具有超長cdr3s的人源化抗體的製作方法

2023-05-23 09:57:31

具有超長cdr3s的人源化抗體的製作方法
【專利摘要】本文公開的內容提供了人源化抗體，包括包含超長CDR3的抗體(例如牛)，以及其用途。
【專利說明】具有超長CDR3S的人源化抗體
[0001] 本申請要求2012年1月9日提交的美國臨時申請第61/584,680號的權益，將其 全文以引用方式結合於本文中作為參考。

【技術領域】
[0002] 本文公開的內容涉及人源化抗體，包括包含超長⑶R3的抗體。
[0003] 發明背景
[0004] 抗體是脊椎動物免疫系統響應於外來物質（抗原）而形成的天然蛋白質，主要用 於抵禦感染。一個多世紀以來，已經在人工條件下在動物中誘導抗體，並收穫抗體用於疾病 狀況的治療或診斷，或用於生物學研究。每個單獨的抗體生產細胞產生具有化學上確定的 組成的單一類型的抗體，然而，響應於抗原接種直接從動物血清獲得的抗體實際上包含產 自單個抗體生產細胞的集群的不相同的分子的集群（例如，多克隆抗體）。
[0005] 與其他脊椎動物相比，某些牛抗體具有超長的VH⑶R3序列。例如，約10%的IgM 含有"超長" CDR3序列，其可以長達61個胺基酸長度。這些不同尋常的CDR3經常具有多 個半胱氨酸。功能性VH基因通過稱為V (D) J重組的過程形成，其中D-區編碼絕大部分的 ⑶R3。已經在牛中鑑定出編碼超長序列的獨特的D-區。超長⑶R3在牛基因組中被部分地 編碼，與人類相比，提供了牛的抗體全集的獨特特徵。Kaushik等人（美國專利第6, 740, 747 號和第7, 196, 185號）公開了幾種聲稱作為探針有用的牛特有的牛種系D-基因序列，以及 聲稱作為疫苗載體有用的牛VDJ盒。
[0006] 發明概述
[0007] 本文公開的內容提供了人源化抗體，包括包含超長CDR3的抗體，生產所述抗體的 方法，以及其用途。
[0008] 本文公開的內容提供了包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段。
[0009] 在一些實施方式中，所述人源化抗體或其結合片段包含一個或多個人類可變區框 架序列。
[0010] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長CDR3的長 度是35個胺基酸或更長，40個胺基酸或更長，45個胺基酸或更長，50個胺基酸或更長，55 個胺基酸或更長，或60個胺基酸或更長。
[0011] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長CDR3的長 度是35個胺基酸或更長。
[0012] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含3 個或更多個半胱氨酸殘基，4個或更多個半胱氨酸殘基，5個或更多個半胱氨酸殘基，6個或 更多個半胱氨酸殘基，7個或更多個半胱氨酸殘基，8個或更多個半胱氨酸殘基，9個或更多 個半胱氨酸殘基，10個或更多個半胱氨酸殘基，11個或更多個半胱氨酸殘基，或12個或更 多個半胱氨酸殘基。
[0013] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含3 個或更多個半胱氨酸殘基。
[0014] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，抗體或其結合片 段包含半胱氨酸基序。
[0015] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，半胱氨酸基 序選自由以下序列組成的組：CX1QCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:41)、CXiqCX6CX5CXCX15C(SEQ ID NO: 42)、CX11CXCX5C (SEQ ID NO : 43)、CX11CX5CX5CXCx7C (SEQ ID NO: 44), CX10CX6Cx5CXCX13C(SEQ ID NO:45)、CXiciCX5CXCX4CX8C(SEQ ID NO:46)、CXiciCX6CX6CXCX7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48)、CXiciCX4CX7CXCX7C (SEQ ID NO: 49)、 CX13CX8CX8C (SEQ ID NO : 50) , CX10CX6CX5CXCX7C (SEQ ID NO: 51) , CX10CX5CX5C (SEQ ID NO:52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(ICXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C(SEQ ID NO:87)、CX10CX6CX5CXCx8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID N0:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。
[0016] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，半胱氨酸基序選 自由以下序列組成的組：
[0017] CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC (SEQ ID NO: 100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiqC (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX 4CX12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX 5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 Cx3CX5CX5CX4CCX10CX 6C (SEQ ID NO: 126) , CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO: 127), CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、Cx8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、 Cx2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : I 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID NO: 136) , CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO: 137) , CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C (SEQ ID NO: 142) , CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID N0:143), Cx7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID NO: 149)、CX15C(SEQ ID NO: 150)、CX10C(SEQ ID NO: 151)和 CX9C(SEQ ID NO: 152)。
[0018] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含2 至6個二硫鍵。
[0019] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 SEQ ID NO:40或其衍生物。
[0020] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 SEQ ID NO: 1-4的任一個的胺基酸殘基3-6。
[0021] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 非人類DH或其衍生物。
[0022] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述非人類DH 是 SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO: 10、 SEQ ID NO:11 或 SEQ ID NO:12。
[0023] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 JH序列或其衍生物。
[0024] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述JH序列是 SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16 或 SEQ ID NO:17。
[0025] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含： 非人類或人類VH序列（例如，種系VH)或其衍生物；非人類DH序列或其衍生物；和/或JH 序列或其衍生物。
[0026] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 另外的胺基酸序列，所述另外的胺基酸序列包含位於VH序列和DH序列之間的二至六個氨 基酸殘基或更多個胺基酸殘基。
[0027] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述另外的氨基 酸序列選自由以下序列組成的組：IR、IF、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO :20或 SEQ ID NO ：21〇
[0028] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 衍生自或基於 SEQ ID NO :22、SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO : 26、SEQ ID NO :27 或 SEQ ID NO : 28 的序列。
[0029] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 牛序列、非牛序列、抗體序列或非抗體序列。
[0030] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，非抗體序列是合 成的序列。
[0031] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，非抗體序列是細 胞因子序列、淋巴因子序列、趨化因子序列、生長因子序列、激素序列或毒素序列。
[0032] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，非抗體序列 是IL-8序列、IL-21序列、SDF-I (α )序列、生長抑素序列、氯毒素（chlorotoxin)序列、 Pro-TxII序列或齊考諾肽（ziconotide)序列。
[0033] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，非抗體序列是 SEQ ID NO :475-481 的任一個。
[0034] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，非抗體序列取代 至少一部分的超長⑶R3。
[0035] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 X1X2X3X4X5基序，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或纈氨酸（V)，其 中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬 醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸 (H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是穀氨 醯胺（Q)。
[0036] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述X1X2X 3X4X5基 序是 TTVHQ (SEQ ID NO: 153)、TSVHQ (SEQ ID NO: 154)、SSVTQ (SEQ ID NO: 155)、STVHQ (SEQ ID NO: 156), ATVRQ (SEQ ID NO: 157), TTVYQ (SEQ ID NO: 158), SPVHQ (SEQ ID NO: 159), ATVYQ(SEQ ID NO: 160), TAVYQ(SEQ ID NO: 161), TNVHQ(SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID NO: 163)、STVYQ(SEQ ID NO: 164)、TIVHQ(SEQ ID NO: 165)、AIVYQ(SEQ ID NO: 166)、 TTVFQ(SEQ ID NO: 167)、AAVFQ(SEQ ID NO: 168)、GTVHQ(SEQ ID NO: 169)、ASVHQ(SEQ ID NO :170), TAVFQ (SEQ ID NO: 171), ATVFQ (SEQ ID NO: 172), AAAHQ (SEQ ID NO: 173), VVVYQ(SEQ ID NO: 174), GTVFQ(SEQ ID NO: 175), TAVHQ(SEQ ID NO: 176), ITVHQ(SEQ ID NO :177), ITAHQ (SEQ ID NO: 178), VTVHQ (SEQ ID NO: 179) ；AAVHQ(SEQ ID NO: 180), GTVYQ(SEQ ID NO:181)、TTVLQ(SEQ ID NO:182)、TTTHQ(SEQ ID NO:183)或 TTDYQ(SEQ ID NO:184)。
[0037] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 CX1X2X3X4X5 基序。
[0038] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述CX1X 2X3X4X5 基序是CTTVHQ(SEQ ID N0:185)、CTSVHQ(SEQ ID N0:186)、CSSVTQ(SEQ ID N0:187)、 CSTVHQ(SEQ ID NO: 188)、CATVRQ(SEQ ID NO: 189)、CTTVYQ(SEQ ID NO: 190)、CSPVHQ(SEQ ID NO:191)、CATVYQ(SEQ ID NO:192)、CTAVYQ(SEQ ID NO:193)、CTNVHQ(SEQ ID NO:194)、 CATVHQ (SEQ ID NO:195)、CSTVYQ (SEQ ID NO:196)、CTIVHQ (SEQ ID NO:197)、CAIVYQ (SEQ ID NO:198)、CTTVFQ(SEQ ID NO:199)、CAAVFQ(SEQ ID NO:200)、CGTVHQ(SEQ ID NO:201)、 CASVHQ(SEQ ID NO:202)、CTAVFQ(SEQ ID NO:203)、CATVFQ(SEQ ID NO:204)、CAAAHQ(SEQ ID NO:205)、CVVVYQ(SEQ ID NO:206)、CGTVFQ(SEQ ID NO:207)、CTAVHQ(SEQ ID NO:208)、 CITVHQ(SEQ ID NO:209), CITAHQ(SEQ ID NO:210), CVTVHQ(SEQ ID N0:211) ；CAAVHQ(SEQ ID NO:212), CGTVYQ(SEQ ID NO:213), CTTVLQ(SEQ ID NO:214), CTTTHQ(SEQ ID N0:215) 或 CTTDYQ(SEQ ID NO :216)。
[0039] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 (XaX b)z基序，其中Xa是任意胺基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，以及其中z是1-4。
[0040] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述（XaX b)z基 序是 CYTYNYEF(SEQ ID N0:217)、HYTYTYDF(SEQ ID N0:218)、HYTYTYEW(SEQ ID N0:219)、 KHRYTYEff(SEQ ID NO: 220), NYIYKYSF (SEQ ID NO: 221), PYIYTYQF (SEQ ID N0:222), SFTYTYEff(SEQ ID NO:223), SYIYIYQff(SEQ ID NO:224), SYNYTYSff(SEQ ID NO:225), SYSYSYEY(SEQ ID NO: 226), SYTYNYDF (SEQ ID NO: 227), SYTYNYEff (SEQ ID NO:228), SYTYNYQF(SEQ ID NO:229), SYVffTHNF(SEQ ID NO:230), TYKYVYEff(SEQ ID N0:231), TYTYTYEF(SEQ ID NO: 232), TYTYTYEff (SEQ ID NO: 233), VFTYTYEF (SEQ ID NO:234), AYTYEW(SEQ ID NO:235)、DYIYTY(SEQ ID NO:236)、IHSYEF(SEQ ID NO:237)、SFTYEF(SEQ ID NO:238)、SHSYEF(SEQ ID NO:239)、THTYEF(SEQ ID NO:240)、TWTYEF(SEQ ID NO:241)、 TYNYEW(SEQ ID NO:242)、TYSYEF(SEQ ID NO:243)、TYSYEH(SEQ ID NO:244)、TYTYDF(SEQ ID NO:245)、TYTYEF(SEQ ID NO:246)、TYTYEW(SEQ ID NO:247)、AYEF(SEQ ID NO:248)、 AYSF (SEQ ID NO: 249)、AYSY (SEQ ID NO: 250)、CYSF (SEQ ID NO: 251)、DYTY (SEQ ID NO:252),KYEH(SEQ ID NO:253),KYEff(SEQ ID NO:254),MYEF(SEQ ID NO:255),NffIY(SEQ ID NO:256),NYDY(SEQ ID NO:257),NYQff(SEQ ID NO:258),NYSF(SEQ ID NO:259),PYEff(SEQ ID NO:260)、RYNW(SEQ ID NO:261)、RYTY(SEQ ID NO:262)、SYEF(SEQ ID NO:263)、SYEH(SEQ ID NO:264)、SYEW(SEQ ID NO:265)、SYKW(SEQ ID NO:266)、SYTY(SEQ ID NO:267)、TYDF(SEQ ID NO:268)、TYEF(SEQ ID NO:269)、TYEW(SEQ ID NO:270)、TYQW(SEQ ID NO:271)、TYTY(SEQ ID NO:272)或 VYEW(SEQ ID NO:273)。
[0041] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述（XaX b)z基序 是 YXYXYX。
[0042] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 X1X2X3X4X5X n基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)， 其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天 冬醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨 酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X 5是穀氨醯 胺（Q)，以及其中η是27-54。
[0043] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 Xn(XaXb)z基序，其中Xa是任意胺基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，其中η是27-54,以及其中z是1-4。
[0044] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 X1X2X3X4X5X n(XaXb)z基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V) ，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5 是穀氨醯胺（Q)，其中Xa是任意胺基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸 (W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，其中η是27-54,以及其中ζ是1-4。
[0045] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述X1X2X 3X4X5基 序是TTVHQ(SEQIDN0:153)或TSVHQ(SEQIDN0:154)，以及其中（X aXb)z基序是YXYXYX。
[0046] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包 含：CX1X 2X3X4X5基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或纈氨酸 (V)，其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸⑴或天冬氨酸（D)，其中X4 是組氨酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中 X5是穀氨醯胺（Q);選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：CX1(iCX5CX 5CXCX7C(SEQ ID NO:41) ,CX10CX6Cx5CXCX15C(SEQ ID NO:42) XX11CXCX5C(SEQ ID NO:43) ,CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C(SEQ ID NO:87)、CX10CX6CX5CXCx8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID N0:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX1QCX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)，以及（XaXb)z 基序，其中 Xa 是任意胺基酸殘基，Xb 是 選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，以及 其中z是1_4。
[0047] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包 含：CX1X 2X3X4X5基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或纈氨 酸（V)，其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨 酸（V)或天冬醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸⑴或天冬氨酸（D)， 其中X4是組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)， 以及其中X 5是穀氨醯胺（Q);選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：其中所述半 胱氨酸基序選自由以下序列組成的組：CCX 3CXCX3CX2CCXCX5CX9CX 5CXC (SEQ ID NO: 96)、 CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC (SEQ ID NO: 97), CX7CXCX5CX4CCCX4CX6CXC (SEQ ID NO:98), CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC(SEQ ID N0:100)、 Cx5Cxcx1Cxcx3CCx3Cx 4Cx10C(seq id no： 101), cx9cccx3cx4cccx5cx6c(seq id no： 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C (SEQ ID NO: 103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C (SEQ ID NO: 104)、 CX6CX2CX3CCCX4CX5CX 3CX3C(SEQ ID NO: 105), CX3CX5CX6CX4CCXCX5CX 4CXC(SEQ ID NO: 106), CX4CX4CCX4CX4CXCXnCX 2CXC(SEQ ID NO: 107), CX5CX2CCX5CX4CCX3CCX 7C(SEQ ID NO: 108), CX5CX5CX3CX2CXCCX4CX 7CXC (SEQ ID NO : 109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C (SEQ ID NO: 110)、CX9CX3CXCX4CCX5CCCX 6C (SEQ ID NO: 111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C (SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX 3CX4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID NO: 114), CX10CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO: 115), CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC (SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX 4CX8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID NO: 120) , Cx3CX5CX3CCCX4CX9C (SEQ ID NO: 121), CCX9CX3CXCCX3CX5C (SEQ ID NO: 122), Cx9CX2CX3CX4CCX4CX 5C (SEQ ID NO: 123) , CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID N0:124), Cx9CX3CCCX10CX2CX3C (SEQ ID NO: 125)、CX3CX5CX5CX4CCX 1(ICX6C (SEQ ID NO : 126)、 CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO : 127)、CX7CXCX6CX4CCCX10C (SEQ ID NO: 128)、 Cx8CX2CX4CCX4CX3CX 3C (SEQ ID NO: 129)、CX7CX5CXCX4CCX7CX 4C (SEQ ID NO: 130), CxiiCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、CX2CX3CX4CCX4CX 5CX15C (SEQ ID NO : 132)、 CX9CX5CX4CCX7C(SEQ ID NO: 133), CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135) , CX9CX5CX4CCX8C (SEQ ID NO: 136) , CX9CX6CX4CCXC (SEQ ID NO: 137), CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138)、CX10CX3CX4CCX4C (SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C (SEQ ID NO: 140) , CX10CX3CX4Cx7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C(SEQ ID NO: 142), CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID NO: 143)、CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144)、CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145)、CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146)、CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147)、CX10CXCX4C(SEQ ID N0:148)、CX1(ICCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152);以及（XaXb)z基序，其中Xa是任意胺基酸殘基，X b是選自由酪氨酸 (Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，以及其中z是1-4。
[0048] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 另外的序列，所述另外的序列是接頭。
[0049] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述接頭連接到 非抗體序列的C-末端、N-末端、或C-末端和N-末端兩者。
[0050] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長CDR3是反 芻動物CDR3。
[0051] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述反芻動物是 牛。
[0052] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含人類重鏈可變區框架序列。
[0053] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含人類重鏈種系序列，或衍生自人類重鏈種系序列。
[0054] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含人類重鏈種系序列，所述人類重鏈種系序列是VH4家族成員種系序列。
[0055] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含VH4-34種系序列。
[0056] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含人類重鏈種系序列，所述人類重鏈種系序列衍生自VH4-34種系序列。
[0057] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述VH4-34種 系序列包含CDR1，所述CDRl包含基於Kabat編號的Gly31Asp和Tyr32Lys取代。
[0058] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述VH4-34種 系序列包含CDR2,所述CDR2包含基於Kabat編號的Glu50Ser取代。
[0059] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述VH4-34種 系序列包含CDRl和CDR2,所述CDRl包含基於Kabat編號的Ala23Thr、Val24Ala、Tyr25Ser、 Gly27Phe、Phe29Leu、Gly31Asp、Tyr32Lys、Tyr33Ala、Trp34Val 和 Ser35Gly 取代，所述 CDR2 包含基於基於 Kabat 編號的 Ile48Leu、Glu50Ser、Asn52Asp、His53Thr、Ser54Gly、Ser56Asn 和Asn58Gly取代。
[0060] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含在SEQ ID勵：461、462、463、464、465、466、467、468或469中列出的胺基酸序 列。
[0061] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含SEQ ID NO :470中列出的胺基酸序列。
[0062] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468或469中列出的胺基酸序 列；以及SEQ ID NO :470中列出的胺基酸序列。
[0063] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468或469中列出的胺基酸序 列；SEQ ID NO :470中列出的胺基酸序列；以及一肽序列，其中所述肽序列位於SEQ ID NO: 461、462、463、464、465、466、467、468 或 469 與 SEQ ID N0:470 之間。
[0064] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述肽序列是牛 序列、非牛序列、抗體序列或非抗體序列。
[0065] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含人類輕鏈可變區框架序列。
[0066] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含輕鏈可變區序列，所述輕鏈可變區序列是λ輕鏈可變區序列。
[0067] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述λ輕鏈可 變區序列是牛λ輕鏈可變區序列，或衍生自牛λ輕鏈可變區序列。
[0068] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述λ輕鏈可 變區序列是人類λ輕鏈可變區序列，或衍生自人類λ輕鏈可變區序列。
[0069] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述人類λ輕 鏈可變區序列是VL1-51種系序列。
[0070] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述人類λ輕 鏈可變區序列衍生自VL1-51種系序列。
[0071] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述VL1-51種 系序列包含CDR1，所述CDRl包含基於Kabat編號的Ile29Val和Asn32Gly取代。
[0072] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述VL1-51種 系序列包含⑶R2,所述⑶R2包含DNN到⑶T的取代。
[0073] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述VL1-51種 系序列包含 CDR2,所述 CDR2 包含 DNNKRP(SEQ ID N0:471)到⑶TSRA(SEQ ID N0:472)的 取代。
[0074] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述VL1-51種 系序列包含基於Kabat編號的S2A、T5N、P8S、A12G、A13S和P14L取代。
[0075] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述VL1-51種 系序列包含基於Kabat編號的S2A、T5N、P8S、A12G、A13S和P14L取代，以及CDR2,所述CDR2 包含DNN到⑶T的取代。
[0076] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含SEQ ID NO :440、441、442、443或444中列出的胺基酸序列。
[0077] 本文公開的內容還提供了編碼本文公開的人源化抗體或其結合片段的多核苷酸。
[0078] 本文公開的內容還提供了編碼包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的多核 苷酸。
[0079] 本文公開的內容還提供了編碼包含超長CDR3的人源化可變區的多核苷酸。
[0080] 本文公開的內容還提供了包含本文公開的多核苷酸的載體。
[0081] 本文公開的內容還提供了包含本文公開的載體的宿主細胞。
[0082] 本文公開的內容還提供了包含多種多核苷酸的核酸文庫，所述多核苷酸包含編碼 人源化抗體或其結合片段的序列，其中所述抗體或其結合片段包含超長CDR3。
[0083] 本文公開的內容還提供了人源化抗體或其結合片段的文庫，其中所述抗體或其結 合片段包含超長⑶R3。
[0084] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長CDR3的長 度是35個胺基酸或更長，40個胺基酸或更長，45個胺基酸或更長，50個胺基酸或更長，55 個胺基酸或更長，或60個胺基酸或更長。
[0085] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長CDR3的長 度是35個胺基酸或更長。
[0086] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含3 個或更多個半胱氨酸殘基，4個或更多個半胱氨酸殘基，5個或更多個半胱氨酸殘基，6個或 更多個半胱氨酸殘基，7個或更多個半胱氨酸殘基，8個或更多個半胱氨酸殘基，9個或更多 個半胱氨酸殘基，10個或更多個半胱氨酸殘基，11個或更多個半胱氨酸殘基，或12個或更 多個半胱氨酸殘基。
[0087] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含3 個或更多個半胱氨酸殘基。
[0088] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，抗體或其結合片 段包含半胱氨酸基序。
[0089] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所 述半胱氨酸基序選自由以下序列組成的組=CXiqCX5CX5CXCX 7C(SEQ ID NO:41)、 CXiciCX6CX5CXCX15C (SEQ ID NO: 42)、CX11CXCX5C (SEQ ID NO: 43)、CX11CX5CX5CXCx7C (SEQ ID NO: 44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C(SEQ ID NO:87)、CX10CX6CX5CXCx8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID N0:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。
[0090] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述半胱氨酸基 序選自由以下序列組成的組：
[0091] CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID no:99)、cx5cx3cxcx4cx4ccx 1(icx2cc(seq id no:loo)、Cx5Cxcx1Cxcx3CCx3Cx 4CxiqC(seq ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX 4CX12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX 5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 Cx3CX5CX5CX4CCX10CX 6C (SEQ ID NO: 126) , CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO: 127), CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、Cx8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、 Cx2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : I 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID NO: 136) , CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO: 137) , CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C (SEQ ID NO: 142) , CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID N0:143), Cx7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID NO: 149)、CX15C(SEQ ID NO: 150)、CX10C(SEQ ID NO: 151)和 CX9C(SEQ ID NO: 152)。
[0092] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含2 到6個二硫鍵。
[0093] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 SEQ ID NO :40或其衍生物。
[0094] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 SEQ ID NO : 1-4中任一個的胺基酸殘基3-6。
[0095] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 非人類DH或其衍生物。
[0096] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述非人類DH 是 SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO: 10、 SEQ ID NO:11 或 SEQ ID NO:12。
[0097] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 JH序列或其衍生物。
[0098] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述JH序列是 SEQ ID N0:13、SEQ ID N0:14、SEQ ID N0:15、SEQ ID N0:16 或 SEQ ID N0:17。
[0099] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含： 非人類VH序列或其衍生物；非人類DH序列或其衍生物；和/或JH序列或其衍生物。
[0100] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 另外的胺基酸序列，所述另外的胺基酸序列包含位於VH序列和DH序列之間的二至六個氨 基酸殘基或更多胺基酸殘基。
[0101] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述另外的氨基 酸序列選自由以下序列組成的組：IR、IF、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO:20或 SEQ ID NO:21〇
[0102] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 衍生自或基於 SEQ ID N0:22、SEQ ID N0:23、SEQ ID N0:24、SEQ ID N0:25、SEQ ID N0:26、 SEQ ID N0:27 或 SEQ ID N0:28 的序列。
[0103] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 非牛序列或非抗體序列。
[0104] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，非抗體序列是合 成的序列。
[0105] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，非抗體序列是細 胞因子序列、淋巴因子序列、趨化因子序列、生長因子序列、激素序列或毒素序列。
[0106] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，非抗體序列 是IL-8序列、IL-21序列、SDF-I (α )序列、生長抑素序列、氯毒素（chlorotoxin)序列、 Pro-TxII序列或齊考諾肽（ziconotide)序列。
[0107] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，非抗體序列是 SEQ ID NO :475-481 中的任一個。
[0108] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 X1X2X3X4X5基序，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或纈氨酸（V)，其 中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬 醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸 (H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5是穀氨 醯胺（Q)。
[0109] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，X1X2X 3X4X5基序 是 TTVHQ(SEQ ID N0:153)、TSVHQ(SEQ ID N0:154)、SSVTQ(SEQ ID N0:155)、STVHQ(SEQ ID NO :156), ATVRQ (SEQ ID NO: 157), TTVYQ (SEQ ID NO: 158), SPVHQ (SEQ ID NO: 159), ATVYQ(SEQ ID NO: 160), TAVYQ(SEQ ID NO: 161), TNVHQ(SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID NO:163)、STVYQ(SEQ ID NO:164)、TIVHQ(SEQ ID NO:165)、AIVYQ(SEQ ID NO: 166)、 TTVFQ(SEQ ID NO: 167), AAVFQ(SEQ ID NO: 168), GTVHQ(SEQ ID NO: 169), ASVHQ(SEQ ID NO :170), TAVFQ (SEQ ID NO: 171), ATVFQ (SEQ ID NO: 172), AAAHQ (SEQ ID NO: 173), VVVYQ(SEQ ID NO: 174), GTVFQ(SEQ ID NO: 175) , TAVHQ(SEQ ID NO: 176), ITVHQ(SEQ ID NO :177), ITAHQ (SEQ ID NO: 178), VTVHQ (SEQ ID NO: 179) ；AAVHQ(SEQ ID NO: 180), GTVYQ(SEQ ID NO:181)、TTVLQ(SEQ ID NO:182)、TTTHQ(SEQ ID NO:183)或 TTDYQ(SEQ ID NO:184)。
[0110] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 CX1X2X3X4X5 基序。
[0111] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述CX1X 2X3X4X5 基序是CTTVHQ(SEQ ID N0:185)、CTSVHQ(SEQ ID N0:186)、CSSVTQ(SEQ ID N0:187)、 CSTVHQ (SEQ ID NO :188)、CATVRQ (SEQ ID NO :189)、CTTVYQ (SEQ ID NO :190)、CSPVHQ (SEQ ID NO:191)、CATVYQ(SEQ ID NO:192)、CTAVYQ(SEQ ID NO:193)、CTNVHQ(SEQ ID NO:194)、 CATVHQ(SEQ ID NO: 195)、CSTVYQ(SEQ ID NO: 196)、CTIVHQ(SEQ ID NO: 197)、CAIVYQ(SEQ ID NO:198)、CTTVFQ(SEQ ID NO:199)、CAAVFQ(SEQ ID NO:200)、CGTVHQ(SEQ ID NO:201)、 CASVHQ(SEQ ID NO:202)、CTAVFQ(SEQ ID NO:203)、CATVFQ(SEQ ID NO:204)、CAAAHQ(SEQ ID NO:205)、CVVVYQ(SEQ ID NO:206)、CGTVFQ(SEQ ID NO:207)、CTAVHQ(SEQ ID NO:208)、 CITVHQ(SEQ ID NO:209), CITAHQ(SEQ ID NO:210), CVTVHQ(SEQ ID N0:211) ；CAAVHQ(SEQ ID NO:212), CGTVYQ(SEQ ID NO:213), CTTVLQ(SEQ ID NO:214), CTTTHQ(SEQ ID N0:215) 或 CTTDYQ(SEQ ID NO :216)。
[0112] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 (XaX b)z基序，其中Xa是任意胺基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，以及其中z是1-4。
[0113] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述（XaX b)z基 序是 CYTYNYEF(SEQ ID N0:217)、HYTYTYDF(SEQ ID N0:218)、HYTYTYEW(SEQ ID N0:219)、 KHRYTYEff(SEQ ID NO: 220), NYIYKYSF (SEQ ID NO: 221), PYIYTYQF (SEQ ID N0:222), SFTYTYEff (SEQ ID NO:223), SYIYIYQff(SEQ ID NO:224), SYNYTYSff (SEQ ID NO:225), SYSYSYEY(SEQ ID NO:226), SYTYNYDF(SEQ ID NO:227), SYTYNYEff(SEQ ID NO:228), SYTYNYQF(SEQ ID NO: 229), SYVffTHNF (SEQ ID NO: 230), TYKYVYEff (SEQ ID NO :231), TYTYTYEF(SEQ ID NO: 232), TYTYTYEff (SEQ ID NO: 233), VFTYTYEF (SEQ ID NO:234), AYTYEW(SEQ ID NO:235)、DYIYTY(SEQ ID NO:236)、IHSYEF(SEQ ID NO:237)、SFTYEF(SEQ ID NO:238)、SHSYEF(SEQ ID NO:239)、THTYEF(SEQ ID NO:240)、TWTYEF(SEQ ID NO:241)、 TYNYEW(SEQ ID NO:242)、TYSYEF(SEQ ID NO:243)、TYSYEH(SEQ ID NO:244)、TYTYDF(SEQ ID NO:245)、TYTYEF(SEQ ID NO:246)、TYTYEW(SEQ ID NO:247)、AYEF(SEQ ID NO:248)、 AYSF(SEQ ID NO: 249)、AYSY (SEQ ID NO: 250)、CYSF (SEQ ID NO: 251)、DYTY (SEQ ID NO:252),KYEH(SEQ ID NO:253),KYEff(SEQ ID NO:254),MYEF(SEQ ID NO:255),NffIY(SEQ ID NO:256)、NYDY(SEQ ID NO:257)、NYQW(SEQ ID NO:258)、NYSF(SEQ ID NO:259)、PYEW(SEQ ID NO:260),RYNff(SEQ ID NO:261),RYTY(SEQ ID NO:262),SYEF(SEQ ID NO:263),SYEH(SEQ ID NO:264)、SYEW(SEQ ID NO:265)、SYKW(SEQ ID NO:266)、SYTY(SEQ ID NO:267)、TYDF(SEQ ID NO:268), TYEF(SEQ ID NO:269), TYEff(SEQ ID NO:270), TYQff(SEQ ID NO:271), TYTY(SEQ ID NO:272)或 VYEW(SEQ ID NO:273)。
[0114] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述（XaX b)z基序 是 YXYXYX。
[0115] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 X1X2X3X4X5X n基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)， 其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天 冬醯胺（N)，其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨 酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X5是穀氨醯 胺（Q)，以及其中η是27-54。
[0116] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 Xn(XaXb)z基序，其中Xa是任意胺基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，其中η是27-54,以及其中ζ是1-4。
[0117] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 X1X2X3X4X5X n(XaXb)z基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V) ，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5 是穀氨醯胺（Q)，其中Xa是任意胺基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸 (W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，其中η是27-54,以及其中ζ是1-4。
[0118] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述X1X2X 3X4X5基 序是TTVHQ(SEQIDN0:153)或TSVHQ(SEQIDN0:154)，以及其中（XaXb) z基序是YXYXYX。
[0119] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含： CX1X2X3X4X5基序，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或纈氨酸（V)， 其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或 天冬醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸⑴或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（Τ)、精氨酸（R)、酪氨酸（Υ)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中 X5是穀氨醯胺（Q)，選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：CX1(iCX5CX 5CXCX7C(SEQ ID NO:41) ,CX10CX6Cx5CXCX15C(SEQ ID NO:42) XX11CXCX5C(SEQ ID NO:43) ,CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8Cx2C (SEQ ID NO :86)、CX10CX6CX5CX8Cx 2C (SEQ ID NO :87)、CX10CX6CX5CXCx8C (SEQ ID NO:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID NO:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX1QCX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID NO:95);以及（XaXb)z 基序，其中 Xa 是任意胺基酸殘基，Xb 是 選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，以及 其中z是1_4。
[0120] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含： CX1X2X3X4X5基序，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或纈氨酸（V)， 其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天 冬醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨 酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5是谷 氨醯胺（Q);選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：其中半胱氨酸基序選自由以下序 列組成的組：CCX 3CXCX3CX2CCXCX5CX9CX 5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC (SEQ ID NO: 100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiqC (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX 4CX12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX 5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 Cx3CX5CX5CX4CCX10CX 6C (SEQ ID NO: 126) , CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO: 127), CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、Cx8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、 Cx2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : I 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID NO: 136) , CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO: 137) , CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C (SEQ ID NO: 142) , CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID N0:143), Cx7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQIDN0:150)、CX1ciC(SEQIDN0:151)^PCX 9C(SEQIDN0:152);#& (XaXb)z基序，其中Xa是任意胺基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，以及其中z是1-4。
[0121] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長⑶R3包含 額外的序列，所述額外的序列是接頭。
[0122] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述接頭連接到 非抗體序列的C-末端、N-末端、或C-末端和N-末端兩者。
[0123] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，超長CDR3是反 芻動物CDR3。
[0124] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述反芻動物是 牛。
[0125] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含人類重鏈可變區框架序列。
[0126] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含人類重鏈種系序列，或衍生自人類重鏈種系序列。
[0127] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含人類重鏈種系序列，所述人類重鏈種系序列是VH4家族成員種系序列。
[0128] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含VH4-34種系序列。
[0129] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含衍生自VH4-34的人類重鏈種系序列。
[0130] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述VH4-34種 系序列包含CDR1，所述CDRl包含基於Kabat編號的Gly31Asp和Tyr32Lys取代。
[0131] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述VH4-34種 系序列包含CDR2,所述CDR2包含基於Kabat編號的Glu50Ser取代。
[0132] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述VH4-34種 系序列包含CDRl和CDR2,所述CDRl包含基於Kabat編號的Ala23Thr、Val24Ala、Tyr25Ser、 Gly27Phe、Phe29Leu、Gly31Asp、Tyr32Lys、Tyr33Ala、Trp34Val 和 Ser35Gly 取代，所述 CDR2 包含基於基於 Kabat 編號的 Ile48Leu、Glu50Ser、Asn52Asp、His53Thr、Ser54Gly、Ser56Asn 和Asn58Gly取代。
[0133] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含SEQ ID NO :470中列出的胺基酸序列。
[0134] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468或469中列出的胺基酸序 列；以及SEQ ID NO :470中列出的胺基酸序列。
[0135] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或 其結合片段包含SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468或469中列出的胺基酸 序列；SEQ ID N0:470中列出的胺基酸序列；以及一肽序列，其中所述肽序列位於SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468 或 469 與 SEQ ID N0:470 之間。
[0136] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述肽序列是牛 序列、非牛序列、抗體序列或非抗體序列。
[0137] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含λ輕鏈可變區序列。
[0138] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含輕鏈可變區序列，所述輕鏈可變區序列是λ輕鏈可變區序列。
[0139] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述λ輕鏈可 變區序列是牛λ輕鏈可變區序列。
[0140] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述λ輕鏈可 變區序列是人類λ輕鏈可變區序列。
[0141] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述人類λ輕 鏈可變區序列是VL1-51。
[0142] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述人類λ輕 鏈可變區序列衍生自VL1-51。
[0143] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述VL1-51種 系序列包含CDR1，所述CDRl包含基於Kabat編號的Ile29Val和Asn32Gly取代。
[0144] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述VL1-51種 系序列包含⑶R2,所述⑶R2包含DNN到⑶T的取代。
[0145] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述VL1-51種 系序列包含 CDR2,所述 CDR2 包含 DNNKRP(SEQ ID N0:471)到⑶TSRA(SEQ ID N0:472)的取 代。
[0146] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述VL1-51種 系序列包含基於Kabat編號的S2A、T5N、P8S、A12G、A13S和P14L取代。
[0147] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述VL1-51種 系序列包含基於Kabat編號的S2A、T5N、P8S、A12G、A13S和P14L取代，以及CDR2,所述CDR2 包含DNN到GDT的取代。
[0148] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段包含SEQ ID NO :440、441、442、443或444中列出的胺基酸序列。
[0149] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，人源化抗體或其 結合片段以空間定址的形式（spatially addressed format)存在。
[0150] 本文公開的內容還提供了人源化抗體可變區的方法，包括遺傳地組合編碼非人類 超長CDR3的核酸序列與編碼人類可變區框架（FR)序列的核酸序列的步驟。
[0151] 本文公開的內容還提供了產生包含超長⑶R3的人源化抗體的文庫的方法，所述 方法包括：組合編碼超長CDR3的核酸序列與編碼人類可變區框架（FR)序列的核酸序列，以 產生編碼包含超長CDR3的人源化抗體的核酸；以及表達編碼包含超長CDR3的人源化抗體 的所述核酸，以產生包含超長CDR3的人源化抗體的文庫。
[0152] 本文公開的內容還提供了產生包含超長CDR3人源化抗體或其結合片段的文庫的 方法，所述超長CDR3包含非抗體序列，所述方法包括：組合編碼超長CDR3的編碼、編碼人類 可變區框架（FR)序列的核酸序列以及編碼非抗體序列的核酸序列，以產生編碼包含超長 CDR3和非抗體序列的人源化抗體或其結合片段的核酸，表達編碼包含超長CDR3和非抗體 序列的人源化抗體或其結合片段的所述核酸，以產生包含超長CDR3和非抗體序列的人源 化抗體或其結合片段的文庫。在一些實施方式中，超長CDR3包含牛、非牛、抗體或非抗體序 列。本文公開的內容還提供了產生包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的文庫的方 法，所述超長CDR3包含非牛或非抗體序列。
[0153] 本文公開的內容還提供了產生包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的文庫 的方法，所述超長CDR3包含半胱氨酸基序，所述方法包括：組合人類可變區框架（FR)序列 以及編碼超長CDR3和半胱氨酸基序的核酸序列；向該核酸序列中引入一個或多個核苷酸 變化，該核酸序列編碼位於編碼不同胺基酸殘基的核苷酸的半胱氨酸基序中的一個或多個 半胱氨酸殘基之間的一個或多個胺基酸殘基，以產生編碼包含超長CDR3和半胱氨酸基序 的人源化抗體或其結合片段的核酸，該半胱氨酸基序具有在半胱氨酸結構域中的一個或多 個半胱氨酸殘基之間引入的一個或多個核苷酸變化；以及表達所述編碼人源化抗體或其結 合片段的核酸，所述人源化抗體或其結合片段包含超長CDR3和半胱氨酸基序，該所述半胱 氨酸基序具有在半胱氨酸結構域中的一個或多個半胱氨酸殘基之間引入的一個或多個核 苷酸變化，以產生人源化抗體或其結合片段的文庫，所述人源化抗體或其結合片段包含超 長CDR3和半胱氨酸基序，其中該半胱氨酸基序具有在半胱氨酸結構域中的一個或多個半 胱氨酸殘基之間引入的一個或多個核苷酸變化。
[0154] 本文公開的內容還提供了包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的文庫，所 述超長CDR3包含半胱氨酸基序，其中所述抗體或結合片段包含位於半胱氨酸基序中的半 胱氨酸殘基之間的胺基酸殘基的一個或多個取代。
[0155] 本文公開的內容還提供了產生包含牛超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的文 庫的方法，所述方法包括：組合編碼人類可變區框架（FR)序列的核酸序列和編碼牛超長 CDR3的核酸，表達編碼人類可變區框架（FR)序列的核酸和編碼牛超長CDR3的核酸，以產生 包含牛超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的文庫。
[0156] 本文公開的內容提供了人源化抗體，包括包含⑶R3支架的抗體，生產所述抗體的 方法，以及其用途。
[0157] 本文公開的內容提供了包含CDR3支架的人源化抗體或其結合片段。
[0158] 在一些實施方式中，所述⑶R3支架包含一個或多個人類可變區框架序列。
[0159] 本文公開的內容還提供了包含牛超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的文庫。
[0160] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，⑶R3支架包含 X1X2X3X4X5基序，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或纈氨酸（V)，其 中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬 醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸 (H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5是穀氨 醯胺（Q)。
[0161] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，CDR3支架的長度 是35個胺基酸或更長，40個胺基酸或更長，45個胺基酸或更長，50個胺基酸或更長，55個 胺基酸或更長，或60個胺基酸或更長。
[0162] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，CDR3支架的長度 是35個胺基酸或更長。
[0163] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，⑶R3支架包含3 個或更多個半胱氨酸殘基，4個或更多個半胱氨酸殘基，5個或更多個半胱氨酸殘基，6個或 更多個半胱氨酸殘基，7個或更多個半胱氨酸殘基，8個或更多個半胱氨酸殘基，9個或更多 個半胱氨酸殘基，10個或更多個半胱氨酸殘基，11個或更多個半胱氨酸殘基，或12個或更 多個半胱氨酸殘基。
[0164] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，⑶R3支架包含3 個或更多個半胱氨酸殘基。
[0165] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，⑶R3支架包含半 胱氨酸基序。
[0166] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所 述半胱氨酸基序選自由以下序列組成的組=CX iqCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:41)、 CXiciCX6CX5CXCX15C (SEQ ID NO: 42)、CX11CXCX5C (SEQ ID NO: 43)、CX11CX5CX5CXCx7C (SEQ ID NO: 44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C(SEQ ID NO:87)、CX10CX6CX5CXCx8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID N0:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。
[0167] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，半胱氨酸基序選 自由以下序列組成的組：
[0168] CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID NO:96), CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC (SEQ ID NO: 100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiqC (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX 5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 Cx3CX5CX5CX4CCX10CX 6C (SEQ ID NO: 126) , CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO: 127), CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、Cx8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、 Cx2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : I 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID NO: 136) , CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO: 137) , CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C (SEQ ID NO: 142) , CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID N0:143), Cx7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID NO: 149)、CX15C(SEQ ID NO: 150)、CX10C(SEQ ID NO: 151)和 CX9C(SEQ ID NO: 152)。
[0169] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，⑶R3支架包含2 至6個二硫鍵。
[0170] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，CDR3支架中的 X1X2X3X4X5基序是TTVHQ(SEQ ID NO: 153)、TSVHQ(SEQ ID NO: 154)、SSVTQ(SEQ ID NO: 155)、 STVHQ(SEQ ID NO: 156), ATVRQ(SEQ ID NO: 157), TTVYQ(SEQ ID NO: 158), SPVHQ(SEQ ID NO :159), ATVYQ (SEQ ID NO: 160), TAVYQ (SEQ ID NO: 161), TNVHQ (SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID NO: 163), STVYQ(SEQ ID NO: 164), TIVHQ(SEQ ID NO: 165), AIVYQ(SEQ ID NO: 166)、TTVFQ(SEQ ID NO: 167)、AAVFQ(SEQ ID NO: 168)、GTVHQ(SEQ ID NO: 169)、 ASVHQ(SEQ ID NO: 170), TAVFQ(SEQ ID NO: 171), ATVFQ(SEQ ID NO: 172), AAAHQ(SEQ ID NO :173), VVVYQ (SEQ ID NO: 174), GTVFQ (SEQ ID NO: 175), TAVHQ (SEQ ID NO: 176), ITVHQ(SEQ ID NO:177), ITAHQ(SEQ ID NO: 178), VTVHQ(SEQ ID NO:179) ；AAVHQ(SEQ ID N0:180)、GTVYQ(SEQ ID N0:181)、TTVLQ(SEQ ID N0:182)、TTTHQ(SEQ ID N0:183)或 TTDYQ(SEQ ID NO:184)。
[0171] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，⑶R3支架包含 CX1X2X3X4X5 基序。
[0172] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述CX1X 2X3X4X5 基序是CTTVHQ (SEQ ID NO :185)、CTSVHQ (SEQ ID NO :186)、CSSVTQ(SEQ ID NO: 187)、 CSTVHQ (SEQ ID NO :188)、CATVRQ (SEQ ID NO :189)、CTTVYQ (SEQ ID NO :190)、CSPVHQ (SEQ ID NO:191)、CATVYQ(SEQ ID NO:192)、CTAVYQ(SEQ ID NO:193)、CTNVHQ(SEQ ID NO:194)、 CATVHQ(SEQ ID NO: 195)、CSTVYQ(SEQ ID NO: 196)、CTIVHQ(SEQ ID NO: 197)、CAIVYQ(SEQ ID NO:198)、CTTVFQ(SEQ ID NO:199)、CAAVFQ(SEQ ID NO:200)、CGTVHQ(SEQ ID NO:201)、 CASVHQ(SEQ ID NO:202)、CTAVFQ(SEQ ID NO:203)、CATVFQ(SEQ ID NO:204)、CAAAHQ(SEQ ID NO:205)、CVVVYQ(SEQ ID NO:206)、CGTVFQ(SEQ ID NO:207)、CTAVHQ(SEQ ID NO:208)、 CITVHQ(SEQ ID NO:209), CITAHQ(SEQ ID NO:210), CVTVHQ(SEQ ID N0:211) ；CAAVHQ(SEQ ID NO:212), CGTVYQ(SEQ ID NO:213), CTTVLQ(SEQ ID NO:214), CTTTHQ(SEQ ID N0:215) 或 CTTDYQ(SEQ ID NO :216)。
[0173] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，⑶R3支架包含 (XaX b)z基序，其中Xa是任意胺基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，以及其中z是1-4。
[0174] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述（XaX b)z基 序是 CYTYNYEF(SEQ ID N0:217)、HYTYTYDF(SEQ ID N0:218)、HYTYTYEW(SEQ ID N0:219)、 KHRYTYEff(SEQ ID NO: 220), NYIYKYSF (SEQ ID NO: 221), PYIYTYQF (SEQ ID N0:222), SFTYTYEff(SEQ ID NO:223), SYIYIYQff(SEQ ID NO:224), SYNYTYSff(SEQ ID NO:225), SYSYSYEY(SEQ ID NO: 226), SYTYNYDF (SEQ ID NO: 227), SYTYNYEff (SEQ ID NO:228), SYTYNYQF(SEQ ID NO :229), SYVffTHNF (SEQ ID NO: 230), TYKYVYEff (SEQ ID N0:231), TYTYTYEF(SEQ ID NO: 232), TYTYTYEff (SEQ ID NO: 233), VFTYTYEF (SEQ ID NO:234), AYTYEW(SEQ ID NO:235)、DYIYTY(SEQ ID NO:236)、IHSYEF(SEQ ID NO:237)、SFTYEF(SEQ ID NO:238)、SHSYEF(SEQ ID NO:239)、THTYEF(SEQ ID NO:240)、TWTYEF(SEQ ID NO:241)、 TYNYEW(SEQ ID NO:242)、TYSYEF(SEQ ID NO:243)、TYSYEH(SEQ ID NO:244)、TYTYDF(SEQ ID NO:245)、TYTYEF(SEQ ID NO:246)、TYTYEW(SEQ ID NO:247)、AYEF(SEQ ID NO:248)、 AYSF(SEQ ID NO: 249)、AYSY (SEQ ID NO: 250)、CYSF (SEQ ID NO: 251)、DYTY (SEQ ID NO:252),KYEH(SEQ ID NO:253),KYEff(SEQ ID NO:254),MYEF(SEQ ID NO:255),NffIY(SEQ ID NO:256)、NYDY(SEQ ID NO:257)、NYQW(SEQ ID NO:258)、NYSF(SEQ ID NO:259)、PYEW(SEQ ID NO:260),RYNff(SEQ ID NO:261),RYTY(SEQ ID NO:262),SYEF(SEQ ID NO:263),SYEH(SEQ ID NO:264)、SYEW(SEQ ID NO:265)、SYKW(SEQ ID NO:266)、SYTY(SEQ ID NO:267)、TYDF(SEQ ID NO:268)、TYEF(SEQ ID NO:269)、TYEW(SEQ ID NO:270)、TYQW(SEQ ID NO:271)、TYTY(SEQ ID NO:272)或 VYEW(SEQ ID NO:273)。
[0175] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述（XaX b)z基序 是 YXYXYX。
[0176] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，⑶R3支架包含 X1X2X3X4X5X n基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)， 其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天 冬醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨 酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X 5是穀氨醯 胺（Q)，以及其中η是27-54。
[0177] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，⑶R3支架包含 Xn(XaXb)z基序，其中Xa是任意胺基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，其中η是27-54,以及其中z是1-4。
[0178] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，⑶R3支架包含 X1X2X3X4X5X n(XaXb)z基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V)，其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X 5是谷 氨醯胺（Q)，Xa是任意胺基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組 氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，其中η是27-54,以及其中ζ是1-4。
[0179] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，CDR3支架中的 X1X2X3X4X5 基序是 TTVHQ(SEQ ID NO: 153)或 TSVHQ(SEQ ID NO: 154)，以及其中（XaXb)z 基序 是 YXYXYX。
[0180] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，⑶R3支架包 含：CX1X 2X3X4X5基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或纈氨 酸（V)，其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸 (V)或天冬醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸⑴或天冬氨酸（D)，其中 X4是組氨酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其 中X 5是穀氨醯胺（Q)，選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序=CXiqCX5CX 5CXCX7C (SEQ ID NO:41) ,CX10CX6Cx5CXCX15C(SEQ ID NO:42) XX11CXCX5C(SEQ ID NO:43) ,CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO: 44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78)、 CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C(SEQ ID NO:87)、CX10CX6CX5CXCx8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID NO:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX1QCX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID NO:95);以及（XaXb)z 基序，其中 Xa 是任意胺基酸殘基，Xb 是 選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，以及 其中z是1_4。
[0181] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，⑶R3支架包含： CX1X2X3X4X5基序，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或纈氨酸（V)， 其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天 冬醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨 酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5是谷 氨醯胺（Q)，選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：其中半胱氨酸基序選自由以下序 列組成的組：CCX 3CXCX3CX2CCXCX5CX9CX 5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID NO :99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC (SEQ ID NO :100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiciC (SEQ ID NO :101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C (SEQ ID NO ： 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C (SEQ ID NO： 103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105), CX3CX5CX6CX4CCXCX5CX 4CXC(SEQ ID NO :106), Cx4Cx4CCX4CX4CXCX1 !CX2CXC (SEQ ID NO： 107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID NO: 109), CX3CX7CX3CX4CCXCX2CX 5CX2C(SEQ ID NO :110), CX9CX3CXCX4CCX5CCCX 6C (SEQ ID NO： 111) > CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID NO :112), CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID NO ： 113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO : 115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC (SEQ ID NO : 116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C (SEQ ID NO ：117), CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC (SEQ ID NO ： 118) , CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C (SEQ ID NO :119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C (SEQ ID NO: 120)、Cx3CX5CX3CCCX4CX 9C (SEQ ID NO :121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C (SEQ ID NO :122)、Cx9CX2CX3CX4CCX 4CX5C (SEQ ID NO : 123)、CX9CX7CX4CCXCX7CX 3C(SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、CX3CX5CX5CX4CCX 1(ICX6C (SEQ ID NO :126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C (SEQ ID NO: 127)、CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO : 128)、CX8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、CX7CX5CXCX4CCX7CX 4C(SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、Cx2CX3CX4CCX4CX 5CX15C (SEQ ID NO : 132)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO :133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C (SEQ ID NO ： 134), CX9CX5CX4CCX14C (SEQ ID NO ： 135), CX9CX5CX4CCX8C (SEQ ID NO :136)、CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO : 137)、CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO :138)、 CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO :141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C (SEQ ID NO :142)、CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID NO :143)、 Cx7CXCX3CXCX6C (SEQ ID NO ： 144) ,CX7CXCX4CXCX4C (SEQ ID NO ： 145) XX9CX5CX4C (SEQ ID NO： 146)、CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147)、CXiciCXCX4C(SEQ ID NO: 148)、CXltlCCX4C(SEQ ID NO: 149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152);以及（XaXb) z基序，其中Xa是任意胺基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組 氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，以及其中z是1-4。
[0182] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，⑶R3支架包含 SEQ ID NO :40或其衍生物。
[0183] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，⑶R3支架包含 SEQ ID NO : 1-4的任一個的胺基酸殘基3-6。
[0184] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，⑶R3支架包含非 人類DH或其衍生物。
[0185] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述非人類DH 是 SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID N0:10、 SEQ ID NO :11 或 SEQ ID NO :12。
[0186] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，⑶R3支架包含 JH序列或其衍生物。
[0187] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述JH序列是 SEQ ID N0:13、SEQ ID N0:14、SEQ ID N0:15、SEQ ID N0:16 或 SEQ ID N0:17。
[0188] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，⑶R3支架包含： 非人類VH序列或其衍生物；非人類DH序列或其衍生物；和/或JH序列或其衍生物。
[0189] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，⑶R3支架包含另 外的胺基酸序列，所述另外的胺基酸序列包含位於VH序列和DH序列之間的二至六個氨基 酸殘基或更多個胺基酸殘基。
[0190] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述另外的氨基 酸序列選自由以下序列組成的組：IR、IF、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO :20或 SEQ ID NO ：21〇
[0191] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，⑶R3支架包含衍 生自或基於 SEQ ID N0:22、SEQ ID N0:23、SEQ ID N0:24、SEQ ID N0:25、SEQ ID N0:26、 SEQ ID NO :27 或 SEQ ID NO :28 的序列。
[0192] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，CDR3支架是反芻 動物⑶R3支架。
[0193] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述反芻動物是 牛。
[0194] 本文公開的內容還提供了包含本文公開的⑶R3支架的文庫。
[0195] 本文公開的內容還提供了編碼本文公開的CDR3支架的多核苷酸。
[0196] 本文公開的內容還提供了包含本文公開的任何多核苷酸的載體。
[0197] 本文公開的內容還提供了包含本文公開的任何載體的宿主細胞。
[0198] 本文公開的內容還提供了
[0199] 在每個或任一個上文或下文提及的實施方式的一些實施方式中，所述細胞是細 菌、病毒或噬菌體。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0200] 當與附圖一同閱讀時，前文的概述以及下文的發明的詳細說明將被更好地理解。 為了舉例說明公開內容的目的，附圖中顯示的是當前優選的實施方式。然而要理解的是，公 開內容不限於所顯示的確切的裝置、實施例和工具。
[0201] 附圖 1 顯示了何含軺長 CDR3 序列的、稱為 BLV1H12、BLV5B8、BLVOT3、BLV8C11、 BF4E9、BFlHl或F18的示例性牛衍生的抗體可變區序列的序列比對。
[0202] 附圖2A-C描繪了超長⑶R3序列。（上方）從種系VhBUU DH2和Jh的翻譯。文獻 中報導的5個全長的超長CDR H3含有四到八個半胱氨酸，彼此不是高度同源的；然而，在比 對之前"固定"這些⑶R H3的第一個半胱氨酸是，可以發現半胱氨酸殘基與DH2的某些保守 性。七個序列中的四個（BLV1H12、BLV?3、BLV8C11和BF4E9)含有與D H2相同位置的四個半 胱氨酸，但還具有其他的半胱氨酸。BLV5B8具有與種系DH2-樣的兩個半胱氨酸。具有一 定半胱氨酸保守性的這種有限的同源性表明，D H2的突變可以產生這些序列。B-Ll和B-L2 是來自源於牛脾臟的初始序列，其餘的是來自深度測序數據的選定的超長CDR H3序列。第 一組含有所鑑定的最長的⑶R H3,顯現為同源相關的（clonally related)。*表明序列出 現167次，表明它是對於功能強烈選定的。八個半胱氨酸序列的某一些表現為功能選擇的， 因為它們出現多次，在括號中標明。各種長度的其他代表性序列在最後一組中標明。限定了 ⑶R H3範圍的框架半胱氨酸和色氨酸殘基是雙下劃線的。表2A-C中呈現的序列BLV1H12 到UL-77 (最左側一列）分成四段來顯示，來區別衍生自某些種系序列和V/D/J連接序列的 胺基酸殘基的節段。從左到右，第一段衍生自VH種系，在公開內容中以X 1X2X3X4X5基序表示。 第二段代表來自V-D連接的序列，在公開內容中以X n表示。第三段代表衍生自DH2種系的 胺基酸殘基的串列，第四段是衍生自JhI種系區域的胺基酸殘基的串列。
[0203] 附圖 3 描繪了稱為 BLV1H12、BLV5B8、BLVOT3、BLV8C11、BF4E9、BFlHl 或 F18 的示 例性牛衍生的超長CDR3序列的序列比對。
[0204] 附圖4顯示了稱為VH-UL的示例性牛種系重鏈可變區（Vh)序列，其適合於修飾或 與超長⑶R3序列一起使用。
[0205] 附圖5A-B顯示了稱為4-39、4-59*03、4-34*09和4-34*02的示例性人類種系重鏈 可變區序列，它們適合於修飾或與超長CDR3序列一起使用（A)，以及這些序列的比對（B)。
[0206] 附圖6顯示了稱為BLV1H12的示例性牛輕鏈可變區序列，其適合於修飾或與超長 CDR3序列一起使用（例如，包含超長CDR3序列的重鏈可變區序列）。
[0207] 附圖 7A-B 顯示了稱為 V11-47、V11-40*1、V11-51*01 和 V12-18*02 的示例性輕鏈 可變區序列，它們適合於修飾或與超長CDR3序列一起使用（A)，以及這些序列的比對（B)。
[0208] 發明詳述
[0209] 本文公開的內容提供了包含超長CDR3序列的人源化抗體，以及生產所述抗體的 材料（例如，蛋白質序列、遺傳序列、細胞、文庫）和方法（例如，人源化方法、文庫方法）。 這種人源化抗體對於多種疾病狀態或失調的治療或預防是有用的。
[0210] 本文公開的內容還提供了包含超長CDR3序列的人源化抗體，其中所述CDR3序列 長度是35個胺基酸或更長（例如，40個或更長、45個或更長、50個或更長、55個或更長、60 個或更長）和/或其中所述CDR3序列具有至少3個半胱氨酸殘基或更多（例如，3個或更多 個半胱氨酸殘基、4個或更多個半胱氨酸殘基、5個或更多個半胱氨酸殘基、6個或更多個半 胱氨酸殘基、7個或更多個半胱氨酸殘基、8個或更多個半胱氨酸殘基、9個或更多個半胱氨 酸殘基、10個或更多個半胱氨酸殘基、11個或更多個半胱氨酸殘基、或12個或更多個半胱 氨酸殘基）。這樣的抗體，如本文描述的，結合（例如，特異性或選擇性結合）多種靶點，包 括，例如，蛋白質靶點，例如跨膜蛋白質（例如，GPCR、離子通道、轉運蛋白、細胞表面受體）。
[0211] 本文公開的內容還提供了用於製備或製造包含超長CDR3序列的人源化抗體的方 法和材料。這樣的材料包括蛋白質、遺傳序列、細胞和文庫。這樣的方法包括人源化的方法 以及產生和篩選文庫的方法。
[0212] 本文公開的內容提供了包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段。在一些實 施方式中，超長CDR3長度可以是35個胺基酸或更長，40個胺基酸或更長，45個胺基酸或 更長，50個胺基酸或更長，55個胺基酸或更長，或60個胺基酸或更長。在一些實施方式 中，超長CDR3可以包含3個或更多個半胱氨酸殘基，4個或更多個半胱氨酸殘基，5個或 更多個半胱氨酸殘基，6個或更多個半胱氨酸殘基，7個或更多個半胱氨酸殘基，8個或更 多個半胱氨酸殘基，9個或更多個半胱氨酸殘基，10個或更多個半胱氨酸殘基，11個或更 多個半胱氨酸殘基，或12個或更多個半胱氨酸殘基。超長CDR3可以包含半胱氨酸基序， 包括，例如，其中所述半胱氨酸基序選自由以下序列組成的組：CX 1(ICX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:41) ,CX10CX6Cx5CXCX15C(SEQ ID NO:42) XX11CXCX5C(SEQ ID NO:43) ,CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78)、 CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C(SEQ ID NO:87)、CX10CX6CX5CXCx8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID N0:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX1QCX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。可替代地，所述超長 CDR3 可以包含 半胱氨酸基序，包括，例如，其中所述半胱氨酸基序選自由以下序列組成的組： CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC (SEQ ID NO ：96), CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC (SEQ ID NO： 97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、 CX5CX3CXCX4CX4CCX1(ICX 2CC (SEQ ID NO :100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiqC (SEQ ID NO :101)、 CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO :102)、Ccx8Cx5Cx4CX3CX 4CCXCX1C (SEQ ID NO :103)、 CCX6CCX5CCCX4CX4CX12C (SEQ ID NO ： 104), CX6CX2CX3CCCX4CX5CX 3CX3C (SEQ ID NO： 105), CX3CX5CX6CX4CCXCX5CX 4CXC (SEQ ID NO ： 106) , CX4CX4CCX4CX4CXCXnCX 2CXC (SEQ ID NO： 107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID NO: 109), CX3CX7CX3CX4CCXCX2CX 5CX2C(SEQ ID NO :110), CX9CX3CXCX4CCX5CCCX 6C (SEQ ID NO： 111) > CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID NO :112), CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID NO ： 113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO : 115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC (SEQ ID NO : 116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C (SEQ ID NO ：117), CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC (SEQ ID NO ： 118) , CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C (SEQ ID NO :119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C (SEQ ID NO: 120)、Cx3CX5CX3CCCX4CX 9C (SEQ ID NO :121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C (SEQ ID NO :122)、Cx9CX2CX3CX4CCX 4CX5C (SEQ ID NO : 123)、CX9CX7CX4CCXCX7CX 3C(SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、CX3CX5CX5CX4CCX 1(ICX6C (SEQ ID NO :126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C (SEQ ID NO: 127)、CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO : 128)、CX8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、CX7CX5CXCX4CCX7CX 4C(SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、Cx2CX3CX4CCX4CX 5CX15C (SEQ ID NO : 132)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO :133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C (SEQ ID NO ： 134), CX9CX5CX4CCX14C (SEQ ID NO ： 135), CX9CX5CX4CCX8C (SEQ ID NO :136)、CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO : 137)、CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO :138)、 CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO :141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C (SEQ ID NO :142)、CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID NO :143)、 Cx7CXCX3CXCX6C (SEQ ID NO ： 144) ,CX7CXCX4CXCX4C (SEQ ID NO ： 145) XX9CX5CX4C (SEQ ID NO： 146)、CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147)、CXiciCXCX4C(SEQ ID NO: 148)、CXltlCCX4C(SEQ ID NO: 149)、CX15C (SEQ ID NO: 150)、CX10C (SEQ ID NO :151)和 CX9C (SEQ ID NO: 152)。
[0213] 本文公開的內容提供了包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段，其中所述超 長CDR3包含X 1X2X3X4X5基序，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或 纈氨酸（V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨 酸（V)或天冬醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸⑴或天冬氨酸（D)，其 中X4是組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及 其中X 5是穀氨醯胺（Q)。在一些實施方式中，所述X1X2X3X 4X5基序可以是TTVHQ(SEQ ID NO: 153),TSVHQ(SEQ ID NO ： 154),SSVTQ(SEQ ID NO ： 155),STVHQ(SEQ ID NO ： 156),ATVRQ(SEQ ID NO: 157)、TTVYQ (SEQ ID NO: 158)、SPVHQ (SEQ ID NO: 159)、ATVYQ (SEQ ID NO: 160)、 TAVYQ (SEQ ID NO :161)、TNVHQ (SEQ ID NO :162)、ATVHQ (SEQ ID NO :163)、STVYQ (SEQ ID NO: 164)、TIVHQ (SEQ ID NO: 165)、AIVYQ (SEQ ID NO: 166)、TTVFQ (SEQ ID NO: 167)、 AAVFQ (SEQ ID NO: 168)、GTVHQ (SEQ ID NO: 169)、ASVHQ (SEQ ID NO: 170)、TAVFQ (SEQ ID NO ：171), ATVFQ (SEQ ID NO ： 172), AAAHQ (SEQ ID NO ： 173), VVVYQ (SEQ ID N0：174), GTVFQ(SEQ ID NO: 175)、TAVHQ(SEQ ID NO: 176)、ITVHQ(SEQ ID NO: 177)、ITAHQ(SEQ ID NO ：178), VTVHQ(SEQ ID N0：179) ；AAVHQ(SEQ ID NO ： 180), GTVYQ(SEQ ID N0：181), TTVLQ (SEQ ID NO: 182)、TTTHQ (SEQ ID NO :183)或 TTDYQ (SEQ ID NO: 184)。
[0214] 本文公開的內容提供了包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段，其中所述超 長CDR3包含（XaXb)z基序，其中Xa是任意胺基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸 (F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，以及其中z是1-4。在一些實施 方式中，所述（XaX b)z 基序可以是 CYTYNYEF(SEQ ID N0:217)、HYTYTYDF(SEQ ID N0:218)、 HYTYTYEff (SEQ ID NO ：219), KHRYTYEff (SEQ ID NO ：220), NYIYKYSF(SEQ ID N0：221), PYIYTYQF(SEQ ID NO ：222), SFTYTYEff (SEQ ID NO ：223), SYIYIYQff (SEQ ID NO ：224), SYNYTYSff(SEQ ID NO ：225), SYSYSYEY(SEQ ID NO ：226), SYTYNYDF (SEQ ID NO ：227), SYTYNYEff(SEQ ID NO ：228), SYTYNYQF(SEQ ID NO ：229), SYVffTHNF(SEQ ID N0：230), TYKYVYEff (SEQ ID NO ：231), TYTYTYEF(SEQ ID NO ：232), TYTYTYEff (SEQ ID N0：233), VFTYTYEF(SEQ ID NO ：234),AYTYEff(SEQ ID NO ：235),DYIYTY(SEQ ID NO ：236),IHSYEF(SEQ ID NO ：237),SFTYEF(SEQ ID NO ：238),SHSYEF(SEQ ID NO ：239),THTYEF(SEQ ID NO ：240), TWTYEF(SEQ ID NO :241)、TYNYEW(SEQ ID NO :242)、TYSYEF(SEQ ID NO :243)、TYSYEH(SEQ ID NO :244)、TYTYDF(SEQ ID NO :245)、TYTYEF(SEQ ID NO :246)、TYTYEW(SEQ ID NO :247)、 AYEF(SEQ ID NO :248)、AYSF(SEQ ID NO :249)、AYSY(SEQ ID NO :250)、CYSF(SEQ ID NO : 251),DYTY(SEQ ID NO ：252),KYEH(SEQ ID NO ：253),KYEff(SEQ ID NO ：254), MYEF(SEQ ID NO :255)、NWIY(SEQ ID NO :256)、NYDY(SEQ ID NO :257)、NYQW(SEQ ID NO :258)、NYSF(SEQ ID NO :259)、PYEW (SEQ ID NO :260)、RYNW (SEQ ID NO :261)、RYTY (SEQ ID NO :262)、 SYEF (SEQ ID NO :263)、SYEH (SEQ ID NO :264)、SYEW (SEQ ID NO :265)、SYKW (SEQ ID NO : 266)、SYTY (SEQ ID NO: 267)、TYDF (SEQ ID NO: 268)、TYEF (SEQ ID NO: 269)、TYEW (SEQ ID NO: 270)、TYQW (SEQ ID NO: 271)、TYTY (SEQ ID NO :272)或 VYEW (SEQ ID NO: 273)。
[0215] 本文公開的內容提供了包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段，其中所述超 長CDR3包含X 1X2X3X4X5Xn(X aXb)z基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨 酸（S)或纈氨酸（V)，其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸 (A)、纈氨酸（V)或天冬醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸⑴或天冬氨 酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸 (L)，以及其中X 5是穀氨醯胺（Q)，其中Xa是任意胺基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙 氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，其中η是27-54,以及其中z 是 1_4〇
[0216] 本文公開的內容提供了包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段，其中所述超長 CDR3包含：CX1X2X3X4X5基序，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈 氨酸（V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸 (V)或天冬醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4 是組氨酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5 是穀氨醯胺（Q)，選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序=CXiqCX5CX5CXCX 7C (SEQ ID NO : 41)、CX10CX6Cx5CXCX15C (SEQ ID NO :42)、CX11CXCX5C (SEQ ID NO :43)、CX11CX5CX5CXCx7C (SEQ ID NO ：44) , CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO :45)、CXiciCX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO :46)、 CX10CX6CX6CXCx7C (SEQ ID NO ：47), CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO ：48), CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID NO ：49) ,CX13CX8CX8C (SEQ ID NO ： 50) ,CX10CX6CX5CXCX7C (SEQ ID NO ： 51) ,CX10CX5CX5C (SEQ ID NO : 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO : 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO : 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C (SEQ ID NO ：55), CX10CX6CX5CXCX9C (SEQ ID NO ： 56), CX10CXCx4CX5CX11C (SEQ ID NO :57)、CX7CX3CX6CX5CXCX 5CX1(iC(SEQ ID NO :58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C(SEQ ID NO :59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO :60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO :61)、 CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO ：62), CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO ：63), CX10CX5CX5CXCX10C (SEQ ID NO :64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO :65)、CXiqCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO :66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO :67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO :68)、CX4CX6CX9CX2CX 11C (SEQ ID NO :69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO :70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、CX10CX6CX5C(SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID NO :73)、CX7CX5CXCX2C(SEQ ID NO :74)、CX10CXCX6C (SEQ ID NO : 75)、CX10CX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、CX10CX4CX5CX12CX 2C (SEQ ID NO :77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO :78)、 CX12CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO ： 79) ,CX10CX6CX5CXCXnC (SEQ ID NO ：80) ,CX16CX5CXCXCX14C (SEQ ID NO :81)、CX10CX5CXCX8Cx6C (SEQ ID NO : 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO :84)、CX1(ICX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID NO :85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C (SEQ ID NO ：86) XX10CX6CX5CX8CX2C (SEQ ID NO ：87) ,CX10CX6CX5CXCX8C (SEQ ID NO :88)、CX1(ICX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO :89)、CXiciCX6CX5CX3CX 8C(SEQ ID NO : 90)、CX10CX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID NO :91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C (SEQ ID NO :92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO :93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX1QCX6CX5CXCX2CX8CX 4C (SEQ ID NO :95)，以及（XaXb) z 基序，其中 Xa 是任意胺基酸殘基，Xb 是 選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，以及 其中z是1_4。
[0217] 本文公開的內容提供了包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段，其中所述超 長CDR3包含：CX 1X2X3X4X5基序，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或 纈氨酸（V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨 酸（V)或天冬醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中 X4是組氨酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中 X5是穀氨醯胺（Q)，選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：其中半胱氨酸基序選自由以 下序列組成的組：
[0218] CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID NO:96), CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC (SEQ ID NO: 100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiqC (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX 4CX12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 Cx3CX5CX5CX4CCX10CX 6C (SEQ ID NO: 126) , CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO: 127), CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、Cx8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、 Cx2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : I 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID NO: 136) , CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO: 137) , CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C (SEQ ID NO: 142) , CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID N0:143), Cx7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQIDN0:150)、CX1ciC(SEQIDN0:151)^PCX 9C(SEQIDN0:152);#& (XaXb)z基序，其中X a是任意胺基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，以及其中z是1-4。
[0219] 本文公開的內容還提供了產生包含超長⑶R3的人源化抗體的文庫的方法，包括： 組合編碼超長CDR3的核酸序列與編碼人類可變區框架（FR)序列的核酸序列，以產生編碼 包含超長CDR3的人源化抗體的核酸；以及表達編碼包含超長CDR3的人源化抗體的所述核 酸，以產生包含超長CDR3的人源化抗體的文庫。
[0220] 本文公開的內容還提供了產生包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的文庫 的方法，所述超長CDR3包含非抗體序列，包括：組合編碼超長CDR3的編碼、編碼人類可變區 框架（FR)序列的核酸序列以及編碼非抗體序列的核酸序列，以產生編碼包含超長CDR3和 非抗體序列的人源化抗體或其結合片段的核酸，表達編碼包含超長CDR3和非抗體序列的 人源化抗體或其結合片段的所述核酸，以產生包含超長CDR3和非抗體序列的人源化抗體 或其結合片段的文庫。
[0221] 本文公開的內容還提供了產生包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的文庫 的方法，所述超長CDR3包含非抗體序列。
[0222] 本文公開的內容還提供了產生包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的文庫 的方法，所述超長CDR3包含半胱氨酸基序，包括：組合人類可變區框架（FR)序列以及編碼 超長CDR3和半胱氨酸基序的核酸序列；向該核酸序列中引入一個或多個核苷酸變化，該核 酸序列編碼位於編碼不同胺基酸殘基的核苷酸的半胱氨酸基序中的一個或多個半胱氨酸 殘基之間的一個或多個胺基酸殘基，以產生編碼包含超長CDR3和半胱氨酸基序的人源化 抗體或其結合片段的核酸，該半胱氨酸基序具有在半胱氨酸結構域中的一個或多個半胱氨 酸殘基之間引入的一個或多個核苷酸變化；以及表達所述編碼人源化抗體或其結合片段的 核酸，所述人源化抗體或其結合片段包含超長CDR3和半胱氨酸基序，該所述半胱氨酸基序 具有在半胱氨酸結構域中的一個或多個半胱氨酸殘基之間引入的一個或多個核苷酸變化， 以產生人源化抗體或其結合片段的文庫，所述人源化抗體或其結合片段包含超長CDR3和 半胱氨酸基序，其中該所述半胱氨酸基序具有在半胱氨酸結構域中的一個或多個半胱氨酸 殘基之間引入的一個或多個核苷酸變化。
[0223] 本文公開的內容還提供了包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的文庫，所 述超長CDR3包含半胱氨酸基序，其中所述抗體或結合片段包含位於半胱氨酸基序中的半 胱氨酸殘基之間的胺基酸殘基的一個或多個取代。
[0224] 本文公開的內容還提供了產生包含牛超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的文 庫的方法，所述方法包括：組合編碼人類可變區框架（FR)序列的核酸序列和編碼牛超長 CDR3的核酸，表達編碼人類可變區框架（FR)序列的核酸和編碼牛超長CDR3的核酸，以產生 包含牛超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的文庫。
[0225] 本文公開的內容還提供了包含X1X2X3X 4X5基序的⑶R3支架，其中X1是蘇氨酸（T)、 甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨 酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨 酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸 (Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5是穀氨醯胺（Q)。
[0226] 蛋白質
[0227] 本文公開的內容提供了包含超長CDR3序列的人源化抗體。
[0228] 在一實施方式中，本文公開的內容提供了包含超長CDR3的人源化抗體，其中所述 CDR3長度是35個胺基酸或更多（例如，40個或更多、50個或更多、55個或更多、60個或更 多）。這種人源化抗體可以包含超長CDR3內的至少3個半胱氨酸殘基或更多（例如，4個 或更多，6個或更多、8個或更多）。
[0229] 在另一種實施方式中，本文公開的內容提供了包含超長CDR3的人源化抗體，其中 所述CDR3是長度35個胺基酸或更多，並且衍生自或基於非人類序列。超長CDR3序列可以 衍生自天然地產生超長⑶R3抗體的任何物種，包括反芻動物，例如家畜（牛，Bos taurus)。
[0230] 在另一種實施方式中，本文公開的內容提供了包含超長CDR3的人源化抗體，其中 所述CDR3是長度35個胺基酸或更多，並且衍生自非抗體序列。所述非抗體序列可以衍生 自任何蛋白質家族，包括但不限於，趨化因子、生長因子、肽、細胞因子、細胞表面蛋白、血清 蛋白、毒素、細胞外基質蛋白、凝血因子、分泌的蛋白，等等。所述非抗體序列可以是人類或 非人類來源的，可以包含非抗體蛋白質的一部分，例如肽或結構域。超長CDR3的非抗體序 列可以含有來自其天然序列的突變，包括胺基酸改變（例如，取代）、插入或刪除。可以在處 於非抗體序列之間的接點處工程化額外的胺基酸，以促進或增強人源化抗體內非抗體序列 的適當摺疊。
[0231] 在另一種實施方式中，本文公開的內容提供了包含超長CDR3的人源化抗體，其中 所述CDR3長度是35個胺基酸或更多，並且包含至少3個或更多個半胱氨酸殘基，包括，例 如，4個或更多，6個或更多，以及8個或更多。
[0232] 在另一種實施方式中，本文公開的內容提供了包含超長CDR3的人源化抗體，其中 所述CDR3長度是35個或更多個胺基酸，並且包含至少3個或更多個半胱氨酸殘基，其中所 述超長CDR3是多特異性抗體的組分。所述多特異性抗體可以是雙特異性的，或包含更多的 效價。
[0233] 在另一種實施方式中，本文公開的內容提供了包含超長CDR3的人源化抗體，其中 所述CDR3長度是35個胺基酸或更多，並且包含至少3個半胱氨酸殘基或更多，其中部分人 類超長CDR3是免疫綴合物的組分。
[0234] 在另一種實施方式中，本文公開的內容提供了包含超長CDR3的人源化抗體，其中 所述CDR3長度是35個胺基酸或更多，並且包含至少3個半胱氨酸殘基或更多，其中包含超 長CDR3的人源化抗體結合跨膜蛋白質靶點。這樣的跨膜靶點可以包括，但不限於，GPCR、離 子通道、轉運蛋白和細胞表面受體。
[0235] 基因序列
[0236] 本文公開的內容提供了編碼包含超長CDR序列的人源化抗體的基因序列（例如， 基因、核酸、多核苷酸）。
[0237] 本文公開的內容還提供了編碼超長CDR3的基因序列（例如，基因、核酸、多核苷 酸）。
[0238] 在一種實施方式中，本文公開的內容提供了編碼包含超長CDR3的人源化抗體的 基因序列，其中所述CDR3長度是35個或更多個胺基酸（例如，40個或更多、50個或更多、 55個或更多、60個或更多）。這種人源化抗體可以包含超長CDR3內的至少3個或更多個半 胱氨酸殘基（例如，4個或更多，6個或更多、8個或更多）。
[0239] 在另一種實施方式中，本文公開的內容提供了編碼包含超長CDR3的人源化抗體 的基因序列，其中所述CDR3是長度35個胺基酸或更多，並且衍生自或基於非人類序列。編 碼超長CDR3的遺傳序列可以衍生自天然地產生超長CDR3抗體的任何物種，包括反芻動物， 例如家畜（牛，Bos taurus)。
[0240] 在另一種實施方式中，本文公開的內容提供了編碼包含超長CDR3的人源化抗體 的基因序列，其中所述CDR3是長度35個胺基酸或更多，並且衍生自非抗體蛋白質序列。所 述編碼非抗體蛋白質序列的基因序列可以衍生自任何蛋白質家族，包括但不限於，趨化因 子、生長因子、肽、細胞因子、細胞表面蛋白、血清蛋白、毒素、細胞外基質蛋白、凝血因子、分 泌的蛋白，等等。所述非抗體蛋白質序列可以是人類或非人類來源的，可以包含非抗體蛋白 質的一部分，例如肽或結構域。超長CDR3的非抗體蛋白質序列可以含有來自其天然序列的 突變，包括胺基酸改變（例如，取代）、插入或刪除。可以在處於非抗體序列之間的接點處工 程化另外的胺基酸，以促進或增強人源化抗體內非抗體序列的適當摺疊。
[0241] 在另一種實施方式中，本文公開的內容提供了編碼包含超長CDR3的人源化抗體 的基因序列，其中所述CDR3長度是35個胺基酸或更多，並且包含至少3個或更多個半胱氨 酸殘基，包括，例如，4個或更多，6個或更多，以及8個或更多。
[0242] 在另一種實施方式中，本文公開的內容提供了編碼包含超長CDR3的人源化抗體 的基因序列，其中所述CDR3長度是35個或更多個胺基酸，並且包含至少3個或更多個半胱 氨酸殘基，其中所述超長CDR3是多特異性抗體的組分。所述多特異性抗體可以是雙特異性 的，或包含更多的效價。
[0243] 在另一種實施方式中，本文公開的內容提供了編碼包含超長CDR3的人源化抗體 的基因序列，其中所述CDR3長度是35個胺基酸或更多，並且包含至少3個半胱氨酸殘基或 更多，其中所述超長CDR3是免疫綴合物的組分。
[0244] 在另一種實施方式中，本文公開的內容提供了編碼包含超長CDR3的人源化抗體 的基因序列，其中所述CDR3長度是35個胺基酸或更多，並且包含至少3個半胱氨酸殘基或 更多，其中包含超長CDR3的人源化抗體結合跨膜蛋白質靶點。這樣的跨膜靶點可以包括， 但不限於，GPCR、離子通道、轉運蛋白和細胞表面受體。
[0245] 文庫和陣列
[0246] 本文公開的內容提供了包含超長CDR3序列的人源化抗體的集合、文庫和陣列。
[0247] 在一種實施方式中，本文公開的內容提供了包含超長CDR3序列的人源化抗體的 文庫或陣列，其中所述文庫或陣列的至少兩個成員在所述超長CDR3序列中的至少一個半 胱氨酸的位置上是不同的。通過所述超長CDR3序列中不同數量的半胱氨酸（例如，至少3 個或更多個半胱氨酸殘基，例如4個或更多個，6個或更多個以及8個或更多個）和/或通 過不同的二硫鍵形成，以及因此不同的環結構，可以增強結構多樣性。
[0248] 在另一種實施方式中，本文公開的內容提供了包含超長CDR3序列的人源化抗體 的文庫或陣列，其中所述文庫或陣列的至少兩個成員在位於所述超長CDR3中的半胱氨酸 之間的至少一個胺基酸處是不同的。就此來說，所述文庫或陣列的成員可以含有CDR3的相 同位置處的半胱氨酸，產生相似的總體結構摺疊，但通過不同的胺基酸側鏈帶來細微的差 異。這樣的文庫或陣列對於親合力成熟可能是有用的。
[0249] 在另一種實施方式中，本文公開的內容提供了包含超長CDR3序列的人源化抗體 的文庫或陣列，其中至少兩個超長CDR3序列在長度上是不同的（例如，胺基酸長度為35個 或更多個胺基酸，例如40個或更多、50個或更多、55個或更多、以及60個或更多）。在文庫 或陣列的成員之間，胺基酸和半胱氨酸含量可以或可以不變化。不同長度的超長CDR3序列 可以提供獨特的結合位點，包括，例如，由於作為長度改變的結果的空間差異。
[0250] 在另一種實施方式中，本文公開的內容提供了包含超長CDR3序列的人源化抗體 的文庫或陣列，其中所述文庫的至少兩個成員在用於構建包含超長CDR3的人源化抗體的 人類框架方面是不同的。
[0251] 在另一種實施方式中，本文公開的內容提供了包含超長CDR3序列的人源化抗體 的文庫或陣列，其中所述文庫或陣列的至少兩個成員不同在於具有包含一部分超長CDR3 的非抗體蛋白質序列。這樣的文庫或陣列可以含有多個非抗體蛋白質序列，包括趨化因子、 生長因子、肽、細胞因子、細胞表面蛋白、血清蛋白、毒素、細胞外基質蛋白質、凝血因子、分 泌的蛋白質、病毒或細菌蛋白質，等等。所述非抗體蛋白質序列可以是人類或非人類來源 的，可以包含非抗體蛋白質的一部分，例如肽或結構域。超長CDR3的非抗體蛋白質序列可 以含有來自其天然序列的突變，包括胺基酸改變（例如，取代）、插入或刪除。可以在處於超 長CDR3內的非抗體序列之間的接點處工程化另外的胺基酸，以促進或增強人源化抗體內 非抗體序列的適當摺疊。
[0252] 本文公開的內容的文庫或陣列可以是本領域公知的幾種形式。所述文庫或陣列可 以是可定址的文庫或可定址的陣列。所述文庫或陣列可以處於展示形式，例如，抗體序列可 以在噬菌體、核糖體、mRNA、酵母或哺乳動物細胞上表達。
[0253] 細胞
[0254] 本文公開的內容提供了包含基因序列的細胞，所述基因序列編碼包含超長CDR3 序列的人源化抗體。
[0255] 在一種實施方式中，本文公開的內容提供了表達包含超長CDR3的人源化抗體的 細胞。所述細胞可以是原核或真核的，包含超長CDR3的人源化抗體可以在細胞表面表達， 或分泌到培養基中。當在細胞表面展示時，人源化抗體優選地含有用於向質粒膜中插入的 基序，例如，處於C-末端的跨膜結構域，或脂質附著位點。對於細菌細胞，包含超長CDR3的 人源化抗體可以分泌到周質中。當細胞是真核的時，它們可以用編碼包含超長CDR3的人源 化抗體的遺傳序列瞬時轉染。可替代地，可以通過本領域技術人員公知的方法，轉染或轉導 編碼包含超長CDR3的人源化抗體的遺傳序列來創建穩定的細胞系或穩定的庫。可以通過 螢光活化的細胞分選（FACS)或通過選擇編碼藥物抗性的基因來挑選細胞。對於生產包含 超長CDR3序列的人源化抗體有用的細胞包括原核細胞如大腸桿菌，真核細胞如酵母，釀酒 酵母（Saccharomyces cerevisiae)和巴斯德畢赤氏酵母（Pichia pastoris)，中國倉鼠卵 巢（CHO)細胞，猴細胞如C0S-1，或人類細胞如HEK-293、HeLa、SP-l。
[0256] 人源化方法
[0257] 本文公開的內容提供了製造包含超長CDR3序列的人源化抗體的方法，包括將衍 生自非人類CDR3的超長CDR3序列工程化到人類框架之中的步驟。所述人類框架可以是種 系來源的，或可以衍生自非種系（例如，突變的或親和力成熟的）序列。本領域技術人員 公知的的遺傳工程技術，包括在本文中公開的，可以用於產生含有人類框架和非人類超長 CDR3的雜合DNA序列。不同於可以由衍生自七個家族之一的V區基因編碼的人類抗體，產生 超長CDR3序列的牛抗體看起來利用了單個V區家族，其可以被認為與人類VH4家族最為同 源。在優選的實施方式，衍生自牛的超長CDR3序列被人源化，以產生包含超長CDR3的抗體， 衍生自VH4家族的人類V區序列可以遺傳地融合到牛衍生的超長CDR3序列。人類抗體基因 座中的示例性VH4種系基因序列在附圖5A中顯示（例如，SEQ ID NO :31-34和368-371)。
[0258] 本文公開的內容還提供了人源化抗體可變區的方法，包括遺傳地組合編碼非 人類超長CDR3(ULCDR3)的核酸序列與編碼人類可變區框架（FR)序列的核酸序列的步 驟。還提供的是製造人源化抗體可變區的方法，包括選擇包含FR1、FR2和FR3的人類 框架序列；選擇CDRl序列；選擇CDR2序列；選擇超長CDR3序列；以及組合所述序列為 FRl-⑶R1-FR2-⑶R2-FR3-UIXDR3。還提供的是製造人源化抗體可變區序列的方法，包括選 擇包含編碼FRl-⑶R1-FR2-⑶R2-FR3的序列的人類抗體可變區序列；選擇編碼非人類超長 CDR3(ULCDR3)的序列；以及將步驟（a)的人類序列與步驟（b)的非人類序列按閱讀框融 合，以產生編碼 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-ULCDR3 的序列。
[0259] 在一種實施方式中，本文公開的內容提供了人類VH4框架序列與牛衍生的超長 CDR3的融合物，例如，可以通過以下步驟實現的。首先，鑑定V區遺傳序列的第二個半胱氨 酸，以及編碼所述第二個半胱氨酸的核苷酸序列。一般地，所述第二個半胱氨酸標記了 CDR3 的上遊（N-末端）兩個殘基處的框架與⑶R3的邊界。第二，鑑定牛衍生的V區序列中的第 二個半胱氨酸，其類似地標記了⑶R3的上遊（N-末端）2個殘基。第三，編碼人類V區的遺 傳材料與編碼超長CDR3的遺傳序列組合。因而，可以製造遺傳融合物，其中超長CDR3序列 位於人類V區序列的框架中。優選地，包含超長CDR3的人源化抗體在胺基酸組成方面盡可 能地接近人類。任選地，J區序列可以從牛衍生的序列突變為人類序列。還任選的是，人源 化的重鏈可以與人類輕鏈配對。
[0260] 在另一種實施方式中，本文公開的內容提供了人類超長CDR3重鏈與非人類輕鏈 的配對。
[0261] 在另一種實施方式中，本文公開的內容提供了包含超長CDR3的人源化重鏈與人 類輕鏈的配對。優選地，所述輕鏈與已知與牛超長CDR3重鏈配對的牛輕鏈是同源的。示例 性牛輕鏈在附圖7A中示出（例如，SEQ ID NO:36-39和373-376)。
[0262] 文庫方法
[0263] 本文公開的內容提供了製造包含人源化抗體的文庫的方法，所述人源化抗體包含 超長⑶R3序列。在WO 2010/054007中描述了製造空間定址文庫的文庫的方法。在酵母、 噬菌體、大腸桿菌或哺乳動物細胞中製造文庫的方法是本領域公知的。
[0264] 本文公開的內容還提供了篩選包含超長CDR3序列的人源化抗體的文庫的方法。
[0265] 定義
[0266] "超長⑶R3"或"超長⑶R3序列"在本文中可互換地使用，包括不是衍生自人類抗 體序列的CDR3或CDR3序列。超長CDR3長度可以是35個胺基酸或更長，例如，40個氨基 酸或更長，45個胺基酸或更長，50個胺基酸或更長，55個胺基酸或更長，或60個胺基酸或 更長。超長CDR3的長度可以包括非抗體序列。超長CDR3可以包含非抗體序列，包括，例 如，白細胞介素序列、激素序列、細胞因子序列、毒素序列、淋巴因子序列、生長因子序列、趨 化因子序列、毒素序列、或其組合。優選地，超長⑶R3是重鏈⑶R3 (⑶R-H3或⑶RH3)。優 選地，超長CDR3是衍生自或基於反芻動物（例如，牛）序列的序列。超長CDR3可以包含 至少3個或更多個半胱氨酸殘基，例如，4個或更多個半胱氨酸殘基，6個或更多個半胱氨 酸殘基，8個或更多個半胱氨酸殘基，10個或更多個半胱氨酸殘基，或12個或更多個半胱 氨酸殘基（例如，3、4、5、6、7、8、9、10、11、12個或更多個）。超長^1?3可以包含以下基序 中的一種或多種：半胱氨酸基序，X 1X2X3X4X5基序，CX 1X2X3X4X5基序，或（X aXb)z基序。"半胱 氨酸基於"是超長CDR3中胺基酸殘基的節段，其包含3個或更多個半胱氨酸殘基，包括4 個或更多個半胱氨酸殘基，5個或更多個半胱氨酸殘基，6個或更多個半胱氨酸殘基，7個 或更多個半胱氨酸殘基，8個或更多個半胱氨酸殘基，9個或更多個半胱氨酸殘基，10個或 更多個半胱氨酸殘基，11個或更多個半胱氨酸殘基，或12個或更多個半胱氨酸殘基。半 胱氨酸基序可以包含選自由以下序列組成的組的胺基酸序列：CX 1(ICX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:41) ,CX10CX6Cx5CXCX15C(SEQ ID NO:42) XX11CXCX5C(SEQ ID NO:43) ,CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO: 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID NO:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C (SEQ ID NO :86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO :87)、CX10CX6CX5CXCx8C (SEQ ID NO:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID NO:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX1QCX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID NO:95)。可替代地，半胱氨酸基序可以包含選自由以下序列 組成的組的胺基酸序列：
[0267] CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID NO:96), CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC (SEQ ID NO: 100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiqC (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX 4CX12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID NO:lll)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID NO:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID NO:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID NO:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID NO:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID NO:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID NO:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID NO:121)、CCX9CX3CXCCX3CX 5C(SEQ ID NO:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID NO:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 Cx3CX5CX5CX4CCX10CX 6C (SEQ ID NO: 126) , CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO: 127), CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、Cx8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、 Cx2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : I 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID NO: 136) , CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO: 137) , CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C (SEQ ID NO: 142) , CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID N0:143), Cx7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152)。半胱氨 酸基序優選地位於超長CDR3內X1X2X3X 4X5基序和（XaXb) z基序之間。I1X2X3X4X 5基序"是超 長CDR3中一系列的五個連續胺基酸殘基，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、 絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙 氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天 冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或 亮氨酸（L)，以及其中X 5是穀氨醯胺（Q)。在一些實施方式中，所述X1X2X3X 4X5基序可以 是 TTVHQ(SEQ ID N0:153)、TSVHQ(SEQ ID N0:154)、SSVTQ(SEQ ID N0:155)、STVHQ(SEQ ID NO :156), ATVRQ (SEQ ID NO: 157), TTVYQ (SEQ ID NO: 158), SPVHQ (SEQ ID NO: 159), ATVYQ(SEQ ID NO: 160), TAVYQ(SEQ ID NO: 161), TNVHQ(SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID NO:163)、STVYQ(SEQ ID NO:164)、TIVHQ(SEQ ID NO:165)、AIVYQ(SEQ ID NO: 166)、 TTVFQ (SEQ ID NO :167)、AAVFQ (SEQ ID NO :168)、GTVHQ (SEQ ID NO :169)、ASVHQ (SEQ ID NO :170), TAVFQ (SEQ ID NO: 171), ATVFQ (SEQ ID NO: 172), AAAHQ (SEQ ID NO: 173), VVVYQ(SEQ ID NO: 174), GTVFQ(SEQ ID NO: 175), TAVHQ(SEQ ID NO: 176), ITVHQ(SEQ ID NO :177), ITAHQ (SEQ ID NO: 178), VTVHQ (SEQ ID NO: 179) ；AAVHQ(SEQ ID NO: 180), GTVYQ(SEQ ID NO:181)、TTVLQ(SEQ ID NO:182)、TTTHQ(SEQ ID NO:183)或 TTDYQ(SEQ ID NO: 184)。WCX1X2X3X4X5基序"是超長⑶R3中的一系列六個連續胺基酸殘基，其中第一個氨 基酸殘基是半胱氨酸，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬醯胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5 是穀氨醯胺（Q)。在一些實施方式中，所述CX1X2X3X4X 5基序是CTTVHQ(SEQ ID NO: 185)、 CTSVHQ(SEQ ID NO: 186)、CSSVTQ(SEQ ID NO: 187)、CSTVHQ(SEQ ID NO: 188)、CATVRQ(SEQ ID NO:189)、CTTVYQ(SEQ ID NO:190)、CSPVHQ(SEQ ID NO:191)、CATVYQ(SEQ ID NO:192)、 CTAVYQ(SEQ ID NO: 193)、CTNVHQ(SEQ ID NO: 194)、CATVHQ(SEQ ID NO: 195)、CSTVYQ(SEQ ID NO:196)、CTIVHQ(SEQ ID NO:197)、CAIVYQ(SEQ ID NO:198)、CTTVFQ(SEQ ID NO:199)、 CAAVFQ(SEQ ID NO:200)、CGTVHQ(SEQ ID NO:201)、CASVHQ(SEQ ID NO:202)、CTAVFQ(SEQ ID NO:203)、CATVFQ(SEQ ID NO:204)、CAAAHQ(SEQ ID NO:205)、CVVVYQ(SEQ ID NO:206)、 CGTVFQ(SEQ ID NO:207)、CTAVHQ(SEQ ID NO:208)、CITVHQ(SEQ ID NO:209)、CITAHQ(SEQ ID NO:210),CVTVHQ(SEQ ID N0:211) ；CAAVHQ(SEQ ID NO:212),CGTVYQ(SEQ ID N0:213), CTTVLQ(SEQ ID N0:214)、CTTTHQ(SEQ ID N0:215)或 CTTDYQ(SEQ ID N0:216)。"（XaXb)z" 基序是超長CDR3中兩個胺基酸殘基的重複系列，其中X a是任意胺基酸殘基，Xb是選自由酪 氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，以及其中z是 1-4。在一些實施方式中，（X aXb)z 基序可以包含 CYTYNYEF(SEQ ID N0:217)、HYTYTYDF(SEQ ID NO:218), HYTYTYEff (SEQ ID NO:219), KHRYTYEff (SEQ ID NO:220), NYIYKYSF(SEQ ID N0:221), PYIYTYQF(SEQ ID NO:222), SFTYTYEff(SEQ ID NO:223), SYIYIYQff(SEQ ID NO:224), SYNYTYSff(SEQ ID NO:225), SYSYSYEY(SEQ ID NO:226), SYTYNYDF(SEQ ID NO: 227) , SYTYNYEff (SEQ ID NO: 228) , SYTYNYQF (SEQ ID NO: 229) , SYVffTHNF (SEQ ID NO: 230), TYKYVYEff (SEQ ID NO: 231), TYTYTYEF (SEQ ID NO: 232), TYTYTYEff (SEQ ID NO:233)、VFTYTYEF(SEQ ID NO:234)、AYTYEW(SEQ ID NO:235)、DYIYTY(SEQ ID NO:236)、 IHSYEF(SEQ ID NO:237)、SFTYEF(SEQ ID NO:238)、SHSYEF(SEQ ID NO:239)、THTYEF(SEQ ID NO:240)、TWTYEF(SEQ ID NO:241)、TYNYEW(SEQ ID NO:242)、TYSYEF(SEQ ID NO:243)、 TYSYEH(SEQ ID NO:244),TYTYDF(SEQ ID NO:245),TYTYEF(SEQ ID NO:246),TYTYEff(SEQ ID NO:247),AYEF(SEQ ID NO:248),AYSF(SEQ ID NO:249),AYSY(SEQ ID NO:250)XYSF(SEQ ID NO:251),DYTY(SEQ ID NO:252),KYEH(SEQ ID NO:253),KYEff(SEQ ID NO:254),MYEF(SEQ ID NO:255),NffIY(SEQ ID NO:256),NYDY(SEQ ID NO:257),NYQff(SEQ ID NO:258),NYSF(SEQ ID NO:259)、PYEW(SEQ ID NO :260)、RYNff(SEQ ID NO :261)、RYTY(SEQ ID NO :262)、SYEF(SEQ ID NO:263)、SYEH(SEQ ID NO :264)、SYEW(SEQ ID NO :265)、SYKW(SEQ ID NO :266)、SYTY(SEQ ID NO:267)、TYDF(SEQ ID NO :268)、TYEF(SEQ ID NO :269)、TYEW(SEQ ID NO :270)、TYQW(SEQ ID N0:271)、TYTY(SEQ ID N0:272)或 VYEW(SEQ ID N0:273)。在一些實施方式中，所述 (XaXb) z基序是YXYXYX。超長⑶R3可以包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列衍生自或基於 SEQ ID NO :40(參見，例如，SEQ ID NO: 1-4的胺基酸殘基3-6;還參見，例如，附圖2A-C中的 VH種系序列）。包含超長CDR3的可變區可以包括一胺基酸序列，所述胺基酸序列是SEQ ID N0:1(CTTVHQ)、SEQ ID N0:2(CTSVHQ)、SEQ ID N0:3(CSSVTQ)或SEQ ID N0:4(CTTVHP)。這樣 的序列可以衍生自或基於牛種系VH基因序列（例如，SEQ ID NO: 1)。超長CDR3可以包含衍 生自或基於非人類DH基因序列的序列，例如，SEQ ID N0:5(還參見，例如Koti,等人（2010) Mol. Immunol. 47:2119-2128)，或可選擇的序列，例如，SEQ ID N0:6、7、8、9、10、ll 或 12(還 參見，例如，附圖2A-C中的DH2種系序列）。超長CDR3可以包含衍生自或基於JH序列的序 列，例如，SEQ ID NO: 13(還參見，例如 Hosseini,等人（2004) Int. Immunol. 16:843-852)， 或可選擇的序列，例如，SEQIDN0:14、15、16或17(還參見，例如，附圖2A-C中的JH1種系 序列）。在一實施方式中，超長CDR3可以包含衍生自或基於非人類VH序列的序列（例如， SEQ ID N0:l、2、3或4;可替代地，附圖2A-C中的VH序列）和/或衍生自或基於非人類DH 序列的序列（例如，SEQ ID N0:5、6、7、8、9、10、ll或12 ;可替代地，附圖2A-C中的DH序列） 和/或衍生自或基於JH序列的序列（例如，SEQ ID NO: 13、14、15、16或17 ;可替代地，附圖 2A-C中的JH序列），和任選的額外的序列，所述額外的序列包含二至六個或更多個胺基酸 (例如，IR、IF、SEQ ID N0:18、19、20或21)，例如，位於VH衍生的序列和DH衍生的序列之 間。在另一個實施方式中，超長CDR3可以包含衍生自或基於SEQ ID N0:22、23、24、25、26、 27或28的序列（還參見，例如，附圖2A-C中的SEQ ID NO: 276-359)。
[0268] 本文公開的"分離的"生物分子，例如各種多肽、多核苷酸和抗體，是指已經被鑑定 和分離，和/或從其天然環境的至少一種成分中回收的生物分子。
[0269] "拮抗劑"是指部分地或完全地阻斷、抑制或中和多肽的活性（例如，生物學活性） 的任何分子。"拮抗劑"還涵蓋的是完全地或部分地抑制編碼多肽的mRNA的轉錄或翻譯的 分子。適合的拮抗劑分子包括，例如，拮抗劑抗體或抗體片段；天然多肽的片段或胺基酸序 列變體；肽；反義寡核苷酸；小的有機分子；以及編碼多肽拮抗劑或拮抗劑抗體的核酸。提 及"一種"拮抗劑涵蓋了單一的拮抗劑或兩個或更多個不同拮抗劑的組合。
[0270] "激動劑"是指部分地或完全地模擬多肽的生物學活性的任何分子。"激動劑"還 涵蓋的是刺激編碼多肽的mRNA的轉錄或翻譯的分子。適合的激動劑分子包括，例如，激動 劑抗體或抗體片段；天然多肽；天然多肽的片段或胺基酸序列變體；肽；反義寡核苷酸；小 的有機分子；以及編碼多肽激動劑或抗體的核酸。提及"一種"激動劑涵蓋了單一的激動劑 或兩個或更多個不同激動劑的組合。
[0271] "分離的"抗體是指一種抗體，其已經被鑑定和分離，和/或從其天然環境的成分 中回收。其天然環境的汙染成分是幹擾所述抗體的診斷或治療用途的材料，可包括酶、激 素和其它蛋白的或非蛋白的溶質。在優選的實施方式中，分離的抗體將被純化至（1)按 抗體的重量計算大於95% (例如，通過Lowry法測定的），優選的按重量計算超過99%， (2)達到足以獲得N-末端或內部胺基酸序列的至少15個殘基的程度（例如，通過使用旋 轉杯測序儀），或（3)達到在還原或非還原條件下SDS-PAGE的同質性（例如，使用考馬斯 (Coomassie?)藍或優選的銀黃染色）。分離的抗體包括重組細胞內原位的抗體，因為不存 在抗體的天然環境的至少一種成分。類似地，分離的抗體包括處於重組細胞周圍的培養基 中的抗體。分離的抗體可以通過至少一種純化步驟來製備。
[0272] "分離的"核酸分子是指從抗體核酸的天然來源中通常與之相關的至少一種雜 質核酸分子中鑑定和分離的核酸分子。分離的核酸分子不同於其天然存在的形式或環境 (setting)。因此分離的核酸分子不同於在天然細胞中存在的核酸分子。然而，分離的核酸 分子包括被包含在表達抗體的細胞中的核酸分子，其中，例如，核酸分子位於與天然細胞的 不同的染色體位置中。
[0273] Kabat 中的可變域殘基編號，或 Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版，Public Health Service, National Institutes of Health，Bethesda，Md. (1991)中的胺基酸位置編號，以及其變體，是指在Kabat等人中用於 抗體編碼的重鏈可變域或輕鏈可變域的編號系統。使用這種編號系統，實際上線性的氨基 酸序列可以含有更少或額外的胺基酸，相應於可變域的FR或CDR的縮短，或插入。例如， 重鏈可變域可以包括處於H2的殘基52之後的單個胺基酸插入（例如，根據Kabat的殘基 52a)，以及處於重鏈FR殘基82之後的插入的殘基（例如，根據kabat的殘基82a、82b和 82c，等）。對於給定抗體，殘基的Kabat編號可以通過在抗體序列的同源性區域上與"標準 的" Kabat編號的序列比對來確定。
[0274] "基本上相似的"或"基本上相同的"是指在兩個數值（一般地，一個數值與本文公 開的抗體相關，另一個數值與參比/比較抗體相關）之間足夠高的相似性，從而本領域技術 人員將認為在所述值所衡量的生物學特徵的情境內兩個值之間的差異很小或沒有生物學 和/或統計學上的顯著性。作為參考/比較抗體的值的函數，所述兩個值之間的差異優選 地小於約50 %，優選地小於約40 %，優選地小於約30 %，優選地小於約20 %，優選地小於約 10%。
[0275] "結合親和性" 一般是指分子（例如，抗體）的單個結合位點與它的結合配體（例 如，抗原）之間的非共價相互作用的總和的強度。除非另外標明，"結合親和性"是指固有的 結合親和性，其反映了結合配對（例如，抗體和抗原）的成員之間1:1的相互作用。分子X 與它的配體Y的親和力一般可以通過解離常數來表示。親和力可以通過本領域已知的常見 方法來測量，包括本文描述的那些。低親和力抗體一般緩慢地結合抗原並傾向於容易解離， 而高親和力抗體一般更快地結合抗原並傾向於保持結合更久。測量結合親和性的多種方法 是本領域已知的，它們的任何一種可以用於本文公開的內容。
[0276] "加載速率（on-rate) "或"締合的速率"或"締合速率"或"km"可以使用表面胞 質團共振技術根據供應商的指導來測定，例如，Biacore (例如，1^3(3〇^4100，1^3〇〇^?-2000, Biacore?-3000, Biacore, Inc.，Piscataway, N. J.)羧甲基化葡聚糖生物傳感器晶片 (CM5, Biacore Inc.)〇
[0277] "載體"是指能夠轉運與之連接的另一個核酸的核酸分子。一種類型的載體是"質 粒"，是指在其中可以連接其他DNA片段的環狀雙鏈DNA環。另一種類型的載體是噬菌體載 體。另一種類型的載體是病毒載體，其中其他的DNA片段可以連接到病毒基因組中。某些 載體能夠在導入它們的宿主細胞中自主複製（例如，具有細菌複製起點的細菌載體和游離 哺乳動物載體）。其他載體（例如，非游離哺乳動物載體）可以在導入宿主細胞中時被整合 到宿主細胞的基因組中，從而隨宿主基因組一起複製。此外，某些載體能夠指導與它們可操 作連接的基因的表達。這樣的載體在此被稱為"重組表達載體"（或簡稱"重組載體"）。一 般地，在重組DNA技術中有實用性的表達載體常常是質粒的形式。因而，"質粒"和"載體" 有時可互換地使用，因為質粒是常用的載體形式。
[0278] "基因"是指核酸（例如，DNA)序列，其包含多肽、前體或RNA(例如，rRNA、tRNA) 的生產所必需的編碼序列。多肽可以由全長編碼序列或由編碼序列的任何部分來編碼，只 要保持了全長或片段的期望的活性或功能性質（例如，酶活性、配體結合、信號轉導、免疫 原性，等等）。該術語還涵蓋結構基因的編碼區域以及距每一端約Ikb或更遠距離鄰近於 編碼區域的5'和3'末端的序列，從而所述基因相應於全長mRNA的長度。位於編碼區域的 5'並在mRNA上存在的序列被稱為5'非翻譯序列。位於編碼區域的3'或下遊並在mRNA 上存在的序列被稱為3'非翻譯序列。術語"基因"涵蓋了基因的cDNA和基因組形式。基 因的基因組形式或克隆含有被非編碼序列中斷的編碼區域，所述非編碼序列被稱為"內含 子"或"間插區"或"間插序列"。內含子是轉錄成核RNA (hnRNA)的基因的片段；內含子可 以含有調節元件例如增強子。內含子從核的或初級轉錄產物中被除去或"剪出"，因而在信 使RNA(mRNA)轉錄產物中沒有內含子。mRNA在翻譯期間起作用，來指定新生多肽中胺基酸 的序列或順序。除了含有內含子之外，基因的基因組形式還可以包括存在於RNA轉錄產物 上、位於序列的5'和3'末端的序列。這些序列被稱為"側翼"序列或區域（這些側翼序列 位於mRNA轉錄產物上存在的非翻譯序列的5'或3'）。5'側翼區域可能含有調節序列，例 如，啟動子和增強子，它們控制或影響基因的轉錄。3'側翼區域可能含有指導轉錄終止、轉 錄後裂解和多聚腺苷酸化的序列。
[0279] "多核苷酸"或"核酸"在本文中可互換地使用，是指任何長度的核苷酸的聚合物， 包括DNA和RNA。核苷酸可以是脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修飾的核苷酸或鹼基，和/ 或它們的類似物，或可以通過DNA或RNA聚合酶、或通過合成反應摻入到聚合物中的任何底 物。多核苷酸可以包含修飾的核苷酸，例如，甲基化的核苷酸和它們的類似物。如果存在， 在聚合物的組裝之前或之後，可以進行對核苷酸結構的修飾。核苷酸的序列可以被非核苷 酸部分打斷。多核苷酸可以在合成之後被進一步修飾，例如，通過與標記物結合。其他類型 的修飾包括，例如，"加帽（caps) "，用類似物取代一個或多個天然存在的核苷酸，核苷間修 飾，例如，具有不帶電的連鍵（膦酸甲酯、磷酸三酯、磷醯胺、氨基甲酸酯，等）和具有帶電的 連鍵（例如，硫代磷酯、二硫代磷酸酯，等）的那些，含有懸垂部分的那些，例如，蛋白質（例 如，核酸酶、毒素、抗體、信號肽、聚-L 一賴氨酸，等），具有嵌入劑（例如，吖啶、補骨脂素， 等）的那些，含有螯合劑（例如，金屬、放射性金屬、硼、氧化金屬，等）的那些，含有烷化劑 的那些，具有修飾的連鍵（例如，α -異頭核酸，等）的那些，以及多核苷酸的未修飾的形式。 進一步的，例如，通常存在於糖中的任何羥基基團可以被膦酸酯基團、磷酸基團置換，被標 准保護基團保護，或被活化來製備與其他核苷酸的連鍵，或可以被綴合到固體或半固體支 持物上。5'和3'末端OH可以被磷酸化，或用胺或1到20個碳原子的有機加帽基團部分來 取代。其他羥基也可以被衍生化為標準保護基團。多核苷酸還可以含有本領域公知的核糖 或脫氧核糖的類似形式，包括，例如，2' -0-甲基-，2' -0-烯丙基，2' -氟-或2' -疊氮-核 糖，碳環的糖類似物，α -異頭糖，差向異構的糖，例如阿拉伯糖、木糖或來蘇糖、吡喃糖、呋 喃糖、景天庚酮糖、無環類似物，以及基礎核苷類似物，例如甲基核苷。一個或多個磷酸二酯 鍵可以被可選擇的連接基團替代。這些可選擇的連接基團包括，但不限於，其中磷酸鹽被 ?(〇)3("硫代"）、？(5)5("二硫代"）、〃(0)殿2("醯胺化"）、？(0)1^(0)(?'、0)或01 2("甲 縮醛"）替換的實施方式，其中每個R或R'獨立地是H或取代的或未取代的烷基（1-20 C)， 任選地含有醚（O)鍵、芳基、烯基、環烷基、環烯基或芳烷基（araldyl)。多核苷酸中的所有 連鍵不必是相同的。上文的描述適用於本文提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。
[0280] "寡核苷酸"是指短的，一般為單鏈的，一般為合成的多核苷酸，其長度一般地而不 是必然地小於約200個核苷酸。術語"寡核苷酸"和"多核苷酸"不是互斥的。上文對多核 苷酸的描述同樣地和完全地適合於寡核苷酸。
[0281] "嚴格雜交條件"是指一些條件，在所述條件下，一般在複雜的核酸混合物中，探針 將與其目標子序列雜交，而不與其他的序列雜交。嚴格條件是序列依賴性的，在不同環境中 是不同的。更長的序列在更高的溫度下特異性雜交。對於核酸雜交的廣泛的指導可以在 Tijssen,Techniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridization with Nucleic Probes, ''Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acid assays" (1993)中找到。一般地，選擇嚴格條件為比定義的離子強度pH下 特定序列的熱熔點（Tm)低約5-10°C。Tm可以是溫度（在定義的離子強度、pH和核酸濃度 下），在該溫度下50%與目標互補的探針與目標序列雜交處於平衡狀態（目標序列過量存 在，在Tm時，50 %的探針被佔據處於平衡狀態）。嚴格調節還可以添加去穩定劑例如甲醯 胺來實現。對於選擇性或特異性雜交，陽性信號可以是至少兩倍的背景雜交，優選的10倍 背景雜交。示例性嚴格雜交條件可以是如下的：50%甲醯胺、5XSSC和1% SDS，在42°C孵 育，或 5XSSC、1% SDS、在 65°C孵育，在 0· 2XSSC 和 0· 1% SDS 中 65°C下洗滌。
[0282] 當提及細胞、核酸、蛋白質或載體使用時，"重組"表明該細胞、核酸、蛋白質或載體 已經通過導入異源核酸或蛋白質或天然核酸或蛋白質的改變被修飾，或者所述細胞來自這 樣修飾的細胞。例如，重組細胞表達在細胞的天然（非重組）形式下不不存在的基因，或表 達天然基因，所述天然基因被過量表達或被異常表達，例如，表達為非天然存在的片段或剪 接變體。所述"重組核酸"在本文中是指最初在試管中形成的核酸，一般通過核酸的操作， 例如使用聚合酶和內切酶，處於自然中通常不存在的形式下。照這樣，實現了不同序列的可 操作的連接。因而，處於線性形式的分離的核酸、或通過將通常不接合的DNA分子連接而在 體外形成的表達載體，對於本發明來說都被認為是重組的。要理解的是，一旦重組核酸被制 造和導入宿主細胞或生物體，它將非重組性地複製，例如，利用宿主細胞的體內細胞機制而 不是體外操作；然而，這樣的核酸一旦被重組地生產，雖然隨後的複製是非重組性的，對於 在此公開的目的而言仍被認為是重組的。類似地，"重組蛋白質"是使用重組技術製造的蛋 白質，例如，通過如上文描述的表達重組核酸。
[0283] 對於肽或多肽序列"胺基酸序列同一性百分比"是指在比對序列並在必要時 引入空位來實現最大百分比的序列同一性時，候選序列中與特定肽或多肽序列中的胺基酸 殘基相同的胺基酸殘基的百分比，任何保守性取代不認為是序列同一性的部分。為了確定 胺基酸序列同一性百分比的比對可以用本領域技術人員知道的各種方式來實現，例如，使 用公眾可獲得的計算機軟體，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)軟體。本 領域技術人員可以確定用于衡量比對的合適的參數，包括在被比較的序列全長上實現最大 對準所需的任何算法。
[0284] 術語"多肽"、"肽"和"蛋白"可互換地使用來指代胺基酸殘基的聚合物。該術語 還適用於這樣的胺基酸聚合物，在其中一個或多個胺基酸殘基是相應的天然存在的胺基酸 的人工化學模擬物，還適合於天然存在的胺基酸聚合物和非天然存在的胺基酸聚合物。
[0285] "胺基酸"是指天然存在的和合成的胺基酸，以及功能上類似於天然存在的胺基酸 的胺基酸類似物和胺基酸模擬物。天然存在的胺基酸是由遺傳密碼編碼的那些，以及在後 期被修飾的那些胺基酸，例如，羥脯氨酸、gamma-羧基穀氨酸和0-磷酸絲氨酸。胺基酸類 似物是指一類化合物，其具有與天然存在的胺基酸相同的基礎化學結構，例如，結合到氫的 α碳、羧基基團、氨基基團和R基團，例如，高絲氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亞碸、甲硫氨酸甲 基鋶。這種類似物可以具有修飾的R基團（例如，正亮氨酸）或修飾的肽主幹，但是保持了 與天然存在的胺基酸相同的基礎化學結構。胺基酸模擬物是指具有與胺基酸的一般化學結 構不同的結構、但是以與天然存在的胺基酸類似地方式起作用的化合物。
[0286] "保守性修飾的變體"適用於胺基酸和核酸序列。"胺基酸變體"是指胺基酸序列。 對於特定的核酸序列，保守性修飾的變體是指編碼相同或基本上相同的胺基酸序列的那 些核酸，或在所述核酸不編碼胺基酸序列時，是指基本上相同的或相關的（例如，天然連續 的）序列。由於遺傳密碼的簡併性，許多功能上相同的核酸編碼了大多數蛋白質。例如， 密碼子GCA、GCC、GCG和GCU都編碼胺基酸丙氨酸。因而，在由密碼子指代的丙氨酸的每 個位置，該密碼子可以被改變為所描述的相應密碼子的另一個而不改變編碼的多肽。這種 核酸變體是"沉默變體"，其是一種保守性修飾的變體。在本文中編碼多肽的每種核酸序列 也描述了所述核酸的沉默變體。本領域技術人員將認識到，在某些情境下，核酸中的每個 密碼子（除了 AUG，其通常是甲硫氨酸的唯一密碼子，以及TGG，其通常是色氨酸的唯一密 碼子）可以被修改以產生功能上相同的分子。因而，編碼多肽的核酸的沉默變體就表達的 產物而言在描述的序列中是隱含的，但對於實際的探針序列不是。對於胺基酸序列，熟練 技術人員將認識到，改變、添加或刪除編碼序列中的單個胺基酸或小百分比的胺基酸的、對 核酸、肽、多肽或蛋白質序列的單獨的取代、添加或刪除是"保守性修飾的變體"，包括其中 改變引起了胺基酸與化學上相似的胺基酸的取代。提供了功能上相似的胺基酸的保守性 取代表是本領域公知的。這種保守性修飾的變體是本文公開的多態性變體、種間同源物和 等位基因之外的，並且不排除它們。典型的保守性取代包括：1)丙氨酸（A)、甘氨酸（G); 2)天冬氨酸（D)、穀氨酸（E) ;3)天冬醯胺（N)、穀氨醯胺（Q) ;4)精氨酸（R)、賴氨酸（K); 5)異亮氨酸（I)、亮氨酸（L)、甲硫氨酸（M)、纈氨酸（V) ;6)苯丙氨酸（F)、酪氨酸（Y)、 色氨酸（W) ;7)絲氨酸（S)、蘇氨酸（T);和8)半胱氨酸（C)、甲硫氨酸（M)(也參見，例如 Creighton, Proteins(1984)) 〇
[0287] "抗體"（Ab)和"免疫球蛋白"（Ig)是具有相似的結構特徵的糖蛋白。抗體可以 展現對特定抗原的結合特異性，免疫球蛋白可以包括抗體和一般缺乏抗原特異性的其他抗 體樣分子。例如，後一種類的多肽是由淋巴系統以低水平、以及由骨髓瘤以提高的水平產生 的。
[0288] "抗體"和"免疫球蛋白"在廣義上可互換地使用，包括單克隆抗體（例如，全長或 完整的單克隆抗體）、多克隆抗體、多價抗體、多特異性抗體（例如，雙特異性抗體，只要它 們展現了期望的生物學活性），還可以包括某些抗體片段（如本文中更詳細地描述的）。抗 體可以是人類的、人源化的和/或親和力成熟的。抗體可以指免疫球蛋白和免疫球蛋白部 分，無論是天然的、部分的還是完全合成的，例如，重組生產的，包括含有免疫球蛋白分子的 可變區的至少一部分、足以形成抗原結合位點的抗體的任何部分。因此，抗體或其部分包括 具有結合結構域的任何蛋白質，所述結合結構域同源於或基本上同源於免疫球蛋白抗原結 合位點。例如，抗體可以指含有兩條重鏈（其可以表示為H和H'）和兩條輕鏈（其可以表 示為L和L'）的抗體，其中每條重鏈可以是全長免疫球蛋白重鏈或其足以形成抗原結合位 點的部分（例如，重鏈包括但不限於VH鏈、VH-CHl鏈和VH-CH1-CH2-CH3鏈），每條輕鏈可 以是全長輕鏈或其足以形成抗原結合位點的部分（例如，輕鏈包括但不限於VL鏈和VL-CL 鏈）。每條重鏈（H和H'）與一條輕鏈（分別為L和L'）配對。一般地，抗體最少包括可變重 (VH)鏈和/或可變輕（VL)鏈的全部或至少一部分。抗體還可以包括恆定區的全部或一部 分。例如，全長抗體是具有兩條全長重鏈（例如，VH-CH1-CH3-CH3或VH-CH1-CH2-CH3-CH4) 和兩條全長輕鏈（VL-CL)和鉸鏈區的抗體，例如，由抗體分泌性B細胞產生的抗體，以及具 有相同結構域的合成生產的抗體。另外，"抗體"是指免疫球蛋白家族的蛋白質，或包含免 疫球蛋白的片段、能夠非共價地、可逆地以及以特異性方式結合相應抗原的多肽。示例性抗 體結構單元包括四聚體。每個四聚體由兩個相同的多肽鏈對組成，每個對具有一條"輕"鏈 (約25 kD)和一條"重"鏈（約50-70kD)，通過二硫鍵連接。公認的免疫球蛋白基因包括 Κ、λ、α、Υ、δ、ε和μ恆定區基因，以及無數的免疫球蛋白可變區基因。輕鏈被分類 為κ或λ。重鏈被分類為γ、μ、α、δ或ε，其隨後定義了免疫球蛋白類型，IgG、IgM、 IgA、IgD和IgE。每條鏈的N-末端劃定了主要對抗原識別負責的約100到110個或更多個 胺基酸的可變區。術語可變輕鏈（VL)和可變重鏈（VH)分別是指輕鏈和重鏈的這些區域。
[0289] "可變"是指這樣的事實，在抗體之間在序列上可變域（也稱為可變區）的某些 部分廣泛地不同，被用於每種特定抗體的結合和特異性方面。然而，可變性在抗體的整個 可變域上不是均勻分布的。它一般集中於處在輕鏈可變域和重鏈可變域中稱為互補決定 區（⑶R)或高變區（HVR)的三個片段中。⑶R包括Kabat、Chothia和MGT中指明的那些， 如本文中可變區序列內顯示的。可變域的更高保守性的部分被稱為框架（FR)。天然重鏈 和輕鏈的可變域各自包含四個FR區，很大程度上採用β -片層結構，由三個⑶R連接，其 形成環形連接，在某些情況下形成β_片層結構的一部分。每條鏈中的CDR通過FR緊密 鄰近地結合在一起，與來自另一個鏈的⑶R-同形成抗體的抗原結合位點（參見Kabat等 K . Sequences of Proteins of Tmmunol ogical Interest,第五版，National Institute of Health, Bethesda, Md. (1991))。恆定域沒有直接涉及抗體與抗原的結合，但是展現出各 種效應物功能，例如在抗體依賴性細胞毒性中抗體的參與。
[0290] 抗體對木瓜蛋白酶消化產生兩個相同的抗原結合片段，稱為"Fab"片段，各自具有 單個抗原結合位點，以及殘餘的"Fc"片段，它的名稱反映了其容易結晶的能力。胃蛋白酶 處理產生F(ab'） 2片段，其具有兩個抗原結合部位並且仍然能夠交聯抗原。
[0291] "Fv"是指一種含有抗原識別和抗原結合位點的抗體片段。在雙鏈Fv種類中，該區 域由非共價締合的一條重鏈和一條輕鏈可變域的二聚體組成。在單鏈Fv(scFv)種類中，一 條重鏈和一條輕鏈可變域可以通過柔性肽接頭共價連接，從而輕鏈和重鏈可以以類似於雙 鏈Fv(scFv)種類中的"二聚"結構締合。在這種結構中，每個可變域的三個⑶R相互作用 來在VH-VL二聚體的表面上限定抗原結合位點。合在一起，六個CDR為抗體賦予了抗原結 合特異性。然而，儘管比完整結合位點有更低的親合性，既便單個可變區（或僅包含三個特 異於抗原的CDR的半個Fv)也具有識別和結合抗原的能力。
[0292] Fab片段還含有輕鏈的恆定域以及重鏈的第一恆定域（CHl)。Fab'片段不同於 Fab片段，在重鏈CHl結構域的羧基末端具有幾個額外的殘基，包括一個或多個來自抗體絞 鏈區的半胱氨酸。Fab' -SH在此是指在恆定區的半胱氨酸殘基攜帶有游離硫醇基的Fab'。 F(ab'）2抗體片段最初作為Fab'片段的配對而產生，其具有Fab'片段之間的鉸鏈半胱氨 酸。抗體片段的其他化學偶聯也是已知的。
[0293] 來自任何脊椎動物物種的抗體（免疫球蛋白）的"輕鏈"可以根據它們的恆定域 的胺基酸序列被分成稱為κ和λ的兩種明顯不同的類型之一。
[0294] 取決於它們的重鏈恆定域的胺基酸序列，免疫球蛋白可以被分為不同的種類。由 五種主要的免疫球蛋白類別：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中的一些可以進一步分為子類 (同種型），例如，IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。符合免疫球蛋白的不同類別的重 鏈恆定域分別被稱為a、S、ε、 Y和μ。不同類別的免疫球蛋白的亞基結構和三維構象 是公知的。
[0295] "抗體片段"僅包含完整抗體的一部分，其中所述部分優選地保留了至少一種、優 選的大多數或全部的功能，所述功能通常與存在於完整抗體中時的所述部分相關。抗體片 段的實例包括 Fab、Fab'、F(ab'）2、單鏈 Fv (scFv)、Fv、dsFv、雙價抗體（diabody)、Fd 和 FcT 片段、Fab片段、Fd片段、scFv片段、線性抗體、單鏈抗體分子，以及由抗體片段形成的多特 異性抗體（參見，例如Methods in Molecular Biology, Vol 207 :Recombinant Antibodies for Cancer Therapy Methods and Protocols (2003);第 I 章 ；p 3-25, Kipriyanov)。其他 已知的片段包括，但不限於，scFab片段（Hust等人，BMC Biotechnology (2007) ,7:14)。在 一種實施方式中，抗體片段包含完整抗體的抗原結合位點，因而保留了結合抗原的能力。在 另一種實施方式中，抗體片段，例如，包含Fc區的抗體片段，保留了在完整抗體中存在時通 常與Fc區相關的生物學功能，例如，FcRn結合、抗體半衰期調節、ADCC功能和補體結合。在 一種實施方式中，抗體片段是單價的抗體，其具有基本上類似於完整抗體的體內半衰期。例 如，這樣的抗體片段可以包括在一個抗原結合臂上與能夠為片段賦予體內穩定性的Fc序 列連接。對於其他實例，抗體片段或抗體部分是指全長抗體的任何部分，其小於全長但是含 有足以形成抗原結合位點的抗體可變區的至少一部分（例如，一個或多個CDR)，因而保留 了全長抗體的結合特異性和/或活性；抗體片段包括通過對全長抗體酶處理產生的抗體衍 生物，以及合成地，例如重組地產生的衍生物。
[0296] "dsFv"是指具有工程化的分子間二硫鍵的Fv，所述二硫鍵穩定VH-VL配對。
[0297] "Fd片段"是指含有抗體重鏈的可變域（VH)和一個恆定區結構域（CHl)的抗體。
[0298] "Fab片段"是指含有全長抗體的部分的抗體片段，其產自全長免疫球蛋白的木瓜 蛋白酶消化，或合成地，例如重組地生產的具有相同結構的片段。Fab片段含有輕鏈（含有 VL和CL部分）以及另一條鏈，所述另一條鏈含有重鏈的可變域（VH)和重量的一個恆定區 結構域部分（CHl);它可以重組地產生。
[0299] "F(ab'）2片段"是指在pH 4. 0-4. 5下用胃蛋白酶消化免疫球蛋白產生的，或具有 相同結構合成地例如重組地產生的抗體片段。F (ab'）2片段含有兩個Fab片段，但是其中每 個重鏈部分含有額外幾個胺基酸，包括連接兩個片段形成二硫鍵的半胱氨酸殘基；它可以 重組地產生。
[0300] "Fab'片段"是指含有半個（一條重鏈和一條輕鏈）F (ab'）2片段的片段。
[0301] "Fd'片段是指含有F(ab'）2片段的一個重鏈部分的抗體片段。
[0302] "Fv'片段"是指僅含有抗體分子的VH和VL結構域的片段。
[0303] "scFv片段"是指一種抗體片段，其含有可變輕鏈（VL)和可變重鏈（VH)，由多肽接 頭以任何順序共價連接。所述接頭的長度使得兩個可變域被橋接而沒有實質的幹擾。示例 性接頭有（Gly-Ser) η殘基，帶有整體上分散的Glu或Lys殘基來提高溶解度。
[0304] 雙抗體是二聚的scFv ;雙抗體一般具有比scFv更短的肽接頭，它們優先地二聚 化。
[0305] "HsFv"是指一些抗體片段，其中通常存在於Fab片段中的恆定域被二聚化的捲曲 螺旋結構域代替（參見，例如Arndt等人（2001) J Mol Biol. 7:312:221-228)。
[0306] "高變區"、"HVR"或"HV"以及"互補決定區"或"⑶R"可以指抗體可變域的區 域，它們在序列上是高變的，和/或形成結構上限定的環體。一般地，抗體包含六個高變 區或〇)1? ;三個在￥!1中011、！12、!13)，三個在￥1^中仏1、1^2、1^3)。多種高變區或〇)1?輪廓 在用，並被涵蓋在本文中。Kabat互補決定區（Kabat CDRs)基於序列變異性，是最常用 的（Kabat 等人，Sequences of Proteins of Tmmunological Interest,第 5 版· Public Health Service,National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). Chothia refers instead to the location of the structural loops (Chothia 和 Lesk, J. Moh Biol. 196:901-917(1987))。AbM 高變區代表了 Kabat CDR 和 Chothia 結構環體 (Chothia"CDRs"）之間的折中，被Oxford Molecular的AbM抗體建模軟體使用。"contact" 高變區是基於可用的複合物晶體結構的分析。來自這些高變區的每一個的殘基在下文中標 注。
[0307]

【權利要求】
1. 一種包含超長⑶R3的人源化抗體或其結合片段。
2. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長CDR3的長度為35個氨 基酸或更長，40個胺基酸或更長，45個胺基酸或更長，50個胺基酸或更長，55個胺基酸或更 長，或60個胺基酸或更長。
3. 權利要求2所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長CDR3的長度為35個氨 基酸或更長。
4. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長CDR3包含3個或更多 個半胱氨酸殘基，4個或更多個半胱氨酸殘基，5個或更多個半胱氨酸殘基，6個或更多個半 胱氨酸殘基，7個或更多個半胱氨酸殘基，8個或更多個半胱氨酸殘基，9個或更多個半胱氨 酸殘基，10個或更多個半胱氨酸殘基，11個或更多個半胱氨酸殘基，或12個或更多個半胱 氨酸殘基。
5. 權利要求4所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長CDR3包含3個或更多 個半胱氨酸殘基。
6. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述抗體或其結合片段包含半 胱氨酸基序。
7. 權利要求6所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述半胱氨酸基序選自由以 下序列組成的組：CX1(ICX5CX5CXCX7C (SEQ ID NO: 41)、CX1(ICX6CX5CXCX15C (SEQ ID NO: 42)、 CXnCXCX5C(SEQ ID N0:43)、CXuCX5CX5CXCX7C(SEQ ID N0:44)、CX1(iCX6CX5CXCX13C(SEQ ID NO: 45) , CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、CX10CX6CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 47)、 CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48) , CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID NO: 49), CX13CX8CX8C (SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCX7C (SEQ ID NO : 51)、CX10CX5CX5C (SEQ ID NO: 52)、 CX10CX5CX6CXCX7C(SEQ ID NO:53), CX10CX6CX5CX7CX9C(SEQ ID NO:54), CX9CX7CX5CXCX7C(SEQ ID N0:55) , CX10CX6CX5CXCX9C(SEQ ID NO: 56) , CX10CXCX4CX5CXnC (SEQ ID NO :57), CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C(SEQ ID N0:58) , CX10CXCX4CX5CXCX2CX 3C(SEQ ID NO:59), CX16CX5CXC(SEQ ID N0:60)、CX6CX4CXCX4CX5C(SEQ ID N0:61)、CXuCX4CX5CX6CX 3C(SEQ ID N0:62)、CX8CX2CX6CX5C(SEQ ID N0:63)、CX1(iCX5CX5CXCX1(iC(SEQ ID N0:64)、 CX10CXCX6CX4CXC(SEQ ID NO:65), CX10CX5CX5CXCX2C(SEQ ID NO:66), CX14CX2CX3CXCXC(SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO : 68)、CX4CX6CX9CX2CXUC (SEQ ID N0:69)、 CX6CX4CX5CX5CX12C (SEQ ID NO : 70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71), CX10CX6CX5C(SEQ ID N0:72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID N0:73)、CX7CX5CXCX2C(SEQ ID N0:74)、CX1(iCXCX6C(SEQ ID N0:75)、CX1(iCX3CX3CX5CX 7CXCX6C(SEQ ID N0:76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID N0:81)、CX10CX5CXCX8CX6C(SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CXnCX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86), CX10CX6CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:87), CX10CX6CX5CXCX8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO: 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90)、CX1(ICX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID N0:91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C(SEQ ID N0:92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C(SEQ ID NO :93) , CX10CX2CX2CX7CXCXnCX 5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。
8. 權利要求6所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述半胱氨酸基 序選自由以下序列組成的組：CCX3CXCX3CX2CCXCX 5CX9CX5CXC(SEQ ID N0:96)、 CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC (SEQ ID NO: 97), CX7CXCX5CX4CCCX4CX6CXC (SEQ ID NO:98), CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC(SEQ ID N0:100)、 CX5CXCX1CXCX3CCX3CX 4CX10C(SEQ ID NO: 101) , cx9cccx3cx4cccx5cx6c(seq ID NO: 102), CCX8CX5CX4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID NO: 103) , CCX6CCX5CCCX4CX4CX12C(SEQ ID NO: 104), CX6CX2CX3CCCX4CX5CX 3CX3C(SEQ ID N0:105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC(SEQ ID N0:106)、 CX4CX4CCX4CX4CXCXnCX 2CXC(SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、 CX5CX5CX3CX2CXCCX4CX 7CXC (SEQ ID NO : 109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C (SEQ ID NO: 110)、CX9CX3CXCX4CCX5CCCX 6C (SEQ ID NO: 111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C (SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID NO: 114), CX10CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO: 115), CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC (SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID N0:122)、 CX9CX2CX3CX4CCX4CX 5C(SEQ ID N0:123)、CX9CX7CX4CCXCX7CX 3C(SEQ ID N0:124)、 CXgCX3CCCX10CX2CX3C (SEQ ID NO: 125)、CX3CX5CX5CX4CCX 1(ICX6C (SEQ ID NO : 126)、 CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO : 127)、CX7CXCX6CX4CCCX10C (SEQ ID NO: 128)、 CX8CX2CX4CCX4CX3CX 3C (SEQ ID NO: 129)、CX7CX5CXCX4CCX7CX 4C (SEQ ID NO: 130), CXnCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、CX2CX3CX4CCX4CX 5CX15C (SEQ ID NO : 132)、 CX9CX5CX4CCX7C(SEQ ID NO: 133), CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO:135)、CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID N0:136)、CX9CX6CX4CCXC(SEQ ID NO:137)、 CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CX10CX3CX4CCX4C (SEQ ID NO: 139), CX9CX4CCX5CX4C (SEQ ID NO:140)、CX10CX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO:141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C(SEQ ID NO:142)、 CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID NO: 143), CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145)、CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146)、CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147)、CX10CXCX4C(SEQ ID N0:148)、CX1(ICCX4C(SEQ ID NO:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID NO:151)和 CX9C(SEQ ID NO: 152) 〇
9. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長CDR3包含2至6個二 硫鍵。
10. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長⑶R3包含SEQ ID NO: 40或其衍生物。
11. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長⑶R3包含SEQ ID NO: 1_4中任一個的胺基酸殘基3-6。
12. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長CDR3包含非人類DH 或其衍生物。
13. 權利要求12所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述非人類DH是SEQ ID NO: 5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID N0:10、SEQ ID N0:11 或 SEQ ID NO :12。
14. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長CDR3包含JH序列或 其衍生物。
15. 權利要求14所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述JH序列是SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO :16 或 SEQ ID NO: 17。
16. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長CDR3包含： _非人類VH序列或其衍生物； -非人類DH序列或其衍生物；和/或 -JH序列或其衍生物。
17. 權利要求16所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長CDR3包含另外的氨 基酸序列，所述另外的胺基酸序列包含位於VH序列和DH序列之間的二至六個胺基酸殘基 或更多個胺基酸殘基。
18. 權利要求17所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述另外的胺基酸序列選自 由 IR、IF、SEQ ID NO :18、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :20 或 SEQ ID NO :21 組成的組。
19. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長CDR3包含衍生自或 基於 SEQ ID N0:22、SEQ ID N0:23、SEQ ID N0:24、SEQ ID N0:25、SEQ ID N0:26、SEQ ID NO :27 或 SEQ ID NO :28 的序列。
20. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長CDR3包含非牛序列或 非抗體序列。
21. 權利要求20所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述非抗體序列是合成的序 列。
22. 權利要求20所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述非抗體序列是細胞因子 序列、淋巴因子序列、趨化因子序列、生長因子序列、激素序列或毒素序列。
23. 權利要求20所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述非抗體序列是IL-8序列、 IL-21序列、SDF-1 ( a )序列、生長抑素序列、氯毒素序列、Pro-TxII序列或齊考諾肽序列。
24. 權利要求20所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述非抗體序列是SEQ ID NO :475-481中的任一個。
25. 權利要求20所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述非抗體序列替換至少一 部分的超長⑶R3。
26. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長⑶R3包含XiX2X3X4X 5基序， 其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X2是絲 氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬醯胺（N)， 其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是穀氨醯胺（Q)。
27. 權利要求26所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述XiX2X3X4X 5基序是 TTVHQ(SEQ ID NO: 153), TSVHQ(SEQ ID NO: 154), SSVTQ(SEQ ID NO: 155), STVHQ(SEQ ID N0:156), ATVRQ(SEQ ID NO: 157), TTVYQ (SEQ ID NO: 158), SPVHQ (SEQ ID NO: 159), ATVYQ(SEQ ID NO: 160), TAVYQ(SEQ ID NO: 161), TNVHQ(SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID N0:163)、STVYQ(SEQ ID N0:164)、TIVHQ(SEQ ID N0:165)、AIVYQ(SEQ ID N0:166)、 TTVFQ(SEQ ID NO: 167), AAVFQ(SEQ ID NO: 168), GTVHQ(SEQ ID NO: 169), ASVHQ(SEQ ID N0:170)、TAVFQ(SEQ ID NO:171)、ATVFQ(SEQ ID NO:172)、AAAHQ(SEQ ID NO:173)、 VVVYQ(SEQ ID NO: 174), GTVFQ(SEQ ID NO: 175), TAVHQ(SEQ ID NO: 176), ITVHQ(SEQ ID NO:177), ITAHQ(SEQ ID NO: 178), VTVHQ (SEQ ID NO: 179) ；AAVHQ(SEQ ID NO: 180), GTVYQ(SEQ ID N0:181)、ITVLQ(SEQ ID N0:182)、ITTHQ(SEQ ID N0:183)或 ITDYQ(SEQ ID NO:184)。
28. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長⑶R3包含CXiX2X3X4X 5基序。
29. 權利要求28所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述CXTXYX5基序是 CTTVHQ(SEQ ID NO: 185), CTSVHQ(SEQ ID NO: 186), CSSVTQ(SEQ ID NO: 187), CSTVHQ(SEQ ID N0:188),CATVRQ(SEQ ID NO:189),CTTVYQ(SEQ ID NO:190),CSPVHQ(SEQ ID NO:191), CATVYQ(SEQ ID NO: 192), CTAVYQ(SEQ ID NO: 193), CTNVHQ(SEQ ID NO: 194), CATVHQ(SEQ ID N0:195)、CSTVYQ(SEQ ID N0:196)、CTIVHQ(SEQ ID N0:197)、CAIVYQ(SEQ ID N0:198)、 CTTVFQ(SEQ ID NO: 199), CAAVFQ(SEQ ID NO:200), CGTVHQ(SEQ ID NO:201), CASVHQ(SEQ ID N0:202),CTAVFQ(SEQ ID NO:203),CATVFQ(SEQ ID NO:204),CAAAHQ(SEQ ID NO:205), CVVVYQ(SEQ ID NO:206), CGTVFQ(SEQ ID NO:207), CTAVHQ(SEQ ID NO:208), CITVHQ(SEQ ID N0:209)、CITAHQ(SEQ ID N0:210)、CVTVHQ(SEQ ID NO:211) ;CAAVHQ(SEQ ID NO:212)、 CGTVYQ(SEQ ID NO:213)、CTTVLQ(SEQ ID NO:214)、CITTHQ(SEQ ID NO:215)或CTTDYQ(SEQ ID NO:216)。
30. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長⑶R3包含》11%基 序， 其中Xa是任意胺基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨 酸01)組成的組的芳香族胺基酸，以及其中z是1-4。
31. 權利要求30所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述（XaXb)z基序是 CYTYNYEF(SEQ ID NO: 217), HYTYTYDF (SEQ ID NO: 218), HYTYTYEff (SEQ ID N0:219), KHRYTYEff(SEQ ID NO: 220), NYIYKYSF (SEQ ID NO: 221), PYIYTYQF (SEQ ID NO:222), SFTYTYEff(SEQ ID NO:223), SYIYIYQff(SEQ ID N0:224), SYNYTYSff(SEQ ID NO:225), SYSYSYEY(SEQ ID NO: 226), SYTYNYDF (SEQ ID NO: 227), SYTYNYEff (SEQ ID NO:228), SYTYNYQF(SEQ ID NO:229), SYVWTHNF(SEQ ID NO: 230), TYKYVYEff(SEQ ID N0:231), TYTYTYEF(SEQ ID NO: 232), TYTYTYEff (SEQ ID NO: 233), VFTYTYEF (SEQ ID NO:234), AYTYEff(SEQ ID NO:235), DYIYTY(SEQ ID NO:236), IHSYEF(SEQ ID NO:237), SFTYEF(SEQ ID N0:238),SHSYEF(SEQ ID NO:239),THTYEF(SEQ ID NO:240),TWTYEF(SEQ ID NO:241), TYNYEff(SEQ ID NO:242), TYSYEF(SEQ ID NO:243), TYSYEH(SEQ ID NO:244), TYTYDF(SEQ ID N0:245)、TYTYEF(SEQ ID N0:246)、TYTYEW(SEQ ID N0:247)、AYEF(SEQ ID N0:248)、 AYSF(SEQ ID N0:249)、AYSY(SEQ ID N0:250)、CYSF(SEQ ID N0:251)、DYTY(SEQ ID N0:252)、KYEH(SEQ ID N0:253)、KYEW(SEQ ID N0:254)、MYEF(SEQ ID N0:255)、NWIY(SEQ ID N0:256)、NYDY(SEQ ID N0:257)、NYQW(SEQ ID N0:258)、NYSF(SEQ ID N0:259)、PYEW(SEQ ID N0:260)、RYNff(SEQ ID N0:261)、RYTY(SEQ ID N0:262)、SYEF(SEQ ID N0:263)、SYEH(SEQ ID N0:264)、SYEW(SEQ ID N0:265)、SYKW(SEQ ID N0:266)、SYTY(SEQ ID N0:267)、TYDF(SEQ ID N0:268)、TYEF(SEQ ID N0:269)、TYEW(SEQ ID N0:270)、TYQW(SEQ ID N0:271)、TYTY(SEQ ID N0:272)或 VYEW(SEQ ID N0:273)。
32. 權利要求30所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述（XaXb)z基序是YXYXYX。
33. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長CDR3包含XiX2X3X4X 5Xn基序， 其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X2是絲 氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬醯胺（N)， 其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X5是穀氨醯胺（Q)，以及 其中n是27-54。
34. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長⑶R3包含Xn(XaXb) z基序， 其中xa是任意胺基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨 酸01)組成的組的芳香族胺基酸，其中n是27-54,以及其中z是1-4。
35. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長CDR3包含 xTxWxjxf、基序， 其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X2是絲 氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬醯胺（N)， 其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是穀氨醯胺（Q)， 其中Xa是任意胺基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H) 組成的組的芳香族胺基酸，其中n是27-54,以及其中z是1-4。
36. 權利要求35所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述XiX2X3X4X 5基序是
37. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長CDR3包含： -CXTfxl5基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬醯胺（N)，其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是穀氨醯胺（Q)， -選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：CX1QCX5CX5CXCX 7C (SEQ ID N0:41)、 CX10CX6CX5CXCX15C(SEQ ID N0:42)、CXUCXCX5C(SEQ ID N0:43)、CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID N0:44)、CX10CX6CX5CXCX13C(SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 47), CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48), CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID N0:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID N0:50)、CX1(iCX6CX5CXCX7C(SEQ ID NO:51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID N0:52)、CX1(iCX5CX6CXCX7C(SEQ ID NO: 53)、CX1(ICX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCX7C(SEQ ID NO:55), CX10CX6CX5CXCX9C(SEQ ID NO:56), CX10CXCX4CX5CXnC(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(ICXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CXnCX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CX1(ICX5CX5CXCX1(IC (SEQ ID NO: 64) , CX10CXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CX1(ICX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67) , CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68) , CX4CX6CX9CX2CXnC (SEQ ID N0:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C(SEQ ID N0:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C(SEQ ID N0:71)、 CX10CX6CX5C(SEQ ID N0:72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID N0:73)、cx7cx5cxcx2c(seq ID N0:74)、CX1(iCXCX6C(SEQ ID N0:75)、CX1(iCX3CX3CX5CX 7CXCX6C(SEQ ID N0:76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID N0:81)、CX10CX5CXCX8CX6C(SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CXnCX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86), CX10CX6CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:87), CX10CX6CX5CXCX8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90)、CX1(ICX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID N0:91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C(SEQ ID N0:92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C(SEQ ID NO :93) , CX10CX2CX2CX7CXCXnCX 5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C (SEQ ID NO :95), _(XaXb)z基序，其中Xa是任意胺基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨 酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，以及其中z是1-4。
38.權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長CDR3包含： -CXTfxl5基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬醯胺（N)，其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是穀氨醯胺（Q); -選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：其中半胱氨酸基序選自由以下序列 組成的組：CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID NO:99), CX5CX3CXCX4CX4CCX10CX 2CC(SEQ ID NO: 100), CX5CXCX1CXCX3CCX3CX 4CX10C (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), ccx8cx5cx4cx3cx4ccxcx 1c(seq id N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 CX3CX5CX5CX4CCX1(ICX 6C(SEQ ID NO:126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C(SEQ ID NO:127)、 CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、CX8CX2CX4CCX4CX 3CX3C(SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO: 130) , CXnCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、 CX2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : 1 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID N0:136)、CX9CX6CX4CCXC(SEQ ID N0:137)、CX5CCX7CX4CX12(SEQ ID N0:138)、 CX10CX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139), CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140), CX10CX3CX4CX7CXC(SEQ ID N0:141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C(SEQ ID N0:142)、CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID N0:143)、 CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152);和 _(XaXb)z基序，其中Xa是任意胺基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨 酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，以及其中z是1-4。
39. 權利要求20所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長CDR3包含另外的序 列，所述另外的序列是接頭。
40. 權利要求39所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述接頭連接至所述非抗體 序列C-末端、N-末端、或C-末端和N-末端兩者。
41. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述超長CDR3是反芻動物 CDR3。
42. 權利要求41所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述反芻動物是牛。
43. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述人源化抗體或其結合片段 包含人類重鏈種系序列，所述人類重鏈種系序列是VH4家族成員種系序列。
44. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述人源化抗體或其結合片段 包含VH4-34種系序列。
45. 權利要求44所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述人源化抗體或其結合片 段包含人類重鏈種系序列，所述人類重鏈種系序列衍生自VH4-34種系序列。
46. 權利要求45所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述VH4-34種系序列包含 CDR1,所述CDR1包含基於Kabat編號的Gly31Asp和Tyr32Lys取代。
47. 權利要求45所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述VH4-34種系序列包含 CDR2,所述CDR2包含基於Kabat編號的Glu50Ser取代。
48. 權利要求45所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述VH4-34種系序列包含 CDR1 和 CDR2,所述 CDR1 包含基於 Kabat 編號的 Ala23Thr、Val24Ala、Tyr25Ser、Gly27Phe、 Phe29Leu、Gly31Asp、Tyr32Lys、Tyr33Ala、Trp34Val 和 Ser35Gly 取代，所述 CDR2 包含基 於基於 Kabat 編號的 Ile48Leu、Glu50Ser、Asn52Asp、His53Thr、Ser54Gly、Ser56Asn 和 Asn58Gly 取代。
49. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述人源化抗體或其結合片段 包含 SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468 或 469 中列出的胺基酸序列。
50. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述人源化抗體或其結合片段 包含SEQ ID NO :470中列出的胺基酸序列。
51. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述人源化抗體或其結合片段 包含SEQ ID勵：461、462、463、464、465、466、467、468或469中列出的胺基酸序列；以及5￡0 ID NO :470中列出的胺基酸序列。
52. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述人源化抗體或其結合片段 包含 SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468 或 469 中列出的胺基酸序列，SEQ ID NO :470中所列的胺基酸序列；以及肽序列，其中所述肽序列位於SEQ ID NO :461、462、463、 464、465、466、467、468 或 469，與5￡〇10勵：470 之間。
53. 權利要求52所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述肽序列是牛序列、非牛序 列、抗體序列或非抗體序列。
54. 權利要求1所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述人源化抗體或其結合片段 包含輕鏈可變區序列，所述輕鏈可變區序列是A輕鏈可變區序列。
55. 權利要求54所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述A輕鏈可變區序列是牛 入輕鏈可變區序列。
56. 權利要求54所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述A輕鏈可變區序列是人 入輕鏈可變區序列。
57. 權利要求56所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述人A輕鏈可變區序列是 VL1-51種系序列。
58. 權利要求56所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述人A輕鏈可變區序列衍 生自VL1-51種系序列。
59. 權利要求58所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述VL1-51種系序列包含 CDR1,所述CDR1包含基於Kabat編號的Ile29Val和Asn32Gly取代。
60. 權利要求58所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述VL1-51種系序列包含 ⑶R2，所述⑶R2包含DNN到⑶T的取代。
61. 權利要求58所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述VL1-51種系序列包含 CDR2,所述 CDR2 包含 DNNKRP(SEQ ID N0:47l)到⑶TSRA(SEQ ID N0:472)的取代。
62. 權利要求58所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述VL1-51種系序列包含基 於 Kabat 編號的 S2A、T5N、P8S、A12G、A13S 和 P14L 取代。
63. 權利要求58所述的人源化抗體或其結合片段，其中，所述VL1-51種系序列包含 基於Kabat編號的S2A、T5N、P8S、A12G、A13S和P14L取代，以及包含DNN到⑶T的取代的 CDR2。
64. 權利要求1的人源化抗體或其結合片段，其中，所述人源化抗體或其結合片段包含 SEQ ID N0:440、441、442、443或444中列出的胺基酸序列。
65. 編碼權利要求1-64中任一項所述的人源化抗體或其結合片段的多核苷酸。
66. 編碼包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的多核苷酸。
67. 編碼包含超長CDR3的人源化可變區的多核苷酸。
68. 包含權利要求65-67中任一項所述的多核苷酸的載體。
69. 包含權利要求68的載體的宿主細胞。
70. -種包含多種多核苷酸的核酸文庫，所述多核苷酸包含編碼人源化抗體或其結合 片段的序列，其中所述抗體或其結合片段包含超長CDR3。
71. -種人源化抗體或其結合片段的文庫，其中，所述抗體或其結合片段包含超長 CDR3。
72. 權利要求71所述的文庫，其中，所述超長CDR3的長度為35個胺基酸或更長，40個 胺基酸或更長，45個胺基酸或更長，50個胺基酸或更長，55個胺基酸或更長，或60個胺基酸 或更長。
73. 權利要求72所述的文庫，其中，所述超長CDR3的長度是35個胺基酸或更長。
74. 權利要求71所述的文庫，其中，所述超長CDR3包含3個或更多個半胱氨酸殘基，4 個或更多個半胱氨酸殘基，5個或更多個半胱氨酸殘基，6個或更多個半胱氨酸殘基，7個或 更多個半胱氨酸殘基，8個或更多個半胱氨酸殘基，9個或更多個半胱氨酸殘基，10個或更 多個半胱氨酸殘基，11個或更多個半胱氨酸殘基，或12個或更多個半胱氨酸殘基。
75. 權利要求74所述的文庫，其中，所述超長CDR3包含3個或更多個半胱氨酸殘基。
76. 權利要求71所述的文庫，其中，所述抗體或其結合片段包含半胱氨酸基序。
77. 權利要求76所述的文庫，其中，所述半胱氨酸基序選自由以下序列組 成的組：CX1(iCX5CX5CXCX7C(SEQ ID N0:41)、CX1(iCX6CX5CXCX15C(SEQ ID NO:42)、 CXnCXCX5C(SEQ ID NO:43)、CXuCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:44)、CX1(iCX6CX5CXCX13C(SEQ ID NO: 45) , CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、CX10CX6CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 47)、 CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48) , CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID NO: 49), CX13CX8CX8C (SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCX7C (SEQ ID NO : 51)、CX10CX5CX5C (SEQ ID NO: 52)、 CX10CX5CX6CXCX7C(SEQ ID NO:53), CX10CX6CX5CX7CX9C(SEQ ID NO:54), CX9CX7CX5CXCX7C(SEQ ID N0:55) , CX10CX6CX5CXCX9C(SEQ ID NO: 56) , CX10CXCX4CX5CXnC (SEQ ID NO :57), CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C(SEQ ID N0:58) , CX10CXCX4CX5CXCX2CX 3C(SEQ ID NO:59), CX16CX5CXC(SEQ ID N0:60)、CX6CX4CXCX4CX5C(SEQ ID N0:61)、CXuCX4CX5CX6CX 3C(SEQ ID N0:62)、CX8CX2CX6CX5C(SEQ ID N0:63)、CX1(iCX5CX5CXCX1(iC(SEQ ID N0:64)、 CX10CXCX6CX4CXC(SEQ ID NO:65), CX10CX5CX5CXCX2C(SEQ ID NO:66), CX14CX2CX3CXCXC(SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO : 68)、CX4CX6CX9CX2CXUC (SEQ ID N0:69)、 CX6CX4CX5CX5CX12C (SEQ ID NO : 70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71), CX10CX6CX5C(SEQ ID N0:72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID N0:73)、CX7CX5CXCX2C(SEQ ID N0:74)、CX1(iCXCX6C(SEQ ID N0:75)、CX1(iCX3CX3CX5CX 7CXCX6C(SEQ ID N0:76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID N0:81)、CX10CX5CXCX8CX6C(SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CXnCX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86), CX10CX6CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:87), CX10CX6CX5CXCX8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90)、CX1(ICX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID N0:91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C(SEQ ID N0:92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C(SEQ ID NO :93) , CX10CX2CX2CX7CXCXnCX 5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。
78. 權利要求76所述的文庫，其中，所述半胱氨酸基序選自由以下序列組成的組：C CX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID NO:96), CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC(SEQ ID NO:97), CX7CXCX5CX4CCCX4CX6CXC(SEQ ID NO:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID NO:99)、 CX5CX3CXCX4CX4CCX10CX 2CC(SEQ ID NO: 100), CX5CXCX1CXCX3CCX3CX 4CX10C(SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C (SEQ ID NO: 102) , CCXgCXgCX^CX^CXCXiC (SEQ ID NO: 103), CCX6CCX5CCCX4CX4CX12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID N0:105)、 CX3CX5CX6CX4CCXCX5CX 4CXC(SEQ ID NO: 106), CX4CX4CCX4CX4CXCXnCX 2CXC(SEQ ID NO: 107), CX5CX2CCX5CX4CCX3CCX 7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、 CX3CX7CX3CX4CCXCX2CX 5CX2C(SEQ ID NO: 110), CX9CX3CXCX4CCX5CCCX 6C(SEQ ID NO: 111), CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、 CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID NO: 114), CX10CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO: 115), CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、 CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC (SEQ ID NO: 118) , CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C (SEQ ID NO: 119), CX4CX2CCX3CXCX4CCX2CX 3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、 CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID NO: 122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID NO: 123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 CX3CX5CX5CX4CCX1(ICX 6C(SEQ ID N0:126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C(SEQ ID N0:127)、 CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、CX8CX2CX4CCX4CX 3CX3C(SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO: 130) , CXnCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、 CX2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : 1 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID N0:136)、CX9CX6CX4CCXC(SEQ ID N0:137)、CX5CCX7CX4CX12(SEQ ID N0:138)、 CX10CX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139), CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140), CX10CX3CX4CX7CXC(SEQ ID N0:141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C(SEQ ID N0:142)、CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID N0:143)、 CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152)。
79. 權利要求71所述的文庫，其中，所述超長⑶R3包含2至6個二硫鍵。
80. 權利要求71所述的文庫，其中，所述超長⑶R3包含SEQ ID NO:40或其衍生物。
81. 權利要求71所述的文庫，其中，所述超長⑶R3包含SEQ ID NO: 1-4中任一個的氨 基酸殘基3-6。
82. 權利要求71所述的文庫，其中，所述超長CDR3包含非人類DH或其衍生物。
83. 權利要求82所述的文庫，其中，所述非人類DH是SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11 或 SEQ ID NO:12。
84. 權利要求71所述的文庫，其中，所述超長CDR3包含JH序列或其衍生物。
85. 權利要求84所述的文庫，其中，所述JH序列是SEQ ID N0:13、SEQ ID N0:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16 或 SEQ ID NO:17。
86. 權利要求71所述的文庫，其中，所述超長⑶R3包含： _非人類VH序列或其衍生物； -非人類DH序列或其衍生物；和/或 -JH序列或其衍生物。
87. 權利要求86所述的文庫，其中，所述超長CDR3包含另外的胺基酸序列，所述另外的 胺基酸序列包含位於VH序列和DH序列之間的二至六個胺基酸殘基或更多個胺基酸殘基。
88. 權利要求87所述的文庫，其中，所述另外的胺基酸序列選自由IR、IF、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20 或 SEQ ID NO: 21 組成的組。
89. 權利要求71所述的文庫，其中，所述超長⑶R3包含衍生自或基於SEQ ID NO:22、 SEQ ID N0:23、SEQ ID N0:24、SEQ ID N0:25、SEQ ID N0:26、SEQ ID N0:27或SEQ ID N0:28 的序列。
90. 權利要求71所述的文庫，其中，所述超長CDR3包含非牛序列或非抗體序列。
91. 權利要求90所述的文庫，其中，所述非抗體序列是合成的序列。
92. 權利要求90所述的文庫，其中，所述非抗體序列是細胞因子序列、淋巴因子序列、 趨化因子序列、生長因子序列、激素序列或毒素序列。
93. 權利要求90所述的文庫，其中，所述非抗體序列是IL-8序列、IL-21序列、 SDF-1 ( a )序列、生長抑素序列、氯毒素序列、Pro-TxII序列或齊考諾肽序列。
94. 權利要求90所述的文庫，其中，所述非抗體序列是SEQ ID NO :475-481中的任一 個。
95. 權利要求71所述的文庫，其中，所述超長⑶R3包含XiX2X3X4X 5基序， 其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X2是絲 氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬醯胺（N)， 其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是穀氨醯胺（Q)。
96. 權利要求95所述的文庫，其中，所述XTXYX5基序是TTVHQ(SEQ ID N0:153)、 TSVHQ(SEQ ID NO: 154), SSVTQ(SEQ ID NO: 155), STVHQ(SEQ ID NO: 156), ATVRQ(SEQ ID N0:157), TTVYQ(SEQ ID NO: 158), SPVHQ (SEQ ID NO: 159), ATVYQ (SEQ ID NO: 160), TAVYQ(SEQ ID NO: 161), TNVHQ(SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID NO: 163), STVYQ(SEQ ID N0:164), TIVHQ(SEQ ID NO: 165), AIVYQ (SEQ ID NO: 166), TTVFQ (SEQ ID NO: 167), AAVFQ(SEQ ID NO: 168), GTVHQ(SEQ ID NO: 169), ASVHQ(SEQ ID NO: 170), TAVFQ(SEQ ID N0:171)、ATVFQ(SEQ ID N0:172)、AAAHQ(SEQ ID N0:173)、VWYQ(SEQ ID N0:174)、 GTVFQ(SEQ ID NO:175), TAVHQ(SEQ ID NO:176), ITVHQ(SEQ ID NO:177), ITAHQ(SEQ ID N0:178), VTVHQ(SEQ ID NO: 179) ；AAVHQ(SEQ ID NO: 180), GTVYQ (SEQ ID NO: 181), ITVLQ(SEQ ID N0:182)、ITTHQ(SEQ ID N0:183)或 ITDYQ(SEQ ID N0:184)。
97. 權利要求71所述的文庫，其中，所述超長⑶R3包含CXTXYX5基序。
98. 權利要求97所述的文庫，其中，所述CXTXYX5基序是CTTVHQ(SEQ ID N0:185)、 CTSVHQ(SEQ ID NO: 186), CSSVTQ(SEQ ID NO: 187), CSTVHQ(SEQ ID NO: 188), CATVRQ(SEQ ID N0:189)、CTTVYQ(SEQ ID N0:190)、CSPVHQ(SEQ ID N0:191)、CATVYQ(SEQ ID N0:192)、 CTAVYQ(SEQ ID NO: 193), CTNVHQ(SEQ ID NO: 194), CATVHQ(SEQ ID NO: 195), CSTVYQ(SEQ ID N0:196)、CTIVHQ(SEQ ID N0:197)、CAIVYQ(SEQ ID N0:198)、CTTVFQ(SEQ ID N0:199)、 CAAVFQ(SEQ ID NO:200), CGTVHQ(SEQ ID NO:201), CASVHQ(SEQ ID NO:202), CTAVFQ(SEQ ID N0:203),CATVFQ(SEQ ID NO:204),CAAAHQ(SEQ ID NO:205),CVVVYQ(SEQ ID NO:206), CGTVFQ(SEQ ID NO:207), CTAVHQ(SEQ ID NO:208), CITVHQ(SEQ ID NO:209), CITAHQ(SEQ ID N0:210)、CVTVHQ(SEQ ID N0:211) ;CAAVHQ(SEQ ID N0:212)、CGTVYQ(SEQ ID N0:213)、 CTTVLQ(SEQ ID N0:214)、CTTTHQ(SEQ ID N0:215)或 CTTDYQ(SEQ ID N0:216)。
99. 權利要求71所述的文庫，其中，所述超長⑶R3包含（XaXb)z基序， 其中，Xa是任意胺基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨 酸01)組成的組的芳香族胺基酸，以及其中z是1-4。
100. 權利要求99所述的文庫，其中，所述（XaXb)z基序是CYTYNYEF(SEQ ID N0:217)、 HYTYTYDF(SEQ ID N0:218), HYTYTYEff (SEQ ID NO: 219), KHRYTYEff (SEQ ID N0:220), NYIYKYSF(SEQ ID NO:221), PYIYTYQF(SEQ ID NO:222), SFTYTYEff(SEQ ID N0:223), SYIYIYQff(SEQ ID NO: 224), SYNYTYSff (SEQ ID NO: 225), SYSYSYEY (SEQ ID NO:226), SYTYNYDF(SEQ ID NO:227), SYTYNYEff(SEQ ID NO:228), SYTYNYQF(SEQ ID NO:229), SYVWTHNF(SEQ ID NO: 230), TYKYVYEff (SEQ ID NO: 231), TYTYTYEF (SEQ ID N0:232), TYTYTYEff(SEQ ID NO: 233), VFTYTYEF (SEQ ID ND: 234), AYTYEff (SEQ ID NO :235), DYIYTY(SEQ ID NO :236), IHSYEF(SEQ ID NO :237), SFTYEF(SEQ ID NO :238), SHSYEF(SEQ ID N0:239) ,THTYEF(SEQ ID NO:240),TWTYEF(SEQ ID NO:241),TYNYEff(SEQ ID NO:242), TYSYEF(SEQ ID N0:243)、TYSYEH(SEQ ID N0:244)、TYTYDF(SEQ ID N0:245)、TYTYEF(SEQ ID N0:246)、TYTYEW(SEQ ID N0:247)、AYEF(SEQ ID N0:248)、AYSF(SEQ ID N0:249)、AYSY(SEQ ID N0:250)、CYSF(SEQ ID N0:251)、DYTY(SEQ ID N0:252)、KYEH(SEQ ID N0:253)、KYEW(SEQ ID N0:254),MYEF(SEQ ID NO:255),NWIY(SEQ ID NO:256),NYDY(SEQ ID NO:257).NYQff(SEQ ID N0:258)、NYSF(SEQ ID N0:259)、PYEW(SEQ ID N0:260)、RYNW(SEQ ID N0:261)、RYTY(SEQ ID N0:262)、SYEF(SEQ ID N0:263)、SYEH(SEQ ID N0:264)、SYEW(SEQ ID N0:265)、SYKW(SEQ ID N0:266)、SYTY(SEQ ID N0:267)、TYDF(SEQ ID N0:268)、TYEF(SEQ ID N0:269)、TYEW(SEQ ID N0:270)、TYQW(SEQ ID N0:271)、TYTY(SEQ ID N0:272)或 VYEW(SEQ ID N0:273)。
101. 權利要求99所述的文庫，其中，所述（XaXb)z基序是YXYXYX。
102. 權利要求71所述的文庫，其中，所述超長⑶R3包含XiX2X3X4X 5Xn基序， 其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X2是絲 氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬醯胺（N)， 其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X5是穀氨醯胺（Q)，以及 其中n是27-54。
103. 權利要求71所述的文庫，其中，所述超長⑶R3包含Xn(XaXb) z基序， 其中Xa是任意胺基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨 酸01)組成的組的芳香族胺基酸，其中n是27-54,以及其中z是1-4。
104. 權利要求71所述的文庫，其中，所述超長CDR3包含XiXfxfXjXfh基序， 其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X2是絲 氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬醯胺（N)， 其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是穀氨醯胺（Q)， Xa是任意胺基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成 的組的芳香族胺基酸，其中n是27-54,以及其中z是1-4。
105. 權利要求104所述的文庫，其中，所述XTXYX5基序是TTVHQ(SEQ ID N0:153)或
106. 權利要求71所述的文庫，其中，所述超長⑶R3包含： -CXTfxl5基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬醯胺（N)，其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是穀氨醯胺（Q)， -選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：CX1QCX5CX5CXCX 7C (SEQ ID NO: 41)、 CX10CX6CX5CXCX15C(SEQ ID N0:42)、CXUCXCX5C(SEQ ID N0:43)、CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID N0:44)、CX10CX6CX5CXCX13C(SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 47), CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48), CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID N0:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID N0:50)、CX1(iCX6CX5CXCX7C(SEQ ID NO:51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID N0:52)、CX1(iCX5CX6CXCX7C(SEQ ID NO: 53)、CX1(ICX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCX7C(SEQ ID NO:55), CX10CX6CX5CXCX9C(SEQ ID NO:56), CX10CXCX4CX5CXnC(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(ICXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CXnCX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CX1(ICX5CX5CXCX1(IC (SEQ ID NO: 64) , CX10CXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CX1(ICX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67) , CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68) , CX4CX6CX9CX2CXnC (SEQ ID N0:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C(SEQ ID N0:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C(SEQ ID N0:71)、 CX10CX6CX5C(SEQ ID N0:72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID N0:73)、cx7cx5cxcx2c(seq ID N0:74)、CX1(iCXCX6C(SEQ ID N0:75)、CX1(iCX3CX3CX5CX 7CXCX6C(SEQ ID N0:76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID N0:81)、CX10CX5CXCX8CX6C(SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CXnCX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86), CX10CX6CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:87), CX10CX6CX5CXCX8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90)、CX1(ICX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID N0:91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C(SEQ ID N0:92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C(SEQ ID NO :93) , CX10CX2CX2CX7CXCXnCX 5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C (SEQ ID NO: 95)，和 _(XaXb)z基序，其中Xa是任意胺基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨 酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，以及其中z是1-4。
107. 權利要求71所述的文庫，其中，所述超長⑶R3包含： -CXTfxl5基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬醯胺（N)，其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是穀氨醯胺（Q); -選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：其中半胱氨酸基序選自由以下序列 組成的組：CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID NO:99), CX5CX3CXCX4CX4CCX10CX 2CC(SEQ ID NO: 100), CX5CXCX1CXCX3CCX3CX 4CX10C (SEQ ID NO: 101), cx9cccx3cx4cccx5cx6c(seq ID NO: 102), ccx8cx5cx4cx3cx4ccxcx 1c(seq id N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 CX3CX5CX5CX4CCX1(ICX 6C(SEQ ID N0:126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C(SEQ ID N0:127)、 CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、CX8CX2CX4CCX4CX 3CX3C(SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO: 130) , CXnCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、 CX2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : 1 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID N0:136)、CX9CX6CX4CCXC(SEQ ID N0:137)、CX5CCX7CX4CX12(SEQ ID N0:138)、 CX10CX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139), CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140), CX10CX3CX4CX7CXC(SEQ ID N0:141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C(SEQ ID N0:142)、CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID N0:143)、 CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152);和 _(XaXb)z基序，其中Xa是任意胺基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨 酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，以及其中z是1-4。
108. 權利要求90所述的文庫，其中，所述超長CDR3包含另外的序列，所述另外的序列 是接頭。
109. 權利要求108所述的文庫，其中，所述接頭連接至非抗體序列的C-末端、N-末端、 或C-末端和N-末端兩者。
110. 權利要求71所述的文庫，其中，所述超長CDR3是反芻動物CDR3。
111. 權利要求110所述的文庫，其中，所述反芻動物是牛。
112. 權利要求71所述的文庫，其中，所述人源化抗體或其結合片段包含人類重鏈種系 序列，所述人類重鏈種系序列是VH4家族成員種系序列。
113. 權利要求71所述的文庫，其中，所述人源化抗體或其結合片段包含VH4-34種系序 列。
114. 權利要求71所述的文庫，其中，所述人源化抗體或其結合片段包含衍生自VH4-34 的人類重鏈種系序列。
115. 權利要求114所述的文庫，其中，所述VH4-34種系序列包含⑶R1，所述⑶R1包含 基於Kabat編號的Gly31Asp和Tyr32Lys取代。
116. 權利要求114所述的文庫，其中，所述VH4-34種系序列包含⑶R2,所述⑶R2包含 基於Kabat編號的Glu50Ser取代。
117. 權利要求114所述的文庫，其中，所述VH4-34種系序列包含⑶R1和⑶R2，所 述 CDR1 包含基於 Kabat 編號的 Ala23Thr、Val24Ala、Tyr25Ser、Gly27Phe、Phe29Leu、 Gly31Asp、Tyr32Lys、Tyr33Ala、Trp34Val 和 Ser35Gly 取代，所述 CDR2 包含基於基於 Kabat 編號的 Ile48Leu、Glu50Ser、Asn52Asp、His53Thr、Ser54Gly、Ser56Asn 和 Asn58Gly 取代。
118. 權利要求71所述的文庫，其中，所述人源化抗體或其結合片段包含SEQ ID NO: 470中列出的胺基酸序列。
119. 權利要求71所述的文庫，其中，所述人源化抗體或其結合片段包含SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468 或 469 中列出的胺基酸序列；以及 SEQ ID N0:470 中列出的胺基酸序列。
120. 權利要求71所述的文庫，其中，所述人源化抗體或其結合片段包含SEQ ID 勵:461、462、463、464、465、466、467、468或4697 中所列的胺基酸，5￡0 1〇勵:470 中列出的 胺基酸序列；以及一肽序列，其中所述肽序列位於SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、 467、468 或 4697,與 SEQ ID N0:470 之間。
121. 權利要求120所述的文庫，其中，所述肽序列是牛序列、非牛序列、抗體序列或非 抗體序列。
122. 權利要求71所述的文庫，其中，所述人源化抗體或其結合片段包含輕鏈可變區序 列，所述輕鏈可變區序列是A輕鏈可變區序列。
123. 權利要求122所述的文庫，其中，所述A輕鏈可變區序列是牛A輕鏈可變區序 列。
124. 權利要求122所述的文庫，其中，所述A輕鏈可變區序列是人類A輕鏈可變區序 列。
125. 權利要求124所述的文庫，其中，所述人類A輕鏈可變區序列是VL1-51。
126. 權利要求124所述的文庫，其中，所述人類A輕鏈可變區序列衍生自VL1-51。
127. 權利要求126所述的文庫，其中，所述VL1-51種系序列包含CDR1，所述CDR1包含 基於Kabat編號的Ile29Val和Asn32Gly取代。
128. 權利要求126所述的文庫，其中，所述VL1-51種系序列包含⑶R2,所述⑶R2包含 DNN到⑶T的取代。
129. 權利要求126所述的文庫，其中，所述VL1-51種系序列包含⑶R2,所述⑶R2包含 DNNKRP(SEQ ID N0:471)到⑶TSRA(SEQ ID N0:472)的取代。
130. 權利要求126所述的文庫，其中，所述VL1-51種系序列包含基於Kabat編號的 S2A、T5N、P8S、A12G、A13S 和 P14L 取代。
131. 權利要求126所述的文庫，其中，所述VL1-51種系序列包含基於Kabat編號的 S2A、T5N、P8S、A12G、A13S和P14L取代，以及包含DNN到⑶T的取代的CDR2。
132. 權利要求71所述的文庫，其中，所述文庫包含SEQ ID勵：440、441、442、443或444 中列出的胺基酸序列。
133. 權利要求71-132中任一項所述的文庫，其中，所述人源化抗體或其結合片段以空 間定址的形式存在。
134. -種人源化抗體可變區的方法，包括將編碼非人類超長CDR3的核酸序列和編碼 人類可變區框架（FR)序列的核酸序列基因組合的步驟。
135. -種產生包含超長CDR3的人源化抗體的文庫的方法，所述方法包括： a. )組合編碼超長CDR3的核酸序列與編碼人類可變區框架（FR)序列的核酸序列，以產 生編碼包含超長CDR3的人源化抗體的核酸；和 b. )表達所述編碼包含超長CDR3的人源化抗體的核酸，以產生包含超長CDR3的人源化 抗體的文庫。
136. -種產生包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的文庫的方法，所述超長 ⑶R3包含非抗體序列，所述方法包括： a. )組合編碼超長CDR3的核酸序列、編碼人類可變區框架（FR)序列的核酸序列、以及 編碼非抗體序列的核酸序列，以產生編碼包含超長CDR3和非抗體序列的人源化抗體或其 結合片段的核酸，和 b. )表達所述編碼包含超長CDR3和非抗體序列的人源化抗體或其結合片段的所述核 酸，以產生包含超長CDR3和非抗體序列的人源化抗體或其結合片段的文庫。
137. -種包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的文庫，所述超長CDR3包含非抗 體序列。
138. -種產生包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的文庫的方法，所述超長 CDR3包含半胱氨酸基序，所述方法包括： a. )組合人類可變區框架（FR)序列以及編碼超長CDR3和半胱氨酸基序的核酸序列； b. )向所述核酸序列中引入一個或多個核苷酸變化，所述核酸序列編碼位於編碼不同 胺基酸殘基的核苷酸的半胱氨酸基序中的一個或多個半胱氨酸殘基之間的一個或多個氨 基酸殘基，以產生編碼包含超長CDR3和半胱氨酸基序的人源化抗體或其結合片段的核酸， 所述半胱氨酸基序具有在半胱氨酸結構域中的一個或多個半胱氨酸殘基之間引入的一個 或多個核苷酸變化；和 c. )表達所述編碼人源化抗體或其結合片段的核酸，所述人源化抗體或其結合片段包 含超長CDR3和半胱氨酸基序，所述半胱氨酸基序具有在半胱氨酸結構域中的一個或多個 半胱氨酸殘基之間引入的一個或多個核苷酸變化，以產生人源化抗體或其結合片段的文 庫，所述人源化抗體或其結合片段包含超長CDR3和半胱氨酸基序，所述半胱氨酸基序具有 在半胱氨酸結構域中的一個或多個半胱氨酸殘基之間引入的一個或多個核苷酸變化。
139. -種包含超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的文庫，所述超長CDR3包含半胱 氨酸基序，其中所述抗體或結合片段包含位於所述半胱氨酸基序中的半胱氨酸殘基之間的 一個或多個胺基酸殘基取代。
140. -種產生包含牛超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的文庫的方法，所述方法 包括： a. )組合編碼人類可變區框架（FR)序列的核酸序列和編碼牛超長CDR3的核酸，和 b. )表達編碼人類可變區框架（FR)序列的核酸和編碼牛超長CDR3的核酸，以產生包含 牛超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的文庫。
141. 一種包含牛超長CDR3的人源化抗體或其結合片段的文庫。
142. -種包含XfxYX5基序的CDR3支架， 其中，X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X2是絲 氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬醯胺（N)， 其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是穀氨醯胺（Q)。
143. 權利要求142所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架的長度為35個胺基酸或更 長，40個胺基酸或更長，45個胺基酸或更長，50個胺基酸或更長，55個胺基酸或更長，或60 個胺基酸或更長。
144. 權利要求143所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架的長度為35個胺基酸或更 長。
145. 權利要求142所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架包含3個或更多個半胱氨 酸殘基，4個或更多個半胱氨酸殘基，5個或更多個半胱氨酸殘基，6個或更多個半胱氨酸殘 基，7個或更多個半胱氨酸殘基，8個或更多個半胱氨酸殘基，9個或更多個半胱氨酸殘基， 10個或更多個半胱氨酸殘基，11個或更多個半胱氨酸殘基，或12個或更多個半胱氨酸殘 基。
146. 權利要求145所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架包含3個或更多個半胱氨酸 殘基。
147. 權利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含半胱氨酸基序。
148. 權利要求147所述的CDR3支架，其中，所述半胱氨酸基序選自由以下序 列組成的組{父1(^5〇父5〇父〇父7(：(5￡〇10勵:41)、〇父 1(^6〇父5〇父〇父15(：(5￡〇10勵:42)、 CXnCXCX5C(SEQ ID NO: 43), CXnCX5CX5CXCX7C (SEQ ID NO: 44), CX10CX6CX5CXCX13C (SEQ ID NO: 45) , CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、CX10CX6CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 47)、 CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48) , CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID NO: 49), CX13CX8CX8C (SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCX7C (SEQ ID NO : 51)、CX10CX5CX5C (SEQ ID NO: 52)、 CX10CX5CX6CXCX7C(SEQ ID NO:53), CX10CX6CX5CX7CX9C(SEQ ID NO:54), CX9CX7CX5CXCX7C(SEQ ID N0:55) , CX10CX6CX5CXCX9C(SEQ ID NO: 56) , CX10CXCX4CX5CXnC (SEQ ID NO :57), CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C(SEQ ID N0:58) , CX10CXCX4CX5CXCX2CX 3C(SEQ ID NO:59), CX16CX5CXC(SEQ ID N0:60)、CX6CX4CXCX4CX5C(SEQ ID N0:61)、CXuCX4CX5CX6CX 3C(SEQ ID N0:62)、CX8CX2CX6CX5C(SEQ ID N0:63)、CX1(iCX5CX5CXCX1(iC(SEQ ID N0:64)、 CX10CXCX6CX4CXC(SEQ ID NO:65), CX10CX5CX5CXCX2C(SEQ ID NO:66), CX14CX2CX3CXCXC(SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO : 68)、CX4CX6CX9CX2CXUC (SEQ ID N0:69)、 CX6CX4CX5CX5CX12C (SEQ ID NO : 70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71), CX10CX6CX5C(SEQ ID N0:72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID N0:73)、CX7CX5CXCX2C(SEQ ID N0:74)、CX1(iCXCX6C(SEQ ID N0:75)、CX1(iCX3CX3CX5CX 7CXCX6C(SEQ ID N0:76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID N0:81)、CX10CX5CXCX8CX6C(SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CXnCX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86), CX10CX6CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:87), CX10CX6CX5CXCX8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90)、CX1(ICX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID N0:91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C(SEQ ID N0:92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C(SEQ ID NO :93) , CX10CX2CX2CX7CXCXnCX 5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。
149. 權利要求147所述的CDR3支架，其中，所述半胱氨酸基序選自由以下序列組 成的組：CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID NO:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID NO:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID NO:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID NO:99), CX5CX3CXCX4CX4CCX10CX 2CC(SEQ ID NO: 100), CX5CXCX1CXCX3CCX3CX 4CX10C (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), ccx8cx5cx4cx3cx4ccxcx 1c(seq id N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID NO:lll)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID NO:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID NO:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID NO:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID NO:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID NO:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID NO:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID NO:121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID NO:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID NO:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 CX3CX5CX5CX4CCX1(ICX 6C(SEQ ID NO:126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C(SEQ ID NO:127)、 CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、CX8CX2CX4CCX4CX 3CX3C(SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO: 130) , CXnCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、 CX2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : 1 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID N0:136)、CX9CX6CX4CCXC(SEQ ID NO:137)、CX5CCX7CX4CX12(SEQ ID NO:138)、 CX10CX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139),CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140),CX10CX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO:141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C(SEQ ID N0:142)、CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID NO:143)、 CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152)。
150. 權利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含2至6個二硫鍵。
151. 權利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架中的XTXYX5基序為 TTVHQ(SEQ ID NO: 153), TSVHQ(SEQ ID NO: 154), SSVTQ(SEQ ID NO: 155), STVHQ(SEQ ID N0:156), ATVRQ(SEQ ID NO: 157), TTVYQ (SEQ ID NO: 158), SPVHQ (SEQ ID NO: 159), ATVYQ(SEQ ID NO: 160), TAVYQ(SEQ ID NO: 161), TNVHQ(SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID N0:163)、STVYQ(SEQ ID N0:164)、TIVHQ(SEQ ID N0:165)、AIVYQ(SEQ ID N0:166)、 TTVFQ(SEQ ID N0:167)、AAVFQ(SEQ ID N0:168)、GTVHQ(SEQ ID N0:169)、ASVHQ(SEQ ID N0:170)、TAVFQ(SEQ ID N0:171)、ATVFQ(SEQ ID N0:172)、AAAHQ(SEQ ID N0:173)、 VVVYQ(SEQ ID NO: 174), GTVFQ(SEQ ID NO: 175), TAVHQ(SEQ ID NO: 176), ITVHQ(SEQ ID N0:177), ITAHQ(SEQ ID NO: 178), VTVHQ (SEQ ID NO: 179) ；AAVHQ(SEQ ID NO: 180), GTVYQ(SEQ ID N0:181)、ITVLQ(SEQ ID N0:182)、ITTHQ(SEQ ID N0:183)或 ITDYQ(SEQ ID NO:184)。
152. 權利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含CXTXYX5基序。
153. 權利要求152所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架中的CXiX2X3X4X 5基序為 CTTVHQ(SEQ ID NO: 185), CTSVHQ(SEQ ID NO: 186), CSSVTQ(SEQ ID NO: 187), CSTVHQ(SEQ ID NO:188),CATVRQ(SEQ ID NO:189),CTTVYQ(SEQ ID NO:190),CSPVHQ(SEQ ID NO:191), CATVYQ(SEQ ID NO: 192), CTAVYQ(SEQ ID NO: 193), CTNVHQ(SEQ ID NO: 194), CATVHQ(SEQ ID NO:195)、CSTVYQ(SEQ ID NO:196)、CTIVHQ(SEQ ID NO:197)、CAIVYQ(SEQ ID NO:198)、 CTTVFQ(SEQ ID NO: 199), CAAVFQ(SEQ ID NO:200), CGTVHQ(SEQ ID NO:201), CASVHQ(SEQ ID N0:202),CTAVFQ(SEQ ID NO:203),CATVFQ(SEQ ID NO:204),CAAAHQ(SEQ ID NO:205), CVVVYQ(SEQ ID NO:206), CGTVFQ(SEQ ID NO:207), CTAVHQ(SEQ ID NO:208), CITVHQ(SEQ ID N0:209)、CITAHQ(SEQ ID N0:210)、CVTVHQ(SEQ ID NO:211) ;CAAVHQ(SEQ ID NO:212)、 CGTVYQ(SEQ ID NO:213)、CTTVLQ(SEQ ID NO:214)、CITTHQ(SEQ ID NO:215)或CTTDYQ(SEQ ID NO:216)。
154. 權利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含（XaXb)z基序， 其中Xa是任意胺基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨 酸01)組成的組的芳香族胺基酸，以及其中z是1-4。
155. 權利要求154所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架中的（XaXb) z基序為 CYTYNYEF(SEQ ID NO: 217), HYTYTYDF (SEQ ID NO: 218), HYTYTYEff (SEQ ID N0:219), KHRYTYEff(SEQ ID NO: 220), NYIYKYSF (SEQ ID NO: 221), PYIYTYQF (SEQ ID N0:222), SFTYTYEff(SEQ ID NO:223), SYIYIYQff(SEQ ID NO:224), SYNYTYSff(SEQ ID NO:225), SYSYSYEY(SEQ ID NO: 226), SYTYNYDF(SEQ ID NO: 227), SYTYNYEff (SEQ ID NO:228), SYTYNYQF(SEQ ID NO:229), SYVWTHNF(SEQ ID NO: 230), TYKYVYEff(SEQ ID NO:231), TYTYTYEF(SEQ ID NO: 232), TYTYTYEff (SEQ ID NO: 233), VFTYTYEF (SEQ ID NO:234), AYTYEff(SEQ ID NO:235), DYIYTY(SEQ ID NO:236), IHSYEF(SEQ ID NO:237), SFTYEF(SEQ ID NO:238) ,SHSYEF(SEQ ID NO:239),THTYEF(SEQ ID NO:240),TWTYEF(SEQ ID NO:241), TYNYEff(SEQ ID NO:242), TYSYEF(SEQ ID NO:243), TYSYEH(SEQ ID NO:244), TYTYDF(SEQ ID NO:245)、TYTYEF(SEQ ID NO:246)、TYTYEW(SEQ ID NO:247)、AYEF(SEQ ID NO:248)、 AYSF(SEQ ID NO:249)、AYSY(SEQ ID N0:250)、CYSF(SEQ ID NO:251)、DYTY(SEQ ID NO:252)、KYEH(SEQ ID NO:253)、KYEW(SEQ ID NO:254)、MYEF(SEQ ID NO:255)、NWIY(SEQ ID NO:256),NYDY(SEQ ID NO:257).NYQff(SEQ ID NO:258),NYSF(SEQ ID NO:259).PYEff(SEQ ID N0:260)、RYNW(SEQ ID NO:261)、RYTY(SEQ ID NO:262)、SYEF(SEQ ID NO:263)、SYEH(SEQ ID N0:264)、SYEW(SEQ ID N0:265)、SYKW(SEQ ID N0:266)、SYTY(SEQ ID N0:267)、TYDF(SEQ ID N0:268)、TYEF(SEQ ID N0:269)、TYEW(SEQ ID N0:270)、TYQW(SEQ ID N0:271)、TYTY(SEQ ID NO :272), or VYEff(SEQ ID N0:273)〇
156. 權利要求154所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架中的（XaXb)z基序為YXYXYX。
157. 權利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含XiX2X3X4X 5Xn基序， 其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X2是絲 氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬醯胺（N)， 其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X5是穀氨醯胺（Q)，以及 其中n是27-54。
158. 權利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含Xn(XaXb) z基序， 其中Xa是任意胺基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨 酸01)組成的組的芳香族胺基酸，其中n是27-54,以及其中z是1-4。
159. 權利要求142所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架包含XiX2X3X4X 5Xn(XaXb)z基 序， 其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X2是絲 氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬醯胺（N)， 其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是穀氨醯胺（Q)， Xa是任意胺基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成 的組的芳香族胺基酸，其中n是27-54,以及其中z是1-4。
160. 權利要求159所述的CDR3支架，其中，CDR3支架中的XfxYX5基序為TTVHQ (SEQ 10勵：153)或15￥即(5￡〇10勵：154)，並且其中（父1\基序為￥父￥父丫父。
161. 權利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含： -CXTfxl5基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬醯胺（N)，其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是穀氨醯胺（Q)， -選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：CX1QCX5CX5CXCX 7C (SEQ ID N0:41)、 CX10CX6CX5CXCX15C(SEQ ID N0:42)、CXUCXCX5C(SEQ ID N0:43)、CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID N0:44)、CX10CX6CX5CXCX13C(SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 47), CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48), CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID N0:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID N0:50)、CX1(iCX6CX5CXCX7C(SEQ ID NO:51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID N0:52)、CX1(iCX5CX6CXCX7C(SEQ ID NO: 53)、CX1(ICX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCX7C(SEQ ID NO:55), CX10CX6CX5CXCX9C(SEQ ID NO:56), CX10CXCX4CX5CXnC(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(ICXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CXnCX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CX10CX5CX5CXCX10C (SEQ ID NO: 64) , CX10CXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CX1(ICX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC(SEQ ID NO:67)、CX15CX5CXC(SEQ ID N0:68)、CX4CX6CX9CX2CX nC(SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C(SEQ ID N0:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C(SEQ ID NO:71)、 CX10CX6CX5C(SEQ ID NO:72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID NO:73)、cx7cx5cxcx2c(seq ID N0:74)、CX1(iCXCX6C(SEQ ID NO:75)、CX1(iCX3CX3CX5CX 7CXCX6C(SEQ ID NO:76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID N0:81)、CX10CX5CXCX8CX6C(SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CXnCX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86), CX10CX6CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:87), CX10CX6CX5CXCX8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90)、CX1(ICX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID N0:91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C(SEQ ID N0:92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C(SEQ ID NO :93) , CX10CX2CX2CX7CXCXnCX 5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C (SEQ ID NO: 95)，和 _(XaXb)z基序，其中Xa是任意胺基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨 酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，以及其中z是1-4。
162.權利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含： -CXTfxl5基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬醯胺（N)，其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是穀氨醯胺（Q); -選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：其中半胱氨酸基序選自由以下序列 組成的組：CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID NO:99), CX5CX3CXCX4CX4CCX10CX 2CC(SEQ ID NO: 100), CX5CXCX1CXCX3CCX3CX 4CX10C (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), ccx8cx5cx4cx3cx4ccxcx 1c(seq id N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 CX3CX5CX5CX4CCX1(ICX 6C(SEQ ID N0:126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C(SEQ ID N0:127)、 CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、cx8cx2cx4ccx4cx 3cx3c(seq ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO: 130) , CXnCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、 CX2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : 1 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID N0:136)、CX9CX6CX4CCXC(SEQ ID N0:137)、CX5CCX7CX4CX12(SEQ ID N0:138)、 CX10CX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139), CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140), CX10CX3CX4CX7CXC(SEQ ID N0:141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C(SEQ ID N0:142)、CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID N0:143)、 CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152);和 _(XaXb)z基序，其中Xa是任意胺基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨 酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族胺基酸，以及其中z是1-4。
163. 權利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含SEQ ID N0:40或其衍 生物。
164. 權利要求142所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架包含SEQ ID NO: 1-4中任一 個的胺基酸殘基3-6。
165. 權利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含非人類DH或其衍生物。
166. 權利要求165所述的CDR3支架，其中，所述非人類DH是SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQIDN0:7、SEQIDN0:8、SEQIDN0:9、SEQIDN0:10、SEQIDN0:11*SEQID NO:12。
167. 權利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含JH序列或其衍生物。
168. 權利要求167所述的CDR3支架，其中，所述JH序列是SEQ ID N0:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16 或 SEQ ID NO:17。
169. 權利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含： _非人類VH序列或其衍生物； -非人類DH序列或其衍生物；和/或 -JH序列或其衍生物。
170. 權利要求169所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架包含另外的胺基酸序列，所 述另外的胺基酸序列包含位於VH序列和DH序列之間的二至六個胺基酸殘基或更多個氨基 酸殘基。
171. 權利要求170所述的⑶R3支架，其中，所述另外的胺基酸序列選自由IR、IF、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20 或 SEQ ID NO: 21 組成的組。
172. 權利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含衍生自或基於SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27 或 SEQ ID NO :28的序列。
173. 權利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架是反芻動物⑶R3支架。
174. 權利要求173所述的CDR3支架，其中，所述反芻動物是牛。
175. -種包含權利要求142-174中任一項所述的⑶R3支架的文庫。
176. 編碼權利要求142-174中任一項所述的⑶R3支架的多核苷酸。
177. 包含權利要求176的多核苷酸的載體。
178. 包含權利要求177的載體的宿主細胞。
179. 權利要求178所述的宿主細胞，其中，所述細胞是細菌、病毒或噬菌體。
【文檔編號】C07K16/10GK104411717SQ201380013173
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2013年1月9日 優先權日:2012年1月9日
【發明者】沃恩·斯密德, 奧馬爾·A·巴茲甘, 茅洪源 申請人:斯克利普斯研究所