一種牡丹雄蕊多糖的提取分離工藝的製作方法
2023-10-09 09:23:34
一種牡丹雄蕊多糖的提取分離工藝的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種牡丹雄蕊多糖的提取分離工藝，其包括以下步驟：1)粉碎；2)細胞破壁；3)脫脂、除寡糖；4)多糖的提取；5)sevage法除蛋白；6)透析脫鹽及其它小分子化合物，透析液減壓濃縮得濃縮液；7)多糖沉澱和乾燥，收集的沉澱經真空冷凍乾燥，即得牡丹雄蕊多糖。該提取分離工藝簡便易行，可控，牡丹雄蕊多糖得率可達3.1%，提取率可達62.6%。
【專利說明】ー種牡丹雄蕊多糖的提取分離エ藝
【技術領域】
[0001]本發明涉及ー種生物活性物質的提取與分離，具體是指牡丹雄蕊多糖的提取分離ェ藝。
【背景技術】
[0002]牡丹原產於中國西部秦嶺和大巴山一帯，除了作為觀賞植物外，還可用於生產丹皮入藥，具有改善心血管疾病、鎮靜、消炎和提高機體免疫力等藥效。
[0003]多糖在自然界中含量豐富，具有顯著的免疫調節作用、抗腫瘤、降血糖及抗病毒作用等，已引起國內外醫學界的高度重視，成為近年來研究和應用的熱點。民間因牡丹雄蕊茶具有降低血脂、預防和輔助治療心腦血管疾病等功效而備受人們關注，同時因其對胃腸功能紊亂、便秘有積極的輔助治療作用，對前列腺炎、前列腺肥大有輔助治療和恢復作用，被譽為「植物黃金」。國內外對牡丹雄蕊提取分離及藥理作用研究未見文獻及專利報導。因此，從牡丹雄蕊中提取分離多糖，可以提升牡丹的應用價值和經濟價值，對牡丹的綜合利用具有重要意義。
【發明內容】
[0004]本發明要解決的技術問題之ー是從牡丹雄蕊中提取分離多糖。本發明要解決的另一個技術問題是為了獲得牡丹雄蕊多糖而採用的系統提取分離エ藝方法。為解決上述技術問題，本發明研究制定了如下技術方案。
[0005]I)粉碎:採集牡丹雄蕊，40~50°C烘乾後粉碎，過20~100目篩。
[0006]2)細胞破壁:向粉碎的牡丹雄蕊中加入5~15倍量的水，攪拌均勻，置於超低溫冰箱中(-20~-40°C )冷凍12~16小時。`投入70~90°C水浴鍋中解凍，水浴I~2小時。然後200W超聲處理10~50分鐘，過濾得固形物為破壁雄蕊。
[0007]3)脫脂、除寡糖:破壁後的牡丹雄蕊加入石油醚回流6~8小時，料液比為1:
2~4(W/V)，浸提脫脂，過濾得固形物(脫脂牡丹雄蕊)。向固形物中加入80%こ醇，料液比為1: 2~4(W/V)，回流6~8小時，抽濾，以脫除寡糖。重複I~3次，抽濾得固形物(脫月旨、除寡糖後的牡丹雄蕊)。
[0008]4)多糖的提取:向固形物中加入蒸餾水，料液比為1: 10~30 (W/V)，加熱，溫度控制在60~90°C，提取時間為I~5小時，抽濾除去殘渣得提取液。重複提取I~5次，提取液合併。
[0009]5) sevage法除蛋白:向提取液中加入0.1~0.3倍體積量的sevage試劑(氯仿:正丁醇=5: I, V/V)，攪拌20~40分鐘，完成後5000 r/min離心10分鐘，取上清液。重複操作3~5次。
[0010]6)透析脫鹽及其它小分子化合物:將脫蛋白的多糖溶液移入透析袋中，保留至少1/3透析袋體系的空間。在同等體積的蒸餾水中透析24h，每8h換一次水，以脫鹽及除去其它小分子化合物。水溶液減壓濃縮得濃縮液。[0011]7)多糖沉澱和乾燥:向濃縮液中加入3~5倍體積95%的こ醇，靜置過夜，4800r/min，離心10分鐘，收集沉澱。收集的沉澱經真空冷凍乾燥即得牡丹雄蕊粗多糖。
[0012]本發明提供了ー種牡丹雄蕊多糖的提取分離エ藝。該方法利用了牡丹雄蕊多糖溶於水而不溶於醇的性質，採用凍融法和超聲破壁、石油醚脫脂、醇沉除雜，sevage法除蛋白，透析脫鹽及其它小分子化合物，並以熱水溶解提取多糖。方法簡便易行，可控；牡丹雄蕊多糖收率可達3.1%，提取率可達62.6%。
【具體實施方式】
[0013]實施例1。
[0014]I)粉碎:採集牡丹雄蕊，45°C烘乾粉碎，過40目篩。
[0015]2)細胞破壁:向粉碎的牡丹雄蕊中加入10倍量的水，攪拌均勻，置於超低溫冰箱中-80°C冷凍14小時。迅速投入80°C水浴鍋中解凍，水浴I小時。然後200W超聲處理20分鐘，過濾得固形物為破壁雄蕊。
[0016]3)脫脂、除寡糖:破壁後的牡丹雄蕊中加入石油醚回流6小時，料液比為1: 2(W/V)，浸提脫脂，過濾得固形物(脫脂牡丹雄蕊)。向固形物中加入80%こ醇，料液比為1:3(ff/V)，回流6~8小吋，抽濾，以脫除寡糖。重複I次，抽濾得固形物(脫脂、除寡糖後的牡丹雄蕊)。
[0017]4)多糖的提取:向固形物中加入蒸餾水，料液比為1: 10~30 (W/V)，加熱，溫度控制在60~90°C，提取時間為I~5小時，抽濾除去殘渣得提取液。重複提取I~5次，提取液合併。
[0018]5) sevage法除蛋白:向上清液中加入0.2倍體積量的sevage試劑(氯仿:正丁醇=5: I, V/V)，攪拌30分鐘，完成後5000 r/min離心10分鐘，取上層水溶液清液。重複操作5次，上清液合併。
[0019]6)透析脫鹽及其它小分子化合物:將脫蛋白的多糖溶液移入透析袋中，保留至少1/3透析袋體系的空間。在同等體積的蒸餾水中透析24小時，每8小時換一次水，以脫鹽及除去其它小分子化合物。水溶液減壓濃縮得濃縮液。
[0020]7)多糖沉澱和乾燥:向濃縮液中加入4倍體積95%的こ醇，靜置過夜，4800 r/min，離心10分鐘，收集沉澱。收集的沉澱經真空冷凍乾燥即得牡丹雄蕊多糖。牡丹多糖收率為3.1%，提取率為62.6%。
【權利要求】
1.ー種牡丹雄蕊多糖的提取分離エ藝，其特徵在於包括以下步驟: 1)粉碎:採集牡丹雄蕊，乾燥粉碎，過篩； 2)細胞破壁:向粉碎的牡丹雄蕊中加水，攪拌均勻，置於超低溫冰箱中冷凍；迅速投入水浴鍋中水浴加熱解凍；然後200W超聲處理，過濾得固形物； 3)脫脂、除寡糖:破壁後的牡丹雄蕊中加入石油醚回流浸提脫脂，過濾得固形物；向固形物中加入80%こ醇，回流，抽濾，以脫除寡糖；重複I~3次，抽濾得固形物，真空乾燥； 4)多糖的提取:向固形物中加入蒸餾水，加熱，浸提，抽濾除去殘渣得上清液；重複提取I~5次，上清液合併； 5)sevage法除蛋白:向上清液中加入sevage試劑(氯仿:正丁醇=5:1，V/V),攪拌，完成後5000 r/min離心10分鐘，取上層水溶液清液； 6)透析脫鹽及其它小分子化合物:將脫蛋白的多糖溶液移入透析袋中，保留至少1/3透析袋體系的空間；在在同等體積的蒸餾水中透析24h，每8h換一次水，以脫鹽及除去其它小分子化合物；水溶液減壓濃縮得濃縮液； 7)多糖沉澱和乾燥:向濃縮液中加入95%的こ醇，置於0~4°C過夜，4800r/min，離心10分鐘，收集沉澱；收集的沉澱經真空冷凍乾燥，即得牡丹花雄蕊多糖。
2.根據權利I所述的步驟I)中，其特徵在於:牡丹花雄蕊陰乾後粉碎至粒徑為20~100 目。
3.根據權利I所述的步驟2)中，其特徵在於:加水的量為5~15倍量；超低溫冰箱的溫度為-60~_80°C，冷凍時間為12~16小時；水浴鍋溫度為70~90°C，水浴時間為I~2小時；超聲處理時間為10~50分 鍾。
4.根據權利I所述的步驟3)中，其特徵在於:破壁後的牡丹花雄蕊中加入石油醚，料液比為1:2~4(W/V)，回流時間為6~8小吋；向固形物中加入80%こ醇，料液比為1:2~4(W/V)。
5.根據權利I所述的步驟4)中，其特徵在幹:向固形物中加入蒸餾水，料液比為1:10~30 (W/V)，加熱溫度為60~90°C，提取時間為I~5小吋。
6.根據權利I所述的步驟5)中，其特徵在於:sevage試劑(氯仿:正丁醇=5:1，V/V)的用量為濃縮液體積的0.1~0.3倍，攪拌時間為20~40分鐘；重複操作3~5次。
7.根據權利I所述的步驟7)中，其特徵在於:向濃縮液中加入3~5倍體積95%的こ醇。
8.根據權利I所述的方法，其特徵在於:所述牡丹品種為鳳丹，但不限於鳳丹。
【文檔編號】C08B37/00GK103554284SQ201310471886
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月11日 優先權日:2013年10月11日
【發明者】鄭國生, 史美麗, 馬傳利, 周遠明, 於曙光, 劉帥 申請人:青島農業大學