一種蛹蟲草酵素粉及其製備方法

2023-12-09 01:39:41 1

一種蛹蟲草酵素粉及其製備方法
【專利摘要】本發明公開了一種蛹蟲草酵素粉及其製備方法。本發明公開一種製備蛹蟲草酵素粉的方法，包括如下步驟：(1)將活化的蛹蟲草菌株接種於種子培養基，26-28℃振蕩培養，得到蛹蟲草一級種子液。本發明公開的蛹蟲草酵素粉生產工藝簡便，便於包裝、運輸、保存，服用方便，活性高，易吸收，見效快，具有抗癌、防衰、減毒、潤肺補腎、降血脂、降血壓、保心護肝，增強人體抵抗力和抗排異的功能。
【專利說明】 一種蛹蟲草酵素粉及其製備方法

【技術領域】
[0001]本發明涉及一種蛹蟲草酵素粉及其製備方法，屬於生物【技術領域】。

【背景技術】
[0002]蛹蟲草(學名:Cordyceps militaris)為子囊菌亞門，麥角菌目，麥角菌科、蟲草屬。其世界性分布的天然資源數量很少。由子座(即草部分)與菌核(即蟲的屍體部分)兩部分組成的複合體。冬季幼蟲蟄居土裡，菌類寄生其中，吸取營養，幼蟲體內充滿菌絲而死。到了夏季，自幼蟲屍體之上生出幼苗，形似草，夏至前後採集而得。中醫認為，蛹蟲草入肺腎二經，既能補肺陰，又能補腎陽，主治腎虛，腰膝酸痛，病後虛弱，久咳虛弱，勞咳痰血，自汗盜汗等，是唯一的一種能同時平衡、調節陰陽的中藥。
[0003]蛹蟲草的菌絲體中含有亞油酸、蟲草酸、蟲草素、腺苷和谷留醇等多種活性成分。實驗證明，蟲草的上述多種活性成分都具有明顯的降血脂，降血壓，預防動脈粥樣硬化，保心護肝的作用。
[0004]超氧化物岐化酶(SOD)普遍存在於好氧生物體內，是生物細胞防衛系統中重要的一種抗氧化物酶，構成了細胞抗氧化損傷的第一道防線。在真核生物中主要存在3種SOD同工酶，包括細胞質Cu，Zn-SOD、線粒體Mn-SOD、細胞質Fe-SOD。許多研究報導表明，絲狀真菌的Cu，Zn-SOD具有潛在的額外修飾基團和多聚體，可以為解決SOD半衰期短以及體內給藥的活性問題等缺陷提供更有效的SOD藥用蛋白。蛹蟲草含有全部以上3種SOD同工酶，其中Cu，Zn-SOD是一種中性蛋白，佔總SOD的90%以上，是蛹蟲草體內主要的S0D。研究人員採用鄰苯三酚自氧化體系，研究了冬蟲夏草及人工蟲草菌絲體對超氧陰離子自由基和羥自由基的清除作用，結果表明冬蟲夏草和人工蟲草菌絲體對超氧陰離子自由基和羥自由基均有清除作用。另有相關研究表明，蛹蟲草子實體中的SOD含量要高於冬蟲夏草子實體中的SOD含量。
[0005]亞油酸是人體所必需的脂肪酸，人體每天攝取6g亞油酸，才能維持正常的生理代謝。而且亞油酸在體內的可代謝產生對人體有重要生理功能的ω-6不飽和脂肪酸，其是影響血壓、血管反應性、凝血和免疫系統的脂肪激素等一系列活性化合物的前提。亞油酸還具有防癌抗癌，抗粥狀動脈硬化，參與脂肪分解與新陳代謝，增強肌體免疫能力，促進骨組織的代謝等作用。現在生活節奏過快，精神壓力過大，飲食和生活不規律，高血壓、高血糖、高血脂、高膽固醇等疾病困擾著越來越多的群體，亞油酸作為一類功能性多不飽和脂肪酸，具有降低血清膽固醇水平作用，服用亞油酸對患高甘油三酯疾病的病人具有明顯的療效。我國藥典正是採用亞油酸乙酯作為預防和治療高血壓及動脈粥樣硬化症、冠心病的藥物。亞油酸有助於降低血清膽固醇和抑制動脈血栓的形成，因此在預防動脈粥樣硬化和心肌梗塞等心血管疾病方面有良好作用。
[0006]酵素，也就是「酶」，是一種由胺基酸組成、且具有催化細胞體內生物化學反應的蛋白質。酵素是維持細胞新陳代謝的重要物質。許多酵素對人體的健康十分有利。超氧化物歧化酶SOD是一種生物活性蛋白質，具有清除新陳代謝中產生的超氧陰離子自由基的能力，又是超氧陰離子的底物誘導酶，其功能是保護細胞免遭有氧代謝物的損傷。在維護機體活性氧代謝的平衡中起重要作用，表現出抗癌、防衰、減毒等作用。蛹蟲草含有的另一有效成分SOD可抑制人體內過氧化脂質的生成和清除衰老產物(氧化自由基)，經研究證明，其功效超過了傳統的具抗氧化作用的中藥，具有顯著的延緩衰老、抗疲勞，耐缺氧、提高人體免疫力、抗癌等功效。維持正常的SOD含量是對保持機體健康具有重要的意義。隨著機體的衰老，人體內的SOD含量和活性會逐步降低，如果不及時補充則導致亞健康。因此，開發具有降脂活性並富含SOD的蛹蟲草酵素就顯得十分迫切。
[0007]目前，蛹蟲草的生產主要是利用大米、小麥和蠶蛹等固體基質通過固體栽培的方法而實現的。這種蛹蟲草固體栽培方法存在周期長(80-90天)、重金屬汙染嚴重、殘留細菌或黴菌毒素、有效成分含量低(如SOD含量偏低，每克菌絲體或子實體的酶活力小於20國際單位)等缺陷。因此，人們對蛹蟲草保健功效和治療功效的渴求與蛹蟲草子實體保有量和子實體中降脂活性成分與SOD含量低之間產生了明顯的矛盾。


【發明內容】

[0008]本發明的目的是提供一種蛹蟲草酵素粉及其製備方法。
[0009]本發明提供一種製備蛹蟲草酵素粉的方法，包括如下步驟:
[0010](I)將活化的蛹蟲草菌株接種於種子培養基，26_28°C振蕩培養，得到蛹蟲草一級種子液；
[0011]所述種子培養基由溶劑和溶質組成，溶劑為水，溶質為葡萄糖、酵母粉、蛋白腖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和消泡劑；所述葡萄糖在所述種子培養基中的濃度為6-8g/100ml，所述酵母粉在所述種子培養基中的濃度為4-6g/100ml，所述蛋白腖在所述種子培養基中的濃度為5-7g/100ml，所述磷酸二氫鉀在所述種子培養基中的濃度為0.2-0.4g/100ml，所述硫酸鎂在所述種子培養基中的濃度為0.02-0.04g/100ml，所述消泡劑在所述種子培養基中的濃度為 0.1-0.2g/100ml ；
[0012](2)將蛹蟲草一級種子液接入二級種子培養基，26_28°C振蕩培養，得到蛹蟲草二級種子液；
[0013]所述二級種子培養基由溶劑和溶質組成，溶劑為水，溶質為葡萄糖、酵母粉、蛋白腖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和消泡劑；所述葡萄糖在所述二級種子培養基中的濃度為4-6g/10ml,所述酵母粉在所述二級種子培養基中的濃度為4-8g/10ml,所述蛋白腖在所述二級種子培養基中的濃度為4-8g/100ml，所述磷酸二氫鉀在所述二級種子培養基中的濃度為0.2-0.4g/100ml，所述硫酸鎂在所述二級種子培養基中的濃度為0.02-0.04g/100ml,所述消泡劑在所述二級種子培養基中的濃度為0.1-0.2g/100ml ；
[0014](3)根據放大工藝的需要，按步驟(2)的方法由上一級種子液製備得到下一級種子液；
[0015](4)將最終得到的種子液接入發酵培養基中，26_28°C振蕩培養，得到蛹蟲草發酵液；
[0016]所述發酵培養基由溶劑和溶質組成，溶劑為水，溶質為葡萄糖、酵母粉、蛋白腖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和消泡劑；所述葡萄糖在所述發酵培養基中的濃度為3-6g/100ml，所述酵母粉在所述發酵培養基中的濃度為4-6g/100ml，所述蛋白腖在所述發酵培養基中的濃度為4-6g/100ml，所述磷酸二氫鉀在所述發酵培養基中的濃度為0.2-0.4g/100ml，所述硫酸鎂在所述發酵培養基中的濃度為0.02-0.04g/100ml，所述消泡劑在所述發酵培養基中的濃度為 0.1-0.2g/100ml ；
[0017](5)將蛹蟲草發酵液離心收集菌體、乾燥和粉碎過篩，即得蛹蟲草酵素粉；
[0018]所述乾燥具體為遠紅外乾燥；
[0019]所述篩具體為120目篩。
[0020]上述方法中，所述步驟(I)中，所述活化的蛹蟲草菌株是將蛹蟲草菌株轉接到斜面培養基上，26-28°C培養得到；
[0021]所述蛹蟲草菌株購自廣東省微生物菌種保藏中心，保藏號為GIM5.269 ；
[0022]所述斜面培養基組成如下:3g/L的鹿糖，2g/L的葡萄糖，lg/L的蛋白腖,0.5g/L的酵母膏，0.2g/100ml的磷酸二氫鉀，0.02g/100ml的硫酸鎂，15g/L的瓊脂粉，餘量為水，pH為 6.5-7.0 ；
[0023]所述pH值具體採用10g/100ml的氫氧化鈉水溶液進行調節；
[0024]所述培養的天數為5-7天，具體為6天；
[0025]上述任一所述的方法中，所述步驟(I)中，所述振蕩培養的天數為2-3天，所述振蕩培養的轉速為200-250rpm ；
[0026]所述步驟(2)中，所述將蛹蟲草一級種子液接入二級種子培養基時的接種量為1-2%，所述培養的天數為2-3天，通氣量為1:0.4-0.8vvm，攪拌轉速為400-500rpm ；
[0027]所述步驟(4)中，所述將最終得到的種子液接入發酵培養基時的接種量為3-5%，所述培養的天數為3-6天，通氣量為1:0.3-0.5vvm，攪拌轉速為350_450rpm。
[0028]上述任一所述的方法中，所述步驟(I)中，所述振蕩培養的天數為3天，所述振蕩培養的轉速為250rpm ；
[0029]所述種子培養基中，所述葡萄糖在所述種子培養基中的濃度為6g/100ml，所述酵母粉在所述種子培養基中的濃度為4g/100ml，所述蛋白腖在所述種子培養基中的濃度為5g/100ml，所述磷酸二氫鉀在所述種子培養基中的濃度為0.2g/100ml，所述硫酸鎂在所述種子培養基中的濃度為0.02g/100ml，所述消泡劑在所述種子培養基中的濃度為0.lg/100ml ；
[0030]或，
[0031]所述種子培養基中，所述葡萄糖在所述種子培養基中的濃度為8g/100ml，所述酵母粉在所述種子培養基中的濃度為6g/100ml，所述蛋白腖在所述種子培養基中的濃度為7g/100ml，所述磷酸二氫鉀在所述種子培養基中的濃度為0.4g/100ml，所述硫酸鎂在所述種子培養基中的濃度為0.04g/100ml，所述消泡劑在所述種子培養基中的濃度為0.2g/100ml ；
[0032]或，
[0033]所述種子培養基中，所述葡萄糖在所述種子培養基中的濃度為7g/100ml，所述酵母粉在所述種子培養基中的濃度為5g/100ml，所述蛋白腖在所述種子培養基中的濃度為6g/100ml，所述磷酸二氫鉀在所述種子培養基中的濃度為0.3g/100ml，所述硫酸鎂在所述種子培養基中的濃度為0.03g/100ml，所述消泡劑在所述種子培養基中的濃度為0.15g/100ml。
[0034]上述任一所述的方法中，所述步驟⑵中，所述接種量為1%或2%;所述培養的天數為3天；所述通氣量為I:0.4vvm、1:0.6vvm或1:0.8vvm ；
[0035]所述二級種子培養基中，所述葡萄糖在所述二級種子培養基中的濃度為4g/10ml,所述酵母粉在所述二級種子培養基中的濃度為4g/100ml,所述蛋白腖在所述二級種子培養基中的濃度為4g/100ml，所述磷酸二氫鉀在所述二級種子培養基中的濃度為0.2g/100ml，所述硫酸鎂在所述二級種子培養基中的濃度為0.02g/100ml，所述消泡劑在所述種子培養基中的濃度為0.lg/100ml ；
[0036]或，
[0037]所述二級種子培養基中，所述葡萄糖在所述二級種子培養基中的濃度為6g/10ml,所述酵母粉在所述二級種子培養基中的濃度為8g/100ml,所述蛋白腖在所述二級種子培養基中的濃度為8g/100ml，所述磷酸二氫鉀在所述二級種子培養基中的濃度為0.4g/100ml，所述硫酸鎂在所述二級種子培養基中的濃度為0.04g/100ml，所述消泡劑在所述二級種子培養基中的濃度為0.2g/100ml ；
[0038]或，
[0039]所述二級種子培養基中，所述葡萄糖在所述二級種子培養基中的濃度為5g/10ml,所述酵母粉在所述二級種子培養基中的濃度為6g/100ml,所述蛋白腖在所述二級種子培養基中的濃度為6g/100ml，所述磷酸二氫鉀在所述二級種子培養基中的濃度為0.3g/100ml，所述硫酸鎂在所述二級種子培養基中的濃度為0.03g/100ml，所述消泡劑在所述二級種子培養基中的濃度為0.15g/100ml。
[0040]上述任一所述的方法中，所述步驟(3)中，所述下一級種子液為蛹蟲草三級種子液和/或四級種子液。
[0041]上述任一所述的方法中，所述步驟(4)中，所述發酵培養基的體積為75L-3850L，具體為75L、150L、750L或3850L ;所述接種量為3%、4%或5%;所述培養的天數為4天；所述通氣量為I:0.3vvm、l:0.4vvm、l:0.5vvm ;所述攪拌轉速為400rpm ；
[0042]所述發酵培養基的體積為75L時，發酵時所用的發酵罐的體積為100L ；
[0043]所述發酵培養基的體積為150L時，發酵時所用的發酵罐的體積為200L ；
[0044]所述發酵培養基的體積為750L時，發酵時所用的發酵罐的體積為1000L ；
[0045]所述發酵培養基的體積為3850L時，發酵時所用的發酵罐的體積為5000L ；
[0046]所述發酵培養基中，所述葡萄糖在所述發酵培養基中的濃度為3g/100ml，所述酵母粉在所述發酵培養基中的濃度為4g/100ml，所述蛋白腖在所述發酵培養基中的濃度為4g/100ml，所述磷酸二氫鉀在所述發酵培養基中的濃度為0.2g/100ml，所述硫酸鎂在所述發酵培養基中的濃度為0.02g/100ml，所述消泡劑在所述發酵培養基中的濃度為0.lg/100ml ；
[0047]或，
[0048]所述發酵培養基中，所述葡萄糖在所述發酵培養基中的濃度為6g/100ml，所述酵母粉在所述發酵培養基中的濃度為6g/100ml，所述蛋白腖在所述發酵培養基中的濃度為6g/100ml，所述磷酸二氫鉀在所述發酵培養基中的濃度為0.4g/100ml，所述硫酸鎂在所述發酵培養基中的濃度為0.04g/100ml，所述消泡劑在所述發酵培養基中的濃度為0.2g/100ml ；
[0049]或，
[0050]所述發酵培養基中，所述葡萄糖在所述發酵培養基中的濃度為4g/100ml，所述酵母粉在所述發酵培養基中的濃度為5g/100ml，所述蛋白腖在所述發酵培養基中的濃度為5g/100ml，所述磷酸二氫鉀在所述發酵培養基中的濃度為0.3g/100ml，所述硫酸鎂在所述發酵培養基中的濃度為0.03g/100ml，所述消泡劑在所述發酵培養基中的濃度為0.15g/100ml。
[0051]上述任一所述的方法中，所述步驟(I)中，所述活化的蛹蟲草菌株在將蛹蟲草菌株轉接到斜面培養基上之前還包括如下步驟:將所述保藏號為GIM5.269的蛹蟲草菌株在26°C在斜面培養基上見光培養7天，再經15°C避光培養5天，挑選呈現金黃色的單菌落。
[0052]由上述任一所述的方法得到的蛹蟲草酵素粉也屬於本發明的保護範圍。
[0053]上述蛹蟲草酵素粉在製備具有降脂活性和/或SOD酶活力的產品中的應用也屬於本發明的保護範圍；
[0054]或，
[0055]上述蛹蟲草酵素粉在製備降血脂和/或抗衰老的產品中的應用也屬於本發明的保護範圍。
[0056]本發明採用工業化液體深層發酵技術，使得蛹蟲草菌種能夠在液體培養基中進行大量增殖，生產出富含降脂有效成分與SOD的酵素粉，每克蛹蟲草酵素粉SOD酶活3 150U酶活力。本發明提供的蛹蟲草酵素粉具有抗癌、防衰、減毒、潤肺補腎、降血脂、降血壓、保心護肝，增強人體抵抗力和抗排異的功能，對氣短、氣喘、口乾和精神疲乏等症狀有很好的療效或作用，適用於醫藥領域腫瘤及腫瘤放化療、器官移植、肺炎、肝炎、慢性腎炎患者，特別適合於廣大中老年人、生活節奏快的人群，免疫功能低下，體弱多病，腎虛，氣短、氣喘、口乾和精神疲乏的患者，而且對人體各系統均能產生有益的作用，可適用於保健食品領域。
[0057]本發明提供的蛹蟲草酵素粉生產工藝簡便，便於包裝、運輸、保存，服用方便，活性高，易吸收，見效快。

【具體實施方式】
[0058]下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。
[0059]下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0060]下述實施例中SOD酶活力的測定採用超氧化物歧化酶(SOD)活性測定試劑盒A001-1 (購自南京建成生物工程研究所)進行總的SOD含量測定，具體按說明書操作並計算酶活力。
[0061]下述實施例中所用到的蛹蟲草(Cordyceps militaris)購自廣東省微生物菌種保藏中心，菌株名稱為蛹蟲草Cordyceps millitaris (L.ex Fr.) Link,保藏號為GIM5.269。將菌種GM5.269在26°C見光培養7天後，經15°C避光低溫脅迫培養5天後(培養時所使用的培養基為實施例中的斜面培養基)，自然選育挑選菌落呈現金黃色的單菌落保存，供生產用。菌落金黃色越深，SOD含量就越高。
[0062]下述實施例中的亞油酸測定採用乙醯氯一甲醇甲酯化法，參考GB 5413.27—2010，嬰幼兒食品和乳品中脂肪酸的測定方法。
[0063]消泡劑購自陶氏化學(上海)有限公司，產品目錄號為D0WFAX*DF103。
[0064]實施例1、10L發酵罐生產富含降脂有效成分與SOD的蛹蟲草酵素粉
[0065]一、將蛹蟲草菌株轉接到斜面培養基上26_28°C常規培養6天(5_7天均可)，得活化的蛹蟲草菌株；
[0066]斜面培養基組成:3g/L的鹿糖,2g/L的葡萄糖，lg/L的蛋白腖,0.5g/L的酵母膏，0.2g/100ml的磷酸二氫鉀，0.02g/100ml的硫酸鎂，瓊脂粉15g/L，餘量為水，採用10g/100ml氫氧化鈉的水溶液調pH為6.5-7.0。
[0067]二、將活化好的蛹蟲草菌株接種於種子培養基，26-28°C，250rpm(200-250rpm均可)振蕩培養3天(2-3天均可)得蛹蟲草一級種子液。
[0068]種子培養基的組成:6g/100ml的葡萄糖,4g/100ml的酵母粉,5g/100ml的蛋白腖，0.2g/100ml的磷酸二氫鉀，0.02g/100ml的硫酸鎂，0.lg/100ml的消泡劑，餘量為水，pH值自然。
[0069]三、將一級種子液接入二級種子培養基，26_28°C培養3天(2_3天均可)，接種量1%,通氣1:0.4vvm,攪拌轉速400?500rpm,得到蛹蟲草二級種子液。
[0070]二級種子培養基的組成:4g/100ml的葡萄糖,4g/100ml的酵母粉,4g/100ml的蛋白腖，0.2g/100ml的磷酸二氫鉀，0.02g/100ml的硫酸鎂，0.lg/100ml的消泡劑，餘量為水，pH自然。
[0071]四、將二級種子液接入裝有75L發酵培養基的100L發酵罐中，26_28°C培養4天(3-6天均可),接種量3 %,通氣1:0.3vvm,攪拌轉速400rpm (350-450rpm均可),發酵結束即為蛹蟲草發酵液。
[0072]發酵培養基的組成:3g/100ml的葡萄糖,4g/100ml的酵母粉,4g/100ml的蛋白腖，0.2g/100ml的磷酸二氫鉀，0.02g/100ml的硫酸鎂，0.lg/100ml的消泡劑，餘量為水，pH值自然。
[0073]五、將蛹蟲草發酵液經離心收集菌體、遠紅外乾燥和超微粉碎得到的蛹蟲草菌絲粉，過120目篩，即得富含降脂有效成分與SOD的蛹蟲草酵素粉。經測定每克蛹蟲草酵素粉含有46mg亞油酸和160U的SOD酶活力。
[0074]實施例2、200L發酵罐生產富含降脂有效成分與SOD的蛹蟲草酵素粉
[0075]—、將蛹蟲草菌株轉接到同實施例1相同的斜面培養基26_28°C常規培養6天(5-7天均可)，得活化的蛹蟲草菌株。
[0076]二、將活化好的蛹蟲草菌株接種於種子培養基，26-28°C，250rpm(200-250rpm均可)振蕩培養3天(2-3天均可)，得蛹蟲草一級種子液。
[0077]種子培養基的組成:8g/100ml的葡萄糖,6g/100ml的酵母粉,7g/100ml的蛋白腖，0.4g/100ml的磷酸二氫鉀，0.04g/100ml的硫酸鎂，0.2g/100ml的消泡劑，餘量為水，pH值自然。
[0078]三、將一級種子液接入二級種子培養基，26_28°C培養3天(2_3天均可)，接種量2%,通氣1:0.8vvm,攪拌轉速400-500rpm,得蛹蟲草二級種子液。
[0079]二級種子培養基的組成:6g/100ml的葡萄糖,8g/100ml的酵母粉,8g/100ml的蛋白腖，0.4g/100ml的磷酸二氫鉀，0.04g/100ml的硫酸鎂，0.2g/100ml的消泡劑，餘量為水，pH自然。
[0080]四、將二級種子液接入裝有150L發酵培養基的200L發酵罐中，26_28°C培養4天(3-6天均可)，接種量5 %,通氣1:0.5vvm,攪拌轉速400rpm (350-450rpm均可),發酵結束即為蛹蟲草發酵液。
[0081]發酵培養基的組成:6g/100ml的葡萄糖,6g/100ml的酵母粉,6g/100ml的蛋白腖，0.4g/100ml的磷酸二氫鉀，0.04g/100ml的硫酸鎂，0.2g/100ml的消泡劑，餘量為水，pH值自然。
[0082]五、將蛹蟲草發酵液經離心收集菌體、遠紅外乾燥和超微粉碎得到的蛹蟲草菌絲粉，過120目篩，即得富含降脂有效成分與SOD的蛹蟲草酵素粉。
[0083]經測定每克蛹蟲草酵素粉含有50mg亞油酸和175U的SOD酶活力。
[0084]實施例3、1000L發酵罐生產富含降脂有效成分與SOD的蛹蟲草酵素粉
[0085]一、將蛹蟲草菌株轉接到同實施例1相同的斜面培養基26_28°C常規培養6天(5-7均可)，得活化的蛹蟲草菌株。
[0086]二、將活化好的蛹蟲草菌株接種於種子培養基，26-28°C，250rpm(200-250rpm均可)振蕩培養3天(2-3天均可)得蛹蟲草一級種子液。
[0087]種子培養基的組成:7g/100ml的葡萄糖,5g/100ml的酵母粉,6g/100ml的蛋白腖，0.3g/100ml的磷酸二氫鉀，(λ 03g/100ml的硫酸鎂，(λ 15g/100ml的消泡劑，餘量為水，pH值自然。
[0088]三、將一級種子液接入二級種子培養基，26_28°C培養3天(2_3天均可)，接種量2%,通氣1:0.6vvm,攪拌轉速400-500rpm,得到蛹蟲草二級種子液。
[0089]二級種子培養基的組成:5g/100ml的葡萄糖,6g/100ml的酵母粉,6g/100ml的蛋白腖，0.3g/100ml的磷酸二氫鉀，0.03g/100ml的硫酸鎂，0.15g/100ml的消泡劑，餘量為水，pH自然。
[0090]四、按步驟三的方法，將二級種子液再接入二級種子培養基製備得到蛹蟲草三級種子液。
[0091]五、將三級種子液接入裝有750L發酵培養基的1000L發酵罐中，26_28°C培養4天(3-6天均可),接種量4%,通氣1:0.4vvm,攪拌轉速400rpm(350-450rpm均可),發酵結束即為蛹蟲草發酵液。
[0092]發酵培養基的組成:4g/100ml的葡萄糖,5g/100ml的酵母粉,5g/100ml的蛋白腖，
0.3g/100ml的磷酸二氫鉀，0.03g/100ml的硫酸鎂，0.15g/100ml的消泡劑，餘量為水，pH自然。
[0093]六、將蛹蟲草發酵液經離心收集菌體、遠紅外乾燥和超微粉碎得到的蛹蟲草菌絲粉，過120目篩，即得富含降脂有效成分與SOD的蛹蟲草酵素粉。
[0094]經測定每克蛹蟲草酵素粉含有58mg亞油酸和198U的SOD酶活力。
[0095]實施例4、5000L發酵罐生產富含降脂有效成分與SOD的蛹蟲草酵素粉
[0096]一、將蛹蟲草菌株轉接到同實施例1相同的斜面培養基26_28°C常規培養6天(5-7天均可)，得活化的蛹蟲草菌株。
[0097]二、將活化好的蛹蟲草菌株接種於種子培養基，26-28°C，250rpm(200-250rpm均可)振蕩培養3天(2-3天均可)，得到蛹蟲草一級種子液。
[0098]種子培養基的組成:6g/100ml的葡萄糖,4g/100ml的酵母粉,5g/100ml的蛋白腖，
0.2g/100ml的磷酸二氫鉀，0.02g/100ml的硫酸鎂，0.lg/100ml的消泡劑，餘量為水，pH值自然。
[0099]三、將一級種子液接入二級種子培養基，26-28°C培養3天(2-3天均可)，接種量1%,通氣1:0.4vvm,攪拌轉速400?500rpm,得到蛹蟲草二級種子液。
[0100]二級種子培養基的組成:4g/100ml的葡萄糖,4g/100ml的酵母粉,4g/100ml的蛋白腖，0.2g/100ml的磷酸二氫鉀，0.02g/100ml的硫酸鎂，0.lg/100ml的消泡劑，餘量為水，pH自然。
[0101]四、按步驟三的方法，將二級種子液再接入二級種子培養基，製備得到蛹蟲草三級種子液。
[0102]五、按步驟三的方法，將三級種子液再接入二級種子培養基，製備得到蛹蟲草四級種子液。
[0103]六、將四級種子液接入裝有3850L發酵培養基的5000L發酵罐中，26-28 °C培養4天(3-6天均可)，接種量4%,通氣1:0.4vvm,攪拌轉速400rpm(350-450rpm均可)，發酵結束即為蛹蟲草發酵液。
[0104]發酵培養基的組成:4g/100ml的葡萄糖,5g/100ml的酵母粉,5g/100ml的蛋白腖，0.3g/100ml的磷酸二氫鉀，0.03g/100ml的硫酸鎂，0.15g/100ml的消泡劑，餘量為水，pH自然。
[0105]七、將蛹蟲草發酵液經離心收集菌體、遠紅外乾燥和超微粉碎得到的蛹蟲草菌絲粉，過120目篩，即得富含降脂有效成分與SOD的蛹蟲草酵素粉。
[0106]經測定每克蛹蟲草酵素粉含有65mg亞油酸和215U的SOD酶活力。
【權利要求】
1.一種製備蛹蟲草酵素粉的方法，包括如下步驟: (1)將活化的蛹蟲草菌株接種於種子培養基，26-28°C振蕩培養，得到蛹蟲草一級種子液； 所述種子培養基由溶劑和溶質組成，溶劑為水，溶質為葡萄糖、酵母粉、蛋白腖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和消泡劑；所述葡萄糖在所述種子培養基中的濃度為6-8g/100ml，所述酵母粉在所述種子培養基中的濃度為4-6g/100ml，所述蛋白腖在所述種子培養基中的濃度為5-7g/100ml，所述磷酸二氫鉀在所述種子培養基中的濃度為0.2-0.4g/100ml，所述硫酸鎂在所述種子培養基中的濃度為0.02-0.04g/100ml，所述消泡劑在所述種子培養基中的濃度為 0.1-0.2g/100ml ； (2)將蛹蟲草一級種子液接入二級種子培養基，26-28°C振蕩培養，得到蛹蟲草二級種子液； 所述二級種子培養基由溶劑和溶質組成，溶劑為水，溶質為葡萄糖、酵母粉、蛋白腖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和消泡劑；所述葡萄糖在所述二級種子培養基中的濃度為4-6g/100ml，所述酵母粉在所述二級種子培養基中的濃度為4-8g/100ml，所述蛋白腖在所述二級種子培養基中的濃度為4-8g/100ml，所述磷酸二氫鉀在所述二級種子培養基中的濃度為0.2-0.4g/100ml，所述硫酸鎂在所述二級種子培養基中的濃度為0.02-0.04g/100ml，所述消泡劑在所述二級種子培養基中的濃度為0.1-0.2g/100ml ； (3)根據放大工藝的需要，按步驟(2)的方法由上一級種子液製備得到下一級種子液； (4)將最終得到的種子液接入發酵培養基中，26-28°C振蕩培養，得到蛹蟲草發酵液； 所述發酵培養基由溶劑和溶質組成，溶劑為水，溶質為葡萄糖、酵母粉、蛋白腖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和消泡劑；所述葡萄糖在所述發酵培養基中的濃度為3-6g/100ml，所述酵母粉在所述發酵培養基中的濃度為4-6g/100ml，所述蛋白腖在所述發酵培養基中的濃度為4-6g/100ml，所述磷酸二氫鉀在所述發酵培養基中的濃度為0.2-0.4g/100ml，所述硫酸鎂在所述發酵培養基中的濃度為0.02-0.04g/100ml，所述消泡劑在所述發酵培養基中的濃度為 0.1-0.2g/100ml ； (5)將蛹蟲草發酵液離心收集菌體、乾燥和粉碎過篩，即得蛹蟲草酵素粉。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於:所述步驟(I)中，所述活化的蛹蟲草菌株是將蛹蟲草菌株轉接到斜面培養基上，26-28°C培養得到； 所述蛹蟲草菌株購自廣東省微生物菌種保藏中心，保藏號為GIM5.269。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特徵在於:所述步驟(I)中，所述振蕩培養的天數為2-3天，所述振蕩培養的轉速為200-250rpm ； 所述步驟(2)中，所述將蛹蟲草一級種子液接入二級種子培養基時的接種量為1_2%，所述培養的天數為2-3天，通氣量為1:0.4-0.8vvm，攪拌轉速為400-500rpm ； 所述步驟(4)中，所述將最終得到的種子液接入發酵培養基時的接種量為3-5%，所述培養的天數為3-6天，通氣量為1:0.3-0.5vvm，攪拌轉速為350_450rpm。
4.根據權利要求1-3任一所述的方法，其特徵在於:所述步驟(I)中，所述振蕩培養的天數為3天，所述振蕩培養的轉速為250rpm。
5.根據權利要求1-4任一所述的方法，其特徵在於:所述步驟(2)中，所述接種量為I %或2% ;所述培養的天數為3天；所述通氣量為1:0.4vvm、1:0.6vvm或1:0.8vvm。
6.根據權利要求1-5任一所述的方法，其特徵在於:所述步驟(3)中，所述下一級種子液為蛹蟲草三級種子液和/或四級種子液。
7.根據權利要求1-6任一所述的方法，其特徵在於:所述步驟(4)中，所述發酵培養基的體積為75L-3850L，具體為75L、150L、750L或3850L ;所述接種量為3 %、4 %或5 % ；所述培養的天數為4天；所述通氣量為1:0.3vvm、l:0.4vvm、l:0.5vvm ;所述攪拌轉速為400rpm。
8.根據權利要求1-7任一所述的方法，其特徵在於:所述步驟(I)中，所述活化的蛹蟲草菌株在將蛹蟲草菌株轉接到斜面培養基上之前還包括如下步驟:將所述保藏號為GIM5.269的蛹蟲草菌株在26°C在斜面培養基上見光培養7天，再經15°C避光培養5天，挑選呈現金黃色的單菌落。
9.由權利要求1-8任一所述的方法得到的蛹蟲草酵素粉。
10.權利要求9所述的蛹蟲草酵素粉在製備具有降脂活性和/或SOD酶活力的產品中的應用； 或， 權利要求9所述的蛹蟲草酵素粉在製備降血脂和/或抗衰老的產品中的應用。
【文檔編號】A61P11/00GK104173389SQ201410411396
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年8月20日 優先權日:2014年8月20日
【發明者】陳瑞琛, 駱梅香, 蔡玉鳳, 黃欽耿, 翁雪清, 黃建忠, 施巧琴, 吳松剛 申請人:廈門元尊生物工程有限公司