同時測定14種維生素含量的高效液相色譜分析方法與流程

2023-05-27 22:08:51 2

本發明屬於分析技術領域，涉及一種利用高效液相色譜（HPLC）法同時測定14種維生素含量的方法。

背景技術：
維生素可維持生命體的正常生理機能和物質能量代謝，是人與動物重要的營養素之一。其按照溶解性可分為水溶性維生素（B族維生素和維生素C）與脂溶性維生素（維生素A、維生素D、維生素E、維生素K）兩類。隨著經濟的快速發展，人們生活水平的不斷提高、健康意識的逐步加強，複合維生素產品在市場中愈來愈受到青睞，種類紛繁的複合維生素食品、保健品、藥品等層出不窮，所含維生素的種類也日益增多。但由於維生素種類繁多，對溫度、溼度、光照等條件敏感，最為重要的是各維生素的溶解度不盡相同，現有的含量測定方法多以單一維生素測定為主，存在多種維生素含量測定需分別進行、操作繁瑣耗時等缺點。也有文獻報導同時測定幾種脂溶性維生素或水溶性維生素含量的方法，其仍然存在維生素種類檢測不全等缺點，而迄今為止尚未見同時檢測14種維生素（包括4種脂溶性維生素和10種水溶性維生素）含量的方法。

技術實現要素：
有鑑於此，本發明的目的在於提供一種同時檢測14種維生素（包括4種脂溶性維生素和10種水溶性維生素）含量的方法，可廣泛應用於醫藥與食品行業中複合維生素產品的質量控制，有效地節約檢測成本與時間。經研究，本發明提供如下技術方案：同時測定14種維生素含量的高效液相色譜分析方法，包括以下步驟：1）色譜條件色譜柱填充劑：十八烷基矽烷鍵合矽膠；流動相及洗脫方式：以0.1M醋酸鈉溶液為流動相A，以甲醇為流動相B，按以下程序進行梯度洗脫：0-4min：流動相為體積比95:5的流動相A-流動相B混合液；4-10min：流動相由體積比95:5的流動相A-流動相B混合液線性變化為體積比55:45的流動相A-流動相B混合液；10-18min：流動相由體積比55:45的流動相A-流動相B混合液線性變化為體積比0:100的流動相A-流動相B混合液；18-50min：流動相為體積比0:100的流動相A-流動相B混合液；50-55min：流動相由體積比0:100的流動相A-流動相B混合液線性變化為體積比95:5的流動相A-流動相B混合液；55-60min：流動相為體積比95:5的流動相A-流動相B混合液；流速：按以下程序採用梯度流速：0-10min：流速為1.0ml/min；10-18min：流速由1.0ml/min線性變化為1.5ml/min；18-50min：流速為1.5ml/min；50-55min：流速由1.5ml/min線性變化為1.0ml/min；55-60min:流速為1.0ml/min；檢測波長：按以下程序採用變化波長：0-10min：檢測波長為266nm；10-12min：檢測波長為280nm；12-24min：檢測波長為325nm；24-32min：檢測波長為266nm；32-60min：檢測波長為325nm；2）供試品溶液的製備取供試品，製成供試品溶液；3）對照品溶液的製備取維生素A、維生素D3、維生素E和維生素K3，精密稱定，加入乙酸乙酯使溶解，加入吐溫-80混勻，用0.1M醋酸鈉溶液稀釋並定容，作為脂溶性維生素對照品貯備液；取維生素B1、維生素B2、維生素B6、維生素B12、煙醯胺、煙酸、葉酸、右泛醇、生物素和維生素C，精密稱定，加水使溶解，精密加入脂溶性維生素對照品貯備液，用水稀釋並定容，作為對照品溶液；4）測定精密量取供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密量取對照品溶液注入液相色譜儀，同法測定；按外標法以峰面積計算供試品中各維生素的含量。優選的，所述供試品溶液的製備採用以下方法：a.供試品為固體樣品：取供試品，研細，精密稱定，置100ml棕色量瓶中，加入乙酸乙酯10ml，超聲5min，加入吐溫-805ml，混勻，加入0.1M醋酸鈉溶液25ml，超聲5min，用0.1M醋酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，所得濾液作為供試品溶液；b.供試品為含水注射液：精密量取供試品，置100ml棕色量瓶中，用0.1M醋酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；c.供試品為除含水注射液外的其它液體樣品：精密量取供試品，置100ml棕色量瓶中，加入體積比2:1的乙酸乙酯-吐溫混合液15ml，超聲5min，加入0.1M醋酸鈉溶液25ml，超聲5min，用0.1M醋酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，所得濾液作為供試品溶液。優選的，所述對照品溶液的製備採用以下方法：取維生素A100,000i.u.、維生素D3100,000i.u、維生素E200mg和維生素K3100mg，精密稱定，置100ml棕色量瓶中，加入乙酸乙酯10ml使溶解，加入吐溫-805ml，混勻，用0.1M醋酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，作為脂溶性維生素對照品貯...