全氟化碳類乳液的製作方法

2023-10-24 07:15:57

專利名稱：：全氟化碳類乳液的製作方法全氟化碳類乳液本申請要求2009年11月13日提交的美國專禾I』，專利臨時申請號(U.S.ProvisionalApplicationNo.)為61Λ81，191，2009年10月19日提交的美國專利，專利臨時申請號為61/279，359，2009年4月四日提交的美國專利，專利臨時申請號為61/214，992，和2009年4月15日提交的美國專利，專利臨時申請號為61/212，689的優先權，每一項申請被全文納入本申請作為參考。貫穿本申請，參考了各種出版物，發表的專利申請和專利。為了更加完整地描述有關本發明所屬的技術發展水平，這些公開文件的全文被納入本申請作為參考。
背景技術：
：已知的全氟化碳(PFCs)是化學和生物學惰性的物質，它們能夠溶解包括氧氣和二氧化碳的很大體積的氣體，達到的濃度遠高於氣體溶解在水，鹽水和血漿中的濃度。此外，PFC類能輸送這些氣體擴散穿越一段距離。因此，PFC類可以成為將高濃度的氧氣或者其它治療氣體傳遞給細胞組織和器官系統的合適工具。由於它們獨特的性質，結果PFC類已經在治療許多急性醫療處境的繼發性缺氧時作為輸送氣體成份的首選(Spahn，1999；美國專利，專利公告號(PatentApplicationPublicationNo.)%2009-0202617)通常用於醫學研究的PFC類是室溫下生物學惰性的，有生物穩定的(biostatic)液體，其密度約為1.5-2.0g/mL，並且對於氧氣和二氧化碳有高的溶解度。但是，純的PFC液體不適合於注入血流中，這是由於它們的疏水性導致它們與血液不溶混的緣故。將純的全氟化碳液體移置到小血管中去會產生血管梗阻和死亡。因此，對於需要血管內注射的醫療應用，必須將全氟化碳分散在生理上可接受的水性乳液(aqueousemulsion)中。參見，例如L.C.Clark,Jr.etal.,"EmulsionsofPerfluorinatedSolventsforIntravascularGasTransport",Fed.Proc.,34(6),pp.1468-77(1975)；K.Yokoyamaetal.,"APerfluorochemicalEmulsionAsAnOxygenCarrier，，，Artif.Organs(Ceve),8(1)，pp.34-40(1984)；以及美國專利，專利號(U.S.Pat.No.)為4，110，474和4，187,252。美國專利，專利號為5，514，720，5，684，050，5，635，539，5，171，755，5，407，962和5，536，753披露了包括全氟化碳的各種高度氟化化合物的乳液，它們被全文納入本申請作為參考。全氟化碳乳液被視為有前景的技術，具有廣泛的用途(參見，例如，Spiess,2009；Spahn,1999；Mason,1989)。但是，在本申請中所討論的許多有關安全性和效能的問題以前並未被識別和解決，使得全氟化碳乳液可用於臨床。發明綜述本申請提供了一種包含一定量的全氟化碳液體的乳液(emulsion)，全氟化碳液體作為顆粒分散在連續液相中，其特徵在於，該分散的顆粒具有單峰粒徑分布(monomodalparticlesizedistribution)，以及乳液的應用。本發明還提供了一種生產全氟化碳乳液的方法，它包含步驟a)將乳化劑(emulsifier)與水一起混合；b)將全氟化碳加到步驟a)的混合物中；c)混合步驟b)的混合物以形成粗乳液(coarseemulsion)；d)獲得步驟c)粗乳液的樣品，測定該樣品的粒徑分布(particlesizedistributio)；e)如果步驟d)的樣品具有單峰粒徑分布(monomodalparticlesizedistribution)，則使步驟c)的粗乳液均質化；以及f)獲得該乳液。本發明還提供了一種製備含有PFC乳液的藥物產品(pharmaceuticalproduct)的方法，該方法包含a)獲得一批PFC乳液或者粗乳液；b)1)測定該批次的粒徑分布；2)測定存在於該批次中的殘留氟化物(residualfluoride)的總量；或者3)測定存在於該批次中的溶血磷脂醯膽鹼(lysophosphatidylcholine)(LPTC)的總量；以及c)僅當1)該批次被測定具有單峰粒徑分布；幻按乳液的重量計，該批次被測定含有少於40ppm的殘留氟化物；或者3)按乳液的重量計，該批次被測定含有少於7g/L的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)時，由該批次製備藥物產品。本申請還提供了一種驗證乳液批次可用於藥物使用(pharmaceuticaluse)的方法，該方法包含a)1)測定該批次的樣品的粒徑分布；2)測定該批次的樣品中殘留氟化物的總量；或者幻測定該批次的樣品中溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)的總量；以及b)僅當1)該批次被測定具有單峰粒徑分布；2)按乳液的重量計，該批次被測定含有少於40ppm的殘留氟化物；或者幻按乳液的重量計，該批次被測定含有少於7g/L的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)時，驗證該批次可以用於藥物使用。附圖的簡要說明圖1顯示生產權利要求乳液的生產流程圖。圖2A)顯示加入PFC後不合格的粗乳液百分粒徑分布(percentilesizedistribution)(PSD)；B)顯示高剪切混合後不合格的粗乳液PSD。圖3A)顯示圖2B的粗乳液在9000psig下均質化過程後的PSD；B)顯示圖2B的粗乳液在15000psig下均質化過程後的PSD。圖4A)顯示圖2B的粗乳液在20000psig下均質化過程後的PSD；B)顯示圖2B的粗乳液在25000psig下均質化過程後的PSD。圖5A)顯示合格粗乳液的PSD；B)顯示高壓均質化過程後合格粗乳液的PSD。圖6顯示典型的均質化裝置的示意圖。發明的詳細說明發明的實施例本申請提供了一種包含一定量的全氟化碳液體的乳液，全氟化碳液體作為顆粒分散在連續液相中，其特徵在於，該分散的顆粒具有單峰粒徑分布。在一個實施例中，乳液含有少於40ppm的按乳液重量計的殘留氟化物。在另一個實施例中，按乳液的重量計，存在於全氟化碳乳液中的殘留氟化物的量少於40ppm。在另一個實施例中，按乳液的重量計，乳液含有少於30ppm的殘留氟化物。在另一個實施例中，按乳液的重量計，乳液含有少於20ppm的殘留氟化物。在另一個實施例中，按乳液的重量計，乳液含有10ppm-40ppm的殘留氟化物。在另一個實施例中，按乳液的重量計，乳液含有20ppm-30ppm的殘留氟化物。在一個實施例中，按乳液的重量計，乳液含有少於7g/L的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC或LPC)。在另一個實施例中，存在於全氟化碳乳液中的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)的量，按乳液的重量計，少於7g/L。在另一個實施例中，按乳液的重量計，乳液含有少於3g/L的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)。在另一個實施例中，按乳液的重量計，乳液含有少於2g/L的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)。在另一個實施例中，按乳液的重量計，乳液含有少於1.5g/L的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)。按乳液的重量計，乳液含有1.2g/L-7g/L的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)。按乳液的重量計，乳液含有2g/L-6g/L的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)。按乳液的重量計，乳液含有3g/L-5g/L的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)。在一個實施例中，按分散的顆粒的體積計，總量的90%或者更多具有顆粒尺寸小於700納米(nm)。在另一個實施例中，按分散的顆粒的體積計，總量的90%或者更多具有顆粒尺寸小於600納米(nm)。在一個實施例中，按分散的顆粒的體積計，總量的50%或者更多具有顆粒尺寸小於400納米(nm)。在另一個實施例中，按分散的顆粒的體積計，總量的50%或者更多具有顆粒尺寸小於300-350納米(nm)。在另一個實施例中，按分散的顆粒的體積計，總量的50%或者更多具有顆粒尺寸小於200-300納米(nm)。在另一個實施例中，按分散的顆粒的體積計，總量的99%或者更多具有顆粒尺寸小於1微米(μm)。在一個實施例中，分散顆粒的D(0.9)約為700納米(nm)。在另一個實施例中，分散顆粒的D(0.9)約為600納米(nm)。在另一個實施例中，分散顆粒的D(0.5)約為150-400納米(nm)。在另一個實施例中，分散顆粒的D(0.5)約為200-330納米(nm)。在另一個實施例中，分散顆粒的D(0.99)約為1微米(μπι)。在另一個實施例中，分散顆粒的平均尺寸(meansize)約為200-400μm。在一個實施例中，分散顆粒的平均直徑(meandiameter)約為0.20-0.25μm。在另一個實施例中，分散顆粒的平均直徑約為0.20μm0在另一個實施例中，分散顆粒的粒度中值(mediasize)約為180_300nm。在一個實施例中，全氟化碳是全氟(叔丁基環己烷)，全氟萘烷，全氟異丙基萘烷，全氟三丙基胺，全氟三丁基胺，全氟甲基環己基哌啶，全氟辛基溴，全氟癸基溴，全氟二氯辛烷，全氟己烷，十二氟戊烷，或者它們的混合物。在一個實施例中，全氟化碳含有按全氟化碳重量計的少於5ppm的殘留共軛烯烴(conjugatedolefin)。在另一個實施例中，存在於全氟化碳中的殘留共軛烯烴的量，按全氟化碳重量計，少於5ppm。在另一個實施例中，全氟化碳含有按全氟化碳重量計的少於3ppm的殘留共軛烯烴。在另一個實施例中，全氟化碳含有按全氟化碳重量計的少於Ippm的殘留共軛烯烴。在一個實施例中，全氟化碳含有按全氟化碳重量計的少於Ippm的殘留氟化物。在另一個實施例中，存在於全氟化碳中的殘留氟化物的量，按全氟化碳重量計，少於lppm。在一個實施例中，全氟化碳含有按全氟化碳重量計的少於0.7ppm的殘留氟化物。在一個實施例中，全氟化碳含有按全氟化碳重量計的少於20ppm的殘留有機氫(organichydrogen)。在另一個實施例中，存在於全氟化碳中的殘留有機氫的量，按全氟化碳重量計，少於20ppm。在另一個實施例中，全氟化碳含有按全氟化碳重量計的少於IOppm的殘留有機氫。在一個實施例中，全氟化碳含有按全氟化碳重量計的少於5ppm的殘留有機Μ,ο在一個實施例中，乳液包含20-80%w/v的全氟化碳。在另一個實施例中，乳液包含60%w/v的全氟化碳。在一個實施例中，乳液還包含乳化劑。在另一個實施例中，乳液包含1-10%w/v的乳化劑。在另一個實施例中，乳液包含2.5-4.5%w/v的乳化劑。在另一個實施例中，該乳化劑是表面活性劑。在還有另外一個實施例中，該表面活性劑是蛋黃磷脂(eggyolkphospholipid)。在一個實施例中，乳液包含40-80%w/v的水。在另一個實施例中，乳液包含50-70%w/v的水。在還有另一個實施例中，該水是注射用水。在一個實施例中，乳液還包含水介質(aqueousmedium)。在另一個實施例中，該水介質是等滲的。在另一個實施例中，該水介質被緩衝至PH為6.8-7.4。在還有另一個實施例中，該乳液還包含維生素E。本申請還提供了一種治療受試者患有的鐮狀細胞病，減壓病，氣泡栓塞或者一氧化碳中毒方法，它包含給予受試者這裡描述的乳液，以有效治療受試者的鐮狀細胞病，減壓病，氣泡栓塞或者一氧化碳中毒。在一個實施例中，該乳液通過血管內(IV)或者鞘內給予。本申請還提供了一種在移植前保存器官的方法，它包含將器官與這裡描述的乳液接觸，以有效延長器官存活時間。在一個實施例中，用該乳液灌注該器官。本申請還提供了一種治療受試者患有的創傷，燒傷，痤瘡或者酒糟鼻的方法，它包含局部給予受試者的皮膚這裡描述的乳液，以有效治療受試者的創傷，燒傷，痤瘡或者酒糟鼻。本申請還提供了一種提高受試者的皮膚緊緻或者減少受試者的細紋，皺紋或者瘢痕出現的方法，它包含局部給予受試者的皮膚這裡描述的乳液，以有效提高受試者的皮膚緊緻或者減少受試者的細紋，皺紋或者瘢痕出現。本申請還提供了一種生產全氟化碳乳液的方法，它包含步驟a)將乳化劑與水介質一起混合；b)將全氟化碳加到步驟a)的混合物中；C)混合步驟b)的混合物以形成粗乳液；d)獲得步驟C)粗乳液的樣品，測定該樣品的粒徑分布；e)如果步驟d)的樣品具有單峰粒徑分布，則使步驟C)的粗乳液均質化；以及f)獲得該乳液。在一個實施例中，在步驟a)中，乳化劑與水介質一起在2，000-7，OOOrpm的條件下混合ο在一個實施例中，在步驟c)中，步驟b)的混合物在高於8，OOOrpm的條件下混合。在一個實施例中，在步驟e)中，步驟c)的粗乳液在高壓下被均質化。在一個實施例中，在步驟d)中，粒徑分布採用雷射散射粒徑分布分析儀來測定。在另一個實施例中，在步驟e)中，僅當步驟d)的樣品的中值粒徑(medianparticlesize)小於20μπι時，步驟c)的混合物才被均質化。在另一個實施例中，在步驟e)中，僅當步驟c)的混合物的pH值為6.8-7.4時，步驟c)的混合物才被均質化。在另一個實施例中，在步驟e)中，粗乳液在7000psi或高於7000psi下被均質化。在還有另一個實施例中，在步驟f)中，在預先確定好的一段時間後獲得了乳液。該預先確定好的一段時間可以是乳化作用時間，它取決於批量的大小和通過均化器的流量大小。乳化作用時間可以通過連續流計算來確定，可以利用Leviton和I^allansch披露的計算方法來計算。(Leviton，1959)本申請還提供了一種製備含有PFC乳液的藥物產品的方法，該PFC乳液具有單峰粒徑分布，該方法包含a)獲得一批全氟化碳乳液或者粗乳液；b)測定該批次的粒徑分布；和c)僅當該批次經測定具有單峰粒徑分布時，由該批次製備藥物產品。在一個實施例中，在步驟b)中，粒徑分布採用雷射散射粒徑分布分析儀來測定。本申請還提供了一種製備含有PFC乳液的藥物產品的方法，按乳液重量計，該PFC乳液含有少於40ppm的殘留氟化物，該方法包含a)獲得一批全氟化碳乳液或者粗乳液；b)測定存在於該批次中的殘留氟化物總量；和c)僅當確定按乳液重量計，該批次含有少於40ppm的殘留氟化物時，由該批次製備藥物產品。本申請還提供了一種製備含有PFC乳液的藥物產品的方法，按乳液重量計，該PFC乳液含有少於7g/L的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)，該方法包含a)獲得一批全氟化碳乳液或者粗乳液；b)測定存在於該批次中的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)總量；和c)僅當確定按乳液重量計，該批次含有少於7g/L的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)時，由該批次製備藥物產品。本申請還提供了一種驗證乳液批次可作為藥物使用的方法，該方法包含a)測定該批次的樣品的粒徑分布；和b)僅當該批次的樣品具有單峰粒徑分布時，才驗證該批次可以用於藥物使用。在一個實施例中，在步驟a)中，粒徑分布採用雷射散射粒徑分布分析儀來測定。本申請還提供了一種驗證乳液批次可用於藥物使用的方法，該方法包含a)測定該批次的樣品中的殘留氟化物總量；和b)僅當按乳液重量計，該批次樣品含有少於40ppm的殘留氟化物時，才驗證該批次可以用於藥物使用。本申請還提供了一種驗證乳液批次可用於藥物使用的方法，該方法包含a)測定該批次的樣品中的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)總量；和b)僅當按乳液重量計，該批次樣品含有少於7g/L的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)時，才驗證該批次可以用於藥物使用。在一個實施例中，在步驟a)中的該批次的樣品已經接受過穩定性的測試。在這裡描述的各種要素的所有組合都在本發明的範圍之內。創傷癒合的生物化學和創傷治療的策略由Chin等人，Q007)陳述在"BiochemistryofWoundHealinginWoundCarePractice"WoundCarePractice,2nded.,BestPublishing,AZ.，文章在此被納入作為參考。痤瘡治療見!"heMerckManual,17thEdition(1999),MerckResearchLaboratories,WhitehouseStation,NJ,U.S.A.第116章第10節，811-813頁的描述，文章在此被納入作為參考。鐮狀細胞病的治療見TheMerckManual,17thEdition(1999),MerckResearchLaboratories,WhitehouseStation,NJ,U.S.A.第127章第11節，878-883頁的描述，文章在此被納入作為參考。術語除非另有說明，如這裡所使用的，下述術語的每一項具有如下陳述的定義。「約」在一個數值或者範圍的上下文中意味著所列舉或聲稱的數值或者範圍的士10%。「加速癒合」意指與未經治療的對照受試者的組織修復和癒合速度相比，組織修復和癒合速度加快。「給予受試者」意指給受試者給予，發放，或者敷用藥品，藥物以緩解或者治癒一種病理狀況。局部給予是將即時的化合物和組合物(instantcompoundsandcompositions)給予受試者的一種途徑。給予也可以通過，例如，靜脈內或者動脈內來進行。「改善」一種狀況或者狀態意味著減輕那種狀況或者狀態的症狀。有關皮膚粉刺，膿包或者丘疹的「改善」指的是減少由粉刺，膿包或者丘疹引起的不適和/或減少他們的出現和/或實際尺寸大小。「抗菌劑」指的是殺菌的化合物，像硝酸銀溶液，醋酸甲磺米隆，或磺胺嘧啶銀，或者指的是抗生素。根據本發明，抗菌劑可以存在於「Curpon」產品中。「Cupron」產品利用銅的性質，將銅結合到紡織纖維中用以製造含浸漬有銅的纖維的紡織品，針織品和無紡布，起到抗菌效果，抵抗像細菌和黴菌那樣的微生物。「生物活性試劑」指的是對於生命物質具有有益效果的物質。「燒傷」指的是有燒傷引起的創傷，它是由於熱，輻射，電或者化學熱所造成的一度，二度或三度傷害，例如在，TheMerckManual,17thEdition(1999)，MerckResearchLaboratories,WhitehouseStation,NJ,U.S.A.第276章，第20節，第對；34頁的描述。「一氧化碳中毒」或者「C0中毒」指的是因受試者暴露在一氧化碳中引起的中毒。一氧化碳的毒性隨受試者的暴露時間長短，CO濃度，呼吸和循環的速率的不同而變。一氧化碳的中毒症狀隨血液中的碳氧血紅蛋白百分比不同而異，可以包括頭疼，眩暈，呼吸困難，精神錯亂，瞳孔放大，驚厥和昏迷(其中的部分是腦部受損引起)。CO中毒的標準治療方法是通過呼吸面罩給予100%氧氣(TheMerckManual,1999；Prockop，2007)。「中樞神經系統」或者「CNS」指的是受試者的腦和脊髓。「閉合性顱腦(Closedhead)」損傷或者「非穿通性(non-penetrating)」損傷是一種顱腦內的損傷，未發生頭顱穿通。如在有效達到一個目標的量中的「有效」指的是按照本發明的方式使用的某一成分的量足以實現期望的治療應答，並且具有合理的利益/風險比例。例如，有效加速傷口癒合而又不會產生過分的有害副作用的量。具體的有效量隨著一些因素的不同而變化，像接受治療的個別狀況，患者的身體狀況，接受治療的哺乳動物的類型，治療的持續時間，並行治療(如果有的話)的實際情況，以及採用的具體處方和化合物或者其衍生物的結構。「乳化劑」意指使乳液穩定的物質。「乳液」意指兩種不溶混液體的混合物。乳液是膠體，其中，膠體的兩個相(即分散相和連續相)都是液體，一種液體(分散相)被分散在另一種液體(連續相)中。如在PFC中經常碰到的，分散相液體可以」顆粒」的形式懸浮在連續相液體中。這裡每次使用的術語」顆粒」意在把它用於在連續液相和微氣泡中的液體PFC微球或者滴(這樣使乳液呈膠體懸浮液狀態)。在本發明的一個實施例中，該乳液是全氟化碳乳液，該全氟化碳乳液的兩種不溶混的液體是全氟(叔丁基環己烷)和蛋黃磷脂。這裡所說的「顆粒」也可以指一種物質在氣相中的微泡沫，例如，以微泡沫形式出現的PFC蒸氣。「D(0.5)」是以微米表示的粒徑，發現50%的總體體積分布在D(0.5)以下。"D(0.9)」是以微米表示的粒徑，發現90%的總體體積分布在D(0.9)以下。「減壓病」S卩「DCS」指的是周圍壓力的降低所帶來的功能紊亂(例如，潛水後上浮，從沉箱或者高壓倉裡出來，或者上升到一定高度)，歸因於溶解在血液或組織中的氣體形成氣泡，通常的特徵表現為疼痛和/或神經病學的表現形式(TheMerckManual,1999)0「吸入的氧氣分數(FractionofInspiredOxygen)」或"FiO2」是指空氣中傳遞給受試者的氧量。FiO2用從0(0%)到1(100%)的一個數字來表示。正常室內空氣的FW2是0.21(21%)，SP，正常室內空氣的21%是氧氣。如在這裡使用的那樣，說一種組合物」無」某一種化學個體指的是，意在分離該化學個體與該組合物的肯定行動採取之後，該組合物不可避免地含有，即使有也是極少，一定量的該化學個體。「格拉斯哥昏迷計分表(GlasgowComakale)」或「GCS」指的是用於測定最好的眼反應(BestEyeResponse)，最好的言語反應(BestVerbalResponse)，最好的運動反應(BestMotorResponse)的神經病學計分表(見TeasdaleG.，JennettB.，LANCET(ii)81-83，1974.)。它是一種應用廣泛的評分系統以量化外傷性的顱腦損傷後的知覺水平。「氧合障礙(Impairedoxygenation)，，指的是，關於組織或者細胞，該組織的氧合水平低於正常生理條件下存在於相同組織或者細胞內的氧合水平。如用於有關痤瘡丙酸桿菌(Propionibacteriumacnes)「感染」指的是痤瘡丙酸桿菌在(宿主)對象體內的有害植入和生長，引起受試者的炎症反應。「局部缺血疼痛(Ischemicpain)」指的是患有鐮狀細胞病受試者的局部缺血所引起的疼痛或者不適。「單峰粒徑分布(Monomodalparticlesizedistribution)」意指一群顆粒(例如，液體微球，小滴，粉末，粒料，珠粒，晶粒，丸粒等)，它們的粒徑分布曲線上具有單個清晰可辨識的最大值(縱坐標或Y軸為重量百分數或者強度，橫坐標或X軸為粒徑大小)。單峰粒徑分布不同於雙模態粒徑分布(bimodalparticlesizedistribution)，它指的是一群顆粒，其粒徑分布曲線上具有兩個清晰可辨識的最大值。單峰粒徑分布也不同於多模態粒徑分布(multimodalparticlesizedistribution)，它指的是一群顆粒，其粒徑分布曲線上具有三個或更多的清晰可辨識的最大值。「氧張力(Oxygentension)」或者「組織氧張力(tissueoxygentension)」是在特定組織上直接測定到的局部氧分壓。「氧合的全氟化碳(Oxygenatedperfluorocarbon)」是在飽和或者亞飽和水平上攜帶了氧氣的全氟化碳。「外周阻力(Peripheralresistance)」指的是體循環的外周血管阻力。「藥物可接受的載體(Pharmaceuticallyacceptablecarrier)」指的是載體或者助劑，它們適用於人類和/或動物，不會產生過分有害的副作用(像毒性，刺激作用，和過敏反應)，與合理的利益/風險比例相稱。它可以是藥用可接受的溶劑，懸浮劑或者賦形劑用以給受試者輸送即時化合物。載體可以是液體或者固體，根據考慮好的計劃給予方式來加以選擇。「藥物有效化合物(Pharmaceuticallyactivecompound)」指的是藥物處方中的有效藥物成分的化合物。「有效藥物成分(Activepharmaceuticalingredient)」或「API」是由美國食品藥物監督局(U.S.FoodandDrugAdministration)界定的作為設計用於藥品生產過程中的任何物質或者這些物質的混合物，當被用於藥物生產過程中時，它們成為藥品中的有效成分。這樣的物質被設計成為診斷，醫治，減輕，治療或者防止疾病提供藥理學的活性或者其它的直接效果，或者影響身體的結構與功能。「原發的(Primary」)和「繼發的(secondary)」是顱腦損傷發生過程的分類。在外傷性腦損傷(TBI)中，原發性損傷發生在最初的傷害過程中，起因於顱腦物理結構的位移。繼發性損傷逐步產生，可能涉及一系列的細胞病變。非由於最初的機械損傷引起的繼發性損傷可以是起因於原發性損傷，或者可以與原發性損傷無關。因此，「原發性缺血(primaryischemia)」是血流不足(導致供氧受限)，直接起因於最初的腦顱損傷，而「繼發性缺血(secondaryischemia)」是血流不足(導致供氧受限)，起因於由最初損傷啟動的病變，例如，起因於最初損傷的併發症，並且可以涉及在最初損傷中未受傷害的組織。有關TBI的原發性和繼發性分類在Silver，J.，etal.(2005)"NeuralPathology"TextbookOfTraumaticBrainInjury.Washington,DC:AmericanPsychiatricAssociation.Chap.2,pp.27-33中有詳細討論。「促進減輕疼痛(Promotesalleviationofpain)」指的是減輕受試者由於傷口，損傷，例如燒傷或者其它的病理性狀況所引起的疼痛感覺。「性器官」(Sexorgan)或者「生殖器」(sexualorgan)指的是涉及到有性生殖和/或性滿足並且構成複雜生物體生殖系統的身體上任何解剖學部位。在本發明的一個優選實施例中，該性器官是受試者的生殖器。如在這裡所說的，「生殖器(genitalia)」指外面看得見的性器官男性是陰蓮，女性是陰蒂和外陰。「鐮狀細胞病(SickleCellDisease)」是一種由HbS的同型接合遺傳所致的慢性血紅蛋白病。「穩定性試驗(labilitytesting)」指的是在特定的時間間隔和各種環境條件下(例如，溫度和溼度)所進行的試驗以觀察一種藥物在指定的的貨架期內是否降解和降解到何種程度。特定的條件和試驗的時間是加速藥品在貨架期內估計會遇到的條件。例如，成品藥穩定性試驗的各項要求被整理在21C.F.R§211.166中，它的全部內容被納入本申請作為參考。「局部給予(Topicaladministration)」一種組合物用在這裡指的是將該組合物敷貼在受試者的皮膚或者黏膜上。在一個實施例中，局部給予一種組合物是將該組合物敷貼在受試者的表皮上。「外傷性腦損傷(TraumaticBrainInjury)」或「TBI」指的是源自衝擊的中樞神經系統損傷，即CNS神經元的，軸索的，神經膠質的和/或血管的阻塞。這樣的衝擊包括鈍器撞擊，子彈殺傷或者爆炸殺傷。「血管閉塞危象(Vaso-occlusivecrisis)」指的是臨床上識別的狀況，源自鐮狀紅細胞阻塞毛細血管，限制了血液流向組織和/或器官，尤其導致缺血和疼痛。"w/v"意指重量/體積比，典型地用於表徵生物溶液。一種1%w/v溶液是Ig的溶質溶於IOOmL最終溶液體積中。PFC乳液的特徵由於PFC液體與包括血液和其它體液的水系統不溶混，所以，它們應該先被配製成生理上相容的乳液才能靜脈內給予。在配製血流中注射用的PFC乳液時應該考慮若干因素，包括但不限於，存在於乳液中的雜質，乳液顆粒尺寸，乳液粒徑分布以及乳液的穩定性。理想的PFC乳液應當具有以下的特徵而不論用於乳液中的PFC是哪種化合物。存在於PFC乳液中的雜質受到限制理想的PFC乳液中的雜質應該在最低水平上。理想的PFC乳液應當具有以下的具體特徵1.按乳液重量計，全氟化碳乳液含有少於40ppm的殘留氟化物，優選地，按乳液重量計，含有少於20ppm的殘留氟化物；2.全氟化碳乳液含有少於7g/L的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)，它已經被牽涉到作為有關糖尿病性視網膜病變，動脈粥樣化形成和神經變性有力的炎性脂質；3.按全氟化碳重量計，全氟化碳乳液含有少於5ppm的殘留共軛烯烴，優選地，按全氟化碳重量計，含有少於Ippm的殘留共軛烯烴；4.按全氟化碳重量計，全氟化碳乳液含有少於Ippm優選地，少於0.7ppm的殘留氟化物；5.按全氟化碳重量計，全氟化碳乳液含有少於20ppm的殘留有機氫，優選地，按全氟化碳重量計，含有少於5ppm的殘留有機氫。小的顆粒尺寸非常小的顆粒尺寸是需要血流中注射的PFC乳液的一個理想特性。業已表明，顆粒尺寸是決定顆粒從循環中的清除率(clearancerate)，初期清除的位點(thesiteofprimaryclearance)以及補體激活程度的一個主要因素。PFC是不產生代謝變化的，它們不溶於水或者脂質中。因此，它們不會在尿液或者糞便中被排洩出去，但是通過肺部作為排除的途徑被呼出去。業已表明，靜脈注射後PFC乳液從血液腔(bloodcompartment)中的清除率與劑量有關，並且受到乳液組合物的影響。從血流中清除出去的佔支配地位的手段是通過網狀內皮系統(REQ的巨噬細胞對乳液顆粒的吞噬作用，即主要是通過脾臟和肝臟中的固定的巨噬細胞(fixedmacrophages)的吞噬作用。粒徑分布是通過單核吞噬細胞系統的顆粒清除率和居留巨噬細胞(residentmacrophages)的伴隨激活潛勢的主要決定因素。它也是有害效應的一個主要原因。小顆粒可能允許顆粒躲避開RES，較長時間地留在脈管系統中，副效應較低。顆粒尺寸也直接與乳液毒性相關。較大顆粒的分布與較高的毒性相關聯即使平均顆粒尺寸0.3微米的顆粒容易受補體的調理素作用，比顆粒直徑<0.2微米的顆粒更快地從循環中被清除出去。較大的顆粒好像被脾臟清除，而小顆粒主要被肝臟所清除。單峰粒徑分布在PFC乳液生產過程中，具體地說，在生產過程的高速混合步驟之後和均質化步驟之前，可以利用雷射散射粒徑分布分析儀來分析粗乳液的粒徑分布。藉助雷射散射粒徑分布分析儀，可以看到顆粒具有單峰，雙模態或者多模態的粒徑分布。發明者令人驚訝地發現，只有在這個中間步驟具有單峰粒徑分布的粗乳液才能導致形成最終乳液具有單峰粒徑分布。也就是說，如果第二個峰不在生產過程中的這個階段消除掉，它就會保留在最終乳液中。因此，只有在粗乳液在雷射散射粒徑分析儀下呈現單峰粒徑分布時才可從高速混合機轉移到均質化器去。免疫活性理想的乳液不應該是免疫活性的。業已發現一些早期的PFC乳液(例如，日本GreenCross公司的FluosolDA和俄羅斯Perftoran公司的Perftoran)具有免疫活性。已經發現了這些PFC乳液中所使用的表面活性劑(PluronicF68和ftx)xanol-268)激活了免疫系統的補體旁路。PFC乳液的高穩定性理想的乳液應當在指定的貨架期內連續滿足所有最初的驗收指標。顆粒尺寸和粒徑分布有別於其它指標，這是因為隨著乳液的陳化它們會發生變化的緣故。由於根據定義，乳液是熱力學不穩定的，所以這個結果是不可避免的。即使是一個好的乳液在其指定的貨架期內顆粒尺寸會呈現出一些增長，不論是由於Ostwald熟化，聚集，絮凝還是沉降所引起。但是，如果乳液配製恰當，生產過程經過優化，則顆粒尺寸的增長率應該相當小，粒度中值應該維持在200-400nm的範圍，粒徑分布應該保持相當狹窄。已知的PFC乳液有若干穩定性的問題。FluosolDA(20%):P_F68非常不穩定，該乳液需要冷凍儲藏；Perftoran重建後只能穩定8小時；Oxygent花生四烯酸的降解產物可能引起類似流感的反應；OxyFluor非冷藏條件下只能儲存一年)。與這些PFC乳液相比，這裡披露的PFC乳液是高度穩定的。PFC乳液的其它特性在配製PFC乳液時其它要考慮的因素包括1.乳液對血小板減少發展的效應血小板減少是一種血液中血小板數量不足的病症；2.乳液對血小板凝集的抑制效應已經發現一些現有的PFC乳液抑制血小板凝集，它使創傷病人不易形成威脅生命的血凝塊，但是也可能會增加顱內出血的風險；3.乳液對PMN粘連在內皮細胞上的抑制效應中性白細胞(PMN)粘連在內皮細胞上被認為是在導致脈管內皮損傷順序中的早期事件。4.乳液對激活巨噬細胞的效應被激活的巨噬細胞的吞噬細胞的活性有所提高，尤其是對於李斯特菌屬種和沙門菌屬種(ListeriaandSalmonella)。但是，被激活的巨噬細胞也能刺激產生有破壞性的炎性細胞活素(cytokine)。例如，興奮的人牙槽巨噬細胞在體外暴露在Oxygent下時減少了細胞活素的產生，提示Oxygent，而且同樣Oxycyte，可能具有抗炎活性。5.乳液對免疫活性，血小板功能，和血小板存活的效應優選的PFC乳液不影響受試者的免疫活性和血小板功能，而且不應該縮短受試者的血小板存活。全氟(叔丁基環己烷)PFC普遍被認可為生物惰性的分子，由於它們的廣泛滷化形成了抵抗代謝降解作用的電子構型。因此，傳統的起源於生成反應性代謝物或者PFC直接與生物大分子的相互作用所產生的毒性形式對於這一類化合物來說已經不成問題。同樣，未曾鑑別出有關PFC類的遺傳毒性。但是，用於氧傳遞(oxygendelivery)應用所需要的PFC劑量的典型範圍為每公斤體重2-3克，這顯著高於常規藥品。因此，通過靜脈內注射PFC類輸送足夠的氧有可能要求通過靜脈內傳遞相當大量的顆粒懸浮物。因而，PFC類對組織形態學的效應就成為選擇它作為這種用途時的一個重要考慮因素。全氟化碳的恰當選擇應該提供必要的效能以及合適的安全曲線。除了對於其指定用途是安全和有效的之外，該全氟化碳也應當能經濟地與穩定的產品處方結合。為了要達到這些目標，該全氟化碳應當滿足以下標準的絕大部分，最好是全部滿足1.該全氟化碳應該能溶解和釋放出大量的氣體，尤其是血液氣體氧和二氧化碳。2.該全氟化碳最好僅由碳和氟組成。3.該全氟化碳最好是單一的化學體，沒有多少異構體和非異構體的雜質。殘留的雜質，像共軛烯烴類，有機氫化物類，和氟化物應當維持在PPm水平上。4.該全氟化碳應當沒有化學活性，直至並且包括用於典型的蒸汽滅菌過程溫度下應當是熱穩定的。5.該全氟化碳應當是代謝惰性的。6.該全氟化碳應當能被配製成亞微粒尺寸小滴的穩定乳液，它能被持續一段時間儲存而不會因為凝聚或者擴散控制的機理產生顯著的小滴增長。優選地，該處方僅含有單一的全氟化碳。7.該全氟化碳應當具有可接受的安全曲線，無毒性。8.在乳液形態中，該全氟化碳應當在血液中具有可觀的停留時間，以及從身體主要的網狀內皮器官中清除出去的可接受的時間範圍。理想地，被選擇的PFC也會具有兩項令人滿意的特徵迅速RES清除和引起過度充氣(hyperinflation)的可能性最低。PFC通過RES的清除率和正常RES組織形態學恢復率與PFC的親脂性成正相關，其次與PFC的蒸氣壓正相關。雖然PFC乳液顆粒被RES巨噬細胞的吞噬作用對攝取的主要器官並無害處，但在臨床上有源自該過程的影響後果。在PFC乳液產品的臨床研究中表徵得最好的是常見的類似流感的症狀。因此，迅速的RES清除對於一種PFC被選作靜脈內乳液應用時是一種令人滿意的特性。在已知處方中懸著了某些PFC類部分地是以他們在RES中較短的停留時間為依據。兩種這樣的PFC類是全氟萘烷(PFD)和全氟辛基溴(PFOB)，前者是日本GreenCross公司的FluosolDA中的主要成分，該產品是FDA批准的首個血液代用品，後者是加利福尼亞(California)，聖地牙哥(SanDiego)AlliancePharmaceutical公司，的血液代用品Oxygent中的主要成分。PFD和PFOB的蒸氣壓分別約為13和lOtorr。由於認識到PFC類的肺呼出並非一個有益健康的過程，這些年來，選擇具有較短RES停留時間的PFC類的傾向性已經有所緩和。一種被稱為」肺過度充氣(pulmonaryhyperinflation)」的現象首次在兔子身上被證明。這個狀況的特徵在於雙肺未縮回到它們的正常」靜息容積(restingvolume)」。在接受了單一劑量的某些PFC乳液處理的兔子身上，雙肺不僅未縮回到它們的靜息容積，而且看起來擴張到超過了它們的正常肺部功能殘氣量(functionalresidualcapacity)(即，過度充氣)。在其極端形態下，呼吸動力學受到影響，氣體交換被累及，該狀況有可能威脅生命。決定不同的PFC類誘發肺部過度充氣傾向的唯一最重要的因素是PFC往氣腔的遷移速率，它主要依賴於蒸氣壓，以及其次，它的親脂性。選擇一種具有最合適性質的PFC的困難在於，兩項最期望的特性，即，迅速的RES清除和引起過度充氣的可能性最低，是相互對立的。選擇一個幾乎很少或者沒有引發過度充氣可能性的具有低蒸汽壓的候選物可能會導致RES半衰期長得不可接受。而它可能受到有力地爭辯，認為這個較慢的RES清除並非是重要的有關安全的關注點，持續的器官腫大和相關的病理組織學從制定規章的立場出發可能被認為是不可接受的。6O%和2O%w/v濃度的全氟(叔丁基環己燒)(Perfluoro(tert-butylcyclohexane))都已經在鼠和猴的身上進行了對照，單劑量的良好藥品實驗研究管理規範(GoodLaboratoryI^ractice(GLP))毒性研究試驗。與其它的PFC類相比較，在用全氟(叔丁基環己烷)處理過的過度充氣的程度遠低於在用PFOB處理過的猴身上所見到的，以及先前未發表的在用全氟萘烷處理過的兔身上所見到的。全氟(叔丁基環己烷)在體內的吸收普遍與已經報告的其它PFC類的類似。但在肝臟和脾臟內的持續保留時間稍長於已經報告過的PF0B。儘管如此，全氟(叔丁基環己烷)在持續保留時間與產生過度充氣，肺部未縮回的傾向性之間比已經報告過的PFOB和全氟萘烷的表現出更好的平衡。除此之外，與其它試驗過作為氧載體的全氟化碳類相比，根據動物試驗結果，全氟(叔丁基環己烷)顯示出較好的安全曲線，它不含溴或者氯，因而沒有臭氧消耗的風險。另外，可以大量製造生物醫學等級的化合物。根據前邊所說，在這裡披露的全氟(叔丁基環己烷)具有各性質之間的最適平衡。其RES半衰期稍長於作為全氟化碳基準點的PF0B，但它引起肺部過度充氣的傾向相應地較低。總的來說，全氟(叔丁基環己烷)看來是用於靜脈內PFC乳液的一個良好的備選化合物。全氟(叔丁基環己烷)(C10F20)有市售，例如，加利福尼亞州(California)，科斯塔梅薩(CostaMesa)的OxygenBiotherapeutics公司出口口口的Oxycyte。Oxycyte是一種全氟化碳乳液氧載體。Oxycyte中的有效成分，全氟(叔丁基環己烷)(C10F20，MW=500.08)，也稱之為F-叔丁基環己烷或者FtBu，是一種飽和脂環族PFC0全氟(叔丁基環己烷)是無色，完全惰性，不溶於水，非親脂的分子，密度是水的2倍，沸點是147°C。FtBu的CAS登記號為84808-64-0。CAS名稱為1_(1，1_二(三氟甲基)-2，2，2-三氟乙基)-l，2，2，3，3，4，4，5，5，6，6-^氟環己烷。由於FtBu分子是非對稱的，在環己烷環上只有單一的非氟取代基，該分子不可能有異構體，因此以如下所示的單一構型存在全氟(叔丁基環己烷)的物理性質如下分子式=C10F20分子量(g/mol):500.08室溫下的物理形態液體密度(g/mL):1.97沸點(°C):14725°C下的蒸氣壓(mmHg)3.837°C下的蒸氣壓(mmHg):4.4動力粘度(cP):5·3781520°C下的折射率1.3098計算偶極矩(Debye):0·287計算表面張力(dyne/cm):14.4體溫下，全氟(叔丁基環己烷)可以攜帶約43mL氧/IOOmLPFC,196mL的C02/100mLPFC。室溫下的FtBu是無色無嗅的液體，憎水(幾乎不溶於水)和憎油的，在溶劑中，像2，2，4_三甲基戊烷(異辛烷)中有極微的溶解度。FtBu最可溶於像異氟烷(isoflurane)那樣的滷化溶劑中。因此，FtBu應當配製成水乳劑用於靜脈給予。FtBu能夠溶解和釋放大量的氣體，包括血液氣體氧和二氧化碳。但是，FtBu並不表現出血紅蛋白結合氧的性質，而只是簡單地作為氣體的溶劑。因而，沒有遇到正弦樣的氧釋放曲線。通過FtBu輸送和釋放氧氣只是一個被動的過程，溶解的氣體量與其分壓線性相關，基本上遵從亨利定律(Henry’sLaw)0全氟(叔丁基環己烷)乳液在本發明的一個實施例中，根據上述討論過的標準選擇的PFC，即，全氟(叔丁基環己烷)利用提純過的表面活性劑在緩衝的，等滲水介質中被乳化。該乳液可含有如表1所示的成分。配製生產的Oxycyte是滅菌的，不引起發熱的乳液，它由全氟(叔丁基環己烷)在一種等滲的並且溫和緩衝至中性PH範圍的水介質中的亞微細顆粒(中直徑(mediumdiameter)為200-300納米)所組成。為了生理學的相容，Oxycyte中的PFC用蛋黃磷脂乳化。表1-6顯示出PFC乳液的有代表性的組成。表1有代表性的PFC乳液1(60%w/v)權利要求1.一種乳液包含一定量的作為顆粒分散在連續液相中的全氟化碳液體，其特徵在於，所述分散的顆粒具有單峰粒徑分布。2.如權利要求第1項所述的乳液，其特徵在於，含有按乳液重量計的低於40ppm的殘留氟化物。3.如權利要求書第1或者第2項所述的乳液，其特徵在於，含有按乳液重量計的低於7g/L的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC或LPC)。4.如權利要求書第1-3項任意一項所述的乳液，其特徵在於，按分散的顆粒體積計，總量的90%或者更多的顆粒尺寸小於700nm。5.如權利要求書第1-4項任意一項所述的乳液，其特徵在於，按分散的顆粒體積計，總量的50%或者更多的顆粒尺寸小於400nm。6.如權利要求書第1-5項任意一項所述的乳液，其特徵在於，所述全氟化碳是全氟(叔丁基環己烷)，全氟萘烷，全氟異丙基萘烷，全氟三丙基胺，全氟三丁基胺，全氟甲基環己基哌啶，全氟辛基溴，全氟癸基溴，全氟二氯辛烷，全氟己烷，十二氟戊烷，或者它們的混合物。7.如權利要求書第1-6項任意一項所述的乳液，其特徵在於，所述全氟化碳含有按該全氟化碳重量計的低於5ppm的殘留共軛烯烴。8.如權利要求書第1-7項任意一項所述的乳液，其特徵在於，所述全氟化碳含有按該全氟化碳重量計的低於20ppm的殘留有機氫。9.如權利要求書第1-8項任意一項所述的乳液，其特徵在於，所述乳液包含20-80%w/ν的全氟化碳。10.如權利要求書第1-9項任意一項所述的乳液，其特徵在於，還包含乳化劑。11.如權利要求書第10項所述的乳液，其特徵在於，包含1-10%w/v的乳化劑。12.如權利要求書第1-11項任意一項所述的乳液，其特徵在於，所述乳化劑是表面活性劑。13.如權利要求書第12項所述的乳液，其特徵在於，所述表面活性劑是蛋黃磷脂。14.如權利要求書第1-13項任意一項所述的乳液，其特徵在於，還包含水介質。15.如權利要求書第14項所述的乳液，其特徵在於，所述水介質是等滲的。16.如權利要求書第14或者第15項所述的乳液，其特徵在於，所述水介質被緩衝至pH值為6.8-7.4。17.如權利要求書第1-16項任意一項所述的乳液，其特徵在於，所述乳液還包含維生Eο18.一種治療受試者患有的鐮狀細胞病，減壓病，空氣栓塞或者一氧化碳中毒的方法，其特徵在於，包含給予受試者如權利要求書第1-17項任意一項所述的乳液，以有效治療受試者的鐮狀細胞病，減壓病，空氣栓塞或者一氧化碳中毒。19.一種在器官移植前保存器官的方法，其特徵在於，包含讓該器官與如權利要求書第1-17項任意一項所述的乳液接觸，以有效延長器官生存期。20.一種治療受試者患有的創傷，燒傷，痤瘡或者酒渣鼻的方法，其特徵在於，包含局部給予受試者的皮膚如權利要求書第1-17項任意一項所述的乳液，以有效治療受試者的創傷，燒傷，痤瘡或者酒渣鼻。21.一種提高受試者的皮膚緊緻，減少受試者皮膚細紋，皺紋或者瘢痕出現的方法，其特徵在於，包含局部給予受試者的皮膚如權利要求書第1-17項任意一項所述的乳液，以有效提高受試者皮膚緊緻，減少受試者皮膚細紋，皺紋或者瘢痕出現。22.—種生產全氟化碳乳液的方法，其特徵在於，包含步驟a)將乳化劑與水介質一起混合；b)將全氟化碳加到步驟a)的混合物中；c)混合步驟b)的混合物，形成粗乳液；d)獲得步驟c)的粗乳液的樣品，測定該樣品的粒徑分布；e)如果步驟d)的樣品具有單峰粒徑分布，則使步驟c)的粗乳液均質化；以及f)獲得所述乳液。23.如權利要求書第22項所述的方法，其特徵在於，在步驟e)中，只有當步驟d)的樣品的中值粒徑小於20μm時，才對步驟c)的粗乳液均質化。24.如權利要求書第22或者第23項項所述的方法，其特徵在於，在步驟e)中，該粗乳液在7000psi或高於7000psi的壓力下被均質化。25.一種製備含有PFC乳液的藥物產品的方法，其特徵在於，所述方法包含a)獲得批次的全氟化碳乳液或者粗乳液；b)1)測定該批次的粒徑分布；2)測定存在於該批次中的殘留氟化物總量；或者3)測定存在於該批次中的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)總量；以及c)只有當1)確定該批次具有單峰粒徑分布；幻確定該批次含有按該乳液重量計的低於40ppm的殘留氟化物；或者幻確定該批次含有按該乳液重量計的低於7g/L的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)時，由該批次製備該藥品。26.—種驗證一個批次的乳液用於藥物使用的方法，其特徵在於，所述方法方法包含a)l)測定該批次樣品的粒徑分布；2)測定存在於該批次樣品中的殘留氟化物總量；或者3)測定存在於該批次樣品中的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)總量；以及b)只有當1)該批次樣品具有單峰粒徑分布；幻該批次含有按該乳液重量計的低於40ppm的殘留氟化物；或者幻該批次含有按該乳液重量計的低於7g/L的溶血磷脂醯膽鹼(LPTC)時，驗證該批次用於藥物使用。27.如權利要求書第沈項所述的方法，其特徵在於，步驟a)1)_a)3)在該批次的樣品接受過穩定性測試後執行。全文摘要本申請提供了一種乳液，它包含一定量的作為顆粒分散在連續液相中的全氟化碳液體，其特徵在於，該分散的顆粒具有單峰粒徑分布，以及乳液的應用。本申請也提供了一種生產全氟化碳乳液的方法，一種製備含有PFC乳液的藥物產品的方法，以及驗證一個批次的乳液用於藥物使用的方法。文檔編號C07C23/00GK102395548SQ201080017461公開日2012年3月28日申請日期2010年4月15日優先權日2009年4月15日發明者德寶·P·湯普森,格瑞·克勞森,理察·凱瑞申請人:奧斯金生醫公司