一種高富硒鈍頂螺旋藻的培養及其檢測方法
2024-01-26 01:04:15 1
專利名稱：一種高富硒鈍頂螺旋藻的培養及其檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種應用於保健食品、醫藥領域的高富硒鈍頂螺旋藻的培養及其方法。
背景技術：
螺旋藻是至今為止發現的營養最豐富、最全面的綠色食品，尤其蛋白質含量較高，胺基酸平衡，還含有豐富的必需脂肪酸(如r 一亞麻酸等)，其中藻藍蛋白是螺旋藻含量最高的生物活性物質之一，可達藻體質量的20%左右，具有良好的抗氧化、抗腫瘤等作用。硒是人體必需的微量元素之一，其生理功能主要表現為硒蛋白和硒酶的抗氧化作用。我國通過人群補硒成功防治了多種疾病，如克山病、大骨節病、心血管病、肝病及腫瘤等。利用生物轉化途徑生產具有較高生物活性的有機硒可避免無機硒的毒性，並可協
同天然活性分子的功能。因此，利用生物體富集有機硒的研究受到廣泛關注。而螺旋藻(Spirulina)易於大規模培養，作為硒生物有機化的載體前景將十分廣闊。何曉燕報導當亞硒酸鈉濃度小於100mg/L時，對藻體生長有一定的促進作用，其生物量、藻藍蛋白和別藻藍蛋白含量有增加，藻體硒含量及富硒係數有所增高。黃峙等也研究了加硒方式對藻體富硒的影響，在溫度33 35°C，光照強度40001x，光照時間24h，分步加硒，而且當亞硒酸鈉為300mg/L時,得到總硒含量為O. 46mg/g的螺旋藻體。同時研究表明不同種類的螺旋藻在不同的培養條件下具有不同的富硒能力。而市場上有機硒的來源有限，目前已經開發比較成熟的是富硒量較高的富硒酵母，陳福生等研究表明富硒酵母中中總硒含量為1.895mg/g，但酵母本身營養價值較低，而螺旋藻本身極具營養價值且對無機硒的耐受能力較強，而富硒大米，富硒茶有報導含硒量為20-30(^g/kg.同時市場上保健品如靈芝孢子分價格比較昂貴，因此迫切需要開發出低成本，高營養價值、高免疫力的高富硒的螺旋藻保健品。鑑於以上研究，本發明探索了易於操作、成本低廉並且富硒量及有機硒含量較高的富硒螺旋藻培養及其檢測方法。
發明內容
本發明的目的是獲得高富硒的螺旋藻培養及其檢測方法，以便開發出營養價值高、免疫力強的聞有機砸的螺旋操保健品，進一步提聞使用者的免疫力。為了實現上述目的本發明採用如下技術方案
一種高富硒鈍頂螺旋藻的培養方法，其特徵在於在溫度20 25°C、pH 8 10、光照強度2000 2500 lx、每天24h光照中培養，採用Zarrouk培養液，放在三角培養瓶中培養，接種密度為OD56tl = O. 25 O. 35，分次添加Na2SeO3至總硒量達270_300mg/L，待OD56tl為I. 2
I.5時收集藻體，冷凍乾燥，製得高富硒鈍頂螺旋藻。高富硒鈍頂螺旋藻的培養方法，包括以下步驟將鈍頂螺旋藻放在250ml的三角培養瓶中，採用Zarrouk培養液，在溫度20 25°C、pH 8 10、最佳光照強度2000_25001χ、每天24h光照中培養，接種密度為OD56tl = O. 25 O. 35，接種體積150ml，然後放在光照培養箱中，當OD560為O. 7 O. 8時第一次加Na2SeO3 13. 5mg-15mg,當藻液OD560為O. 8-0. 9時第二次添加 Na2SeO3 13. 5mg-15mg,當藻液 OD56tl 為 O. 9-1. O 時第三次添加 Na2Se0313. 5mg-15mg繼續培養，待OD56tl為I. 2-1. 5時收集鈍頂螺旋藻，培養周期為ll-13d，用蒸餾水洗2_3次鈍頂螺旋藻，冷凍乾燥後製得高富硒鈍頂螺旋藻。高富硒鈍頂螺旋藻的檢測方法，包括以下步驟用原子螢光光譜法檢測總硒及有機硒的含量；
(1)總硒測定
取O. 5g富硒螺旋藻，加9-llml消化液搖勻後，所述的消化液為濃硝酸高次氯酸=4:1配置得到，放置過夜，置於電熱板上加熱至有機物分解或色澤加深，補加I 3ml消化液繼續消化，控制溫度低於200°C，如此反覆至消化液澄清，有HClO4白煙冒出，繼續加熱至溶液I 3ml，用60%濃HCL定容在25ml容量瓶中，然後加O. 5%NaBH4至反應終點，用AFS-3100型雙道原子螢光光度計測量總硒含量；
(2)無機硒的測定
取O. 5g富硒螺旋藻,加IOml 20ml的蒸懼水,置於加熱板上加熱沸騰20min 30min,冷卻離心，保存上清液，殘渣再重複一次操作，合併上清液，上清液進行和總硒測定同樣的方法消化測定，按4:1加消化液搖勻後，放置過夜，置於電熱板上加熱至有機物分解或色澤加深，補加l_2ml消化液繼續消化，控制溫度低於200°C，如此反覆至消化液澄清，有HClO4白煙冒出，繼續加熱至溶液l_2ml，用60%濃HCL定容在25ml容量瓶中，然後加O. 5%NaBH4至反應終點，用AFS-3100型雙道原子螢光光度計測量無機硒含量，然後總硒減去無機硒即是有機硒。(3)硒及胺基酸相對含量檢測方法
將O. 2g藻粉放在共振盤上，通過手握傳感器測定樣品的微磁場的頻率和能量，經儀器放大，計算機處理後和設與儀器內部的營養指標的標準「量子共振譜」比較，輸出相應的由負到正的相對量價值。本發明的有益效果
(O富硒螺旋藻中總硒及有機硒測定結果在本發明條件下培養鈍頂螺旋藻，添加亞硒酸鈉累計270mg 300mg/L，每次按技術路線測富硒螺旋藻的總硒和有機硒含量，重複3次，結果表明總硒含量2mg/g 2. 5mg/g,有機硒佔總硒的比例為68% 80%。(2)硒、必需胺基酸、免疫功能相對含量比較結果量子共振法檢測結果顯示培養得到的富硒螺旋藻比普通螺旋藻及靈芝孢子粉硒含量顯著提高，且富硒培養後八種必需胺基酸的含量比著普通螺旋藻中的含量也明顯提高，同時相對靈芝孢子粉中必需胺基酸含量而言，富硒螺旋藻中這些胺基酸的含量顯著增高，而且富硒螺旋藻的免疫能力遠遠高於普通螺旋藻和靈芝孢子粉的免疫能力。這表明富硒培養不僅能夠提高總硒及有機硒的含量，也可以使必需胺基酸、免疫能力得到提高。表I富硒螺旋藻中總硒及有機硒測定結果；表2 硒、必需胺基酸、免疫功能相對含量比較圖。表I:
權利要求
1.一種高富硒鈍頂螺旋藻的培養方法，其特徵在於在溫度20 25°C、pH 8 10、光照強度2000 2500 lx、每天24h光照中培養，採用Zarrouk培養液，放在三角培養瓶中培養，接種密度為OD56tl = O. 25 O. 35，分次添加Na2SeO3至總硒量達270_300mg/L，待OD56tl為I.2 I. 5時收集藻體，冷凍乾燥，製得高富硒鈍頂螺旋藻。
2.根據權利要求I所述的高富硒鈍頂螺旋藻的培養方法，其特徵在於包括以下步驟將鈍頂螺旋藻放在250ml的三角培養瓶中，採用Zarrouk培養液，在溫度20 25°C、pH 8 10、最佳光照強度2000-25001x、每天24h光照中培養，接種密度為OD56tl = O. 25 O.35，接種體積150ml，然後放在光照培養箱中，當OD56tl為O. 7 O. 8時第一次加Na2SeO313.5mg-15mg,當藻液 OD560 為 O. 8-0. 9 時第二次添加 Na2SeO3 13. 5mg_15mg,當藻液 OD560 為O.9-1. O時第三次添加Na2Se0313. 5mg-15mg繼續培養，待OD56tl為I. 2-1. 5時收集鈍頂螺旋藻，培養周期為ll-13d，用蒸餾水洗2-3次鈍頂螺旋藻，冷凍乾燥後製得高富硒鈍頂螺旋藻。
3.—種檢測權利要求書I或2所述的高富硒鈍頂螺旋藻的檢測方法，其特徵在於包括以下步驟用原子螢光光譜法檢測總硒及有機硒的含量； (1)總硒測定 取O. 5g富硒螺旋藻，加9-llml消化液搖勻後，所述的消化液為濃硝酸高次氯酸=4:1配置得到，放置過夜，置於電熱板上加熱至有機物分解或色澤加深，補加I 3ml消化液繼續消化，控制溫度低於200°C，如此反覆至消化液澄清，有HClO4白煙冒出，繼續加熱至溶液I 3ml，用60%濃HCL定容在25ml容量瓶中，然後加O. 5%NaBH4至反應終點，用AFS-3100型雙道原子螢光光度計測量總硒含量； (2)無機硒的測定 取O. 5g富硒螺旋藻,加IOml 20ml的蒸懼水,置於加熱板上加熱沸騰20min 30min,冷卻離心，保存上清液，殘渣再重複一次操作，合併上清液，上清液進行和總硒測定同樣的方法消化測定，按4:1加消化液搖勻後，放置過夜，置於電熱板上加熱至有機物分解或色澤加深，補加l_2ml消化液繼續消化，控制溫度低於200°C，如此反覆至消化液澄清，有HClO4白煙冒出，繼續加熱至溶液l_2ml，用60%濃HCL定容在25ml容量瓶中，然後加O. 5%NaBH4至反應終點，用AFS-3100型雙道原子螢光光度計測量無機硒含量，然後總硒減去無機硒即是有機硒； (3)硒及胺基酸相對含量檢測方法 將O. 2g藻粉放在共振盤上，通過手握傳感器測定樣品的微磁場的頻率和能量，經儀器放大，計算機處理後和設與儀器內部的營養指標的標準「量子共振譜」比較，輸出相應的由負到正的相對量價值。
全文摘要
本發明公開了一種高富硒鈍頂螺旋藻的培養及其檢測方法，本發明在溫度20～25℃、pH8～10、光照強度2000～2500lx、每天24h光照中培養，採用Zarrouk培養液，放在三角培養瓶中培養，接種密度為OD560=0.25～0.35，分次添加Na2SeO3至總硒量達270-300mg/L，待OD560為1.2～1.5時收集藻體，冷凍乾燥，製得高富硒鈍頂螺旋藻。本發明方法培養條件易於控制，而且螺旋藻繁殖快，生長周期短，成本低，總硒含量可達2.0mg-2.5mg/g，有機硒含量達68-80%，且必須胺基酸含量及免疫力均有較大提高。
文檔編號C12R1/89GK102876579SQ201210275399
公開日2013年1月16日 申請日期2012年8月3日 優先權日2012年8月3日
發明者黃蓓, 王鑫焱, 沈敬連, 武子涵, 劉亞華 申請人:安徽大學, 亳州市貢藥飲片廠