一種梅魚酶解多肽及其應用的製作方法

2024-03-01 04:35:15 1

專利名稱：：一種梅魚酶解多肽及其應用的製作方法
技術領域：
：本發明屬於生物
技術領域：
，涉及醫藥及保健食品及其應用，具體為一種梅魚酶解多肽及其應用，特別是梅魚酶解多肽在製備治療高血壓藥物中的應用。技術背景肽(p印tides)是分子結構介於胺基酸和蛋白質之間的一類化合物，是蛋白質的結構與功能片段，並使蛋白質具有數以千萬計的生理功能。肽本身也具有很強的生物活性。胺基酸是其基本構成單位，由2個或3個胺基酸脫水縮合而成的肽分別叫二肽和三肽，以此類推為四肽、五肽。一般說來，肽鏈上胺基酸數目在IO個以內的叫寡肽，1050個的叫多肽，50個以上的叫蛋白質，肽類在生物學方面具有多種生物活性，文獻報導，多肽具有免疫調節、激素調節、酶抑制、抗菌以及抗病毒等的功效。高血壓已成為危及人類身體健康的主要的疾病之一。常規的降血壓藥都有明顯的副作用，而來源於食物中血管緊張素轉化酶抑制肽(ACEI)具有降壓效果顯著、沒有毒副作用、安全性高、成本低、易吸收等特點，更加符合人們的需求。
發明內容-本發明的目的是，提供一種從海水魚中製備的梅魚酶解多肽(MYT)，以及提供其在醫藥或保健食品中的應用。梅魚為小黃魚，i^ewc/cwc/ae"apo(yacto(Bleeker)、SmallYellowCroaker;大黃魚，/^ez^osc7'ae"acracea(Richardson)、LargeYellowCroaker、黃姑魚A^6eaa/6//ora(Richardson)、yellowdrum;白姑魚v4rgynwo附iwcwge"to/zwa(houttuyn)、whitecroaker等石首魚禾鬥的幼魚的統稱。梅魚蛋白來自新鮮小梅魚肉。將梅魚去除魚骨及魚頭、魚皮，收集魚肉，獲取梅魚蛋白，將梅魚蛋白加水6-8倍勻漿，加入復配蛋白酶，復配蛋白酶的組成為鹼性蛋白酶(Alcalase)、複合蛋白酶(Protamex)和風味蛋白酶(Flavourzyme)，三種酶等量混合；力口入量為按魚肉蛋白含量計的0.3%-0.6%，在40-60"C反應4-6小時，85-9(TC滅酶15分鐘，離心，上清夜濃縮乾燥後得到乾粉狀梅魚酶解多肽(MYT)。梅魚酶解多肽(MYT)總蛋白》85%，其主要胺基酸組成為天門冬氨酸、穀氨酸、亮氨酸、賴氨酸及精氨酸，其含量》45%，等電點主要集中在pH小於7範圍內。梅魚酶解多肽(MYT)應用於製備治療高血壓的藥物或製備防治高血壓的保健品。採用蛋白酶水解梅魚蛋白，經離心乾燥等技術製得梅魚酶解多肽(MYT、在製備治療高血壓藥物中應用，國內外均未見其應用報導。梅魚酶解多肽(MYT)總蛋白>85%，其主要胺基酸組成(天門冬氨酸、穀氨酸、亮氨酸、賴氨酸及精氨酸)含量》45%。等電點主要集中在pH小於7範圍內，主要成分為酸性多肽。本發明所述的製備治療高血壓藥物或保健品的劑型，可以為口服液型，粉劑型，片劑型或膠囊型。體外試驗研究表明梅魚酶解多肽(MYT)有抑制血管緊張素轉換酶(ACE)活性的作用，動物體內實驗證明其具有降血壓療效。可以治療高血壓疾病，達到較好的效果，長期食用無副作用。發明的優點和應用前景本發明製備梅魚酶解多肽(MYT)的工藝穩定，得率高，可用作工業化生產，梅魚酶解多肽(MYT)降血壓功能的驗證為高血壓患者提供了一種新的預防和治療途徑，而且這種藥食同源的設計思路符合現代醫藥及保健食品工業發展的趨勢，將具有廣闊的市場前景和較大的社會和經濟效益。圖l、圖2、圖3為血管緊張素轉化酶(ACE)抑制活性測定圖譜；圖l為馬尿酸標準圖譜。圖2為無梅魚酶解多肽樣品存在條件下的圖譜；圖3為加入梅魚酶解多肽樣品條件下的圖譜；採用梅魚酶解多肽濃度為0.3mg/ml，其ACE抑制活性如圖3所示。圖3顯示加入梅魚酶解多肽樣品，馬尿酸的生成量大大減少，表明其對ACE的抑制活性顯著。圖4、圖5、圖6、圖7為梅魚酶解多肽(MYT)對SHR自發性高血壓大鼠血壓的影響測定圖；圖4為MYT對SHR自發性大鼠尾動脈收縮壓(mmHg)的影響；圖5為MYT對SHR自發性大鼠尾動脈舒張壓(mmHg)的影響；圖6為MYT對SHR自發性大鼠尾動脈平均壓(mmHg)的影響；圖7為MYT對SHR自發性大鼠心率(bpm)的影響。測定結果表明給予劑量為1.02.0g'kg"的MYT能顯著降低SHR自發性高血壓大鼠尾動脈血壓，SHR自發性高血壓大鼠的血壓隨年齡的增高而升高，而MYT能抑制血壓的升高，說明MYT有一定的抑制SHR大鼠血壓升高作用。具體實施例方式實施例一梅魚酶解多肽(MYT)的製備方法將梅魚去除魚骨及魚頭、魚皮，收集魚肉，獲取梅魚蛋白，將梅魚蛋白加水6-8倍勻漿，加入復配蛋白酶，復配蛋白酶的組成為鹼性蛋白酶(Alcalase)、複合蛋白酶(Protamex)和風味蛋白酶(Flavourzyme)，三種酶等量混合；加入量為按魚肉蛋白重量計的0.3%-0.6%，在40-60。C反應4-6小時，85-90'C滅酶15分鐘，離心，上清夜濃縮乾燥後得到乾粉狀梅魚酶解多肽。經過測定梅魚酶解多肽總蛋白>85%，其主要胺基酸組成為天門冬氨酸、穀氨酸、亮氨酸、賴氨酸及精氨酸，其含量》45%，等電點集中在pH小於7範圍內。實施例二測定實施例1所得梅魚酶解多肽(MYT)乾粉對血管緊張素轉換酶(ACE)活性的抑制作用血管緊張素轉化酶抑制活性的測定採用高效液相色譜系統WATERS2695-2696;檢測器WATERS2424;色譜柱HypersilBDSC184.6X210腿；洗脫液30%甲醇(含0.1%的三氟乙酸TFA和0.05%乙酸)；流速0.8mL/min;檢測波長228nm;上樣量10uL。取樣品15uL和ACE(溶於pH=8.3,50mM的硼酸緩衝液，酶活60mU/mL)45uL於37。C恆溫水浴中保溫5min，加入75ul7.6mM的底物(馬尿酸HHL溶於50mM的硼酸緩衝液，含6.8mM的氯化鈉)，37。C下反應30min，加入15化10%的TFA終止反應，至室溫取10uL反應產物進樣，通過HPLC洗脫圖譜定量馬尿酸生成量，以生成馬尿酸的量來測定樣品的ACE抑制活性。本實驗採用梅魚酶解多肽濃度為0.3mg/ml，其ACE抑制活性如圖3所示。圖3顯示加入梅魚酶解多肽樣品，馬尿酸的生成量大大減少，表明其對ACE的抑制活性顯著。不同濃度的多肽溶液的抑制率如表l所示。根據表l所示數據，實驗對不同濃度的多肽及其對應的抑制率進行線型回歸，ACEI半抑制濃度為O.203mg/ml。表l不同濃度多肽的ACE抑制活性(義±&/7=3)tableseeoriginaldocumentpage5實施例三梅魚酶解多肽(MYT)對SHR自發性高血壓大鼠降血壓的作用取SPF級體重為280~300g的雄性SHR自發性高血壓大鼠16隻，按血壓高低隨機分成3組，即模型對照組(6隻)、高(2.0g'kg"MYT、5隻)、低(l.Og'kg"MYT、5隻)劑量組；另取5隻SPF級體重為280300g的雄性Wistar大鼠作正常對照組。高、低劑量組分別灌胃給予MYDT2.0g.kg—1和MYT1.Og'kg.1，模型對照組和正常對照組灌胃給予蒸餾水10mhkg"體重，每R給藥一次，連續給藥40天，每4天各組大鼠測定尾動脈收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、平均壓(MBP)和心率(HR),觀察MYT對SHR自發性高血壓大鼠血壓的影響，結果如圖4、圖5、圖6、圖7所示。由圖4結果可見，與正常對照組比較，模型對照組大鼠尾動脈收縮壓顯著升高(PO.01);連續40天給予高、低劑量MYT的高血壓大鼠尾動脈收縮壓有不同程度的下降，MYT低劑量組於給藥第8、16、24—40天，收縮壓有顯著降低(PO.05或PO.01),MYT高劑量組於給藥第4、8、12、16、24—40天，收縮壓有顯著降低(P<0.05或PO.Ol)，其作用效果與MYT劑量呈一定的相關性。由圖5結果可見，與正常對照組比較，模型對照組大鼠尾動脈舒張壓顯著升高(PO.01);連續40天給予高、低劑量MYT的高血壓大鼠尾動脈舒張壓有不同程度的下降，MYT低劑量組於給藥第16、24—36天，舒張壓有顯著降低(P<0.05或PO.Ol)，MYT高劑量組於給藥第8—40天，舒張壓有顯著降低(P0.05);連續40天給予高、低劑量MYT的高血壓大鼠心率無明顯變化。試驗結果表明，給予劑量為1.02.0g'kg"的MYT能顯著降低SHR自發性高血壓大鼠尾動脈血壓，SHR自發性高血壓大鼠的血壓隨年齡的增高而升高，而MYT能抑制血壓的升高，說明MYT有一定的抑制SHR大鼠血壓升高作用。權利要求1、一種梅魚酶解多肽，其特徵在於其來源於酶解的梅魚蛋白，該梅魚酶解多肽總蛋白≥85％，其中天門冬氨酸、穀氨酸、亮氨酸、賴氨酸及精氨酸含量≥45％，等電點主要集中在pH小於7的範圍內。2、如權利要求1所述梅魚酶解多肽應用於製備治療高血壓的藥物或製備防治高血壓的保健品。全文摘要本發明公開了一種梅魚酶解多肽(MYT)及其應用，MYT來源於酶解的梅魚蛋白，其總蛋白≥85％，其中天門冬氨酸、穀氨酸、亮氨酸、賴氨酸及精氨酸含量≥45％，等電點主要集中在pH小於7的範圍內。體外試驗研究表明梅魚酶解多肽(MYT)有抑制血管緊張素轉換酶(ACE)活性的作用，動物體內實驗證明其具有降血壓療效，為高血壓患者提供了一種新的預防和治療途徑，MYT可以應用於製備治療高血壓的藥物或製備防治高血壓的保健品。本發明藥食同源的設計思路符合現代醫藥及保健食品工業發展的趨勢。文檔編號C07K2/00GK101225105SQ200810059648公開日2008年7月23日申請日期2008年2月1日優先權日2008年2月1日發明者張燕平,戴志遠申請人:浙江工商大學