含NF－κB誘餌的用於治療和預防呼吸疾病的藥物組合物及其使用方法

2023-06-14 07:08:26

專利名稱：含NF－κB誘餌的用於治療和預防呼吸疾病的藥物組合物及其使用方法
技術領域：
本發明涉及組合物及其使用方法，所述組合物包含與轉錄調節因子尤其是NF-κB的染色體結合位點特異性結合的化合物(如核酸及其同源物)。更具體的，本發明涉及含NF-κB誘餌(decoy)化合物的組合物及其使用方法。
具體而言，本發明提供治療、改善和預防氣道炎性疾病、氣道狹窄或鼻腔炎性疾病的組合物及其具有顯著效果的使用方法，具體的，例如，根本性治療、改善和預防哮喘或鼻炎的組合物。
背景技術：
1993年3月，WHO(世界衛生組織)報告了「事實上全球哮喘發病率正在增加」，並公布了他們的發現在世界55億人口中間哮喘患者超過1億(「Internationalguidance towards asthma control-global strategy for asthma control and prevention，NHLBI/WHO Workshop Report」ed.Sohei MAKINO，Kokusai Igaku Shuppan(International Medical Publishers，Inc.)1995)。特別是哮喘在小兒中的發病率正在增加。
在日本，小兒哮喘增加的趨勢明顯，根據文部省(Ministry of Education)的學校保健調查，小兒哮喘發病率最高是在1994年，與1975-1984年期間相比已經增加2-4倍。
厚生省(Ministry of Health and Welfare)於1993年10月公布日本總計有1,066,000人患哮喘(男性586,000；女性480,000)，據此統計數字計算人口中0.9％患有哮喘。
而且根據調查方法在日本有2-3百萬哮喘患者(人口的約2-3％)，並且每年因哮喘死亡的人數估計是約6,000-7,000。
如此，日本和其它地方的當前趨勢是與哮喘相關的發病率增加。而且，與哮喘相關的死亡率也微降低；哮喘導致死亡的風險高，尤其是對於難治的哮喘。
氣道黏膜炎症在支氣管哮喘病理中起重要作用。
也就是說，一旦氣道黏膜接受變應原刺激，炎症細胞如肥大細胞或嗜酸性粒細胞就產生各種細胞因子、組織毒性蛋白等。由此，細胞的炎性刺激引起受炎性刺激而激活的轉錄因子如NF-κB和AP-1激活，從而增強各種基因的表達，如各種細胞因子的表達。
炎性因子如細胞因子負責介導免疫系統細胞之間的相互作用，並在對變應原或微生物的免疫應答中起重要作用。
然而，由這些因子介導的過度的變態反應或炎症導致支氣管哮喘、氣道狹窄等患者的不利現象，如哮喘發作。
肥大細胞和嗜酸性粒細胞的表面膜上攜帶細胞因子受體。一旦其它細胞或其自身產生的細胞因子與這些受體結合，信號就經細胞內信號傳遞傳入細胞核而促進各種基因轉錄，從而基於轉錄產生新細胞因子、趨化因子和細胞粘附分子。
在此情況下，轉錄因子在調節核中遺傳信息的轉錄活性方面起重要作用。氣道炎症中重要的轉錄因子包括NF-κB、AP-1、NF-AT(活化T細胞的核因子)，尤其是NF-κB起關鍵作用。
對NF-κB促進轉錄反應而產生的因子包括各種因子如炎性細胞因子、趨化因子、細胞毒性蛋白、細胞粘附分子、免疫系統相關的細胞膜受體等。
迄今為止，已經報導在人肥大細胞(MC)中，IgE依賴的NF-κB被炎性抗體刺激激活，TNF-α(腫瘤壞死因子α)被認為促進NF-κB活化。而且，已知在嗜酸性粒細胞中GM-CSF(粒細胞巨噬細胞集落刺激因子)對NF-κB活化重要(J.Immunol.，169(9)，5287-93，2002)。
氣道中的TNF-α有與IL-1相似的生物學作用，並與氣道炎症和氣道中過度反應相關。此外，受IL-1或IL-4激活在氣道上皮和內皮中表達的粘附分子尤其是VCAM-1導致嗜酸性粒細胞浸潤入氣道，並參與氣道中的過度反應。動物試驗中施用抗ICAM-1抗體抑制嗜酸性粒細胞浸潤和氣道反應性。
傳統哮喘治療主要是針對炎症控制，並可按以下分類連續使用用於長期控制的長期控制劑(控制劑)，和用於短期治療哮喘發作的發作治療劑(緩解劑)。
具體的，吸入性類固醇、抗變態反應劑、持續釋放性茶鹼等已經被用作控制劑，而吸入性β2受體激動劑、氨茶鹼、口服或靜脈注射的類固醇等已經被用作緩解劑。
然而，儘管緩解劑的發作緩解作用，使用傳統控制劑治療不能達到足夠效果，因為如上所述，哮喘發病率增加，哮喘死亡率仍沒有降低。
因此，對哮喘治療的研究最近已經從這些傳統症狀治療轉向抑制氣道炎症。
代表性轉錄因子NF-κB是由p65和p50異二聚體組成的轉錄調節因子。NF-κB典型位於細胞漿中，在此與其抑制因子IκB結合從而使NF-κB的核轉位受阻。然而，當施加刺激如細胞因子、缺血、再灌注等時，IκB因磷酸化而被降解。結果導致NF-κB被活化並轉位進入核。在核中，NF-κB結合到染色體上的NF-κB結合位點，並促進其下遊基因轉錄。位於NF-κB結合位點下遊的很多基因是已知的，如炎性細胞因子(如IL-1、IL-6、IL-8、腫瘤壞死因子α(TNFα)等)和粘附分子(例如(如VCAM-1、ICAM-1等)。
儘管有許多患者，支氣管哮喘、變應性哮喘、小兒哮喘等是難於根治的疾病，而長期以來一直期待這種根治。現在的治療主要基於症狀治療，並且主要是施用支氣管擴張劑如茶鹼等。然而，這些症狀治療僅能在發作後開始，因此完全抑制患者症狀是不可能的，並且根治也是不可能的。因此，提供根本性治療的療法已經被長期期待。
除了感冒中常見的症狀如鼻塞、鼻涕、噴嚏等以外，鼻炎有多種症狀，各種症狀如鼻出血、嗅覺和味覺減退、頭痛、注意力缺乏等。
根據誘因/誘發性物質或臨床症狀，將鼻炎分成以下幾類變應性鼻炎、花粉病、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥大性鼻炎、慢性竇炎(積膿症)和鼻中隔偏移等。
作為代表性鼻炎，變應性鼻炎由吸入吸入性抗原如塵、塵蟎、花粉等引起，導致鼻部症狀如噴嚏、鼻涕和鼻塞等。剛吸入抗原性物質時沒有症狀。然而在開始吸入這種抗原以後，體內的抗體量逐漸增加，當抗體效價超過某一水平並且這種抗原性物質被吸入時，就出現症狀。
基本上認為其病理是變應性炎症(Rhinology，41(2)，80-6，2003)。
日本柳杉(Cryptomeria japonica)所致花粉病的患者數在日本一直在增加，現在認為已經達到一千五百萬人。特別是日本大都市地區，據說有五分之一的人有花粉病。這裡的原因被認為是(1)日本柳杉花粉分散量增加；(2)柴油機尾氣對空氣的汙染促進IgE抗體產生。
(3)壓力增加促進變態反應。
(4)由於西方化飲食習慣促進IgE抗體產生。
(5)寄生蟲感染降低。
如本文所用，術語「變應性鼻炎」表示引起鼻腔黏膜抗特異性物質反應的鼻炎，可能與噴嚏、鼻涕和鼻塞這三種主要症狀相關，可能還與其它症狀如眼部搔癢、眼部充血和系統性症狀如缺乏食慾和疲勞相關。
引起變態反應的物質(變應原)包括花粉(日本柳杉、日本扁柏(Chamaecyparisobtusa)等)、豚草、塵蟎、居室塵、寵物毛等，這些可以分成季節性變應原(如春季的日本柳杉花粉)和全年性變應原。
已經提出治療鼻炎的各種方法。然而迄今，只有去除變應原或症狀治療可用，並且很多這些症狀治療有副作用。
此外，慢性阻塞性肺病(COPD)為全球死因的第四大原因。然而，有很多患者在變嚴重之前沒有意識到它，因此它已成為21世紀最嚴重的健康問題之一。在美國，COPD死亡率隨年齡增加，並且根據年齡層劃分，在45歲或更高年齡中是排在第四或五位的死亡原因。在1965-1998年期間，儘管其它疾病死亡率降低，COPD死亡率已顯著增加，因此強烈需要根本性解決方案。
近年COPD患者數一直在增加，因而預期在未來將進一步增加。如今沒有COPD的根本性治療，並且社會保險對與COPD相關的醫療支出也大。COPD是氣流不可逆限制的發病狀態。氣流限制通常是進行性的，並且根據吸入有毒氣體的量或類型而程度不同。氣流限制是由肺實質破壞引起，而所述肺實質破壞是由對吸入氣體的反應而由周圍氣道中炎症反應引起。WHO和世界銀行(World Bank)於1990年進行了一項調查，其中報告其全球死亡率是9.34/千人(男性)和7.33/千人(女性)。如今COPD正在增加，並且是1990年排到第六位的死亡誘因，預期到2020年將上升到第三位。在日本如今有約50,000名患者由於該疾病而在家接受氧療。根據厚生省1996年公布的統計數字，患者數是220,000。然而，根據肺病流行病學調查協會(haishikkanekigaku chosa kenkyukai)公布的統計數字，日本COPD患者數估計是5,300,000。此外，40歲或更高年齡中COPD發病率是8.5％，這與全球發病率相當。迄今為止，認為日本有少數患者，然而，有很多仍未被診斷的患者，因此以實際患者數來看對於COPD的根本性治療有日益增加的需要。
COPD是呼吸過程中作為空氣通路的「氣道」受到破壞並因而呼吸功能逐漸降低的一種疾病。以前稱「肺氣腫」和「慢性支氣管炎」的疾病現在統稱為COPD。
COPD從正常症狀開始，並逐漸發展，並因而被認為是「與生活方式相關的肺病」，其中當患者接受診斷時，他/她已經處於嚴重狀態。COPD是這樣一種疾病，其中由於嚴重狀態的呼吸困難而導致患者運動受限制，並將發生系統性障礙，這是極其嚴重的疾病。因此，從改善症狀的角度講，非常需要對其的治療。
當前COPD治療僅包括症狀治療和改善生活方式，它們是被動方法，因而沒有積極方法或根本性治療。例如，建議放棄有高COPD風險的生活習慣，如吸菸。此外，也在使用促進呼吸的藥物治療、康復、氧療等，它們都是對症治療。預防支氣管感染的接種和併發症治療等也在使用。對於最嚴重患者，當所有條件都被滿足時也可考慮手術治療。然而不能說這種手術治療令人滿意得改善症狀。
如此，現如今沒有有效的CIPD治療，並且如今沒有方法延緩疾病進程。如上所述，迄今為止，現在使用的療法只是對症治療，如吸氧、外部主動換氣等。如上所述，必要時手術切除病變的肺組織。然而有很多報告說明上述治療不提供COPD的長期預後改善。而且，施用藥劑如支氣管擴張劑、祛痰劑等的作用是有限的。
專利文獻1(WO 03/105780)和專利文獻2(US 6303582)公開了生產核酸微顆粒的技術。然而，所述文獻沒有描述小核酸如誘餌是否能被生產為微顆粒而仍然具有對抗炎性疾病的功能。
本發明的目的是提供組合物及其用途，適用於治療由受NF-κB調節的基因表達引起的呼吸系統疾病，如包括氣道炎性疾病、氣道狹窄或鼻腔炎性疾病的疾病、障礙和/或病症。

發明內容
本發明提供含NF-κB誘餌作為主要成分的組合物，用於治療和/或預防由受NF-κB調節的基因表達引起的呼吸系統疾病、障礙和/或病症，以及使用所述組合物治療和/或預防所述疾病的方法。
發明人已經發現，施用NF-κB誘餌可以有效治療和/或預防由受NF-κB調節的基因表達或由嗜酸性粒細胞和/或嗜中性粒細胞異常引起的呼吸系統疾病、障礙和/或病症，從而實現了本發明。
本發明涉及用於治療和預防由受NF-κB調節的基因表達引起的疾病、障礙和/或病症的藥物組合物。所述組合物包含NF-κB誘餌、其衍生物、變體或片段以及藥學上可接受的載體，並且其衍生物、變體或片段是具有生物活性的誘餌。
本發明也涉及用於治療和/或預防與嗜酸性粒細胞異常相關的呼吸系統疾病、障礙和/或病症的藥物組合物，包含誘餌和藥學上可接受的載體。
優選的，所述疾病是COPD、哮喘或鼻炎。
優選的，所述疾病是與嗜酸性粒細胞異常相關的疾病。這種與嗜酸性粒細胞異常相關的疾病例如包括哮喘，如支氣管哮喘、小兒哮喘、變應性哮喘、特應性哮喘、類固醇抵抗型哮喘(SRA)、非變應性哮喘(內因性哮喘、外因性哮喘如阿司匹林哮喘、心臟性哮喘和感染性哮喘)；和其它嗜酸性粒細胞異常，如鼻炎、變應性疾病等。
優選的，所述藥學上可接受的載體是親水聚合物、不溶性脂質體、碳水化合物或不溶性添加劑。
優選的，所述藥學上可接受的載體是選自脂質體、乳糖、海藻糖、蔗糖、甘露醇和木糖醇的一種或多種。
優選的，所述NF-κB誘餌是SEQ ID NO1中列出的誘餌。
優選的，所述呼吸系統疾病、障礙和/或病症是氣道炎性疾病、氣道狹窄或鼻腔炎性疾病。
優選的，所述呼吸系統疾病、障礙和/或病症是COPD、哮喘或鼻炎。
優選的，所述呼吸系統疾病、障礙和/或病症是COPD。
優選的，所述呼吸系統疾病、障礙和/或病症是哮喘。
優選的，所述呼吸系統疾病、障礙和/或病症是鼻炎。
優選的，所述呼吸系統疾病、障礙和/或病症是選自哮喘或鼻炎，所述哮喘選自支氣管哮喘、小兒哮喘、變應性哮喘、特應性哮喘、類固醇抵抗型哮喘、非變應性哮喘、內因性哮喘、外因性哮喘、阿司匹林哮喘、心臟性哮喘和感染性哮喘；所述鼻炎選自變應性鼻炎、花粉病、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥大性鼻炎、慢性竇炎(積膿症)和鼻中隔偏移。
另一方面，本發明涉及NF-κB誘餌用於製造藥劑或藥物組合物的用途，所述藥劑或藥物組合物用於治療和/或預防由受NF-κB調節的基因表達引起的呼吸系統疾病、障礙和/或病症，或由嗜酸性粒細胞異常引起的呼吸系統疾病、障礙和/或病症。
另一方面，本發明包含本發明的上述組合物，其適用於施用於呼吸系統。
優選的，施用於呼吸系統包含施用於氣道內或經氣道吸收。
優選的，施用於呼吸系統特徵是經霧化或吸入施用於氣道。
優選的，施用於呼吸系統特徵包含經定量噴霧式吸入器(MDI)、乾粉吸入器(DPI)或噴霧器施用。
優選的，所述組合物以乾粉提供。
優選的，所述乾粉是經選自下組之一的方式生產的微粒球磨、珠磨、噴射磨、ultimaizer、研缽、石磨、噴霧乾燥和超臨界流體。
優選的，所述乾粉的氣體動力學平均粒徑為約0.01至約50微米。
優選的，所述乾粉的氣體動力學平均粒徑為約0.05至約30微米。
優選的，所述乾粉的氣體動力學平均粒徑為約0.1至約10微米。
優選的，本製劑(formulation)中提供的每輪劑量是10μg-100mg。
優選的，本製劑中提供的每輪劑量是50μg-50mg。
優選的，本製劑中提供的每輪劑量是10mg或更少。
優選的，施用於呼吸系統包含經鼻吸收。
優選的，所述製劑是選自滴鼻劑、噴鼻劑、噴霧劑、呼吸器用劑和粉末給藥製劑的製劑。
優選的，所述製劑是用於鼻炎的滴鼻劑。
優選的，本發明特徵在於NF-κB誘餌包封在HVJ-E囊膜載體(envelope vector)中。
優選的，施用於呼吸系統包含施用於肺。
另一方面，本發明提供治療呼吸系統的裝置，其包含根據本發明的組合物以及將所述組合物施用於呼吸系統的器具。
優選的，所述施用於呼吸系統的器具包含選自下組的器具用於向肺給藥的器具、用於經氣道給藥的器具、用於經氣道吸收的器具和用於經鼻吸收的器具。
優選的，所述用於向氣道中給藥的器具包含定量噴霧式吸入器(MDI)、乾粉吸入器(DPI)或噴霧器。
另一方面，本發明提供製造含NF-κB誘餌的顆粒的方法，包括以下步驟A)提供所述誘餌和藥學上可接受的載體；B)將所述誘餌和載體乾燥並加熱到足以造粒(particulization)的溫度；和C)獲得具有預期顆粒大小的顆粒。
優選的，所述溫度是50攝氏度或更低。
優選的，所述溫度是100攝氏度或更低。
優選的，所述乾粉氣體動力學平均粒徑為約0.01至約50微米。
優選的，所述乾粉的氣體動力學平均粒徑為約0.05至約30微米。
優選的，所述乾粉的氣體動力學平均粒徑為約0.1至約10微米。
另一方面，本發明提供治療和/或預防由受NF-κB調節的基因表達引起的呼吸系統疾病、障礙和/或病症的方法，包括以下步驟A)向對象的呼吸系統施用含NF-κB誘餌和藥學上可接受載體的組合物。
優選的，所述呼吸系統疾病、障礙和/或病症是氣道炎性疾病、氣道狹窄或鼻腔炎性疾病。
優選的，所述呼吸系統疾病、障礙和/或病症是COPD、哮喘或鼻炎。
優選的，施用於呼吸系統包含施用於氣道內或經氣道吸收。
優選的，施用於呼吸系統特徵是經霧化或吸入施用於氣道。
優選的，施用於氣道包含經定量噴霧式吸入器(MDI)、乾粉吸入器(DPI)或噴霧器施用。
優選的，所述施用經選自滴鼻劑、噴鼻劑、噴霧器、呼吸器和粉末給藥的方式實現。
另一方面，本發明提供治療和/或預防由嗜酸性粒細胞異常引起的呼吸系統疾病、障礙和/或病症的方法，包括以下步驟A)向對象的呼吸系統施用含NF-κB誘餌和藥學上可接受載體的組合物。
另一方面，本發明涉及NF-κB誘餌在製造用於治療和/或預防由受NF-κB調節的基因表達引起的呼吸系統疾病、障礙和/或病症的藥物方面的用途。
另一方面，本發明涉及NF-κB誘餌在製造用於治療和/或預防由嗜酸性粒細胞異常引起的呼吸系統疾病、障礙和/或病症的藥物方面的用途。
發明效果本發明允許處理如治療或預防呼吸疾病如氣道炎性疾病、氣道狹窄或鼻腔炎性疾病等。


圖1是顯示根據本發明的藥物組合物在哮喘模型中效果的試驗方案的實例(圖1A)。圖1B和1C顯示吸入誘餌的效果。
圖2的結果顯示來自卵清蛋白激發的動物的支氣管肺泡灌洗液中根據本發明的藥物組合物的效果。圖2A和2B所示為用於計算嗜酸性粒細胞數目的原始數據。圖2C顯示本發明的效果，其中從左邊開始分別表示對照、卵清蛋白激發、氣溶膠處理(2mg×2)和液體處理(0.5mg×1)。
圖3的結果顯示來自卵清蛋白激發的動物的支氣管肺泡灌洗液中根據本發明的藥物組合物的效果。圖3A(嗜酸性粒細胞數)和圖3B(嗜酸性粒細胞百分率)顯示本發明的效果。從左邊開始，每個圖分別表示對照、卵清蛋白激發、裸誘餌(500微克)、HVJ(200；含HVJ-E 10000HAU和誘餌200μg)、HVJ(500；含HVJ-E 25000HAU和誘餌500μg)和載體(只有HVJ-E 25000HAU，無誘餌)。#表示對照相對於卵清蛋白激發的統計顯著性。
圖4表示嗜酸性粒細胞行為的實例。
圖5表示本發明NF-κB誘餌的粉末吸入藥劑的結果。
圖6表示用作對照的含乳糖的粉末吸入藥劑的結果。
圖7表示NF-κB誘餌在大鼠哮喘模型(AHR)中的結果。圖例如下##p＜0.01vs鹽水組(學生t-檢驗)；*，**分別表示p＜0.05，0.01vs對照組(Dunnett’s多重比較檢驗)。
圖8表示NF-κB誘餌在大鼠哮喘模型(BALF)中的結果。圖例如下##p＜0.01vs鹽水組(學生t-檢驗)；*，**分別表示p＜0.05，0.01vs對照組(Dunnett’s多重比較檢驗)。
圖9表示NF-κB誘餌在大鼠鼻炎模型中的效果。圖例如下##p＜0.01vs鹽水組(學生t-檢驗)；*，**分別表示p＜0.05，0.01vs對照組(Dunnett’s多重比較檢驗)。序列表說明SEQ ID NO1是NF-κB誘餌。
SEQ ID NO2是打亂的(scrambled)NF-κB誘餌。
SEQ ID NO3是NF-κB誘餌的變體。
以下，本發明將用優選實施方案的方式描述。本領域技術人員將會理解，基於本說明書的描述和本領域公知的常用技術，本發明的實施方案可以適當實施或實現。本發明的功能和效果容易被本領域技術人員識別。
實施發明的最佳方式以下將描述本發明。應該理解，在本說明書中除非文中明確的另外指出，單數形式的冠詞(如英語中的「a」、「an」、「the」等；德語中的「ein」、「der」、「das」、「die」、等及其變化；法語中的「un」、「une」、「le」、「la」等；西班牙語中的「un」、「una」、「el」、「la」等，和其它語言中的冠詞、形容詞等)包括其複數指示物。也應該理解，除非另外說明，此處所用的術語具有本領域通常使用的定義。因此，除非另外定義，此處使用的所有術語和技術名詞與本發明所屬領域的技術人員一般理解具有相同含義。如果有衝突，以本說明書(包括定義)為準。
此處下面提供的實施方案為更好理解本發明的目的而提供，因而應該理解本發明範圍不受以下描述的限制。因此，根據本說明書的描述，進行在本發明範圍內的任何修飾對於本領域技術人員是顯而易見的。
術語「誘餌」或「誘餌化合物」表示這樣一種化合物，它結合到NF-κB的染色體結合位點或受NF-κB控制的基因的另一個轉錄調節因子的染色體結合位點(以下稱為靶結合位點)，並拮抗NF-κB與其靶結合位點的結合。代表性的，所述誘餌或誘餌化合物包括核酸及其類似物。
當誘餌存在於核中時，誘餌與轉錄調節因子衝突，競爭所述轉錄調節因子的靶結合位點。結果，通過轉錄調節因子與靶結合位點的結合而產生的生物功能被抑制。所述誘餌含有至少一種能結合靶結合序列的核酸序列。只要誘餌能結合靶結合序列，所述誘餌就能用於製備本發明的藥物組合物。
誘餌的優選實施例包括但不限於含5』-CCT-TGA-AGG-GAT-TTC-CCT-CC-3』(SEQ ID NO1)(NF-κB誘餌)的寡核苷酸、或其互補序列、其變體或包括一種或多種這些分子的化合物等。所述寡核苷酸可以是DNA或RNA，並且其中也可以包括修飾核酸和/或假核酸。此外，這些寡核苷酸可以是其突變體或其中有它們的化合物。所述寡核苷酸可以是單鏈或雙鏈，或可以是線性或環狀，或可以帶分支或線性。突變體指具有在上述序列之一中含突變、替換、插入或缺失的序列的核酸，並且它能特異性拮抗NF-κB或受NF-κB控制基因的另一種轉錄調節因子與其結合位點的結合。更優選的誘餌包括含一種或多種上述核酸序列的雙鏈寡核苷酸或其突變體。NF-κB誘餌的代表性變體包括但不限於具有SEQ ID NO3核酸序列的那些。
用於本發明的寡核苷酸包括經修飾以抵抗體內降解的寡核苷酸等，如具有硫代磷酸二酯鍵(其中磷酸二酯鍵中的氧原子被硫原子替換)的寡核苷酸(S-oligo)、磷酸二酯鍵被不帶電荷的甲基磷酸基團替換的寡核苷酸等。
此處所用的分子生物學技術、生化技術和微生物學技術是公知其常用的，例如描述於Ausubel F.A.et al ed.(1988)，Current Protocols in Molecular Biology，Wiley，New York，NY；Sambrook J.et al.(1989)Molecular CloningA Laboratory Manual，2ndEd.，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，SupplementExperimental Medicine「Gene introduction and expression analysis methods」，Yodosha，1997等。
除非另外註明，此處所用的術語「核酸」、「核酸分子」、「多核苷酸」和「寡核苷酸」具有相同含義，指由一系列核苷酸組成的聚合物。核苷酸指形成磷酸酯的核苷。基本部分包括具有嘧啶鹼基或嘌呤鹼基的核苷酸(嘧啶核苷酸和嘌呤核苷酸)。組成多核苷酸的核苷酸包括DNA或RNA等。如上所述，誘餌通常使用這些形式的核酸。
基於本發明的誘餌序列通過用軟體如BLAST、FASTA等對基因組數據如人類基因組計劃(the Human Genome Project)中包括的那些或基因信息資料庫如GenBank進行同源性搜索而獲得的序列也在本發明範圍內。生物學篩選基於這種資料庫製備的文庫而獲得的序列(例如，在嚴謹條件下獲得的序列)也包括在本發明範圍內。
此處使用FASTA(序列分析工具)比較鹼基序列的相似性、一致性和同源性時使用默認參數，除非另外註明。
如此處所用，術語「對應」的基因或序列(如誘餌或啟動子序列等)指給定物種中具有或預期具有與供比較的參考物種中的預定基因相似的功能的基因。當有多個具有這種功能的基因時，該術語指具有相同進化起源的基因。因此，與給定基因對應的基因可以是所述給定基因的直向同源基因。因此，與那些如小鼠NF-κB或序列對應的基因可以在其它動物如人、大鼠、豬、牛等中發現。可通過本領域公知的技術鑑定這種對應的基因。因此，例如，給定動物中的對應基因可用序列如作為參考基因的小鼠NF-κB作為查詢序列通過搜索所述動物(如人、大鼠)的序列資料庫而被發現。這些對應基因可由本領域技術人員用序列資料庫或文庫容易的獲得。本發明中，與本發明的特定序列對應的序列因此也將被包括。
「寡核苷酸衍生物」或「多核苷酸衍生物」包括核苷酸衍生物，或表示核苷酸之間具有與典型連接不同的連接的寡核苷酸或多核苷酸，可互換使用。這種寡核苷酸的實例具體包括寡核苷酸中的磷酸二酯鍵轉變成硫代磷酸二酯鍵的寡核苷酸衍生物、寡核苷酸中的磷酸二酯鍵轉變成N3』-P5』氨基磷酸酯鍵的寡核苷酸衍生物、寡核苷酸中的核糖和磷酸二酯鍵轉變成肽核酸鍵的寡核苷酸衍生物、寡核苷酸中的尿嘧啶被替換成C-5丙炔基尿嘧啶的寡核苷酸衍生物、寡核苷酸中的尿嘧啶被替換成C-5噻唑尿嘧啶的寡核苷酸衍生物、寡核苷酸中的胞嘧啶被替換成C-5丙炔基胞嘧啶的寡核苷酸衍生物、寡核苷酸中的胞嘧啶被替換成吩噁嗪修飾胞嘧啶的寡核苷酸衍生物、DNA中的核糖被替換成2』-O-丙基核糖的寡核苷酸衍生物，以及寡核苷酸中的核糖被替換成2』-甲氧乙氧基核糖的寡核苷酸衍生物。
如此處所用，術語「生物活性」指某種因子在生物體內所具有的活性，包括表現各種功能的活性。例如，當某種因子是轉錄因子時，其生物活性包括調節轉錄活性的活性。當某種因子是酶時，其生物活性包括酶活性。作為另一個例子，當某種因子是配體時，其生物活性包括與所述配體對應的受體的結合。在本發明的實施方案中，這種生物活性包含與至少一種轉錄因子的結合活性。通過混合轉錄因子和轉錄因子的結合序列、並測定由這種結合所得的複合體(如經電泳觀察)可以實現測定這種轉錄因子結合活性的方法。這種方法在本領域公知並常規使用。
如此處所用，術語「核苷酸」可以是天然存在的或非天然存在的。「核苷酸衍生物」指與天然存在核苷酸不同但具有與這種核苷酸相似功能的衍生物。這種核苷酸衍生物與核苷酸類似物在本領域公知。這種核苷酸衍生物的實例例如包括但不限於硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、甲基磷酸酯、手性甲基磷酸酯、2-O-甲基核糖核苷酸、肽核酸(PNA)。
如此處所用，術語「變體」指起始物質如多核苷酸的一部分被改變的物質。這種變體包括具有替換、添加或缺失的變體、截短型變體、等位基因變體等。等位基因指與另一個位於相同遺傳座位並可以互相有區別的遺傳變體。
本發明的誘餌可用本領域已知的化學或生化合成方法製備。例如，當用核酸作為誘餌化合物時，可以採用遺傳工程中常用的核酸合成方法。例如，DNA合成儀可直接用於合成預定的誘餌核酸。此外，可以合成這些核酸、含所述核酸的核酸或其部分，隨後用PCR方法、克隆載體等擴增。而且，將由這些方法獲得的核酸用限制酶等切割，並用DNA連接酶等連接，等等，以製備預定核酸。為獲得在細胞中更穩定的誘餌核酸，所述核酸中的鹼基、糖和磷酸酯部分可以被化學修飾，如烷基化、醯基化等。
本發明提供含單獨或與穩定化合物、稀釋劑、載體或其它成分或藥劑組合的上述誘餌化合物的藥物組合物。
如此處所用，術語「患者」或「對象」指被施加本發明的治療或組合物的生物體。患者可以是任何動物，如靈長類、嚙齒類等。只要可以施加本發明的治療或組合物即可。優選的，所述患者可以是人，如此處所用，術語「由受NF-κB調節的基因表達引起的疾病、障礙和/或病症」指原因是轉錄因子NF-κB調節(例如增加、減少、延遲等)表達(例如翻譯或轉錄)的疾病或障礙。這種疾病、障礙或病症包括但不限於哮喘、鼻炎、COPD等。
如此處所用，術語「與嗜酸性粒細胞異常相關的疾病、障礙和/或病症」指體內(如血液中)嗜酸性粒細胞水平位於正常水平以外作為原因或結果的任何疾病、障礙和/或病症。嗜酸性粒細胞表面有IgE受體，並在變應性疾病中起重要作用。
這些與嗜酸性粒細胞異常相關的疾病包括但不限於哮喘(支氣管哮喘、小兒哮喘、變應性哮喘、特應性哮喘、類固醇抵抗型哮喘(SRA)、非變應性哮喘(內因性哮喘、外因性哮喘如阿司匹林哮喘、心臟性哮喘和感染性哮喘)；和其它嗜酸性粒細胞異常如鼻炎、變應性疾病等。
如此處所用，術語「與呼吸系統相關的疾病、障礙和/或病症」指與呼吸系統相關的任何疾病、障礙和/或病症。這種與呼吸系統相關的疾病包括但不限於氣道炎性疾病、氣道狹窄或鼻腔炎性疾病。
如此處所用，與呼吸系統相關的疾病包括COPD、哮喘、鼻炎等。
如此處所用，術語「COPD」(Chronic Obstructive Pulmonary Disease的縮寫)總起來說表示空氣進出肺慢性變差並因而逐漸變得有病的疾病。它基本包括如今已被稱為「慢性支氣管炎」和「肺氣腫」的任何疾病。舉例來說，COPD病情包括每天連續咳嗽並有痰、甚至患者沒有感冒時也是如此的情況，和當移動他/她的身體如上下樓梯等時患者感到呼吸困難的情況。一些患者在當他們以與沒有咳嗽和痰的同齡人相同步伐行走而感到疲勞時將只識別出呼吸困難。這些是常見病情，並因而被誤認為是由於衰老導致。然而，COPD的特徵是連續表現咳嗽、有痰和呼吸困難等。
COPD主要分成傳統稱謂的「慢性支氣管炎」和「肺氣腫」，其中慢性支氣管炎有支氣管和細支氣管疾病，肺氣腫特徵是肺泡疾病。多數患者同時看到兩種類型疾病。即使患者有慢性支氣管炎，也有不總是伴隨咳嗽和有痰的病例，因此最近將它稱為「氣道疾病類型」，應該理解所有這些都被本發明目標包括。
多數氣道疾病類型被識別為氣道表面發炎並分泌大量粘液的情況。此外，氣道壁變厚，氣道變狹窄，因而通氣被破壞。
肺氣腫表示那些疾病，其中慢性炎症引起肺泡破壞和融合，因而肺含空氣導致起泡或膨脹的肺組織擠壓氣道，從而破壞氣道並且通氣被破壞。
與上述兩種疾病類型無關，肺中的細胞都已經被破壞，因而沒有根本性治療，除非假定肺中的細胞可以再生。應該注意本發明有史以來第一次提供COPD的根本性治療。
如下診斷COPD可以用稱為「肺量計」的裝置經簡單的呼吸功能測試(肺量測試)進行COPD診斷。肺量測試是肺容量和呼氣時氣道通暢程度的測試。
「用力肺活量(forced vital capacity)(FVC)」表示當對象儘可能吸氣隨後徹底呼出時的呼吸體積，而「一秒內體積(FEV1.0)」是吸氣後第一秒內呼出的體積，在肺量測試中測量這兩個數據。然後，如果FEV1.0值除以FVC值所得的值(以下稱為一秒比率「FEV1.0％」)小於70％，則認為有COPD的可能。調查確認病情、症狀、吸菸史或狀態、生活環境和疾病史等，如果必要也將進行其它測試，例如，包括胸部X-射線檢查、CT掃描等的成像診斷、研究是否身體缺氧的血氣分析等。這使用動脈血或使用脈衝式量氧計(pulse oxymeter)測量氧，以進行COPD診斷，其中所述脈衝式量氧計是一種裝備在指尖等的小型測定裝置。
如果一秒比率(FEV1.0％)＝一秒體積/用力肺活量×100＜70％，則所述對象診斷有COPD。
(COPD嚴重程度)優選根據疾病的嚴重程度進行COPD治療。因此，根據需要確定COPD的嚴重程度。基於可由肺量測試測量的％預期一秒體積(％FEV1.0)對COPD的嚴重程度分類。
表1

FEV1.0一秒體積；FVC用力肺活量GOLDCOPD global strategy for diagnosis，control and prevention(2003，revision)如此處所用，術語「哮喘」指呼吸系統(例如，氣道(鼻腔、咽、喉、氣管、支氣管)和肺)對黏膜相關浮腫、粘稠分泌物和任意其它刺激具有更強反應、導致氣道狹窄引起呼氣困難的病症。哮喘包括但不限於，例如，支氣管哮喘、小兒哮喘、變應性哮喘、特應性哮喘、類固醇抵抗性哮喘、非變應性哮喘、內因性哮喘、外因性哮喘、阿司匹林哮喘、心臟性哮喘和感染性哮喘等。
如此處所用，術語「鼻炎」指鼻腔黏膜的任何炎性疾病。鼻炎包括但不限於，例如變應性鼻炎、花粉病、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥大性鼻炎、慢性竇炎(積膿症)和鼻中隔偏移等。變應性鼻炎是與作為主要症狀的頻繁打噴嚏、大量鼻液溢和因鼻黏膜水腫性增生而致的鼻塞相關的鼻炎，因此變應原(抗原)包括居室塵、塵蟎、雪松或其它的花粉等，據說日本有一千五百萬患者。
實施本發明的藥物組合物和方法中，在患者是人的情況下，優選在人體試驗之前，進行體外、隨後體內和最終的動物試驗以確定對預期治療或預防適當的劑量。作為預備試驗，組合物抗細胞系和/或動物模型的效果可以用本領域已知技術測定。根據本發明，可用於確定是否可施用特定化合物的體外測試包括觀察轉錄因子與轉錄因子結合序列之間的結合等。在動物水平試驗中，可以象對人一樣向動物施用所述組合物並確認治療效果的水平例如觀察嗜酸性粒細胞變化，從而進行測定。本領域中應該理解，一旦在動物模型中測定到治療和/或預防效果，通常在人中將獲得相似效果。
本發明的藥物組合物可以這種形式使用，其中誘餌可被攝入目標組織中的受影響部分或細胞中。
本發明藥物組合物可以在任何無菌生物相容性藥物載體(包括但不限於生理鹽水、緩衝生理鹽水、右旋糖和水)中被施用。上述誘餌化合物在藥物組合物中與適當賦形劑、佐劑和/或藥學上可接受的載體混合而使用。這種組合物可以單獨或與藥物組合物中的另一種藥物成分組合施用於患者。在本發明的一個實施方案中，所述藥學上可接受的載體沒有藥物活性。
可通過口腔或非胃腸道途徑施用本發明藥物組合物。非胃腸道遞送方法包括局部、動脈內(如直接入腫瘤、動脈瘤等)、肌肉內、皮下、骨髓內、入蛛網膜下腔、心室內、靜脈內、腹膜內或鼻內施用。除了誘餌化合物以外，本發明藥物組合物還包含藥學上可接受的載體，如賦形劑和加速處理所述誘餌化合物的其它化合物，從而製備藥學上可接受的製劑。處方和給藥的進一步技術細節例如描述於最新版「REMINGTON』S PHARMACEUTICAL SCIENCES」(Maack Publishing Co.，Easton，PA)。
用於給藥的藥物組合物可以用本領域公知的藥學上可接受的載體製備成適於給藥的形式。這種載體可以製備成片劑、丸劑、糖衣劑、膠囊、液體、凝膠、糖漿、膏劑(slurry)、懸液等，它們適於患者使用所述藥物組合物。藥學上可接受的載體包括但不限於脂質體、乳糖、海藻糖、蔗糖、甘露醇、木糖醇、結晶纖維素、脫乙醯殼多糖、碳酸鈣、滑石、氧化鈦或矽膠(氧化矽)等。
所用藥物組合物可以例如如下方式獲得將活性化合物與固體賦形劑組合，必要時將所得混合物研磨成粉，如果必要再加入適當化合物而獲得片或糖衣劑的芯，並加工顆粒混合物。適當賦形劑可以是碳水化合物或蛋白質填充劑，包括但不限於以下糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；來源於玉米(玉米澱粉)、小麥、稻米、馬鈴薯或其它植物的澱粉；纖維素如甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素或羧甲基纖維素鈉；和膠，包括阿拉伯膠和黃芪膠；和蛋白質，如明膠和膠原。如果必要可以使用崩解劑或助溶劑，如交聯聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、海藻酸或其鹽(如海藻酸鈉)。
糖衣劑芯與適當的包衣如濃縮糖溶液一起提供。糖衣劑芯也可以含有阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、carbopolygel、聚乙二醇和/或二氧化鈦、漆溶液以及適當有機溶劑或溶劑混合液。為識別產品或表徵活性化合物的量(即劑量)，染料或顏料可以加入片劑或糖衣劑中。
可使用的藥物組合物例如可以含有由明膠膠囊、明膠和包衣(如甘油或山梨醇)組成的密封軟膠囊。明膠膠囊可以含有活性成分，其中混合填充劑或粘合劑如乳糖或澱粉、潤滑劑如滑石或硬脂酸鎂，和任選的穩定劑。在軟膠囊中，所述誘餌化合物可以溶於或懸於適當液體如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇中，其中有或無穩定劑。
用於非胃腸道給藥的藥物組合物含有活性化合物的水溶液。對於注射目的，本發明的藥物組合物在水性溶液中製備，優選Hank’s溶液、Ringer’s溶液或生理適合的緩衝液如緩衝生理鹽水。注射用水懸液可以含有增加懸液粘度的物質(如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或葡聚糖)。此外，活性化合物的懸液可以製備為適當的油性懸液。適當的親脂性溶劑或介質包括脂肪酸如麻油、合成脂肪酸酯如油酸乙酯或三甘油酯，或脂質體。如果必要，懸液可以含有允許製備高濃度溶液的穩定劑，或用於增加所述化合物溶解性的適當藥物成分或試劑。
對於局部給藥，如肺部給藥、經氣道給藥或鼻內給藥，製劑中可使用透過特定屏障的適當通透劑。這種通透劑在本領域公知。
本發明藥物組合物可以用與本領域已知方法相似的方法製備(如常規混合、溶解、造粒、製備糖衣劑、淘析、乳化、膠囊化、包合或凍幹)。
因此，應該理解，根據本領域已知技術，可以容易的實施適用於向呼吸系統給藥的方法。例如，應該理解氣道內給藥或經氣道吸收優選的可適於用噴霧或吸入的形式包括微粒如乾粉。如此處所用，例如，本發明適於經定量噴霧式吸入器(MDI)、乾粉吸入器(DPI)或噴霧器施用。對於鼻腔給藥，應該理解水溶液也適合。對於肺部給藥，應該理解優選使用與氣道給藥相似的劑量或甚至更細的微粒。乾粉製造可通過選自以下之一的方式球磨、珠磨、噴射磨、ultimaizer、研缽、石磨、噴霧乾燥和超臨界流體。對於氣道給藥，理想的乾粉的氣體動力學平均粒徑典型是約0.01至約50μm，優選約0.1至約30μm，更優選約0.1至約10μm。對於肺部給藥，考慮到遞送入肺泡，優選製造具有氣體動力學平均粒徑約3μm或更小的顆粒，但本發明不限於此。術語「氣體動力學平均粒徑」指沉降速率與所研究顆粒相同、其密度為1(g/cm3)並具有球形的粒徑。可基於顆粒沉降距離的差異或顆粒加速時慣性差異進行這種粒徑的測定。例如，階式碰撞取樣器等通過分級這些顆粒而捕集顆粒。本發明使用這種氣體動力學平均粒徑的原因是基於一種理論，其中經呼吸而吸入身體的沉積到每個位點上的顆粒的比例可以用氣體動力學平均粒徑確定。典型的，動態光散射(例如，用可從HORIBA獲得的LB-550)或雷射衍射(例如用可從HORIBA獲得的LB-500)、離心沉降(例如可從HORIBA獲得的CPA-500)等可用於測定。如此處所用，術語「動態光散射」指用雷射照射溶液中顆粒並從輸出散射光的隨時間波動獲得布朗運動速率(分散效率)而測量粒徑的方法。雷射衍射法是用光散射現象(Fraunhofer現象)和米氏散射現象的方式獲得粒徑的方法。離心沉降滲透方法是通過在介質中沉降的顆粒直徑與沉降速度之間關係而測量粒徑的方法。
優選的，在非胃腸道給藥的情況下，如向受影響部位的細胞或預定組織的細胞局部給藥，本發明藥物組合物可以含有合成或天然存在的親水聚合物作為載體。這種親水聚合物的實例包括羥丙基纖維素和聚乙二醇。本發明的誘餌化合物可與上述親水聚合物在適當溶劑中混合。可用例如空氣乾燥的方法去除溶劑。所得化合物可成形為預期形式如片，然後可給予靶位點。這種含親水聚合物的製劑具有低含水量、優異的儲存期限，並具有優異的保持所述誘餌化合物的能力，因為使用時所述製劑吸水並變成凝膠。
這種片可以包括親水片，通過混合多元醇與上述組合物成分相似的化合物如纖維素或澱粉、或其衍生物、合成聚合化合物等、並調節片的硬度而獲得。
這種片可以在腹腔鏡下放置在靶位點內。當前，腹腔鏡手術已經顯著的發展為一項非侵入性技術。通過組合本發明的藥物組合物以及腹腔鏡技術，可以提供可重複使用的治療疾病的方法。
作為替代方案，當核酸或其修飾物用作誘餌時，本發明藥物組合物有利地使用通常在基因導入方法中使用的形式，如用仙臺病毒(HVJ)等的膜融合脂質體製劑、用細胞內吞等的脂質體製劑、含陽離子脂的脂質體製劑如Lipofectamine(LifetechOriental)等，或用逆病毒載體、腺病毒載體等的病毒製劑。具體而言，優選膜融合脂質體製劑。
所述脂質體製劑是以下脂質體構造物的任一種大單層囊泡(LUV)、多層囊泡(MLV)和小單層囊泡(SUV)。LUV具有200-1000nm的顆粒系統。MLV具有400-3500nm的顆粒系統。SUV具有20-50nm的顆粒系統。用仙臺病毒等的膜融合脂質體製劑優選使用具有200nm-1000nm顆粒體系的MLV。
對製備脂質體的方法沒有特別限制，只要脂質體能保留誘餌即可。脂質體可用常用方法製備，例如，反相蒸發法(Szoka，F et al.，Biochim.Biophys.Acta，Vol.601559(1980))、醚注入法(Deamer，D.W.Ann.N.Y.Acad.Sci.，Vol.308 250(1978))、表面活性劑法(Brunner，J et al.Biochim.Biophys.Acta，Vol.455 322(1976))等。
用於形成脂質體的脂的實例包括磷脂、膽固醇、氮脂(nitrogen lipids)等。一般來說，優選磷脂，包括天然存在的磷脂，如磷脂醯膽鹼、磷脂醯絲氨酸、磷脂醯甘油、磷脂醯肌醇、磷脂醯乙醇胺、磷脂酸、心磷脂、鞘磷脂、卵黃卵磷脂、大豆卵磷脂、溶血卵磷脂等，或用常用方法氫化的對應磷脂，還有合成磷脂，如聯十六烷基磷酸酯(dicetylphosphate)、二硬脂醯磷脂醯膽鹼、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺、二棕櫚醯磷脂醯絲氨酸、桐醯磷脂醯膽鹼(eleostearoylphosphatidylcholine)、桐醯磷脂醯乙醇胺、桐醯磷脂醯絲氨酸等。
包括這些磷脂的脂類可以單獨使用，或至少兩種組合使用。在此情況下，分子內含具陽離子基團的原子團如乙醇胺、膽鹼等的脂類可用於增加帶負電誘餌核酸的結合速率。除了用於形成脂質體的主要磷脂以外，可以使用添加劑如膽固醇、硬脂胺、α-生育酚等，它們已被公認為形成脂質體的添加劑。
由此獲得的脂質體還可含有促進膜融合的物質，如從仙臺病毒純化的膜融合促進蛋白、滅活仙臺病毒等，以加速吸收入受影響部位的細胞或預定組織的細胞。
製備脂質體製劑的示例性方法將在下面具體描述。例如，上述用於形成脂質體的物質與膽固醇一起溶於有機溶劑如四氫呋喃、氯仿、乙醇等中。所得溶液放入適當容器，隨後減壓去除溶劑，從而在容器內壁形成可形成脂質體物質的膜。將含誘餌的緩衝溶液加入容器中，隨後攪拌。如果必要將上述促進膜融合的物質加入所得脂質體中，隨後分離脂質體。由此獲得的含誘餌脂質體可懸於適當溶劑中，或可加以凍幹並在以後分散於適當溶劑中。所得懸液可用於治療。可在分離脂質體之後和使用之前的中間時期加入促進膜融合的物質。
如此處所用，術語或「治療(treatment或therapy)」指當患者感染疾病或障礙時防止這種疾病或障礙的惡化，優選至少維持現狀，更優選緩解，更優選消退。
如此處所用，術語「預防(prophylaxis或prevention)」當針對疾病或障礙時指在這種狀態出現之前進行一種處理從而使這種狀態不會發生。因此，對於疾病或障礙而言，它包括這種狀態的防止、延遲等，以及惡化的防止。
如此處所用，對於疾病、障礙或病症而言，術語「處理(treatment)」的最廣義含義指對疾病、障礙或病症的任何醫學行為，包括診斷、治療、預防、預後等的任何行為。
通常，用於藥物治療呼吸系統疾病如哮喘的藥物分為緩解劑和控制劑，其中所述緩解劑是用於減輕發作的發作處理藥物，所述控制劑是用於預防發作的長期控制藥物。應該理解，NF-κB可用於預防和治療。這具體是因為防止發作基本是哮喘的根本性治療，更重要的是具有根本性治療效果，而緩解發作劑則沒有這種效果。一旦明白本發明可用於其它疾病如鼻炎、COPD等，它也可用於治療。另一方面，一旦明白本發明可用於治療，那麼它也可用於預防。因此，應該明白在本發明中當已知預防或治療的適當劑量時，本領域技術人員將能從已知劑量計算用於治療或預防的適當劑量。
本發明藥物組合物包括含可達到誘餌化合物預定目的的有效量誘餌化合物的組合物。「預防有效量」、「治療有效量」和「藥理有效量」是本領域技術人員公知的術語，指產生預定藥理效果如預防或治療效果的藥劑有效量。因此，預防有效量是足以避免發生症狀的量，治療有效量是足以降低待治療疾病表現的量。確認對預定應用的有效量(如治療有效量)的有用測試是測量從目標疾病的恢復程度。實際給藥量取決於待治療個體。優選優化該量以獲得預期效果，而沒有顯著副作用。確定治療有效量在本領域技術人員的能力範圍內。
可用細胞培養測試或任何適當動物模型初步估計任何化合物的預防或治療有效量。動物模型用於獲得預期濃度範圍和給藥途徑。之後，這些信息可用於確定用於向人給藥時的劑量和途徑。
預防和治療有效量分別指足以預防疾病發生的量，和導致疾病的症狀或狀態改善的誘餌化合物的量。這種化合物的治療效果和毒性可用標準藥學方法在細胞培養物或試驗動物中確定(如ED50，對群體中50％治療有效的劑量；LD50，導致群體中50％死亡的劑量)。治療和毒性作用的劑量比是治療指數，它可以表示為ED50/LD50的比。優選表現高治療指數的藥物組合物。從細胞培養測試和動物研究中獲得的數據可用於配製用於人的劑量範圍。這些化合物的劑量優選位於包括ED50同時很少或沒有毒性的循環濃度範圍內。這種劑量可根據所用劑型、患者易感性和給藥途徑而在此範圍內變化。作為實例，可根據患者年齡和其它情況、疾病類型、所用誘餌類型等適當選擇誘餌劑量。例如，在血管內給藥、肌肉內給藥、關節內給藥或塗敷於皮膚的情況下，一般可以每天一次到幾次施用1μg到100mg。
確切劑量由各醫生根據待治療患者的狀況選擇。調節劑量和給藥以提供足夠水平的活性部分或達到預期效果。待考慮的其它因素包括疾病狀態的嚴重程度(如腫瘤大小和位置)；患者的年齡、重量和性別；飲食限制時間和給藥頻率、潛在藥物相互作用、反應易感性和對治療的抗性/反應)。根據具體製劑的半衰期和清除速率，持續作用的藥物組合物可以每3-4天、每周或每兩周施用一次。具體劑量和遞送方法的指導在本領域已知的出版物中提供。
根據疾病類型、待使用誘餌類型等，含誘餌作為主要成分而製備的藥物產品可以經多種方式施用。例如，對於哮喘、COPD等，霧化器型吸入器如MDI、BDI或噴霧器等可用於吸入。例如對於鼻炎，可使用吸收和吸入進行給藥。
常規用作經鼻腔、氣道和鼻通路給藥方法等的吸入方法將在下面描述。在氣道內給藥劑型、經氣道吸收劑型或經鼻吸收劑型中，通常優選製備合劑(mist)形式的藥物溶液或作為細粉末(乾粉)。通常，所形成藥物溶液可經噴霧器的方式吸入，加工成粉末的那些可用加有藥物的氣霧化類型的器具MDI(定量噴霧式吸入器)或呼出吸入系統DPI(乾粉吸入器)吸入。
對於粉末吸入器，現有兩種類型用於快速和深度吸入，「乾粉吸入器(DPI)」和延遲吸入類型「定量噴霧式吸入器(MDI)」。
DPI又分成三類多劑量儲器(產品名稱；Turbuhaler，得自AstraZeneca)、多單位劑量(產品名稱；Accuhaler/Diskus，得自GSK)、單位劑量(很多製造商)。
吸入器指由口端(mouth piece)和藥筒(管)組成的藥盒，通常管兩端經鋁箔密封使用。使用之前，將管裝上口端以刺破鋁箔，從而允許吸入內部的粉狀藥物。
另一方面，可經噴霧器或呼吸器、人工呼吸器的器具吸收藥物溶液。噴霧器產生的藥物氣溶膠速度緩慢並在空氣中流動，從而使任何人容易吸收藥物，這是其優點。
珠磨是用於研磨和分散的裝置，經向容器中加入珠子、旋轉中心轉軸以移動珠子、遞送物質到珠子並研磨珠子而提供。
噴射磨是經高壓氣流而研磨顆粒的裝置，將顆粒加速到約聲速在氣流中引起碰撞從而研磨顆粒。
ultimaizer是用於微粒化的裝置，其中是經過使用經氣體如空氣、氮氣等而加壓霧化或加壓的漿狀物質在極端速度下互相碰撞粉體。
超臨界流體微粒化是經過噴霧乾燥溶於溶劑中藥物的方式而製造微粒的方法，其中通過從連接於加壓容器內的噴嘴並溶於超臨界CO2而快速膨脹。
用於本發明的乾粉的平均粒徑不限制，但通常在約0.01-約50μm，優選約0.05μm-約30μm，更優選約0.1μm-約1μm。
當以位點選擇性方式給藥時，為作用於氣管，通常要求氣體動力學平均粒徑約10-約30微米；為作用於支氣管，通常要求氣體動力學平均粒徑約3-約10微米；為作用於肺泡，通常要求氣體動力學平均粒徑約3微米或更小，優選氣體動力學平均粒徑約2微米或更小，並優選要求均勻粒徑。
本發明的NF-κB劑量不限制於特定值，但當以乾粉用於氣道內給藥或經氣道吸入時，劑量通常是每個成年個體10μg-100mg/輪，優選50μg-50mg/輪，更優選10mg或更少/輪。當作為經鼻吸入劑給藥時，特別是作為鼻炎滴鼻劑給藥時，劑量通常是每個成年個體10μg-100mg/輪，優選50μg-50mg/輪，更優選10mg或更少/輪。根據目標疾病、狀況(程度)、年齡和是否有併發症，劑量可以適當變化。
此外，本發明NF-κB誘餌可以裸形式施用，或可以在各種載體如HVJ-囊膜載體中將誘餌包括在其中施用。
製造本發明乾粉時，通常使用賦形劑。
可用的賦形劑是對NF-κB無活性的，並且只要被認為作為藥物添加劑使用，對這種賦形劑沒有限制，例如優選包括單糖如半乳糖、甘露糖、山梨糖；二糖如乳糖、蔗糖和海藻糖等；多糖如澱粉、棉子糖、葡聚糖等；糖醇(包括甘油、赤蘚糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨醇、甘露醇)、二元醇(包括乙二醇、丙二醇、聚乙二醇、聚丙二醇)、纖維素樣聚合物(包括羥基纖維素、羥丙基纖維素)、不溶性添加劑(結晶纖維素、脫乙醯殼多糖、碳酸鈣、滑石、氧化鈦或矽膠(氧化矽))或其混合物。
噴劑形式的氣溶膠系統例如包括內含推進劑的容器，也在開發無推進劑的氣溶膠系統。此外，氣溶膠系統中推進劑包含與常規添加劑如乳糖一起的活性成分。由這些成分組成的組合物決定氣溶膠吸入劑的特性，也即，例如顆粒分布、遞送速率、粘度等。
氣溶膠可以作為兩相氣溶膠(即氣體和液體)或三相氣溶膠(氣體、液體和固體或液體)獲得。兩相氣溶膠由溶於液化推進劑和噴霧推進劑中的活性物質溶液組成。溶劑例如包括推進劑或推進劑和醇或丙二醇等的混合物。聚乙二醇用於改善活性物質的溶解度。
三相系統包括懸劑或乳劑，每種包括與混合推進劑一起的一種或多種活性成分。懸劑包括經常規添加劑如潤溼劑和/或固體載體如滑石或膠體二氧化矽的方式分散於推進劑系統中的活性成分。如果可能，使用已知推進劑如烴以防止破壞臭氧層。
只有如果吸入溶液霧化成1-10μm大小範圍的極小顆粒，吸入才有可能。優選吸入其中微細分布的氣溶膠。在除上述以外的常規氣溶膠情況下，優選不吸入。為獲得關於氣溶膠吸入劑的詳細信息，例如可參考藥典如日本藥典、美國藥典等，它們的全部內容引入此處作為參考。
根據本發明使用的脂質體優選是0.1μm-2μm的大小，特別優選0.4μm。具體而言，優選使用單層脂質體。用擠出加工裝置或高壓過濾可以實現脂質體製備。例如通過將幹脂膜重構於期望液體中可以製備脂質體(例如，Parthasarathy et al.，CancerChemother.and Pharmacol.1999，43(4)，277-283)。由此而製備所謂的多層脂質體(即在水性核心周圍有多個脂層的脂質體)。這種脂質體的大小極其均勻。
另一方面，本發明提供預防或治療肺組織的系統，其含有向肺給藥的器具和適於肺給藥形式的NF-κB誘餌。應該明白，只要系統利於向肺施用藥劑，這種系統可以是任何形式。實現肺給藥的這種器具例如包括但不限於吸入裝置、支氣管鏡等。
在優選實施方案中，所用的NF-κB誘餌可以是任何形式，如乾粉、脂質體、微粒等。
在一個實施方案中，用於本發明組合物中的NF-κB為有效濃度。這種濃度可以在簡單的體外試驗中確定。這種試驗包括但不限於例如，經閃爍曲線等方式確定放射性同位素(如I125)標記的NF-κB誘餌的方法。優選的，有利地使用適於臨床使用的閃爍曲線。這是因為它能用大型動物如狗進行確認。
在優選實施方案中，所用NF-κB誘餌可施用於期望組織如肺組織。這種選擇性給藥可通過描述為本發明系統中優選給藥器具如吸入器或支氣管鏡的優選器具實現。因此，更優選的，NF-κB誘餌基本上不施用於除期望組織如肺以外的其它組織。如果NF-κB誘餌施用於除期望組織以外的其它組織，它可能引起意料之外的事件，導致出現副作用。
可使用的肺給藥系統是能將本發明的NF-κB誘餌遞送到肺的任何系統。這種肺給藥系統包括吸入器或支氣管鏡，並包括Olympus Inc.商業供應的支氣管鏡系統。
下面將以實施例方式描述本發明。這些實施例只用於說明目的。本發明不限於這些實施例或本發明以上的詳細描述，而只受所附權利要求的限制。
實施例下面將以實施例方式描述本發明，這些實施例僅用於說明本發明，而非要限制本發明。
(實施例1製備誘餌)以下誘餌寡聚脫氧核苷酸已被製備。
所用誘餌序列如下此處所用誘餌NF-κB誘餌(SEQ ID NO1)5′-CCT-TGA-AGG-GAT-TTC-CCT-CC-3′3′-GGA-GGG-AAA-TCC-CTT-CAA-GG-5′打亂的NF-κB誘餌(SEQ ID NO2)5′-TTG-CCG-TAC-CTG-ACT-TAG-CC-3′3′-GGC-TAA-GTC-AGG-TAC-GGC-AA-5′NF-κB誘餌變體(SEQ ID NO3)5′-GGG(A/G)(C/A/T)T(T/C)(T/C)(C/A/T)C-3′(SEQ ID NO3)3′-CCC(T/C)(G/T/A)A(A/G)(A/G)(G/T/A)G-5′這些誘餌溶液以100mg/管保存於-20℃直至使用。
(實施例2使用大鼠哮喘模型的NF-κB誘餌治療)接著，建立哮喘模型以證明根據本發明的誘餌的效果。基本基於描述於Eur JPharmacol.1995 Dec 7；293(4)401-12中的方法建立哮喘模型。
(動物和致敏方法)從Charles River，Japan獲得Brown Norway大鼠(8-10周齡；重200-300g)。基於大阪大學在動物福利精神下制定的規定繁殖並維持大鼠。經頸部皮下注射向這些大鼠施用溶於1ml無熱源鹽水中的4mg氫氧化鋁和1mg卵清蛋白(OVA；Sigma，grade V)進行致敏。含3×109熱滅活細菌的百日咳博代氏菌(Bordetella pertussis)疫苗作為佐劑用於腹膜內注射。與上述相同但缺少卵清蛋白的溶液作為對照用於腹膜內注射，從而提供陰性對照。
(製備仙臺病毒囊膜載體)如下製備仙臺病毒(HVJ)囊膜載體(HVJ-E)。簡單的說，經紫外照射(99mJ/cm2)滅活病毒懸液(1.0×104血凝單位(HAU))，並與誘餌寡核苷酸(200μg)和0.3％Triton-X混合。離心後用1ml平衡鹽溶液(BSS；10mM Tris-Cl，pH7.5，137mM NaCl，和5.4mM KCl)洗滌滅活病毒懸液，以去除表面活性劑和未摻入的寡核苷酸。離心後將囊膜載體懸於適量磷酸鹽緩衝液(PBS)中。載體在4℃保存直至使用。
(實驗方案)致敏後12天，如下處置大鼠。使用口腔氣管(orotracheal)滴注，分別施用(1)0.5ml生理鹽水(對照)；(2)500μg裸誘餌/0.5ml；(3)200μg用HVJ-E 1.0×104HAU處理的誘餌/0.5ml；(4)500μg用HVJ-E 2.5×104HAU處理的誘餌/0.5ml HVJ-E；(5)HVJ-E 2.5×104HAU/0.5ml。在第14天，用5％氣溶膠化的卵清蛋白利用噴霧器(PARIturbo)激發5分鐘。氣流速率是7-8升/分鐘。結果誘導產生了氣道過敏。實驗方案的流程圖示於圖1。
(導入誘餌)經鼻吸入(用氣溶膠)或插管(液體、氣溶膠、呼吸器)向大鼠施用誘餌。
第一個實驗中，如下施用誘餌2mg×1次、1mg×2次或2mg×2次(氣溶膠)或0.5mg×1次(液體給藥)。
第二個實驗中，如上述用HVJ-E製備誘餌並施用。
(支氣管肺泡灌洗(BAL))卵清蛋白激發後24小時收集BAL液。腹膜內注射超劑量戊巴比妥鈉對大鼠實施安樂死。用5ml磷酸鹽緩衝液(PBS；137mM NaCl，10mM磷酸鈉緩衝液pH7.4，2.7mM KCl)實施BAL 4次。用血細胞計數器確定BAL液中的細胞總數。通過用Diff-Quick染料(IBMC Inc.，Chicago，ILCatalog# K7124)計數300餘個細胞來實施差異細胞計數。
(結果)圖2顯示第一次實驗中BAL中嗜酸性粒細胞百分比的表現。發現卵清蛋白激發引起嗜酸性粒細胞數的統計學顯著增加(p＜0.01)。激發以後進行氣溶膠處理或液體處理。作為結果，在每種情況下，嗜酸性粒細胞增加被統計學顯著的抑制(每組p＝0.08)。因此，證明了本發明誘餌對引起嗜酸性粒細胞異常的疾病如哮喘等是有效的，與給藥方法無關。
圖3顯示使用仙臺病毒作為另一種給藥方法時本發明誘餌的效果。卵清蛋白激發後用上述HVJ-E誘餌藥方進行處理。結果，HVJ-E誘餌具有比裸誘餌顯著更高的效果(見圖4)。具有2.5倍量的HVJ-E製劑具有統計學顯著更高的治療效果。證明這種HVJ-E效果不是由於載體自身。因而本發明中證明HVJ-E製劑有更高治療效果。
(實施例3用變體治療)接下來，代替上述實施例中使用的誘餌，在哮喘模型大鼠中使用誘餌變體。確認是否能用誘餌變體獲得相同效果。此處，使用NF-κB的共有序列5′-GGG(A/G)(C/A/T)T(T/C)(T/C)(C/A/T)C-3′(SEQ ID NO3)作為變體。因此證明任何被NF-κB識別的序列都可用於治療和預防受NF-κB調節的基因表達引起的疾病、障礙和/或病症，和嗜酸性粒細胞異常引起的疾病、障礙和/或病症。
除了使用不同誘餌，按上述實施例進行相同實驗。對於主動脈瘤或哮喘，已經證明表現出治療和預防效果。因此，本發明不限於特定NF-κB誘餌。已經證明，只要保持生物活性(即結合轉錄因子序列的活性)，任何變體NF-κB誘餌都具有相同治療和預防效果。
(實施例4NF-κB誘餌對大鼠哮喘模型的效果)接下來，闡明NF-κB對大鼠哮喘模型的效果。在本實施例中，施用裸NF-κB誘餌的粉末吸入劑。
(製備NF-κB誘餌粉末吸入劑)NF-κB(100mg)與18g氧化鋯珠(直徑3.0mm)一起位於透明玻璃容器中(大小25.5mm，高48.5mm)，並以200rpm在球磨旋轉搖床(Asahi Rika)上研磨10小時。
將乳糖(50g，產品名Pharmatose 450M，得自DMV)在噴射磨(產品名A-O噴射磨，得自Seishin Enterprise)中研磨。
為確定由此獲得的NF-κB誘餌和乳糖的大小，使用掃描電子顯微鏡(S-570，得自HITACHI)觀察。結果示於圖5(NF-κB誘餌)和圖6(乳糖)。照片放大倍數是×1000，每個顆粒的大小小於10μm。
通常認為使用10μm或更小施用於氣管是理想的，但本發明不限於此。此外，已知使用3μm或更小的那些允許施用到肺泡中。
研磨後NF-κB誘餌(100mg)、研磨後乳糖(3700mg)和輕無水矽酸(Aerosil 200，得自Japan Aerosil Inc.；200mg)在小研磨器(Shibata Kagaku Inc.製造)中混合1分鐘，得到NF-κB誘餌混合物粉末(25μg/mg)。
NF-κB誘餌混合物粉末(25μg/mg；1000mg)、研磨後乳糖(2850mg)和輕無水矽酸(150mg)在小研磨器中混合1分鐘，得到NF-κB誘餌混合物粉末(6.25μg/mg)。
NF-κB誘餌混合物粉末(6.25μg/mg；800mg)、研磨後乳糖(3040mg)和輕無水矽酸(160mg)在小研磨器中混合1分鐘，得到NF-κB誘餌混合物粉末(1.25μg/mg)。
NF-κB誘餌混合物粉末(25μg/mg；400mg)、研磨後乳糖(3420mg)和輕無水矽酸(180mg)在小研磨器中混合1分鐘，得到NF-κB誘餌混合物粉末(2.5μg/mg)。
NF-κB誘餌混合物粉末(2.5μg/mg；400mg)、研磨後乳糖(3420mg)和輕無水矽酸(180mg)在小研磨器中混合1分鐘，得到NF-κB誘餌混合物粉末(0.25μg/mg)。
NF-κB誘餌混合物粉末(0.25μg/mg；800mg)、研磨後乳糖(3040mg)和輕無水矽酸(160mg)在小研磨器中混合1分鐘，得到NF-κB誘餌混合物粉末(0.05μg/mg)。
(實驗步驟)向雄性BN大鼠股肌施用抗原卵清蛋白OA(1mg/大鼠)，並向腹腔施用百日咳博代氏菌(Bordetella pertussis)(1.25×1010/大鼠)並主動致敏。致敏後12或13天，麻醉下吸入鹽水中的0.5％抗原，並產生變態反應。吸入抗原3天後，研究氣道對乙醯膽鹼(ACh)的反應性。用兩分鐘間隔吸入評價氣道對ACh的反應性。每次吸入進行10秒，而濃度從0.1mg/nl每次依次加倍。從吸入ACh開始氣道壓力增加5cmH2O時的ACh濃度計算為激發濃度(Provocation Concentration)5cmH2O(PC5cmH2OACh)ACh(mg/mL)。確定氣道反應性以後，進行氣道洗滌，並計算浸潤到氣道中的細胞數。作為陰性對照，準備致敏大鼠吸入鹽水的組和致敏大鼠吸入抗原與溶劑的對照組。
此外，在吸入抗原之前3天，4克由前述方法製備的NF-κB誘餌混合物粉末(0.05、0.25、1.25和6.25μg/mg)在麻醉下被大鼠吸入。本實施例中所用BN大鼠的平均體重是200g，因而NF-κB誘餌的劑量分別是1μg/kg、5μg/kg、25μg/kg和125μg/kg。
(實驗結果)如圖7和8所示，(圖7和8NF-κB誘餌在大鼠哮喘模型中的效果。圖例如下##p＜0.01vs鹽水組(學生t-檢驗)；*，**分別表示p＜0.05，0.01vs對照組(Dunnett’s多重比較檢驗))，與鹽水對照組比較，觀察到在對照組中氣道反應性(氣道超敏性)和主要由嗜酸性粒細胞組成的炎症細胞的浸潤明顯增強。NF-κB誘餌以劑量依賴的方式從5μg/kg開始抑制這些變化，在25和125μg/kg達到最大抑制。這闡明了NF-κB誘餌粉末吸入劑在大鼠哮喘模型中的療效。
表2大鼠哮喘模型附表



(實施例5NF-κB誘餌對變應性鼻炎模型的效果)本實施例證明NF-κB誘餌對大鼠鼻炎模型的效果。
(實驗方法)抗原2，4-二硝基苯基卵清蛋白(DNP-OA)(1mg/大鼠)和百日咳博代氏菌(1.25×1010)皮給予雄性SD大鼠四肢的足墊上，進行主動致敏。致敏後9天，施用抗原到兩側鼻中(10％DNP-OA×0.02mL/位點×2位點)，由此引起變態反應。發生鼻炎後6小時，靜脈注射施用染料(Pontamin Sky-Blue)，處理後9小時當觀察到峰值時解剖所述對象。取出鼻中隔周圍的組織並測定染料洩漏水平。準備向致敏大鼠鼻中給予鹽水的陰性對照組和向致敏大鼠鼻中給予抗原與溶劑的對照組。以5和125μg/mL濃度將NF-κB誘餌溶解於鹽水，之前3天每側鼻孔中滴入20μL，使得劑量分別是0.2μg和5μg。本實施例使用的SD大鼠的平均體重是200g，因而NF-κB誘餌的劑量分別是1μg/kg和25μg/kg。
(實驗結果)圖9的圖例如下##p＜0.01vs鹽水組(學生t-檢驗)；*，**分別表示p＜0.05，0.01vs對照組(Dunnett’s多重比較檢驗)。如圖9所示，其中顯示NF-κB誘餌在大鼠鼻炎模型中的效果，與陰性對照(鹽水)組比較，觀察到陽性對照組的血液滲透性明顯增強，因此可以確認出現鼻炎症狀。另一方面，NF-κB以體積依賴的方式從1μg/kg開始抑制血液滲透性增強，並在25μg/kg顯示基本完全抑制血液滲透性增強。由此證明了NF-κB誘餌在大鼠鼻炎模型中的療效。
表3鼻炎附表NF-kB

(實施例6製備比格犬COPD模型)皮下注射動物麻醉劑(Selactal，Bayer)麻醉比格犬(體重9-14kg)。以氣管內管的方式將支氣管鏡插入氣管中。豬胰彈性蛋白酶(50mg；3750單位，得自NacalaiTesque)溶於5ml鹽水，並將霧化導管(得自Olympus等)插入周圍氣管並分散到整個右肺5到10次。分散後約1個月過去後用作COPD模型肺。左肺用作正常肺進行比較。
(實施例7向比格犬模型施用NF-κB誘餌)根據實施例4的方法研磨NF-κB誘餌來製備粒徑為3μm或更小的微粒粉末。
作為NF-κB誘餌混合粉末以擴散方式用支氣管鏡進入整個右肺中5到10次，從而將NF-κB(200μg)分散入COPD模型肺中。為觀察NF-κB誘餌治療前後之間的變化，用MRI測量血流並比較。
(比較MRI結果)MRI用於準備全身麻醉後比格犬的仰臥位照片。在右頸內動脈中確認靜脈途徑並注射常用造影劑，約3秒後對肺內血管進行造影。由於造影作用，MRI信號強度已被增強。MRI信號強度依賴於血流，因而血流越多，信號越強。由於肺動脈血液體積之間的個體差異，為消除這些個體差異，接受給藥的右肺的MRI信號值除以正常左肺的值，用於左側和石側之間的比較。注射3ml常規造影劑後開始成像。對於注射造影劑後約120秒，拍照100個圓截面並連續測量和分析限於肺實質的截面的信號值。還計算MRI肺內血流體積的左右比值。基於這些結果，測量左右信號值的比值，觀察到正常犬中左右肺沒有區別，而在COPD模型中右肺血流降低，NF-κB誘餌治療模型中血流被改善，並接近正常狀態。也就是說，認識到施用NF-κB誘餌提供顯著的血流改善。
儘管此處已經描述某些優選實施方案，除了所附權利要求列出的以外，不應理解為這些實施方案是對本發明範圍的限制。在閱讀用具體和優選的實施方案在此處的說明以後，根據本領域的普通知識，本發明的各種其它修飾和等價物對於本領域技術人員將是顯而易見的，並可由他們容易的實現。本文引用的所有專利、公開的專利申請和出版物通過引用併入，就像全文在本文中列出一樣。
工業實用性藥物組合物或載體用於治療疾病，所述疾病與受NF-κB調節的基因表達或嗜酸性粒細胞異常引起的疾病相關。局部施用本發明的藥物組合物是非侵入性的，並可以重複提供。
序列表110安琪士多摩奇株式會社森下龍一青木元邦荻原俊男川崎富夫牧野寬史肉倉孝小柳晶裕120含NF-KB誘餌的用於治療和預防呼吸疾病的藥物組合物及其使用方法130AN011-1PCT150PCT/JP03/087401512003-07-091603170PatentIn version 3.2210121120212DNA213人工的220
223誘餌4001ccttgaaggg atttccctcc 20210221120212DNA213人工的220
223誘餌4002ttgccgtacc tgacttagcc 20210321110212DNA213人工的220
223誘餌4003gggrhtyyhc10
權利要求
1.一種藥物組合物，其用於治療和/或預防由受NF-κB調節的基因表達引起的呼吸系統疾病、障礙和/或病症，包含NF-κB誘餌和藥學上可接受的載體。
2.根據權利要求1的組合物，其中所述NF-κB誘餌是NF-κB誘餌或其衍生物、變體或片段，並且所述衍生物、變體或片段具有生物活性。
3.根據權利要求1的組合物，其中所述NF-κB誘餌是SEQ ID NO1列出的誘餌。
4.根據權利要求1的組合物，其中所述呼吸系統疾病、障礙和/或病症是氣道炎性疾病、氣道狹窄或鼻腔炎性疾病。
5.根據權利要求1的組合物，其中所述呼吸系統疾病、障礙和/或病症是COPD、哮喘或鼻炎。
6.根據權利要求1的組合物，其中所述呼吸系統疾病、障礙和/或病症是COPD。
7.根據權利要求1的組合物，其中所述呼吸系統疾病、障礙和/或病症是哮喘。
8.根據權利要求1的組合物，其中所述呼吸系統疾病、障礙和/或病症是鼻炎。
9.根據權利要求1的組合物，其中所述藥學上可接受的載體是親水聚合物、碳水化合物或不溶性添加劑。
10.根據權利要求1的組合物，其中所述藥學上可接受的載體是選自脂質體、乳糖、海藻糖、蔗糖、甘露醇和木糖醇的至少一種類型。
11.一種組合物，其用於治療和/或預防與嗜酸性粒細胞異常相關的呼吸系統疾病、障礙和/或病症，包含NF-κB誘餌和藥學上可接受的載體。
12.根據權利要求11的組合物，其中所述NF-κB誘餌是NF-κB誘餌或其衍生物、變體或片段，並且所述衍生物、變體或片段具有生物活性。
13.根據權利要求11的組合物，其中所述NF-κB誘餌是SEQ ID NO1列出的誘餌。
14.根據權利要求11的組合物，其中所述呼吸系統疾病、障礙和/或病症是氣道炎性、氣道狹窄性或鼻腔炎性疾病、障礙和/或病症。
15.根據權利要求11的組合物，其中所述呼吸系統疾病、障礙和/或病症是COPD、哮喘或鼻炎。
16.根據權利要求11的組合物，其中所述呼吸系統疾病、障礙和/或病症是哮喘或鼻炎，所述哮喘選自支氣管哮喘、小兒哮喘、變應性哮喘、特應性哮喘、類固醇抵抗型哮喘、非變應性哮喘、內因性哮喘、外因性哮喘、阿司匹林哮喘、心臟性哮喘和感染性哮喘；所述鼻炎選自變應性鼻炎、花粉病、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥大性鼻炎、慢性竇炎(積膿症)和鼻中隔偏移。
17.根據權利要求11的組合物，其中所述藥學上可接受的載體是親水聚合物或碳水化合物。
18.根據權利要求11的組合物，其中所述藥學上可接受的載體是選自脂質體、乳糖、海藻糖、蔗糖、甘露醇和木糖醇的一種或多種。
19.一種適於施用於呼吸系統的呼吸系統製劑，包含根據權利要求1-18中任意一項的組合物。
20.根據權利要求19的製劑，其中所述施用於呼吸系統包含施用於氣道內或經氣道吸收。
21.根據權利要求19的製劑，其中所述施用於氣道是經霧化或吸入施用於氣道。
22.根據權利要求19的製劑，其中所述施用於氣道包含經定量噴霧式吸入器(MDI)、乾粉吸入器(DPI)或噴霧器施用。
23.根據權利要求19的製劑，其中所述組合物以乾粉提供。
24.根據權利要求23的製劑，其中所述乾粉是經選自下組之一的方式生產的微粒球磨、珠磨、噴射磨、ultimaizer、研缽、石磨、噴霧乾燥和超臨界流體。
25.根據權利要求23的製劑，其中所述乾粉的氣體動力學平均粒徑為約0.01值至約50微米。
26.根據權利要求23的製劑，其中所述乾粉的氣體動力學平均粒徑為約0.05至約30微米。
27.根據權利要求23的製劑，其中所述乾粉的氣體動力學平均粒徑為約0.1至約10微米。
28.根據權利要求19的製劑，其中提供的每輪劑量是10μg-100mg。
29.根據權利要求19的製劑，其中提供的每輪劑量是50μg-50mg。
30.根據權利要求19的製劑，其中提供的每輪劑量是10mg或更少。
31.根據權利要求19的製劑，其中所述施用於呼吸系統包含經鼻吸收。
32.根據權利要求31的製劑，它是選自滴鼻劑、噴鼻劑、噴霧劑、呼吸器用劑和粉末給藥製劑的製劑。
33.根據權利要求31的製劑，它是用於鼻炎的滴鼻劑。
34.根據權利要求19的製劑，其中NF-κB誘餌包封在HVJ-E囊膜載體中。
35.根據權利要求19的製劑，其中所述施用於呼吸系統包含施用於肺。
36.治療呼吸系統的裝置，包含根據權利要求1-18中任意一項的組合物，以及將所述組合物施用於呼吸系統的器具。
37.根據權利要求36的裝置，其中所述施用於呼吸系統的器具包含選自下組的器具用於向肺給藥的器具、用於經氣道給藥的器具、用於經氣道吸收的器具和用於經鼻吸收的器具。
38.根據權利要求36的裝置，其中用於向氣道給藥的器具包含定量噴霧式吸入器(MDI)、乾粉吸入器(DPI)或噴霧器。
39.製造包含NF-κB誘餌的顆粒的方法，包括以下步驟A)提供所述誘餌和藥學上可接受的載體；B)將所述誘餌和載體乾燥並加熱到足以造粒的溫度；和C)獲得具有預期顆粒大小的顆粒。
40.根據權利要求39的方法，其中所述溫度是50攝氏度或更低。
41.根據權利要求39的方法，其中所述溫度是100攝氏度或更低。
42.根據權利要求39的方法，其中所述乾粉的氣體動力學平均粒徑為約0.01至約50微米。
43.根據權利要求39的方法，其中所述乾粉的氣體動力學平均粒徑為約0.05至約30微米。
44.根據權利要求39的方法，其中所述乾粉的氣體動力學平均粒徑為約0.1至約10微米。
45.治療和/或預防由受NF-κB調節的基因表達引起的呼吸系統疾病、障礙和/或病症的方法，包括以下步驟A)向對象的呼吸系統施用含NF-κB誘餌和藥學上可接受載體的組合物。
46.根據權利要求45的方法，其中所述呼吸系統疾病、障礙和/或病症是氣道炎性疾病、氣道狹窄或鼻腔炎性疾病。
47.根據權利要求45的方法，其中所述呼吸系統疾病、障礙和/或病症是COPD、哮喘或鼻炎。
48.根據權利要求45的方法，其中所述施用於呼吸系統包含施用於氣道內或經氣道吸收。
49.根據權利要求45的方法，其中所述施用於呼吸系統是經霧化或吸入施用於氣道。
50.根據權利要求45的方法，其中所述施用於氣道包含經定量噴霧式吸入器(MDI)、乾粉吸入器(DPI)或噴霧器施用。
51.根據權利要求45的方法，其中所述施用經選自滴鼻劑、噴鼻劑、噴霧器、呼吸器和粉末給藥的方式實現。
52.治療和/或預防由嗜酸性粒細胞異常引起的呼吸系統疾病、障礙和/或病症的方法，包括以下步驟A)向對象的呼吸系統施用含NF-κB誘餌和藥學上可接受載體的組合物。
53.NF-κB誘餌在製造用於治療和/或預防由受NF-κB調節的基因表達引起的呼吸系統疾病、障礙和/或病症的藥物方面的用途。
54.NF-κB誘餌在製造用於治療和/或預防由嗜酸性粒細胞異常引起的呼吸系統疾病、障礙和/或病症的藥物方面的用途。
全文摘要
藥用組合物，用於治療和預防由受NF－κB調節的基因表達引起的氣道炎性、氣道狹窄性或鼻腔炎性疾病、障礙和/或病症，該組合物含有NF－κB誘餌和藥學上可接受的載體。以上疾病可以是哮喘、COPD或鼻炎。而且以上疾病可以是由嗜酸性粒細胞異常引起的疾病(例如，哮喘、鼻炎和COPD)。所述藥學上可接受的載體可以是親水聚合物、脂質體等。
文檔編號A61K47/10GK1819845SQ200480019698
公開日2006年8月16日 申請日期2004年7月9日 優先權日2003年7月9日
發明者森下龍一, 青木元邦, 荻原俊男, 川崎富夫, 牧野寬史, 肉倉孝, 小柳晶裕 申請人:安琪士摩奇株式會社