辣椒疫黴細胞分裂蛋白及其編碼基因與應用的製作方法
2024-04-05 00:49:05
辣椒疫黴細胞分裂蛋白及其編碼基因與應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種辣椒疫黴細胞分裂蛋白及其編碼基因與應用。本發明所提供的蛋白質為如下a)或b)：a)由序列1所示的胺基酸序列組成的蛋白質；b)將序列1的胺基酸序列經過一個或幾個胺基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物抗鹽相關的由序列1衍生的蛋白質。實驗證明，本發明所提供的蛋白在辣椒疫黴自身生長發育過程中起作用，進一步獲得的沉默轉化子的生長發育較野生型有明顯變化；通過遊動孢子接種離體的辣椒葉片後發現沉默轉化子接種的病斑面積明顯小於野生型，利用苯胺藍染色技術研究了侵染過程孢子的發育，也證明了沉默轉化子的孢子萌發較晚，且芽管較短。以上結論均為辣椒疫黴的發育過程和分子致病機制的研究提供了一定的幫助。
【專利說明】辣椒疫黴細胞分裂蛋白及其編碼基因與應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬於基因工程領域，涉及一種辣椒疫黴細胞分裂蛋白及其編碼基因與應 用。
【背景技術】
[0002] 辣椒疫病是一種世界性分布的毀滅性的的±傳病害，是由植物病原卵菌辣椒疫黴 引發的，該病原菌是一種兼性寄生菌。它的寄主除了辣椒等茄科植物外，還可W侵染黃瓜、 南瓜等葫蘆科作物。辣椒疫病最先發現於美國新墨西哥州，此後陸續在其他國家發現，對世 界範圍內的蔬菜生產造成了巨大的經濟損失。隨著辣椒疫黴在世界範圍內地傳播我國蔬菜 種植區辣椒疫病自80年代W來日趨嚴重，已經成為危害我國蔬菜產品質量和產量的重要 病害之一。因此辣椒疫病的防治對保障我國農業生產具有重要意義。如何控制辣椒疫病的 廣泛傳播和普遍發生，減少病害帶來的各種損失成為植保工作者的首要任務。目前，在抗病 育種進展緩慢的情況下，主要依賴化學藥劑進行防治，但該也導致了一定程度的負面影響， ±壤汙染，農藥殘留等問題日益凸顯。在此，尋找辣椒疫黴致病基因並通過合理有效的生物 學手段抑制阻礙其致病過程成為近些年卵菌工作者的工作重點。
[0003] 隨著分子生物學和卵菌分子遺傳學的向前發展，許多效率更高效果更好的基因功 能分析技術得到不斷改進。因此，綜合運用不同的分析手段，對於全面分析卵菌基因的遺傳 學功能，無疑會促進卵菌分子遺傳學的發展，加深人們對卵菌病害的認識。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是提供一種辣椒疫黴細胞分裂蛋白及其編碼基因與應用。
[0005] 本發明所提供的蛋白質，名稱為化CDP，來源於辣椒疫黴（Phyto地thoracapsici Leonian)，是如下（a)或化）：
[0006] (a)由序列表中序列1所示的胺基酸序列組成的蛋白質；
[0007] 化）將序列1的胺基酸序列經過一個或幾個胺基酸殘基的取代和/或缺失和/或 添加且與植物抗鹽相關的由序列1衍生的蛋白質。
[000引其中，序列表中序列1由472個胺基酸殘基組成。
[0009] 為了便於化CDP蛋白的純化，可在由序列表中序列1的胺基酸殘基序列組成的蛋 白質的氨基末端或駿基末端連接上如下表所示的標籤。
[0010] 表；柄籤的序列
[0011]
【權利要求】
1. 蛋白質，是如下（a)或（b): (a) 由序列表中序列1所示的胺基酸序列組成的蛋白質； (b) 將序列1的胺基酸序列經過一個或幾個胺基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加 且與植物抗鹽相關的由序列1衍生的蛋白質。
2. 編碼權利要求1所述蛋白質的核酸分子。
3. 根據權利要求2所述的核酸分子，其特徵在於：所述核酸分子是編碼權利要求1所 述蛋白質的基因；所述基因是如下1)至3)中任一所述的DNA分子： 1) 序列表中序列2所不的DNA分子； 2) 在嚴格條件下與1)限定的DNA分子雜交且編碼權利要求1所述蛋白質的DNA分子； 3) 與1)或2)限定的DNA分子具有90%以上同源性且編碼權利要求1所述蛋白質的 DNA分子。
4. 含有權利要求2或3所述核酸分子的重組載體、表達盒或重組菌。
5. 權利要求1所述的蛋白質，或權利要求2或3所述的核酸分子，或權利要求4所述的 重組載體或表達盒在促進辣椒疫黴生長發育和/或製備促進辣椒疫黴生長發育的產品中 的應用。
6. 核酸分子，為序列表中序列2的反向互補序列所不的DNA分子。
7. 含有權利要求6所述核酸分子的重組載體、表達盒或重組菌。
8. 權利要求6所述的核酸分子，或權利要求7所述的重組載體或表達盒在如下al)或 a2)中的應用： al)抑制辣椒疫黴生長發育或製備抑制辣椒疫黴生長發育的產品； a2)預防和/或治療辣椒疫病或製備預防和/或治療辣椒疫病的產品。
9. 一種抑制辣椒疫黴生長發育的方法，包括對目的辣椒疫黴中的權利要求1所述蛋白 質進行表達抑制的步驟。
10. 根據權利要求9所述的方法，其特徵在於：對所述目的辣椒疫黴的權利要求1所述 蛋白質進行表達抑制是通過向所述辣椒疫黴中導入權利要求6所述核酸分子實現的。
【文檔編號】C12N1/14GK104447966SQ201410720137
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月1日 優先權日:2014年12月1日
【發明者】朱春原, 張夢妍, 張修國 申請人:山東農業大學