線粒體醛脫氫酶2(ALDH2)結合多環醯胺和其用於治療癌症的用途的製作方法

2023-06-07 13:22:26

本申請要求2014年2月19日提交的美國臨時申請號61/941,909的優先權和權益，所述臨時申請的全部內容以全文引用的方式併入本文中。

技術領域

本公開涉及調節線粒體醛脫氫酶-2(ALDH2)的活性的化合物，以及所述化合物的製備和/或使用方法。

背景技術：

線粒體醛脫氫酶-2(ALDH2)是一種催化外源和生源醛化合物轉化為相應的酸(例如乙醛轉化為乙酸)的酶。ALDH2對於人類中的酒精代謝是關鍵的，因為它進一步分解來自醇脫氫酶活性的乙醇氧化的產物。56kDa酶以核基因組編碼並被轉運到線粒體中。ALDH2以由四個相同亞基構成的四聚體蛋白形式存在於溶液中，所述亞基各自由約517個胺基酸殘基組成。所述四聚體可被視為二聚體的二聚體。形成二聚體的單體之間的界面不同，並且比形成四聚體的兩個二聚體之間的界面更加廣泛。每個亞基由三個結構域構成：催化結構域、輔酶或NAD+結合結構域和寡聚結構域。

範可尼貧血(Fanconi anemia，FA)是一種常染色體隱性遺傳病症，其特徵在於先天性畸形、骨髓衰竭和惡性疾病傾向，包括骨髓增生異常症候群和急性髓性白血病。參見Auerbach等,《遺傳性疾病的代謝和分子基礎》(The Metabolic and Molecular Basis of Inherited Diseases).第8版.Scriver等編輯.New York:McGraw-Hill；2001.第753-768頁。大多數患者在中位年齡五歲時經歷骨髓衰竭。進行性全血細胞減少和先天性畸形(包括身材矮小、橈骨發育不全、泌尿道畸形、色素沉著和發育遲緩)是常見的症狀。範可尼貧血與癌症、特別是急性骨髓性白血病傾向和患上實體腫瘤的風險增加相關。

在具有再生障礙性貧血，手臂和/或拇指、心臟、中樞神經系統、泌尿生殖系統、腎臟和/或骨骼系統畸形，色素沉著，體型矮小和/或出血病症的年輕患者中需要進行範可尼貧血測試。

已經報導了一些FA互補群(FA-A至FA-O)(參見例如Joenje等,《美國人類遺傳學雜誌》(Am J Hum Genet.)(2000),67:759-762)，其中FA-A(在線《人類孟德爾遺傳》(Online Mendelian Inheritance in Man),OMIM no.227650)佔患者的大約三分之二。FANCA、FANCB、FANCC、FANCD2、FANCE、FANCF、FANCG、FANCI、FANCJ(BRIP1)、FANCL、FANCM、FANCN(PALB2)和FANCO(RAD51C)基因已經被克隆並且已知是範可尼貧血的致病突變。參見例如Lo Ten Foe等,《自然遺傳學》(Nat Genet.)(1996),14:320-323；範可尼貧血/乳腺癌協會(Fanconi Anemia/Breast Cancer Consortium.)《自然遺傳學》(Nat Genet.)(1996),14:324-328；Strathdee等,《自然遺傳學》(Nat Genet.)(1992),1:196-198；de Winter等,《美國人類遺傳學雜誌》(Am J Hum Genet.)(2000),67:1306-1308；de Winter等,《自然遺傳學》(Nat Genet.)(2000),24:15-16；和de Winter等,《自然遺傳學》(Nat Genet.)(1998),20:281-283。然而，這些基因的特定功能仍不清楚。

FA基因產物在保護人類基因組的完整性中起重要作用；由於未能修復DNA損傷，任何FA基因的突變總是導致基因組不穩定性。在過去十年中，已經確定了範可尼貧血基因產物在DNA修復中的作用。然而，在FA患者中造成過度的基因組不穩定性從而導致發育異常、BMF和惡性疾病傾向的表型的來源和化學劑一直難以捉摸。在生理條件下能夠攻擊DNA並造成基因組不穩定性的環境汙染物、致癌物質和生源活性化學物質是FA的分子觸發物的主要嫌疑對象。活性醛是可以通過形成DNA-蛋白質或DNA-DNA交聯而破壞DNA的已知毒性分子。參見Brooks,P.J.和Zakhari,S.Acetaldehyde and the genome:Beyond nuclear DNA adducts and carcinogenesis,《環境與分子誘變》(Environ.Mol.Mutagen.),2014,55:77-91。已經提出，FA患者中的骨髓衰竭可由內源性醛誘導的毒性產生，所述毒性然後導致造血幹細胞(HSC)的損耗，如在Aldh2-/-Fancd2-/-小鼠中所觀測。參見Langevin F等,Fancd2counteracts the toxic effects of naturally produced aldehydes in mice,《自然》(Nature)(2011),475(7354):53-58；Garaycoechea JI等,Genotoxic consequences of endogenous aldehydes on mouse haematopoietic stem cell function.《自然》(Nature)(2012),489(7417):571-575。一組日本FA患者的ALDH2基因型最近已被破譯。參見Hira A等,Variant ALDH2is associated with accelerated progression of bone marrow failure in Japanese Fanconi anemia patients,《血液》(Blood)(2013),122(18):3206-3209。在涉及日本患者人群的一項研究中，在ALDH2缺乏下觀測到骨髓衰竭的急劇加速和一些組織中的畸形頻率增加(這些患者在ALDH2基因中帶有雙重突變，即，表示為ALDH*2/*2的純合突變等位基因，因此，完全沒有ALDH2活性)。參見Hira(2013)。最引人注目的是，那些患者在生命的前7個月內完全沒有ALDH2發展的骨髓衰竭，這表明活性醛在範可尼貧血預後中發揮重要作用。參見同上。

本公開提供作為ALDH2激動劑的化合物，其可用於治療和/或預防ALDH2在其中起作用的疾病或病症。例如，本發明化合物可用於治療外周動脈疾病(PAD)、急性炎性疼痛、肝臟損傷和損害如肝纖維化、酒精相關病症如不耐受、成癮、致醉、濫用等。此外，本發明化合物可用於治療範可尼貧血。本公開還提供治療和/或預防癌症(例如，食道癌和範可尼貧血患者或帶有範可尼貧血的FANC*致病突變的患者中的癌症)，以及預防和/或防止由電離輻射或化療造成的損傷和損害的方法。

技術實現要素：

本發明提供調節線粒體醛脫氫酶-2(ALDH2)活性的化合物，以及所述化合物的製備和/或使用方法。在一個方面，本公開提供式I化合物：

或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，

其中：

A是O、S、NH或N-RC；

RA是H、任選地被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C8環烷基；

RB是RC或任選地被RC取代的3-14元碳環；

RC是D或C1-C6烷基；

X1和X2獨立地是N或CH；

R1、R2、R3和R4獨立地選自-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3和-OCD3；

可選地，R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環；

Z是選自以下的被取代的環結構

其中i是0、1、2或3；

R5、R6、R7和R8獨立地選自H、F和N(CH3)2；

X3、X4、X5和X6獨立地選自N、NO和CH；

X7、X8和X9獨立地選自S、O、N、NR9和CR9；

R9是H或CH3；

R10是R11、-CH＝CHR11、或其中j是0、1、2或3；

R11是-C(CH3)2NH2、-CH(CH3)2、-CH(CH3)OH、-NH2、-NHRC、-NRC2、-OCH3、-C(O)CH3、-OPO3H2、-COOH、-CH＝NOH、-CH3、-SH、-OH或-H；並且

每個R12獨立地是H或D。

在另一個子集中，所述式(I)化合物包括其中X3、X4、X5和X6中的至少兩個是CH的那些。在一些實施方案中，所述式(I)化合物包括具有X1和X2為CH的那些。在其他實施方案中，所述式(I)化合物包括具有X1或X2中的一個為CH的那些。本公開的式(I)化合物包括其中X3、X4、X5和X6中的一個或兩個是N或NO的化合物。

本公開提供其中RA是被RB取代的C1烷基的式(I)化合物，其中RB是未被取代的環丙基。根據本公開的式(I)化合物包括其中A是O，RA是被RB取代的C1烷基並且RB是未被取代的環丙基的那些。在一些實施方案中，本公開的化合物包括其中A是NH，RA是被RB取代的C1烷基並且RB是未被取代的環丙基的那些。在一些實施方案中，所述化合物具有其中A是O的式。在一些實施方案中，所述化合物具有其中「i」是1，R10是R11並且R11是-OH的式。在一個實施方案中，RA是C1-C6直鏈飽和烴鏈或C3-C6支鏈飽和烴鏈。在另一個實施方案中，RA是C3-C8環烷基。在另一個實施方案中，R1和R3中的一個或兩個是F，R2是OCD3，並且R4是H。

本公開提供式(I)化合物的子集，其中被取代的環結構Z選自呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、嗎啉基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,2,4-噁二唑5(4H)-酮、噁唑烷基、噁唑基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮、4-哌啶酮、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、四唑基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻唑基、噻吩基、苯硫基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基和1,3,4-三唑基。

本公開提供式(I)化合物的酯、磷醯氧基甲基(POM)和磷醯氧基甲基氧甲基(POMOM)衍生物，或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物。

所述式(I)化合物的一個子集包括表1中列出的化合物AC1-AC166。

表1

本公開還提供包含一種或多種藥學上可接受的載體和一種或多種選自本文公開的任何式或化合物的那些的化合物的藥物組合物。

本發明的另一個方面是治療和/或預防癌症的方法。本公開的方法降低癌症的發病率和/或進展。在一個實施方案中，本公開提供降低有需要的受試者中的口腔癌、肺癌、頭癌、頸癌、白血病、淋巴瘤和/或多發性骨髓瘤的發病率和/或進展的方法。所述方法包括向有需要的受試者施用治療有效量的一種或多種選自本文公開的任何式或化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的那些的化合物。

除非另外說明，否則關於治療和/或預防方法的任何描述包括使用所述化合物來提供如本說明書中所述的這種治療和/或預防，以及使用所述化合物來製備藥物以治療和/或預防這種病狀。所述治療包括人類或非人類動物，其包括齧齒動物和疾病模型中的其他動物。

在另一個方面，本公開涉及治療和/或預防有需要的受試者中的癌症的進展和/或復發的方法，所述方法包括施用：a)式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥；和b)癌症化療劑或電離輻射。所述方法包括將所述化合物與所述癌症化療劑、或者化合物與所述電離輻射以組合有效量施用以治療和/或預防癌症的進展和/或復發。與式(I)化合物一起施用的化療劑選自烷化劑、亞硝基脲、抗代謝物、抗腫瘤抗生素、植物(長春花)生物鹼和類固醇激素。

用於與所述式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥一起施用的烷化劑選自氮芥、亞硝基脲、乙烯亞胺衍生物、磺酸烷酯和三氮烯，其包括(但不限於)二氯甲基二乙胺、環磷醯胺、美法侖(L-沙可來新)、卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、司莫司汀(甲基-CCNU)、鏈脲佐菌素、氯脲黴素、尿嘧啶氮芥、氮芥、異環磷醯胺、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、三乙烯三聚氰胺、三乙烯硫代磷胺、白消安、達卡巴嗪和替莫唑胺。

在一個實施方案中，本公開的治療和/或預防癌症的進展和/或復發的方法涉及通過體外放射治療或近距離放射治療來施用電離輻射。在一些實施方案中，所述化合物的施用降低了治療或預防癌症所需的化療劑或電離輻射的量。

在一個實施方案中，所述化療劑選自烷化劑、亞硝基脲、抗代謝物、抗腫瘤抗生素、植物(長春花)生物鹼和類固醇激素。在一個實施方案中，所述烷化劑選自氮芥、亞硝基脲、乙烯亞胺衍生物、磺酸烷酯和三氮烯，其包括(但不限於)二氯甲基二乙胺、環磷醯胺、美法侖(L-沙可來新)、卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、司莫司汀(甲基-CCNU)、鏈脲佐菌素、氯脲黴素、尿嘧啶氮芥、氮芥、異環磷醯胺、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、三乙烯三聚氰胺、三乙烯硫代磷胺、白消安、達卡巴嗪和替莫唑胺。

在一個實施方案中，本發明涉及降低處於患上口腔癌或肺癌的風險下的受試者中的癌症的發病率、進展和/或復發的方法，所述方法包括向有需要的受試者施用有效量的本發明化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。在一個實施方案中，所述化合物是通過選自肌內、靜脈內、皮下、口服和局部的途徑施用的。

在一個實施方案中，本發明涉及降低有需要的受試者中的頭和頸癌的發病率、進展和/或復發的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的本發明化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。在一個實施方案中，所述受試者是習慣性檳榔使用者。在一個實施方案中，用於治療和/或預防癌症的進展和/或復發的化合物被配製成牙膏、牙凝膠、牙粉、漱口水、口香糖或含片。

本發明的另一個方面是治療和/或預防範可尼貧血的方法。本公開的方法降低範可尼貧血的發病率和/或進展。所述化合物治療和/或預防範可尼貧血的一種或多種症狀，例如進行性全血細胞減少、身材矮小、橈骨發育不全、泌尿道畸形、色素沉著和先天性發育遲緩。在一個實施方案中，本公開提供降低有需要的受試者中的範可尼貧血的發病率和/或進展的方法。所述方法包括向有需要的受試者施用治療有效量的一種或多種化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，其選自本文公開的任何式或化合物的那些。本公開還提供用於治療和/或預防範可尼貧血的藥物的製造方法。因此製造的藥物被用於治療和/或預防範可尼貧血的症狀，例如全血細胞減少、身材矮小、橈骨發育不全、泌尿道畸形、色素沉著和先天性發育遲緩。

所述式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥降低了需要治療和/或預防範可尼貧血的受試者中的癌症的風險；所述癌症選自急性骨髓性白血病，口腔、食道、胃腸道、肛門和外陰的鱗狀細胞癌，頭和頸鱗狀細胞癌(HNSCC)以及乳腺癌。

在一個實施方案中，本發明涉及在有需要的受試者中治療和/或預防輻射誘導的上皮細胞損傷的方法，所述方法包括向所述受試者施用本發明的化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。在一個實施方案中，所述輻射誘導的損傷導致放射性皮炎。在一個實施方案中，所述化合物是在對受試者進行電離輻射之前施用的。在一個實施方案中，所述化合物是在對受試者進行電離輻射之後施用的。在一個實施方案中，所述化合物是在對受試者進行電離輻射之前和之後施用的。在一個實施方案中，所述輻射誘導的損傷導致黏膜炎。在一個實施方案中，將所述化合物施用至受試者中的黏膜表面。

在一個實施方案中，所述電離輻射是通過體外放射治療或近距離放射治療施用的。在一個實施方案中，所述化合物的施用降低了治療或預防癌症所需的化療劑或電離輻射的量。

在一個實施方案中，本發明涉及在暴露於醇或醛的有需要的受試者中螯合醛的方法，其包括向所述受試者施用有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。

在一個實施方案中，本發明涉及將有需要的受試者中以毒性水平存在的醛的水平降至低於所述毒性水平的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的本發明的化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，其中所述醛是生源醛或外源醛。在一個實施方案中，所述生源醛是乙醛、丙二醛(MDA)、3,4-二羥基苯乙醛(DOPAL)、3,4-二羥基苯基羥乙醛(DOPEGAL)、己醛、丙烯醛、乙二醛、丁烯醛、反式-2-壬烯醛、4-氧代-2-壬烯醛或4-羥基-2-壬烯醛(4HNE)。在一個實施方案中，所述外源醛是攝入或吸入的環境醛。

在一個實施方案中，本發明涉及治療和/或預防酒精不耐受、酒精成癮、酒精濫用障礙、酒精緻醉、酒精依賴、酒精中毒或飲酒症狀的方法，所述方法包括向有需要的受試者施用有效量的本發明的化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。在一個實施方案中，所述酒精中毒是甲醇中毒。在一個實施方案中，所述酒精中毒是急性酒精中毒。在一個實施方案中，所述酒精緻醉是急性酒精緻醉。在一個實施方案中，所述飲酒症狀是宿醉症狀。在另一個實施方案中，所述宿醉症狀選自脫水、疲乏、頭痛、全身酸痛、嘔吐、腹瀉、脹氣、虛弱、體溫和心率升高、唾液分泌過多、注意力不集中、出汗、焦慮、煩躁、易怒、對光線和噪音敏感、運動功能不穩定、睡眠問題、極度飢餓、口臭和缺乏深度知覺。

在一個實施方案中，治療和/或預防酒精不耐受、酒精成癮、酒精濫用障礙、酒精緻醉、酒精依賴、酒精中毒或飲酒症狀的方法還包括施用阿片受體拮抗劑。在一個實施方案中，所述阿片受體拮抗劑是納曲酮。

在另一個方面，本發明涉及在有需要的受試者中治療和/或預防外周動脈疾病的方法。所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。

本發明的另一個方面涉及在有需要的受試者中治療和/或預防肝臟損傷和/或損害的方法。所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。

在另一個方面，本發明涉及在有需要的受試者中治療和/或預防急性炎性疼痛的方法。所述方法包括向有需要的受試者施用治療有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。

本發明的另一個方面涉及用於降低有需要的受試者中的口腔癌、食道癌和/或肺癌的發病率或進展的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。

在另一個方面，本發明涉及用於降低有需要的受試者中的頭和/或頸癌的發病率或進展的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。在一個實施方案中，所述受試者是習慣性檳榔使用者。

本發明的另一個方面涉及用於在有需要的受試者中治療和/或預防癌症的組合療法中的化合物，其中所述化合物是式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，其與癌症化療劑或電離輻射組合使用，其中所述化合物與所述癌症化療劑、或者化合物與所述電離輻射以組合有效量施用以治療或預防所述癌症。在一個實施方案中，所述化療劑選自烷化劑、亞硝基脲、抗代謝物、抗腫瘤抗生素、植物(長春花)生物鹼和類固醇激素。在另一個實施方案中，所述烷化劑選自氮芥、亞硝基脲、乙烯亞胺衍生物、磺酸烷酯和三氮烯，其包括(但不限於)二氯甲基二乙胺、環磷醯胺、美法侖(L-沙可來新)、卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、司莫司汀(甲基-CCNU)、鏈脲佐菌素、氯脲黴素、尿嘧啶氮芥、氮芥、異環磷醯胺、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、三乙烯三聚氰胺、三乙烯硫代磷胺、白消安、達卡巴嗪和替莫唑胺。在另一個實施方案中，所述電離輻射是通過體外放射治療或近距離放射治療施用的。在另一個實施方案中，所述化合物的施用降低了治療或預防癌症所需的化療劑或電離輻射的量。

在另一個方面，本發明涉及用於在有需要的受試者中治療和/或預防範可尼貧血的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。在一個實施方案中，所述化合物治療和/或預防範可尼貧血的一種或多種症狀，其選自進行性全血細胞減少、身材矮小、橈骨發育不全、泌尿道畸形、色素沉著和先天性發育遲緩。在另一個實施方案中，所述化合物降低了需要治療和/或預防範可尼貧血的受試者中的癌症風險，其中所述癌症選自急性骨髓性白血病，口腔、食道、胃腸道、肛門和外陰的鱗狀細胞癌，頭和頸鱗狀細胞癌(HNSCC)以及乳腺癌。

本發明的另一個方面涉及用於在暴露於醇或醛的受試者中螯合醛的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。

在另一個方面，本發明涉及用於將受試者中以毒性水平存在的醛的水平降至低於所述毒性水平的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。在一個實施方案中，所述醛是生源醛或外源醛。在另一個實施方案中，所述生源醛是乙醛、丙二醛(MDA)、3,4-二羥基苯乙醛(DOPAL)、3,4-二羥基苯基羥乙醛(DOPEGAL)、己醛、丙烯醛、乙二醛、丁烯醛、反式-2-壬烯醛、4-氧代-2-壬烯醛或4-羥基-2-壬烯醛(4HNE)。在另一個實施方案中，所述外源醛是攝入或吸入的環境醛。

本發明的另一個方面涉及用於治療和/或預防酒精不耐受、酒精成癮、酒精濫用障礙、酒精緻醉、酒精依賴、酒精中毒或飲酒症狀的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。在一個實施方案中，所述酒精中毒是甲醇中毒。在另一個實施方案中，所述酒精中毒是急性酒精中毒。在另一個實施方案中，所述酒精緻醉是急性酒精緻醉。在另一個實施方案中，所述飲酒症狀是宿醉症狀。在另一個實施方案中，所述宿醉症狀選自脫水、疲乏、頭痛、全身酸痛、嘔吐、腹瀉、脹氣、虛弱、體溫和心率升高、唾液分泌過多、注意力不集中、出汗、焦慮、煩躁、易怒、對光線和噪音敏感、運動功能不穩定、睡眠問題、極度飢餓、口臭和缺乏深度知覺。

在另一個方面，本發明涉及用於治療和/或預防酒精不耐受、酒精成癮、酒精濫用障礙、酒精緻醉、酒精依賴、酒精中毒或飲酒症狀的組合療法中的化合物，其中所述化合物是式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，其與阿片受體拮抗劑組合使用。在一個實施方案中，所述阿片受體拮抗劑是納曲酮。

本發明的另一個方面涉及用於在有需要的受試者中治療和/或預防外周動脈疾病的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。

在另一個方面，本發明涉及用於在有需要的受試者中治療和/或預防肝臟損傷和/或損害的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。在一個實施方案中，所述肝臟損傷和/或損害是肝纖維化。

本發明的另一個方面涉及用於在有需要的受試者中治療和/或預防急性炎性疼痛的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。

在另一個方面，本發明涉及用於製造用於降低有需要的受試者中的口腔癌、食道癌和/或肺癌的發病率或進展的藥物的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。

本發明的另一個方面涉及用於製造用於降低有需要的受試者中的頭和/或頸癌的發病率或進展的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。在一個實施方案中，所述受試者是習慣性檳榔使用者。

在另一個方面，本發明涉及用於製造用於在有需要的受試者中治療和/或預防癌症的藥物的組合，其中所述組合包含：a)式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥；和b)癌症化療劑或電離輻射，其中所述化合物與所述癌症化療劑、或者所述化合物與所述電離輻射以組合有效量施用以治療或預防所述癌症。在一個實施方案中，所述化療劑選自烷化劑、亞硝基脲、抗代謝物、抗腫瘤抗生素、植物(長春花)生物鹼和類固醇激素。在另一個實施方案中，所述烷化劑選自氮芥、亞硝基脲、乙烯亞胺衍生物、磺酸烷酯和三氮烯，其包括(但不限於)二氯甲基二乙胺、環磷醯胺、美法侖(L-沙可來新)、卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、司莫司汀(甲基-CCNU)、鏈脲佐菌素、氯脲黴素、尿嘧啶氮芥、氮芥、異環磷醯胺、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、三乙烯三聚氰胺、三乙烯硫代磷胺、白消安、達卡巴嗪和替莫唑胺。在另一個實施方案中，所述電離輻射是通過體外放射治療或近距離放射治療施用的。在另一個實施方案中，所述化合物的施用降低了治療或預防癌症所需的化療劑或電離輻射的量。

本發明的另一個方面涉及用於製造在有需要的受試者中治療和/或預防範可尼貧血的藥物的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。在一個實施方案中，所述化合物治療和/或預防範可尼貧血的一種或多種症狀，其選自進行性全血細胞減少、身材矮小、橈骨發育不全、泌尿道畸形、色素沉著和先天性發育遲緩。在另一個實施方案中，所述化合物降低了需要治療和/或預防範可尼貧血的受試者中的癌症風險，其中所述癌症選自急性骨髓性白血病，口腔、食道、胃腸道、肛門和外陰的鱗狀細胞癌，頭和頸鱗狀細胞癌(HNSCC)以及乳腺癌。

在另一個方面，本發明涉及用於製造用於在暴露於醇或醛的受試者中螯合醛的藥物的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。

本發明的另一個方面涉及用於製造用於將受試者中以毒性水平存在的醛的水平降至低於所述毒性水平的藥物的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。在一個實施方案中，所述醛是生源醛或外源醛。在另一個實施方案中，所述生源醛是乙醛、丙二醛(MDA)、3,4-二羥基苯乙醛(DOPAL)、3,4-二羥基苯基羥乙醛(DOPEGAL)、己醛、丙烯醛、乙二醛、丁烯醛、反式-2-壬烯醛、4-氧代-2-壬烯醛或4-羥基-2-壬烯醛(4HNE)。在另一個實施方案中，所述外源醛是攝入或吸入的環境醛。

在另一個方面，本發明涉及用於製造用於治療和/或預防酒精不耐受、酒精成癮、酒精濫用障礙、酒精緻醉、酒精依賴、酒精中毒或飲酒症狀的藥物的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。在一個實施方案中，所述酒精中毒是甲醇中毒。在另一個實施方案中，所述酒精中毒是急性酒精中毒。在另一個實施方案中，所述酒精緻醉是急性酒精緻醉。在另一個實施方案中，所述飲酒症狀是宿醉症狀。在另一個實施方案中，所述宿醉症狀選自脫水、疲乏、頭痛、全身酸痛、嘔吐、腹瀉、脹氣、虛弱、體溫和心率升高、唾液分泌過多、注意力不集中、出汗、焦慮、煩躁、易怒、對光線和噪音敏感、運動功能不穩定、睡眠問題、極度飢餓、口臭和缺乏深度知覺。

本發明的另一個方面涉及用於製造用於治療和/或預防酒精不耐受、酒精成癮、酒精濫用障礙、酒精緻醉、酒精依賴、酒精中毒或飲酒症狀的藥物的組合，其中所述組合包含式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和阿片受體拮抗劑。在一個實施方案中，所述阿片受體拮抗劑是納曲酮。

在另一個方面，本發明涉及用於製造用於在有需要的受試者中治療和/或預防外周動脈疾病的藥物的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。

本發明的另一個方面涉及用於製造用於在有需要的受試者中治療和/或預防肝臟損傷和/或損害的藥物的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。在一個實施方案中，所述肝臟損傷和/或損害是肝纖維化。

在另一個方面，本發明涉及用於製造用於在有需要的受試者中治療和/或預防急性炎性疼痛的藥物的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。

在一個實施方案中，本發明涉及合成本發明化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物的方法。

附圖說明

為了理解本發明並且顯示它可如何在實踐中執行，現在僅通過非限制性實施例，參考附圖來描述實施方案，在所述附圖中：

圖1(A)-(B)描繪了示出在0至30μM範圍內的4HNE(反式-4-羥基壬烯醛(4HNE)是ω-6多不飽和脂肪酸的過氧化產物)濃度下FANCA缺陷型細胞生長隨時間的抑制作用的線圖，1(A)通過螢光測量的細胞生長，1(B)相對細胞生長。

圖2(A)-(B)描繪了示出在濃度範圍為2至10μM的ALDH2活化劑AC32和AC6存在下3.5μM 4HNE隨時間對FANCA缺陷型細胞生長的抑制作用的線圖。用10μM AC6和AC32處理的細胞相比於對照顯示更有效的生長直至48小時，2(A)通過螢光測量的細胞生長，2(B)相對細胞生長。

圖3(A)-(B)描繪了示出在濃度為10μM的ALDH2活化劑AC32和濃度為5μM和10μM的ALDH2活化劑AC6存在下6μM 4HNE隨時間對FANCA缺陷型細胞生長的抑制作用的線圖。圖3B描繪了示出AC32和AC6拯救FANCA缺陷型細胞免於6μM 4HNE的生長抑制作用的線圖，3(A)通過螢光測量的細胞生長，3(B)相對細胞生長。

圖4(A)描繪了示出基線和用Alda-1或AC151化合物處理後的同側縮爪閾值的條形圖。圖4(B)描繪了示出用Alda-1或AC151化合物處理後的同側縮爪閾值的條形圖。數據以平均值±SEM呈現。星號(*p<0.05)指示相比於媒介物的顯著差異。

圖5描繪了示出基線和用Alda-1或AC151化合物處理後的對側縮爪閾值的條形圖。數據以平均值±SEM呈現。

圖6描繪了示出當用AC151、伊馬替尼、媒介物(鹽水)和假處理對照(橄欖油)處理時的小鼠中的丙氨酸轉氨酶(ALT)和天冬氨酸轉氨酶(AST)水平的條形圖。

圖7是用作外周動脈疾病的替代模型的肢體缺血鼠類動物研究設計的示意圖。

圖8(A)和圖8(B)是示出在用AC112或Alda-1處理的動物中觀測到的對奔跑距離和時間的影響的條形圖。

圖9(A)和圖9(B)是示出在用AC112或Alda-1處理的動物中觀測到的對疼痛閾值和骨骼肌的影響的條形圖。

圖10(A)和圖10(B)是示出在用AC112或Alda-1處理的動物中觀測到的對骨骼肌測量結果(例如，骨骼肌收縮能力和骨骼肌阻力)和肌肉組織的ALDH2活性的影響的條形圖。

具體實施方式

本公開的一個或多個實施方案的細節已經在下文所附描述中得到闡述。雖然與本文所述那些類似或等效的任何方法和材料都可以用於實施或測試本發明，但現在描述優選的方法和材料。根據本說明書和權利要求書，本公開的其他特徵、目的和優點將是顯而易見的。在本說明書和所附權利要求書中，除非上下文另有明確說明，否則單數形式包括複數個提及物。本說明書中引用的所有出版物都以全文引用的方式併入。

為方便起見，本說明書、實施例和權利要求中使用的某些術語集中於此。除非另有定義，否則本文使用的所有技術和科學術語具有與本公開所屬領域的普通技術人員通常所理解相同的含義。

本發明提供調節線粒體醛脫氫酶-2(ALDH2)的化合物，和所述化合物的製備和/或使用方法。

化合物

本發明涉及式(I)化合物：

或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，

其中：

A是O、S、NH或N-RC；

RA是H、任選地被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C8環烷基；

RB是RC或任選地被RC取代的3-14元碳環；

RC是D或C1-C6烷基；

X1和X2獨立地是N或CH；

R1、R2、R3和R4獨立地選自-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3和-OCD3；

可選地，R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環；

Z是選自以下的被取代的環結構

其中i是0、1、2或3；

R5、R6、R7和R8獨立地選自H、F和N(CH3)2；

X3、X4、X5和X6獨立地選自N、NO和CH；

X7、X8和X9獨立地選自S、O、N、NR9和CR9；

R9是H或CH3；

R10是R11、-CH＝CHR11、或其中j是0、1、2或3；

R11是-C(CH3)2NH2、-CH(CH3)2、-CH(CH3)OH、-NH2、-NHRC、-NRC2、-OCH3、-C(O)CH3、-OPO3H2、-COOH、-CH＝NOH、-CH3、-SH、-OH或-H；並且

每個R12獨立地是H或D。

在一個實施方案中，所述式I化合物具有式(Ia)的結構：

和其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，

其中：

A是O、S、NH或N-RC；

RA是H、任選地被RB取代的C1-C6烷基、或C3-C6環烷基；

RB是RC或任選地被RC取代的3-14元碳環；

RC是C1-C6烷基；

X1和X2獨立地是N或CH；

R1、R2、R3和R4獨立地選自-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3和-OCH3；

可選地，R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環；

Z是選自以下的被取代的環結構

其中i是0、1、2或3；

R5、R6、R7和R8獨立地選自H、F和N(CH3)2；

X3、X4、X5和X6獨立地選自N、NO和CH；

X7、X8和X9獨立地選自S、O、N、NR9和CR9；

R9是H或CH3；並且

R10是R11、-CH＝CHR11、或其中j是0、1、2或3；並且

R11是-C(CH3)2NH2、-CH(CH3)2、-CH(CH3)OH、-NH2、-NHRC、-NRC2、-OCH3、-C(O)CH3、-OPO3H2、-COOH、-CH＝NOH、-CH3、-SH、-OH或-H。

在另一個實施方案中，所述式I化合物具有式(Ib)的結構：

或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，

其中，R1、R2、R3、R4、RA、A和Z如本文關於式(I)或(Ia)所限定。

在另一個實施方案中，所述式I化合物具有式(Ic)的結構：

或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，

其中，R1、R2、R3、R4、RA、A和Z如本文關於式(I)或(Ia)所限定。

在另一個實施方案中，所述式I化合物具有式(Id)的結構：

或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，

其中，R1、R2、R3、R4、RA、A和Z如本文關於式(I)或(Ia)所限定。

在一些實施方案中，所述式(I)化合物包括其中A是O的那些。在其他實施方案中，所述式(I)化合物包括其中A是NH的那些。本公開還提供其中A是S的式(I)化合物。在一些實施方案中，A是N-RC，RC是C1-C6烷基。

在一些實施方案中，所述式(I)化合物包括其中RC是甲基或乙基的那些。在一些實施方案中，所述式(I)化合物包括其中R11是甲基或乙基的那些。在一些實施方案中，所述式(I)化合物包括其中R11是甲基或乙基並且RC是甲基或乙基的那些。在其他實施方案中，式(I)化合物包括其中R11是-N(CH3)2、-NHCH2CH3、-NHCH3的那些。

所述式(I)化合物的一個子集包括其中X1和X2都是CH的那些。所述式(I)化合物的另一個子集包括其中X1或X2中的一個是CH的那些。在某些化合物中，R1、R2、R3和R4中的至少一個不是H。例如，X1或X2不是CH，並且R1、R2、R3和R4中的至少一個是F或OCH3。在一個實施方案中，X1或X2是N，並且R1、R2、R3和R4中的一個是F並且至少另一個R1、R2、R3和R4是OCH3。在其他實施方案中，當X1或X2是N時，並且R1、R2、R3和R4中的至少一個是F並且另一個R1、R2、R3和R4是CF3或CH3。

在一些實施方案中，所述式(I)化合物包括其中RA是C3-C8環烷基的那些。在另一個實施方案中，所述式(I)化合物包括其中R1和R3中的一個或兩個是F，R2是OCD3並且R4是H的那些。在一個實施方案中，X1或X2是N，並且R1、R2、R3和R4中的一個是F並且至少另一個R1、R2、R3和R4是OCH3或OCD3。在其他實施方案中，當X1或X2是N時，並且R1、R2、R3和R4中的至少一個是F並且另一個R1、R2、R3和R4是CF3或CH3。

在一些實施方案中，所述式(I)化合物包括其中RA是C3-C8環烷基的那些。在另一個實施方案中，所述式(I)化合物包括其中R1和R3中的一個或兩個是F，R2是OCH3或OCD3並且R4是H的那些。

在一些實施方案中，所述式(I)化合物包括其中RA是C7-C8環烷基的那些。

在一些實施方案中，所述式(I)化合物包括其中RA是C3-C6環烷基的那些。在另一個實施方案中，所述式(I)化合物包括其中R1和R3中的一個或兩個是F，R2是OCH3並且R4是H的那些。

在一些實施方案中，所述式(I)化合物包括其中RC是D、甲基或乙基的那些。在一些實施方案中，所述式(I)化合物包括其中R11是甲基或乙基的那些。在一些實施方案中，所述式(I)化合物包括其中R11是甲基或乙基並且RC是D、甲基或乙基的那些。在其他實施方案中，式(I)化合物包括其中R11是-N(CH3)2、-NHCH2CH3、-NHCH3的那些。在其他實施方案中，所述式(I)化合物包括其中R12是H或D的那些。

本公開還提供其中R1和R3中的一個或兩個是F，R2是OCH3的式(I)化合物的子集。式(I)化合物包括其中R1和R3中的一個或兩個是OCH3、CF3或H並且R2或R4是F的那些。所述式(I)化合物的其他子集包括其中R1、R2、R3和R4中的兩個、三個或全部是H的那些。在一個實施方案中，R1、R2、R3和R4中的一個是F，並且另一個是OCH3或CF3。在其他實施方案中，R2是OCH3，R3是F，並且R1和R4都是H。在其他實施方案中，R2是OCH3，R1是F，並且R3和R4都是H。在一些實施方案中，R1和R3中的一個或兩個是F，R2是OCH3，並且R4是H。在其他實施方案中，R1、R2、R3和R4中的至少一個不是H。在一些實施方案中，R1、R2、R3和R4中的一個、兩個、三個或全部都不是H。本公開還提供其中X1、X2、X3、X4、X5中的每一個是CH，X6是N，i是1，R10是R11並且R2是OCH3的式(I)化合物，其中R11是OH，並且R1、R3或R4是F、-OCH3、-Cl或RC。

在另一個子集中，所述式(I)化合物包括其中X3、X4、X5和X6中的至少兩個是CH的那些。在一些實施方案中，所述式(I)化合物包括具有X1和X2為CH的那些。在其他實施方案中，所述式(I)化合物包括具有X1或X2中的一個為CH的那些。本公開的式(I)化合物包括其中X3、X4、X5和X6中的一個或兩個是N或NO的化合物。

本公開提供其中RA是被RB取代的C1烷基的式(I)化合物，其中RB是未被取代的環丙基。根據本公開的式(I)化合物包括其中A是O，RA是被RB取代的C1烷基並且RB是未被取代的環丙基的那些。在一些實施方案中，本公開的化合物包括其中A是NH，RA是被RB取代的C1烷基並且RB是未被取代的環丙基的那些。在一些實施方案中，所述化合物具有其中A是O的式。在一些實施方案中，所述化合物具有其中「i」是1，R10是R11並且R11是-OH的式。在一個實施方案中，RA是C1-C6直鏈飽和烴鏈或C3-C6支鏈飽和烴鏈。

本公開提供式(I)化合物的子集，其中被取代的環結構Z選自呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、嗎啉基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,2,4-噁二唑5(4H)-酮、噁唑烷基、噁唑基、異噁唑基、吡唑基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮、4-哌啶酮、吡啶基(pyridinyl/pyridyl)、嘧啶基、四唑基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻唑基、噻吩基、苯硫基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基和1,3,4-三唑基。

在式(I)的一些實施方案中，關於X1、X2、R1、R2、R3、R4、RA、A和Z中的任一個所限定的每個取代基可以與關於其餘X1、X2、R1、R2、R3、R4、RA、A和Z所限定的任何取代基組合。

在式(Ia)的一些實施方案中，關於X1、X2、R1、R2、R3、R4、RA、A和Z中的任一個所限定的每個取代基可以與關於其餘X1、X2、R1、R2、R3、R4、RA、A和Z所限定的任何取代基組合。

在式(Ib)的一些實施方案中，關於R1、R2、R3、R4、RA、A和Z中的任一個所限定的每個取代基可以與關於其餘R1、R2、R3、R4、RA、A和Z所限定的任何取代基組合。

在式(Ic)的一些實施方案中，關於R1、R2、R3、R4、RA、A和Z中的任一個所限定的每個取代基可以與關於其餘R1、R2、R3、R4、RA、A和Z所限定的任何取代基組合。

在式(Ic)的一些實施方案中，關於R1、R2、R3、R4、RA、A和Z中的任一個所限定的每個取代基可以與關於其餘R1、R2、R3、R4、RA、A和Z所限定的任何取代基組合。

本公開提供式(I)化合物的酯、磷醯氧基甲基(POM)和磷醯氧基甲基氧甲基(POMOM)衍生物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物。

在上述式的一些實施方案中，X1是CH。在另一個實施方案中，X1是CH並且X2是CH。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，並且A是O。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是O，並且R1是-H、-F、-Cl或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是O，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是O，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，並且R3是-H、-F、-Cl或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是O，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是O，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3並且Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是O，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C8環烷基。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是O，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C6環烷基。

在上述式的一些實施方案中，X1是N。在另一個實施方案中，X1是N並且X2是CH。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，並且A是O。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是O，並且R1是-H、-F、-Cl或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是O，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是O，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，並且R3是-H、-F、-Cl或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是O，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是O，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，並且Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是O，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C8環烷基。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是O，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C6環烷基。

在上述式的一些實施方案中，X1是CH。在另一個實施方案中，X1是CH並且X2是N。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，並且A是O。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是O，並且R1是-H、-F、-Cl或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是O，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是O，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，並且R3是-H、-F、-Cl或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是O，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是O，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，並且Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是O，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C8環烷基。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是O，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C6環烷基。

在上述式的一些實施方案中，X1是CH。在另一個實施方案中，X1是CH並且X2是CH。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，並且A是S。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是S，並且R1是-H、-F、-Cl或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是S，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是S，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，並且R3是-H、-F、-Cl或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是S，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是S，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，並且Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是S，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C8環烷基。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是S，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C6環烷基。

在上述式的一些實施方案中，X1是N。在另一個實施方案中，X1是N並且X2是CH。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，並且A是S。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是S，並且R1是-H、-F、-Cl或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是S，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是S，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，並且R3是-H、-F、-Cl或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是S，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是S，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，並且Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是S，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C8環烷基。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是S，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C6環烷基。

在上述式的一些實施方案中，X1是CH。在另一個實施方案中，X1是CH並且X2是N。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，並且A是S。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是S，並且R1是-H、-F、-Cl或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是S，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是S，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，並且R3是-H、-F、-Cl或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是S，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是S，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，並且Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是S，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C8環烷基。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是S，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C6環烷基。

在上述式的一些實施方案中，X1是CH。在另一個實施方案中，X1是CH並且X2是CH。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，並且A是NH。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是NH，並且R1是-H、-F、-Cl或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是NH，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是NH，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，並且R3是-H、-F、-Cl或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是NH，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是NH，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，並且Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是NH，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C8環烷基。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是NH，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C6環烷基。

在上述式的一些實施方案中，X1是N。在另一個實施方案中，X1是N並且X2是CH。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，並且A是NH。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是NH，並且R1是-H、-F、-Cl或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是NH，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是NH，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，並且R3是-H、-F、-Cl或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是NH，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是NH，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，並且Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是NH，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C8環烷基。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是NH，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C6環烷基。

在上述式的一些實施方案中，X1是CH。在另一個實施方案中，X1是CH並且X2是N。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，並且A是NH。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是NH，並且R1是-H、-F、-Cl或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是NH，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是NH，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，並且R3是-H、-F、-Cl或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是NH，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是NH，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，並且Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是NH，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C8環烷基。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是NH，R1是-H、-F、-Cl或-OCH3，R2是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3、-OCH3或-OCD3，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C6環烷基。

在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是O、NH或S，並且R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是O、NH或S，R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環，並且R3是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3和-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是O、NH或S，R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是O、NH或S，R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3並且Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是O、NH或S，R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C8環烷基。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是CH，A是O、NH或S，R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C6環烷基。

在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是O，NH或S，並且R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是O、NH或S，R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環，並且R3是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3和-OCH3。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是O、NH或S，R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是O、NH或S，R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3並且Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是O、NH或S，R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C8環烷基。在另一個實施方案中，X1是N，X2是CH，A是O、NH或S，R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C6環烷基。

在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是O、NH或S，並且R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是O、NH或S，R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環，並且R3是-H、-F、-Cl、-CH3、-CF3、-C(CH3)3和-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是O、NH或S，R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，並且R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是O、NH或S，R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3並且Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是O、NH或S，R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C8環烷基。在另一個實施方案中，X1是CH，X2是N，A是O、NH或S，R1和R2一起形成含有兩個氧原子的部分飽和的5元雜環，R3是-H、-F、-Cl或-OCH3，R4是-H、-F、-Cl、-CH3或-OCH3，Z是任選被取代的苯基、任選被取代的吡啶基、任選被取代的吡啶基氧化物、任選被取代的苯硫基、任選被取代的吡唑基、任選被取代的噻唑基、任選被取代的咪唑基、任選被取代的咪唑基呋喃基、或任選被取代的異噁唑基，並且RA是H、任選被一個或多個RB取代的C1-C6烷基、或C3-C6環烷基。

所述式(I)化合物的一個子集包括表1中列出的化合物AC1-AC166。本發明還涉及這些化合物的鹽。例如，酸加成鹽，例如鹽酸鹽。例如，所述鹽是二鹽酸鹽。

在一些實施方案中，本發明的化合物相比於其他ALDH家族成員具選擇性。如本文所用，「選擇性」或「選擇性ALDH2活化劑」或「選擇性ALDH2化合物」是指相比於任何其他ALDH家族成員(即，ALDH1A1、ALDH1A2、ALDH1A3、ALDH1B1、ALDH1L1、ALDH1L2、ALDH3A1、ALDH3A2、ALDH3B1、ALDH3B2、ALDH4A1、ALDH5A1、ALDH6A1、ALDH7A1、ALDH8A1、ALDH9A1、ALDH16A1和/或ALDH18A)在更大程度上有效活化ALDH2的化合物，例如本發明化合物。

可以例如通過比較化合物活化ALDH2的能力與其活化ALDH家族的其他成員的能力來鑑別「選擇性ALDH2活化劑」。例如，可對物質測定其活化ALDH2活性以及ALDH1A1、ALDH1A2、ALDH1A3、ALDH1B1、ALDH1L1、ALDH1L2、ALDH3A1、ALDH3A2、ALDH3B1、ALDH3B2、ALDH4A1、ALDH5A1、ALDH6A1、ALDH7A1、ALDH8A1、ALDH9A1、ALDH16A1和/或ALDH18A的能力。

在某些實施方案中，本發明化合物展現優於其他ALDH家族成員至少2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍或100倍的選擇性。在多個實施方案中，本發明化合物展現優於其他ALDH家族成員至多1000倍的選擇性。

藥物組合物

在一個實施方案中，本發明涉及包含式(I)化合物(例如化合物AC1-AC166)或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和藥學上可接受的賦形劑的藥物組合物。式(I)化合物可以與一種或多種藥學上可接受的賦形劑一起配製。多種藥學上可接受的賦形劑是本領域中已知的。藥學上可接受的賦形劑已經在多個出版物中充分描述，包括例如A.Gennaro(2000)「《雷明頓：藥劑學科學與實踐》(Remington:The Science and Practice of Pharmacy)」,第20版,Lippincott,Williams,&Wilkins；《藥物劑型和藥物遞送系統》(Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems)(1999)H.C.Ansel等編,第7版,Lippincott,Williams,&Wilkins；和《藥物賦形劑手冊》(Handbook of Pharmaceutical Excipients)(2000)A.H.Kibbe等編,第3版.Amer.Pharmaceutical Assoc.。

藥學上可接受的賦形劑，例如媒介物、佐劑、載體或稀釋劑，可容易供公眾使用。此外，藥學上可接受的輔助物質，例如pH調節和緩衝劑、張力調節劑、穩定劑、潤溼劑等，可容易供公眾使用。

「藥學上可接受的賦形劑」是指可用於製備藥物組合物的賦形劑，其通常是安全、無毒的並且在生物學上和其他方面都不是不合需要的，並且包括可接受用於獸醫用途以及人類製藥用途的賦形劑。如本說明書和權利要求書中所用的「藥學上可接受的賦形劑」包括一種和一種以上的這種賦形劑。

本公開還提供包括式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的組合物。本公開的式(I)化合物包括(但不限於)表1中列出的化合物AC1-AC166。

式(I)化合物的「藥物組合物」是呈適合施用至受試者的形式的含有所公開化合物的製劑。在一個實施方案中，式(I)化合物的藥物組合物呈散裝或單位劑量形式。所述單位劑型是多種形式中的任一種，包括例如膠囊、IV袋、片劑、氣霧劑吸入器上的單泵、或小瓶。單位劑量的組合物中的活性成分(例如，所公開化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的製劑)的量是有效量並且根據所涉及的特定處理而改變。在藥物劑型中，主題活性劑可以其藥學上可接受的鹽形式施用，或者主題活性劑可單獨地或適當聯合以及與其他藥學活性化合物組合使用。以下方法和賦形劑僅是示例性的，而不以任何方式進行限制。

式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以通過與適當的藥學上可接受的載體或稀釋劑組合而配製成藥物組合物，並且可配製成固體、半固體、液體或氣體形式的製劑，例如片劑、膠囊、散劑、顆粒劑、軟膏、溶液、栓劑、注射劑、吸入劑和氣霧劑。涵蓋多種途徑，包括局部、口服、經肺、經直腸、腸胃外、透皮、皮下、靜脈內、肌內、腹膜內、吸入、經頰、舌下、胸膜內、鞘內、鼻內等。用於局部或透皮施用本發明化合物的劑型包括散劑、噴霧劑、軟膏、糊劑、乳膏、洗劑、凝膠劑、溶液、貼劑和吸入劑。在一個實施方案中，將活性化合物在無菌條件下與藥學上可接受的載體以及需要的任何防腐劑、緩衝劑或推進劑混合。

對於口服製劑，式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以單獨地或與適當添加劑組合使用以製造片劑、散劑、顆粒劑或膠囊，例如，存在常規添加劑，例如乳糖、甘露糖醇、玉米澱粉或馬鈴薯澱粉；粘合劑，例如結晶纖維素、纖維素衍生物、阿拉伯膠、玉米澱粉或明膠；崩解劑，例如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉或羧甲基纖維素鈉；潤滑劑，例如滑石或硬脂酸鎂；並且如果需要的話，存在稀釋劑、緩衝劑、潤溼劑、防腐劑和調味劑。

式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以通過將它們溶解、懸浮或乳化在水性或非水性溶劑例如植物油或其他類似油、合成脂族酸甘油酯、高級脂族酸或丙二醇的酯而配製成注射製劑；並且如果需要的話，存在常規添加劑如增溶劑、等滲劑、懸浮劑、乳化劑、穩定劑和防腐劑。

式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以用於氣霧劑製劑中以通過吸入施用。式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以配製到可接受的加壓推進劑如二氯二氟甲烷、丙烷、氮氣等中。

此外，式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以通過與多種基質如乳化基質或水溶性基質混合而製成栓劑。式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以通過栓劑經直腸施用。所述栓劑可包括媒介物如可可脂、碳蠟和聚乙二醇單甲醚，其在體溫下熔融，但在室溫下固化。

可提供用於口服或直腸施用的單位劑型，例如糖漿、酏劑和懸浮液，其中每個劑量單位(例如茶匙、湯匙、片劑或栓劑)含有預定量的主題活性劑。類似地，用於注射或靜脈內施用的單位劑型可在呈於無菌水、生理鹽水或另一種藥學上可接受的載體中的溶液形式的組合物中包含主題活性劑。

如本文所用的術語「單位劑型」是指適合作為用於人類和動物受試者的單一劑量的物理離散單位，每個單位含有以足以產生所需作用的量計算的預定量的主題活性劑與藥學上可接受的稀釋劑、載體或媒介物。主題活性劑的規格取決於所用的特定化合物和待實現的作用，以及與宿主中的每種化合物相關的藥效學。

式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以被配製以通過注射施用。通常，可注射組合物被製備成液體溶液或懸浮液；還可製備在注射前適合溶解或懸浮在液體媒介物中的固體形式。所述製劑也可被乳化或者活性成分可包封在脂質體媒介物中。

在一些實施方案中，通過連續遞送系統來遞送式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。術語「連續遞送系統」在本文可與「受控遞送系統」互換使用並涵蓋與導管、注射裝置等組合的連續(例如受控)遞送裝置(例如泵)，其中多種是本領域中已知的。

合適的賦形劑媒介物是例如水、鹽水、右旋糖、甘油、乙醇等，和其組合。此外，如果需要的話，媒介物可含有少量的輔助物質，例如潤溼或乳化劑或pH緩衝劑。對於本領域技術人員，製備這類劑型的實際方法是已知的，或者將是顯而易見的。參見例如《雷明頓藥物科學》(Remington's Pharmaceutical Sciences),Mack Publishing Company,Easton,Pa.,第17版,1985。在任何情況下，待施用的組合物或製劑將含有足以在所治療受試者中實現所需狀態的量的藥劑。

取決於所治療的受試者和病狀以及施用途徑，所述式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以例如每天每kg體重0.1μg至10mg的劑量施用。所述範圍是寬泛的，因為一般來說對於不同哺乳動物的治療作用的功效隨著劑量廣泛改變，所述劑量在人類中通常比大鼠中要小20倍、30倍或甚至40倍(每單位體重)。類似地，施用模式可對劑量具有很大影響。因此，例如，口服劑量可能是注射劑量的約十倍。更高的劑量可用於局部化遞送途徑。

示例性劑量可為適合靜脈內施用的溶液；每天兩次至六次服用的片劑，或每天一次服用並含有比例更高含量的活性成分的一次性釋放膠囊或片劑等。時間釋放作用可通過在不同pH值下溶解的膠囊材料、通過滲透壓緩慢釋放的膠囊或通過受控釋放的任何其他已知方法獲得。

本領域技術人員將容易了解，劑量水平可隨著具體化合物、症狀嚴重程度和受試者對副作用的易感性而改變。本領域技術人員通過多種方法可容易地確定給定化合物的優選劑量。

可提供用於口服或直腸施用的單位劑型，例如糖漿、酏劑和懸浮液，其中每個劑量單位(例如，茶匙、湯匙、片劑或栓劑)含有預定量的含有一種或多種本發明化合物的組合物。類似地，用於注射或靜脈內施用的單位劑型可在呈於無菌水、生理鹽水或另一種藥學上可接受的載體中的溶液形式的組合物中包含所述化合物。

在一些實施方案中，施用多個劑量的主題化合物。式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的施用頻率可根據多種因素中的任一種(例如，症狀的嚴重程度等)而改變。例如，在一些實施方案中，式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥是每月一次、每月兩次、每月三次、每隔一周(qow)、每周一次(qw)、每周兩次(biw)、每周三次(tiw)、每周四次、每周五次、每周六次、每隔一天(qod)、每天一次(qd)、每天兩次(qid)或每天三次(tid)施用的。如上文所討論，在一些實施方案中，式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥是連續施用的。

式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的施用持續時間，例如，施用式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥所經歷的時期，可根據多種因素中的任一種(例如，患者反應等)而改變。例如，式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以在如下範圍內的一段時期內施用：約一天至約一周、約兩周至約四周、約一個月至約兩個月、約兩個月至約四個月、約四個月至約六個月、約六個月至約八個月、約八個月至約1年、約1年至約2年、或約2年至約4年、或更長時間。在一些實施方案中，式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥在受試者的生存期內施用。

使用適合藥物遞送的任何可用方法和途徑將本發明的式(I)的ALDH2活性調節劑或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥施用至受試者，包括體內和離體方法，以及全身和局部施用途徑。施用可以是急性的(例如，持續時間短，例如，單次施用、持續一天至一周施用)，或慢性的(例如，持續時間長，例如，施用一周以上，例如，在約2周至約一個月、約一個月至約3個月、約3個月至約6個月、約6個月至約1年、或一年以上的一段時期內施用)。

常規和藥學上可接受的施用途徑包括鼻內、肌內、氣管內、皮下、皮內、透皮、舌下、局部施用、靜脈內、經直腸、經鼻、口服和其他腸內和腸胃外施用途徑。施用途徑在需要時可組合或者根據藥劑和/或所需作用進行調整。所述化合物可以單次劑量或多次劑量施用。

式(I)的活性劑或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以使用適合常規藥物遞送的任何可用常規方法和途徑(包括全身或局部途徑)施用至宿主。一般來說，本發明所涵蓋的施用途徑包括(但不一定限於)腸內、腸胃外或吸入途徑。

除了吸入施用之外的腸胃外施用途徑包括(但不一定限於)局部、透皮、皮下、肌內、眶內、囊內、脊柱內、胸骨內和靜脈內途徑，即，除了通過消化道之外的任何施用途徑。可進行腸胃外施用以實現藥劑的全身或局部遞送。在需要全身遞送時，施用通常涉及藥物製劑的浸潤性或全身吸收的局部或黏膜施用。

式(I)的化合物或藥劑或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥也可以通過腸內施用遞送至受試者。腸內施用途徑包括(但不一定限於)口服和直腸(例如，使用栓劑)遞送。

式(I)的化合物或藥劑或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥通過皮膚或黏膜的施用方法包括(但不一定限於)合適的藥物製劑的局部施用、透皮傳送、注射和硬膜外施用。對於透皮傳送，吸收促進劑或離子電滲療法是合適的方法。離子電滲傳送可使用市售「貼劑」來實現，所述貼劑經由電脈衝連續地遞送其產品通過完整的皮膚持續數天或更長時間。

藥用鹽和賦形劑

所述式(I)化合物能夠形成鹽。在所要求保護的發明範圍內也涵蓋所有這些形式。本公開提供式(I)化合物的藥學上可接受的鹽，例如，化合物AC1-AC166的藥學上可接受的鹽。化合物的「藥學上可接受的鹽」是指在藥學上可接受並且具有母體化合物的所需藥理學活性的鹽。

如本文所用，「藥學上可接受的鹽」是指式(I)化合物(例如化合物AC1-AC166)的衍生物，其中母體化合物通過製造其酸性或鹼性鹽來改性。式(I)化合物的藥學上可接受的鹽的實例包括(但不限於)鹼性殘基如胺的無機或有機酸鹽，酸性殘基如羧酸的鹼性或有機鹽，等。藥學上可接受的鹽包括例如由無毒的無機或有機酸形成的母體化合物的常規無毒鹽或季銨鹽。例如，這樣的常規無毒鹽包括(但不限於)由無機和有機酸產生的那些，所述酸選自2-乙醯氧基苯甲酸、2-羥基乙磺酸、乙酸、抗壞血酸、苯磺酸、苯甲酸、重碳酸、碳酸、檸檬酸、依地酸、乙烷二磺酸、1,2-乙烷磺酸、富馬酸、葡庚糖酸、葡糖酸、穀氨酸、乙醇酸、乙二醇對氨基苯胂酸、己基間苯二酚酸、海巴明酸、氫溴酸、鹽酸、氫碘酸、羥基馬來酸、羥基萘甲酸、羥乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂基磺酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、萘磺酸、硝酸、草酸、撲酸、泛酸、苯基乙酸、磷酸、聚半乳糖醛酸、丙酸、水楊酸、硬脂酸、琥珀酸、氨基磺酸、磺胺酸、硫酸、鞣酸、酒石酸、甲苯磺酸和通常存在的胺基酸，例如，甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等。

其他實例包括己酸、環戊烷丙酸、丙酮酸、丙二酸、3-(4-羥基苯甲醯基)苯甲酸、肉桂酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟腦磺酸、4-甲基雙環[2.2.2]-辛-2-烯-1-甲酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、粘康酸等。本發明還涵蓋當母體化合物中存在的酸性質子被金屬離子例如鹼金屬離子、鹼土離子或鋁離子代替；或與有機鹼如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、緩血酸胺、N-甲基葡糖胺等配位時形成的鹽。

應當理解，所有對於藥學上可接受的鹽的提及包括同一鹽的如本文所定義的溶劑加成形式(溶劑化物)或晶體形式(多晶型物)。

式(I)化合物的藥學上可接受的鹽可以通過常規化學方法從含有鹼性或酸性部分的母體化合物來合成。通常，這種鹽可以通過使這些化合物的游離酸或鹼形式與化學計算量的適當鹼或酸在水中或在有機溶劑中或在兩者的混合物中反應來製備；可以使用非水性介質，如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。合適的鹽的列表見於《雷明頓藥物科學》(Remington's Pharmaceutical Sciences),第18版.(Mack Publishing Company,1990)中。例如，鹽可以包括(但不限於)本發明的含脂族胺、含羥基胺和含亞胺化合物的鹽酸鹽和乙酸鹽。

酯和前藥

本發明的化合物還可以製備成酯，例如藥學上可接受的酯。例如，化合物中的羧酸官能團可以轉化成其相應的酯，例如，甲基、乙基、乙酸酯、二烷基氨基乙酸酯、甲酸酯、磷酸酯、硫酸酯和苯甲酸酯衍生物。此外，化合物中的醇基可以轉化成其相應的酯，例如，乙酸酯、丙酸酯或其他酯。

本發明的化合物還可以製備成前藥，例如藥學上可接受的前藥。術語「前藥(pro-drug)」和「前藥(prodrug)」在本文可互換使用並且是指在體內釋放活性母體藥物的任何化合物。因為前藥已知增強藥物的眾多所需特性(例如，溶解性、生物利用度、製造等)，所以本發明的化合物可以前藥形式遞送。因此，本發明旨在涵蓋目前要求保護的化合物的前藥、其遞送方法和含有其的組合物。「前藥」旨在包括當將這種前藥施用至受試者時在體內釋放本發明的活性母體藥物的任何共價鍵合的載體。本發明的前藥是通過以使得修飾在常規操作中或在體內裂解成母體化合物的方式來改性化合物中存在的官能團來製備的。前藥包括如下的本發明化合物，其中羥基、氨基、巰基、羧基或羰基鍵合至可在體內裂解的任何基團以分別形成游離羥基、游離氨基、游離巰基、游離羧基或游離羰基。

前藥的實例包括(但不限於)式I化合物中的羥基官能團的酯(例如，乙酸酯、二烷基氨基乙酸酯、甲酸酯、磷酸酯、硫酸酯和苯甲酸酯衍生物)和氨基甲酸酯(例如，N,N-二甲基氨基羰基)，羧基官能團的酯基(例如乙酯、嗎啉基乙醇酯)，氨基官能團的N-醯基衍生物(例如N-乙醯基)、N-曼尼希鹼、席夫鹼和烯胺酮，酮和醛官能團的肟、縮醛、縮酮和烯醇酯，等，參見Bundegaard,H."《前藥設計》(Design of Prodrugs)"第1-92頁,Elesevier,New York-Oxford(1985)。

治療和預防的一般方法

本發明提供各種治療和預防方法，通常涉及向受試者施用有效量的本發明化合物。與ALDH2相關的疾病和病狀包括癌症、範可尼貧血和相關病症、外周動脈疾病(PAD)、急性炎性疼痛、肝臟損傷和/或損害、醇中毒、酒精不耐受、酒精成癮、酒精濫用障礙、酒精緻醉、酒精依賴、酒精中毒、飲酒症狀和麻醉品成癮。

治療和/或預防癌症的方法

本發明提供利用式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥在受試者中治療和/或預防癌症的方法。所述方法通常涉及向受試者施用有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥以及標準癌症療法。標準癌症療法包括外科手術(例如，手術切除癌性組織)、放射療法、骨髓移植、化療治療、生物反應調節劑治療和前述的某些組合。

本發明提供通過增加ALDH2的水平和/或活性來降低由於癌症治療(包括外科手術、化療和/或電離輻射)造成的損害和/或損傷的方法。所述方法通常涉及向具有實體腫瘤和/或液體腫瘤的受試者施用有效量的增加ALDH2的水平和/或活性的藥劑。

在一些實施方案中，施用增加ALDH2的水平和/或活性的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥作為標準癌症療法的輔助療法。標準癌症療法包括外科手術(例如，手術切除癌性組織)、放射療法、骨髓移植、化療治療、生物反應調節劑治療和前述的某些組合。

放射療法包括(但不限於)從外部施加源如光束或通過植入小放射源來遞送的x射線或γ射線。

化療劑是降低癌細胞增殖的非肽(即，非蛋白)化合物，並且涵蓋細胞毒性劑和細胞生長抑制劑。化療劑的非限制性實例包括烷化劑、亞硝基脲、抗代謝物、抗腫瘤抗生素、植物(長春花)生物鹼和類固醇激素。

用於降低細胞增殖的藥劑是本領域中已知的並且廣泛使用。這種藥劑包括烷化劑，例如氮芥、亞硝基脲、乙烯亞胺衍生物、磺酸烷酯和三氮烯，其包括(但不限於)二氯甲基二乙胺、環磷醯胺美法侖(L-沙可來新)、卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、司莫司汀(甲基-CCNU)、鏈脲佐菌素、氯脲黴素、尿嘧啶氮芥、氮芥、異環磷醯胺、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、三乙烯三聚氰胺、三乙烯硫代磷胺、白消安、達卡巴嗪和替莫唑胺。

抗代謝物藥劑包括葉酸類似物、嘧啶類似物、嘌呤類似物和腺苷脫氨酶抑制劑，其包括(但不限於)阿糖胞苷(CYTOSAR-U)、胞嘧啶阿拉伯糖苷、氟尿嘧啶(5-FU)、氟尿苷(FudR)、6-硫鳥嘌呤、6-巰基嘌呤(6-MP)、噴司他丁、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲氨蝶呤、10-炔丙基-5,8-二脫氮雜葉酸(PDDF，CB3717)、5,8-二脫氮雜四氫葉酸(DDATHF)、甲醯四氫葉酸、磷酸氟達拉濱、噴司他丁和吉西他濱。

合適的天然產物和其衍生物(例如，長春花生物鹼、抗腫瘤抗生素、酶、淋巴因子和表鬼臼毒素)包括(但不限於)Ara-C、太平洋紫杉醇多西他賽脫氧助間型黴素、絲裂黴素-C、L-天冬醯胺酶、硫唑嘌呤；布喹那；生物鹼，例如長春新鹼、長春鹼、長春瑞濱、長春地辛等；鬼臼毒素，例如依託泊苷、替尼泊苷等；抗生素，例如蒽環類、鹽酸柔紅黴素(道諾黴素、紅比黴素、司比定)、伊達比星、阿黴素、表柔比星和嗎啉基衍生物等；吩噁嗪酮雙環肽，例如更生黴素；鹼性糖肽，例如博來黴素；蒽醌糖苷，例如普卡黴素(光輝黴素)；蒽二酮，例如米託蒽醌；氮丙啶吡咯並吲哚二酮(azirinopyrrolo indoledione)，例如絲裂黴素；大環免疫抑制劑，例如環孢菌素、FK-506(他克莫司、普樂可復(prograf))、雷帕黴素等；等。

其他抗增殖細胞毒性劑是長春瑞濱、CPT-11、阿那曲唑、來曲唑、卡培他濱、雷洛昔芬、環磷醯胺、異環磷醯胺和屈洛昔芬。

具有抗增殖活性的微管影響劑也適合使用並且包括(但不限於)異秋水仙素(NSC 406042)、軟海綿素B(NSC 609395)、秋水仙素(NSC 757)、秋水仙素衍生物(例如NSC 33410)、海兔毒素10(NSC 376128)、美登素(NSC153858)、根黴素(NSC 332598)、太平洋紫杉醇衍生物、多西他賽硫代秋水仙素(NSC 361792)、三苯甲基半胱氨酸、硫酸長春鹼、硫酸長春新鹼、天然和合成的埃博黴素(包括但不限於埃博黴素A、埃博黴素B、圓皮海綿內酯(discodermolide))；雌莫司汀、諾考達唑等。

適合使用的激素調節劑和類固醇(包括合成類似物)包括(但不限於)腎上腺皮質類固醇，例如氯潑尼松、地塞米松等；雌激素和黃體素，例如己酸羥基孕酮、乙酸甲羥孕酮、乙酸甲地孕酮、雌二醇、氯米芬、他莫昔芬等；和腎上腺皮質抑制劑，例如氨魯米特；17α-炔雌醇、己烯雌酚、睪酮、氟甲睪酮、丙酸屈他雄酮、睪內酯、甲潑尼龍、甲基-睪酮、潑松龍、曲安西龍、氯烯雌醚、羥基孕酮、氨魯米特、雌莫司汀、乙酸甲羥孕酮、亮丙瑞林、氟他胺(Drogenil)、託瑞米芬(Fareston)和雌激素刺激增殖和分化，因此，採用結合雌激素受體的化合物來阻斷這種活性。皮質類固醇可抑制T細胞增殖。

其他化療劑包括金屬絡合物，例如順鉑(順-DDP)、卡鉑等；脲，例如羥基脲；和肼，例如N-甲基肼；表鬼臼毒素；拓撲異構酶抑制劑；丙卡巴肼；米託蒽醌；甲醯四氫葉酸；替加氟；等。其他感興趣的抗增殖劑包括免疫抑制劑，例如黴酚酸、沙利度胺、脫氧精胍菌素、氮雜孢菌素(azasporine)、來氟米特、咪唑立賓、氮雜螺烷(azaspirane)(SKF 105685)；(ZD 1839，4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-甲氧基-6-(3-(4-嗎啉基)丙氧基)喹唑啉)；等。

「紫杉烷」包括太平洋紫杉醇，以及任何活性紫杉烷衍生物或前藥。可利用本領域技術人員已知的技術容易地製備「太平洋紫杉醇」(其在本文中應理解為包括類似物、製劑和衍生物，例如，多西他賽、(多西他賽製劑)、太平洋紫杉醇的10-脫乙醯基類似物和太平洋紫杉醇的3N-脫苯甲醯基-3'N-叔丁氧基羰基類似物)(也參見WO 94/07882、WO 94/07881、WO 94/07880、WO 94/07876、WO 93/23555、WO 93/10076；美國專利號5,294,637；5,283,253；5,279,949；5,274,137；5,202,448；5,200,534；5,229,529；和EP 590,267)，或從多種商業來源獲得，包括例如Sigma Chemical Co.,St.Louis,Mo.(來自Taxus brevifolia的T7402；或來自Taxus yannanensis的T-1912)。

應當理解，太平洋紫杉醇不僅指太平洋紫杉醇的常見化學可用形式，還指類似物和衍生物(例如，如上所述的多西他賽)和太平洋紫杉醇結合物(例如，太平洋紫杉醇-PEG、太平洋紫杉醇-右旋糖苷或太平洋紫杉醇-木糖)。

術語「紫杉烷」還包括多種已知衍生物，包括親水性衍生物和疏水性衍生物。紫杉烷衍生物包括(但不限於)國際專利申請號WO 99/18113中所述的半乳糖和甘露糖衍生物；WO 99/14209中所述的哌嗪基和其他衍生物；WO 99/09021、WO 98/22451和美國專利號5,869,680中所述的紫杉烷衍生物；WO 98/28288中所述的6-硫代衍生物；美國專利號5,821,263中所述的磺胺衍生物；和美國專利號5,415,869中所述的紫杉酚衍生物。它還包括太平洋紫杉醇的前藥，包括(但不限於)WO 98/58927；WO 98/13059；和美國專利號5,824,701中所述的那些。

適合與本發明方法聯用的生物反應調節劑包括(但不限於)：(1)酪氨酸激酶(RTK)活性抑制劑；(2)絲氨酸/蘇氨酸激酶活性抑制劑；(3)腫瘤相關抗原拮抗劑，例如特異性結合腫瘤抗原的抗體；(4)細胞凋亡受體激動劑；(5)白細胞介素-2；(6)IFN-α；(7)IFN-γ；(8)集落剌激因子；(9)血管生成抑制劑；和(10)腫瘤壞死因子拮抗劑。

癌症是一組可能造成幾乎任何徵象或症狀的疾病。所述徵象和症狀將取決於癌症的位置、癌症的大小和其將影響附近的器官或結構的程度。如果癌症擴散(轉移)，則症狀可能出現在身體的不同部位。

隨著癌症生長，它開始推動附近的器官、血管和神經。這種壓力產生一些癌症的徵象和症狀。如果癌症處在關鍵區域，例如大腦的某些部分，則即使最小的腫瘤也可能造成早期症狀。

但有時癌症起始於不引起任何症狀直至癌症已經生長得相當大的地方。例如，胰腺癌通常不會生長得足夠大以從身體外部感覺到。一些胰腺癌不會引起症狀，直至它們開始在附近的神經周圍生長(這造成背痛)。其他在膽管周圍生長，這阻斷膽汁流動並導致皮膚發黃，被稱為黃疸。直到胰腺癌引起這些徵象或症狀時，它通常已經達到晚期。

癌症也可引起諸如發燒、疲乏或體重減輕等症狀。這可能是因為癌細胞消耗了太多的身體能量供應或釋放了改變身體代謝的物質。或者癌症可能導致免疫系統以產生這些症狀的方式反應。

有時，癌細胞釋放物質進入血流中，這引起通常不認為由癌症產生的症狀。例如，一些胰腺癌可以釋放在腿部靜脈中產生血塊的物質。一些肺癌產生激素樣物質，其影響血鈣水平，從而影響神經和肌肉並造成虛弱和頭暈。

癌症呈現若干一般徵象或症狀，其當存在多種癌細胞亞型時存在。大多數癌症患者隨著他們的疾病在某些時刻會減輕體重。原因不明的(無意識的)10磅或更多的體重減輕可能是癌症的第一徵象，特別是胰腺癌、胃癌、食道癌或肺癌。

發燒是癌症非常常見的，但更通常見於疾病晚期。幾乎所有的癌症患者將在某些時刻具有發燒，尤其是在癌症或其治療影響免疫系統並使得身體更難對抗感染時。不太經常地，發燒可能是癌症的早期徵象，例如白血病或淋巴瘤。

隨著癌症進展，疲乏可能是一個重要的症狀。但是，在癌症例如白血病中，或者如果癌症造成進行性血液損失，如在一些結腸癌或胃癌中，它可能早期發生。

疼痛可能是一些癌症如骨癌或睪丸癌的早期症狀。但最常見的疼痛是晚期疾病的症狀。

與皮膚癌一起，一些內部癌症可能引起可見的皮膚徵象。這些變化包括皮膚看上起更暗(色素沉著)、發黃(黃疸)或發紅(紅斑)；發癢；或毛髮過度生長。可選地或另外，癌症亞型呈現特定徵象或症狀。排便習慣或膀胱功能改變可能表明癌症。長期便秘、腹瀉或大便尺寸變化可能是結腸癌的徵象。排尿疼痛、尿中帶血或膀胱功能改變(例如排尿頻率增多或減少)可能與膀胱癌或前列腺癌有關。皮膚狀況變化或新的皮膚狀況的出現可能表明癌症。皮膚癌可能出血並且看起來像不癒合的潰瘍。口腔中長期持續的潰瘍可能是口腔癌，尤其是在吸菸、咀嚼菸草或經常飲酒的患者中。陰莖或陰道上的潰瘍可能是感染或早期癌症的徵象。

不尋常的出血或溢液可能表明癌症。不尋常的出血可能發生在癌症早期或晚期。唾液(痰)中的血液可能是肺癌的徵象。便血(或者深色或黑色大便)可能是結腸癌或直腸癌的徵象。子宮頸癌或子宮內膜(子宮內層)癌可能引起陰道出血。尿中帶血可能是膀胱癌或腎癌的徵象。乳頭血性溢液可能是乳腺癌的徵象。

乳房或身體其他部位的增厚或腫塊可能表明癌症的存在。許多癌症可以通過皮膚感覺到，大多在乳房、睪丸、淋巴結(腺)和身體的軟組織中。腫塊或增厚可能是癌症的早期或晚期徵象。任何腫塊或增厚都可能指示癌症，特別是如果是新形成的或大小已經生長。

消化不良或吞咽困難可能表明癌症。雖然這些症狀通常具有其他原因，但消化不良或吞咽問題可能是食道癌、胃癌或咽(喉)癌的徵象。疣或痣的最近變化可能表明癌症。顏色、大小或形狀改變或者失去其明確邊界的任何疣、痣或雀斑都指示癌症的潛在發展。例如，皮膚病變可能是黑素瘤。持續咳嗽或聲音嘶啞可能表明癌症。不會消失的咳嗽可能是肺癌的徵象。聲音嘶啞可能是喉(larynx/voice box)癌或甲狀腺癌的徵象。雖然上文列出的徵象和症狀是伴隨癌症可見的更常見的徵象和症狀，但存在許多不太常見和此處未列出的其他徵象和症狀。然而，本發明預期和涵蓋所有公認的癌症徵象和症狀。

治療癌症可以導致腫瘤尺寸的減小。腫瘤尺寸的減小也可被稱為「腫瘤消退」。優選地，在治療後，腫瘤尺寸相對於其在治療前的尺寸減小5％或更多；更優選地，腫瘤尺寸減小10％或更多；更優選地，減小20％或更多；更優選地，減小30％或更多；更優選地，減小40％或更多；甚至更優選地，減小50％或更多；並且最優選地，減小75％以上或更多。可通過任何重現性測量方法來測量腫瘤尺寸。腫瘤尺寸可以腫瘤直徑測量。

治療癌症可以導致腫瘤體積減小。優選地，在治療後，腫瘤體積相對於其在治療前的尺寸減小5％或更多；更優選地，腫瘤體積減小10％或更多；更優選地，減小20％或更多；更優選地，減小30％或更多；更優選地，減小40％或更多；甚至更優選地，減小50％或更多；並且最優選地，減小75％或更多。可通過任何重現性測量方法來測量腫瘤體積。

治療癌症導致腫瘤數目減少。優選地，在治療後，腫瘤數目相對於治療前的數目減少5％或更多；更優選地，腫瘤數目減少10％或更多；更優選地，減少20％或更多；更優選地，減少30％或更多；更優選地，減少40％或更多；甚至更優選地，減少50％或更多；並且最優選地，減少75％以上。可通過任何重現性測量方法來測量腫瘤數目。可通過對裸眼或在指定放大倍率下可見的腫瘤計數來測量腫瘤數目。優選地，所述指定放大倍率是2倍、3倍、4倍、5倍、10倍或50倍。

治療癌症可以導致距原發性腫瘤部位較遠的其他組織或器官中的轉移病灶的數目減少。優選地，在治療後，轉移病灶數目相對於治療前的數目減少5％或更多；更優選地，轉移病灶數目減少10％或更多；更優選地，減少20％或更多；更優選地，減少30％或更多；更優選地，減少40％或更多；甚至更優選地，減少50％或更多；並且最優選地，減少75％以上。可通過任何重現性測量方法來測量轉移病灶數目。可通過對裸眼或在指定放大倍率下可見的轉移病灶計數來測量轉移病灶數目。優選地，所述指定放大倍率是2倍、3倍、4倍、5倍、10倍或50倍。

治療癌症可以導致被治療受試者群體相比於僅接受載體的群體的平均存活時間增加。優選地，平均存活時間增加30天以上；更優選地，60天以上；更優選地，90天以上；並且最優選地，120天以上。可通過任何重現性方法來測量群體的平均存活時間的增加。可例如通過在利用活性化合物起始治療後對群體計算平均存活長度來測量群體的平均存活時間的增加。還可例如通過在利用活性化合物完成第一輪治療後對群體計算平均存活長度來測量群體的平均存活時間的增加。

治療癌症可以導致被治療受試者群體相比於未被治療的受試者群體的平均存活時間增加。優選地，平均存活時間增加30天以上；更優選地，60天以上；更優選地，90天以上；並且最優選地，120天以上。可通過任何重現性方法來測量群體的平均存活時間的增加。可例如通過在利用活性化合物起始治療後對群體計算平均存活長度來測量群體的平均存活時間的增加。還可例如通過在利用活性化合物完成第一輪治療後對群體計算平均存活長度來測量群體的平均存活時間的增加。

治療癌症可以導致被治療受試者群體相比於接受用並非本發明化合物或其藥學上可接受的鹽、前藥、代謝物、類似物或衍生物的藥物進行的單一療法的群體的平均存活時間增加。優選地，平均存活時間增加30天以上；更優選地，60天以上；更優選地，90天以上；並且最優選地，120天以上。可通過任何重現性方法來測量群體的平均存活時間的增加。可例如通過在利用活性化合物起始治療後對群體計算平均存活長度來測量群體的平均存活時間的增加。還可例如通過在利用活性化合物完成第一輪治療後對群體計算平均存活長度來測量群體的平均存活時間的增加。

治療癌症可以導致被治療受試者群體相比於僅接受載體的群體的死亡率降低。治療癌症可以導致被治療受試者群體相比於未被治療群體的死亡率降低。治療癌症可以導致被治療受試者群體相比於接受用並非本發明化合物或其藥學上可接受的鹽、前藥、代謝物、類似物或衍生物的藥物進行的單一療法的群體的死亡率降低。優選地，死亡率降低2％以上；更優選地，5％以上；更優選地，10％以上；並且最優選地，25％以上。可通過任何重現性方法來測量被治療受試者群體的死亡率降低。還可例如通過在利用活性化合物起始治療後對群體計算每單位時間的疾病相關死亡平均數來測量群體的死亡率降低。還可例如通過在利用活性化合物完成第一輪治療後對群體計算每單位時間的疾病相關死亡平均數來測量群體的死亡率降低。

治療癌症可以導致腫瘤生長速率降低。優選地，在治療後，腫瘤生長速率相對於治療前的數目降低至少5％；更優選地，腫瘤生長速率降低至少10％；更優選地，降低至少20％；更優選地，降低至少30％；更優選地，降低至少40％；更優選地，降低至少50％；甚至更優選地，降低至少50％；並且最優選地，降低至少75％。可通過任何重現性測量方法來測量腫瘤生長速率。可根據每單位時間的腫瘤直徑變化來測量腫瘤生長速率。

治療癌症可以導致腫瘤再生長降低。優選地，在治療後，腫瘤再生長小於5％；更優選地，腫瘤再生長小於10％；更優選地，小於20％；更優選地，小於30％；更優選地，小於40％；更優選地，小於50％；甚至更優選地，小於50％；並且最優選地，小於75％。可通過任何重現性測量方法來測量腫瘤再生長。例如通過測量在先前的治療後腫瘤收縮後的腫瘤直徑增加來測量腫瘤再生長。腫瘤再生長降低由腫瘤在治療停止後不會再出現來指示。

治療或預防細胞增殖性病症可以導致細胞增殖速率降低。優選地，在治療後，細胞增殖速率降低至少5％；更優選地，至少10％；更優選地，至少20％；更優選地，至少30％；更優選地，至少40％；更優選地，至少50％；甚至更優選地，至少50％；並且最優選地，至少75％。可通過任何重現性測量方法來測量細胞增殖速率。例如通過測量每單位時間組織中的分裂細胞數目來測量細胞增殖速率。

治療或預防細胞增殖病症可以導致增殖細胞比例降低。優選地，在治療後，增殖細胞比例降低至少5％；更優選地，至少10％；更優選地，至少20％；更優選地，至少30％；更優選地，至少40％；更優選地，至少50％；甚至更優選地，至少50％；並且最優選地，至少75％。可通過任何重現性測量方法來測量增殖細胞比例。優選地，例如通過相對於組織樣本中的非分裂細胞數目定量分裂細胞數目來測量增殖細胞比例。增殖細胞比例可能等同於有絲分裂指數。

治療或預防細胞增殖病症可以導致細胞增殖區或區域的尺寸降低。優選地，在治療後，細胞增殖區或區域的尺寸相對於其在治療前的尺寸降低至少5％；更優選地，降低至少10％；更優選地，降低至少20％；更優選地，降低至少30％；更優選地，降低至少40％；更優選地，降低至少50％；甚至更優選地，降低至少50％；並且最優選地，降低至少75％。可通過任何重現性測量方法來測量細胞增殖區或區域的尺寸。細胞增殖區或區域的尺寸可以細胞增殖區或區域的直徑或寬度測量。

治療或預防細胞增殖病症可以導致具有異常外觀或形態的細胞的數目或比例降低。優選地，在治療後，具有異常形態的細胞的數目相對於其在治療前的尺寸降低至少5％；更優選地，降低至少10％；更優選地，降低至少20％；更優選地，降低至少30％；更優選地，降低至少40％；更優選地，降低至少50％；甚至更優選地，降低至少50％；並且最優選地，降低至少75％。可通過任何重現性測量方法來測量異常細胞外觀或形態。可通過顯微鏡(例如，使用倒置的組織培養顯微鏡)來測量異常細胞形態。異常細胞形態可採用核多形性形式。

可以使用任何已知方法來確定腫瘤負荷是否已經降低，包括(但不限於)測量實體腫瘤質量；使用細胞學測定法對腫瘤細胞數目進行計數；螢光活化細胞分選(例如，使用對腫瘤相關抗原具特異性的抗體)；腫瘤的計算機斷層掃描、磁共振成像和/或x射線成像以估計和/或監測腫瘤尺寸；測量生物樣本(例如，血液)中的腫瘤相關抗原的量；等。

在一個實施方案中，本發明涉及降低受試者將患上頭和頸癌的可能性的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的本發明的化合物或組合物。在一個實施方案中，所述受試者是習慣性檳榔使用者。在一個實施方案中，所述組合物是牙膏、牙凝膠、牙粉、漱口水、口香糖或含片。

在一個實施方案中，本發明涉及在受試者中治療和/或預防癌症的方法，所述方法包括施用：a)本發明的化合物或藥物組合物；和b)癌症化療劑或電離輻射，其中所述化合物或組合物與所述癌症化療劑、或者化合物或組合物與所述電離輻射以組合有效量施用以治療或預防癌症。在一個實施方案中，所述化療劑選自烷化劑、亞硝基脲、抗代謝物、抗腫瘤抗生素、植物(長春花)生物鹼和類固醇激素。在一個實施方案中，所述電離輻射是通過體外放射治療或近距離放射治療施用的。在一個實施方案中，所述化合物或藥物組合物的施用降低了治療或預防癌症所需的化療劑或電離輻射的量。

在一個實施方案中，本發明涉及降低受試者將患上口腔癌或肺癌的可能性的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的本發明的化合物或藥物組合物。在一個實施方案中，所述化合物或藥物組合物是通過選自肌內、靜脈內、皮下、口服和局部的途徑施用的。

本發明的另一個方面涉及用於在有需要的受試者中降低口腔癌、食道癌和/或肺癌的發病率或進展的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物。

在另一個方面，本發明涉及用於在有需要的受試者中降低頭和/或頸癌的發病率或進展的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物。在一個實施方案中，所述受試者是習慣性檳榔使用者。

本發明的另一個方面涉及用於在有需要的受試者中治療和/或預防癌症的組合療法中的化合物，其中所述化合物是式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，或式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物，其與癌症化療劑或電離輻射組合使用，其中所述化合物或組合物與所述癌症化療劑、或者化合物或組合物與所述電離輻射以組合有效量施用以治療或預防癌症。在一個實施方案中，所述化療劑選自烷化劑、亞硝基脲、抗代謝物、抗腫瘤抗生素、植物(長春花)生物鹼和類固醇激素。在另一個實施方案中，所述烷化劑選自氮芥、亞硝基脲、乙烯亞胺衍生物、磺酸烷酯和三氮烯，其包括(但不限於)二氯甲基二乙胺、環磷醯胺、美法侖(L-沙可來新)、卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、司莫司汀(甲基-CCNU)、鏈脲佐菌素、氯脲黴素、尿嘧啶氮芥、氮芥、異環磷醯胺、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、三乙烯三聚氰胺、三乙烯硫代磷胺、白消安、達卡巴嗪和替莫唑胺。在另一個實施方案中，所述電離輻射是通過體外放射治療或近距離放射治療施用的。在另一個實施方案中，所述化合物的施用降低了治療或預防癌症所需的化療劑或電離輻射的量。

在另一個方面，本發明涉及用於製造在有需要的受試者中降低口腔癌、食道癌和/或肺癌的發病率或進展的藥物的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物。

本發明的另一個方面涉及用於製造在有需要的受試者中降低頭和/或頸癌的發病率或進展的藥物的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物。在一個實施方案中，所述受試者是習慣性檳榔使用者。

在另一個方面，本發明涉及用於製造在有需要的受試者中治療和/或預防癌症的藥物的組合，其中所述組合包含：a)式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，或式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物；和b)癌症化療劑或電離輻射，其中所述化合物或組合物與所述癌症化療劑、或者所述化合物或組合物與所述電離輻射以組合有效量施用來治療或預防癌症。在一個實施方案中，所述化療劑選自烷化劑、亞硝基脲、抗代謝物、抗腫瘤抗生素、植物(長春花)生物鹼和類固醇激素。在另一個實施方案中，所述烷化劑選自氮芥、亞硝基脲、乙烯亞胺衍生物、磺酸烷酯和三氮烯，其包括(但不限於)二氯甲基二乙胺、環磷醯胺、美法侖(L-沙可來新)、卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、司莫司汀(甲基-CCNU)、鏈脲佐菌素、氯脲黴素、尿嘧啶氮芥、氮芥、異環磷醯胺、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、三乙烯三聚氰胺、三乙烯硫代磷胺、白消安、達卡巴嗪和替莫唑胺。在另一個實施方案中，所述電離輻射是通過體外放射治療或近距離放射治療施用的。在另一個實施方案中，所述化合物的施用降低了治療或預防癌症所需的化療劑或電離輻射的量。

治療和/或預防範可尼貧血的方法

本發明提供利用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥在受試者中治療和/或預防範可尼貧血和相關病症的方法。本公開的方法在診斷患有範可尼貧血的受試者和/或基於遺傳致病突變(例如FANC(A-O))的存在而易患上範可尼貧血的受試者中治療和/或預防癌症的發病率和/或進展。

本公開的方法包括施用有效量的式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防範可尼貧血和/或相關疾病或病症，例如癌症。施用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防範可尼貧血的劑量和方法在本公開中指定並以引用的方式併入本文中。

例如，式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以每劑約1mg至約1000mg、例如每劑約1mg至約5mg、約5mg至約10mg、約10mg至約20mg、約20mg至約25mg、約25mg至約50mg、約50mg至約75mg、約75mg至約100mg、約100mg至約125mg、約125mg至約150mg、約150mg至約175mg、約175mg至約200mg、約200mg至約225mg、約225mg至約250mg、約250mg至約300mg、約300mg至約350mg、約350mg至約400mg、約400mg至約450mg、約450mg至約500mg、約500mg至約750mg、或約750mg至約1000mg的量施用。

用於治療和/或預防範可尼貧血和/或相關病症和/或疾病的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以通過與適當的藥學上可接受的載體或稀釋劑組合而配製成藥物組合物，並且可配製成固體、半固體、液體或氣體形式的製劑，例如片劑、膠囊、散劑、顆粒劑、軟膏、溶液、栓劑、注射劑、吸入劑和氣霧劑。涵蓋多種途徑，包括局部、口服、經肺、經直腸、腸胃外、透皮、皮下、靜脈內、肌內、腹膜內、吸入、經頰、舌下、胸膜內、鞘內、鼻內等。用於局部或透皮施用本發明化合物的劑型包括散劑、噴霧劑、軟膏、糊劑、乳膏、洗劑、凝膠劑、溶液、貼劑和吸入劑。在一個實施方案中，將活性化合物在無菌條件下與藥學上可接受的載體以及需要的任何防腐劑、緩衝劑或推進劑混合。

本公開的方法還包括向受試者施用有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥以及標準的範可尼貧血治療。標準的範可尼貧血治療包括血液和骨髓幹細胞移植、雄激素療法、合成生長因子療法、基因療法和其某些組合。與標準療法組合施用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防範可尼貧血的劑量和方法在本公開中指定並以引用的方式併入本文中。

範可尼貧血蛋白牽涉於DNA修復中。範可尼貧血蛋白是範可尼貧血基因A、B、C、D1(BRCA2)、D2、E、F、G、I、J(BRIP1)、L、M、N(PALB2)和P(SLX4)的表達產物。本發明提供通過增加ALDH2的水平和/或活性來治療和/或預防範可尼貧血的方法。所述方法通常涉及向罹患範可尼貧血的受試者施用有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，以增加ALDH2的水平和/或活性。施用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防範可尼貧血的劑量和方法在本公開中指定並以引用的方式併入本文中。

在一些實施方案中，增加ALDH2的水平和/或活性的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥作為輔助療法施用至血液和/或骨髓幹細胞移植受試者。與血液和/或骨髓幹細胞移植組合施用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防範可尼貧血的劑量和方法是基於本公開中指定的劑量並以引用的方式併入本文中。

血液和骨髓幹細胞移植涉及從健康供體(同種異體移植)或患者(自體移植)提取骨髓，抑制患者的免疫系統，並隨後向患者施用所提取的骨髓。同種異體移植涉及健康供體和受折磨患者，並且需要供體具有與患者匹配的組織類型。自體移植涉及從患者提取造血幹細胞，將它們儲存在低於冰點的溫度下，破壞患者的惡性細胞和免疫系統，並且最後向患者施用他們所提取的幹細胞。

在一些實施方案中，增加ALDH2的水平和/或活性的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥作為輔助療法施用至接受雄激素療法的受試者。與雄激素療法組合施用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防範可尼貧血的劑量和方法是基於本公開中指定的劑量並以引用的方式併入本文中。

雄激素療法涉及向範可尼貧血患者施用合成製備或天然雄性激素以影響血細胞產生增加。雄激素是合成製備的或以天然提取物獲得。羥甲烯龍是最通常用於範可尼貧血患者的雄激素療法中的17-α-烷基化雄激素。

在一些實施方案中，增加ALDH2的水平和/或活性的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥作為輔助療法施用至接受合成生長因子療法的受試者。與生長因子療法組合施用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防範可尼貧血的劑量和方法是基於本公開中指定的劑量並以引用的方式併入本文中。

合成生長因子療法涉及向範可尼貧血患者施用合成製備的造血生長因子蛋白以影響血細胞產生增加。

在一些實施方案中，增加ALDH2的水平和/或活性的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥作為輔助療法施用至接受基因療法的受試者。與基因療法組合施用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防範可尼貧血的劑量和方法是基於本公開中指定的劑量並以引用的方式併入本文中。

基因療法涉及向範可尼貧血患者施用合成製備的DNA以影響血細胞產生增加。合成製備的DNA(例如含有FANC(A-O)的cDNA的逆轉錄病毒載體)當適當引入患者中時編碼健康的範可尼貧血蛋白。

在一些實施方案中，施用式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥以降低範可尼貧血患者中的實體腫瘤和白血病的發生率。

在一些實施方案中，式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥與DNA交聯劑結合施用以治療或預防範可尼貧血和癌症。

在一些實施方案中，式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥與其他藥學活性小分子結合施用以延遲範可尼貧血患者中的腫瘤發作。與小分子組合施用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防範可尼貧血的劑量和方法是基於本公開中指定的劑量並以引用的方式併入本文中。

在一些實施方案中，將式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥施用至具有低血細胞計數的範可尼貧血患者。

在一些實施方案中，將式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥施用至具有健康的血細胞計數的範可尼貧血患者。

在一些實施方案中，將式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥與用於基因療法和細胞療法的患者特異性誘導多能幹細胞一起施用至範可尼貧血患者。

在一些實施方案中，施用式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥以治療常染色體隱性遺傳病。

生長因子是促進細胞生長或分化的天然存在的蛋白質或類固醇。合成生長因子是已經在實驗室製備或分離以用於醫療用途的生長因子。生長因子蛋白的實例包括粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子、粒細胞集落刺激因子和重組白細胞介素。

適合用主題藥劑和/或主題方法(其中所述藥劑增加ALDH2的水平和/或活性)治療的受試者包括罹患範可尼貧血的受試者。

在一個實施方案中，本發明涉及降低受試者將患上範可尼貧血的可能性的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的本發明的化合物或組合物。

在一個實施方案中，本發明涉及降低罹患範可尼貧血的受試者將患上癌症的可能性的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的本發明的化合物或組合物。

在一個實施方案中，本發明涉及在受試者中治療和/或預防範可尼貧血的方法，所述方法包括施用：a)本發明的化合物或藥物組合物；和b)激素或生長因子。

在一個實施方案中，所述化合物或藥物組合物是通過選自肌內、靜脈內、皮下、口服和局部的途徑施用的。

本公開提供利用式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來拯救在與範可尼貧血有關的基因(例如，FANCA-FANCO)中的任一個中具有遺傳突變的暴露於DNA加合物的細胞(例如，淋巴細胞)的細胞增殖的方法。所公開的方法提供利用式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥以濃度依賴性方式降低細胞增殖。

本公開提供施用式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來拯救DNA加合物暴露細胞(例如，淋巴細胞)的細胞增殖的方法。

反式-4-羥基壬烯醛(4HNE)是從膜脂質的代謝產生的。參見Huang等,《環境與分子誘變》(Environ.Mol.Mutagen),(2011),51(6):625-634。它是ω-6多不飽和脂肪酸在體內的主要過氧化產物。參見Huang(2011)。從ω-6多不飽和脂肪酸形成HNE的若干途徑已經得到描述。參見Huang(2011)。4HNE暴露調節基因表達、細胞信號傳導、細胞增殖和細胞凋亡。參見Huang(2011)。人類暴露與氧化應激相關，並且4HNE已經牽涉於阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、動脈硬化和肝缺血再灌注損傷的病因中。參見Huang(2011)。在多種哺乳動物細胞(包括人類淋巴細胞)中在暴露後觀測到染色體畸變。參見Huang(2011)。4HNE在齧齒動物和人類細胞中誘變。哺乳動物基因毒性取決於穀胱甘肽，其針對4HNE-DNA加合物的形成具化學保護性。參見Huang(2011)。

本公開提供在約1-5μM 4HNE(例如3.5μM 4HNE)激發之前利用式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥(例如利用AC32或AC6)對FANCA缺陷型細胞(例如淋巴細胞)預處理約2小時，其相比於不具有任何ALDH2活化劑(僅4HNE)的細胞導致更高水平的細胞生長。ALDH2活化劑對細胞生長的這種保護具濃度依賴性。所述實施方案還提供在類似濃度下相比於AC32具有更高功效的AC6。本公開提供在4HNE處理後約1小時內、約2小時內、約3小時內、約4小時內、約5小時內、約6小時內、約7小時內、約8小時內、約9小時內、約10小時內、約11小時內、約12小時內、約13小時內、約14小時內、約15小時內、約16小時內、約17小時內、約18小時內、約19小時內、約20小時內、約25小時內、約30小時內、約35小時內、約40小時內、約45小時內、約46小時內、約47小時內、約48小時內、約1-10小時內、約2-15小時內、約3-20小時內、約4-25小時內、約5-30小時內、或約10-50小時內利用式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥對DNA加合物(例如，4HNE)的細胞增殖抑制作用的完全拯救。

本公開提供利用式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥(例如AC6和AC32)對於更高濃度的4HNE對FANCA細胞(例如，FANCA淋巴細胞)的細胞增殖造成的生長抑制作用的濃度依賴性拯救。在約6μM 4HNE激發之前用10μM AC32或AC6對FANCA缺陷型淋巴細胞預處理約2小時相比於不具有任何ALDH2活化劑(僅4HNE)的細胞或具有2μM ALDH2活化劑的細胞導致更高水平的細胞生長。僅由利用10μm AC6或10μM AC32處理產生的FANCA細胞中的更高ALDH2活性能夠拯救6μM 4HNE對FANCA細胞生長的抑制作用。

本發明的另一個方面是治療和/或預防範可尼貧血的方法。本公開的方法降低範可尼貧血的發病率和/或進展。所述化合物或組合物治療和/或預防範可尼貧血的一種或多種症狀，例如進行性全血細胞減少、身材矮小、橈骨發育不全、泌尿道畸形、色素沉著和先天性發育遲緩。在一個實施方案中，本公開提供在有需要的受試者中降低範可尼貧血的發病率和/或進展的方法。所述方法包括向有需要的受試者施用治療有效量的選自本文公開的任何式或化合物的那些的一種或多種化合物或者一種或多種這類式或化合物的藥物組合物。本公開還提供用於治療和/或預防範可尼貧血的藥物的製造方法。因此製造的藥物用於治療和/或預防範可尼貧血的症狀，例如全血細胞減少、身材矮小、橈骨發育不全、泌尿道畸形、色素沉著和先天性發育遲緩。

式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥降低了需要治療和/或預防範可尼貧血的受試者中的癌症的風險；所述癌症選自急性骨髓性白血病，口腔、食道、胃腸道、肛門和外陰的鱗狀細胞癌，頭和頸鱗狀細胞癌(HNSCC)以及乳腺癌。

在另一個方面，本發明涉及用於在有需要的受試者中治療和/或預防範可尼貧血的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物。在一個實施方案中，所述化合物或組合物治療和/或預防範可尼貧血的一種或多種症狀，其選自進行性全血細胞減少、身材矮小、橈骨發育不全、泌尿道畸形、色素沉著和先天性發育遲緩。在另一個實施方案中，所述化合物或組合物降低了需要治療和/或預防範可尼貧血的受試者中的癌症風險，其中所述癌症選自急性骨髓性白血病，口腔、食道、胃腸道、肛門和外陰的鱗狀細胞癌，頭和頸鱗狀細胞癌(HNSCC)以及乳腺癌。

本發明的另一個方面涉及用於製造在有需要的受試者中治療和/或預防範可尼貧血的藥物的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物。在一個實施方案中，所述化合物治療和/或預防範可尼貧血的一種或多種症狀，其選自進行性全血細胞減少、身材矮小、橈骨發育不全、泌尿道畸形、色素沉著和先天性發育遲緩。在另一個實施方案中，所述化合物降低了需要治療和/或預防範可尼貧血的受試者中的癌症風險，其中所述癌症選自急性骨髓性白血病，口腔、食道、胃腸道、肛門和外陰的鱗狀細胞癌，頭和頸鱗狀細胞癌(HNSCC)以及乳腺癌。

治療和/或預防外周動脈疾病的方法

本發明提供利用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥在受試者中治療和/或預防外周動脈疾病和相關病症的方法。本公開的方法治療和/或預防外周動脈疾病的發病率和/或進展。

ALDH2活化增加了缺血肢體中的活性醛的去除。ALDH2活化還保留了線粒體結構和功能，從而增強骨骼肌活力和功能。因為活性醛如4-羥基-壬烯醛(4-HNE)和丙二醛(MDA)破壞線粒體，所以4-HNE和其他毒性醛的加速去除將降低羰基應力和活性氧物質(RO)的負擔，從而降低組織損傷。本發明的化合物通過ALDH2活化增強了PAD中的功能能力。

本公開的方法包括施用有效量的式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防外周動脈疾病。施用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防外周動脈疾病的劑量和方法在本公開中指定並以引用的方式併入本文中。

例如，式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以每劑約1mg至約1000mg、例如每劑約1mg至約5mg、約5mg至約10mg、約10mg至約20mg、約20mg至約25mg、約25mg至約50mg、約50mg至約75mg、約75mg至約100mg、約100mg至約125mg、約125mg至約150mg、約150mg至約175mg、約175mg至約200mg、約200mg至約225mg、約225mg至約250mg、約250mg至約300mg、約300mg至約350mg、約350mg至約400mg、約400mg至約450mg、約450mg至約500mg、約500mg至約750mg、或約750mg至約1000mg的量施用。

用於治療和/或預防外周動脈疾病的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以通過與適當的藥學上可接受的載體或稀釋劑組合而配製成藥物組合物，並且可配製成固體、半固體、液體或氣體形式的製劑，例如片劑、膠囊、散劑、顆粒劑、軟膏、溶液、栓劑、注射劑、吸入劑和氣霧劑。涵蓋多種途徑，包括局部、口服、經肺、經直腸、腸胃外、透皮、皮下、靜脈內、肌內、腹膜內、吸入、經頰、舌下、胸膜內、鞘內、鼻內等。用於局部或透皮施用本發明化合物的劑型包括散劑、噴霧劑、軟膏、糊劑、乳膏、洗劑、凝膠劑、溶液、貼劑和吸入劑。在一個實施方案中，將活性化合物在無菌條件下與藥學上可接受的載體以及需要的任何防腐劑、緩衝劑或推進劑混合。

本公開的方法還包括向受試者施用有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥與標準的外周動脈疾病治療。標準的外周動脈疾病治療包括(但不限於)抗血小板劑、他汀類、ACE抑制劑和β-阻斷劑。與標準療法組合施用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防外周動脈疾病的劑量和方法在本公開中指定並以引用的方式併入本文中。

本發明提供通過增加ALDH2的活性和/或水平來治療和/或預防外周動脈疾病的方法。所述方法通常涉及向罹患外周動脈疾病的受試者施用有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，來增加ALDH2的水平和/或活性。施用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防外周動脈疾病的劑量和方法在本公開中指定並以引用的方式併入本文中。

適合用主題藥劑和/或主題方法(其中所述藥劑增加ALDH2的水平和/或活性)治療的受試者包括罹患外周動脈疾病的受試者。

在一個實施方案中，本發明涉及降低受試者將患上外周動脈疾病的可能性的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的本發明的化合物或組合物。

在一個實施方案中，所述化合物或藥物組合物是通過選自肌內、靜脈內、皮下、口服和局部的途徑施用的。

本發明的另一個方面涉及用於在有需要的受試者中治療和/或預防外周動脈疾病的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物。

在另一個方面，本發明涉及用於製造在有需要的受試者中治療和/或預防外周動脈疾病的藥物的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物。

治療和/或預防肝臟損傷和/或損害的方法

本發明提供利用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥在受試者中治療和/或預防肝臟損傷和/或損害如肝纖維化的方法。本公開的方法治療和/或預防肝纖維化的發病率和/或進展。

由於對肝臟的急性毒性損害如急性酒精中毒和對乙醯氨基酚過量而發生急性肝臟損傷和/或損害。在攝入潛在肝毒性量的對乙醯氨基酚後，對乙醯氨基酚過量造成肝損傷。對乙醯氨基酚過量事件分成兩類：急性攝入或反覆超治療攝入(RSI)。

此外由於對肝臟的慢性毒性損害如C型肝炎病毒(HCN)或B型肝炎病毒(HBV)感染、自身免疫性損傷和對毒素如酒精的長期暴露而發生肝臟損傷和/或損害。慢性毒性損害導致伴有慢性炎症的肝細胞損傷和修復的反覆循環。在一段可變時期內，由於宿主的傷口修復反應而使異常細胞外基質逐漸積聚。任其發展，這導致纖維材料的沉積增加，直至肝組織結構變得扭曲並且肝臟的再生能力受損。肝臟內的瘢痕組織的逐漸累積最終導致肝硬化組織病理學圖像，其定義為在整個肝臟內形成纖維隔膜和形成微結節。

如本文所用，在本文可與「肝臟纖維化」互換使用的術語「肝纖維化」是指由於以下中的任一種導致的瘢痕組織的生長：多種慢性毒性損害，包括(但不限於)慢性酒精濫用；藥物長期暴露，包括(但不限於)對乙醯氨基酚、胺碘酮、阿司匹林、硫唑嘌呤、異煙肼、甲基多巴、甲氨蝶呤、呋喃妥因、丙基硫氧嘧啶和磺醯胺；長期接觸某些化學劑，包括(但不限於)四氯化碳、二甲基亞硝胺、氯乙烯、多氯聯苯、黃麴黴素和殺蟲劑；曼氏血吸蟲(Schistosoma mansoni)感染；糖尿病；自身免疫性病症，包括(但不限於)原發性硬化性膽管炎、原發性膽汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、狼瘡狀肝炎和炎性腸病；血色素沉著病；α-1-抗胰蛋白酶缺乏症；慢性淤膽型肝炎；非酒精性脂肪性肝炎；慢性膽道梗阻；威爾遜氏病(Wilson's disease)；和已知造成肝硬化的其他病狀。

本公開的方法包括施用有效量的式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防肝臟損傷和/或損害。施用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防肝臟損傷和/或損害的劑量和方法在本公開指定並以引用的方式併入本文中。在一個實施方案中，所述肝臟損傷和/或損害是肝纖維化。

例如，式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以每劑約1mg至約1000mg、例如每劑約1mg至約5mg、約5mg至約10mg、約10mg至約20mg、約20mg至約25mg、約25mg至約50mg、約50mg至約75mg、約75mg至約100mg、約100mg至約125mg、約125mg至約150mg、約150mg至約175mg、約175mg至約200mg、約200mg至約225mg、約225mg至約250mg、約250mg至約300mg、約300mg至約350mg、約350mg至約400mg、約400mg至約450mg、約450mg至約500mg、約500mg至約750mg、或約750mg至約1000mg的量施用。

用於治療和/或預防肝臟損傷和/或損害(例如，肝纖維化)的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以通過與適當的藥學上可接受的載體或稀釋劑組合而配製成藥物組合物，並且可配製成固體、半固體、液體或氣體形式的製劑，例如片劑、膠囊、散劑、顆粒劑、軟膏、溶液、栓劑、注射劑、吸入劑和氣霧劑。涵蓋多種途徑，包括局部、口服、經肺、經直腸、腸胃外、透皮、皮下、靜脈內、肌內、腹膜內、吸入、經頰、舌下、胸膜內、鞘內、鼻內等。用於局部或透皮施用本發明化合物的劑型包括散劑、噴霧劑、軟膏、糊劑、乳膏、洗劑、凝膠劑、溶液、貼劑和吸入劑。在一個實施方案中，將活性化合物在無菌條件下與藥學上可接受的載體以及需要的任何防腐劑、緩衝劑或推進劑混合。

本公開的方法還包括向受試者施用有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥與標準的肝纖維化治療。

本發明提供通過增加ALDH2的活性和/或水平來治療和/或預防肝纖維化的方法。所述方法通常涉及向罹患肝纖維化的受試者施用有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，以增加ALDH2的水平和/或活性。施用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防肝纖維化的劑量和方法在本公開中指定並以引用的方式併入本文中。

適合用主題藥劑和/或主題方法(其中所述藥劑增加ALDH2的水平和/或活性)治療的受試者包括罹患肝纖維化的受試者。

在一個實施方案中，本發明涉及降低受試者將患上肝纖維化的可能性的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的本發明的化合物或組合物。

在一個實施方案中，所述化合物或藥物組合物是通過選自肌內、靜脈內、皮下、口服和局部的途徑施用的。

肝纖維化是與肝硬化相關的併發症(例如門靜脈高壓、進行性肝功能不全和肝細胞癌)的前兆。肝纖維化減少因此降低這些併發症的發生率。因此，本發明還提供降低個體將患上與肝硬化相關的併發症的可能性的方法。

病毒和寄生蟲感染可引起炎症和肝纖維化。一些實例是嗜肝DNA病毒科(A型肝炎病毒和B型肝炎病毒)；丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒和未分類病毒(例如，海綿狀腦病的病原體、δ肝炎病原體(被認為是B型肝炎病毒的缺損衛星)、非A非B型肝炎病原體(1級＝腸道傳輸；2級＝腸胃外傳輸)(即，C型肝炎)；諾瓦克和相關病毒，和星狀病毒)。示例性寄生蟲包括(但不限於)：阿米巴蟲(Entamoeba histolytica)；瘧疾寄生蟲瘧原蟲物種(惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum)、三日瘧原蟲(P.malariae)、卵形瘧原蟲(P.ovale)、間日瘧原蟲(P.vivax))、線蟲旋毛形線蟲(Trichinella spiralis)、吸蟲華支睪吸蟲(Clonorchis sinensis)、曼氏血吸蟲(Schistosoma mansoni)、埃及血吸蟲(S.haematobium)和日本血吸蟲(S.japonicum)和其任何組合。

在其他實施方案中，式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的施用是與抗病毒藥物或藥劑組合進行的。可用於本文所述方法的示例性抗病毒劑包括(但不限於)免疫球蛋白、金剛烷胺、幹擾素、核苷類似物和蛋白酶抑制劑。抗病毒劑的具體實例包括(但不限於)醋孟南；阿昔洛韋；阿昔洛韋鈉；阿德福韋；阿洛夫定；阿韋舒託；鹽酸金剛烷胺；阿拉諾丁；阿立酮；甲磺酸地拉韋啶；阿夫立定；西多福韋；西潘茶鹼；鹽酸阿糖胞苷；甲磺酸地拉韋啶；地昔洛韋；去羥肌苷；二噁沙利；依度尿苷；恩韋拉登；恩韋肟；泛昔洛韋；鹽酸法莫汀；非西他濱；非阿尿苷；磷利酯；膦甲酸鈉；膦乙酸鈉；更昔洛韋；更昔洛韋鈉；碘苷；乙氧丁酮醛；拉米夫定；洛布卡韋；鹽酸美莫丁；美替沙腙；奈韋拉平；噴昔洛韋；吡羅達韋；利巴韋林；鹽酸金剛乙胺；甲磺酸沙奎那韋；鹽酸金剛烷胺；索立夫定；維司託隆；司他夫定；鹽酸替絡龍；三氟尿苷；鹽酸伐昔洛韋；阿糖腺苷；磷酸阿糖腺苷；阿糖腺苷磷酸鈉；韋羅肟；扎西他濱；齊多夫定；和淨韋肟。

在另一個方面，本發明涉及用於在有需要的受試者中治療和/或預防肝臟損傷和/或損害的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物。在一個實施方案中，所述肝臟損傷和/或損害是肝纖維化。

本發明的另一個方面涉及用於製造在有需要的受試者中治療和/或預防肝臟損傷和/或損害的藥物的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物。在一個實施方案中，所述肝臟損傷和/或損害是肝纖維化。

治療和/或預防急性炎性疼痛的方法

本發明提供利用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥在受試者中治療和/或預防急性炎性疼痛和相關病症的方法。本公開的方法治療和/或預防急性炎性疼痛的發病率和/或進展。

本公開的方法包括施用有效量的式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防急性炎性疼痛。施用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防急性炎性疼痛的劑量和方法在本公開中指定並以引用的方式併入本文中。

例如，式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以每劑約1mg至約1000mg、例如每劑約1mg至約5mg、約5mg至約10mg、約10mg至約20mg、約20mg至約25mg、約25mg至約50mg、約50mg至約75mg、約75mg至約100mg、約100mg至約125mg、約125mg至約150mg、約150mg至約175mg、約175mg至約200mg、約200mg至約225mg、約225mg至約250mg、約250mg至約300mg、約300mg至約350mg、約350mg至約400mg、約400mg至約450mg、約450mg至約500mg、約500mg至約750mg、或約750mg至約1000mg的量施用。

用於治療和/或預防急性炎性疼痛的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可通過與適當的藥學上可接受的載體或稀釋劑組合而配製成藥物組合物，並且可配製成固體、半固體、液體或氣體形式的製劑，例如片劑、膠囊、散劑、顆粒劑、軟膏、溶液、栓劑、注射劑、吸入劑和氣霧劑。涵蓋多種途徑，包括局部、口服、經肺、經直腸、腸胃外、透皮、皮下、靜脈內、肌內、腹膜內、吸入、經頰、舌下、胸膜內、鞘內、鼻內等。用於局部或透皮施用本發明化合物的劑型包括散劑、噴霧劑、軟膏、糊劑、乳膏、洗劑、凝膠劑、溶液、貼劑和吸入劑。在一個實施方案中，將活性化合物在無菌條件下與藥學上可接受的載體以及需要的任何防腐劑、緩衝劑或推進劑混合。

本公開的方法還包括向受試者施用有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥與可用於治療疼痛的其他藥劑。例如，所述式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以與一種或多種抗抑鬱藥、止痛藥、肌肉鬆弛藥、食慾抑制劑、興奮劑、抗癲癇藥物、鎮靜/安眠藥和其組合一起施用。可以與式(I)化合物一起施用的化合物的具體實例包括(但不限於)米那普侖、加巴噴丁、普瑞巴林、普拉克索、1-多巴、安非他明、替扎尼定、可樂定、曲馬多、嗎啡、三環類抗抑鬱藥、可待因、卡馬西平、西布曲明、安非他明、安定、曲唑酮和其組合(包括其鹽和/或溶劑化物)。與可用於治療疼痛的其他藥劑組合施用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防急性炎性疼痛的劑量和方法在本公開中指定並以引用的方式併入本文中。

本發明提供通過增加ALDH2的活性和/或水平來治療和/或預防急性炎性疼痛的方法。所述方法通常涉及向罹患急性炎性疼痛的受試者施用有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，以增加ALDH2的水平和/或活性。施用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防急性炎性疼痛的劑量和方法在本公開中指定並以引用的方式併入本文中。

適合用主題藥劑和/或主題方法(其中所述藥劑增加ALDH2的水平和/或活性)治療的受試者包括罹患急性炎性疼痛的受試者。

在一個實施方案中，本發明涉及降低受試者將患上急性炎性疼痛的可能性的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的本發明的化合物或組合物。

在一個實施方案中，所述化合物或藥物組合物是通過選自肌內、靜脈內、皮下、口服和局部的途徑施用的。

本發明的另一個方面涉及用於在有需要的受試者中治療和/或預防急性炎性疼痛的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物。

在另一個方面，本發明涉及用於製造用於在有需要的受試者中治療和/或預防急性炎性疼痛的藥物的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物。

治療和/或預防酒精相關疾病或病狀的方法

本發明提供治療和/或預防酒精不耐受、酒精成癮、酒精濫用障礙、酒精緻醉、酒精依賴、酒精中毒或飲酒症狀的方法，所述方法包括向受試者施用有效量的式(I)的化合物或藥物組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以定期施用至受試者以治療或預防酒精成癮。例如，在一些實施方案中，式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥是每天兩次、每天一次、每隔一天、每周兩次、每周一次或每月兩次施用至受試者。式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以透皮「貼劑」形式施用以治療或預防酒精成癮。

如本文所用的「治療酒精成癮」包括達到以下中的一種或多種：消耗酒精量降低；消耗酒精的頻率降低；酒精渴望降低；和過量飲酒症狀中的一種或多種的降低。如本文在酒精成癮的上下文中所用的「酒精」是指乙醇，例如，含有2體積％、3體積％、4體積％、5體積％或更多乙醇的飲料，例如，葡萄酒、啤酒、伏特加、威士忌等。

適合用式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥治療的受試者包括具有酒精成癮的受試者，包括被認為是酗酒者的受試者(例如，具有以下列中的一種或多種為特徵的原發性慢性疾病的受試者：對飲酒的控制受損、專注於藥物酒精、儘管有不良後果仍使用酒精和飲酒後的思維扭曲)；在飲酒停止後罹患戒斷症狀的受試者；經歷酒精依賴(例如，酒精濫用與耐受、戒斷，和無法控制的飲酒欲)的受試者；等。

酒精緻醉(也稱為醉酒或酒醉)是指由飲酒引起的受試者的生理狀態，當時酒精在血流中積聚的速度比它可以被肝臟代謝的速度更快。常見的作用是精神愉快和社會禁忌降低。酒精緻醉的常見症狀包括言語不清、精神愉快、平衡障礙、肌肉協調喪失(共濟失調)、滿臉通紅、脫水、嘔吐、眼睛發紅、禁忌減少和不確定的行為。足夠高水平的血源性酒精會導致昏迷和死於酒精對中樞神經系統的抑制作用。

式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥還可以治療或預防酒精中毒，例如急性酒精中毒，它是指血液中的高濃度酒精，例如，高到足以引起昏迷或呼吸抑制。急性酒精中毒被認為是一種醫療急救。急性酒精中毒症狀包括例如嚴重混亂、不可預知的行為、木僵、突然墜入和脫離無意識或半意識狀態(以及後來的酒精性失憶)、在無意識或半意識抽搐的同時嘔吐、呼吸抑制(少於每分鐘八次呼吸)，以及由於氧氣不足而導致的皮膚蒼白、發藍、發冷和溼冷。

在一個實施方案中，酒精緻醉或酒精中毒的治療或預防包括在急救室中向受試者施用本發明化合物。在另一個實施方案中，式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以用於治療或預防受試者中的酒精緻醉、酒精中毒或飲酒症狀。上文列出了酒精緻醉和酒精中毒的症狀的一些實例。由於飲酒引起的症狀包括例如宿醉。宿醉(也稱為宿醉(veisalgia))是在飲酒後經歷各種令人不快的生理作用。宿醉的特徵包括例如頭痛、噁心、對光線和噪音敏感、嗜睡、煩躁、腹瀉和口渴，通常在酒精開始逐漸減弱的醉人效果之後。雖然宿醉可以在任何時間經歷，但通常宿醉是在夜晚大量飲酒之後的早晨所經歷的。除了身體症狀之外，宿醉還可誘發心理症狀，包括抑鬱和焦慮感加劇。

宿醉症狀可在最後飲酒後持續若干天。宿醉的一些方面被視為急性酒精戒斷症狀。酒精宿醉與多種症狀相關，所述症狀可包括脫水、疲乏、頭痛、全身酸痛、嘔吐、腹瀉、脹氣、虛弱、體溫和心率升高、唾液分泌過多、注意力不集中、出汗、焦慮、煩躁、易怒、對光線和噪音敏感、運動功能不穩定(包括震顫)、睡眠問題、極度飢餓、口臭和缺乏深度知覺。一些受試者還可能被宿醉期間酒精的掛念、味道或氣味所排斥。不同受試者之間的症狀顯著改變。

本發明提供對具有ALDH2缺陷型基因的受試者提供維持以除去所述受試者中的乙醛的方法，其包括在飲酒之前、之後或同時向所述受試者施用有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。

在一些實施方案中，所述受試者具有兩個「野生型」ALDH2等位基因，例如，由兩個野生型ALDH2等位基因編碼的ALDH2在位置487處具有穀氨酸。在其他實施方案中，所述受試者具有一個或兩個「ALDH2*2」等位基因，例如，由一個或兩個ALDH2等位基因編碼的ALDH2包含賴氨酸作為胺基酸位置487。E487K多態性是半顯性多態性，並且產生相比於「野生型」ALDH2具有顯著更低酶促活性的ALDH2四聚體。因此，對於ALDH2*2等位基因雜合或純合的受試者相比於對於「野生型」ALDH2等位基因純合的受試者具有更低的體內ALDH2活性水平。具有這種ALDH2缺陷型基因、例如對於ALDH2*2等位基因雜合或純合的受試者預期獲益於利用本發明化合物的治療，因為這種受試者中的ALDH2活性水平特別低，並且ALDH2活性水平的任何增加將預期提供治療作用。

約40％的東亞人口帶有半顯性ALDH2*2等位基因。這些受試者可以通過包括面部潮紅、噁心和心動過速中的一種或多種的乙醇消耗反應來表徵。對於ALDH2*2等位基因雜合或純合的受試者適合用涉及施用本發明化合物的主題方法來治療。

所述式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以用於在暴露於醇或醛的受試者中螯合醛。本發明化合物可以用作醛螯合劑。所述螯合劑可以在飲酒和/醛暴露之前、之後或同時施用。本發明化合物可以通過例如與醛結合或反應以形成穩定和無毒的形式來螯合受試者中的醛，並且因此防止醛在受試者中造成損傷作用。

在一些實施方案中，所述式(I)化合物或藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以與阿片受體拮抗劑組合施用以治療或預防酒精相關的疾病和/或病狀。所述阿片拮抗劑包括例如納曲酮，它是相比於不活化受體的激動劑以更高親和力與阿片受體結合的競爭性拮抗劑。這有效地阻斷受體，從而防止身體對鴉片類和內啡肽起反應。納曲酮也是部分反向激動劑，其可以用於治療或預防阿片成癮。

在一個實施方案中，本發明涉及治療和/或預防酒精不耐受、酒精成癮、酒精濫用障礙、酒精緻醉、酒精依賴、酒精中毒或飲酒症狀的方法，所述方法包括向受試者施用有效量的式(I)的化合物或藥物組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。在一個實施方案中，所述酒精中毒是甲醇中毒。在一個實施方案中，所述酒精中毒是急性酒精中毒。在一個實施方案中，所述酒精緻醉是急性酒精緻醉。在一個實施方案中，所述飲酒症狀是宿醉症狀。在另一個實施方案中，所述宿醉症狀選自脫水、疲乏、頭痛、全身酸痛、嘔吐、腹瀉、脹氣、虛弱、體溫和心率升高、唾液分泌過多、注意力不集中、出汗、焦慮、煩躁、易怒、對光線和噪音敏感、運動功能不穩定、睡眠問題、極度飢餓、口臭和缺乏深度知覺。

在一個實施方案中，治療和/或預防酒精不耐受、酒精成癮、酒精濫用障礙、酒精緻醉、酒精依賴、酒精中毒或飲酒症狀的方法還包括施用阿片受體拮抗劑。在一個實施方案中，所述阿片受體拮抗劑是納曲酮。

在一個實施方案中，本發明涉及在暴露於醇或醛的受試者中螯合醛的方法，其包括向所述受試者施用有效量的式(I)的化合物或藥物組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。

在一個實施方案中，本發明涉及將受試者中以毒性水平存在的醛的水平降至低於所述毒性水平的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的本發明的化合物或藥物組合物，其中所述醛是生源醛或外源醛。在一個實施方案中，所述生源醛是乙醛、丙二醛(MDA)、3,4-二羥基苯乙醛(DOPAL)、3,4-二羥基苯基羥乙醛(DOPEGAL)、己醛、丙烯醛、乙二醛、丁烯醛、反式-2-壬烯醛、4-氧代-2-壬烯醛或4-羥基-2-壬烯醛(HNE)。在一個實施方案中，所述外源醛是攝入或吸入的環境醛。

在一個實施方案中，本發明涉及在暴露於醇或醛的有需要的受試者中螯合醛的方法，其包括向所述受試者施用有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。

在一個實施方案中，本發明涉及將有需要的受試者中以毒性水平存在的醛的水平降至低於所述毒性水平的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的本發明的化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，其中所述醛是生源醛或外源醛。在一個實施方案中，所述生源醛是乙醛、丙二醛(MDA)、3,4-二羥基苯乙醛(DOPAL)、3,4-二羥基苯基羥乙醛(DOPEGAL)、己醛、丙烯醛、乙二醛、丁烯醛、反式-2-壬烯醛、4-氧代-2-壬烯醛或4-羥基-2-壬烯醛(4HNE)。在一個實施方案中，所述外源醛是攝入或吸入的環境醛。

在一個實施方案中，本發明涉及治療和/或預防酒精不耐受、酒精成癮、酒精濫用障礙、酒精緻醉、酒精依賴、酒精中毒或飲酒症狀的方法，所述方法包括向有需要的受試者施用有效量的本發明的化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥。在一個實施方案中，所述酒精中毒是甲醇中毒。在一個實施方案中，所述酒精中毒是急性酒精中毒。在一個實施方案中，所述酒精緻醉是急性酒精緻醉。在一個實施方案中，所述飲酒症狀是宿醉症狀。在另一個實施方案中，所述宿醉症狀選自脫水、疲乏、頭痛、全身酸痛、嘔吐、腹瀉、脹氣、虛弱、體溫和心率升高、唾液分泌過多、注意力不集中、出汗、焦慮、煩躁、易怒、對光線和噪音敏感、運動功能不穩定、睡眠問題、極度飢餓、口臭和缺乏深度知覺。

在一個實施方案中，治療和/或預防酒精不耐受、酒精成癮、酒精濫用障礙、酒精緻醉、酒精依賴、酒精中毒或飲酒症狀的方法還包括施用阿片受體拮抗劑。在一個實施方案中，所述阿片受體拮抗劑是納曲酮。

本發明的另一個方面涉及用於在暴露於醇或醛的受試者中螯合醛的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物。

在另一個方面，本發明涉及用於將受試者中以毒性水平存在的醛的水平降至低於所述毒性水平的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物。在一個實施方案中，所述醛是生源醛或外源醛。在另一個實施方案中，所述生源醛是乙醛、丙二醛(MDA)、3,4-二羥基苯乙醛(DOPAL)、3,4-二羥基苯基羥乙醛(DOPEGAL)、己醛、丙烯醛、乙二醛、丁烯醛、反式-2-壬烯醛、4-氧代-2-壬烯醛或4-羥基-2-壬烯醛(4HNE)。在另一個實施方案中，所述外源醛是攝入或吸入的環境醛。

本發明的另一個方面涉及用於治療和/或預防酒精不耐受、酒精成癮、酒精濫用障礙、酒精緻醉、酒精依賴、酒精中毒或飲酒症狀的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物。在一個實施方案中，所述酒精中毒是甲醇中毒。在另一個實施方案中，所述酒精中毒是急性酒精中毒。在另一個實施方案中，所述酒精緻醉是急性酒精緻醉。在另一個實施方案中，所述飲酒症狀是宿醉症狀。在另一個實施方案中，所述宿醉症狀選自脫水、疲乏、頭痛、全身酸痛、嘔吐、腹瀉、脹氣、虛弱、體溫和心率升高、唾液分泌過多、注意力不集中、出汗、焦慮、煩躁、易怒、對光線和噪音敏感、運動功能不穩定、睡眠問題、極度飢餓、口臭和缺乏深度知覺。

在另一個方面，本發明涉及用於治療和/或預防酒精不耐受、酒精成癮、酒精濫用障礙、酒精緻醉、酒精依賴、酒精中毒或飲酒症狀的組合療法中的化合物，其中所述化合物是式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，或式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物，其與阿片受體拮抗劑組合使用。在一個實施方案中，所述阿片受體拮抗劑是納曲酮。

解毒方法

本發明提供降低受試者中的有毒化合物水平的方法，所述方法通常涉及向受試者施用有效量的本發明化合物。本發明提供治療和/或預防與化合物(例如，外源醛；生源醛；或者當攝入、吸收或吸入時產生ALDH2的醛底物的化合物)的毒性水平相關或由其產生的病症的方法，所述方法通常涉及向受試者施用有效量的本發明化合物，其中所述受試者中的所述化合物的水平降至非毒性水平。

可以使用主題方法降低在受試者中的水平的毒性化合物包括(但不限於)乙醇、甲醇、乙二醇單甲醚、外源醛、生源醛和通過攝入、吸收或吸入的化合物的體內代謝產生的醛。本發明化合物是以當以一個或多個劑量施用時可有效降低化合物如乙醇、甲醇、乙二醇單甲醚、外源醛、生源醛或通過攝入、吸收或吸入的化合物的體內代謝產生的醛的毒性水平的量施用的。在一些實施方案中，所述醛是乙醛。

本發明提供降低醛毒性的方法，所述方法通常涉及施用有效量的本發明化合物。在一些實施方案中，本發明化合物的有效量是可有效降低醛毒性的一種或多種症狀的量。例如，在一些實施方案中，本發明化合物的有效量是可有效降低過量乙醇消耗的一種或多種症狀的量，其中這些症狀包括例如頭痛、脫水、疲乏、噁心、嘔吐、腹瀉、虛弱、焦慮、煩躁、畏光、畏聲等。

在另一個方面，本發明涉及用於在有需要的受試者中降低醛毒性的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物。

本發明的另一個方面涉及用於製造用於降低有需要的受試者中的醛毒性的藥物的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物。

適合用本發明化合物治療的受試者包括例如通過攝入毒性化合物、通過吸入毒性化合物、通過攝入或吸入毒性水平的化合物或通過在正常代謝期間產生醛而具有毒性水平的醛的受試者。這些受試者包括(但不限於)已經攝入或吸入乙醇、甲醇、乙二醇單甲醚或其他外源或生源醛化合物的受試者。例如，這類受試者包括已經攝入或吸入殺蟲劑、殺真菌劑或其他這類化合物的受試者；已經消耗過量水平的乙醇的受試者；等。

治療和/或預防涉及缺血應激的病狀的方法

本發明提供在個體中治療和/或預防涉及缺血應激的病狀的方法(包括預防性方法)，所述方法通常涉及向有需要的個體施用有效量的主題ALDH2激動劑。涉及缺血應激的病狀包括局部缺血病狀、局部缺血事件、可以產生局部缺血的病狀，和由局部缺血事件產生的病狀。適合用主題方法治療的涉及缺血應激的病狀包括由任何病狀或事件產生的局部缺血，其包括(但不限於)心肌梗塞(例如，急性心肌梗塞)、心臟手術、腦外傷、腦血管疾病、中風、脊髓損傷、蛛網膜下腔出血、其中發生多種器官局部缺血的大手術、器官移植、四肢缺血(例如，由第1型或第2型糖尿病產生)等。

本公開的方法包括施用有效量的式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防涉及缺血應激的病狀。施用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防涉及缺血應激的病狀的劑量和方法在本公開中指定並以引用的方式併入本文中。在一個實施方案中，涉及缺血應激的病狀選自由心臟手術產生的局部缺血、由中風產生的局部缺血、由腦外傷產生的局部缺血、由長時期手術產生的局部缺血和由器官移植產生的局部缺血。

例如，式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以每劑約1mg至約1000mg、例如每劑約1mg至約5mg、約5mg至約10mg、約10mg至約20mg、約20mg至約25mg、約25mg至約50mg、約50mg至約75mg、約75mg至約100mg、約100mg至約125mg、約125mg至約150mg、約150mg至約175mg、約175mg至約200mg、約200mg至約225mg、約225mg至約250mg、約250mg至約300mg、約300mg至約350mg、約350mg至約400mg、約400mg至約450mg、約450mg至約500mg、約500mg至約750mg、或約750mg至約1000mg的量施用。

用於治療和/或預防涉及缺血應激的病狀的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥可以通過與適當的藥學上可接受的載體或稀釋劑組合而配製成藥物組合物，並且可配製成固體、半固體、液體或氣體形式的製劑，例如片劑、膠囊、散劑、顆粒劑、軟膏、溶液、栓劑、注射劑、吸入劑和氣霧劑。涵蓋多種途徑，包括局部、口服、經肺、經直腸、腸胃外、透皮、皮下、靜脈內、肌內、腹膜內、吸入、經頰、舌下、胸膜內、鞘內、鼻內等。用於局部或透皮施用本發明化合物的劑型包括散劑、噴霧劑、軟膏、糊劑、乳膏、洗劑、凝膠劑、溶液、貼劑和吸入劑。在一個實施方案中，將活性化合物在無菌條件下與藥學上可接受的載體以及需要的任何防腐劑、緩衝劑或推進劑混合。

本公開的方法還包括向受試者施用有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥與可用於治療涉及缺血應激的病狀的其他藥劑。與可用於治療涉及缺血應激的病狀的其他藥劑組合施用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防涉及缺血應激的病狀的劑量和方法在本公開中指定並以引用的方式併入本文中。

本發明提供通過增加ALDH2的活性和/或水平來治療和/或預防涉及缺血應激的病狀的方法。所述方法通常涉及向罹患涉及缺血應激的病狀的受試者施用有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，來增加ALDH2的水平和/或活性。施用式(I)的化合物或組合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥來治療和/或預防涉及缺血應激的病狀的劑量和方法在本公開中指定並以引用的方式併入本文中。

在一個實施方案中，本發明涉及降低受試者將患上涉及缺血應激的病狀的可能性的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的本發明的化合物或組合物。

在一個實施方案中，所述化合物或藥物組合物是通過選自肌內、靜脈內、皮下、口服和局部的途徑施用的。

在另一個方面，本發明涉及用於在有需要的受試者中治療和/或預防涉及缺血應激的病狀的方法中的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物。在一個實施方案中，所述涉及缺血應激的病狀選自由心臟手術產生的局部缺血、由中風產生的局部缺血、由腦外傷產生的局部缺血、由長時期手術產生的局部缺血和由器官移植產生的局部缺血。

本發明的另一個方面涉及用於製造用於在有需要的受試者中治療和/或預防涉及缺血應激的病狀的藥物的化合物，其中所述化合物選自式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥，和式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的藥物組合物。在一個實施方案中，所述涉及缺血應激的病狀選自由心臟手術產生的局部缺血、由中風產生的局部缺血、由腦外傷產生的局部缺血、由長時期手術產生的局部缺血和由器官移植產生的局部缺血。

適合用主題藥劑和/或主題方法(其中所述藥劑增加ALDH2的水平和/或活性)治療的受試者包括罹患涉及缺血應激的病狀的受試者。

適合用主題藥劑和/或主題方法(其中所述藥劑增加ALDH2的水平和/或活性)治療的受試者包括定期進行心臟手術或已經歷心臟手術的受試者；已經歷中風的受試者；已遭受腦外傷的受試者；具有長時期手術的受試者；和將進行器官移植的受試者。

合成方法

在一個實施方案中，本發明涉及本發明化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、酯或前藥的合成方法。

用於製備苄胺的一般程序：

在本發明中應用的苄胺可購得或者如下文方案中所述從以下市售原料製備：1)苯甲腈；2)苯甲醛；3)苄基氯；和4)苯甲酸。

用於製備式(II)化合物的一般程序：

方案1：

根據方案1製備化合物AC1

本公開包括用於製備中間體化合物ICb的程序。通過向市售ICa於醇(例如甲醇)中的溶液中添加催化劑如細粒固體複合物(例如，鎳-鋁合金如雷尼鎳(Raney-Ni))來製備ICb。反應在室溫下進行若干小時，例如過夜。通過過濾除去固體反應產物，並用醇(例如甲醇)洗滌。以濾液形式收集透明溶液，然後將其減壓濃縮，獲得ICb的黃色油狀物。

本公開提供用於製備中間體化合物(IC2)的程序。在這個程序中，將中間體化合物(IC1)於有機氯化合物(例如亞硫醯二氯(SOCl2))中的溶液回流約1-2小時，然後濃縮，獲得粗製乙醯氯中間體。向ICb、鹼(例如三乙胺)於有機溶劑(例如二氯甲烷(DCM))中的溶液中添加先前在二氯甲烷中獲得的乙醯氯中間體。在室溫(rt)下攪拌若干小時(例如過夜)後，用水稀釋反應物。分離出水性部分並將有機溶劑(例如二氯甲烷)用於萃取。將合併的有機層用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉(Na2SO4))乾燥，濃縮並溼磨，獲得呈白色固體狀的IC2。

本公開提供用於製備中間體化合物(IC3)的程序。在室溫下，將不溶性鹼(例如氫化鈉(NaH))添加至醇(例如環丙烷甲醇)於極性非質子性有機溶劑(例如二甲基甲醯胺(DMF))中的溶液。攪拌約一小時後，將反應物冷卻至約0℃，然後添加溶解在非極性非質子性溶劑(例如DMF)中的IC2。在室溫下攪拌若干小時(例如過夜)後，將反應物用水淬滅並用溶劑/稀釋劑(例如乙酸乙酯(EA))萃取。將產生的合併有機層用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉(Na2SO4))乾燥，濃縮並溼磨，得到呈白色固體狀的IC3。

本公開提供用於製備中間體化合物4(IC4)的程序。向IC3和硼酸(例如(2-甲醯基苯基)硼酸)於非極性溶劑(例如甲苯)中的溶液中添加水性鹼溶液(例如碳酸鈉溶液)和鈀(II)催化劑(例如[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(Pd(dppf)Cl2))。然後將反應物加熱約3小時。用水淬滅反應。分離出水性部分並用極性有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取。將合併的有機層用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉(Na2SO4))乾燥並濃縮，得到粗產物，通過矽膠色譜法純化，獲得呈白色固體狀的IC4。

本公開提供用於製備AC1的程序。向IC4於第一有機溶劑(例如四氫呋喃(THF))和第二有機溶劑(例如甲醇)中的溶液中添加還原劑(例如硼氫化鈉(NaBH4))。攪拌約30分鐘後，用冷水淬滅反應並且利用酸(例如鹽酸)將反應混合物的pH調節至約5的pH值。再攪拌約15分鐘後，用極性有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取反應混合物。將合併的有機層用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉(Na2SO4))乾燥並濃縮，得到呈白色固體狀的AC1。

方案2：用於合成式(II)化合物的替代方案

用於製備式(III)化合物的一般程序：

方案3：

通過方案3製備AC2：

本公開包括用於製備中間體化合物ICb的程序。通過向市售ICa於醇(例如甲醇)中的溶液中添加催化劑如細粒固體複合物(例如，鎳-鋁合金如雷尼鎳(Raney-Ni))來製備ICb。反應在室溫下進行若干小時，例如過夜。通過過濾除去固體反應產物，並用醇(例如甲醇)洗滌。以濾液形式收集透明溶液，然後將其減壓濃縮，獲得ICb的黃色油狀物。

本公開包括用於製備中間體化合物IC6的程序。在約0℃下向醇(例如環丙烷甲醇)溶解在非極性非質子性溶劑(例如二甲基甲醯胺)中的溶液中添加不溶性鹼(例如氫化鈉(NaH))。將混合物攪拌約1小時。然後添加ICa於有機溶劑(例如二甲基甲醯胺(DMF))中的溶液。將反應混合物在約75℃下攪拌過夜。在冷卻至室溫後，利用酸(例如鹽酸)在約0℃下將反應溶液酸化至約5的pH值，並用水稀釋。分離出水層並用極性有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取。將有機層用鹽水洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥並濃縮，獲得粗物質，通過矽膠色譜法純化，得到化合物IC6。

本公開包括用於製備中間體化合物IC7的程序。將化合物IC6於有機氯化合物(例如亞硫醯二氯(SOCl2))中的混合物加熱至回流約1-2小時，冷卻至室溫並濃縮。將所得殘餘物溶解在有機溶劑(例如二氯甲烷)中並且在約0℃下將溶液逐滴添加至(3-氟-4-甲氧基苯基)甲胺(ICb)和鹼(例如三乙胺)溶解在有機溶劑(例如二氯甲烷)中的混合物。將反應混合物在約室溫下攪拌若干小時(例如過夜)。第二天，將反應混合物用水淬滅並用有機溶劑(例如二氯甲烷)萃取。分離出有機層並用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥並濃縮。通過矽膠色譜法純化粗物質，得到呈固體狀的化合物IC7。

本公開包括用於製備中間體化合物IC8的程序。向IC7和硼酸(例如(2-甲醯基苯基)硼酸)於非極性溶劑(例如甲苯)中的溶液中添加鹼(例如碳酸鈉)和鈀(II)催化劑(例如[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(Pd(dppf)Cl2))。然後將反應混合物加熱至約90℃，並攪拌若干小時(例如過夜)。第二天，將反應混合物用水淬滅並用極性溶劑(例如乙酸乙酯)萃取。將合併的有機層用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥並濃縮，得到粗產物，通過矽膠色譜法利用PE:EA＝5:1混合物純化，獲得呈白色固體狀的IC8。

本公開包括用於製備化合物AC2的程序。向IC8於兩種有機溶劑(例如，四氫呋喃和甲醇)中的溶液中添加還原劑(例如硼氫化鈉)。攪拌約30分鐘後，通過冷水淬滅反應並且利用酸(例如鹽酸)將反應混合物的pH調節至約5的pH值。再攪拌約15分鐘後，用有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取反應混合物。將合併的有機層用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥並濃縮，得到粗產物，通過矽膠色譜法純化，獲得AC2。

方案4：用於合成式(III)化合物的替代方案

根據方案4製備AC6：

本公開包括用於製備中間體化合物ICb的程序。將ICa和催化劑如細粒固體複合物(例如，鎳-鋁合金如雷尼鎳)於醇溶劑(例如甲醇)中的混合物在約室溫下在氫氣氣氛下攪拌若干小時(例如過夜)。第二天，將混合物過濾並濃縮，獲得化合物ICb，其不經進一步純化即用於下一步驟。

本公開包括用於製備中間體化合物IC6的程序。在約0℃下向醇(例如環丙烷甲醇)於非極性有機溶劑(例如二甲基甲醯胺)中的溶液中添加不溶性鹼(例如氫化鈉)。將混合物攪拌約1小時。然後添加化合物ICb於非極性溶劑(例如二甲基甲醯胺)中的溶液。將混合物在約75℃下攪拌過夜並通過TLC監測。第二天冷卻至室溫後，利用酸(例如鹽酸)在約0℃下將反應混合物酸化至約5的pH值，並用水稀釋。分離出水層並用有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取。將分離的有機層用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥，濃縮並通過從乙酸乙酯中結晶來純化，得到呈淺黃色固體狀的化合物IC6。

本公開包括用於製備中間體化合物IC7的程序。將IC6於有機氯化合物(例如亞硫醯二氯(SOCl2))中的混合物加熱至回流持續約1.5小時，冷卻至室溫並直接濃縮。將所得殘餘物溶解在有機溶劑(例如二氯甲烷)中，並且在約0℃下將溶液逐滴添加至化合物IC6和鹼(例如三乙胺)溶解在有機溶劑(例如二氯甲烷)中的混合物中。然後將混合物在約室溫下攪拌若干小時(例如過夜)並通過TLC監測。第二天，用水淬滅反應混合物並且用有機溶劑(例如二氯甲烷)萃取分離的水層。將合併的有機層用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥並濃縮。通過矽膠柱色譜法(PE:EA＝2:1混合物)純化粗物質，得到呈白色固體狀的化合物IC7。

本公開包括用於製備中間體化合物IC10的程序。向IC7和鈀配體(例如雙(頻哪醇根基)二硼)、有機溶劑(例如二噁烷)和弱鹼(例如乙酸鉀)的溶液中添加鈀(II)催化劑(例如，[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(Pd(dppf)Cl2))。將所得混合物加熱至約95℃。在回流約3小時後，用水稀釋反應物。用極性溶劑(例如乙酸乙酯)萃取水層。將合併的有機層用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥並濃縮，得到化合物IC9，其不經純化即用於下一步驟。將粗化合物IC9再次溶解在非極性溶劑(例如甲苯和3-溴-4-甲醯基吡啶)中，並且添加鈀(II)催化劑(例如[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(Pd(dppf)Cl2))、弱鹼(例如碳酸鈉(Na2CO3))。將混合物加熱至約95℃。在回流約5小時後，用水稀釋反應物。分離出水層並用極性溶劑(例如乙酸乙酯)萃取，用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥並濃縮。通過矽膠柱色譜法純化粗物質並且隨後重結晶，得到呈灰白色粉末狀的IC10。

本公開包括用於製備化合物AC6的程序。向溶解在醇性溶劑(例如甲醇)和第二有機溶劑(例如四氫呋喃)中的IC10溶液中添加還原劑(例如硼氫化鈉)。將混合物在室溫下攪拌約30分鐘。用冰水稀釋反應物，並且利用酸(例如鹽酸)將反應混合物的pH調節至約6的pH值。分離出水層並用有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取。分離出有機層並用鹽溶質(例如鹽水)洗滌並經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥並濃縮。將粗物質重結晶，獲得呈白色固體狀的AC6。

方案5：AC14的製備

本公開包括用於製備中間體化合物IC11的程序。將AC6甲矽烷氯(例如叔丁基二甲基甲矽烷氯(TBSCl))、催化劑(例如二甲基氨基吡啶(DMAP))和弱鹼(例如咪唑)於有機溶劑(例如二氯甲烷)中的混合物在約25℃下攪拌約2小時。通過TLC監測反應。然後用水淬滅混合物。分離出水層並用極性有機溶劑(例如二氯甲烷)萃取。將合併的有機層用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥，濃縮並通過矽膠柱色譜法純化，獲得呈白色固體狀的化合物IC11。

本公開包括用於製備中間體化合物IC12的程序。向IC11溶解在有機溶劑(例如二氯甲烷)中的溶液中添加氧化劑(例如3-氯過苯甲酸(m-CPBA))。將反應混合物在約室溫下攪拌約3.5小時，然後用亞硫酸鹽(例如亞硫酸鈉(Na2SO3))淬滅。分離出水層並用有機溶劑(例如二氯甲烷)萃取。將合併的有機層用鹼(例如碳酸鈉)、鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥並濃縮，獲得IC12，其不經進一步純化即使用。

本公開包括用於製備化合物AC14的程序。向IC12於有機溶劑(例如四氫呋喃)中的溶液中添加四丁基氟化銨溶液。將混合物在約室溫下攪拌約15分鐘。通過TLC監測反應進程。用水稀釋反應混合物。用有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取水層。將合併的有機層用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥，濃縮並通過製備型薄層色譜法純化，獲得呈白色固體狀的AC14。

方案6：AC24的製備

本公開包括用於製備中間體化合物ICb的程序。向化合物ICa於醇性溶劑(例如甲醇)中的溶液中添加催化劑如細粒固體複合物(例如，鎳-鋁合金如雷尼鎳)。將反應混合物在約室溫下攪拌若干小時(例如過夜)。第二天，通過過濾除去固體，並用極性溶劑(例如甲醇)洗滌。減壓濃縮透明濾液溶液，獲得呈黃色油狀的化合物ICb。

本公開包括用於製備中間體化合物IC2的程序。將IC1於有機氯化合物(例如亞硫醯二氯(SOCl2))中的溶液回流約1.5小時，然後濃縮，獲得粗製乙醯氯中間體。在約0℃下，向化合物ICb、鹼(例如三乙胺)於有機溶劑(例如二氯甲烷)中的溶液中添加先前製備的溶解在有機溶劑(例如二氯甲烷)中的乙醯氯中間體。在約室溫下攪拌若干小時(例如過夜)後，用水稀釋反應物。分離出水層並用有機溶劑(例如二氯甲烷)萃取。將合併的有機層用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥，濃縮並溼磨，獲得呈白色固體狀的IC2。

本公開包括用於製備中間體化合物IC3的程序。在約室溫下向醇(例如環丙烷甲醇)於非極性非質子性溶劑(例如二甲基甲醯胺)中的溶液中添加不溶性鹼(例如氫化鈉)。攪拌約1小時後，將反應混合物冷卻至約0℃，並添加溶解在非極性非質子性溶劑(例如二甲基甲醯胺)中的化合物IC2。在約室溫下攪拌若干小時(例如過夜)後，用水淬滅反應。分離出水層並用有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取。將合併的有機層用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥，濃縮並溼磨，獲得呈白色固體狀的IC3。

本公開包括用於製備中間體化合物IC13的程序。向IC3和硼酸(例如(4-甲醯基噻吩-3-基)硼酸)溶解在非極性溶劑(例如甲苯)中的溶液中添加鹼(例如碳酸鈉)和鈀(II)催化劑(例如[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(Pd(dppf)Cl2))。然後將反應混合物加熱至約90℃，並攪拌若干小時(例如過夜)。第二天，用水淬滅反應。用極性有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取水層。將合併的有機層用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥並濃縮，得到粗產物，通過製備型薄層色譜法純化，獲得呈白色固體狀的IC13。

本公開包括用於製備化合物AC24的程序。向IC13溶解在第一有機溶劑(例如四氫呋喃)和第二有機溶劑(例如甲醇)中的溶液中添加還原劑(例如硼氫化鈉)。攪拌約30分鐘後，通過冷水淬滅反應並且利用酸(例如鹽酸)將反應混合物的pH調節至5的pH值。再攪拌15分鐘後，分離出水層並用極性溶劑(例如乙酸乙酯)萃取。將合併的有機層用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥並濃縮，得到呈白色固體狀的AC24。

方案7：AC25的製備

本公開包括用於製備中間體化合物IC14的程序。向化合物IC3和硼酸(例如(2-甲醯基噻吩-3-基)硼酸)於非極性溶劑(例如甲苯)中的溶液中添加鹼(例如碳酸鈉)和鈀(II)催化劑(例如[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(Pd(dppf))。然後將反應加熱至約90℃，並攪拌若干小時(例如過夜)。第二天，用水淬滅反應混合物。分離出水層並用有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取。將合併的有機層用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥並濃縮，得到粗產物，通過製備型薄層色譜法純化，獲得呈白色固體狀的IC14。

本公開包括用於製備化合物AC25的程序。向化合物IC14溶解在第一有機溶劑(例如四氫呋喃)和第二有機溶劑(例如甲醇)中的溶液中添加還原劑(例如硼氫化鈉)。攪拌約30分鐘後，用冷水淬滅反應並且然後利用酸(例如鹽酸)將反應混合物的pH調節至約5的pH值。再攪拌約15分鐘後，將反應混合物分溶並分離水層並用極性有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取。將合併的有機層用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥並濃縮，得到呈白色固體狀的IC14。

方案8：AC26的製備

本公開包括用於製備中間體化合物IC15的程序。向化合物IC3和硼酸(例如(3-甲醯基噻吩-2-基)硼酸)溶解在非極性溶劑(例如甲苯)中的溶液中添加鹼(例如碳酸鈉)和鈀(II)催化劑(例如[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(Pd(dppf)Cl2))。然後將反應加熱至約90℃，並攪拌若干小時(例如過夜)。第二天，用水淬滅反應。分離出水層並用極性溶劑(例如乙酸乙酯)萃取。將合併的有機層用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥並濃縮，得到粗產物，通過製備型薄層色譜法純化，獲得呈白色固體狀的IC15。

本公開包括用於製備化合物IC15.AC26的程序。

向化合物IC15溶解在第一有機溶劑(例如四氫呋喃)和第二有機溶劑(例如甲醇)中的溶液中添加還原劑(例如硼氫化鈉)。攪拌約30分鐘後，用冷水淬滅反應混合物並利用(例如鹽酸)將反應物的pH調節至約5的pH值。再攪拌約15分鐘後，使反應混合物分溶。用有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取水層。將合併的有機層用鹽溶質(例如鹽水)洗滌，經乾燥劑(例如硫酸鈉)乾燥並濃縮，得到呈白色固體狀的AC26。

調節酶活性的方法

本發明的化合物充當線粒體醛脫氫酶-2(ALDH2)活性的調節劑。ALDH2激動劑可用於治療和/或預防多種病症，包括酒精相關疾病和病症、癌症和範可尼貧血。ALDH2激動劑也可用於降低受試者中的化合物如乙醇、甲醇、乙二醇單甲醚、聚氯乙烯、外源醛和生源醛的水平。ALDH2激動劑也可用於降低受試者中當攝入、吸收或吸入時產生ALDH2的醛底物的化合物的水平。ALDH2拮抗劑可用於治療和/或預防病症如癌症，其中所述ALDH2拮抗劑被用作標準癌症療法的輔助劑。ALDH2拮抗劑也可用於治療和/或預防醇中毒。ALDH2拮抗劑也可用於治療和/或預防麻醉品成癮。本發明提供治療方法，其涉及施用主題化合物或主題藥物組合物。

在一些實施方案中，待治療的受試者是人類。在一些實施方案中，有待根據主題方法治療的人類是具有兩個「野生型」ALDH2等位基因者，例如，由兩個野生型ALDH2等位基因編碼的ALDH2在位置487處具有穀氨酸。在其他實施方案中，有待根據主題方法治療的人類是具有一個或兩個「ALDH2*2」等位基因者，例如，由一個或兩個ALDH2等位基因編碼的ALDH2包含賴氨酸作為胺基酸位置487。US 2011/0105602提供胺基酸序列的細節，其以引用的方式併入本文中。E487K多態性是半顯性多態性，並且產生相比於「野生型」ALDH2具有顯著更低酶促活性的ALDH2四聚體。因此，對於ALDH2*2等位基因為雜合或純合的受試者相比於對於「野生型」ALDH2等位基因純合的受試者具有更低的體內ALDH2活性水平。對於ALDH2*2等位基因雜合或純合的受試者預期從本發明化合物的治療中獲益，因為這些受試者中的ALDH2活性水平特別低，並且ALDH2活性水平的任何增加將預期提供治療作用。ALDH2活性的任何增加將有利於治療病狀如缺血性病症，增加這些受試者對硝酸甘油的反應性等。

此外提供ALDH2變體如E487K ALDH2變體在鑑定ALDH2活化劑(激動劑)的篩選方法中的用途。因為E487K ALDH2變體相比於「野生型」ALDH2具有較低酶促活性，所以測試化合物的激動劑活性的讀出更敏感。野生型在本公開中表示為ALDH*1/*1。純合突變等位基因表示為ALDH*2/*2，並且雜合突變等位基因表示為ALDH*1/*2。

在一些實施方案中，調節ALDH2活性的化合物調節ALDH2的脫氫酶活性，例如，所述化合物調節在將醛(例如，外源醛、生源醛或從攝入、吸入或吸收的化合物產生的醛)氧化成相應的酸中的脫氫酶活性。在其他實施方案中，調節ALDH2活性的化合物調節ALDH2的酯酶活性。在其他實施方案中，調節ALDH2活性的化合物調節ALDH2的還原酶活性。例如，ALDH2可以通過其還原酶活性將硝酸甘油轉化成一氧化氮(NO)。

在一些實施方案中，調節ALDH2活性的化合物調節ALDH2例如在將醛(例如，外源醛、生源醛或從攝入、吸入或吸收的化合物產生的醛)氧化成相應的酸中的脫氫酶活性。多種化合物可以產生ALDH2的醛底物。可以產生ALDH2的醛底物的化合物的非限制性實例包括乙醇；多種殺昆蟲劑；工業毒素如乙烯基氯(例如，聚氯乙烯)；和丙酮酸酯。例如，化合物被哺乳動物攝入、吸收(例如，通過皮膚)或吸入並且隨後在哺乳動物中轉化成ALDH2的醛底物。

生源醛包括由哺乳動物產生的醛，例如，是由哺乳動物通過代謝方式產生的。生源醛的非限制性實例包括ω-6多不飽和脂肪酸，例如丙二醛(MDA)；己醛；丙烯醛；乙二醛；丁烯醛；反式-2-壬烯醛；4-氧代-2-壬烯醛；和4-羥基-2-壬烯醛(HNE)(參見例如Ellis,《藥理學和治療學》(Pharmacology&Therapeutics)(2007)115:13；Picklo和Montine(2007)《阿爾茨海默氏病雜誌》(J.Alzheimer’s Dis.)12:185)；3-氨基丙醛(3-AP)，聚胺氧化酶的產物；和酪氨酸、絲氨酸和蘇氨酸的醛產物(參見Wood等,《腦研究》(Brain Res)(2006)1095；190)。

外源醛包括由哺乳動物從所述哺乳動物外部的來源攝入、吸收或吸入的醛。外源醛包括例如甲醛和戊二醛(例如，McGregor等,《藥理學關鍵評論》(Crit.Rev Toxicol)(2006)36:821和Pandey等,《人類與實驗毒理學》(Hum Exp.Toxicol.)(2000)19:360)；氯乙醛(參見例如Richardson等,《突變研究》(Mutat.Research)(2007)636:178)；和香菸煙霧中存在的活性醛(參見Smith等,《吸入毒理學》(Inhal.Toxicol.)(2006)18:667)。

用於研究本發明化合物功效的測定法可使用本領域中已知的方法進行。

使用NAD+作為輔因子，ALDH2催化底物乙醛向乙酸的氧化反應。通過源自NAD+的還原產物NADH的積聚，通過分光光度法在UV波長λ340nm下測量醛脫氫酶(ALDH2)的酶促活性或催化速率。在λ340nm下的吸光度與隨時間產生的NADH量定量呈正比(6.22O.D.單位＝1mmol的NADH，在1-cm寬度標準比色皿中測量)。這種方法在文獻中充分確定[例如Rex等,《酒精臨床實驗研究》(Alcohol Clin.Exp.Res.)9,147(1985)]。

全長野生型人類ALDH2cDNA可購自ATCC(No.MGC-1806.GenBank ID:BC002967)。具18個胺基酸的線粒體轉運信號序列可通過PCR除去並使用標準的分子克隆技術克隆到His標籤載體(pTrcHis)的NheI/HindIII位點中。可以通過定點誘變來獲得含有Asian E487K突變的人類ALDH2*cDNA構建體以產生野生型ALDH2的E487K取代。可設計人類克隆以表達在蛋白質N端具有His標籤的重組蛋白。對於人類ALDH2野生型和ALDH2*2異四聚體的共表達實驗，可將野生型ALDH2基因和ALDH2E487K基因分別插入pETDuet-1載體(Novagen,CA,USA)的兩個多克隆位點中。可將所有載體轉化到BL21大腸桿菌宿主細胞中並在30℃下進行0.5mM IPTG誘導以進行蛋白質表達。可根據製造商的說明(Novagen,USA)使用標準方案來進行通過親和鎳柱(HisTrap,GE Healthy Science,USA)對重組蛋白的純化。

使用NAD+作為輔因子，ALDH2催化底物乙醛向乙酸的氧化反應。可以通過源自NAD+的還原產物NADH的積聚，通過分光光度法在UV波長λ340nm下測量醛脫氫酶(ALDH2)的酶促活性或催化速率。在λ340nm下的吸光度與隨時間產生的NADH量定量呈正比(6.22O.D.單位＝1mmol的NADH，在1-cm寬度標準比色皿中測量)。這種方法在文獻中充分確定[例如Rex等,《酒精臨床實驗研究》(Alcohol Clin.Exp.Res.)9,147(1985)]。

人類ALDH2野生型和ALDH2*2重組突變酶的克隆、表達和純化：全長野生型人類ALDH2cDNA購自ATCC(No.MGC-1806.GenBank ID:BC002967)。具18個胺基酸的線粒體轉運信號序列通過PCR除去並使用標準的分子克隆技術克隆到His標籤載體(pTrcHis)的NheI/HindIII位點中。通過定點誘變來獲得含有Asian E487K突變的人類ALDH2*cDNA構建體以產生野生型ALDH2的E487K取代。設計人類克隆以表達在蛋白質N端具有His標籤的重組蛋白。對於人類ALDH2野生型和ALDH2*2異四聚體的共表達實驗，將野生型ALDH2基因和ALDH2E487K基因分別插入pETDuet-1載體(Novagen,CA,USA)的兩個多克隆位點中。將所有載體轉化到BL21大腸桿菌宿主細胞中並在30℃下進行0.5mM IPTG誘導以進行蛋白質表達。根據製造商的說明(Novagen,USA)使用標準方案來進行通過親和鎳柱(HisTrap,GE Healthy Science,USA)對重組蛋白的純化。

本公開提供用於調節ALDH2活性的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑、酯或前藥。

使用NAD+作為輔因子，ALDH2催化底物乙醛向乙酸的氧化反應。可以通過源自NAD+的還原產物NADH的積聚，通過分光光度法在UV波長λ340nm下測量醛脫氫酶(ALDH2)的酶促活性或催化速率。因為式(I)化合物被視為ALDH2的激動劑或「活化劑」，所以所測量的酶促活性將超過所述酶在其正常活化狀態中的基線酶促活性的100％。隨著所述式(I)化合物的濃度在ALDH存在下從20微摩爾濃度降至0.16微摩爾濃度，對於野生型ALDH2*1/*1和雜合形式ALDH2*1/*2觀測到酶促活性活化的降低。表2示出若干代表性式(I)化合物的各種活性。例如，對於化合物AC1-29，展現在約100-150％範圍內的活性的化合物被指定為+，具有在約150-250％範圍內的活性的化合物被指定為++並且具有大於約250％的活性的化合物被指定為+++(參見表2)。

表2：

線粒體ALDH2的底物

作為線粒體ALDH2底物的化合物的非限制性實例包括：3,4-二羥基苯乙醛(DOPAL)；甲醛；乙醛；丙醛；正丁醛；己醛；庚醛；戊醛；辛醛；癸醛；視黃醛；3-羥基苯甲醛；2,5-二羥基苯甲醛；苯乙醛；3-苯基丙醛(參見例如Want等,(2002)《藥物代謝及處置》(Drug Metabolism and Disposition)30:69)；肉桂醯基和羥基肉桂醯基醛和其衍生物醛(例如對硝基肉桂醛、對(二甲基氨基)肉桂醛、氫化肉桂醛、α-苯基丙醛)；苯甲醛和其衍生物醛(例如2,4-二硝基-苯甲醛、鄰硝基-苯甲醛、對硝基-苯甲醛、對甲基-苯甲醛、間甲基-苯甲醛、對甲氧基-苯甲醛、對(二甲基氨基)-苯甲醛、間甲氧基-苯甲醛、間羥基-苯甲醛、3,4-二甲氧基-苯甲醛、鄰甲氧基-苯甲醛)；萘醛和其衍生物醛(例如5-溴-1-萘醛、5-硝基-1-萘醛、6-[O--(CH2)5--COOH]-2-萘醛、6-(二甲基氨基)-2-萘醛)；香豆素-4-甲醛和其衍生物醛(例如7-乙醯氧基-香豆素-4-甲醛、7-(二甲基氨基)-香豆素-4-甲醛、7-甲氧基-香豆素-4-甲醛、6,7-二甲氧基-香豆素-4-甲醛)；喹啉、喹啉酮甲醛和其衍生物醛(例如喹啉-3-甲醛、7-(二甲基氨基)-2-喹啉酮-4-甲醛、喹啉-4-甲醛、6-甲氧基-2-喹啉酮-4-甲醛)；菲-9-甲醛；吲哚-3-醛、吲哚-3-乙醛；5-甲氧基吲哚-3-甲醛；3-吡啶甲醛；芴-2-甲醛(參見例如Klyosov,(1996)《生物化學》(Biochemstry)35:4457)；4-羥基壬烯醛；丙二醛；3,4-二羥基苯乙醛；和5-羥基吲哚-3-乙醛。還參見例如Williams等,(2005),《分析化學》(Anal.Chem.)77:3383；Marchitti等,(2007),《藥理學研究》(Pharmacol.Rev.)59:125；以及Hoffman和Maser(2007),《藥物代謝研究》(Drug Metab.Rev.)39:87。

ALDH2激動劑

本發明提供ALDH2激動劑(也稱為「活化劑」)；和包含ALDH2激動劑的藥物組合物。ALDH2激動劑可用於治療和/或預防多種病症，包括例如涉及缺血應激的病狀、慢性自由基相關疾病、急性自由基相關疾病、對硝酸甘油不敏感(例如，在心絞痛和心臟衰竭中)、高血壓、糖尿病和骨質疏鬆症。激動劑也可用於酒精濫用、甲醇中毒、乙二醇單甲醚中毒和由於其他外源或生源醛化合物引起的中毒的解毒。

可以容易地確定化合物是否是ALDH2激動劑。ALDH2的脫氫酶活性的測定法是本領域中已知的，並且可以使用任何已知測定法。脫氫酶測定法的實例見於各種出版物中，包括例如Sheikh等,((1997)《生物化學雜誌》(J.Biol.Chem.)272:18817-18822)；Vallari和Pietruszko(1984)《生物化學雜誌》(J.Biol.Chem.)259:4922；和Farres等,((1994)《生物化學雜誌》(J.Biol.Chem.)269:13854-13860)。

本發明提供ALDH2拮抗劑(也稱為「ALDH2抑制劑」)，和包含ALDH2拮抗劑的藥物組合物。在一些實施方案中，ALDH2拮抗劑可用於治療和/或預防酒精成癮。在其他實施方案中，ALDH2拮抗劑增加癌細胞對癌症化療劑的敏感性。因此，在一些實施方案中，ALDH2拮抗劑可用作標準癌症療法的輔助劑，來治療或預防癌症。

可以容易地確定化合物是否是ALDH2拮抗劑。對於ALDH2的測定法是本領域中已知的，並且可以使用任何已知測定法。測定法的實例見於各種出版物中，包括例如Sheikh等,((1997)《生物化學雜誌》(J.Biol.Chem.)272:18817-18822)和Farres等,((1994)《生物化學雜誌》(J.Biol.Chem.)269:13854-13860)。例如，在25℃下在50mM焦磷酸鈉HCl緩衝液(pH 9.0)、100mM磷酸鈉緩衝液(pH 7.4)或50mM磷酸鈉緩衝液(pH 7.4)中測定ALDH2，其中所述緩衝液包括NAD+(例如，0.8mM NAD+或更高，例如1mM、2mM或5mM NAD+)和底物如14μM丙醛。使用分光光度計在340nm下或使用螢光顯微光度計通過螢光增加來監測NAD+減少。可以使用標準分光光度方法，例如通過在340nm下測量煙醯胺腺嘌呤二核苷酸的氧化形式(NAD+)向其還原形式NADH的還原反應來測定酶促活性，如US2005/0171043和WO 2005/057213中所述。在示例性測定法中，在25℃下在0.1NaPPi緩衝液(pH 9.5)、2.4mM NAD+和10mM乙醛(作為底物)中進行反應。通過NAD+向NADH的還原反應在340nm下測量酶促活性，如US 2005/0171043和WO 2005/057213中所述。可選地，NADH產生可以與消耗NADH並提供可檢測信號的另一種酶促反應結合。這種酶促反應的實例是基於心肌黃酶的反應，其將刃天青(resazurin)還原成其氧化螢光化合物試滷靈(resorufin)，如US 2005/0171043和WO 2005/057213中所述。在590nm下檢測螢光試滷靈對於ALDH2酶促活性的任何變化提供放大和更靈敏的信號。

對於脫氫酶活性的測定法

作為脫氫酶活性測定法的實例，在25℃下在50mM焦磷酸鈉HCl緩衝液(pH 9.0)、100mM磷酸鈉緩衝液(pH 7.4)或50mM磷酸鈉緩衝液(pH 7.4)中測定ALDH2，其中所述緩衝液包括NAD+(例如，0.8mM NAD+或更高，例如1mM、2mM或5mM NAD+)和醛底物如14μM丙醛。使用分光光度計在340nm下或使用螢光顯微光度計通過螢光增加來監測NAD+減少。可以使用標準分光光度方法，例如通過在340nm下測量煙醯胺腺嘌呤二核苷酸的氧化形式(NAD+)向其還原形式NADH的還原反應來測定酶促活性，如US 2005/0171043和WO 2005/057213中所述。在示例性測定法中，在25℃下在0.1NaPPi緩衝液(pH 9.5)、2.4mM NAD+和10mM乙醛(作為底物)中進行反應。通過NAD+向NADH的還原反應在340nm下測量酶促活性，如US 2005/0171043和WO 2005/057213中所述。可選地，NADH產生可以與消耗NADH並提供可檢測信號的另一種酶促反應結合。這種酶促反應的實例是基於心肌黃酶的反應，其將刃天青還原成其氧化螢光化合物試滷靈，如US 2005/0171043和WO 2005/057213中所述。在590nm下檢測螢光試滷靈對於ALDH2酶促活性的任何變化提供放大和更靈敏的信號。

可以使用對於酯酶活性的任何已知測定法來確定化合物是否增加ALDH2的酯酶活性。例如，可以通過在室溫下在外加NAD+的不存在或存在下利用800μM乙酸對硝基苯酯作為底物在25mM N,N-雙(2-羥基乙基)-2-氨基乙磺酸(BES)(pH 7.5)中在400nm下監測對硝基苯酚形成速率來測定ALDH2的酯酶活性。可以使用硝基苯酚在400nm下為16mM-1cm-1的pH依賴性摩爾消光係數。參見例如Larson等,(2007)《生物化學雜誌》(J.Biol.Chem.)282:12940。可以通過利用1mM乙酸對硝基苯酯作為底物在50mM Pipes(pH 7.4)中在400nm下測量對硝基苯酚形成速率來測定ALDH2的酯酶活性。可以使用對硝基苯酚酯在400nm下為18.3×103M-1cm-1的摩爾消光係數來計算其形成速率。參見例如Ho等,(2005)《生物化學(Biochemistry)》44:8022。

可以使用對於還原酶活性的任何已知測定法來測定化合物是否增加ALDH2的還原酶活性。可以通過使用薄層色譜法(TLC)或液相閃爍光譜方法使用放射性標記的底物測量二硝酸1,2-甘油酯和二硝酸1,3-甘油酯形成速率來測定ALDH2的還原酶活性。例如，在ALDH2存在下將0.1mM或1mM GTN(三硝酸甘油酯)與含有100mM KPi(pH 7.5)、0.5mM EDTA、1mM NADH、1mM NADPH的測定混合物(1ml)一起溫育。在37℃下溫育約10分鐘至約30分鐘後，停止反應並且用3×4ml醚萃取GTN和其代謝物並匯集，並且通過氮氣流蒸發溶劑。對於後續TLC分離和閃爍計數，最終體積在乙醇中保持為小於100ml。參見例如Zhang和Stamler(2002)《美國國家科學院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sci.)USA 99:8306。

角叉菜膠炎性疼痛模型

使小鼠適應菌落室並維持在12小時/12小時光照/黑暗循環。為了誘導足底對觸覺刺激的敏感性，向小鼠的後爪足底施用角叉菜膠的單次注射並且通過向後爪的足底表面施加上升彎曲力的Von Frey纖維絲來測量從機械刺激的回縮。

將式(I)化合物溶解並在角叉菜膠施用之前和在角叉菜膠注射之後皮下(sc)或口服(po)施用。在適當時通過方差分析(ANOVA)並接著與費舍爾檢驗(Fisher Test)進行事後比較來分析數據。

四氯化碳誘導的纖維化模型

使小鼠適應菌落室並維持在12小時/12小時光照/黑暗循環。在適應期後，向小鼠施用CCl4持續8周的總時期以建立肝纖維化。從第0天起，向除假處理對照組中的動物之外的所有動物經腹膜內(i.p.)注射含CCl4的橄欖油，每周兩次，持續8周的總時期。在第3周結束時，根據ALT和AST值和其次根據體重將CCl4處理的小鼠隨機分成4組。從第4周開始，相應地用媒介物或測試化合物處理動物。每次給藥是從CCl4施用之前施用的。

收集血樣來製備血清樣本以用於血液化學分析(例如，ALT和AST血清水平、TGF-β水平)。收集整個肝臟組織並切成片以用於組織病理學和免疫組織化學(IHC)分析。將左葉和中葉分別快速冷凍在液氮中並儲存在-80℃下以用於進一步分析。

外周動脈疾病(PAD)的肢體缺血模型

將小鼠麻醉並且從手術區域完全除去毛髮。縱向切口是沿著股血管的腹股溝摺痕並且小心地解剖股動脈與靜脈之間的結締組織片。在股動脈與靜脈之間做個切口並且使用三重手術結閉合股動脈。然後封閉切口。

利用式(I)化合物處理在永久股動脈閉合下的動物並且在代謝室中使用跑臺運動在小鼠中評估所述化合物對功能能力的影響。

通過血清乳酸測定法測量VO2最大值和呼吸交換率以及無氧閾值。此外評估嵴規律性、細胞器內縮合、線粒體膜不規則性和相關空泡化/溶酶體。通過透射電子顯微鏡(TEM)測量線粒體損傷的生物標記物，包括具有活性醛(即4-HNE)和線粒體結構的線粒體蛋白加合物。

此外通過測量線粒體膜電位和呼吸鏈複合物活性以及使用Clark電極測量骨骼肌O2消耗量來評估線粒體功能。此外，通過LM和TEM評估ALDH2活性的藥理學或遺傳調節對肌肉結構的影響，利用螢光毒傘素評估肌原纖維內的肌動蛋白絲的片段化並利用TUNEL/Caspase-3染色評估細胞凋亡；並且使用電刺激和力微傳感器在體外對腓腸肌的收縮功能進行定量。

定義

術語「本發明的化合物」是指根據式(I)、式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)和式(Id)的化合物。

關於可用於本發明中的化合物，以下術語可適用：如本文所用，「烷基」旨在包括具有指定數目的碳原子的支鏈和直鏈的飽和脂族烴基團。例如，C1-C6烷基旨在包括C1、C2、C3、C4、C5和C6烷基基團。烷基的實例包括(但不限於)甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基和正己基。「烷基」還包括具有氧、氮、硫或磷原子代替一個或多個烴主鏈碳原子的烷基基團。在某些實施方案中，直鏈或支鏈的烷基在其主鏈中具有六個或更少的碳原子(例如，對於直鏈為C1-C6，對於支鏈為C3-C6)，並且在另一個實施方案中，直鏈或支鏈的烷基具有四個或更少的碳原子。同樣，環烷基在其環結構中具有三個至八個碳原子，並且在另一個實施方案中，環烷基在環結構中具有五個或六個碳。

如本文所用，術語「被取代的」是指在指定原子上的任何一個或多個氫被來自指定群組的選擇代替，其條件是不超過所述指定原子的正常價態，並且取代產生穩定化合物。當取代基是酮基(即，＝O)時，則原子上的2個氫被代替。酮基取代基不存在於芳族部分上。如本文所用的環雙鍵是在兩個相鄰的環原子之間形成的雙鍵(例如，C＝C、C＝N或N＝N)。

「被取代的烷基」是指具有置換烴主鏈的一個或多個碳上的一個或多個氫的取代基的烷基部分。這些取代基可以包括例如烷基、烯基、炔基、滷素、羥基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸酯基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸酯基、膦酸酯基、次膦酸酯基、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、醯基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨甲醯基和脲基)、脒基、亞氨基、巰基、烷基硫基、芳基硫基、硫代羧酸酯基、硫酸酯基、烷基亞硫醯基、磺酸根基、氨磺醯基、磺醯氨基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環基、烷基芳基、或芳族或雜芳族部分。環烷基可例如用上述取代基進一步取代。「烷基芳基」或「芳烷基」部分是被芳基取代的烷基(例如，苯基甲基(苄基))。

「烯基」包括在長度和可能的取代上與上述烷基類似，但含有至少一個雙鍵的不飽和脂族基團。例如，術語「烯基」包括直鏈烯基基團(例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基)、支鏈烯基基團、環烯基(例如脂環族)基團(例如，環丙烯基、環戊烯基、環己烯基、環庚烯基、環辛烯基)、被烷基或烯基取代的環烯基基團，和被環烷基或環烯基取代的烯基基團。術語「烯基」還包括烯基基團，其包括置換一個或多個烴主鏈碳的氧、氮、硫或磷原子。在某些實施方案中，直鏈或支鏈的烯基基團在其主鏈中具有六個或更少的碳原子(例如，對於直鏈為C2-C6，對於支鏈為C3-C6)。同樣，環烯基基團可在其環結構中具有三個至八個碳原子，並且在一個實施方案中，環烯基基團在環結構中具有五個或六個碳。術語「C1-C6」包括含有兩個至六個碳原子的烯基基團。術語「C3-C6」包括含有三個至六個碳原子的烯基基團。

「被取代的烯基」是指具有置換一個或多個烴主鏈碳原子上的一個或多個氫的取代基的烯基部分。這些取代基可以包括例如烷基基團、炔基基團、滷素、羥基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸酯基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸酯基、膦酸酯基、次膦酸酯基、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、醯基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨甲醯基和脲基)、脒基、亞氨基、巰基、烷基硫基、芳基硫基、硫代羧酸酯基、硫酸酯基、烷基亞硫醯基、磺酸根基、氨磺醯基、磺醯氨基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環基、烷基芳基、或芳族或雜芳族部分。

本發明旨在包括在本發明化合物中存在的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子數但不同質量數的那些原子。作為一般實例並且不加限制，氫的同位素包括氚和氘，並且碳的同位素包括C-13和C-14。

當任何變量(例如，RC)在化合物的任何組分或式中出現一次以上時，其在每次出現時的定義獨立於其在每次其他出現時的定義。因此，例如，如果顯示基團被0-2個RC部分取代，則所述基團可任選地被至多兩個RC部分取代並且在每次出現時獨立地選自RC的定義。此外，取代基和/或變量的組合是允許的，但只有當這些組合產生穩定化合物時。

當與取代基連接的鍵顯示跨越連接環中兩個原子的鍵時，則這種取代基可鍵合至環中的任何原子。當列出取代基而不指示這種取代基是通過哪個原子鍵合至給定式的化合物的其餘部分時，則這種取代基可通過所述取代基中的任何原子鍵合。取代基和/或變量的組合是允許的，但只有當這些組合產生穩定化合物時。

含有氮的本發明化合物可以通過用氧化劑(例如，3-氯過氧苯甲酸(m-CPBA)和/或過氧化氫)處理而轉化成N-氧化物以得到本發明的其他化合物。因此，所有所示和所要求保護的含氮化合物當被價態和結構允許時被視為包括如所示的化合物和其N-氧化物衍生物(其可以指定為N-O或N+-O-)。此外，在其他情況下，本發明化合物中的氮可以轉化成N-羥基或N-烷氧基化合物。例如，可以通過利用氧化劑如m CPBA將母體胺氧化來製備N-羥基化合物。所有所示和所要求保護的含氮化合物當被價態和結構允許時也被視為涵蓋所示的化合物和其N-羥基(即N-OH)和N-烷氧基(即N-OR，其中R是被取代或未被取代的C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6炔基、C3-14碳環或3-14元雜環)衍生物。

如本文所用，術語「雜環」或「雜環的」旨在是指任何穩定的單環、雙環或三環，它是飽和、不飽和或芳族的並且包含碳原子和一個或多個環雜原子，例如，1或1-2或1-3或1-4或1-5或1-6個雜原子，其獨立地選自氮、氧和硫。雙環或三環雜環可具有位於一個環中的一個或多個雜原子，或者所述雜原子可位於一個以上的環中。氮和硫雜原子可任選地被氧化(即，N→O和S(O)p，其中p＝1或2)。當環中包括氮原子時，它是N或NH，取決於它是否連接至環中的雙鍵(即，如果需要的話存在氫以維持氮原子的三價)。氮原子可為被取代或未被取代的(即N或NR，其中R是H或如所定義的另一個取代基)。雜環可在任何雜原子或碳原子連接至其側基，其產生穩定結構。本文所述的雜環可在碳上或在氮原子上被取代，只要所得化合物是穩定的。雜環中的氮可任選地被季銨化。在一個實施方案中，當雜環中的S和O原子的總數超過1時，則這些雜原子不彼此相鄰。在雜環的定義中也包括橋接環。當一個或多個原子(即，C、O、N或S)連接兩個不相鄰碳或氮原子時，存在橋接環。橋包括(但不限於)一個碳原子、兩個碳原子、一個氮原子、兩個氮原子和碳-氮基團。應注意，橋總是將單環轉化成三環。當環是橋接時，對於環所述的取代基也可存在於橋上。還包括螺環和稠環。

雜環的實例包括(但不限於)吖啶基、氮雜環辛四烯基、苯並咪唑基、苯並呋喃基、苯並硫代呋喃基、苯並噻吩基、苯並噁唑基、苯並噁唑啉基、苯並噻唑基、苯並三唑基、苯並四唑基、苯並異噁唑基、苯並異噻唑基、苯並咪唑啉基、咔唑基、4aH咔唑基、咔啉基、色滿基、色烯基、噌啉基、十氫喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氫呋喃並[2,3b]四氫呋喃、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚烯基、吲哚啉基、吲嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、靛紅醯基(isatinoyl)、異苯並呋喃基、異色滿基、異吲唑基、異吲哚啉基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異噁唑基、亞甲基二氧苯基、嗎啉基、萘啶基、八氫異喹啉基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,2,4-噁二唑5(4H)-酮、噁唑烷基、噁唑基、羥吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、酚黃素基(phenoxathinyl)、吩噁嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮、哌啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、噠嗪基、吡啶並噁唑、吡啶並咪唑、吡啶並噻唑、吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H喹嗪基、喹喔啉基、奎寧環基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、四唑基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻嗯基、噻唑基、噻吩基、噻吩並噻唑基、噻吩並噁唑基、噻吩並咪唑基、苯硫基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基和呫噸基。

術語「羥基」包括具有-OH或-O-的基團。另外，本發明化合物，例如所述化合物的鹽，可以水合或非水合(無水)形式或者以與其他溶劑分子的溶劑化物形式存在。水合物的非限制性實例包括單水合物、二水合物等。溶劑化物的非限制性實例包括乙醇溶劑化物、丙酮溶劑化物等。

「溶劑化物」是指含有化學計算或非化學計算量的溶劑的溶劑加成形式。一些化合物具有將固定摩爾比率的溶劑分子捕集在結晶固體狀態中的趨勢，從而形成溶劑化物。如果溶劑是水，則所形成的溶劑化物是水合物，當溶劑是醇時，所形成的溶劑化物是醇化物。水合物是通過一個或多個水分子與一種物質組合形成的，其中水保持其作為H2O的分子狀態，這種組合能夠形成一種或多種水合物。

「互變異構體」是指其結構在原子排列上顯著不同、但以容易和快速的平衡存在的化合物。應理解，本發明化合物可被描繪為不同的互變異構體。此外應理解，當化合物具有互變異構形式時，所有互變異構形式預期在本發明的範圍內，並且所述化合物的命名不排除任何互變異構形式。本發明的一些化合物可以互變異構形式存在，其也預期涵蓋在本發明的範圍內。

本發明的化合物和鹽可以若干互變異構形式存在，包括烯醇和亞胺形式，以及酮和烯胺形式和幾何異構體以及其混合物。所有這些互變異構形式都包括在本發明的範圍內。互變異構體以互變異構組在溶液中的混合物形式存在。在固體形式中，通常一種互變異構體佔主導。即使可描述一種互變異構體，本發明包括本發明化合物的所有互變異構體。

互變異構體是平衡存在的兩種或更多種結構異構體中的一種並且容易從一種互變異構形式轉化成另一種互變異構形式。這種反應導致氫原子的正式遷移，伴隨著相鄰共軛雙鍵的切換。在其中可能存在互變異構的溶液中，將達到互變異構體的化學平衡。互變異構體的確切比率取決於若干因素，包括溫度、溶劑和pH。通過互變異構可相互轉換的互變異構體的概念被稱為互變異構現象。

「受試者」包括哺乳動物，例如，人類、伴侶動物(例如，狗、貓、鳥等)、農場動物(例如，牛、綿羊、豬、馬、家禽等)和實驗動物(例如，大鼠、小鼠、豚鼠、鳥等)。在一個實施方案中，所述受試者是人類。

如本文所用，短語「藥學上可接受的」是指在正確醫學判斷範圍內適合用於與人類和動物的組織接觸而沒有過度的毒性、刺激性、過敏反應或者其他問題或併發症並且與合理的效益/風險比相稱的那些化合物、材料、組合物、載體和/或劑型。

如本文所用，術語「線粒體醛脫氫酶-2」或「ALDH2」是指在NAD+依賴性反應中將醛(例如，外源醛、生源醛或從攝入、吸入或吸收的化合物產生的醛)氧化成其相應的酸的酶。例如，ALDH2將從化合物(例如，所攝入、吸收、吸入或者在正常代謝期間產生的毒性化合物)分解產生的醛氧化。

「治療」包括導致病狀、疾病、病症等改善的任何作用，例如，減輕、降低、調節或消除。疾病狀態的「治療」包括：(1)抑制疾病狀態，即阻止疾病狀態或其臨床症狀的發展；(2)減輕疾病狀態，即造成疾病狀態或其臨床症狀的暫時或永久消退；或(3)降低或減輕疾病狀態的症狀。如本文所用，「治療」描述出於抗擊疾病、病狀或病症的目的對患者進行的管理和護理，並且包括施用本發明化合物或其藥學上可接受的鹽、前藥、代謝物、多晶型物或溶劑化物，以減輕疾病、病狀或病症的症狀或併發症，或消除所述疾病、病狀或病症。術語「治療」還可包括在體外或動物模型中對細胞的處理。

「預防」包括在可能暴露於或傾向於疾病狀態、但尚未經歷或顯示疾病狀態的症狀的受試者中例如造成疾病狀態的臨床症狀不發展的任何作用。本發明的化合物或其藥學上可接受的鹽、代謝物、多晶型物或溶劑化物還可以用於預防疾病、病狀或病症，或者出於這些目的用於鑑定合適的候選者。如本文所用，「預防」描述降低或消除所述疾病、病狀或病症的症狀或併發症的發作。

如本文所用，術語「減輕」意在描述降低病症的徵象或症狀的嚴重程度的過程。重要的是，徵象或症狀可以減輕而不消除。在一個優選的實施方案中，施用本發明的藥物組合物導致徵象或症狀的消除，但是消除不是所要求的。有效劑量預期降低徵象或症狀的嚴重程度。例如，如果癌症的嚴重程度在多個位置中的至少一個內有所降低，則所述病症如癌症(其可以發生在多個位置)的徵象或症狀減輕。

如本文所用，術語「嚴重程度」意在描述癌症從癌前或良性狀態轉化成惡性狀態的可能性。可選地或另外，嚴重程度意在描述例如根據TNM系統(為國際抗癌聯盟(International Union Against Cancer，UICC)和美國癌症聯合委員會(American Joint Committee on Cancer，AJCC)所接受)或通過其他本領域公認方法的癌症階段。癌症階段是指基於例如如下因素的癌症程度或嚴重程度：原發性腫瘤的位置、腫瘤大小、腫瘤數目和淋巴結牽連(癌症擴散到淋巴結)。可選地或另外，嚴重程度意在描述根據本領域公認方法的腫瘤等級(參見美國國家癌症研究所(National Cancer Institute)，www.cancer.gov)。腫瘤等級是用於根據它們在顯微鏡下看起來多麼異常和腫瘤可能生長和擴散得多麼快來將癌細胞分類的系統。當確定腫瘤等級時考慮許多因素，包括細胞的結構和生長模式。用於確定腫瘤等級的具體因素隨著每種類型的癌症而改變。嚴重程度也描述組織學等級(也稱為分化)，這是指有多少腫瘤細胞類似於同一組織類型的正常細胞(參見美國國家癌症研究所，www.cancer.gov)。此外，嚴重程度描述核等級，這是指腫瘤細胞中的核的尺寸和形狀以及分裂的腫瘤細胞的百分比(參見美國國家癌症研究所，www.cancer.gov)。

在本發明的另一個方面，嚴重程度描述腫瘤已經分泌生長因子，降解細胞外基質，變得血管化，失去與並置組織的粘附或轉移的程度。此外，嚴重程度描述原發性腫瘤已經轉移的位置數目。最後，嚴重程度包括治療不同類型和位置的腫瘤的難度。例如，不能手術的腫瘤，更大地接近多個身體系統的那些癌症(血液學和免疫學腫瘤)，和最抵抗傳統治療的那些被視為最嚴重的。在這些情況下，延長受試者的預期壽命和/或減少疼痛，降低癌細胞的比例或將細胞限制於一種系統，和改善癌症階段/腫瘤等級/組織學等級/核等級，被視為減輕癌症的徵象或症狀。

如本文所用，術語「症狀」被定義為疾病、疾患、損傷的跡象，或者身體中某些方面不正常。症狀被經歷症狀的個體感覺或注意到，但可能不容易被其他人注意到。其他人被定義為非健康護理專業人員。

如本文所用，術語「徵象」也定義為指示身體中某些方面不正常。但徵象被定義為可以被醫生、護士或其他健康護理專業人員看出的事情。

如本文所用，「正常細胞」是不能被歸類為「細胞增殖性病症」的一部分的細胞。正常細胞缺乏未經調節或異常的生長，或兩者，其可能導致不希望的病狀或疾病的發展。優選地，正常細胞具有正常起作用的細胞周期檢查點控制機制。

如本文所用，「接觸細胞」是指其中所關注的化合物或其他組合物與細胞直接接觸，或者足夠接近以在細胞中誘導所需生物作用的狀況。

如本文所用，「候選化合物」是指本發明的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、前藥、代謝物、多晶型物或溶劑化物，其已經或將要在一個或多個體外或體內生物測定法中測試，以確定所述化合物是否可能在細胞、組織、系統、動物或人類中引起被研究人員或臨床醫生所尋求的所需生物學或醫學反應。候選化合物是本發明的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、前藥、代謝物、多晶型物或溶劑化物。所述生物學或醫學反應可以是癌症的治療。所述生物學或醫學反應可以是細胞增殖性病症的治療或預防。所述生物學反應或作用還可包括在體外或在動物模型中出現的細胞增殖或生長的變化，以及可在體外觀測到的其他生物變化。體外或體內生物學測定法可以包括(但不限於)酶促活性測定法、電泳遷移率變動測定法、報告基因測定法、體外細胞活力測定法和本文所述的測定法。

如本文所用，「單一療法」是指向有需要的受試者施用單一活性或治療性化合物。優選地，單一療法將涉及施用治療有效量的活性化合物。例如，向需要癌症治療的受試者施用利用一種本發明化合物或其藥學上可接受的鹽、前藥、代謝物、類似物或衍生物的癌症單一療法。單一療法可與組合療法形成對照，在組合療法中施用多種活性化合物的組合，優選地其中所述組合的每種組分以治療有效量存在。在一個方面，利用本發明化合物或其藥學上可接受的鹽、前藥、代謝物、多晶型物或溶劑化物的單一療法相比於組合療法在誘導所需生物作用中更有效。

術語「ALDH2」涵蓋來自多個物種的ALDH2。來自多個物種的ALDH2的胺基酸序列可公開獲得。例如，人類ALDH2胺基酸序列在GenBank登錄號AAH02967和NP_000681下存在；小鼠ALDH2胺基酸序列在GenBank登錄號NP_033786下存在；並且大鼠ALDH2胺基酸序列在GenBank登錄號NP_115792下存在。如本文所用的術語「ALDH2」也涵蓋保持ALDH2酶促活性的片段、融合蛋白和變體(例如，具有一個或多個胺基酸取代、添加、缺失和/或插入的變體)。特定酶促活性ALDH2變體、片段、融合蛋白等可以通過改變本文所述的方法來驗證。ALDH2變體的一個實例是在人類ALDH2的胺基酸位置487處或在對應於人類ALDH2的胺基酸487的位置處包含Glu-Lys取代的ALDH2多肽。這種突變被稱為「E487K突變」；「E487K變體」；或「Glu504Lys多態性」。參見例如Larson等,(2005)《生物化學雜誌》(J.Biol.Chem.)280:30550；和Li等,(2006)《臨床研究雜誌》(J.Clin.Invest.)116:506。ALDH2變體保持相應野生型ALDH2酶的酶促活性的至少約1％。

出於促進對本文所述的實施方案的理解的目的，使用對優選實施方案和特定語言的提及來對其進行描述。本文使用的術語僅出於描述特定實施方案的目的，而不旨在限制本發明的範圍。除非上下文另外明確說明，否則如本公開中通篇使用的單數形式「一」和「所述」包括複數個提及物。因此，例如，對「組合物」的提及包括多種這樣的組合物，以及單一組合物，並且對「治療劑」的提及是對一種或多種治療劑和/或醫藥劑以及本領域技術人員已知的其等效物等的提及。除非另外說明，否則本文使用的所有百分比和比率是以重量計。

以下實施例對於本發明的方法和組合物是說明性而非限制性的。在本公開的化合物的合成和使用中通常遇到並且為本領域技術人員所顯而易見的多種條件和參數的其他合適的修改和改變在本公開的精神和範圍內。

「Alda-1」是指具有下列結構的N-(1,3-苯並二氧戊環-5-基甲基)-2,6-二氯苯甲醯胺：

實施例

實施例1：用於製備苄胺的一般程序：

本發明中使用的苄胺可購得或者如上文方案中所述來製備。所述反應是基於市售原料，例如1)苯甲腈；2)苯甲醛；3)苄基氯；和4)苯甲酸。

實施例2：用於製備式(II)化合物的一般程序：

式(II)化合物可以使用下文在方案1和2中所示的兩種不同的反應順序來製備。

方案1

實施例2.1：根據方案1製備化合物AC1

實施例2.1.1：(3-氟-4-甲氧基苯基)甲胺(ICb)的製備

向3-氟-4-甲氧基苯甲腈ICa(68.0g，450mmol，1當量)於甲醇(2L)中的溶液中添加雷尼鎳(Raney,Ni；70.0g)。在添加完成後，將反應混合物在室溫下攪拌過夜。通過過濾除去所形成的固體並用甲醇洗滌。減壓濃縮透明濾液，獲得呈黃色油狀的(3-氟-4-甲氧基苯基)甲胺(62.8g，90％)。

實施例2.1.2：5-溴-2-氯-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)煙醯胺(IC2)的製備

將IC1(40g，0.169mol，1當量)於亞硫醯二氯(SOCl2；400mL)中的溶液回流1.5小時，然後濃縮以獲得粗乙醯氯中間體，將其溶解在二氯甲烷(DCM；100mL)中並且隨後添加至ICb(28.8g，0.186mol，1.1當量)和三乙胺(TEA；51.35g，0.508mmol，3當量)溶解在二氯甲烷(600mL)中的冷卻(0℃)溶液中。在室溫下攪拌過夜後，向反應混合物中添加水並且使所得混合物的各層分溶。分離水層並用二氯甲烷萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉(Na2SO4)乾燥，濃縮並用PE:EA＝10:1溼磨，獲得呈白色固體狀的5-溴-2-氯-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)煙醯胺(40.8g，60％)。

實施例2.1.3：5-溴-2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)煙醯胺(IC3)的製備

在室溫下向環丙烷甲醇(9.45g，0.131mol，1.2當量)於二甲基甲醯胺(DMF；500mL)中的溶液中添加氫化鈉(NaH；6.55g，0.164mol，1.5當量)。攪拌1小時後，將反應混合物冷卻至0℃，並且添加溶解在二甲基甲醯胺(100mL)中的IC2(40.8g，0.109mol，1當量)。在室溫下攪拌過夜後，用水淬滅反應混合物。分離出水性部分並用乙酸乙酯萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，濃縮並用PE:EA＝10:1溼磨，獲得呈白色固體狀的5-溴-2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)煙醯胺(35g，79％)。

實施例2.1.4：2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(2-甲醯基苯基)煙醯胺(IC4)的製備

向IC3(4.0g，9.78mmol，1當量)和(2-甲醯基苯基)硼酸(1.76g，11.7mmol，1.1當量)於甲苯中的溶液中添加2N碳酸鈉(水溶液)(Na2CO3；8mL，1.64當量)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(Pd(dppf)Cl2；400mg，0.490mmol，0.05當量)。在添加完成後，將反應混合物加熱至90℃，並攪拌3小時，然後用水淬滅。用乙酸乙酯萃取水層並且將合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，得到粗產物，通過矽膠色譜法(PE:EA＝5:1)純化，獲得呈白色固體狀的化合物2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(2-甲醯基苯基)煙醯胺(3.0g，6.91mmol，70％)。

實施例2.1.5：2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(2-(羥基甲基)苯基)煙醯胺(AC1)的製備

向化合物IC4(1.1g，2.53mmol，1當量)於四氫呋喃和甲醇(20mL:20mL)中的溶液中添加硼氫化鈉(NaBH4；0.48g，12.6mmol，5當量)。攪拌30分鐘後，用冷水淬滅反應並且利用1N鹽酸(水溶液)將反應混合物的pH調節至5的pH值。再攪拌15分鐘後，然後用乙酸乙酯萃取反應混合物。將合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，得到呈白色固體狀的2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(2-(羥基甲基)苯基)煙醯胺(1.0g，90％)。

方案2：用於合成式(II)化合物的替代方案

實施例3：用於製備式(III)化合物的一般程序：

方案3

實施例3.1：根據方案3製備化合物AC2

實施例3.1.1：(3-氟-4-甲氧基苯基)甲胺(ICb)的製備

向3-氟-4-甲氧基苯甲腈ICa(68.0g，450mmol，1當量)於甲醇(2L)中的溶液中添加雷尼鎳(Raney,Ni；70.0g)。在添加完成後，將反應混合物在室溫下攪拌過夜。通過過濾除去所形成的固體，並用甲醇洗滌。減壓濃縮透明濾液，獲得呈黃色油狀的(3-氟-4-甲氧基苯基)甲胺(62.8g，90％)。

實施例3.1.2：5-溴-2-(環丙基甲氧基)苯甲酸(IC6)的製備

在0℃下向環丙烷甲醇(7.9g，0.011mol)於二甲基甲醯胺中的溶液中添加氫化鈉(4.87g，0.2mol，60％於礦物油中)。將混合物攪拌1小時，然後添加IC5(20.0g，0.092mol)溶解在二甲基甲醯胺中的溶液。在添加完成後，將反應混合物在75℃下攪拌過夜。第二天，將反應混合物冷卻至0℃，酸化至pH＝5，並用水稀釋。分離出水性部分並用乙酸乙酯萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，得到粗物質。使用矽膠色譜法(PE:EA＝1:1，Rf＝0.2)純化所述粗物質，得到5-溴-2-(環丙基甲氧基)苯甲酸(20.0g，80％)。

實施例3.1.3：5-溴-2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)苯甲醯胺(IC7)的製備

將化合物IC6(20.0g，0.07mol)於亞硫醯二氯中的溶液加熱至回流持續1.5小時，冷卻至室溫並濃縮，得到粗殘餘物，將其溶解在二氯甲烷(20mL)中並逐滴添加至在0℃下(3-氟-4-甲氧基苯基)甲胺(ICb)(11.5g，0.07mol)和三乙胺(22.4g，0.22mol)溶解在二氯甲烷(70mL)中的溶液中。將反應混合物在室溫下攪拌過夜並通過薄層色譜法(TLC)監測。第二天，用水淬滅反應混合物。用二氯甲烷萃取水性部分。將所有合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，得到粗物質。通過矽膠色譜法(PE:EA＝2:1，Rf＝0.6)純化所述粗物質，得到呈固體狀的5-溴-2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)苯甲醯胺(21.0g，70％)。

實施例3.1.4：4-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-2'-甲醯基-[1,1'-聯苯]-3-甲醯胺(IC8)的製備

向化合物IC7(3.0g，7.35mmol，1當量)和(2-甲醯基苯基)硼酸(1.21g，8.08mmol，1.1當量)於甲苯中的溶液中添加2N碳酸鈉(水溶液)(9.6mL，2.61當量)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(300mg，0.36mmol，0.05當量)。然後將反應物加熱至90℃，並攪拌過夜。第二天，用水淬滅反應。分離出水層並用乙酸乙酯萃取。將所有合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，得到粗產物，通過矽膠色譜法(PE:EA＝5:1)純化，獲得呈白色固體狀的4-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-2'-甲醯基-[1,1'-聯苯]-3-甲醯胺(2.0g，4.62mmol，63％)。

實施例3.1.5：4-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-2'-(羥基甲基)-[1,1'-聯苯]-3-甲醯胺(AC2)的製備

向化合物IC8(550mg，1.27mmol，1當量)於四氫呋喃和甲醇(10mL:10mL)中的溶液中添加硼氫化鈉(240mg，6.34mmol，5當量)。攪拌30分鐘後，用冷水淬滅反應並且利用1N鹽酸(水溶液)將所得混合物的pH調節至pH＝5。再攪拌15分鐘後，用乙酸乙酯萃取反應混合物。將合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，得到粗產物，通過矽膠色譜法純化，獲得呈白色固體狀的4-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-2'-(羥基甲基)-[1,1'-聯苯]-3-甲醯胺(400mg，73％)。

方案4：用於合成式(III)化合物的替代方案

實施例3.2：根據方案4製備化合物AC6

實施例3.2.1：(3-氟-4-甲氧基苯基)甲胺(ICb)的製備

將化合物ICa(50.0g，0.33mol)和雷尼鎳(55.0g，50％於水中)於甲醇(400mL)中的混合物在室溫下在氫氣氣氛下攪拌過夜。使用薄層色譜法(TLC)監測反應進程。在反應完成後，過濾混合物並濃縮所收集的濾液，獲得(3-氟-4-甲氧基苯基)甲胺(47.0g，91.6％)，其不經進一步純化即使用。

實施例3.2.2.：5-溴-2-(環丙基甲氧基)苯甲酸(IC6)的製備

在0℃下向環丙烷甲醇(13.1g，0.181mol)於二甲基甲醯胺(200mL)中的溶液中添加氫化鈉(7.98g，0.20mol，60％於礦物油中)。將混合物攪拌1小時，然後添加IC5(36.0g，0.165mol)溶解在二甲基甲醯胺(60mL)中的溶液。將所得反應混合物在75℃下攪拌過夜並通過薄層色譜法(TLC)監測。第二天，將反應混合物冷卻至0℃並利用1N鹽酸(水溶液)酸化至pH＝5並且隨後用水稀釋。分離出水性部分並用乙酸乙酯萃取。將所有合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，獲得粗物質。通過從乙酸乙酯中結晶來純化所述粗物質，得到呈淺黃色固體狀的5-溴-2-(環丙基甲氧基)苯甲酸(40.0g，90％)。

實施例3.2.3：5-溴-2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)苯甲醯胺(IC7)的製備

將化合物IC6(40.0g，0.150mol)於亞硫醯二氯(80mL)中的混合物加熱至回流持續1.5小時，冷卻至室溫並濃縮。將所得殘餘物溶解在二氯甲烷(60mL)中並且將溶液逐滴添加至化合物ICb(23.3g，0.15mol)和三乙胺(22.8g，0.225mol)溶解在二氯甲烷(80mL)中的冷卻(0℃)溶液中。將所得反應混合物在室溫下攪拌過夜。第二天，用水淬滅反應。分離出水層並用二氯甲烷萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，獲得粗物質。使用矽膠柱色譜法(PE:EA＝2:1，Rf＝0.6)純化所述粗物質，得到呈白色固體狀的5-溴-2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)苯甲醯胺(40.0g，65％)。

實施例3.2.4：2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(3-甲醯基吡啶-2-基)苯甲醯胺(IC10)的製備

向化合物IC7(35g，0.086mol，1當量)和雙(頻哪醇根基)二硼(PinB；26.2g，0.103mol)於二噁烷(500mL)中的溶液中添加乙酸鉀(KOAc；25.3g，0.258mol)，接著添加[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(Pd(dppf)Cl2；7.0g，0.0086mol)。將反應混合物加熱至95℃。在回流3小時後，用水稀釋反應物。分離出水性部分並用乙酸乙酯萃取。將所有合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，得到2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼-2-基)苯甲醯胺(IC9)，其不經純化即用於下一步驟。將粗化合物IC9再次溶解在甲苯(500mL)中並且添加3-溴-4-甲醯基吡啶(ICc)(19.1g，0.101mol)、Pd(dppf)Cl2(3.5g，0.0043mol)、2N碳酸鈉(水溶液)(86ml，0.172mol)。將所得混合物加熱至95℃。在回流5小時後，用水稀釋反應物。分離出水性部分並用乙酸乙酯萃取，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，獲得粗物質，通過矽膠色譜法和後續重結晶純化，得到呈灰白色粉末狀的2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(3-甲醯基吡啶-2-基)苯甲醯胺(24g，65％)。

實施例3.2.5：2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(羥基甲基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(AC6)的製備

向化合物IC10(24g，0.055mol，1當量)於甲醇(300mL)和四氫呋喃(300mL)中的混合物中添加硼氫化鈉(10.46g，0.276mol，5當量)。在添加後，將反應在室溫下攪拌0.5小時。然後用冰水稀釋反應混合物並且利用2N鹽酸(水溶液)將混合物的pH調節至6的pH值。分離出所得水層並用乙酸乙酯萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，得到粗物質，使其從PE和EA(v/v＝2:1)中重結晶，獲得呈白色固體狀的2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(羥基甲基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(22g，91％)。

實施例4：2-(4-(環丙基甲氧基)-3-((3-氟-4-甲氧基苄基)氨甲醯基)苯基)-3-(羥基甲基)吡啶1-氧化物(AC14)的製備

方案5

實施例4.1.0：5-(3-(((叔丁基二甲基甲矽烷基)氧基)甲基)吡啶-2-基)-2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)苯甲醯胺(IC11)的製備

將化合物AC6(2.8g，6.53mmol)、叔丁基二甲基甲矽烷基氯(TBSCl；1.47g，9.79mmol)、二甲基氨基吡啶(DMAP；0.08g，0.65mmol)和咪唑(1.33g，19.6mmol)於二氯甲烷(50mL)中的混合物在25℃下攪拌2小時。用水淬滅混合物。分離出水層並用二氯甲烷萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，得到粗物質。通過矽膠色譜法(PE:EA＝4:1，Rf＝0.5)純化所述粗物質，獲得呈白色固體狀的5-(3-(((叔丁基二甲基甲矽烷基)氧基)甲基)吡啶-2-基)-2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)苯甲醯胺(3.2g，90％)。

實施例4.1.1：3-(((叔丁基二甲基甲矽烷基)氧基)甲基)-2-(4-(環丙基甲氧基)-3-((3-氟-4-甲氧基苄基)氨甲醯基)苯基)吡啶1-氧化物(IC12)的製備

向化合物IC11(3.2g，5.8mmol)於二氯甲烷(50mL)中的溶液中添加3-氯過苯甲酸(m-CPBA；4.05g，23.0mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌3.5小時，然後用亞硫酸鈉(Na2SO3；水溶液)淬滅。用二氯甲烷萃取水層。將合併的有機層用碳酸鈉(Na2CO3；水溶液)和鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，得到3-(((叔丁基二甲基甲矽烷基)氧基)甲基)-2-(4-(環丙基甲氧基)-3-((3-氟-4-甲氧基苄基)氨甲醯基)苯基)吡啶1-氧化物(3.2g，粗物質)，其不經進一步純化即使用。

實施例4.1.2：2-(4-(環丙基甲氧基)-3-((3-氟-4-甲氧基苄基)氨甲醯基)苯基)-3-(羥基甲基)吡啶1-氧化物(AC14)的製備

向化合物IC12(3.0g，5.47mmol)溶解在四氫呋喃(15mL)中的溶液中添加四丁基氟化銨(TBAF；10mL，10.0mmol，1M於四氫呋喃中)溶液。將所得反應混合物在室溫下攪拌15分鐘。通過TLC監測反應進程。一旦反應完成，就用水稀釋反應混合物。分離出水性部分並用乙酸乙酯萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，得到粗物質。通過製備型薄層色譜法(二氯甲烷:甲醇(15:1)，Rf＝0.35)純化所述粗物質，得到呈白色固體狀的2-(4-(環丙基甲氧基)-3-((3-氟-4-甲氧基苄基)氨甲醯基)苯基)-3-(羥基甲基)吡啶1-氧化物(750mg，30％)。

實施例5：2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(4-羥基甲基)噻吩-3-基)煙醯胺(AC24)的製備

方案6

實施例5.1.0：(3-氟-4-甲氧基苯基)甲胺(ICb)的製備

向化合物ICa(68.0g，450mmol，1當量)於甲醇(2L)中的溶液中添加雷尼鎳(70.0g)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。通過過濾除去所形成的固體並用甲醇洗滌。所收集的濾液是透明溶液，將其減壓濃縮，得到呈黃色油狀的(3-氟-4-甲氧基苯基)甲胺(62.8g，90％)。

實施例5.1.1.：5-溴-2-氯-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)煙醯胺(IC2)的製備

將化合物IC1(40g，0.169mol，1當量)於亞硫醯二氯(400mL)中的溶液回流1.5小時，然後濃縮，獲得粗乙醯氯中間體，將其溶解在二氯甲烷(100mL)中並添加至化合物ICb(28.8g，0.186mol，1.1當量)、三乙胺(51.35g，0.508mmol，3當量)於二氯甲烷(600mL)中的冷卻(0℃)溶液中。在室溫下攪拌過夜後，用水稀釋反應混合物。分離出水層並用二氯甲烷萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，濃縮並用PE:EA＝10:1溼磨，得到呈白色固體狀的5-溴-2-氯-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)煙醯胺(40.8g，60％)。

實施例5.1.2.：5-溴-2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)煙醯胺(IC3)的製備

在室溫下向環丙烷甲醇(9.45g，0.131mol，1.2當量)於二甲基甲醯胺(500mL)中的溶液中添加氫化鈉(6.55g，0.164mol，1.5當量)。在攪拌1小時後，將反應冷卻至0℃，並且添加含化合物IC2(40.8g，0.109mol，1當量)的二甲基甲醯胺(100mL)。在室溫下攪拌過夜後，用水淬滅反應。分離出水層並用乙酸乙酯萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，濃縮並用PE:EA＝10:1溼磨，得到呈白色固體狀的5-溴-2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)煙醯胺(35g，79％)。

實施例5.1.3：2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(4-甲醯基噻吩-3-基)煙醯胺(IC13)的製備

向化合物IC3(200mg，0.489mmol，1當量)和(4-甲醯基噻吩-3-基)硼酸(84mg，0.538mmol，1.1當量)於甲苯中的溶液中添加2N碳酸鈉(水溶液)(0.5mL，2當量)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(Pd(dppf)Cl2；20mg，0.0244mmol，0.05當量)。然後將反應混合物加熱至90℃，並攪拌過夜。第二天，用水淬滅反應。分離出水層並用乙酸乙酯萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，得到粗產物，通過製備型薄層色譜法(PE:EA＝1:1)純化，得到呈白色固體狀的2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(4-甲醯基噻吩-3-基)煙醯胺(100mg，46％)。

實施例5.1.4.：2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(4-羥基甲基)噻吩-3-基)煙醯胺(AC24)的製備

向化合物IC13(100mg，0.227mmol，1當量)於四氫呋喃(5mL)和甲醇(5mL)中的溶液中添加硼氫化鈉(43mg，1.136mmol，5當量)。攪拌30分鐘後，用冷水淬滅反應並且利用1N鹽酸(水溶液)將反應混合物的pH調節至pH＝5。再攪拌15分鐘後，使反應混合物分溶。除去水層並用乙酸乙酯萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，得到呈白色固體狀的2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(4-羥基甲基)噻吩-3-基)煙醯胺(90mg，90％)。

實施例5.2.0：2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(2-(羥基甲基)噻吩-3-基)煙醯胺(AC25)的製備

實施例5.2.1.：2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(2-甲醯基噻吩-3-基)煙醯胺(IC14)的製備

向化合物IC3(200mg，0.489mmol，1當量)和(2-甲醯基噻吩-3-基)硼酸(84mg，0.538mmol，1.1當量)於甲苯中的溶液中添加2N碳酸鈉(水溶液)(0.5mL，2N，2當量)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(Pd(dppf)Cl2；20mg，0.0244mmol，0.05當量)。然後將反應加熱至90℃，並攪拌過夜。第二天，用水淬滅反應混合物。分離出水層並用乙酸乙酯萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，得到粗產物，通過製備型薄層色譜法(PE:EA＝1:1)純化，獲得呈白色固體狀的2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(2-甲醯基噻吩-3-基)煙醯胺(27mg，12％)。

實施例5.2.2.：2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(2-(羥基甲基)噻吩-3-基)煙醯胺(AC25)的製備

向化合物IC14(20mg，0.045mmol，1當量)於四氫呋喃(1mL)和甲醇(1mL)中的溶液中添加硼氫化鈉(9mg，0.227mmol，5當量)。在攪拌30分鐘後，用冷水淬滅反應並且然後利用1N鹽酸(水溶液)將反應混合物的pH調節至pH＝5。再攪拌15分鐘後，使反應混合物分溶並且分離出水層並用乙酸乙酯萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，得到呈白色固體狀的2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(2-(羥基甲基)噻吩-3-基)煙醯胺(15mg，75％)。

實施例6：2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(3-(羥基甲基)噻吩-2-基)煙醯胺(AC26)的製備

實施例6.1.0.：2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(3-甲醯基噻吩-2-基)煙醯胺(IC15)的製備

向化合物IC3(200mg，0.489mmol，1當量)和(3-甲醯基噻吩-2-基)硼酸(84mg，0.538mmol，1.1當量)於甲苯中的溶液中添加碳酸鈉(0.5mL，2N，2當量)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(Pd(dppf)Cl2；20mg，0.0244mmol，0.05當量)。然後將反應加熱至90℃，並攪拌過夜。第二天，用水淬滅反應。分離出水層並用乙酸乙酯萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，得到粗產物，通過製備型薄層色譜法(PE:EA＝1:1)純化，獲得呈白色固體狀的2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(3-甲醯基噻吩-2-基)煙醯胺(23mg，10％)。

實施例6.1.1.：2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(3-(羥基甲基)噻吩-2-基)煙醯胺(AC26)的製備

向化合物IC15(18mg，0.041mmol，1當量)於四氫呋喃(1mL)和甲醇(1mL)中的溶液中添加硼氫化鈉(9mg，0.227mmol，5當量)。攪拌30分鐘後，用冷水淬滅反應並且利用1N HCl(水溶液)將反應物的pH調節至pH＝5。再攪拌15分鐘後，使反應混合物分溶。用乙酸乙酯萃取水層。將合併的有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮，得到呈白色固體狀的2-(環丙基甲氧基)-N-(3-氟-4-甲氧基苄基)-5-(3-(羥基甲基)噻吩-2-基)煙醯胺(AC26)(15mg，83％)。

表3：化合物的分析數據

*約100-150％的範圍指定為+，約150-250％指定為++並且大於約250％指定為+++。

實施例7：

FANCA缺陷型淋巴細胞的增殖：FANCA缺陷型淋巴細胞系(範可尼貧血，互補群A，FANCA B-淋巴細胞，GM13022)購自Coriell CellRepositories(403Haddon Ave,Camden,New Jersey 08103)。

FANCA淋巴細胞的培養

在本實驗中使用標準的細胞培養條件。培養基(CM)由培養基RPMI1640、15％熱滅活FBS、2mM L-穀氨醯胺、1％青黴素/鏈黴素組成。將細胞懸浮在處在豎直位置的T25組織培養燒瓶中的10-20ml CM中並在37℃、5％CO2溫育箱中溫育。每天對細胞進行計數並用新鮮CM稀釋至3×105個細胞/毫升。將解凍並維持培養3-12天的細胞用於這些研究中。

將細胞塗在聚-D-賴氨酸塗布的96孔黑色/透明板上的一般方案

測定FANCA淋巴細胞的細胞密度並且將細胞在含有15％FBS、2mML-穀氨醯胺、1％青黴素/鏈黴素的RPMI1640培養基中稀釋至所需細胞密度。將50-75μl中的4000個細胞塗在第3-10列和第B-G行中的總共48個孔的每個孔上。對於每種實驗條件，這種塗板布置提供每列6個重複物。然後將板在500rpm下離心2分鐘以確保細胞在孔上的更好分布。對於背景培養基對照，向孔B2、C2、D2添加相等體積(50-75μl)的稀釋培養基。

為了最小化在樣品孔中乾燥的細胞/培養基，向樣品周圍的45個孔和對照孔的每個孔中添加150μl的1XDPBS。然後將板在37℃5％CO2溫育箱中溫育至少4小時，然後添加新的試劑。

將化合物在DMSO中用含有15％FBS的RPMI1640培養基從20mM儲備液稀釋。含有15％FBS和相應體積的DMSO的RPMI1640培養基被用作對照。

利用RPMI1640基礎培養基將4HNE(64mM於100％乙醇中)稀釋至所需濃度。

將AlamarBlue添加至每個孔至最終每個孔中總體積的9.1或10％。將板在37℃5％CO2溫育箱中進一步溫育。設計alamarBlue測定法來定量測量人類和動物細胞系在培養中的增殖相對於溫育時期的關係。

在預先指定的時間下從CO2溫育箱中移出板並放置在微板讀取器中。在Ex 554nm和Em 590nm下監測每個孔中的螢光水平。其後將數值/單位用於數據分析。

數據分析

A)細胞增殖速率的時間過程

通過微板讀取器在每個時間點獲取所有孔中的螢光單位。然後將數據輸出到科學家的配備有SoftMax Pro5軟體的計算機。測定背景單位的平均值(Blk，3x)和每個樣品組的平均值(6個重複物)。對於在每個時間點(細胞培養溫育期)採集的數據，從每組樣品單元的平均值減去Blk單位的平均值。然後將這些「淨螢光單位」數據呈現在由不同培養溫育時期(x軸)相對於相應的淨螢光單位(y軸)組成的曲線中。

B)以相對於不具有任何處理的對照樣品的百分比形式的細胞增殖的時間過程

每個樣品組的「淨螢光單位」也與每個時間點的「對照」的那些進行比較。在所有時間點，「對照螢光單位」被視為100％。將每組「淨螢光單位」除以「對照螢光單位」並乘以100來獲得相應的百分比。然後將這些「相對百分比」數據呈現在由時間點(x軸)相對於相應的相對100對照百分比(y軸)組成的曲線中。

在培養中通過4HNE處理對FANCA缺陷型細胞生長的抑制作用具4HNE濃度依賴性

研究了4HNE對FANCA淋巴細胞增殖的抑制作用。將75μl的含有15％FBS的RPMI1640培養基中的4000個細胞塗在96孔聚D-賴氨酸塗布的黑色/透明細胞培養板中的每個樣品孔上並且將板在37℃5％CO2溫育箱中溫育7小時。

利用RPMI1640培養基將64mM的4HNE儲備液稀釋至10μM、20μM、30μM、40μM、60μM、80μM和120μM。將25μl的在每種濃度下稀釋的4HNE添加至指定孔的6個重複物，最終4HNE濃度為2.5μM、5μM、7.5μM、10μM、15μM、20μM或30μM。在對照孔中，添加25μl的RPMI1640培養基。將細胞在37℃5％CO2溫育箱中進一步溫育16小時。向每個孔添加10μl alamarBlue作為定量細胞生長的指示。在所選時間點，通過微板讀取器測定所有孔中的螢光單位。如上文章節「數據分析」中所述來分析數據。

如圖1A和圖1B中所示，用4HNE處理FANCA細胞導致細胞增殖水平以濃度依賴性方式降低。

實施例8：ALDH2活化劑拯救在3.5μM 4HNE或6μM 4HNE存在下的FANCA缺陷型細胞生長

對於化合物AC32和AC6研究了它們拯救在4HNE處理存在下的FANCA缺陷型淋巴細胞生長的能力。將50μl的含有15％FBS的RPMI1640細胞培養基中的4000個細胞塗在每個樣品孔上並且然後在溫育箱中溫育4小時。

將AC32和AC6在DMSO中用含有15％FBS的RPMI1640培養基從20mM儲備液稀釋至8μM、20μM或40μM。然後將約25μl的稀釋AC32或AC6添加至指定孔的6個重複物以獲得2μM、5μM或10μM的最終化合物濃度。對於對照樣品，向每個孔添加25μl相等體積的用含有15％FBS的RPMI1640培養基稀釋的DMSO。2小時後，將25μl的在RPMI1640基礎培養基中稀釋的14μM或24μM 4HNE添加至指定孔的6重複物，最終為3.5μM或6μM 4HNE。溫育過夜後，向每個孔添加10μl的alamarBlue。在所選時間點，通過微板讀取器測定所有孔中的螢光單位。如上文章節「數據分析」中所述來分析數據。

AC6和AC32拯救3.5μM 4HNE對FANCA缺陷型細胞的生長抑制作用

如圖2中所示，用AC32或AC6預處理FANCA缺陷型淋巴細胞2小時，然後3.5μM 4HNE激發，相比於不具有任何ALDH2活化劑(僅4HNE)的細胞產生更高水平的細胞生長。ALDH2活化劑對細胞生長的這種保護具濃度依賴性。此外，在類似濃度下，AC6相比於AC32顯示更高功效。如圖2B中所示，在4HNE處理後20小時，在樣品「僅4HNE」中不再檢測到外源3.5μM 4HNE在FANCA細胞中的抑制作用。對於「僅4HNE」細胞和「對照」細胞，在4HNE處理後25小時至48小時，相對細胞增殖速率不再變化(83％對100％)。

在4HNE處理後25小時至48小時，在用5μM和10μM AC6處理的細胞中以及在用10μM AC32處理的細胞中的相對細胞增殖速率相比於不具有AC化合物的「對照」顯示更高水平的細胞生長。這些結果與我們先前的室內研究結果一致，即用ALDH2活化劑處理FANCA淋巴細胞促進細胞生長至少48小時。

實施例9：需要更高濃度的AC6和AC32來拯救FANCA缺陷型細胞免於6μM 4HNE的生長抑制作用

此外在更高濃度的4HNE下研究了AC6和AC32拯救FANCA淋巴細胞免於4HNE激發的生長抑制作用的能力。如圖3中所示，用10μM AC32或AC6預處理FANCA缺陷型淋巴細胞2小時，然後6μM 4HNE激發，相比於不具有任何ALDH2活化劑(僅4HNE)或具有2μM ALDH2活化劑的細胞產生更高水平的細胞生長。這些結果強烈支持如下觀點：在更高濃度的4HNE下，ALDH2活性與FANCA淋巴細胞中的4HNE毒性降低直接相關。僅由利用10μm AC6或10μM AC32處理產生的FANCA細胞中的更高ALDH2活性能夠拯救6μM 4HNE對FANCA細胞生長的抑制作用。

在圖2B中檢測到的AC6促進FANCA細胞生長的能力也示於圖3B中。在4HNE處理後25小時至48小時，用10μM AC6處理的FANCA細胞展現細胞增殖速率增加。這些結果表明，在FANCA細胞中，AC6的細胞保護作用有效至少48小時。

實施例10：式(I)化合物在角叉菜膠炎性疼痛模型中的止痛作用

在雄性C57BL/6小鼠中使用角叉菜膠炎性疼痛模型評估AC151和Alda-1的止痛作用。向所述小鼠施用AC151、Alda-1和作為對照的媒介物(鹽水)。

在本研究中使用來自Jackson Laboratories(Bar Harbor,Maine)的雄性C57BL/6J小鼠。小鼠接收時為6-7周齡。在接收後，小鼠被分配唯一的識別編號(尾標)並分組圈養在OPTImice籠中。使所有動物在測試前適應菌落室至少1周。在適應期內，定期對動物進行檢查，處理和稱重，以確保足夠的健康和適應性。將動物維持在12小時/12小時光照/黑暗循環。室溫維持在20℃至23℃，相對溼度維持在30％至70％。飼料和水在研究持續時期內隨意提供。在動物的光照循環階段內進行所有測試。

為了誘導足底對觸覺刺激的敏感性，向小鼠的後爪足底施用角叉菜膠的單次注射並且在三小時後通過向後爪的足底表面(與注射同側和對側)施加上升彎曲力(0.02至6克)的Von Frey纖維絲來測量從機械刺激的回縮。陽性反應定義為從Von Frey纖維絲回縮。通過在回縮反應上方和下方研究纖維絲來檢驗閾值確定。回縮閾值的顯著降低被解釋為機械痛覺過敏。在藥物或角叉菜膠處理之前，採用基線Von Frey量度並用於平衡各處理組之間的動物。

將Alda-1(1、2和5mg/kg)溶解在50％DMSO/50％PEG中並以5ml/kg的劑量在角叉菜膠施用之前15分鐘皮下(sc)施用和在角叉菜膠注射之後30分鐘和150分鐘再施用兩次。將AC151(40和80mg/kg)溶解在鹽水中並在角叉菜膠施用後30分鐘經口(po)施用。對於一個群組，在角叉菜膠注射前15分鐘施用AC151(80mg/kg)。這種化合物的劑量是10ml/kg。

在角叉菜膠注射前15分鐘進行AC151(80mg/kg)和Alda-1的初始注射。然後，向右後爪足底施用3％角叉菜膠的單次3.5μl注射。然後施用Alda-1兩次，一次在角叉菜膠後30分鐘，再次在角叉菜膠後150分鐘。在單獨的處理組中，在角叉菜膠注射後30分鐘施用AC151(40mg/kg和80mg/kg)以及鹽水媒介物。在角叉菜膠注射後180分鐘採用Von Frey量度。

在適當時通過方差分析(ANOVA)並接著與費舍爾檢驗進行事後比較來分析數據。如果p<0.05，則作用視為顯著的。如果p<0.05，則作用視為顯著的。

測量動物在測試之前的平均體重。ANOVA發現各種處理組之間在測試之前無顯著差異。

AC151或Alda-1化合物對於角叉菜膠誘導的爪炎症的影響示於圖4A和圖4B中。單因子ANOVA顯示顯著治療作用(圖4A和圖4B)。事後分析證實，AC151(所有群組)以及Alda-1(5mg/kg)相比於媒介物顯著增加縮爪閾值，這表明對於觸覺刺激的高敏性降低。出於比較目的，AC151和Alda-1化合物對於角叉菜膠誘導的對側爪炎症的影響示於圖5中。利用這種量度未注意到治療作用(圖5)。

如通過同側縮爪閾值的顯著增加所測量，AC151和Alda-1降低了角叉菜膠誘導的機械痛覺過敏。發現AC151與Alda-1之間無顯著差異，這表明兩種化合物的功效類似(圖4A和圖4B)。所觀測到的反應是特異性的，因為兩種化合物僅影響同側而非對側縮爪閾值。

實施例11：式(I)化合物對四氯化碳誘導的纖維化模型中的肝纖維化和硬化的影響

在BALB/c小鼠中評估AC151對四氯化碳(CCl4)施用誘導的肝纖維化的功效。對小鼠施用AC151、甲磺酸伊馬替尼和作為對照的媒介物(鹽水)。CCl4在齧齒動物中誘導的肝纖維化和硬化是用於研究肝纖維化和硬化的廣泛接受的實驗模型。在許多方面，這種模型反映了與毒性損傷相關的人類疾病進程如病毒性肝炎、酒精濫用、由於鐵或銅過載而造成的代謝性疾病等的模式。目前的建議是在BALB/c小鼠中建立慢性CCl4誘導的肝纖維化並評估測試化合物對這種動物模型的功效。

試劑：橄欖油(Sinopharm Chemical)、四氯化碳(China-reagent Co.,Ltd)和異氟烷(Hebei Jiupai Pharmaceutical Co.,Ltd)。通過將1ml CCl4與3ml橄欖油混合來製備25％CCl4於橄欖油中的溶液。

在本研究中使用來自Shanghai SLAC Laboratory Animal Co.Ltd.的45隻雄性BALB/c小鼠。小鼠接收時為6-7周齡，體重為18g至25g。在接收後，小鼠被分配唯一的識別編號並分組圈養在透明的聚碳酸酯塑料籠中。使所有動物在測試前適應菌落室至少1周。在適應期內，定期對動物進行檢查，處理和稱重，以確保足夠的健康和適應性。將動物維持在12小時/12小時光照/黑暗循環。室溫維持在20℃至26℃，相對溼度維持在40％至70％。飼料和水在研究持續時期內隨意提供。在動物的光照循環階段內進行所有測試。

在適應期後，在8周的總時期內對小鼠施用CCl4以建立肝纖維化。從第0天起，對除第1組(假處理對照組)之外的所有動物經腹膜內注射CCl4(i.p.)、2mL/kg 25％CCl4的橄欖油溶液(對於體重為25g的正常小鼠為50μL)，每周兩次，持續8周的總時期。在第3周結束時，首先根據ALT和AST值，其次根據體重，將40隻CCl4處理的小鼠隨機分成4組(在處理開始之前，n＝10/組)。從第4周開始，相應地用媒介物或測試化合物處理來自第2-5組的動物(隨著模型需要，持續CCl4處理)。每次給藥是在CCl4施用之前30至60分鐘施用的。處理組示於下表4中。

表4：處理組

向第1組中的動物施用媒介物處理，持續5周，p.o.q.d.(3周橄欖油，接著5周橄欖油加媒介物)。向第2組中的動物施用CCl4 1mL/kg(2mL/kg的25％CCl4橄欖油溶液，每周兩次，i.p.)持續3周，接著進行5周的CCl4加媒介物處理。向第3組中的動物施用CCl4 1mL/kg(2mL/kg的25％CCl4橄欖油溶液，每周兩次，i.p.)持續8周。伊馬替尼處理與開始CCl4施用重合併貫穿整個研究(25mg/kg，bid，p.o.)。

向第4組中的動物施用CCl4 1mL/kg(2mL/kg的25％CCl4橄欖油溶液，每周兩次，i.p.)持續3周，接著5周的CCl4加測試化合物低劑量處理(40mg/kg，q.d，p.o.)。向第5組中的動物施用CCl4 1mL/kg(2mL/kg的25％CCl4橄欖油溶液，每周兩次，i.p.)持續3周，接著5周的CCl4加測試化合物高劑量處理(80mg/kg，q.d，p.o.)。

在第3周和第8周結束時採集300μL血樣(非禁食)以製備血清樣本用於血液化學分析(ALT和AST)。在CCl4施用後24小時在通風櫥中在異氟烷麻醉(3-5％異氟烷持續3-5分鐘)下通過眼眶後穿刺來獲得血樣。採集後，使血液在環境溫度下凝結至少30分鐘並且然後在4℃下冷藏30分鐘以允許凝塊收縮。通過在4℃、3500x g下離心10分鐘來製備血清樣本。使用自動生化分析儀(HITACHI 7020)在第3周和第8周結束時測量血清丙氨酸轉氨酶(ALT)和天冬氨酸轉氨酶(AST)水平。將血清樣本放置在-70℃至-80℃中進行儲存。對於最終血清樣本，通過ELISA試劑盒根據製造商的說明來檢測TGF-β。在最後CCl4施用後48小時，在血液採樣後，處死動物。

將全肝組織用冰冷的PBS快速衝洗，在紙巾上短暫吸乾並稱重。將肝組織切成片以供稍後使用。將右葉固定在10％中性福馬林中以用於組織病理學和免疫組織化學(IHC)分析。將左葉和中葉分別在液氮中快速冷凍並儲存在-80℃下以用於進一步分析。

在第8周結束時測量TGF-β的血清水平並且還測量體重(每周兩次)和肝臟重量。在研究中也對所有處理的動物進行肝切片的HE染色與炎症評分、肝臟中纖維化組織的定量(天狼紅染色與定量)、肝切片中的α-SMA(IHC)與定量和肝巨噬細胞浸潤(F4/80抗體染色用於IHC與定量)。

數據將以平均值±SEM呈現並使用相應的檢驗進行分析。p<0.05被視為統計學顯著的。將在除去離群值後對原始數據進行統計分析。離群值將定義為相比於平均值的差值大於2SD。

實施例12：在外周動脈疾病(PAD)的肢體缺血模型中對線粒體醛脫氫酶進行調節的作用

在ALDH2*2敲入小鼠中評估ALDH2調節的作用。ALDH2*2敲入小鼠用AC151和作為對照的媒介物處理。ALDH2*2敲入小鼠相比於野生型小鼠僅具有10％的ALDH2活性。

肢體缺血鼠類動物模型被用作外周動脈疾病的替代模型，如《自然方案》(Nature Protocols),4,1737-1748(2009)中所述(Limbourg,A.等,Evaluation of postnatal arteriogenesis and angiogenesis in a mouse model of hind-limb ischemia,《自然方案》(Nature Protocols),4,1737-1748(2009))。研究設計概述於圖1中。所有實驗都是根據國家和機構關於用於研究目的的動物使用和權限的規定來操作的以進行必須獲得的實驗。

利用氯胺酮(100mg/ml)劑量80-100mg/kg和甲苯噻嗪(20mg/ml)劑量4-6mg/kg的腹膜內(IP)注射將動物(18-22周齡WT小鼠)麻醉。從手術區域完全除去毛髮並且沿著股血管在腹股溝摺痕開始做縱向切口。然後小心地解剖股動脈與靜脈之間的結締組織片並且在股動脈與靜脈之間做個開口。然後利用動脈結紮線使用三重手術結來閉合股動脈。然後封閉切口並且向動物皮下施用單一劑量的丙諾啡(0.1mg/kg)以控制缺血性疼痛。

在第0天進行永久股動脈閉合的動物，通過滲透泵用ALDH2活化劑Alda-1和AC112處理28天。在代謝室中使用跑臺運動在小鼠中評估本發明化合物對功能能力的影響。

通過動態O2和CO2測量來測量VO2最大值和呼吸交換率以及通過血清乳酸測定法來測量無氧閾值。此外評估嵴規律性、細胞器內縮合、線粒體膜不規則性和相關空泡化/溶酶體。通過透射電子顯微鏡(TEM)測量線粒體損傷的生物標記物，包括具有活性醛(即4-HNE)和線粒體結構的線粒體蛋白加合物(即，線粒體體積和位置(肌膜下/肌節))。

此外通過測量線粒體膜電位和呼吸鏈複合物活性以及使用Clark電極測量骨骼肌O2消耗量來評估線粒體功能。此外，通過LM和TEM評估ALDH2活性的藥理學或遺傳調節對肌肉結構的影響，利用螢光毒傘素評估肌原纖維內的肌動蛋白絲的片段化並利用TUNEL/Caspase-3染色評估細胞凋亡；並且使用電刺激和力微傳感器在體外對腓腸肌的收縮功能進行定量。

ALDH2激動劑AC112已證實改進PAD野生型小鼠中的奔跑距離和奔跑時間(圖8A和圖8B)。AC112也改善了PAD小鼠中的疼痛閾值(圖9A)並最小化WT小鼠中的PAD誘導的骨骼肌萎縮(圖9B)。已經離體測量了骨骼肌收縮能力，結果已表明，AC112處理可以改善PAD小鼠中的骨骼肌抗疲勞性(圖10A)。在這項研究中，我們還確定了肌肉組織中的ALDH2活性。AC112處理增加了PAD小鼠中的肌肉組織的ALDH2活性(圖10B)。

以引用的方式併入

本文提及的各專利文獻和科學文章的全部公開內容出於所有目的以引用的方式併入。在本公開中，主體文件鑑定為具有足夠特殊性並且與本公開相關的材料是基於參考文獻的內容解釋的。出版物和專利文件的引用不旨在承認任何是相關的現有技術，也不構成對其內容或日期的承認。本發明現在已通過書面描述的方式進行說明，本領域技術人員應認識到，本發明可以多種實施方案進行實施並且前述描述和實施例是出於說明而非限制後面的權利要求的目的。

等效物

本發明可在不脫離其精神或基本特徵的情況下以其他特定形式來實施。因此前述實施方案被視為在所有方面都是說明性的而非對本文所述的發明進行限制。本發明的範圍因此由所附權利要求而非前述描述指定，並且在權利要求的含義和等效範圍內的所有變化都旨在涵蓋於其中。