含有增效劑的Bt生物農藥的製作方法
2024-03-30 10:01:05
專利名稱：含有增效劑的Bt生物農藥的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種Bt生物農藥，尤其涉及一種含有粘蟲顆粒病毒增效劑的Bt生物農藥。
背景技術：
蘇雲金桿菌(Bt)製劑是全世界生產最多、應用面積最大、使用最為廣泛的生物農藥，在綠色食品的生產和人類生存環境的保護等方面作出了巨大的貢獻。在我國，Bt製劑除了部分原粉出口外，各種劑型的產品主要面對國內市場，其市場容量已從初期的10噸逐年上升到目前的200噸以上，發展較為迅速。但在發展中仍存在不少急需解決的問題，如殺蟲速度較慢，殺蟲譜不廣，害蟲對之較易產生抗性等問題。隨著中國加入WTO，我國的生物農藥產業面臨著一個機遇與挑戰並存的歷史發展時期，對於Bt製劑產業，必須以高效、廣譜、作用快速等全新的特徵面對這一歷史時期。多年來我國Bt製劑更大規模應用發展的阻力主要來自於「影響田間藥效的自然幹擾因素」和「害蟲的抗藥性」等兩個方面。
近年來，針對性科研攻關的主要技術路線之一是「添加輔助成份提高Bt製劑藥效，降低用藥量」，實踐證明這一思路是適合我國目前國情的，並已研製出Bt與高效低毒化學(含生物化學)農藥復配、Bt與昆蟲杆狀病毒復配以及Bt加增效劑等多種聯合增效的劑型(彭可凡等，2000，微生物學通報，27242-245；徐莉等，2000，全國生物防治暨第八屆殺蟲微生物學術研討會論文摘要集，p114；廣西南寧天罡生物工程有限責任公司的產品殲年蟲菜蛾特，1×108PIB/克小菜蛾顆粒體病毒+16000IU/毫克Bt可溼性粉劑混配，農藥登記號Ls20011368和殲年蟲青蟲特，1×108PIB/克菜青蟲顆粒體病毒+16000IU/毫克Bt可溼性粉劑混配，農藥登記號Ls20011367)。這些增效型的Bt製劑或產品從不同方面發揮了添加輔助成份的增效作用，如彭可凡等篩選不同的農藥助劑，從改善Bt的劑型著手，提高其田間施用效果；徐莉等利用不同螢光增白劑，從保護Bt在田間不被紫外線破壞的角度提高Bt的殺蟲活性；而廣西南寧天罡生物工程有限責任公司的產品將Bt和害蟲的另一種病原微生物混合，達到多靶點攻擊害蟲，提高殺蟲效率的目的。
發明內容
本發明涉及一種在蘇雲金桿菌(Bt)製劑中加入轉寄主粘蟲顆粒病毒(PuGV-Ps)(專利申請號00130237.X)作為增效劑的Bt+PuGV-Ps聯合增效生物農藥，本發明採用的增效劑不僅添加量低，而且增效作用強，促進了Bt製劑在糧食、蔬菜、茶葉、森林等多種農作物和經濟林果上更廣泛地大規模應用。
該生物農藥包括Bt製劑和作為增效劑的轉寄主粘蟲顆粒病毒(PuGV-Ps)，其中Bt和PuGV-Ps的質量比為1000～10∶1，Bt的毒力效價為20000-2000國際單位/毫克。
Bt和PuGV-Ps的質量比優選為800～50∶1。
所述的Bt毒力效價優選為16000-8000國際單位/毫克。
該生物農藥可以是固態也可以製成溶液。使用時加水將生物農藥配成需要的濃度。
PuGV-Ps可採用中國專利申請號00130237.X的方法製得。
本發明提供的Bt-PuGV-Ps聯合增效生物農藥，具有添加量低，增效作用強等優勢，並且進一步豐富了Bt製劑的實用化技術，提高對鱗翅目害蟲的防效，促進Bt製劑在糧食、蔬菜、茶葉、森林等多種農作物和經濟林果上更廣泛地大規模應用，鞏固、提高和發展了Bt這種生物農藥。
具體實施例方式
實施例1用廣州抗性小菜蛾蟲種，室內累代人工飼養，選3齡左右幼蟲作試蟲。Bt原粉為揚州綠源生化有限公司出品，毒力效價16000國際單位/毫克(對廣東抗性小菜蛾48h的LC50為100μg/ml左右)，PuGV-Ps原粉(顆粒劑)由中國科學院動物研究所研製並提供(採用中國專利申請號00130237.X的方法製得)，病毒含量為3.0×1010/毫克。
用由普通礦泉水分級逐步稀釋製得的800萬倍PuGV-Ps液分別稀釋Bt原粉成10000倍(Bt含量為100μg/ml)、20000倍(Bt含量為50μg/ml)、40000倍(Bt含量為25μg/ml)、80000倍(Bt含量為12.5μg/ml)、和160000倍(Bt含量為6.25μg/ml)的等比系列濃度，即Bt和PuGV-Ps的質量比分別為800∶1，400∶1，200∶1，100∶1，50∶1，病毒含量保持不變，為0.125μg/ml。同時，另取Bt原粉用上述礦泉水分別稀釋成2000倍(Bt含量為500μg/ml)、4000倍(Bt含量為250μg/ml)、8000倍(Bt含量為125μg/ml)、16000倍(Bt含量為62.5μg/ml)和32000倍(Bt含量為31.25μg/ml)的等比系列濃度單劑，作為對照藥劑。
上述每試驗處理均為30頭試蟲，重複2次，並以清水處理為對照。試驗採用「葉片浸漬」法，在專用菜地選取倒數第2或倒數第3完全展開的青菜葉，剪成30×50mm左右的葉片，放入處理液中，連同處理液震蕩約10s，取出攤放於清潔的吸水紙上，自然晾乾後使葉片背面朝底放入事先已用軟毛筆挑入試蟲的普通醫用培養皿內，每玻皿一張葉片，15頭試蟲，用食品保鮮膜密封皿口(取代原有的玻璃皿蓋)。各試驗處理均統一放入電控光照恆溫箱內，溫度25.0～27.0℃。43～48h內檢查死亡蟲數，計算校正死亡率，用機率值法計算分析，求出回歸方程和LC50及LC99及其95％置信限。用孫雲沛(1960)方法計算Bt和PuGV-Ps聯合作用的共毒係數(注PuGV-Ps只對粘蟲有專化毒性，對其它害蟲如對小菜蛾幼蟲等沒有致病作用，即對粘蟲以外害蟲的毒力為0，因此在「Bt+PuGV-Ps」對小菜蛾等的作用中PuGV-Ps相當於「增效劑」)。表1為該實施例的測試結果。
表1 Bt+PuGV-Ps聯合增效生物測定(1)
從表1的實驗測定數據可以看出，Bt+PuGV-Ps混劑的共毒係數為441.5，比Bt單劑增效4.4倍。其病毒增效劑用量低，效果好，同時因為此增效劑為對環境無任何毒害作用的昆蟲病原微生物，所以使本發明的Bt+PuGV-Ps聯合生物殺蟲劑成為完全無公害的綠色農藥，可以防治高度抗性的蔬菜害蟲(廣州抗性小菜蛾)。
實施例2試蟲為2-3齡斜紋夜蛾幼蟲，由田間採集的卵塊至室內，並用菜葉人工飼養而成。所用Bt毒力效價為8000國劑單位/毫克，PuGV-Ps原粉同實施例1。稱取一定量PuGV-Ps和Bt原粉，用普通礦泉水分級逐步稀釋PuGV至37500倍，用該PuGV液分別稀釋Bt原粉至150倍(6667μg/ml)、225倍(4444μg/ml)、337.5倍(2963μg/ml)、506.25倍(1975μg/ml)和759.38倍(1317μg/ml)的等比系列濃度，即Bt同PuGV-Ps的質量比分別為250∶1，167∶1，111∶1，74∶1，49∶1，病毒含量保持不變，為26.67μg/ml；同時另取一定量Bt原粉，用礦泉水分別稀釋成75倍(1333μg/ml)、112.5倍(8889μg/ml)、168.75倍(5926μg/ml)、253.125倍(3951μg/ml)和379.7倍(2634μg/ml)的等比系列濃度單劑。本實施例每試驗處理20頭試蟲，重複2次，以清水為空白對照處理，亦採用實施例1的「葉片浸漬」法，每玻皿10頭試蟲。試驗環境及溫度同實施例1，但另加遮光措施。48h檢查死亡蟲數，用前法計算分析LC50和LC99及共毒係數，表2為該實施例的測試參考結果。
表2的數據表明Bt+PuGV-Ps混劑對另一種蔬菜害蟲斜紋夜蛾也有很好的增效效果，共毒係數達233.3，比單劑增效2.3倍左右。其特點是增效劑用量少，增效效果顯著，對環境無任何不良影響。
表2 Bt+PuGV-Ps聯合增效生物測定(2)
實施例3試蟲為3齡茶尺蠖幼蟲，由從浙江省茶葉研究所引進的蟲種在室內用新鮮茶葉人工累代飼養繁殖而得。Bt和PuGV原粉的選用和PuGV母液的配製同實施例2。實驗方法和數據處理方法同實施例2，表3為該實施例的測試參考結果。
表3的結果表明，Bt+PuGV-Ps混劑用於茶葉害蟲茶尺蠖同樣有顯著的增效作用，共毒係數達238.4，比單劑增效2.4倍左右。
表3 Bt+PuGV-Ps聯合增效生物測定(3)
權利要求
1.一種含有增效劑的Bt生物農藥，包括Bt製劑和作為增效劑的轉寄主粘蟲顆粒病毒PuGV-Ps，其中Bt和PuGV-Ps的質量比為1000～10∶1，Bt的毒力效價為20000-2000國際單位/毫克。
2.如權利要求1所述的含有增效劑的Bt生物農藥，其特徵在於Bt和PuGV-Ps的質量比為800～50∶1。
3.如權利要求1或2所述的含有增效劑的Bt生物農藥，其特徵在於Bt的毒力效價為16000-8000國際單位/毫克。
4.如權利要求1所述的含有增效劑的Bt生物農藥，其特徵在於該農藥為固態。
5.如權利要求1所述的含有增效劑的Bt生物農藥，其特徵在於該農藥為液態。
全文摘要
本發明涉及一種含粘蟲顆粒病毒增效劑的Bt生物農藥，本發明提供的Bt－PuGV－Ps聯合增效生物農藥，其中Bt和PuGV－Ps的質量比為1000～10∶1，Bt的毒力效價為20000－2000國際單位/毫克；本發明的Bt－PuGV－Ps聯合增效生物農藥，具有添加量低，增效作用強等優勢，並且進一步豐富了Bt製劑的實用化技術，提高對鱗翅目害蟲的防效，促進Bt製劑在多種農作物和經濟林果上更廣泛地大規模應用，鞏固、提高和發展了Bt這種生物農藥。
文檔編號A01N63/00GK1507780SQ0215568
公開日2004年6月30日 申請日期2002年12月13日 優先權日2002年12月13日
發明者徐健, 秦啟聯, 殷向東, 李瑄, 苗麟, 朱錦磊, 祁建杭, 徐 健 申請人:揚州綠源生物化工有限公司, 中國科學院動物研究所