用於化妝品的帶電荷柔性納米脂質體及其製備方法

2023-11-10 05:36:47

專利名稱：用於化妝品的帶電荷柔性納米脂質體及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種帶電荷柔性納米脂質體，更具體地，本發明涉及一種用於化妝品的帶電荷柔性納米脂質體及其製備方法。
背景技術：
隨著技術、儀器和方法學的發展，人們對於人體自身的認識越來越深刻，對於皮膚生理病理的認識已經深入到基因和分子生物學水平，對於相關的生物醫藥及化妝品產業的發展產生了巨大的推動作用，越來越多的具有生物活性的動植物成分和/或生物高分子成分應用到化妝品行業，取得了巨大的社會和經濟效益。但是，將這些具有生物活性的物質應用到化妝品中，面臨著諸多難題，主要表現在以下二個方面1、這些生物活性物質的穩定性如何解決，這類物質的穩定性除了由其自身的結構和空間構象決定外，外界環境因素的影響也不容小視，例如表皮活性因子溶液，在外界環境中的活性持續時間僅有短短的數小時，在其被皮膚吸收發揮作用之前就基本失活了，根本不能發揮其應有的作用和效果；2、如何使這些高分子成分能夠被人體皮膚吸收，通常來說，活性物分子量越小，越容易透過皮膚，一旦分子量大於600，活性物就很難被皮膚吸收了，而近年來應用的具有特定皮膚活性功能的物質大多數是肽類等高分子物質，其分子量少則數千，多則數十萬，這就決定了它們很難透過皮膚從而被有效吸收。通常化妝品中活性成分的種類少則十餘種，多則達到數十種，活性成分之間的理化反應限制了化妝品處方篩選的範圍。為了解決這些問題，目前也採用了很多解決方法比如新的藥物製劑技術越來越多地被應用到化妝品行業，目前，解決活性物穩定性和相容性主要採取加入穩定劑、冷凍乾燥、製備成乳劑、用環糊精、微囊(球)、脂質體進行包裹等方法；而促進皮膚吸收則採用了以下一些方法將藥物本身的顆粒製備成納米級、加入Azone 等透皮促進劑、採用離子導入或電致孔、製備成具有促透性能的納米級包裹體等。另外將脂質體製備工藝應用到化妝品中，大量的研究事實證明，將化妝品活性成分包裹到脂質體中，可以極大提高這些活性成分的穩定性，這些活性成分從脂質體中釋放具有緩釋性能，同時，由於脂質體膜成分與人體細胞生物膜的成分極其接近，因此這類製劑生物相容性好，安全性高。特別是二十世紀六十年代出現的柔性納米脂質體，可以通過其自身的柔性和變形性，高效地穿透比自身直徑小數倍的皮膚孔道從而達到良好的透皮吸收效果，柔性納米脂質體不僅可以包裹小分子活性物，對於分子量高達IO6的生物大分子活性物質亦具有比較優良的皮膚透過性能，是化妝品製備中極具潛力的製備方法。另外，化妝品活性成分分別用脂質體包裹，可以有效避免這些成分可能存在的相互作用和理化反應。雖然普通脂質體能提高穩定性和使用的安全性，但其自身穩定性還是相對不高；而且不容易促進透皮吸收。所以市場上迫切需要一種應用在化妝品中的製劑，其不僅能提高化妝品的生物活性物質的穩定性，而且能促進透皮吸收，達到最佳的護膚養膚效果。

發明內容
本發明為了解決上述問題，提供一種透皮能力強且與皮膚結合更緊密的帶電荷柔性納米脂質體製劑。本發明的另一目的在於提供了一種用於化妝品的帶電荷柔性納米脂質體及其製備方法。本發明創新性地將帶電荷的脂質成分嵌合到柔性納米脂質體膜中，利用皮膚表面酸鹼特性，使帶電荷脂質體通過靜電吸引與局部皮膚結合更加緊密，以利於活性成分更有效地延長在皮膚的作用時間，以利於充分發揮這些活性成分護膚養膚的作用效果。本發明的技術方案如下所述的帶電荷柔性納米脂質體包括下列重量份的組分 1-1000份中性磷脂、0. 5-500份帶電荷磷脂、1-1000份膽固醇、0. 5-500份表面活性劑、
0.1-20份透明質酸、0. 5-250份化妝品活性成分、100-8000份的冷凍乾燥保護劑。在本發明一較佳實施例中，本發明所述的帶電荷柔性納米脂質體包括下列重量份的組分100-120份中性磷脂、0. 5-100份帶電荷磷脂、15-100份膽固醇、10-100份表面活性劑、0. 1-2份透明質酸、0. 5-250份化妝品活性成分、400-800份的冷凍乾燥保護劑。在本發明一更佳實施例中，本發明所述的帶電荷柔性納米脂質體包括下列重量份的組分100-120份中性磷脂、0. 5-20份帶電荷磷脂、15-20份膽固醇、10-20份表面活性劑、
1.5份透明質酸、20份化妝品活性成分、400-600份的冷凍乾燥保護劑。其中，所述的中性磷脂選自大豆卵磷脂、氫化大豆磷脂、蛋黃卵磷脂、腦磷脂，以及二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、二硬脂醯磷脂醯膽鹼、二肉豆蔻磷脂醯膽鹼、二月桂醯磷脂醯膽鹼、 二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺等天然或合成磷脂中的一種或幾種；所述的帶電荷磷脂選自磷脂酸、磷脂醯甘油、磷脂醯肌醇、磷脂醯絲氨酸、雙鯨蠟磷脂酸肌醇等負電荷磷脂中的一種或幾種，或者是選自硬脂醯胺、3β-[Ν-(Ν，，Ν，_ 二甲基乙胺)胺基甲醯基]膽固醇、N-[l-(2， 3-二油醯基)丙基]-N，N，N-三乙胺氯、2，3_ 二油醯氧-N-[2-(精氨酸基醯胺)乙基]-N， N- 二甲基-1-丙基-三氟乙酸胺、1，2- 二油醯氧丙基-N，N, N-三甲基溴化銨等合成正電荷脂質中的一種或幾種；所述的表面活性劑是膽酸鈉或去氧膽酸鈉。本發明優選大豆卵磷脂、氫化大豆磷脂、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、磷脂酸、磷脂醯甘油、硬脂醯胺、3β-[Ν-(Ν』，N』 - 二甲基乙胺)胺基甲醯基]膽固醇中的一種或幾種。其中的磷脂酸、磷脂醯甘油屬於負電荷脂質成分，賦予柔性納米脂質體膜帶負電荷，以利於脂質體與鹼性呈正電性的局部皮膚的結合與吸收；硬脂醯胺、3 β-[N-(N』，N』 - 二甲基乙胺)胺基甲醯基]膽固醇屬於正電荷脂質成分，賦予柔性納米脂質體膜帶正電荷，以利於脂質體與酸性呈負電性的局部皮膚的結合與吸收。本發明膽固醇的使用，是為了調節脂質體膜的流動性和通透性，進而調整脂質體膜的穩定性。本發明使用的表面活性劑，可以使脂質體膜具有更大的彈性與變形性，從而促進脂質體的透皮吸收性能。優選膽酸鈉或去氧膽酸鈉。本發明的帶電荷柔性納米脂質體開可以包括常規用量的相當於脂質體總重量約 0. 2%抗氧化劑，以防止其在常溫條件下貯存時被氧化。所述的氧化劑可選用但不限於維生素C、維生素E、丁基羥基茴香醚(BHA) ,2,6- 二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)、茶多酚、愈創樹脂、芝麻酚、波爾定鹼中的一種或多種。優選維生素E和丁基羥基茴香醚(BHA)組成的混合抗氧化劑。本發明的帶電荷柔性納米脂質體可以包括相當於脂質體總重量4-8倍的冷凍乾燥保護劑。所述的冷凍乾燥保護劑可選用但不限於蔗糖、甘露醇、葡萄糖、海藻糖。優選甘露醇。上述脂質成分與所包裹活性成分的重量比，對脂質體的穩定性、包封率及載藥量有較大影響，適宜的脂質成分與所包裹活性成分的重量比在2 1至5 1之間；凍幹保護劑與脂質體的重量比，對最終產品的載藥量亦有較大影響，適宜的比例範圍是凍幹保護劑脂質體3 1-6 1。本發明提供了脂質體混懸液中，脂質體包裹的活性成分與游離的活性成分分離的透析方法，還可以採用超速離心法、柱層析法等分離脂質體與游離成分。本發明還提供了帶電荷柔性納米脂質體的製備方法改良的逆相蒸發-超聲-均質-擠出-凍幹法。其中所述的改良的逆相蒸發亦可採用常規的脂質體製備方法，包括薄膜分散法、注入法、加熱法、 乳化法等。本發明採用改良的逆相蒸發-超聲-均質-擠出-凍幹法製備帶電荷柔性納米脂質體，具體步驟如下1)將磷脂、膽固醇、脂溶活性成分等脂溶性成分在35°C水浴條件下溶解於揮發性有機溶劑中；2)將透明質酸、表面活性劑、水溶活性成分等水溶性成分在35°C水浴條件下溶解於磷酸緩衝溶液(pH = 7. 0)中；3)將步驟1)和2、超聲混合，使之形成穩定的乳濁液，靜置30分鐘不分層；4)將步驟幻所得的乳濁液旋轉蒸發，直至形成脂質體混懸液；5)將步驟4)所得脂質體混懸液超聲破碎30次(超聲5秒、停5秒為1次)後， 5000PSI-10000PSI均質3次，最後通過擠出儀過IOOnm濾膜3次；6)將步驟幻得到的溶液，採用透析法分離脂質體包裹的活性成分和游離在磷酸緩衝液中的活性成分；7)在步驟6)得到的透析袋中的脂質體混懸液中，加入5-8倍量的凍幹保護劑， 於-40°C預凍12小時以上，再置於冷凍乾燥機凍幹，得到白色流動性良好的凍幹帶電荷柔性納米脂質體粉末。本發明的有益效果在於本發明製備的帶電荷柔性納米脂質體粒徑在50-200nm 之間，表面電荷絕對值在50mV以上，使所包裹的活性成分具有更好的穩定性。同時，在柔性納米脂質體膜成分中引入帶電荷脂質成分，除了使脂質體具有良好的皮膚透過性外，脂質體與細胞生物膜之間具有更強的粘附性，有利於局部充分發揮活性成分的作用功效和作用效率，減少活性成分的使用量，進而利於節約資源。而本發明採用的改良的逆相蒸發-超聲-均質-擠出-凍幹法，使產品具有較高的包封率和載藥量；整個工藝過程均由機械手段完成，使產品工藝和質量具有較好的穩定性和重現性；本發明最終的產品為流動性良好的粉末，便於使用、運輸和貯存。


圖1為陽離子積雪苷柔性納米脂質體電鏡圖；其中A為剛製備的脂質體原液；B為凍幹後重新懸浮的脂質體；C未加凍幹保護劑的凍幹脂質體；D為加凍幹保護劑的凍幹脂質體；圖2為不同樣品累積釋放結果；圖3為實驗樣品M小時累積透皮吸收量；圖4為實驗樣品M小時累積透皮吸收百分率(％ )。
具體實施例方式實施例1將IOOmg大豆卵磷脂、16mg硬脂醯胺、15mg膽固醇水浴超聲溶於氯仿中，將25mg 積雪苷、0. ^iig維生素E與BHA混可抗氧化劑溶於少量乙醇中，再與氯仿液混合；將12mg膽酸鈉、1. 7mg透明質酸溶於pH7. 0的磷酸緩衝液中；將前述的磷酸緩衝液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘後，旋轉蒸發得脂質體混懸液；將脂質體混懸液用探針式超聲細胞破碎儀超聲30個循環(每循環超聲5秒，間歇5秒)後，用AVESTIN高壓均質機均質3次，再通過AVESTIN擠出儀過IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時；取透析袋中的脂質體混懸液，加入4倍脂質質量的甘露醇，於_40°C預凍12小時後，放置於冷凍乾燥機冷凍乾燥成粉末狀。所得到的陽離子積雪苷柔性納米脂質體的粒徑和kta電位經ktasizeHNano ZS-90, Malvern)納米粒度及電位分析儀測定其粒徑和kta電位分別為61. 72士 11. 29nm, 69. 1 士 5. 99mV ；採用透析法分離測得產品的包封率為四.7%。實施例2將120mg氫化大豆卵磷脂、20mg硬脂醯胺、18mg膽固醇水浴超聲溶於氯仿中，將 0. 25mg維生素E與BHA混可抗氧化劑溶於少量乙醇中，再與氯仿液混合；將2000UI表皮活性因子(EGF)、15mg膽酸鈉、1. 7mg透明質酸溶於pH7. 0的磷酸緩衝液中；將前述的磷酸緩衝液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘後，旋轉蒸發得脂質體混懸液； 將脂質體混懸液用探針式超聲細胞破碎儀超聲30個循環(每循環超聲5秒，間歇5秒)後， 用AVESTIN高壓均質機均質3次，再通過AVESTIN擠出儀過IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時；取透析袋中的脂質體混懸液，加入5倍脂質質量的海藻糖，於_40°C預凍12小時後，放置於冷凍乾燥機冷凍乾燥成粉末狀。所得到的陽離子EGF柔性納米脂質體的粒徑和kta電位經ktasizer(Nano ZS-90, Malvern)納米粒度及電位分析儀測定其粒徑和kta電位分別為178. 2士21. 91nm、 65. 0 士 6. 04mV ；採用透析法分離測得產品的包封率為31. 7%。實施例3將IOmg 二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、2mg硬脂醯胺、2mg膽固醇水浴超聲溶於氯仿中，將
0.20mg維生素C與BHA混可抗氧化劑溶於少量乙醇中，再與氯仿液混合；將5mg紫草素、
1.6mg膽酸鈉、1. 7mg透明質酸溶於pH7. 0的磷酸緩衝液中；將前述的磷酸緩衝液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘後，旋轉蒸發得脂質體混懸液；將脂質體混懸液用探針式超聲細胞破碎儀超聲30個循環(每循環超聲5秒，間歇5秒)後，用AVESTIN 高壓均質機均質3次，再通過AVESTIN擠出儀過IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時；取透析袋中的脂質體混懸液，加入5倍脂質質量的乳糖，於-40°C預凍12小時後，放置於冷凍乾燥機冷凍乾燥成粉末狀。所得到的陽離子紫草素柔性納米脂質體的粒徑和kta電位經ktasizeHNano ZS-90, Malvern)納米粒度及電位分析儀測定其粒徑和kta電位分別為81. 55士31. 20nm、 63. 7 士 5. 4ImV ；採用透析法分離測得產品的包封率為30. 1%。實施例4將500mg氫化大豆卵磷脂、80mg硬脂醯胺、75mg膽固醇水浴超聲溶於氯仿中，將 1. Smg維生素E與茶多酚混可抗氧化劑溶於少量乙醇中，再與氯仿液混合；將5mg尿囊素、 75mg去氧膽酸鈉、8. 5mg透明質酸溶於35°C pH7. 0的磷酸緩衝液中；將前述的磷酸緩衝液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘後，旋轉蒸發得脂質體混懸液；將脂質體混懸液用探針式超聲細胞破碎儀超聲30個循環(每循環超聲5秒，間歇5秒)後，用 AVESTIN高壓均質機均質3次，再通過AVESTIN擠出儀過IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時；取透析袋中的脂質體混懸液，加入5倍脂質質量的甘露醇，於_40°C預凍12小時後，放置於冷凍乾燥機冷凍乾燥成粉末狀。所得到的陽離子尿囊素柔性納米脂質體的粒徑和kta電位經ktasizeHNano ZS-90, Malvern)納米粒度及電位分析儀測定其粒徑和kta電位分別為88. 38士 14. 92nm、 51. 5 士 4. 26mV ；採用透析法分離測得產品的包封率為34. 1%。實施例5將500mg氫化大豆卵磷脂、50mg 3 β -[N-(N'，N』 -二甲基乙胺)胺基甲醯基]膽固醇、75mg膽固醇水浴超聲溶於氯仿中，將200mg輔酶Q10、l. 8mg維生素E與BHA混可抗氧化劑溶於少量乙醇中，再與氯仿液混合；將75mg膽酸鈉、8. 5mg透明質酸溶於35°C pH7. 0 的磷酸緩衝液中；將前述的磷酸緩衝液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘後，旋轉蒸發得脂質體混懸液；將脂質體混懸液用探針式超聲細胞破碎儀超聲30個循環 (每循環超聲5秒，間歇5秒)後，用AVESTIN高壓均質機均質3次，再通過AVESTIN擠出儀過IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時；取透析袋中的脂質體混懸液，加入6倍脂質質量的甘露醇，於_40°C預凍12小時後，放置於冷凍乾燥機冷凍乾燥成粉末狀。所得到的陽離子輔酶QlO柔性納米脂質體的粒徑和kta電位經ktasizer (Nano ZS-90, Malvern)納米粒度及電位分析儀測定其粒徑和kta電位分別為106. 8士85. 51nm、 60. 3 士 5. 49mV ；採用透析法分離測得產品的包封率為31. 8%。實施例6將12mg氫化大豆卵磷脂、1. 5mg磷脂醯甘油、1. 5mg膽固醇水浴超聲溶於氯仿中， 將1. 25mg神經醯胺2、0. 025mg維生素E與BHA混可抗氧化劑溶於少量乙醇中，再與氯仿液混合；將1. 5mg去氧膽酸鈉、0. 17mg透明質酸溶於pH7. 0的磷酸緩衝液中；將前述的磷酸緩衝液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘後，旋轉蒸發得脂質體混懸液； 將脂質體混懸液用探針式超聲細胞破碎儀超聲30個循環(每循環超聲5秒，間歇5秒)後，用AVESTIN高壓均質機均質3次，再通過AVESTIN擠出儀過IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時；取透析袋中的脂質體混懸液，加入5倍脂質質量的甘露醇，於_40°C預凍12小時後，放置於冷凍乾燥機冷凍乾燥成粉末狀。所得到的陰離子神經醯胺2柔性納米脂質體的粒徑和^ta電位經 Zetasizer (Nano ZS-90, Malvern)納米粒度及電位分析儀測定其粒徑和kta電位分別為 139. 7士23. Inm, -52. 1 士5. 95mV ；採用透析法分離測得產品的包封率為28. 3%0實施例7將120mg氫化大豆卵磷脂、20mg硬脂醯胺、18mg膽固醇水浴超聲溶於氯仿中，將 30mg水飛薊素、0. 20mg維生素E與BHT混可抗氧化劑溶於少量乙醇中，再與氯仿液混合；將 15mg去氧膽酸鈉、1. 7mg透明質酸溶於pH7. 0的磷酸緩衝液中；將前述的磷酸緩衝液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘後，旋轉蒸發得脂質體混懸液；將脂質體混懸液用探針式超聲細胞破碎儀超聲30個循環(每循環超聲5秒，間歇5秒)後，用AVESTIN 高壓均質機均質3次，再通過AVESTIN擠出儀過IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時；取透析袋中的脂質體混懸液，加入3倍脂質質量的蔗糖，於-40°C預凍12小時後，放置於冷凍乾燥機冷凍乾燥成粉末狀。所得到的陽離子水飛薊素柔性納米脂質體的粒徑和kta電位經ktasizer (Nano ZS-90, Malvern)納米粒度及電位分析儀測定其粒徑和kta電位分別為117. 2士 19. 21nm、 57. 4 士 7. 25mV ；採用透析法分離測得產品的包封率為32. 9%。實施例8將IOOmg大豆卵磷脂、16mg硬脂醯胺、IOmg膽固醇水浴超聲溶於氯仿中，將0. 25mg 維生素E與BHA混可抗氧化劑溶於少量乙醇中，再與氯仿液混合；將20mg膠原蛋白、15mg去氧膽酸鈉、1. 7mg透明質酸溶於pH7. 0的磷酸緩衝液中；將前述的磷酸緩衝液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘後，旋轉蒸發得脂質體混懸液；將脂質體混懸液用探針式超聲細胞破碎儀超聲30個循環(每循環超聲5秒，間歇5秒)後，用AVESTIN高壓均質機均質3次，再通過AVESTIN擠出儀過IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時；取透析袋中的脂質體混懸液，加入4 倍脂質質量的甘露醇，於-40°C預凍12小時後，放置於冷凍乾燥機冷凍乾燥成粉末狀。所得到的陽離子膠原蛋白柔性納米脂質體的粒徑和kta電位經ktasizer (Nano ZS-90, Malvern)納米粒度及電位分析儀測定其粒徑和Zeta電位分別為158. 7士 10. 68nm、 55. 0 士 5. 58mV。實施例9將120mg大豆卵磷脂、16mg硬脂醯胺、IOmg膽固醇水浴超聲溶於氯仿中，將0. 25mg 維生素E與BHA混可抗氧化劑溶於少量乙醇中，再與氯仿液混合；將25mg五肽、15mg去氧膽酸鈉、1. 7mg透明質酸溶於pH7. 0的磷酸緩衝液中；將前述的磷酸緩衝液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘後，旋轉蒸發得脂質體混懸液；將脂質體混懸液用探針式超聲細胞破碎儀超聲30個循環(每循環超聲5秒，間歇5秒)後，用AVESTIN高壓均質機均質3次，再通過AVESTIN擠出儀過IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時；取透析袋中的脂質體混懸液，加入4倍脂質質量的甘露醇，於-40°C預凍12小時後，放置於冷凍乾燥機冷凍乾燥成粉末狀。所得到的陽離子五肽柔性納米脂質體的粒徑和kta電位經 Zetasizer (NanoZS-90, Malvern)納米粒度及電位分析儀測定其粒徑和kta電位分別為 93. 3 士 22. 71nm、62. 7 士 6. 16mV。上述實施例中，中性磷脂由日油株式會社提供，硬脂醯胺為美國Sigma-Aldrich Chemie GmbH產品，磷脂醯甘油由美國Avanti Polar Lipids Inc.生產，磷脂酸由上海作舟化工科技有限公司提供，膽固醇、去氧膽酸鈉以及膽酸鈉由天津市大茂化學試劑廠生產，透明質酸由山東福瑞達生物醫藥有限公司生產，甘露醇由上海實驗試劑有限公司生產，BHA由上海QIGANG Pd生產，維生素E為美國Sigma產品，磷酸緩衝液根據中國藥典自配，其餘試劑均為市售產品，除有機溶劑外均符合食品或藥用標準。效果實施例1形態學將陽離子積雪苷柔性納米脂質體混懸液，磷鎢酸負染，透射電鏡下觀察形態；將凍幹陽離子積雪苷柔性納米脂質體用磷酸緩衝液重新混懸，磷鎢酸負染，透射電鏡下觀察形態；在掃描電鏡下觀察未加凍幹保護劑和加入凍幹保護劑的陽離子積雪苷柔性納米脂質體見圖1。效果實施例2穩定性取3批陽離子EGF柔性納米脂質體及凍幹陽離子EGF柔性納米脂質體粉末，分別置於室溫、4°C條件下，於Om和: 測定其包封率、pH、粒徑和kta電位，並觀察外觀，以確定其穩定性。見表1。表1脂質體混懸液及凍幹脂質體分別放置3個月後其穩定性結果
貯存時間(月)
脂質體混懸液
凍幹脂質體
0
3***
3**
包封率(％或mg*)31.729.380.1340.130室溫pH7.037.166.98**7.03貯粒徑(nm)178.284.7467.5465.41存電位(mV)60.561.7-46.38-44.52條包封率(％)31.730.790.1340.132件A eppH7.037.056.986.874。粒徑(nm)178.275.0467.5463.79電位(mV)60.565.3-46.38-48.77 *脂質體混懸液包封率單位為%，凍幹脂質體載藥量單位為mg/每mg凍乾粉；** 凍幹脂質體的PH、粒徑和電位是將其用PBS溶液重新懸浮後測定；***表示與0月相比無顯著性差異(P > 0. 05)
效果實施例3體外釋放特性 分別取陽離子積雪苷柔性納米脂質體混懸液5ml (含積雪苷約78. 2 μ g)和積雪苷溶液5ml (含積雪苷約80. Oyg)，分別置於透析袋中；積雪苷脂質體乳膏IOOmg (含積雪苷約78. 3μ g)置於濾紙筒中。按中國藥典規定的槳法測定其釋放特徵，接收液PBS體積50ml， 釋放溫度保持37. O0C，磁力攪拌速度為50rpm。在事先確定的時間點吸取0. 5ml SBF接收液並隨即補充相同體積的SBF溶液。採用前述的HPLC方法檢測釋放出的藥物量。每個樣
10本平行實驗3次。結果見圖2。效果實施例4體外透皮吸收分別配製積雪苷陽離子柔性脂質體(樣品A)、積雪苷柔性脂質體(樣品B)、積雪苷一般陽性脂質體(樣品C)及積雪苷溶液(樣品D)，並分別加入到同配方的空白膏體中， 使每g膏體含積雪苷約0. 25mg ；去用於透皮吸收的商品化豬皮，根據Franz擴散池的口徑 (0. 66cm2)，裁剪成適宜大小，使豬皮表面(角質層)朝上，安裝於擴散池上，各塗抹膏體Ig ； 接收液為PBS溶液，溫度37°C，接收液體積2. 5ml，在規定的時間點將所有接收液取出，同時補充新的接收液；按前面的方法檢測接收液積雪苷含量，計算積雪苷累積透皮吸收量和百分率；最後一個時間點取樣後，將豬皮正反面用蒸餾水衝洗，豬皮浸泡於50mlPBS液中M小時，測定浸泡液積雪苷含量，以確定積雪苷在豬皮中的滯留量。結果見圖3、圖4和表2。表4不同樣品在豬皮中的滯留量(n = 3)
權利要求
1.一種用於化妝品的帶電荷柔性納米脂質體，其特徵在於所述的帶電荷柔性納米脂質體包括下列重量份的組分1-1000份中性磷脂、0. 5-500份帶電荷磷脂、1-1000份膽固醇、0. 5-500份表面活性劑、0. 1-20份透明質酸、0. 5-250份化妝品活性成分、100-8000份的冷凍乾燥保護劑。
2.根據權利要求1所述的用於化妝品的帶電荷柔性納米脂質體，其特徵在於所述的帶電荷柔性納米脂質體包括下列重量份的組分100-120份中性磷脂、0. 5-100份帶電荷磷脂、15-100份膽固醇、10-100份表面活性劑、0. 1-2份透明質酸、0. 5-250份化妝品活性成分、400-800份的冷凍乾燥保護劑。
3.根據權利要求1所述的用於化妝品的帶電荷柔性納米脂質體，其特徵在於所述的帶電荷柔性納米脂質體包括下列重量份的組分100-120份中性磷脂、0. 5-20份帶電荷磷脂、15-20份膽固醇、10-20份表面活性劑、1. 5份透明質酸、20份化妝品活性成分、400-600 份的冷凍乾燥保護劑。
4.根據權利要求1-3任一所述的用於化妝品的帶電荷柔性納米脂質體，其特徵在於 化妝品活性成分選自膠原蛋白、水飛薊素、神經醯胺、輔酶Q10、尿囊素、紫草素、UI表皮活性因子或積雪苷一種或者多種。
5.根據權利要求1-3任一所述的用於化妝品的帶電荷柔性納米脂質體，其特徵在於 其還包括佔脂質體總重量0. 1-0. 5%的覆核抗氧化劑，其中所述的覆核抗氧化劑選自維生素C、維生素E、丁基羥基茴香醚、2，6_二叔丁基-4-甲基苯酚、茶多酚、愈創樹脂、芝麻酚、波爾定鹼中的一種或多種。
6.根據權利要求1-3任一所述的用於化妝品的帶電荷柔性納米脂質體，其特徵在於 所述覆核抗氧化劑為維生素E與丁基羥基茴香醚，其比例為10 1到10 5。
7.根據權利要求1-3任一所述的用於化妝品的帶電荷柔性納米脂質體，其特徵在於 所述的帶電荷柔性納米脂質體的粒徑範圍為50-200nm。
8.根據權利要求1-3任一所述的用於化妝品的帶電荷柔性納米脂質體，其特徵在於 所述的帶電荷柔性納米脂質體的kta-電位範圍為(-70)-70mV。
9.根據權利要求1-3任一所述的用於化妝品的帶電荷柔性納米脂質體，其特徵在於 所述的中性磷脂選自大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、腦磷脂，以及二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、二硬脂醯磷脂醯膽鹼、二肉豆蔻磷脂醯膽鹼、二月桂醯磷脂醯膽鹼、二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺等天然或合成磷脂中的一種或幾種；所述的帶電荷磷脂選自磷脂酸、磷脂醯甘油、磷脂醯肌醇、 磷脂醯絲氨酸、雙鯨蠟磷脂酸肌醇等負電荷磷脂中的一種或幾種，或者是選自硬脂醯胺、 3β-[Ν-(Ν，，Ν，- 二甲基乙胺)胺基甲醯基]膽固醇、N-[l-(2，3-二油醯基)丙基]-Ν，Ν， N-三乙胺氯、2，3- 二油醯氧-N-[2-(精氨酸基醯胺)乙基]-N，N- 二甲基-1-丙基-三氟乙酸胺、1，2_ 二油醯氧丙基-N，N, N-三甲基溴化銨合成正電荷脂質中的一種或幾種；所述的表面活性劑是膽酸鈉或去氧膽酸鈉；所述的冷凍乾燥保護劑選用蔗糖、甘露醇、葡萄糖、 海藻糖中的一種或幾種。
10.一種如權利要求1-3任一所述的用於化妝品的帶電荷柔性納米脂質體的製備方法，所述包括如下步驟1)將磷脂、膽固醇、脂溶活性成分在35°c水浴條件下溶解於揮發性有機溶劑中；2)將透明質酸、表面活性劑、水溶活性成分等水溶性成分在35°C水浴條件下溶解於磷酸緩衝溶液(pH = 7. 0)中；3)將步驟1)和2、超聲混合，使之形成穩定的乳濁液，靜置30分鐘不分層；4)將步驟幻所得的乳濁液旋轉蒸發，直至形成脂質體混懸液；5)將步驟4)所得脂質體混懸液超聲破碎30次後，5000PSI-10000PSI均質3次，最後通過擠出儀過IOOnm濾膜3次；6)將步驟幻得到的溶液，採用透析法分離脂質體包裹的活性成分和游離在磷酸緩衝液中的活性成分；7)在步驟6)得到的透析袋中的脂質體混懸液中，加入5-8倍量的凍幹保護劑， 於-40°C預凍12小時以上，再置於冷凍乾燥機凍幹，得到白色流動性良好的凍幹帶電荷柔性納米脂質體粉末。
全文摘要
本發明涉及一種用於化妝品的帶電荷柔性納米脂質體及其製備方法。本發明的用於化妝品的帶電荷柔性納米脂質體包括下列重量份的組分1-1000份中性磷脂、0.5-500份帶電荷磷脂、1-1000份膽固醇、0.5-500份表面活性劑、0.1-20份透明質酸、0.5-250份化妝品活性成分、100-8000份的冷凍乾燥保護劑。本發明的化妝品活性成分帶電荷柔性納米脂質體，可以顯著提高化妝品活性成分的穩定性，促進活性成分的透皮吸收並提高其作用效率，還能提高活性成分在皮膚表面和皮膚深層的滯留和作用時間；粉末狀態的化妝品活性成分帶電荷柔性納米脂質體還利於使用、運輸和貯存。本發明的帶電荷柔性納米脂質體的製備方法均可採用機械化方法，產品工藝和質量的穩定性好、重現性高。
文檔編號A61Q19/00GK102397168SQ20111037513
公開日2012年4月4日 申請日期2011年11月23日 優先權日2011年11月23日
發明者江妍 申請人:蘇州瑞納生化技術有限公司