一種鴨瘟活疫苗及其製備方法
2024-01-24 14:55:15
專利名稱：一種鴨瘟活疫苗及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種鴨瘟活疫苗及其製備方法，屬獸用生物製品領域。
背景技術：
鴨痕(duck plague),也稱為鴨病毒性腸炎(duck virus enteritis),是由鴨腸炎病毒(duck enteritis virus)或稱鴨痕病毒(duck plague virus)或稱鴨痕皰疫病毒(duck plague herpesvirus)引起的鴨、鵝等雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性的傳染病，其特徵是血管損傷、組織出血、消化道黏膜糜爛、淋巴器官出現病變、實質器官退行性病變(Saif Y M.禽病學(第11版).高福，蘇敬良譯.北京:中國農業出版社，2005:389-398)。1923 年荷蘭首次報導了該病(Baudet，A.E.R.F.1923.Mortality in ducks inthe Netherlands caused by a filterable virus.Fowl plague.Tijdschr Diergeneeskd50:455 - 459.)。1957年，黃引賢在我國最早報導該病並分離到病毒(黃引賢.擬鴨瘟的研究.華南農學院學報 .1959，1:67-78.)。該病發病率和死亡率很高，對水禽養殖業危害很大。目前預防鴨瘟的主要措施為疫苗免疫接種。常用的疫苗有滅活疫苗和活疫苗。鴨瘟滅活疫苗是由鴨瘟病毒鴨胚適應毒滅活後加油佐劑乳化而成。鴨瘟活疫苗是由鴨瘟病毒雞胚化弱毒培養物，加適宜穩定劑，經冷凍真空乾燥而成(中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典二〇一〇年版(三部).中國農業出版社，2011，本發明以下簡稱《獸藥典》)。鴨瘟病毒雞胚化弱毒是鴨瘟病毒經過鴨胚連續傳代10代後，再經雞胚傳代60多代致弱，對鴨的致病力減弱。該病毒的全基因組約為158091bp (GenBank N0.EU082088)。本發明使用的原始種毒為中國獸醫微生物菌種保藏管理中心(CVCC)保存的鴨瘟皰疹病毒強毒CVCC AV1221株，全基因組為162131bp(GenBank N0.JQ673560)，與鴨瘟病毒雞胚化弱毒相比，存在兩個額外的大片段(3513bp和528bp)。注:本發明所涉及的鴨痕(duck plague),也稱為鴨病毒性腸炎(duck virusenteritis),其病原為鴨腸炎病毒(duck enteritis virus) /或稱鴨痕病毒(duck plaguevirus) / 或稱鴨痕皰疫病毒(duck plague herpesvirus)。
發明內容
本發明的目的是培育一株免疫原性和安全性都好的鴨腸炎病毒(duck enteritisvirus)弱毒病毒株，並用此弱毒株病毒作為鴨瘟活疫苗的生產毒種，製備出一種鴨瘟活疫苗提供鴨瘟防疫使用。本發明的技術方案1.一株鴨腸炎病毒(duck enteritis virus)是一株弱毒株,該株病毒已於2013年04月26日送交北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號CGMCC N0.7460。2.該鴨腸炎病毒CGMCC N0.7460是鴨瘟皰疹病毒強毒株CVCC AV1221經雞胚成纖維細胞連續傳代、克隆純化得到的弱毒株病毒；CGMCC N0.7460毒株全基因組為160330bp，與鴨瘟皰疹病毒強毒CVCC AV1221株基因組(GenBank N0.JQ673560)相比，缺失了 145818-147618 位的核苷酸共 1801bp。3.一種鴨瘟疫苗主要含有鴨腸炎病毒CGMCC N0.7460株，其製備方法主要為:將鴨腸炎病毒CGMCC N0.7460株接種於SPF雞胚製備的CEF單層細胞，培養至當病變率達75%以上收穫病毒培養物，加常規凍幹穩定劑，混勻後再經冷凍真空乾燥製成鴨瘟活疫苗。給鴨接種有效劑量的疫苗，能使接種的鴨獲得對鴨瘟皰疹病毒強毒株有效的免疫力。4.該鴨腸炎病毒CGMCCN0.7460株的基因組145818-147618位缺失區域按常規生物學技術插入不同的水禽病毒的保護性抗原基因片段構建成相應的重組病毒，分別用於製備活載體疫苗，同時預防鴨瘟和相應的水禽疾病。本發明具體方式1.生產種毒1.1原始種毒來源原始種毒為中國獸醫微生物菌種保藏管理中心(CVCC)保存的鴨瘟皰疹病毒強毒株，目錄編碼為CVCC AV1221 (見中國獸醫藥品監察所，中國獸醫微生物菌種保藏管理中心編著.中國獸醫菌種目錄第二版，中國農業科學技術出版社，2002，pl38)。1.2弱毒株的培育
鴨痕病毒AV1221株經無特定病原體(Specific pathogen free, SPF)雞胚成纖維細胞(chick embryo fibroblast, CEF)連續傳代80代,克隆純化得到的弱毒株,命名為鴨腸炎病毒(duck enteritis virus)DEVC86株,該毒株已於2013年04月送交北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號CGMCC N0.7460。1.3生物學特性1.3.1繁殖特性鴨瘟病毒DEVC86株接種SPFCEF細胞，感染複數(Μ0Ι)為0.01，測定病毒一步生長曲線，結果見表1，培養48小時病毒含量達最高，為IO6 8TCID5tlA).1ml，說明該病毒在CEF中具有良好的繁殖特性。表I鴨痕皰疫病毒DEVC86株不同培養時間的病毒含量
權利要求
1.一株鴨腸炎病毒病毒,其特徵在於該鴨腸炎病毒(duck enteritis virus)是一株弱毒株，該株病毒已於2013年04月26日送交北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號CGMCCN0.7460。
2.如權利要求1所述一株鴨腸炎病毒，其特徵在於該鴨腸炎病毒CGMCCN0.7460是鴨瘟皰疹病毒強毒株CVCCAV1221經雞胚成纖維細胞連續傳代、克隆純化得到的弱毒株病毒；CGMCCN0.7460毒株全基因組為160330bp，與鴨瘟皰疹病毒強毒CVCCAV1221株基因組(GenBankN0.JQ673560)相比，缺失了 145818-147618 位的核苷酸共 1801bp。
3.一種鴨瘟活疫苗，其特徵在於該疫苗主要含有鴨腸炎病毒CGMCCN0.7460株。
4.一種如權利要求3所述鴨瘟活疫苗的製備方法，其特徵在於是將鴨腸炎病毒CGMCCN0.7460株接種於SPF雞胚製備的CEF單層細胞，培養至當病變率達75%以上收穫病毒培養物，加常規凍幹穩定劑，混勻後再經冷凍真空乾燥製成鴨瘟活疫苗。
5.如權利要求3所述一種鴨瘟活疫苗的應用，其特徵在於給鴨接種有效劑量的疫苗，能使接種的鴨獲得對鴨瘟皰疹病毒強毒株有效的免疫力。
6.如權利要求1所述一株鴨腸炎病毒的應用，其特徵在於該鴨腸炎病毒CGMCCN0.7460株的基因組145818- 147618位缺失區域按常規生物學技術插入不同的水禽病毒的保護性抗原基因片段構建成相應的重組病毒，分別用於製備活載體疫苗，同時預防鴨瘟和相應的水禽疾病。
全文摘要
本發明涉及一種鴨瘟活疫苗及其製備方法。所提供的鴨腸炎病毒是人工致弱的鴨腸炎病毒CGMCC No.7460(DEVC86)株，能在CEF繁殖，病毒含量高，製造疫苗方便；雛鴨安全，對雞不致死，具有良好的生物安全性；免疫原性好，能有效地保護各品種鴨抵抗鴨瘟感染；該鴨腸炎病毒CGMCC No.7460株的基因組145818-147618位缺失區域按常規生物學技術插入不同的水禽病毒的保護性抗原基因片段構建成相應的重組病毒。
文檔編號C12R1/93GK103224913SQ20131016557
公開日2013年7月31日 申請日期2013年5月8日 優先權日2013年5月8日
發明者楊承槐, 李俊平, 李啟紅, 張廣川, 劉丹, 李嶺, 毛婭卿, 李慧姣, 夏業才 申請人:中國獸醫藥品監察所