蟲草多糖在製備抗皮膚光老化的藥物中的應用的製作方法
2023-11-30 13:48:06 2
專利名稱：蟲草多糖在製備抗皮膚光老化的藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及蟲草多糖新的醫藥用途。
背景技術：
蟲草多糖(CP)具有抗肝纖維化、化學和免疫性的肝損傷的治療、抗腫 瘤、免疫調節、降血糖、抗衰老等藥理作用。近年對於蟲草多糖的應用也主 要是集中在這些方面
冬蟲夏草多糖能提高機體的免疫功能。它對機體網狀內皮系統及腹腔巨 噬細胞的吞噬功能具有明顯的激活作用，能促進淋巴細胞的轉化，可促進特 異性抗體的產生，增強機體體液免疫能力。
蟲草多糖對於化學性和免疫性的肝損傷均具有保護作用。應用序貫注射 卡介苗和脂多糖誘導小鼠免疫性肝損傷模型，蟲草多糖有抗肝臟脂質過氧化 作用，使肝勻漿丙二醛含量下降，超氧化物歧化酶活力升高。具有較好的抗 小鼠免疫性肝損傷作用。CPL能顯著降低D—半乳糖所致肝損傷的小鼠血清中 谷丙和穀草轉氨酶活性，對小鼠肝損傷有保護作用。蟲草多糖還通過抑制肝
星狀細胞的活化和TGFP的表達，明顯減少肝臟的膠原沉積，並能抑制I、 II 型原膠原基因的表達，起到良好的抗肝纖維化的作用；蟲草多糖還可以增強 患者細胞免疫功能，改善肝功能。
蟲草多糖對正常小鼠與四氧嘧啶糖尿病和鏈尿佐菌素糖尿病的模型小鼠 均有顯著的降血糖作用，且有一定量效關係。
蟲草多糖可以治療家犬夾閉腎動脈引起的急性腎衰具有治療作用，對於 腺嘌呤引發的大鼠慢性腎衰也具有治療作用。
另外蟲草多糖抗腫瘤、抗輻射、誘生幹擾素等作用也有報導。關於抗衰老方面有人採用從蟲草深層發酵產物中提取的多糖進行果蠅抗衰老試驗，結 果表明，不同來源的蟲草多糖對果蠅壽命均有不同程度的延長作用，從而證
明蟲草多糖有延緩衰老的作用；並且延壽的效果隨純度的增大而提高。 文獻中尚未見蟲草多糖抗皮膚光老化及作用機理的報導。 皮膚老化包括兩個過程，內在老化和光老化。前者主要受遺傳和代謝等 因素的影響，可通過改善全身營養代謝平衡等措施加以防護；後者則主要由 長期紫外線照射所致，只能通過避免陽光照射和使用防曬藥物來預防，而在 實際生活中後者是很難避免的。皮膚老化是機體衰老的重要組成部分，與許 多皮膚病如基底細胞癌、鱗狀細胞癌等的發生也有著病因學的關係，而且有 損於美容。同時伴隨著物質生活的日益提高，人們對延緩皮膚衰老、保持青 春亮麗的容顏的要求越來越高，中醫是中國文化的瑰寶，中草藥是天然藥物， 副作用少，容易被人們接受，將傳統的中醫與現代生命科學的理論與技術相 結合，是開發中草藥的一條有效途徑。
發明內容
本發明所要解決的技術問題在於開發蟲草多糖的新用途，提供蟲草多糖 在製備抗皮膚光老化的藥物中的應用。
本發明中的蟲草多糖(CP)是天然藥物冬蟲夏草的主要活性成分之一， 也是最高的藥理活性成分，是一類高分子複合物。
本發明中的蟲草多糖亦可通過人工合成，如中國專利CN1560085A於2005 年Ol月05日公開了一種利用蟲草人工培養中產生的培養基下腳料提取蟲草 多糖的工藝；中國專利CN1560085A於2005年01月05日公開了一種用大米 生產蟲草多糖方法。
本發明在製備小鼠光老化模型過程中，通過皮膚表面預先塗抹蟲草多糖 溶液，通過肉眼觀察，並對皮膚組織做切片，HE染色光鏡觀察和醋酸鈾和擰 檬酸鉛雙重電子染色透射電鏡觀察發現，用蟲草多糖保護的小鼠皮膚較為保護的小鼠皮膚有明顯改善，實驗結果說明，蟲草多糖對皮膚的光老化過程具 有保護作用。
用蟲草多糖溶液來保護皮膚光老化，直接用外部皮膚塗抹，簡便快捷。 本發明提出的蟲草多糖新的醫藥用途，有進一步在人體皮膚使用的可能， 具有開發潛能，可用於大規模生產，可通過添加到日常護膚品中使用。
圖1是HE染色光鏡觀察結果圖(正常對照組，放大100倍)。 圖2是HE染色光鏡觀察結果圖(光老化組，放大100倍)。 圖3是HE染色光鏡觀察結果圖(低濃度蟲草多糖保護組5mg/ml，放大 100倍)。
圖4是HE染色光鏡觀察結果圖(中濃度蟲草多糖保護組10mg/ml，放大 100倍)。
圖5是HE染色光鏡觀察結果圖(高濃度蟲草多糖保護組20mg/ml，放大 100倍)。
圖6是透射電鏡觀察結果圖(正常對照組，放大6000倍)。 圖7是透射電鏡觀察結果圖(光老化組，放大6000倍)。 圖8是透射電鏡觀察結果圖(低濃度蟲草多糖保護組5mg/ml，放大6000倍)。
圖9是透射電鏡觀察結果圖(中濃度蟲草多糖保護組10mg/ml，放大6000倍)。
圖10是透射電鏡觀察結果圖(高濃度蟲草多糖保護組20mg/ml，放大6000倍)。
具體實施例方式
有關本發明前述及其它技術內容、特點與功效，在以下較佳實施例的詳 細說明中，將可清楚的呈現。一、小鼠光老化模型的建立和實驗方法。
1、 實驗動物
昆明種小白鼠，雌鼠，體重20—25 g， 7 — 8周齡，由上海中醫藥大學實 驗動物中心提供。小鼠清潔級常規飼養。
2、 小鼠光老化模型的建立
用電動理髮器將小鼠背部皮膚剃淨，約2cn^2cm，裸露皮膚，隨機分5組 第一組為正常對照組，皮膚每天塗抹一次雙蒸水，其他無任何處理； 第二組為光老化模型組，皮膚每天塗抹1% 8-M0P (8甲氧補骨脂素)1 次，1. 5_2小時後，給予190 u w的UVA照射，累積照射138小時(累積強度 95J/cm2)，照射結束後24小時內取皮膚；
第三、四、五組為蟲草多糖保護組，皮膚每天分別塗抹低、中、高濃度 的蟲草多糖溶液，濃度分別為5mg/ml、 10mg/ml、 20mg/ml，塗抹至所暴露皮 膚溼潤，稍幹後再塗抹1%8—M0P， 1.5 — 2小時後，給予190uw的UVA照射， 累積照射138小時(累積強度95J/cm2)，照射結束後24小時內取皮膚。
進行HE染色光鏡觀察和醋酸鈾和透射電鏡觀察實驗時，正常對照組、光
老化模型組和蟲草多糖保護組五組同時取皮膚。
3、 HE染色光鏡觀察
將取下的皮膚塊浸人10%甲醛固定。12h後，取出固定好的皮膚塊進行 蠟塊包埋。蠟塊切片後，將切片分別HE常規染色，光鏡觀察。
4、 透射電鏡觀察
頸椎脫臼法處死小鼠，迅速取皮膚，約3 mmX3 mm，固定於4%戊二醛
磷酸緩衝溶液中，4°C ，保存l h; PBS衝洗；1%鋨酸，4°C，後固定l h;
PBS衝洗；50% ， 70% ， 80% ， 90% ， 100%乙醇梯度脫水；100%丙酮 浸透15—30 min;包埋劑包埋；分別在37。C， 45°C， 60°C ，各24 h聚合； 用超薄切片機切成50 nm的超薄切片；經醋酸鈾和檸檬酸鉛雙重電子染色；透射電鏡觀察照相。 二、實驗結果。
1、 肉眼觀察。
正常對照組皮膚色澤紅潤有彈性。
光老化組皮膚顏色灰暗，彈性差，局部變硬，毛髮脫落。 蟲草多糖保護組隨濃度增加，皮膚逐漸改善，高濃度組肉眼看與正常 對照無差異。
2、 HE染色光鏡觀察結果。
如圖1和2所示，光老化組較正常對照組相比，出現典型的光老化病理 變化表皮厚度不均一，常有脫落，真皮層變厚明顯，炎性細胞浸潤多見， 微血管擴展，毛囊減少，皮脂腺不規則增生。
如圖3、 4、 5所示，蟲草多糖保護組較光老化組，病理變化有明顯改善， 真皮層較光老化組薄，炎性細胞浸潤較少。並且隨濃度的增加，改善效果逐 漸明顯。
3、 透射電鏡觀察結果。
在透射電鏡下觀察真皮層的纖維分布和成纖維細胞的形態。
如圖5所示，正常對照組纖維分布整齊，規則、緊密，無斷裂現象， 成纖維細胞外形清晰，內質網擴展明顯，說明成纖維細胞的蛋白質合成功能 旺盛。
如圖6所示，光老化組纖維分布疏鬆，局部出現不規則分布，有斷裂 現象，成纖維細胞形態變形，外形不規則，細胞質較少，內質網較少，並且 有變異的細胞器，說明細胞的蛋白質合成不活躍。
如圖7、 8、 9所示，蟲草多糖保護組明顯改善，纖維排列和成纖維細 胞形態及細胞器更接近於對照組，並且隨濃度的增加，效果逐漸明顯，低濃 度時還可見炎細胞，中濃度時也觀察到變異細胞器，高濃度組未見到。
權利要求
1、蟲草多糖在製備抗皮膚光老化的藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了蟲草多糖在製備抗皮膚光老化的藥物中的應用。用蟲草多糖溶液來保護皮膚光老化，直接用外部皮膚塗抹，簡便快捷。本發明提出的蟲草多糖新的醫藥用途，具有開發潛能，可用於大規模生產，可通過添加到日常護膚品中使用。
文檔編號A61P17/00GK101564404SQ200810043308
公開日2009年10月28日 申請日期2008年4月25日 優先權日2008年4月25日
發明者雯 劉, 華 李 申請人:上海中醫藥大學