元七骨痛製劑及其製備方法
2023-12-01 02:19:41 2
專利名稱：元七骨痛製劑及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種骨痛外用製劑，用於治療骨性關節炎(筋脈瘀滯證)腰、膝關節等部分疼痛、腫脹、麻木重著，遇寒加重、關節屈伸不利，活動功能障礙等。
背景技術：
筋脈瘀滯證骨性關節炎，是中老年人常見的多發病，會造成腰椎、膝關節等部位疼痛、腫脹、麻木，引起關節屈伸不利，活動功能障礙等，嚴重影響著人們的健康並給其生活帶來了不便。
發明內容
本發明的目的在於提供一種用於治療骨性關節炎(筋脈瘀帶證)、腰椎、膝關節等部位疼痛、腫痛、麻木重著、遇寒加重、關節屈伸不利、活動功能障礙等的中藥複方製劑，具有活血化瘀，驅寒散痛，通絡止痛作用，而且使用方便、無毒副作用。
本發明的技術方案為一種元七骨痛製劑，為由下述重量份數的組分作為藥用原料製成的外用製劑三七15～40份、延胡索15～40份、急性子10～35份、細辛3～20份、花椒3～20份、老鸛草5～30份、當歸5～30份、土鱉蟲5～25份、莪朮5～25份、重樓5～30份、血竭1～15份、乳香1～15份、沒藥1～15份、骨碎補5～25份、烏梢蛇5～25份、丁香油5～25份和水楊酸甲酯5～25份。
這種元七骨痛製劑，優選的是由下述重量份數的組分作為藥用原料製成的外用製劑三七25份、延胡索25份、急性子20份、細辛10份、花椒10份、老鸛草15份、當歸15份、土鱉蟲12份、莪朮10份、重樓15份、血竭3份、乳香5份、沒藥5份、骨碎補10份、烏梢蛇10份、丁香油10份、水楊酸甲酯10份。
所述的元七骨痛製劑可以貼膏劑、氣霧劑、噴霧劑、酊劑、搽劑、洗劑、塗膜劑、軟膏劑、凝膠劑、流浸膏劑、浸膏劑，優選酊劑。
上述的元七骨痛製劑可以按下述步驟生產(1)將上述17味藥按配方稱重，除丁香油、水楊酸甲酯外其餘15味分別粉碎為粗粉；(2)延胡索用1～100倍量40％～80％的乙醇熱回流提出1～20次，每次10分鐘至50小時，然後提取液回收乙醇、濃縮至相對密度為1.01～1.4的藥液，或乾燥成幹浸膏粉，備用；(3)土鱉蟲、烏梢蛇用40％～70％乙醇浸漬1～200小時，乳香、沒藥、血竭用70％～95％乙醇浸漬1～200小時，濾過，收集浸漬液備用；(4)三七、急性子、細辛、花椒、老鸛草、當歸、莪朮、重樓、骨碎補9味粗粉用40％～90％的乙醇作溶劑，浸漬1～200小時，與以上五味浸漬後藥材殘渣混勻，滲濾法進行滲濾，收集濾液，與(3)中二種備用液合併，攪勻，靜置，濾過；
(5)濾液中加入丁香油、水楊酸甲酯和可用的輔料，製成外用製劑。
優選的方式是，所述的步驟(2)中，延胡索用三倍量60％乙醇熱回流提出3次，每次2小時。
優選的方式是，所述的步驟(3)中，土鱉蟲、烏梢蛇用50％乙醇用浸漬72小時。
優選的方式是，所述的步驟(3)中，乳香、沒藥、血竭用95％乙醇用浸漬72小時。
優選的方式是，所述的步驟(4)中，三七、急性子、細辛、花椒、老鸛草、當歸、莪朮、重樓、骨碎補9味粗粉用70％乙醇作溶劑浸漬為72小時。
優選的方式是，所述的步驟(4)中，三七、急性子、細辛、花椒、老鸛草、當歸、莪朮、重樓、骨碎補9味粗粉用70％乙醇浸漬時間為72小時後與在上所述的步驟(3)中浸漬後的五味藥材殘渣合併用70％的乙醇滲漉。
所述的輔料可以為賦形劑、抗氧化劑等外用製劑的輔料，其製備工藝可以按傳統的外用製劑的製備工藝製備。
所述的酊劑的輔料為甘油和月桂氮卓酮，與濾液和丁香油攪拌、混勻，調乙醇濃度至55～65％，靜置12～200小時，濾過，灌裝即得。
本發明的製劑，其中三七、延胡索為方中君藥。三七，主要成分為皂甙、黃酮甙等，如Rb、Rg1等多種單體人參皂甙，具止血作用的三七素及揮髮油，藥理研究表明，三七皂甙活血化瘀的活性成分主要是以Rg1為代表的三醇型皂甙，其作用機理是Rg1可使血小板內CAMP含量增加，減少血栓的生成，三七皂甙還具有抗炎、鎮痛作用。延胡索，別名玄胡索、元胡，主要成分為生物鹼類，主要藥理為對中樞神經系統的鎮痛、鎮靜、麻醉作用，延胡索甲、乙、醜、戊素均具鎮痛作用，其中延胡索乙素鎮痛、鎮靜作用尤為明顯。
急性子、老鸛草、土鱉蟲、細辛、當歸、花椒為臣藥。急性子具有抗風溼、抗菌等藥理作用。老鸛草具有抗菌、抗病毒等藥理作用。土鱉蟲對心腦缺氧、心肌缺血有保護作用。細辛對中樞神經有明顯的抑制作用，具有鎮靜、鎮痛、解熱及抗炎作用，細辛醇提取物和煎劑對蛙坐骨神經、人舌黏膜均有局部麻醉作用。當歸浸出物能顯著提高失血小鼠的血紅蛋白和紅細胞數，並能使體重增加，能增加肌力及耐受力等，活血的主要成分是阿魏酸，能抗血小板聚集、抗血栓形成、調節血流變量、擴張血管、增加組織供血、供氧，改善微循環等。花椒有鎮痛、抗血栓形成及局麻作用。
莪朮、重樓、血竭、乳香、沒藥、骨碎補為佐藥。莪朮有抗腫瘤、抑制血小板聚集等作用。重樓，有廣譜抗菌、鎮痛、鎮靜、抗炎、止血等作用。血竭，能明顯降低血粘度、抑制血小板聚集和血栓形成，並有一定的止血消炎及消瘀的作用。乳香、沒藥具有抗血栓形成、改善血液流變性作用及鎮痛、消炎、抗菌等藥理作用。骨碎補，具有抗炎、抑菌、抗損傷等作用。
烏梢蛇、丁香油、水楊酸甲酯為使藥。烏梢蛇，藥理實驗表明有抗炎、鎮痛等作用。丁香油具有抑菌殺蟲和抗凝、抗血栓形成的作用。水楊酸甲酯，可促進局部血液循環。
本複方製劑中17味原料的主要藥理活性成分為多種甙類、生物鹼、酚類、有機酸和揮髮油等，它們協同作用能降低血液粘度，抑制血小板和血栓形成，改善血流動力學，擴張血管，從而改善微循環，增加組織的供血、供氧，達到活血、消腫、抗炎、鎮痛的目的，並促進損傷組織修復和癒合的作用，並且毒理學研究表明無明顯毒副作用及過敏反應。因此本發明的元七骨痛製劑具有活血化瘀、祛風散寒、通絡止痛的功能，用於治療骨性關節炎(筋脈瘀滯證)腰椎、膝關節等部位疼痛、腫脹、麻木重著，遇寒加重、關節屈伸不利，活動功能障礙等。用有治療效果好，使用方便，無毒副作用的特點。
作為酊劑，塗擦於患處，每次2-5ml，每日三次，重症患者塗藥後揉擦10餘分鐘。其他劑型參照酊劑用量使用。
具體實施例方式
下面結合具體實施例對本發明的三七骨痛製劑作進一步說明。
實施例1具有藥理活性的處方組成為三七25g、延胡索25g、急性子20g、細辛10g、花椒10g、老鸛草15g、當歸15g、土鱉蟲12g、莪朮10g、重樓15g、血竭3g、乳香5g、沒藥5g、骨碎補10g、烏梢蛇10g、丁香油10g、水楊酸甲酯10g。
將上述17味藥按配方稱重，除丁香油、水楊酸甲酯外其餘15味分別粉碎為粗粉；延胡索用三倍量60％乙醇熱回流提出3次，每次2小時，然後提取液回收乙醇、濃縮至相對密度為1.05(溫度20℃)的藥液，備用；土鱉蟲、烏梢蛇用50％乙醇，乳香、沒藥、血竭用95％乙醇按《中國藥典》(2000年版附錄IN)浸漬法浸漬72小時，濾過，收集浸漬液備用；三七、急性子、細辛、花椒、老鸛草、當歸、莪朮、重樓、骨碎補9味粗粉用70％乙醇作溶劑，浸漬72小時，與以上五味浸漬後藥材殘渣混勻，按《中國藥典》(2000年版附錄IN)滲濾法進行滲濾，收集濾液，與前述二種備用液合併，攪勻，靜置，濾過；濾液中加入丁香油、水楊酸甲酯各10g，甘油15g、月桂氮卓酮10g，攪拌、混勻，調乙醇濃度至55-65％，製成1000ml，靜置12～200小時，一般為24小時，濾過，灌裝即得元七骨痛酊劑。
實施例2 軟膏劑具有藥理活性的處方組成為三七25g、延胡索25g、急性子20g、細辛10g、花椒10g、老鸛草15g、當歸15g、土鱉蟲12g、莪朮10g、重樓15g、血竭3g、乳香5g、沒藥5g、骨碎補10g、烏梢蛇10g、丁香油10g、水楊酸甲酯10g。
將上述17味藥按配方稱重，除丁香油、水楊酸甲酯外其餘15味分別粉碎為粗粉；延胡索用3倍量80％乙醇熱回流提出3次，每次2小時，然後提取液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.01～1.4的藥液備用；土鱉蟲、烏梢蛇用50％乙醇，乳香、沒藥、血竭用95％乙醇按《中國藥典》(2005年版附錄IN)浸漬法浸漬72小時，濾過，收集浸漬液備用；三七、急性子、細辛、花椒、老鸛草、當歸、莪朮、重樓、骨碎補9味粗粉用70％乙醇作溶劑，浸漬72小時，與以上五味浸漬後藥材殘渣混勻，用70％乙醇按《中國藥典》(2005年版附錄IN)滲濾法進行滲濾，收集濾液，與前述二種備用液合併，回收乙醇，濃縮至相對密度為1.3～1.35的稠膏，加入處方量丁香油、水楊酸甲酯，羥苯乙酯0.3g、羊毛酯50g與凡士林適量，混勻，製成1000g，灌裝即得元七骨痛軟劑。
實施例3 軟膏劑具有藥理活性的處方組成為三七40g、延胡索16g、急性子34g、細辛5g、花椒19g、老鸛草6g、當歸30g、土鱉蟲5g、莪朮23g、重樓5g、血竭15g、乳香2g、沒藥15g、骨碎補4g、烏梢蛇24g和丁香油6g、水楊酸甲酯24g。
將上述17味藥按配方稱重，除丁香油、水楊酸甲酯外其餘15味分別粉碎為粗粉；延胡索用100倍量60％乙醇熱回流提出13次，每次45小時，然後提取液回收乙醇至相對密度為1.01～1.4的藥液備用；土鱉蟲、烏梢蛇用70％乙醇，乳香、沒藥、血竭用70％乙醇按《中國藥典》(2005年版附錄IN)浸漬法浸漬190小時，濾過，收集浸漬液備用；三七、急性子、細辛、花椒、老鸛草、當歸、莪朮、重樓、骨碎補9味粗粉用40％乙醇作溶劑，浸漬180小時，與以上五味浸漬後藥材殘渣混勻，用70％乙醇按《中國藥典》(2005年版附錄IN)滲濾法進行滲濾，收集濾液，與前述二種備用液合併，回收乙醇，濃縮至相對密度為1.3～1.35的稠膏，加入丁香油、水楊酸甲酯，羥苯乙酯0.3g、羊毛酯50g與凡士林適量，混勻，製成1000g，灌裝即得元七骨痛軟劑。
實施例4 貼膏劑具有藥理活性的處方組成為三七25g、延胡索25g、急性子20g、細辛10g、花椒10g、老鸛草15g、當歸15g、土鱉蟲12g、莪朮10g、重樓15g、血竭3g、乳香5g、沒藥5g、骨碎補10g、烏梢蛇10g、丁香油10g、水楊酸甲酯10g。
將上述17味藥按配方稱重，除丁香油、水楊酸甲酯外其餘15味分別粉碎為粗粉；延胡索用3倍量60％乙醇熱回流提出3次，每次2小時，濾過，收集藥液備用；土鱉蟲、烏梢蛇用50％乙醇，乳香、沒藥、血竭用95％乙醇按《中國藥典》(2005年版附錄IN)浸漬法浸漬72小時，濾過，收集浸漬液備用；三七、急性子、細辛、花椒、老鸛草、當歸、莪朮、重樓、骨碎補9味粗粉用70％乙醇作溶劑，浸漬72小時，與以上五味浸漬後藥材殘渣混勻，用70％乙醇按《中國藥典》(2005年版附錄IN)滲濾法進行滲濾，收集濾液，與前述二種備用液合併，回收乙醇，濃縮至相對密度為1.3～1.35的稠膏，加入處方量丁香油、水楊酸甲酯，再加入由橡膠、松香等組成的基質，或由聚丙烯酸鈉、羥由基纖維素鈉、明膠、甘油和微粉矽膠等組成基質，或由乙烯-醋酸乙烯共聚物、矽橡膠和聚乙二醇等組成的基質製成塗料，進行塗膏、蓋襯、切成小塊即得元七骨痛膏劑。
實施例5 貼膏劑具有藥理活性的處方組成為三七16g、延胡索39g、急性子12g、細辛18g、花椒3g、老鸛草30g、當歸5g、土鱉蟲25g、莪朮6g、重樓29g、血竭2g、乳香15g、沒藥1g、骨碎補24g、烏梢蛇6g和丁香油24g、水楊酸甲酯5g。
將上述17味藥按配方稱重，除丁香油、水楊酸甲酯外其餘15味分別粉碎為粗粉；延胡索用2倍量40％乙醇熱回流提出15次，每次20分鐘，濾過，然後提出液回收乙醇，乾燥成幹浸膏粉；土鱉蟲、烏梢蛇用50％乙醇，乳香、沒藥、血竭用95％乙醇按《中國藥典》(2005年版附錄IN)浸漬法浸漬195小時，濾過，收集浸漬液備用；三七、急性子、細辛、花椒、老鸛草、當歸、莪朮、重樓、骨碎補9味粗粉用90％乙醇浸漬時間為72小時後與在上所述的步驟中浸漬後的土鱉蟲、烏梢蛇、乳香、沒藥、血竭五味藥材殘渣合併用70％的乙醇滲漉，收集濾液，與前述幹浸膏粉和備用液合併，回收乙醇，濃縮至相對密度為1.3～1.35的稠膏，加入丁香油、水楊酸甲酯，再加入由橡膠、松香等組成的基質，或由聚丙烯酸鈉、羥由基纖維素鈉、明膠、甘油和微粉矽膠等組成基質，或由乙烯-醋酸乙烯共聚物、矽橡膠和聚乙二醇等組成的基質製成塗料，進行塗膏、蓋襯、切成小塊即得元七骨痛膏劑。
一、藥效學試驗研究在下面的藥效學試驗中，試驗結果中的「大劑量組」、「中劑量組」、「小劑量組」是指元七骨痛酊劑的大劑量組、中劑量組及小劑量組。
(一)試驗藥物元七骨痛酊劑，按實施例1中的處方製備，分為高、中、低濃度三種，含生藥量分別為40％、20％和10％。
賦形劑為乙醇，含醇量58％。
陰性對照組為生理鹽水。
陽性對照藥為骨友靈擦劑(部標收載品、遼衛藥準字(1996)第0065號)，為外用擦劑，有活血化瘀、消腫止痛，用於骨質增生引起的功能性障礙、軟組織損傷等所致腫脹、疼痛。
(二)試驗項目及研究結果1、鎮痛試驗健康合格一級昆明種小鼠，體重18～22g，雌雄各半。
1.1 對小鼠電刺激的鎮痛作用用乙醇脫去小鼠尾上皮脂，然後塗導電膠，用YSD-4型藥理生理多用儀方波脈衝電刺激鼠尾，刺激參數為電壓10～70Hz，每次刺激時間40毫秒。給藥前先測定每隻動物的痛閾，連續刺激三次(每次間隔10分鐘)，若其中二次刺激引起嘶叫者，可選作實驗用。試驗前24小時選取小鼠60隻，隨機分為本發明藥物大、中、小劑量組與骨友靈擦劑、賦形劑和陰性對照組，每組10隻共6組。給藥前先分別測試各鼠痛閾，然後分組給相應藥物，塗於尾部，每次0.5ml/只，連續給藥2次，間隔1小時，於末次給藥後0.5、1、2、4小時分別用各鼠給藥前痛閾刺激，連續刺激2次無嘶叫反應者為有鎮痛作用。分組統計各組疼痛陽性或陰性反應動物，經卡方分析比較。結果見表1表1 對小鼠電刺激反應的影響
注與陰性對照組比較 ※P＜0.05；※※P＜0.01與賦形劑組比較△P＜0.05；△△P＜0.01結論元七骨痛酊劑大、中劑量對電刺激小鼠有顯著鎮痛作用。
1.2 對小鼠尾尖壓痛的鎮痛作用用血壓計制小鼠尾尖壓痛裝置，以小鼠尾根節2.5cm處為測痛點，以小鼠尖叫為疼痛指標，記錄壓迫力量大小(kPa)。60隻小鼠隨機分為元七骨痛酊劑大、中、小劑量組與陽性和陰性藥物以及賦形劑對照組，共6組，每組10隻。各試驗組動物於試驗前裝於固定筒內測試各組動物用藥前疼痛壓力(kPa)，然後將相應的藥物塗於尾部皮膚，每次0.5ml/只，間隔1小時，連續給藥2次，於末次給藥後30分鐘、1小時、2小時、4小時，用尾尖壓痛法測試疼痛反應，直至小鼠尖叫為疼痛指標，觀察血壓計上水銀柱壓力(kPa)。分組統計各試驗組壓痛力(kPa)。結果見表2表2 對小鼠尾尖壓鎮的影響(kPa，x±s)
注與陰性對照組比較 ※P＜0.05；※※P＜0.01與賦形劑組比較△P＜0.05；△△P＜0.01結論元七骨痛酊劑對小鼠尾尖壓痛有明顯鎮痛作用。
2、抗炎試驗2.1 對二甲苯所致炎症的抗炎作用將70隻小鼠隨機分為元七骨痛酊劑大、中、小劑量組與氫化可的松、陽性和陰性藥物對照組以及賦形劑組，共7組，每組10隻。各試驗組動物試驗前1小時於右耳廓塗二甲苯藥，0.5ml/只，左耳作對照。各試驗組動物右耳廓塗相應藥物2次，塗藥間隔1小時，於末次給藥後1小時斷頭處死動物，用直徑為0.6釐米打孔器切下雙耳同等部位耳片稱重，以左右耳片重量之差(mg)為腫脹度，計算出腫脹抑制率(％)。試驗結果如表3所示。
表3 對二甲苯誘發小鼠耳部炎症水腫的影響(mg，x±s)
注與陰性對照組比較 ※P＜0.05；※※P＜0.01與賦形劑組比較△P＜0.05；△△P＜0.01元七骨痛酊劑可明顯減輕二甲苯所致急性炎症。
2.2 對小鼠瓊脂肉芽腫的抗炎作用選取小鼠60隻，隨機分為元七骨痛酊劑大、中、小劑量組與陽性和陰性藥物對照組以及賦形劑組，每組10隻，各試驗組動物於試驗前24小時用6％硫化鈉溶液對背部脊柱兩側皮膚脫毛。試驗時，於小鼠背部脊柱兩側皮下各注入2％滅菌瓊脂溶液0.2ml，形成瓊脂性肉芽腫。自注入瓊脂後第二天起，各試驗組連續15天經皮膚塗相應藥物0.5ml/只，每天兩次。塗於背部皮膚脫毛處，於末次給藥後24小時將動物脫臼處死，剝離瓊脂塊和肉芽腫部分，稱重。分組統計各組肉芽腫重量。結果見表4表4 對小鼠瓊脂性肉芽腫重量的作用(mg，x±s，n＝10)
注與陰性對照組比較 ※P＜0.05；※※P＜0.01與賦形劑組比較△P＜0.05；△△P＜0.01結論元七骨痛酊劑對瓊脂性肉芽腫有顯著抑制作用。
3、消腫試驗對小鼠瓊脂足蹠腫脹的作用60隻小鼠，雌雄各半，隨機分為6組，每組10隻。各試驗組動物於給藥前用千分尺測量左右足蹠厚度，然後各組動物分別塗相應的藥物於後足皮膚二次，每次0.5ml/只，間隔30分鐘。於第二次塗藥後10分鐘將1％瓊脂溶液注射至左右足蹠下，0.5ml/只，再塗相應藥物2次。給藥量和間隙時間同前。致炎後1、2、4小時用千分尺分別測量左右後足蹠厚度，左右後足蹠之差為左右足蹠腫脹度，結果如表5。4小時末處死動物，於左右後肢長毛和絨毛交界處剪下左右足爪分別稱重，結果見表6。
表5 對小鼠瓊脂性足蹠腫脹的影響(X±S)
注與陰性對照組比較 ※P＜0.05；※※P＜0.01與賦形劑組比較△P＜0.05；△△P＜0.01表6 對小鼠致炎後4小時足蹠腫脹程度的影響(X±S，n＝10)
注與陰性對照組比較 ※P＜0.05；※※P＜0.01與賦形劑組比較△P＜0.05；△△P＜0.01
結論元七骨痛酊劑對小鼠瓊脂性足蹠腫脹有顯著抗炎消腫作用。
另外，大鼠蛋清所致足蹠腫脹試驗結果表明，本發明的元七骨痛酊劑大、中、小劑量給藥後2小時足蹠腫脹度分別與陰性對照組相比較均有顯著差異，表明本製劑對蛋清所引起的足蹠腫脹有明顯的抑制作用。
4、降低毛細血管通透性試驗70隻小鼠隨機分為元七骨痛酊劑大、中、小劑量和氫化可的松、賦形劑、陽性和陰性藥物組，共7組，每組10隻，所給藥物容量1.0ml/只塗於腹部皮膚，給藥間隔為1小時，共給藥3次。氫化可的松肌肉注射0.025g/kg。於末次給藥15分鐘後，經尾靜脈注射1％Evans藍生理鹽水0.10ml/10g體重，並同時腹腔注射0.5％醋酸生理鹽水溶液0.2ml/10g體重。30分種後處死動物，以生理鹽水反覆衝洗腹腔內Evans藍溶液總體積為6ml，加0.1mol/L NaOH 0.2ml，混勻後行3000轉/分鐘離心，取上清液用分光光度法在波長590nm處測定染料吸收度A值，觀察對毛細血管通透性的影響，分組統計，組間行t檢驗，結果見表7。
表7 對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響(X±S)
注與陰性對照組比較 ※P＜0.05；※※P＜0.01與賦形劑組比較△P＜0.05；△△P＜0.01結論元七骨痛酊劑對醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性增加有明顯抑制作用。
5、體外透皮試驗將20g左右的21隻小鼠用脫毛劑脫去腹部的毛，用水洗淨，24小時後處死小鼠，取下脫毛皮膚，除盡脂肪和肌肉，用生理鹽水反覆洗淨，再用50％乙醇洗滌，並浸泡，取出用濾紙吸乾，備用。
將鼠皮蒙於改進Franz擴散池口，池口面積4.34cm2。取元七骨痛酊劑0.5ml置於鼠皮上，池內充滿接受液(水-乙醇＝1∶1)，用37℃恆溫水流，並用磁力連續攪拌，定時取接受液20μl進行HPLC測定，再補入同體積的接受液。
接受液的HPLC測定法，色譜條件為ODS C18反相柱，流動相為甲醇∶水∶冰醋酸∶二乙醯胺(500∶40∶2.5∶1.25)，流速1.2ml/min，柱溫25℃，檢測波長254nm，紙速0.2cm/min，20μl固定進樣環。將元七骨痛酊劑用50％乙醇按1∶100稀釋後直接進樣作為參考標準HPLC圖譜，接受液按0、0.5、1、2、4、6、8小時定時取樣進行分析；按每次進樣後所計算出的總峰高作為透皮相對量，透皮相對量見表8。
表8 透皮試驗結果(峰高×10-5mv)
結論結果表明本發明的製劑中的一些成份可透過鼠皮進入接受液；其相對透過量隨時間延長而增加；透入過程前2小時較快，其後逐漸變緩。
6、降低血液流變學試驗健康合格一級Wistar大鼠，體重200～220g，雌雄各半。
用打擊器造成臀部軟組織損傷，並隨機分為元七骨痛酊劑大、中、小劑量和骨友靈擦劑與賦形劑乙醇以及陰性組生理鹽水6組，每組10隻。試驗時，各組動物塗相應藥液於背部脫毛皮膚，2ml/只，給藥間隔為1小時，共給藥3次，於末次給藥後30分鐘將各組動物斷頭取血作血液流變速測定，測定使用重慶大學生產的FASCo-94全自動連續切變率血液粘度快測儀。
檢測指標包括全血粘度(高切、中切、低切)；血漿粘度；紅細胞壓積；紅細胞聚集指數；紅細胞變形指數；纖維蛋白原。
試驗結果表明本發明的製劑大、中、小劑量能明顯降低大鼠血液流變學的全血粘度，高切、中切和低切以及紅細胞聚集指數與紅細胞變形指數，與陰性對照組間均有顯著差異。提示本製劑祛瘀活血與降低血液流變速有密切關係，有明顯降低大鼠血液流變速的作用。
7、軟組織損傷試驗試驗前24小時，將60隻小鼠用6％硫化鈉將臀部皮膚脫毛。試驗時，小鼠側臥固定於軟組織打擊器上，用50g打擊錘對準臀部軟組織打擊，打擊時，打擊錘拉至5cm高，鬆開打擊錘讓其自由落下，連續打擊5次，每隻動物僅打擊一支腿。打擊後肉眼可見被打擊部位皮下血。60分鐘後手摸被打擊處有明顯腫脹感。然後將軟組織損傷的60隻小鼠隨機分為元七骨痛酊劑大、中、小劑量組和陰性藥物和陽性藥物以及賦形劑對照組，每組10隻。各組動物軟組織損傷處塗相應藥物，0.5ml/只，每天2次，連續4天。塗藥期間觀察各組動物軟組織損傷的外觀變化，並做記錄。第5天將所有試驗動物處死，切開打擊部位，按外表觀察4組評價，並取標本用10％福馬林固定，行組織切片顯微鏡下觀察，作四級評分，按組織學損害分組統計處理。
軟組織損傷觀察評分標準0分完全恢復，同正常軟組織。
1分表面無出血或瘀血灶，無水腫。
2分表面0.5～1cm2出血或瘀血灶，水腫面積小於1cm2。
3分表面見大於1cm2的出血、瘀血、水腫。
組織學觀察評分標準0分完全恢復，同正常軟組織。
1分肌纖維腫脹，肌組織內瘀血、水腫、出血灶明顯減輕或大部分消失，血管增生，膠原纖維增生，與正常軟組織比較已基本恢復正常。
2分肌纖維腫脹，肌纖維間出血、水腫，出血灶稍有減輕或部分消失，纖維間炎症細胞明顯，與對照組相比較略有減輕。
3分肌纖維腫脹，肌纖維間出血伴有嚴重瘀血，大量炎症細胞存在，肌纖維變性等。
觀察結果見表9表9 對小鼠軟組織損傷治療效果(n＝10)
注與陰性對照組比較 ※P＜0.05；※※P＜0.01與賦形劑組比較△P＜0.05；△△P＜0.01試驗結果表明，元七骨痛酊劑對軟組織損傷有明顯的治療作用。
8、血腫消散試驗將60隻健康合格一級Wistar大鼠，禁食12小時，實驗時用3％戊巴比妥鈉溶液進行腹腔麻醉(30mg/kg)，用千分尺測量每隻大鼠的左足蹠中部厚度值(mm)，然後用6號針頭自心內抽取血液0.10ml，立即從左足蹠底後部進針向前推進至蹠底部中間凹陷部皮下快速注射，造成一側足蹠底部血腫。將60隻足蹠底部血腫大鼠隨機分為6組，每組10隻，分籠餵養。於造血腫模型後15分鐘開始給藥，將相應藥物塗於形成血腫的足蹠部，1.0ml/只/次，反覆搓揉，並間隔2小時給相應藥物一次。0.5、1、2、4、8小時分別測定每隻大鼠左足蹠中部厚度值(mm)，結果如表10所示。造血腫模型後，足蹠中部厚度值與造血模型前厚度值之差則為血腫腫脹值。並每隔12小時觀察各組大鼠左足底部血腫瘀斑消散時間(小時)，對大鼠足蹠瘀斑消散的影響見表11。
表10 對大鼠足蹠部血腫的影響(mm，X±SD)
注與陰性對照組比較 ※P＜0.05；※※P＜0.01與賦形劑組比較△P＜0.05；△△P＜0.01表11 對大鼠足蹠瘀斑消散的影響(h，X±SD)
注與陰性對照組比較 ※P＜0.05；※※P＜0.01與賦形劑組比較△P＜0.05；△△P＜0.01血腫消散試驗表明，本製劑大、中、小劑量均有明顯消散血腫、瘀斑作用，與陰性對照組和賦形劑組間均有顯著作用。
二、毒性試驗研究a)急毒試驗家兔皮膚給藥急毒試驗結果表明，本發明的製劑對皮膚完整動物無明顯刺激作用，但大劑量對皮膚損傷動物用藥有輕度刺激，但對皮膚完整或損傷動物均無明顯吸收毒性反應發生，如中樞神經系統、四肢活動、體重、食慾、眼及黏膜等未見明顯異常，也無動物死亡現象發生。
b)長期毒性試驗用家兔36隻，分本發吸的製劑大、小劑量組和陰性對照組3組，每組12隻，其中6隻為皮膚完整動物，6隻為皮膚損傷動物。1次人體用量的60倍和20倍，連續給藥6周，觀察動物一般情況、體重、飲食、肝功、腎功、血象和血液生化指標以及皮膚等重要器官病理檢查與臟器係數，停藥後又繼續觀察一周，結果均無異常變化，表明本製劑無明顯毒性反應發生。
c)皮膚刺激試驗分別用高、低濃度(含生藥量分別為80％和20％)兩種本發明製劑對豚鼠完整和破損皮膚進行刺激試驗，連續給藥7天，停藥後觀察7天。結果表明本製劑對完整皮膚動物無明顯局部刺激反應，對破損皮膚動物有輕度刺激作用，但無病理性損害發生。
d)皮膚過敏性試驗豚鼠皮膚過敏試驗結果表明，本品無皮膚過敏反應。
權利要求
1.一種元七骨痛製劑，其特徵在於為由下述重量份數的組分作為藥用原料製成的外用製劑三七15～40份、延胡索15～40份、急性子10～35份、細辛3～20份、花椒3～20份、老鸛草5～30份、當歸5～30份、土鱉蟲5～25份、莪朮5～25份、重樓5～30份、血竭1～15份、乳香1～15份、沒藥1～15份、骨碎補5～25份、烏梢蛇5～25份、丁香油5～25份和水楊酸甲酯5～25份。
2.如權利要求1所述的元七骨痛製劑，其特徵在於是由下述重量份數的組分作為藥用原料製成的外用製劑三七25份、延胡索25份、急性子20份、細辛10份、花椒10份、老鸛草15份、當歸15份、土鱉蟲12份、莪朮10份、重樓15份、血竭3份、乳香5份、沒藥5份、骨碎補10份、烏梢蛇10份、丁香油10份和水楊酸甲酯10份。
3.如權利要求1或2所述的元七骨痛製劑，其特徵在於其劑型為貼膏劑、氣霧劑、噴霧劑、酊劑、搽劑、洗劑、塗膜劑、軟膏劑、凝膠劑、流浸膏劑、浸膏劑。
4.一種權利要求1至3中之一所述的元七骨痛製劑的製備方法，按下述步驟生產(1)將上述17味藥按配方稱重，除丁香油、水楊酸甲酯外其餘15味分別粉碎為粗粉；(2)延胡索用1～100倍量40％～80％的乙醇熱回流提出1～20次，每次10分鐘至50小時，然後提取液回收乙醇、濃縮至相對密度為1.01～1.4的藥液，或乾燥成幹浸膏粉，備用；(3)土鱉蟲、烏梢蛇用40％～70％乙醇浸漬1～200小時，乳香、沒藥、血竭用70％～95％乙醇浸漬1～200小時，濾過，收集浸漬液備用；(4)三七、急性子、細辛、花椒、老鸛草、當歸、莪朮、重樓、骨碎補9味粗粉用40％～90％的乙醇作溶劑，浸漬1～200小時，與以上五味浸漬後藥材殘渣混勻，滲濾法進行滲濾，收集濾液，與(3)中二種備用液合併，攪勻，靜置，濾過；(5)濾液中加入丁香油、水楊酸甲酯和可用的輔料，製成外用製劑。
5.如權利要求4所述的元七骨痛製劑的製備方法，其特徵在於所述的輔料為甘油和月桂氮卓酮，與濾液和丁香油攪拌、混勻，調乙醇濃度至55～65％，靜置12～200小時，濾過，灌裝即得酊劑。
6.如權利要求4所述的元七骨痛製劑的製備方法，其特徵在於所述的步驟(2)中，延胡索用三倍量60％乙醇熱回流提出3次，每次2小時。
7.如權利要求4所述的元七骨痛製劑的製備方法，其特徵在於所述的步驟(3)中，土鱉蟲、烏梢蛇用50％乙醇浸漬的時間為72小時。
8.如權利要求4所述的元七骨痛製劑的製備方法，其特徵在於在所述的步驟(3)中，乳香、沒藥、血竭用95％的乙醇浸漬的時間為72小時。
9.如權利要求4所述的元七骨痛製劑的製備方法，其特徵在於所述的步驟(4)中，9味粗粉用70％乙醇浸漬時間為72小時。
10.如權利要求9所述的元七骨痛製劑的製備方法，其特徵在於所述的步驟(4)中，9味粗粉用70％乙醇浸漬時間為72小時後與在上所述的步驟(3)中浸漬後的五味藥材殘渣合併用70％的乙醇滲漉。
全文摘要
本發明公開了一種元七骨痛製劑，為由下述組分作為藥用原料製成的外用製劑三七、延胡索、急性子、細辛、花椒、老鸛草、當歸、土鱉蟲、莪朮、重樓、血竭、乳香、沒藥、骨碎補、烏梢蛇、丁香油和水楊酸甲酯。這種元七骨痛製劑治療效果好使用方便。
文檔編號A61P29/00GK1895637SQ20061008656
公開日2007年1月17日 申請日期2006年6月22日 優先權日2006年6月22日
發明者張慶華 申請人:張慶華