防治植物病毒病的生物復配製劑及其應用的製作方法
2024-03-05 10:34:15
專利名稱：防治植物病毒病的生物復配製劑及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及ー種生物製劑及其應用，特別是涉及ー種用於防治植物病毒病的生物復配製劑及其應用。
背景技術：
病毒是ー類無細胞結構的極其微小的專性寄生物，必須用電鏡才能觀察到它的形態。植物病毒的形態多呈球形或杆狀，它不是一個細胞體，而是個微粒，稱為病毒粒體。這種粒體是核酸和蛋白質兩種物質組成的，核酸位於中心或中軸，蛋白質包圍在核酸外面。病毒用自我複製(利用寄主活細胞的各種原料)的方法進行繁殖，由病毒侵染植物引起的病害稱為病毒病。植物病毒感染植物後，對植物細胞的影響與動物病毒一祥，會打亂植物細胞 的正常代謝活動，使植物的生長和發育遭到破壞，從而降低農作物的產量和品質。受害植物通常表現為變色、壞死、畸形等症狀。植物病毒除借帶毒的繁殖材料如接穗、鱗莖、塊根、塊莖等傳播外，主要是通過昆蟲，以及蟎類、土壌中的真菌、線蟲等媒介體傳播。據統計，毎年由於病毒病的危害，全世界的糧食損失為200億美元。微生物蛋白農藥是ー種新型生物農藥，無毒無殘留，環境友好，能激活植物的一系列代謝調控反應，從而使植物對病蟲害產生抗性，促進植物生長，提高作物品質，増加作物產量。極細鏈格孢激活蛋白主要是通過提高植物自身的免疫系統而激活植物對於植物病毒病的抗性。氨基寡糖素是ー類開發較早的生物農藥，在植物與病原菌的相互作用中，病原菌分泌的細胞壁降解酶通過水解植物細胞壁而釋放出寡糖信號分子，並以極低濃度傳達給植物受侵染的信息，誘導植物編碼植保素和其他防禦化合物合成酶基因的表達，啟動植物細胞的防禦反應。這兩種生物農藥對植物病毒病來說具有較好的防治結果，但從生產實踐中講，還是期望有更高防治效果並且使用成本較低、用量較少的藥劑出現。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種防治植物病毒病效果更好、用量較少、使用成本較低的生物復配製劑，及其在植物病毒病防治上的應用。本發明ー種防治植物病毒病的生物復配製劑，由濃度為1000mg/L的極細鏈格孢激活蛋白母液和濃度為1000mg/L的氨基寡糖素母液按體積比I : (0. 5 2. 0)復配而成，其中極細鏈格孢激活蛋白母液是將極細鏈格孢激活蛋白含量為10%的極細鏈格孢激活蛋白母藥用0. I %的吐溫-80水溶液稀釋製得，氨基寡糖素母液是將氨基寡糖素含量為7. 5%的氨基寡糖素母藥用0. 1%的吐溫-80水溶液稀釋製得。其中所述的極細鏈格孢激活蛋白母藥由中國農科院植保所廊坊農藥中試廠提供，氨基寡糖素母藥由遼寧省大連凱飛化學股份有限公司提供。上述生物復配製劑，優選極細鏈格孢激活蛋白母液和氨基寡糖素母液的體積比為
I Io
本發明的生物復配製劑可用於防治植物病毒病。上述生物復配製劑在防治植物病毒病中的應用，優選在防治番茄黃化曲葉病毒病、水稻條紋病毒病或菸草花葉病毒病中的應用。本發明的有益效果通過將極細鏈格孢激活蛋白母液和氨基寡糖素母液按一定比例進行復配，得到ー種復配製劑，該製劑可最大限度的發揮極細鏈格孢激活蛋白和氨基寡糖素各自的藥效，使藥劑的活性有了很大提高，藥劑的使用劑量和使用成本有了很大的降低。比這兩種母藥單獨使用更有效地防治植物病毒病的發生，特別是在番茄黃化曲葉病毒病(TYLCV)、水稻條紋病毒病(RSV)、菸草花葉病毒病(TMV)的防治上具有更好的防治效果。
具體實施例方式下面結合本發明具體的試驗過程，進ー步闡述本發明。實施例I :本發明對番茄黃化曲葉病毒病的防治效果試驗 步驟一、藥液的配製母液的製備10%極細鏈格孢激活蛋白母藥、7. 5%氨基寡糖素母藥分別用O. 1%的吐溫-80水溶液稀釋，先分別配製成1000mg/L單劑母液，然後再分別以體積比I : I、
I: 2、2 : 1、2 3、3 2的比例復配成五組復配劑母液，備用。濃度的設定根據藥劑活性分別將極細鏈格孢激活蛋白單劑母液、氨基寡糖素單劑母液、五組復配劑母液分別用O. I %的吐溫-80水溶液配置成10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L和160mg/L 5個系列濃度的藥液，每個濃度的藥液設置3個重複試驗。步驟ニ、供試靶標供試革巴標為中國番爺黃化曲葉病毒(Tomato yellow leaf curl virus, TYLCV),因該屬病毒在自然條件下只能由煙粉風(Bemisia tabaci)以持久方式傳播。傳毒介體的篩選2008年4 5月從南方重病區中採集煙粉蝨若蟲，在感病品種上進行飼養，交配後單頭雌蟲單獨產卵，再採用斑點免疫結合法檢測雌蟲帶毒情況，保留帶毒雌蟲的後代，飼養2 3代後獲得煙粉蝨群體，選擇帶毒率大於50%的群體分別飼養，獲得TYLCV傳毒介體煙粉蝨，連續5代監測其群體帶毒率均大於50%，備用。步驟三、防治效果的試驗選用感病品種將感病品種播於IOOOmL燒杯中，每杯播種25株苗。待秧苗長至3葉時進行接種，接種前2d淘汰病弱苗，挑選生長一致的幼苗20株，用防蟲網蓋好用於接種，備用。藥劑處理用噴霧法將藥劑均勻噴灑於備用的番茄苗葉面至全部潤溼，待藥液自然風乾後備用。每處理3盆，4次重複，並設只含溶劑和表面活性劑而不含有效成分的處理作空白對照。接種與培養保護性試驗一般為藥劑處理後24h左右進行接種；治療性藥劑一般在藥劑處理前24h接種。採用傳毒介體煙粉蝨接種，接種時間48h，接種強度4頭/株和番茄接種齡期3 4葉齡。按有效接種蟲量4頭/株將2 4齡接入杯中，每天趕蟲2次以確保被測番茄苗均勻獲毒。接種後移走全部煙粉蝨，再將番茄苗移栽至塑料小盆內培養。接種後在每天連續光照/黑暗各12h交替(光照強度為5000LUX 20000LUX)、溫度為18 20°C的條件下培養7d。接種7d後開始調查病害，每隔I天調查I次，共調查15次。
調查待空白對照病葉率達到50%以上時，分級調查各處理髮病情況，每處理至少調查30片葉。採用如下分級方法。O級整株健康無黃化曲葉；1級輕度矮化。株高為健株株高的I 4/5左右；3級矮化。株高為健株株高的4/5 2/3左右，頂部典型黃化曲葉；5級明顯矮化。株高為健株株高的2/3 1/2左右，頂部典型黃化曲葉；7級明顯矮化。株高為健株株高的1/2 1/3左右，整株典型症狀；9級嚴重矮化。株高為健株株高的1/3以下，整株典型症狀，或提早枯死。步驟四、數據統計與分析計算方法根據調查結果，按公式(I)、(2)計算各處理濃度對供試靶標的病情指數和防治效
果O 病情指數按公式(I)計算，單位為百分率)。
Σ (N1Xi)X= .................xlOO...................................(I)
NX9式中-X——病情指數；隊——各級病葉數；i——各級相對級數值；隊——調查總 葉數。防治效果按公式⑵計算。
CK-PTP=..............xlOO.........................(2)
CK式中P——防治效果，單位為百分率)；CK——空白對照病情指數；PT——藥劑處理病情指數.對藥劑混劑聯合毒力測定，根據孫雲沛法計算混劑的共毒係數(CTC)，評價混劑的聯合作用類型孫雲沛法根據共毒係數(CTC)來評價藥劑混用的增效作用，即CTC彡80為拮抗作用，80 < CTC < 120為相加作用，CTC彡120為增效作用。共毒係數(CTC)按式(3)、(4)、(5)計算
SATI= ..........xlOO....................(3)
M式中ΑΤΙ——混劑實測的毒力指數；S——標準藥劑的LD5tl,單位為毫克每升(mg/L) ；M-供試混劑的LD5tl,單位為毫克姆升(mg/L)。TTI = TIAXPA+TIBXPB.....................(4)式中TTI——混劑的理論毒カ指數；ΤΙΑ——A藥劑的毒力指數；Pa——A藥劑在混劑中的百分含量，單位為百分率)；TIb——B藥劑的毒力指數；Pb——B藥劑在混劑中的百分含量，單位為百分率
(% )ο
ATICTC= ..........xlOO..................(5)
TTI
式中CTC—共毒係數;ATI——混劑實測毒力指數；TTI——混劑理論毒力指數。結果與分析根據調查結果(見表1-2)，計算試驗藥劑的殺菌效果、毒力回歸方程，結果見表I-I ο
統計分析用PBT數據處理系統軟體進行分析，根據各藥劑濃度對數值及對應的防治效果的機率值作回歸分析，計算各藥劑的LD5tl值及其95%置信限。對藥劑混劑聯合毒力測定，根據孫雲沛法計算混劑的共毒係數(CTC)，評價混劑的聯合作用類型。結論根據室內毒力測定結果，極細鏈格孢激活蛋白和氨基寡糖素對番茄黃化曲葉病毒病菌的室內毒力回歸方程分別為Y = I. 2495X+3. 1953，Y=L 0578X+3. 5542，根據回歸方程計算出極細鏈格孢激活蛋白和氨基寡糖素分別對番茄黃化曲葉病毒病菌的LD5tl分別為27. 8221mg/L，23. 2711mg/L ;而兩者復配配比對番茄黃化曲葉病毒病菌的共毒係數(CTC)最高的是激活蛋白氨基寡糖(I D組合，為493. 9979，其次為激活蛋白氨基寡糖(I 2)組合，為394. 5271，其餘三組共毒係數均大於120。可見極細鏈格孢激活蛋白與氨基寡糖素復配對番茄黃化曲葉病毒病菌均表現為增效，尤其是激活蛋白氨基寡糖(I D組合對番茄黃化曲葉病毒病更敏感，活性高。表1-1.極細鏈格孢激活蛋白與氨基寡糖素單劑及復配製劑對番茄黃化曲葉病毒病菌的室內毒力測定結果
權利要求
1.一種防治植物病毒病的生物復配製劑，其特徵在幹由濃度為1000mg/L的極細鏈格孢激活蛋白母液和濃度為1000mg/L的氨基寡糖素母液按體積比I : (O. 5 2. O)復配而成，其中極細鏈格孢激活蛋白母液是將極細鏈格孢激活蛋白含量為10%的極細鏈格孢激活蛋白母藥用O. I %的吐溫-80水溶液稀釋製得，氨基寡糖素母液是將氨基寡糖素含量為7.5%的氨基寡糖素母藥用O. 1%的吐溫-80水溶液稀釋製得。
2.根據權利要求I所述的生物復配製劑，其特徵在幹由所述極細鏈格孢激活蛋白母液和氨基寡糖素母液按體積比I : I復配而成。
3.權利要求I或2所述的生物復配製劑在防治植物病毒病中的應用。
4.根據權利要求3所述的生物復配製劑在防治植物病毒病中的應用，其特徵在於所述植物病毒病為番爺黃化曲葉病毒病、水稻條紋病毒病或菸草花葉病毒病。
全文摘要
本發明涉及一種用於防治植物病毒病的生物復配製劑及其應用。其目的是為了提供一種最大限度的發揮極細鏈格孢激活蛋白和氨基寡糖素各自的藥效，使藥劑的活性有很大提高，更有效地防治植物病毒病發生的生物藥劑。本發明由濃度為1000mg/L的極細鏈格孢激活蛋白母液和濃度為1000mg/L的氨基寡糖素母液按體積比1∶(0.5～2.0)復配而成，當體積比為1∶1時該復配製劑的活性最高，防治效果最好。
文檔編號A01N43/16GK102687730SQ20111007380
公開日2012年9月26日 申請日期2011年3月25日 優先權日2011年3月25日
發明者曾洪梅, 楊秀芬, 袁京京, 邱德文, 郭立華 申請人:中國農業科學院植物保護研究所