一種豬肺炎支原體選擇性分離培養基及其製備方法

2024-03-27 22:21:05

一種豬肺炎支原體選擇性分離培養基及其製備方法
【專利摘要】本發明屬於獸醫生物學【技術領域】，涉及一種豬肺炎支原體選擇性分離培養基及其製備方法。本發明提供的一種豬肺炎支原體選擇性分離培養基，其主要成分為水解乳蛋白，酵母浸粉，MEM培養基，Hank’s液，0.1％酚紅溶液，健康馬血清，青黴素和去離子水，特異性生長抑制血清。本發明的豬肺炎支原體選擇性培養基能夠用於豬肺炎支原體的快速分離鑑定，配製方法簡單可行，試驗結果可靠，分離時間縮短為103h～122h，時間縮短17%～23%，分離成功率高達75%以上，是現有培養基分離成功率的10倍以上。
【專利說明】一種豬肺炎支原體選擇性分離培養基及其製備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於獸醫生物學【技術領域】，涉及一種豬肺炎支原體選擇性分離培養基及其製備方法。
【背景技術】
[0002]豬肺炎支原體是引起豬的接觸性慢性呼吸道疾病的重要病原之一，在全世界廣泛存在，嚴重危害養豬業健康發展，其主要危害是引起豬的生長受阻、飼料轉化率大幅下降，繼發引起其他疾病的發生並加重發病症狀。豬支原體肺炎滅活疫苗可以減少喘氣病的發生，但優質疫苗的前提需要有一種好的疫苗株及地區豬肺炎支原體流行現狀來支撐。培養基是人工合成各種營養物質供微生物生長的基質。支原體是一種微小原核生物，無細胞壁，可在人工培養基上生長，形成小菌落，但培養條件要求十分苛刻，且生長速度慢，豬鼻支原體、豬滑液支原體、絮狀支原體與豬肺炎支原體常同時存在於豬的體內，且其生長速度均高於豬肺炎支原體，從而開展豬肺炎支原體分離鑑定時常發生汙染，而導致豬肺炎支原體分離失敗，這樣對防治豬氣喘病的研究造成困難。在實際生產過程中，豬肺炎支原體典型症狀仔豬，病料的豬肺炎支原體的分離率極低，甚至由於豬滑液支原體等病原微生物的汙染分離率低至I~5%，亟待一種新的實驗方案解決豬肺炎支原體的分離問題。
【發明內容】

[0003]本發明的目的在於提供一種適合豬肺炎支原體生長，且生長快、活菌滴度相對較高且能夠抑制豬鼻支原體、豬滑液支原體、絮狀支原體生長的豬肺炎支原體選擇性分離培養基，使用該選擇性分離培養基用於臨床分離培養豬肺炎支原體，提高分離過程中支原體生長速度，提高豬肺炎支原體的分離率，特異性和敏感性顯著提高，用於豬肺炎支原體分離培養、生化特徵、遺傳、免疫等方面的研究。
[0004]本發明提供的一種豬肺炎支原體選擇性分離培養基，其主要成分為水解乳蛋白，酵母浸粉，MEM培養基，Hank』 s液，0.1 %酚紅溶液，健康馬血清，青黴素和去離子水，特異性生長抑制血清(豬鼻支原體、豬滑液支原體、絮狀支原體)。
[0005]本發明另一目的是提供用於該豬肺炎支原體培養基的製備方法。
[0006]本發明的目的是通過如下技術方案實現的:
一種豬肺炎支原體選擇性分離培養基，其特徵在於，按照下列配比製得:水解乳蛋白40~50g，酵母浸粉40~50g，MEM培養基40~50g，10XHank’s液20~60mL，0.1%酚紅溶液10~20mL，青黴素500~800萬單位，健康馬血清1000~2000mL，特異性生長抑制血清25~45mL,去離子水調整至lOOOOmL。
[0007]進一步優化的配比如下:水解乳蛋白45g，酵母浸粉45g，MEM培養基49g，10 X Hank』 s液50mL，0.1 %酚紅溶液10mL，青黴素600萬單位，健康馬血清1500mL，特異性生長抑制血清30mL，去離子水調整至lOOOOmL。
[0008]本發明用於豬肺炎支原體選擇性分離培養基的製備方法，其特徵在於，按照下列步驟製備:
(I)按配比稱取水解乳蛋白40~50g、酵母浸粉40~50g、MEM培養基49g溶解於去離子水5000mL，攪拌，使之完全溶解，加入10 X Hank』 s液20~60mL、0.1 %酚紅溶液10~20mL、青黴素500~800萬單位,用0.45 μ m濾膜過濾除菌,4°C保存備用。
[0009](2)臨用前，加入健康馬血清1000~2000mL、特異性生長抑制血清25~45mL，用lmol/L氫氧化鈉溶液調整pH至7.6~7.8，使用去離子水適量調整至總體積lOOOOmL，即得豬肺炎支原體選擇性分離液體培養基。
[0010]本發明所述特異性生長抑制血清是指同時抑制豬鼻支原體、豬滑液支原體、絮狀支原體的特異性生長抑制血清。
[0011]本發明的要點在於選擇合適的組分製備常規豬肺炎支原體專用培養基，並在該基礎上進一步加入豬鼻支原體、豬滑液支原體、絮狀支原體等三種特異性生長抑制血清，製備成豬肺炎支原體選擇性分離培養基，用於豬肺炎支原體的分離培養。在該培養基上，豬肺炎支原體接種後，生長良好。使用前加入製備的生長抑制血清，可抑制豬鼻支原體、豬滑液支原體、絮狀支原體的生長，選擇性的分離培養豬肺炎支原體。
[0012]本發明具有以下優點:豬肺炎支原體選擇性培養基能夠用於豬肺炎支原體的快速分離鑑定，配製方法簡單可行，試驗結果可靠，分離時間縮短為103h~122h，時間縮短17%~23%，分離成功率高達75%以上，是現有培養基分離成功率的10倍以上。
【具體實施方式】
[0013]下面結合實例對本發明作進一步的詳細說明。
[0014]按照下述配方所列配比及按照發明所述的製備方法製得配方一、配方二、配方三，具體如下:
配方一:水解乳蛋白40g，酵母浸粉40g，MEM培養基4(^，10\他1^』8液201^，0.1%酚紅溶液10mL，青黴素500萬單位，健康馬血清1000mL,特異性生長抑制血清25mL，去離子水調整至lOOOOmL。
[0015]製備方法:(1)稱取水解乳蛋白40g,酵母浸粉40g, MEM培養基40g溶解於去離子水5000mL，攪拌，使之完全溶解，加入10 XHankj s液20mL，0.1%酚紅溶液10mL，青黴素500萬單位，用0.45 μ m濾膜過濾除菌，4°C保存備用；(2)加入健康馬血清lOOOmL、特異性生長抑制血清25mL，用lmol/L氫氧化鈉溶液調整pH至7.6，使用去離子水調整至總體積lOOOOmL，即得豬肺炎支原體選擇性分離液體培養基一。
[0016]配方二:水解乳蛋白50g，酵母浸粉50g, MEM培養基50g，10XHank，s液60mL，
0.1 %酚紅溶液20mL，青黴素800萬單位，健康馬血清2000mL，特異性生長抑制血清45mL，去離子水調整至lOOOOmL。
[0017]製備方法:(1)稱取水解乳蛋白50g,酵母浸粉50g, MEM培養基50g溶解於去離子水5000mL，攪拌，使之完全溶解，加入10 X Hankj s液60mL，0.1 %酚紅溶液20mL，青黴素800萬單位，用0.45 μ m濾膜過濾除菌，4°C保存備用。(2)加入健康馬血清2000mL、特異性生長抑制血清45mL，用lmol/L氫氧化鈉溶液調整pH至7.8，使用去離子水調整至總體積lOOOOmL，即得豬肺炎支原體選擇性分離液體培養基二。
[0018]配方三:水解乳蛋白458、酵母浸粉458、]\^]\1培養基498、10\他1^』 s液50mL、0.1 %酚紅溶液10mL、青黴素600萬單位、健康馬血清1500mL、特異性生長抑制血清30mL、去離子水調整至lOOOOmL。
[0019]備方法:(1)稱取水解乳蛋白45g，酵母浸粉45g，MEM培養基49g溶解於去離子水5000mL，攪拌，使之完全溶解，加入10 XHank』 s液50mL，0.1 %酚紅溶液IOOmL,青黴素600萬單位，用0.45 μ m濾膜過濾除菌，4°C保存備用。(2)加入健康馬血清1500mL、特異性生長抑制血清30mL，用lmol/L氫氧化鈉溶液調整pH至7.6，使用去離子水調整至總體積lOOOOmL，即得豬肺炎支原體選擇性分離液體培養基三。
[0020]使用本發明培養基一、培養基二、培養基三作為本發明選用的培養基，使用KM2、A26兩種培養基作為對照培養基，進行臨床症狀典型、且使用PCR方法證實豬肺炎支原體感染陽性的71份病料分別進行了豬肺炎支原體病原分離鑑定，結果如對照實驗數據表所示(表 I)。
【權利要求】
1.一種豬肺炎支原體選擇性分離培養基，其特徵在於，由下列組份按照配比製得:水解乳蛋白40~50g，酵母浸粉40~50g，MEM培養基40~50g，10 X Hank』 s液20~60mL，0.1 %酚紅溶液10~20mL，青黴素500~800萬單位，健康馬血清1000~2000mL，特異性生長抑制血清25~45mL，去離子水調整至lOOOOmL。
2.根據權利要求1所述的一種豬肺炎支原體選擇性分離培養基，其特徵在於，所述組份的配比為水解乳蛋白45g，酵母浸粉45g，MEM培養基為49g，10XHank』 s液50mL，0.1%酚紅溶液10mL，青黴素600萬單位，健康馬血清1500mL，特異性生長抑制血清30mL，去離子水調整至lOOOOmL。
3.用於權利要求1的一種豬肺炎支原體選擇性分離培養基的製備方法，其特徵在於，按照下列步驟製備: (1)按配比稱取水解乳蛋白40~50g、酵母浸粉40~50g、MEM培養基49g溶解於去離子水5000mL，攪拌，使之完全溶解，加入10 X Hank』 s液20~60mL、0.1 %酚紅溶液10~20mL、青黴素500~800萬單位,用0.45 μ m濾膜過濾除菌,4°C保存備用； (2)臨用前，加入健康馬血清1000~2000mL、特異性生長抑制血清25~45mL，用lmol/L氫氧化鈉溶液調整pH至7.6~7.8，使用去離子水適量調整至總體積lOOOOmL，即得豬肺炎支原體選擇性分離液體培養基。
4.用於權利要求2的一種豬肺炎支原體選擇性分離培養基的製備方法，其特徵在於，按照下列步驟製備: (1)稱取水解乳蛋白45g，酵母浸粉45g，MEM培養基49g溶解於去離子水5000mL，攪拌，使之完全溶解，加入10 X Hank』 s液50mL，0.1 %酚紅溶液IOOmL,青黴素600萬單位，用.0.45 μ m濾膜過濾除菌，4°C保存備用； (2)加入健康馬血 清1500mL、特異性生長抑制血清30mL，用lmol/L氫氧化鈉溶液調整pH至7.6，使用去離子水調整至總體積lOOOOmL，即得豬肺炎支原體選擇性分離液體培養基。
【文檔編號】C12Q1/04GK104017856SQ201410233471
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2014年5月29日 優先權日:2014年5月29日
【發明者】李書光, 李峰, 沈志強, 張娜 申請人:山東省濱州畜牧獸醫研究院