一種春蘭快速培養繁殖方法與流程
2024-03-27 19:17:05 1
本發明涉及植物培養
技術領域：
，具體涉及一種春蘭快速培養繁殖方法。
背景技術：
：春蘭為蘭科蘭屬地生植物，又名朵蘭、撲地蘭、幽蘭、朵朵香、草蘭，是中國蘭花中栽培歷史最為悠久、人們最為喜歡的種類之一。植株一般較小，假鱗莖較小，卵球形。葉帶形，邊緣無齒或具細齒。花多單朵或兩朵，不出架；花色以綠色、淡褐黃色居多，花幽香。由於春蘭種子非常微小，幾乎無胚乳，在自然條件下種子萌發率極低，因此在生產實踐中多採用分株方式或組織培養進行繁殖，但是分株培養繁殖率低，時間長，不能滿足市場需要，組織培養能在一定程度上解決快速繁殖的難題，但是依然存在繁殖時間相對較長、轉接次數多、成本高、移栽成活率低等問題。技術實現要素：本發明的目的在於提供一種培養時間短、種子萌發率高的春蘭快速培養繁殖方法。為了達到上述目的，本發明採用的技術方案為：一種春蘭快速培養繁殖方法，利用輻射處理後的春蘭種子誘導產生原球莖，在對原球莖進行增殖、生根培養，最後移栽得到春蘭苗株。如上所述的一種春蘭快速培養繁殖方法，包括以下步驟：(1)輻射處理：取無病蟲害、長勢良好春蘭植株上的成熟蒴果，用60Co-γ射線進行輻射處理，輻射劑量為10～30Gy；(2)材料消毒：將輻射處理後的蒴果用75％的酒精消毒1min，接著用0.2％的升汞消毒3min，然後用無菌水衝洗2～3min，接著將消毒後的蒴果放置在無菌工作檯上，切開蒴果，將種子移入有少量無菌水的培養瓶中，輕輕搖動使之分散均勻；(3)原球莖誘導培養：用無菌吸管將種子分移到誘導培養基上，並使種子均勻地分布於誘導培養基表面，所述誘導培養基為：1/2MS+0.4～0.6mg/L煙酸+0.4～0.6mg/LVB6+0.1～0.2mg/LVB1+1～2g/L蛋白腖+18～22g/L蔗糖+8～10g/L瓊脂；pH為5.4～5.8，溫度為22～25℃，光照時間為12h/d，光照強度為1500～2000lx；(4)增殖培養：將誘導出的原球莖接種到增殖培養基中繼續培養，所述增殖培養基為：MS+0.8～1.5mg/L6-BA+0.1～0.3mg/LNAA+0.1～0.2mg/L肌醇+8～12％椰汁，培養條件：培養溫度24～26℃，光照時間為12h/d，光照強度為1500～2000lx；(5)生根壯苗培養：增殖培養後，選擇高2cm以上、有明顯突起的小苗轉入壯苗培養基中培養，所述壯苗培養基為：MS+3～6mg/LKT+0.5～0.8mg/LNAA+140～160g/L香蕉泥+90～110mg/L檸檬酸+28～32g/L食糖+5～9g/L瓊脂，pH為5.5～5.7，培養溫度23～25℃，光照時間為12h/d，光照強度為2000～2500lx；(6)移栽：當試管苗生長至4～5cm高，根2～4條，葉1～2片時，將試管苗放在自然光下煉苗5～7天，打開瓶蓋煉苗1～2天，然後進行盆栽。如上所述的一種春蘭快速培養繁殖方法，進一步說明為，所述誘導培養基為：1/2MS+0.5mg/L煙酸+0.5mg/LVB6+0.15mg/LVB1+1.5g/L蛋白腖+20g/L蔗糖+9g/L瓊脂。如上所述的一種春蘭快速培養繁殖方法，進一步說明為，所述增殖培養基為：MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+0.15mg/L肌醇+10％椰汁。如上所述的一種春蘭快速培養繁殖方法，進一步說明為，所述壯苗培養基為：MS+5mg/LKT+0.7mg/LNAA+150g/L香蕉泥+100mg/L檸檬酸+30g/L食糖+7g/L瓊脂。如上所述的一種春蘭快速培養繁殖方法，進一步說明為，所述輻射劑量為20Gy。本發明的有益效果是：通過輻射處理後的種子，可以提高種子的萌發率，減少萌發時間，通過生物技術手段在短時間內，滿足了商業化生產的需求，為企業規模化、產業化培養春蘭提供了技術支持。同時本方法中使用的各種培養基能夠使苗株成苗率高，長勢良好，提高了效率，節約了成本。具體實施方式本發明提供的一種春蘭快速培養繁殖方法，適用於春蘭的快速繁殖使用。該方法利用輻射處理後的春蘭種子誘導產生原球莖，在對原球莖進行增殖、生根培養，最後移栽得到春蘭苗株。通過輻射處理後的種子，可以提高種子的萌發率，減少萌發時間。本春蘭快速培養繁殖方法具體包括以下步驟：(1)輻射處理：取無病蟲害、長勢良好春蘭植株上的成熟蒴果，用60Co-γ射線進行輻射處理，輻射劑量為10～30Gy；表1為不同輻射劑量對種子萌發率的影響輻射劑量(Gy)接種數(個)平均萌發時間(d)萌發率(％)0100284851002641101002261201002069301002366401002751601002932801003315120100359表1中為了保證對照試驗的準確性，只是輻射劑量不同，而其他培養條件一致，如輻射後接種的培養基、培養溫度等均一致，從表1中可以看出，輻射劑量過小，對種子的影響不大，輻射劑量過大時，種子會受到不可逆的損害，失去活性，所以輻射劑量為10～30Gy；作為優選，所述輻射劑量為20Gy；通過輻射處理後的春蘭種子，減少了萌發時間的同時，還提高了種子的萌發率。(2)材料消毒：將輻射處理後的蒴果用75％的酒精消毒1min，接著用0.2％的升汞消毒3min，然後用無菌水衝洗2～3min，接著將消毒後的蒴果放置在無菌工作檯上，切開蒴果，將種子移入有少量無菌水的培養瓶中，輕輕搖動使之分散均勻；進行消毒是為了對種子進行殺菌，從而使後面的培養處理能夠不受汙染，保證春蘭的誘導成活率，從而提高了工作效率；(3)原球莖誘導培養：用無菌吸管將種子分移到誘導培養基上，並使種子均勻地分布於誘導培養基表面，所述誘導培養基為：1/2MS+0.4～0.6mg/L煙酸+0.4～0.6mg/LVB6+0.1～0.2mg/LVB1+1～2g/L蛋白腖+18～22g/L蔗糖+8～10g/L瓊脂；pH為5.4～5.8，溫度為22～25℃，光照時間為12h/d，光照強度為1500～2000lx；由於春蘭種子體積很小，故採用無菌吸管將種子分移到誘導培養基上，並使種子均布於誘導培養基表面；表2為多種誘導培養基的實施例表2為6種不同誘導培養基的實施例，在本誘導培養基取值範圍內，還可以有其他多種組合方式，這裡不一一進行闡述。作為優選，所述誘導培養基為：1/2MS+0.5mg/L煙酸+0.5mg/LVB6+0.15mg/LVB1+1.5g/L蛋白腖+20g/L蔗糖+9g/L瓊脂，即為表2中誘導培養基1的成分及用量，通過本誘導培養基誘導出來的原球莖，顆粒大、長勢良好，成長速度快等優點。(4)增殖培養：將誘導出的原球莖接種到增殖培養基中繼續培養，所述增殖培養基為：MS+0.8～1.5mg/L6-BA+0.1～0.3mg/LNAA+0.1～0.2mg/L肌醇+8～12％椰汁，培養條件：培養溫度24～26℃，光照時間為12h/d，光照強度為1500～2000lx；增值培養作用在於通過原球莖分化出繁殖出更多的原球莖，從而提高生產速率，為企業規模化培養春蘭提供有效途徑；表3為多種增值培養基的實施例表3為6種不同增值培養基的實施例，在本增值培養基取值範圍內，還可以有其他多種組合方式，這裡不一一進行闡述。作為優選，所述增殖培養基為：MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+0.15mg/L肌醇+10％椰汁，即為表3中增值培養基1的成分及用量。通過本步驟之後，還可以將增值後的單個芽切下，重新放置在增值培養基中繼續增值培養，從而培養出更多的春蘭苗株，提高產量的同時，降低了製造成本。(5)生根壯苗培養：增殖培養後，選擇高2cm以上、有明顯突起的小苗轉入壯苗培養基中培養，所述壯苗培養基為：MS+3～6mg/LKT+0.5～0.8mg/LNAA+140～160g/L香蕉泥+90～110mg/L檸檬酸+28～32g/L食糖+5～9g/L瓊脂，pH為5.5～5.7，培養溫度23～25℃，光照時間為12h/d，光照強度為2000～2500lx；表4為多種壯苗培養基的實施例表4為6種不同壯苗培養基的實施例，在本壯苗培養基取值範圍內，還可以有其他多種組合方式，這裡不一一進行闡述。作為優選，所述壯苗培養基為：MS+5mg/LKT+0.7mg/LNAA+150g/L香蕉泥+100mg/L檸檬酸+30g/L食糖+7g/L瓊脂，即為表4中壯苗培養基1的成分及用量。通過本壯苗培養基培養出來的春蘭苗株長勢良好、根系發達、葉片蔥綠，大大提高了春蘭移栽後的成活率。(6)移栽：當試管苗生長至4～5cm高，根2～4條，葉1～2片時，將試管苗放在自然光下煉苗5～7天，打開瓶蓋煉苗1～2天，然後進行盆栽。通過本方法在短時間內，滿足了商業化生產的需求，為企業規模化、產業化培養春蘭提供了技術支持，同時能夠使苗株成苗率高，長勢良好，提高了效率，節約了成本。本發明並不限於上述實例，在本發明的權利要求書所限定的範圍內，本領域技術人員不經創造性勞動即可做出的各種變形或修改均受本專利的保護。當前第1頁1 2 3