牛角瓜及其提取物在製備抗腫瘤藥物中的新用途的製作方法

2023-12-08 07:53:36 1

專利名稱：牛角瓜及其提取物在製備抗腫瘤藥物中的新用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種藥用植物新的醫療用途，尤其是牛角瓜及其提取物在製備抗腫瘤藥物中 的新用途，屬於中藥、天然藥物領域。
背景技術：
牛角瓜[Ca/ofra; "'g7'ga"fra (L.) Dryand ex Ait. f.]為蘿摩禾鬥(Asclepiadaceae)牛角瓜屬 (Cfl/Wra/^)植物。別名五狗臥花、羊浸樹、斷胲草。牛角瓜屬植物全世界共有6個種，分 布於東南亞。我國產牛角瓜和白花牛角瓜2種，分布於海南、雲南、廣東和廣西等地，生長 於低海拔向陽山坡、曠野和海邊。牛角瓜根、莖、葉、果各部及白色汁液均有大毒和強烈的 刺激性，食少量能引起嘔吐和下瀉，食大量則會發生嚴重的腹痛及腸炎，以致死亡，妊娠的 人畜中毒引起流產。牛角瓜入藥可用作發汗劑、除痰劑、驅蟲劑、驅風劑和強心劑，用於治 療溼疹、麻瘋病、梅毒、象皮病、哮喘等病症。
目前，已從牛角瓜植物中分離出50餘種化合物，其中強心苷類化合物為主要的化學成分 (《現代本草綱目》(上巻)，2001年版)。至今文獻報導多為牛角瓜強心苷類化合物在抗腫瘤 等方面的研究和應用(《Journal of Natural Product》，2006， 69: 1249;《Chemical Pharmaceutical Bulletin》，1998， 46: 528)，公開專利"PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING USCHARIDIN OR ITS ANALOGUES"(US 6342490 Bl)涉及強心苷抗腫瘤活性的研究，"一 種治療癌症的強心苷類化合物及其製備方法"(專利CNI414010A)涉及強心苷類化合物提取 新工藝等。
癌症是一組可影響身體任何部位的100多種疾病的通稱。使用的其它術語為惡性腫瘤和 腫瘤。癌症是全世界一個主要死亡原因。在2005年全世界5800萬死亡總數中，癌症佔所有 死亡的760萬(或13%)。導致癌症總死亡率的主要癌症種類為肺(130萬死亡/年)，胃(約 100萬死亡/年)，肝(662 000死亡/年)，結腸(655 000死亡/年)，乳腺(502 000死亡/年)。 目前的治療手段為臨床用藥從單一藥物治療過渡到多藥聯合化療，但是，絕大多數的治療僅 能延長生命而不能根除病症，伴隨治療產生的許多毒副作用如肝功能衰竭和糖尿病等，使得 患者的免疫系統受到損害。目前從天然藥物中尋找抗腫瘤藥物是研究的熱門課題。 一些中草 藥的提取物如延命素(《雲南植物研究》，2006， 28: 95)、牡荊苷(《熱帶亞熱帶植物學報》， 2008， 16: 51)、亞油酸(《上海醫學》，1994， 17: 635)等具有抗腫瘤的活性，其化學結構 包括二萜、黃酮苷、有機酸等。大蒜、蘑菇、靈芝和人參等已被許多國家用於癌症治療。
本發明所述的牛角瓜及其提取物在製備抗腫瘤藥物中的新用途，至今尚未見文獻報導和 專利公開。

發明內容
本發明的目的是提供牛角瓜新的醫療用途，即牛角瓜及其提取物在製備抗腫瘤藥物中的 用途。
本發明的內容是牛角瓜及其提取物在製備抗腫瘤藥物中的用途，所述用途特徵在於1、 牛角瓜提取物可通過下述步驟獲得牛角瓜乾燥根，適當粉碎後用8-11倍量95%乙醇室溫浸 泡提取3次，也可滲漉提取，將提取液減壓回收乙醇，減壓回收乙醇至無醇味。將乙醇提取 物分散於水中成懸濁液，經石油醚萃取得到石油醚浸膏A，剩下的水液經過濾後上大孔吸附 樹脂(D-101)柱層析，先後用水和甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，經濃縮得到甲醇浸膏B。浸膏 A、 B乾燥即得牛角瓜提取物A、牛角瓜提取物B; 2、牛角瓜提取物B和/或牛角瓜95。/。乙醇 提取物，添加適當的藥用輔料，按常規的製劑工藝，即可製成片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸 劑、口服液等口服藥物製劑和注射藥物製劑。
牛角瓜提取物B經薄層層析，用強心苷顯色劑顯色，顯示牛角瓜提取物B含有強心苷類 化合物。
本發明的牛角瓜提取物B，經體外活性篩選，統計處理結果顯示有較好的抗腫瘤活性。 為了進一步驗證牛角瓜及其提取物在治療腫瘤方面的功效，對牛角瓜提取物B進行了 100例 病人初步的臨床療效觀察，結果表明牛角瓜提取物B是有效的。由牛角瓜提取物B的體外活 性篩選和病人初步臨床療效觀察結果，可以合理推導牛角瓜及其提取物可用於製備抗腫瘤藥 物，即牛角瓜及其提取物在製備抗腫瘤藥物方面的用途。
本發明的有益效果是提供了牛角瓜在民間通常用於製備治療溼疹、麻瘋病等藥物以外的 新的醫療用途，即牛角瓜及其提取物在製備抗腫瘤藥物方面的用途，並採用不同的溶媒萃取 得到牛角瓜提取物B，牛角瓜提取物B添加適當的藥用輔料，按常規的製劑工藝，即可製成 口服和注射藥物製劑。
下面是牛角瓜提取物B的體外活性篩選和病人初步臨床療效觀察試驗及其結果。
一、體外活性篩選 試驗方法
採用MTT法測試了牛角瓜提取物B對人體的胃癌細胞SGC-7901、慢性骨髓性白血病細 胞K562、人口腔表皮癌細胞KB、骨纖維肉瘤HT-1080、骨肉瘤(G-292、 KHOS/NP)、前列腺癌LNCap、胃腺癌(KKLS、 MKN-28、 MKN-45)等細胞株的體外抑瘤活性(結果見附表1)。活 性測試方法如下實驗設陰性對照組(水)、DMSO溶劑對照組、陽性對照組(絲裂黴素C)和 8個不同濃度(0.8， 1.6， 3.2, 6.3, 12.5， 25， 50， 100 )的待測樣品，每個濃度設2個平行。收集對數 生長期細胞，血球計數板計數，按每孔4500個癌細胞量接種於96孔平底細胞培養板中，置 於5%(:02、溼度90%以上、37'C培養箱中培養。24h後取出加入一定量的待測樣品，繼續 培養3 d後取出置於顯微鏡下觀察每孔細胞形態，記錄細胞形態變化情況，接著每孔加入5 mg/mL的MTT溶液(溶於平衡鹽溶液PBS) 50 ^L， 37 'C反應4 h後，將細胞培養液吸出， 每孔加入100 pL DMSQ將Formazane充分溶解，將細胞培養板置於MK3酶標儀上，用570 nm 波長測各孔的吸光度(A)，按下列公式求生長抑制率。
用藥組平均A值
生長抑制率(％) =(1
-)xl00%
陰性對照組平均A值
以樣品濃度為橫坐標，以抑制率為縱坐標，作圖並求出抑制率為50%時樣品的濃度(1<:5)，
樣品活性結果即以半數抑制濃度(IC50)表示。
實驗結果.-
附表1樣品對SGC-7901、 K562等腫瘤細胞株的毒性作用
Cell line
Human origin
IC50(//g/ml)
牛角瓜提取物B
SGC-7卯1Gastric cancer7.0
K562Chronic myelogenous leukemia3.3
KBOral epidermoid carcinoma0.16
HT-1080Fibrosarcoma0.20
G-292Osteosarcoma0.29
KHOS/NPOsteosarcoma0.033
LNCapProstate adenocarcinoma0.70
KKLSGastric adenocarcinoma0.14
MKN-28Gastric adenocarcinoma0.23
MKN-45Gastric adenocarcinoma0.43
注毒性值IC5fl,即藥物對細胞殺滅50%時的濃度值。IC50值越大則毒性越小。
二、初步臨床療效觀察
研究對象腫瘤患者，其中男63例，女37例，年齡最小者35歲，最大者73歲。
診斷標準1、無其他任何不良症狀；2、沒有服用過任何其他抗腫瘤藥物。
研究方法該試驗以100名腫瘤患者為研究對象，受試物為本發明成藥(約含0.15g牛
角瓜提取物B的O號膠囊)服用， 一日三次，每次二粒，開水衝服。每40天為一個療程， 連續兩個療程後停藥休息一周，詳細觀察病情變化進行檢査。然後進行第三個療程治療，在 服藥期間停服其它藥品。
臨床治癒症狀及客觀檢査陽性徵象消失，連續半年無復發者。
臨床顯著症狀基本消失，癌灶縮小一半以上，其它客觀檢查有明顯好轉，觀察半年以 上不再發展者。
臨床有效症狀有所改善，病灶基本穩定，觀察在一個月以上者。 臨床無效症狀及客觀檢査無改善，或僅有短期改善，而又迅速惡化者。 療效結果:_
療效_總例數_百分比_備註
臨床治癒 58 58%
臨床顯著 16 16%
臨床有效 17 17%
臨床無效_^_^_擴散轉移
本發明的優點是
1、 本發明選用的天然藥物為原料，低毒，副作用小。
2、 本發明無須煎煮，治療方便，有效率達91%。
3、 本發明能夠控制癌細胞增生，防止癌細胞擴散，使癌細胞枯萎脫落消失。
4、 本發明提供低劑量(0.5~2mg/kg)即可產生抗腫瘤活性，因此長期低劑量(如0.6 1.25 mg/kg)比高劑量(5~10mg/kg)的抗腫瘤作用更強。
具體實施方式
實施例1
取牛角瓜乾燥品2.0kg，用10倍量95%乙醇分3次(5、 3、 3天)浸提，減壓回收乙醇， 濃縮乾燥得到浸膏粉，浸膏粉加入澱粉適量，混均、制粒、乾燥、整粒，裝入膠囊，製成1000 粒即可。
實施例2
取牛角瓜乾燥品10.0kg，用9倍量90%乙醇滲漉，減壓濃縮滲漉液至無醇味得濃縮液， 濃縮液分散於水中成懸濁液，經石油醚萃取得到石油醚浸膏A，剩下的水液經過濾後上大孔 吸附樹脂(D-101)柱層析，先後用水和甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，經濃縮得到甲醇浸膏B， 浸膏B乾燥即得牛角瓜提取物B。取牛角瓜提取物B 100 g，加入澱粉等適量輔料，混均、制
粒、乾燥，壓製成1000片即可。 實施例3
取牛角瓜乾燥品5.0 kg，用8倍量80%乙醇滲漉，減壓濃縮滲漉液至無醇味得濃縮液， 濃縮液分散於水中成懸濁液，經石油醚萃取得到石油醚浸膏，剩下的水液經過濾後上大孔吸 附樹脂(D-101)柱層析，先後用水和甲醇洗脫，.收集甲醇洗脫液，經濃縮得到甲醇浸膏，甲醇 浸膏乾燥即得牛角瓜提取物B;取牛角瓜提取物B 25g,加適量注射用水溶解，按常規的水針 劑工藝，調PH值、過濾、灌封、滅菌製成1000ml即可；或者添加適量附加劑如甘露醇，溶 解攪勻，過濾、凍幹、分裝製成500瓶即可。
權利要求
1、牛角瓜在製備抗腫瘤藥物中的新用途，其特徵在於所述牛角瓜為蘿藦科(Asclepiadaceae)牛角瓜屬(Calotropis)植物牛角瓜(Calotropis gigantea)，藥用全株。
2、 牛角瓜提取物在製備抗腫瘤藥物中的新用途，其特徵在於牛角瓜提取物可通過下述步 驟獲得牛角瓜乾燥根，適當粉碎後用8-11倍量^5%乙醇室溫浸泡提取3次，也可滲漉提取，將 提取液減壓回收乙醇，減壓回收乙醇至無醇味。將乙醇提取物分散於水中成懸濁液，經石油 醚萃取得到石油醚浸膏A，剩下的水液經過濾後上大孔吸附樹脂(D-101)柱層析，先後用水和 甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，經濃縮得到甲醇浸膏B。浸膏A、 B乾燥即得牛角瓜提取物A、 牛角瓜提取物B。
3、 根據權利要求2所述牛角瓜提取物，其特徵在於所述牛角瓜提取物B含有強心苷類 化合物。
4、 根據權利要求l、 2所述用途，其特徵在於將牛角瓜提取物B和/或牛角瓜95。/。乙醇 提取物，添加適當的藥用輔料，按常規的製劑工藝，即可製成片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸 劑、口服液等口服藥物製劑和凍乾粉針、水針等注射藥物製劑。
全文摘要
本發明公開了牛角瓜及其提取物在製備抗腫瘤藥物中的新用途，屬於中藥、天然藥物領域。牛角瓜通過乙醇提取，用石油醚進行萃取，剩下的水液經過濾後上大孔吸附樹脂(D101)柱層析，先後用水和甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，經濃縮得到甲醇部位，經實驗證明，提取所得到的甲醇部位具有抗腫瘤細胞的作用。
文檔編號A61K9/10GK101352468SQ20081013764
公開日2009年1月28日 申請日期2008年7月2日 優先權日2008年7月2日
發明者嬌 吳, 戴好富, 曾豔波, 梅文莉, 王祝年, 王茂媛 申請人:中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所;中國熱帶農業科學院熱帶作物品種資源研究所