一種改善睡眠的藥物的製作方法

2023-10-27 00:51:32

專利名稱：一種改善睡眠的藥物的製作方法
技術領域：
本發明屬於一種藥物，特別是關於一種改善睡眠的生物製劑與中藥合成的藥物。
背景技術：
人一生中有三分之一的時間是在睡眠中度過，五天不睡眠人就會死去，可見睡眠是人的生理需要。睡眠作為生命所必須的過程，是機體復原、整合和鞏固記憶的重要環節，是健康不可缺少的組成部分。睡眠是指復發的惰性和不反應狀態，睡眠時意識水平降低或消失，大多數的生理活動和反應進入惰性狀態。通過睡眠，使疲勞的神經細胞恢復正常的生理功能，精神和體力得到恢復。睡眠時垂體前葉生長激素分泌明顯增高，有利於促進機體生長，並使核蛋白合成增加，有利於記憶的儲存。睡眠障礙是指睡眠量的異常及睡眠質的異常，或在睡眠時發生某些臨床症狀，如睡眠減少或睡眠過多，夢行症等，影響入睡或保持正常睡眠能力的各種障礙，也包括睡眠過度，或異常的睡眠相關的行為。睡眠障礙是睡眠中樞興奮和抑制失調產生的睡眠-覺醒紊亂，致大腦控制睡眠區域神經元受影響的結果。睡眠功能障礙常會導致中樞神經系統，尤其是大腦皮質活動失常，神經細胞因持續興奮、過度消耗而致功能衰竭。
依據睡眠的病理生理學，睡眠障礙國際分類如下1.睡眠失調A內因性睡眠障礙；B外因性睡眠障礙；C睡眠的晝夜節律障礙。
2.異態睡眠指睡眠中出現了異常的發作性事件，如睡行症、夢魘、夜驚等。A覺醒障礙；B清醒→睡眠過渡期障礙；C與REM有關的異態睡眠；D其它異態睡眠。
3.軀體或精神疾病性睡眠障礙A與精神疾病相關的睡眠障礙；B與神經疾病相關的睡眠障礙；C與其它疾病相關的睡眠問題。
祖國傳統醫學認為，人的正常睡眠由「心」(心經、心系、心陰、心陽、心氣、心血)所主持，再由五臟、六腑、經絡分工合作，協調的生理功能相維繫共同完成。「心」受外邪侵襲，臟腑、經絡機能紊亂，氣血陰陽的相對平衡失調，是發生睡眠障礙的基本原因。
「心」實乃神之本也，神之舍也，生命之根本也。「心」主宰著人體各項機能活動，如五臟六腑的生理，四肢百骸，五官九竅的功能活動，經絡的餓內傳外導，喜、怒、哀、樂情志思維的變化等等，都是在「心」的功能支配下發揮其作用。人能夠正常睡眠以及發生睡眠障礙，「心」是至關重要，總其大成的。臨床較常見的睡眠障礙的成因有心腎不交，心脾兩虛，心膽虛怯。總之，人的正常睡眠是「心」(心經、心系、心陰、心陽、心氣、心血)責無旁貸之職，睡眠障礙也多責之於「心」。由於睡眠障礙的病因病機複雜多樣，治療也要綜合考慮，全面施治。現有的一些藥物要麼只注重治療，要麼只注重調節，往往治標不治本，達不到有效、安全，吸收快、顯效快，白日無殘留作用，無成癮和依賴作用的綜合效果。

發明內容
本發明的目的是提供一種改善睡眠的藥物，它是生物製劑與中藥合成的藥物，此藥物將現代醫學和傳統醫學科學、巧妙的結合起來，發揮兩者的協同作用，它療效好，對睡眠障礙的治療起到獨特的治療作用，並且無毒副作用，服用方便。
本發明的技術方案是設計一種改善睡眠的藥物，其特徵是它包括α-甘露聚糖肽20％-40％；褪黑素0.2％-5％；補腦安神類中藥55％-75％。
所述的藥物包括α-甘露聚糖肽35％-50％；褪黑素0.8％-3％；補腦安神類中藥30％-40％；補脾益氣、清熱解毒類中藥10％-30％。
所述的藥物包括α-甘露聚糖肽10％-30％；褪黑素0.8％-3％；補腦安神類中藥20％-60％；補脾益氣、清熱解毒類中藥10％-30％；補血活血、清熱瀉火類中藥10％-30％。
所述的藥物包括α-甘露聚糖肽30％-50％；褪黑素0.8％-2％；補腦安神類中藥20％-40％；補脾益氣、清熱解毒類中藥10％-20％；補血活血、清熱瀉火類中藥10％-30％；疏肝昇陽類中藥5％-20％。
所述的補腦安神類中藥有刺五加、遠志、乾薑、何首烏、淫羊藿、紅棗、丹參、酸棗仁、硃砂、柏子仁，夜交藤、靈芝、合歡皮；所述的補脾益氣、清熱解毒類中藥有甘草、大棗、黨參、白朮、茯苓、茵陳、大黃、梔子、杏仁、寇仁、砂仁、扁豆、車前子、紫河車；所述的補血活血、清熱瀉火類中藥有當歸、知母、茯苓、黃芩、大黃、熟地、雞血藤、石膏、香附、川芎；所述的疏肝昇陽類中藥有柴胡、白芍、枳實、甘草、黃芪、香附。
所述的藥物1000g中α-甘露聚糖肽400g、褪黑素20g、刺五加100g、遠志60g、乾薑50g、何首烏30g、淫羊藿30g、紅棗50g、丹參30g、酸棗仁30g、硃砂30g、柏子仁50g、夜交藤40g、靈芝40g、合歡皮40g。
所述的藥物1000g中α-甘露聚糖肽400g、褪黑素20g、刺五加50g、遠志40g、乾薑30g、何首烏20g、淫羊藿20g、紅棗30g、丹參25g、酸棗仁25g、硃砂25g、柏子仁25g、夜交藤35g、靈芝35g、合歡皮35g、甘草30g、黨參10g、白朮20g、茯苓15g、茵陳20g、大黃10g、梔子10g、杏仁5g、寇仁10g、砂仁10g、扁豆15g、車前子20g、紫河車10g。
所述的藥物1000g中α-甘露聚糖肽250g、褪黑素20g、刺五加30g、遠志20g、乾薑20g、何首烏10g、淫羊藿10g、紅棗20g、丹參15g、酸棗仁25g、硃砂25g、柏子仁45g、夜交藤35g、靈芝25g、合歡皮35g、甘草10g、黨參10g、白朮20g、茯苓20g、茵陳10g、大黃10g、梔子10g、杏仁5g、寇仁10g、砂仁10g、扁豆15g、車前子20g、紫河車10g，當歸30g、知母20g、黃芩25g、大黃20g、熟地20g、雞血藤30g、石膏30g、香附40g、川芎40g。
所述的藥物1000g中α-甘露聚糖肽300g，褪黑素20g、刺五加20g、遠志10g、乾薑10g、何首烏20g、淫羊藿10g、紅棗20g、丹參15g、酸棗仁15g、硃砂15g、柏子仁25g、夜交藤15g、靈芝15g、合歡皮15g、黨參10g、白朮20g、茯苓20g、茵陳10g、大黃10g、梔子10g、杏仁5g、寇仁10g、砂仁10g、扁豆15g、車前子20g、紫河車10g、當歸30g、知母20g、黃芩25g、大黃20g、熟地20g、雞血藤20g、石膏20g、川芎20g、柴胡20g、白芍20g、枳實30g、甘草20g、黃芪30g、香附30g。
本發明的特點是本發明以祖國醫學「腦為生命之本」的經典理論為依據，採用補腦安神的中藥刺五加、遠志等為君藥，調節中樞神經系統興奮和抑制過程，改善大腦供血狀況，促進腦細胞代謝和修復；以甘草、大棗等補脾益氣，清熱解毒中藥，補中益氣，養血安神，為臣藥；當歸、知母、茯苓佐等補血活血、清熱瀉火類中藥以補血活血，清熱瀉火，生津潤燥，利水滲溼，健脾補中，增強君藥的作用；使柴胡等疏肝昇陽類中藥和解毒氣，疏肝昇陽。諸藥配伍合理，共同起效，有健脾養心，益氣，滋陰補腎，育陰潛陽，肝腎同補，養心安神的作用；西藥褪黑素是人體內清除自由基的衛士，具有強大的護腦功能，還能調節人體晝夜節律起搏器，使睡眠-覺醒節律同步化、正常化，使人體某些生理指標的波動節律也與明暗周期同步化；α-甘露聚糖肽是一種生物反應調節器，能調節機體各系統功能，使其處於平衡協調的狀態，這對機體正常的生理機能是極其重要的，另外它還具有強身健體的功效，增強機體對其它疾病的抵抗力。這樣的處方組成發揮了中藥辯證施治，全面綜合的治療優勢，同時結合西藥高效、靶向、確切的特點，兩者相輔相成，對睡眠障礙起到協同高效的改善作用。
具體實施例方式
由於本發明將α-溶血鏈球菌菌種搭載返回式太空飛行器(宇宙飛船或返回式衛星)，利用太空中微(零)重力、宇宙射線、交變磁場、高真空、高熱深冷等因素的綜合作用，使菌株的DNA雙鏈結構斷裂，基因組發生重排，從而產生新的菌株。返回地面後，對經過太空搭載的菌株進行培養和篩選，通過研究其形態特徵、培養特徵、生理生化反應、代謝產物、遺傳性狀及蛋白表達、遺傳穩定性、中試生產指標等內容，優選出其中的正變異、遺傳特性穩定的菌種，經培養發酵後得到治療潰瘍性結腸炎的藥物。該菌種已經在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，編號為CGMCCNo.1082。
特別是α-溶血鏈球菌D33菌株經太空搭載誘變，地面上的篩選、分離和純化後，選育出發酵單位更高、所分泌的甘露聚糖肽含量更高的高產、優質菌株T33株。通過中國科學院微生物研究所對T33菌株及D33菌株的全細胞蛋白SDS-聚丙烯醯胺凝膠(SDS-PAGE)分析和菌株的基因組DNA限制性酶切分析(RFLP/PFGE)比較，可以證明空間誘變及地面篩選出的T33菌株其基因有變異。該突變菌株在遺傳上穩定，有較強的生產適應性，由其發酵產生的甘露聚糖肽含量提高，多肽含量比國家標準(80％)提高3至5倍，西安市藥品檢驗所送樣測定達到271.6％，發酵含量比對照組產物含量平均高出三倍以上。該菌種經過神舟系列飛船航天搭載太空誘變，由北京中科院微生物所和西北大學生物系對菌種進一步篩選培養育種形成遺傳性質穩定，變異特徵明顯的高產高效菌種。
(見附件材料1陝西省科學技術廳陝西省科學技術成果鑑定證書材料附件材料2太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽生產菌株經「神舟三號」飛船搭載公證書。
附件材料3太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽生產菌株經「神舟三號」飛船搭載返回地面篩選報告附件材料4中國科學院微生物所關於「神舟三號」飛船搭載太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽生產菌株與地面對照菌的形態生理生化鑑定報告書附件材料5中國科學院微生物所關於「神舟三號」飛船搭載太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽生產菌株與地面對照菌的SDS-PAGE及RFLP/PFGE分析鑑定報告書附件材料6陝西省藥品檢驗所「神舟三號」太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽口服液檢測報告附件材料7科技查新報告複印件附件材料8中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏菌種保藏受理通知書)本發明的菌種選育在α-溶血鏈球菌生長規律的基礎上，選定較合適生長時期的菌種，採用平皿生長的菌落、浸入其它物質中的菌懸液、帶菌的砂土等方法，於2002年3月25日搭載「神舟三號」宇宙飛船。在太空軌道(近地點高度200公裡、遠地點高度350公裡)進行了6天零18小時的在軌飛行。太空的特殊條件主要體現為微重力、高真空、高輻射、交變磁場等特殊環境。在外層空間飛行的菌種被置於一個與地球上的生態環境完全不同的環境中，主要包括來自磁場俘獲的電子、質子及低能重粒子；來自銀河系的宇宙射線如質子、粒子及更重的高能重粒子；來自太陽磁暴的質子及重粒子等。這些粒子作用於微生物細胞核中的DNA雙鏈結構，可導致雙鏈斷裂。微重力、高真空環境可使DNA的鹼基序列發生重組，即基因組的重組和變異。變異後產生的新菌株，其形態特徵、培養特徵、生理生化反應、代謝產物、遺傳性狀及蛋白表達、中試生產指標等均會發生不同程度的變化。在宇宙飛船返回地面後，經過進一步篩選，僅優選出其中0.2％的正變異且遺傳特性穩定的菌株，經培育製成生產菌種。這種經航天搭載誘變後選育出的菌種已經在在2003年12月29日由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，編號為CGMCCNo.1082。
實驗及中試生產結果表明，經空間誘變後的新型太空菌種在遺傳特性上穩定，有較強的生產適應性，由其發酵產生的甘露聚糖肽含量提高，多肽含量比國家標準(80％)提高3至5倍，西安市藥品檢驗所送樣測定達到271.6％，發酵含量比對照組產物含量平均高出三倍以上，發酵周期大大縮短。
製備方法太空誘變菌種生產甘露聚糖肽的製備過程本發明所述的太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽是由以下方法製備太空菌種製備---一級發酵---二級發酵-----發酵液提純，最終生產出甘露聚糖肽。
①太空菌種製備以經過空間誘變育種精心選育的a-溶血鏈球菌作為生產菌種。
A.斜面種子培養基牛肉膏0.5％，酵母膏0.6％，蛋白腖0.5％，葡萄糖0.4％，氯化鈉0.5％，瓊脂3％，綿羊血8％；pH7.4。
斜面種子培養基滅菌溫度121℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.12Mpa。
啟封菌種冷凍管，用無菌肉湯培養基稀釋，在無菌條件下接入血斜面，接種後置38℃恆溫培養30小時。
B.肉湯種子培養基牛肉膏0.5％，酵母膏0.6％，蛋白腖0.5％，葡萄糖0.4％，氯化鈉0.5％；pH7.4。
肉湯種子培養基滅菌溫度121℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.12Mpa。
將培養好的斜面菌種在無菌條件下按9％接種量，接入肉湯種子培養基內，38℃恆溫培養30小時。
②發酵過程發酵培養基牛肉膏0.4％，酵母膏0.5％，蛋白腖0.5％，葡萄糖0.4％，氯化鈉0.5％。
發酵培養基滅菌溫度121℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.12Mpa。
A.一級發酵罐將優良的肉湯菌種在無菌條件下按10％接種量，接入一級種子罐，在29℃恆溫培養30小時，罐壓不超過0.02Mpa，通氣量以能翻動培養液為宜，連續充分攪拌。
B.二級發酵罐將一級發酵培養液在無菌條件下按20％接種量，接入發酵罐，在29℃恆溫培養70小時，罐壓不0.02Mpa，滅活放罐。滅活採用加溫使發酵液溫度達到100℃，保溫60分鐘，冷卻靜置。
③提取過程a、發酵液進行濃縮，使濃縮液體積與發酵液體積比控制在1∶15-1∶20或酌情而定。
b、發酵液的濃縮液加入80-99％乙醇，體積量比控制在1∶1.5-1∶5.5或酌情而定。充分攪拌靜置後，離心去除上清液，沉澱用蒸餾水溶解，調pH5.0，得到溶解液並將溶解液靜置。
c、再將溶解液離心去除雜質得到上清液，準確量取清液體積，按上清液體積計算出所需乙醇量，調pH值，將乙醇緩慢加入到上清液中，並充分攪拌，靜置後離心去除上清液得到沉澱物。
d、沉澱物再用蒸餾水溶解，調pH，離心，上清液再加乙醇沉澱。
這樣的工藝反覆操作至中間檢測合格為止，得到的沉澱物為太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽粗品。真空乾燥3-8小時，即得到太空誘變菌種生產的甘露聚糖肽產品。
上述方法得到的產品的檢驗[性狀]本品為白色或微黃色無定形粉末；無臭、無味。
本品在水中易溶，在乙醇、氯仿及丙酮中不溶。
比旋度取本品，精密稱定，加水溶解並稀釋成每1ml中約含10mg的溶液，依法測定(中國藥典2000年版二部附錄vI E)，比旋度為+70℃至+80℃。
1、取本品10mmg，加水0.5ml使溶解，加a-萘酚乙醇溶液(5-100)1ml，搖勻，沿管壁緩緩加硫酸0.5ml，數分鐘後，界面呈紫紅色。
2、取本品，加水製成每1ml中含1mg的溶液，取約10ul點於濾紙上，晾乾，用無水乙醇固定，置高硝酸溶液(取高碘酸1.2g，加水30ml溶解後。加0.2mol/L醋酸鈉溶液1.5ml與乙醇100ml，混勻即得。
置暗處保存，可使用數月)中浸泡5分鐘，取出，用70％乙醇溶液衝洗，置還原液(取碘化鉀5g，硫代硫酸鈉5g，加水100ml使溶解，再加乙醇150ml、2mol/L鹽酸液2.5ml，隨加隨攪拌，臨用時配)中浸泡5分鐘，取出，用70％乙醇溶液衝洗，置品紅業硫酸試液中浸泡約30分鐘，取出，用焦亞硫酸鈉溶液(取焦亞硫酸鈉0.4g，加鹽酸1ml，加水溶解使成100ml，即得)，衝洗，晾乾，在濾紙片點樣處應呈紫紅色。
3、取供試品和對照品適量，分別加氯化鈉注射液製成每1ml中含1mg的溶液作為供試品溶液和對照品溶液，按甘露聚糖肽免疫原性測定法試驗，供試品和對照品管應均無溶血發生。
1、酸度取本品，加水製成每1ml中含10mg的溶液，依法測定(中國藥典2000年版二部附錄VIH)，pH值應為3.0-5.0。
2、吸收度取本品，加水製成每1ml中含0.4mg的溶液，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄VIA)，在260nm的波長處，其吸收度不得大於0.25，在280nm的波長處，其吸收度不得大於0.20。
3、總氮量取本品，照氮測定法(中國藥典2000年版二部附錄VIID第二法)測定。按乾燥品計算，含總氮量應為0.8-2.0％。
4、免疫原性取供試品和對照品適量，分別加氯化鈉注射液製成每1ml中含10mg的溶液，再分別用磷酸鹽緩衝液製成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256的稀釋液作為供試品溶液和對照品溶液，依法檢查(附甘露聚糖肽免疫原性測定法)，供試品不溶血管的最低濃度應不得高於對照品相應濃度的一倍以上。
5、乾燥失重 取本品，在105℃乾燥至恆重，減失重量不得過5.0％(中國藥典2000年版二部附錄VIIIL)。
6、重金屬 取本品，在1.0g，依法檢查(中國藥典2000年版VIIIH)含重金屬不得過百萬分之二十。
7、異常毒性 取本品，加氯化鈉注射液製成每1ml中含0.5mg的溶液，依法檢查(中國藥典2000年版附錄XIC)。按靜脈注射法給藥，應符合規定(供注射用)。
1.對照品溶液的製備精密稱取經105℃乾燥至恆重的D-甘露糖對照品0.1g置100ml量瓶中，加水溶解並稀釋至刻度。搖勻；精密量取5ml，置100ml的量瓶中，加水至刻度，搖勻。每1ml中含甘露糖50ug。
2.供試品溶液備取本品適量，精密稱定，加水溶解製成每1ml中含40ug的溶液。
3.標準曲線的製備精密稱取對照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分別置具塞試管中，各加水至1.0ml，再加3％苯酚溶液1.0ml，搖勻，衝入硫酸4.5ml，搖勻，放置於室溫，以0管為空白。照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄IVA)在490nm的波長處測定吸收度。以甘露糖ug數對相應的吸收度，計算回歸方程。
4.測定法精密量取供試品溶液1.0ml，照標準曲線製備項下自「再加3％苯酚溶液1.0ml」起，依法操作，測定吸收度，由回歸方程計算甘露糖的含量。
甘露聚糖肽免疫原性測定法(補體結合法)；1、試液A.酸鹽緩衝液(pH7.2)取氯化鈉8.5g、磷酸氫二鈉0.565g及磷酸二氫鉀0.135g，加水至1000ml使其溶解，加10％硫酸鎂溶液1ml，搖勻。
B.1％羊紅細胞懸液羊血紅細胞的製備由綿羊頸靜脈無菌採血於盛有等量阿氏液(取葡萄糖20.5g、枸椽酸鈉8.0g、氯化鈉4.2g，枸椽酸5.5g，加水至1000ml使溶解，100℃滅菌30分鐘)的無菌容器中，4℃保存。
1％羊血紅細胞懸液的製備取上述羊血紅細胞適量，用氯化鈉注射液洗滌三次，每次離心5分鐘(2000轉/分)，取壓積羊血紅細胞，用氯化鈉注射液製成1％羊血紅細胞懸液。取懸液，用氯化鈉注射液稀釋20倍製成供試品溶液，另取等量懸液加水稀釋20倍作為空白溶液，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄IVA)，在541nm的波長處測定，其吸收度應為0.65-0.70，如超出限度應調節1％羊紅細胞懸液的濃度。
C.溶血素及致敏羊血紅細胞溶血素的製備取上述壓積羊血紅細胞，用氯化鈉注射液製成25％羊血紅細胞懸液。取家兔1隻，靜脈注射上述羊血紅細胞懸液，每日一次，共七次，前三次3ml，後三次5ml，末次注射後七日採血。分離血清，56℃。30分鐘滅活，分裝，0℃以下保存。
溶血素單位的測定取溶血素適量，加磷酸鹽緩衝液分別製成1∶1000、1∶2000、1∶3000、1∶4000、1∶5000、1∶6000、1∶7000、1∶8000、1∶9000、1∶10000的稀釋液，各取0.1ml置試管中，加1％羊血細胞懸液0.1ml，搖勻，加稀釋度為1∶30的豚鼠血清(補體)0.2ml及磷酸鹽緩衝液0.2ml，搖勻，37℃保溫30分鐘，完全溶血管的最高稀釋度為1單位溶血素。
致敏羊血紅細胞的製備臨用前，將2％的羊血紅細胞懸液與2單位溶血索等體積混合，37℃保溫15分鐘即得。
補體取三隻以上的豚鼠，心臟採血，離心分離血清，0℃以下保存。
補體單位的測定取補體適量，加磷酸鹽緩衝液，分別製成1∶40、1∶60、1∶80、1∶100、1∶120、1∶140、1∶160、1∶180的稀釋液，各取0.2ml置試管中，加0.2ml磷酸鹽緩衝液，搖勻，37℃保溫30分鐘後，分別加致敏羊血紅細胞0.2ml，搖勻，37℃再保溫30分鐘。完全溶血管的最高稀釋度為1單位的補體。
抗體取甘露聚糖肽對照品適量，加氯化鈉注射液製成每1ml中含10mg的對照品溶液免疫家兔，隔日採用耳靜脈注射對照品溶液一次。
第一次注射0.2ml，第二次至第五次備註射0.5ml，第六次至第十次各注射1.0ml，第十一次至第十五次各注射2.0ml，末次注射後三日採血，離心分離血清，56℃下30分鐘滅活，分裝，0℃以下保存(臨用前，需56℃30分鐘再次滅活)。
抗體單位的測定取抗體適量，加磷酸鹽緩衝液分別製成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128的稀釋液，各取0.1ml置試管中，加甘露聚糖肽對照品溶液0.1ml及2單位補體0.2ml，搖勻，於4-8℃放置4小時以上，置37℃保溫30分鐘，不溶血管的最高稀釋度為1單位抗體。同時設抗原(不加抗體，以0.1ml磷酸鹽緩衝液代替)、抗體(不加抗原，以0.1ml磷酸鹽緩衝液代替)、補體(不加抗原，抗體，以0.2ml磷酸鹽緩衝液代替)對照管，以上三種對照管應全溶血；另設的致敏羊血紅細胞(不加抗原、抗體和補體，以0.4ml磷酸鹽緩衝液代替)對照管應不溶血。
2、免疫原性測定法取甘露驟糖肽對照品與供試品適量，照藥品項下的規定製成不同濃度的對照品溶液和供試品溶液，各取0.1ml置試管中，加入2單位抗體0.1ml及2單位補體0.2ml。搖勻，於4-8℃放置4小時以上，置37℃保溫30分鐘，加入致敏羊血紅細胞0.2ml，搖勻，37℃再保溫30分鐘。觀察各管的溶血情況，不溶血管的最低濃度代表甘露聚糖肽的免疫原性。同時設抗原(不加抗體，以0.1ml磷酸鹽緩衝液代替)、抗體(不加抗原，以0.1ml磷酸鹽緩衝液代替)、補體(不加抗原、抗體、以0.2ml磷酸鹽緩衝液代替)對照管，以上三種對照管應全溶血另設的致敏羊血紅細胞(不加抗原、抗體和補體，以0.4ml磷酸鹽緩衝液代替)對照管應不溶血。
本發明所述一種改善睡眠的藥物實施例口服液的製備過程取上述α-甘露聚糖肽400g、褪黑素20g、刺五加100g、遠志60g、乾薑50g、何首烏30g、淫羊藿30g、紅棗50g、丹參30g、酸棗仁30g、硃砂30g、柏子仁50g、夜交藤40g、靈芝40g、合歡皮40g，此方中的中藥經水洗、濃煎三次後→去除沉渣→過濾→將三次煎液合併濃縮→加入α-甘露聚糖肽、褪黑素混勻→質檢→灌裝，製成每支10ml。
本發明的生產工藝和設備按中華人民共和國藥典2000版一部口服液的製備工藝(國家藥典委員會編，化學工業出版社出版)執行。
其它實施例與實施例1隻是藥的成分不同，其它生產過程完全相同。
實施例2的藥物1000g中含α-甘露聚糖肽400g、褪黑素20g、刺五加50g、遠志40g、乾薑30g、何首烏20g、淫羊藿20g、紅棗30g、丹參25g、酸棗仁25g、硃砂25g、柏子仁25g、夜交藤35g、靈芝35g、合歡皮35g、甘草30g、黨參10g、白朮20g、茯苓15g、茵陳20g、大黃10g、梔子10g、杏仁5g、寇仁10g、砂仁10g、扁豆15g、車前子20g、紫河車10g。
實施例3的藥物1000g中含α-甘露聚糖肽250g、褪黑素20g、刺五加30g、遠志20g、乾薑20g、何首烏10g、淫羊藿10g、紅棗20g、丹參15g、酸棗仁25g、硃砂25g、柏子仁45g、夜交藤35g、靈芝25g、合歡皮35g、甘草10g、黨參10g、白朮20g、茯苓20g、茵陳10g、大黃10g、梔子10g、杏仁5g、寇仁10g、砂仁10g、扁豆15g、車前子20g、紫河車10g，當歸30g、知母20g、黃芩25g、大黃20g、熟地20g、雞血藤30g、石膏30g、香附40g、川芎40g。
實施例4的藥物1000g中含α-甘露聚糖肽300g，褪黑素20g、刺五加20g、遠志10g、乾薑10g、何首烏20g、淫羊藿10g、紅棗20g、丹參15g、酸棗仁15g、硃砂15g、柏子仁25g、夜交藤15g、靈芝15g、合歡皮15g、黨參10g、白朮20g、茯苓20g、茵陳10g、大黃10g、梔子10g、杏仁5g、寇仁10g、砂仁10g、扁豆15g、車前子20g、紫河車10g、當歸30g、知母20g、黃芩25g、大黃20g、熟地20g、雞血藤20g、石膏20g、川芎20g、柴胡20g、白芍20g、枳實30g、甘草20g、黃芪30g、香附30g。
本發明所述改善睡眠口服液的毒理研究①急性毒性試驗大鼠腹腔注射100ml/100g原液的濃縮液後，未見死亡及任何不良反應發生；②亞急性毒性試驗大鼠每日腹腔注射50ml/100g原液的濃縮液，連續一個月。家兔每日腹腔注射50ml/100g原液的濃縮液，連續兩個月，檢查肝腎功能、血象及各臟器組織均無異常變化；③豚鼠過敏試驗為陰性；④致畸致死試驗均為陰性。
動物藥效學研究1 試驗材料1.1 受試動物ICR品系小鼠，體重18-22g，雌雄各半；或體重22-26g，雄性；或體重18-22g，雄性，均由陝西省中醫藥研究院醫學實驗動物中心提供。動物合格證號陝醫動證字第08-24號一級。
1.2 供試藥品本發明所述五種口服液、α-甘露聚糖肽口服液均由本公司提供；眠安寧具有養血安神、補益鎮靜功效，用於失眠多夢、心神不安、神經衰弱、神經機能症等諸多由神經緊張綜合症引起的各種疾病，瀋陽飛龍保健品有限公司出品。
2 方法與結果2.1 對小鼠自主性活動行為的影響取小鼠80隻，隨機均分8組，每組10隻，雌雄各半。即生理鹽水對照組(生理鹽水0.2ml/10g)，本發明所述第一種口服液組(0.2ml/10g)，本發明所述第二種口服液組(0.2ml/10g)，本發明所述第三種口服液組(0.2ml/10g)，本發明所述第四種口服液組(0.2ml/10g)，本發明所述第五種口服液組(0.2ml/10g)，α-甘露聚糖肽口服液組(0.2ml/10g)，眠安寧組(0.2ml/10g)。將8組小鼠按所示劑量逐組逐只灌胃給藥30min後，逐只放入曠野箱(100cm×100cm×40cm無蓋箱，底部劃分36等格)，自然光下觀察記錄小鼠放入箱後2min內活動距離(格數)、站立次數、排便粒數(粒)。經t檢驗，結果見表1。
從表1的實驗數據可以看出應用本發明所述的五種口服液後，動物的活動距離、站立次數和排便粒數均顯著下降，並且隨著配方的全面，療效更加顯著，與生理鹽水對照組相比有顯著性差異；應用α-甘露聚糖肽口服液和眠安寧後，上述指標也都有所下降，但與生理鹽水對照組相比無顯著性差異。表明本發明所述的五種口服液對自主性活動行為具有顯著的鎮靜作用，且療效顯著優於單用α-甘露聚糖肽口服液和眠安寧。
表1各種藥物對小鼠自主性活動的影響(X±S)

注與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.012.2 對小鼠中樞神經系統異常興奮的影響將YSD-4型藥理生理多用儀「刺激方式」旋鈕撥向「連續B」，後面板開關撥於「激怒」檔，「B時間」置於1sec，「A頻率」置於「4Hz」。取異盒飼養的雄性小鼠，稱體質量，兩隻一對，逐對放入附件盒內，接通電源，調節交流電壓輸出強度逐漸由小增大，直到使小鼠出現激怒反應(兩鼠豎立、前肢離地、對峙、相互嘶咬)為止。篩選80對(共160隻)，以備測定供試藥品用。
80對雄性小鼠，隨機均分為8組，每組10對(共20隻)。即生理鹽水對照組(生理鹽水0.2ml/10g)，本發明所述第一種口服液組(0.2ml/10g)，本發明所述第二種口服液組(0.2ml/10g)，本發明所述第三種口服液組(0.2ml/10g)，本發明所述第四種口服液組(0.2ml/10g)，本發明所述第五種口服液組(0.2ml/10g)，α-甘露聚糖肽口服液組(0.2ml/10g)，眠安寧組(0.2ml/10g)。將8組小鼠按所示劑量逐組逐只灌胃給藥30min後，再逐對放入附件盒內，用預試選定的交流電壓強度刺激，記錄給藥前、後2min內激怒反應的次數。經t檢驗，結果見表2。
表2各種藥物對小鼠電激怒反應的影響(X±S)

注與空白對照組比較*P＜0.05，與給藥前比較*P＜0.05從表2的實驗數據可以看出應用本發明所述的五種口服液後，動物2min內的激怒反應次數均較生理鹽水對照組及給藥前顯著下降，並且隨著配方的全面，療效更加顯著；應用α-甘露聚糖肽口服液和眠安寧後，上述指標也都有所下降，但與生理鹽水對照組及給藥前相比無顯著性差異。表明本發明所述的五種口服液對電刺激小鼠造成的中樞神經系統異常興奮活動行為——激怒反應具有類似氯丙嗪樣的作用，且療效顯著優於單用α-甘露聚糖肽口服液和眠安寧。
2.3對小鼠睡眠時間的影響取雄性小鼠80隻，隨機分為8組，每組10隻。即生理鹽水對照組(生理鹽水0.2ml/10g)，本發明所述第一種口服液組(0.2ml/10g)，本發明所述第二種口服液組(0.2ml/10g)，本發明所述第三種口服液組(0.2ml/10g)，本發明所述第四種口服液組(0.2ml/10g)，本發明所述第五種口服液組(0.2ml/10g)，α-甘露聚糖肽口服液組(0.2ml/10g)，眠安寧組(0.2ml/10g)。先將8組小鼠按上述所示劑量灌胃給藥30min後，再皮下注射閾下劑量的戊巴比妥鈉(35mg/kg)。然後逐組逐只分別記錄出現睡眠百分率(％)、睡眠持續時間(min)(以小鼠翻正反射消失為睡眠指標)。經x2、t檢驗，結果見表3、表4。
表3各種藥物對小鼠睡眠百分率(％)的影響(X±S)

注與空白對照組比較*P＜0.01表4各種藥物對小鼠睡眠時間(min)的影響(X±S)


從表3、表4的實驗數據可以看出應用本發明所述的五種口服液後，與生理鹽水對照組相比動物睡眠百分率顯著提高、睡眠持續時間明顯延長，並且隨著配方的全面，療效更加顯著；應用α-甘露聚糖肽口服液和眠安寧後，上述指標也都有所升高，但仍低於本發明所述的五種口服液組。表明本發明所述的五種口服液與鎮靜催眠藥合用能產生協同，因而對小鼠睡眠持續時間具有延長作用，且療效顯著優於單用α-甘露聚糖肽口服液和眠安寧。
本發明所述改善睡眠口服液療效的臨床驗證王某某，男，60歲，從50歲更年期就患有失眠症，曾多次求醫治療，沒有明顯效果，身體一直疲憊不堪。52歲時因肺癌做過切除手術(已切除右肺的1/4)。之後一直體弱多病，糖尿病尤為嚴重，精神狀態一直不佳，失眠至今已有八年之久，做事丟三落四，常感頭暈，心跳氣短。受疾病折磨的他面黃肌瘦，雙目無神，神情呆滯，反應遲鈍。經過確診，患有嚴重的失眠症，服用本發明所述改善睡眠口服液。患者服用兩個療程後(一周為一個療程)，睡眠狀況明顯好轉，入睡時間從服藥前的4小時左右縮短到現在的半小時左右，即能較快入睡。連續睡眠時間從原來的3小時左右延長到現在的6小時，即睡眠6小時中間無覺醒，睡眠質量大大提高。加服一個療程後失眠症已完全消失，精神狀態良好，反應敏銳，面色紅潤有光澤，言談自如，隨訪半年未見復發。可見本發明所述改善睡眠口服液確實有獨特的臨床療效。
本發明所述改善睡眠口服液的療效統計研究本研究收集204例失眠患者的資料，其中男性86例，女性118例，年齡最小的為22歲，最大的為73歲，失眠時間最短為10天，最長達8年。每例患者每日睡前服藥10ml，連服兩周。效果評判標準；治癒；入睡時間小於0.5小時，夜間總睡眠時間為7-9小時，睡眠期間覺醒不超過2次，自覺精神狀態良好，身體無其它不適感；顯效入睡時間小於0.5小時，夜間總睡眠時間為6-8小時，睡眠期間覺醒2-3次，自覺精神狀態良好，身體無其它不適感；有效入睡時間介於0.5-1小時之間，夜間總睡眠時間為6-7小時，睡眠期間覺醒2-3次，自覺精神狀態一般，身體無其它不適感；無效入睡時間大於1小時，夜間總睡眠時間為6小時以下，睡眠期間覺醒超過3次，自覺精神狀態不好，感覺疲乏無力，記憶力不好等。結果判定用藥兩周後，治癒148例，佔72.6％；顯效31例，佔15.2％；有效20例，佔9.8％；無效5例，佔25％，統計總有效率為97.5％。經過收集大量服藥患者病歷資料深入研究歸納總結證實本發明口服液具有①消除失眠的各種臨床表理，如疲勞睏倦，頭痛頭暈，注意力不集中，動作不準確，工作和學習效率下降，記憶和活力減退，反應不靈敏，皮膚麻木，耳鳴，手指震顫，免疫功能低下等。②徹底改變白天過多瞌睡的症狀，主要有患者在白天常可出現不適宜或不希望入睡的情況下睡著，無法避免的打瞌睡，出現無意識動作，認知功能降低等。③改善睡眠中的異常行為，主要有睡行症，夜驚，夢魘，夢遊等。④能使紊亂的睡眠節律規律化，使患者的睡眠模式與常規的作息時間同步。
權利要求
1.一種改善睡眠的藥物，其特徵是它主要包括α-甘露聚糖肽20％-40％；褪黑素0.2％-5％；補腦安神類中藥55％-75％。
2.根據權利要求1所述的一種改善睡眠的藥物，其特徵是所述的藥物包括α-甘露聚糖肽35％-50％；褪黑素0.8％-3％；補腦安神類中藥30％-40％；補脾益氣、清熱解毒類中藥10％-30％。
3.根據權利要求1所述的一種改善睡眠的藥物，其特徵是所述的藥物包括α-甘露聚糖肽10％-30％；褪黑素0.8％-3％；補腦安神類中藥20％-60％；補脾益氣、清熱解毒類中藥10％-30％；補血活血、清熱瀉火類中藥10％-30％。
4.根據權利要求1所述的一種改善睡眠的藥物，其特徵是所述的藥物包括α-甘露聚糖肽30％-50％；褪黑素0.8％-2％；補腦安神類中藥20％-40％；補脾益氣、清熱解毒類中藥10％-20％；補血活血、清熱瀉火類中藥10％-30％；疏肝昇陽類中藥5％-20％。
5.根據權利要求1所述的一種改善睡眠的藥物，其特徵是所述的補腦安神類中藥有刺五加、遠志、乾薑、何首烏、淫羊藿、紅棗、丹參、酸棗仁、硃砂、柏子仁，夜交藤、靈芝、合歡皮；所述的補脾益氣、清熱解毒類中藥有甘草、大棗、黨參、白朮、茯苓、茵陳、大黃、梔子、杏仁、寇仁、砂仁、扁豆、車前子、紫河車；所述的補血活血、清熱瀉火類中藥有當歸、知母、茯苓、黃芩、大黃、熟地、雞血藤、石膏、香附、川芎；所述的疏肝昇陽類中藥有柴胡、白芍、枳實、甘草、黃芪、香附。
6.根據權利要求1所述的一種改善睡眠的藥物，其特徵是所述的藥物1000g中α-甘露聚糖肽400g、褪黑素20g、刺五加100g、遠志60g、乾薑50g、何首烏30g、淫羊藿30g、紅棗50g、丹參30g、酸棗仁30g、硃砂30g、柏子仁50g、夜交藤40g、靈芝40g、合歡皮40g。
7.根據權利要求1所述的一種改善睡眠的藥物，其特徵是所述的藥物1000g中α-甘露聚糖肽400g、褪黑素20g、刺五加50g、遠志40g、乾薑30g、何首烏20g、淫羊藿20g、紅棗30g、丹參25g、酸棗仁25g、硃砂25g、柏子仁25g、夜交藤35g、靈芝35g、合歡皮35g、甘草30g、黨參10g、白朮20g、茯苓15g、茵陳20g、大黃10g、梔子10g、杏仁5g、寇仁10g、砂仁10g、扁豆15g、車前子20g、紫河車10g。
8.根據權利要求1所述的一種改善睡眠的藥物，其特徵是所述的藥物1000g中α-甘露聚糖肽250g、褪黑素20g、刺五加30g、遠志20g、乾薑20g、何首烏10g、淫羊藿10g、紅棗20g、丹參15g、酸棗仁25g、硃砂25g、柏子仁45g、夜交藤35g、靈芝25g、合歡皮35g、甘草10g、黨參10g、白朮20g、茯苓20g、茵陳10g、大黃10g、梔子10g、杏仁5g、寇仁10g、砂仁10g、扁豆15g、車前子20g、紫河車10g，當歸30g、知母20g、黃芩25g、大黃20g、熟地20g、雞血藤30g、石膏30g、香附40g、川芎40g。
9.根據權利要求1所述的一種改善睡眠的藥物，其特徵是所述的藥物1000g中α-甘露聚糖肽300g，褪黑素20g、刺五加20g、遠志10g、乾薑10g、何首烏20g、淫羊藿10g、紅棗20g、丹參15g、酸棗仁15g、硃砂15g、柏子仁25g、夜交藤15g、靈芝15g、合歡皮15g、黨參10g、白朮20g、茯苓20g、茵陳10g、大黃10g、梔子10g、杏仁5g、寇仁10g、砂仁10g、扁豆15g、車前子20g、紫河車10g、當歸30g、知母20g、黃芩25g、大黃20g、熟地20g、雞血藤20g、石膏20g、川芎20g、柴胡20g、白芍20g、枳實30g、甘草20g、黃芪30g、香附30g。
全文摘要
本發明屬於一種藥物，特別是關於一種改善睡眠的生物製劑與中藥合成的藥物，其特徵是；它包括α－甘露聚糖肽20％－40％；褪黑素0.2％－5％；補腦安神類中藥55％－75％；所述的藥物包括α－甘露聚糖肽35％－50％；褪黑素0.8％－3％；補腦安神類中藥30％－40％；補脾益氣、清熱解毒類中藥10％－30％。所述的藥物包括α－甘露聚糖肽10％－30％；褪黑素0.8％－3％；補腦安神類中藥20％－60％；補脾益氣、清熱解毒類中藥10％－30％；補血活血、清熱瀉火類中藥10％－30％。這一種改善睡眠的藥物，它是生物製劑與中藥合成的藥物，此藥物將現代醫學和傳統醫學科學、巧妙的結合起來，發揮兩者的協同作用，它療效好，對睡眠障礙的治療起到獨特的治療作用，並且無毒副作用，服用方便。
文檔編號A61P25/20GK1660400SQ20041010443
公開日2005年8月31日 申請日期2004年12月19日 優先權日2003年12月31日
發明者趙恆 申請人:趙恆