凝膠粒子測定試劑及使用其的測定方法

2023-12-04 19:34:31 2

專利名稱：凝膠粒子測定試劑及使用其的測定方法
技術領域：
本發明涉及在通過凝膠化反應使測定對象的試樣中的內毒素和/或β-D-葡聚糖等目標物質凝膠粒子化後所使用的凝膠粒子測定試劑，特別是涉及試圖早期(快速地)測定凝膠粒子開始出現的時間點的凝膠粒子測定試劑及使用其的測定方法。
背景技術：
所謂的內毒素，主要是不被革蘭氏染色法染色的(革蘭氏陰性)菌的菌體膜成分的一部分，其成分是被稱為脂多糖的脂質多糖類。具體地，是由被稱作脂質A (Lipid A)的脂質和多糖鏈通過2-酮基-3-脫氧辛酸(KDO)結合而成的脂多糖(LPS)，其中含有的被稱為脂質A (Lipid A)的脂質結構部分通過感染進入人體時,與細胞的受體結合而引起炎症,在大多數情況下會引起各種各樣的重度的臨床症狀。這樣，內毒素是成為人類敗血症或菌血症等致死率非常高的臨床症狀的原因的物質，因此，對進入到體內的內毒素進行評估在臨床上的要求很高。另外，藥品(注射劑等)和血液製劑.醫療用具(血管導管等)或人工透析中的大量精製水等不被內毒素汙染(無熱原)是非常重要的，在使用細菌製備的藥品(在重組蛋白質、基因治療中使用的DNA等)或食品添加劑、化妝品等中，適當除去或控制內毒素是不可缺少的。這種內毒素的除去確認或者急救醫學中的計測，不僅要求測定的試樣數多，而且還要求以救命治療為目的的迅速性。為了治療敗血症等，測量內毒素值的研究很早就開始了，人們發現鱟(Limulus)的阿米巴樣血細胞成分中所含的基因組與內毒素發生特異性反應而成為凝集塊堵塞傷口的現象，並據此嘗試使用該當的阿米巴樣血細胞水解物(Limulus Amebocyte Lysate ;LAL試劑或鱟試劑)對內毒素 進行定量測定。最初的使用鱟試劑的測定方法，僅僅是將其與作為試樣的患者血漿混合後靜置，在一定時間後倒轉過來，通過溶液的凝固來確認混合溶液是否凝膠化，根據引起凝膠化的最大稀釋率來推算內毒素的量，這就是被稱為所謂凝膠化法的半定量的測定方法。隨後，人們著眼於在凝膠化反應過程中濁度的增加，用採用光學測量方法的濁度計，根據伴隨靜置後的混合溶液的凝膠化反應的濁度變化來定量測定內毒素濃度，這是已知的比濁時間分析法。而且，還已知有顯色合成底物法，該方法是將鱟試劑反應過程的最終階段的凝固蛋白原(Coagulogen)轉換為凝固素(Coagulin)的凝膠化反應替換為合成底物的顯色反應。該方法是通過加入顯色合成底物(Boc-Leu-Gly-Arg-對硝基苯胺)來代替凝固過程中的凝固前體物質(凝固蛋白原=Coagulogen),通過其水解使對硝基苯胺游離，利用其黃色顯色的比色來測定凝固蛋白原的分解能力，測定內毒素的濃度。進而，作為以往的內毒素的測定方法，已經採用了例如專利文獻I 5所記載的方法。
專利文獻I是為了長時間精確度良好地測定水溶液中的內毒素濃度，在含有內毒素的水溶液中使對內毒素具有親和性、且具有不會阻礙或促進內毒素與鱟的血細胞成分液體之間的反應的性質的水溶液的蛋白質共存，從而穩定化水溶液中的內毒素的方法。專利文獻2是為了抑制內毒素的活性,在含有內毒素的試樣中使與內毒素相結合且具有抑制內毒素活性的性質的肽衍生物(或蛋白質)和表面活性劑共存的方法。專利文獻3是為了利用比濁時間分析法高靈敏度地檢測內毒素等，在規定的水溶性聚合物的共存下使鱟的血細胞成分與含有內毒素和/或β -D-葡聚糖的試樣混合，測定直至光學變化程度到達規定值的時間，根據所得時間與內毒素等的量的相互關係，求出試樣中的內毒素等的量的方法。專利文獻4是為了在短時間內正確地測定內毒素和β-D-葡聚糖等利用凝膠化反應測定的物質的濃度，在通過凝膠化反應測定試樣中的目標物質的測定裝置中，對收納有含有目標測定物質的檢品和含有引起凝膠化的試劑的溶液的試樣池照射發光二極體的照明光，利用攪拌棒攪拌試樣中的溶液，產生微小而均勻的凝膠粒子，使它們通過照明光；進而，利用二極體檢測在試樣池中生成的凝膠粒子的透射光，基於該透射光檢測輸出，測定所產生的凝膠粒子的大小和量的變化，由此測定溶液中的上述物質的濃度的技術。專利文獻5為具備試樣池、預先收納在該試樣池內且與試樣中的目標物質反應而發生凝膠化的試劑、為了抑制預先被收納並注入到試樣池內的含有試樣和試劑的混合溶液全體發生凝膠化而對混合溶液進行攪拌的攪拌部件、以及，在上述試劑及攪拌部件收納在試樣池內的狀態下密封試樣池的開口且在密封后可向試樣池內注入試樣的密封部件，在將試樣注入到試樣池內的時間點，開始攪拌部件的攪拌操作，在抑制混合溶液全體發生凝膠化的狀態下生成凝膠粒子的技術。進而，利用凝膠化反應的測定技術不僅可用於上述內毒素的測定，而且可用於β -D-葡聚糖(β -D-glucan)等的測定。

β-D-葡聚糖為構成具有真菌特徵的細胞膜的多糖(多糖體)。通過測定該β -D-葡聚糖，不僅是對諸如念珠菌、麴黴或隱球菌等一般在臨床上常見的真菌，而且對包括稀有真菌在內的大範圍內的真菌感染症的篩分等均有效。在該β-D-葡聚糖的測定中，利用β-D-葡聚糖來使鱟的血細胞提取成分凝膠化，然後採用上述的凝膠化法和/或比濁時間分析法、顯色合成底物法來進行測定。內毒素和β-D-葡聚糖的測定方法具有共同點，例如，採用大致相同的測定硬體，通過從鱟的血細胞提取成分中除去與β-D-葡聚糖發生特異性反應的G因子(Factor G)成分，能夠測定內毒素的選擇性凝膠化反應和/或顯色反應，並且通過預處理使試樣中的內毒素失活，能夠測定β -D-葡聚糖的選擇性凝膠化反應和/或顯色反應。現有技術文獻專利文獻專利文獻1:日本專利第2817606號公報(發明內容部分)專利文獻2:日本專利第3106839公報(發明內容部分)專利文獻3:日本專利第3327076號公報(發明內容部分)專利文獻4:W02008-139544號公報(具體實施方式
部分，圖1)專利文獻5:日本特開2010-085276號公報(具體實施方式
，圖1)

發明內容
發明要解決的課題但是，在以往的凝膠化法、比濁時間分析法及顯色合成底物法中，存在以下缺點。凝膠化法及比濁時間分析法雖然均生成凝膠，但是在低濃度下，需要約90分鐘以上的長時間。即，雖然反應溶液的凝膠化時間與作為測定對象的試樣中的目標物質的濃度呈正比，但凝膠化法及比濁時間分析法均由於靈敏度的問題而不能檢測出準確的凝膠化開始時間等，因而只能依據進行至某種程度的凝膠化的時間來計算反應量，以此作為凝膠化時間的基準。例如以比濁時間分析法為例進行說明，比濁時間分析法是這樣一種定量法，雖然通過在同一條件下製備試劑，變化開始時的最初濃度水平的濁度和變化達到目的時的濃度水平的濁度是知道的，但各種以S形曲線變化的濁度變化開始時間和結束時間卻很難知道，通過測定最初和最終水平之間的一定水平的變化到達(濁度的增加)，轉變為對凝膠化全體的變化觀察，以此進行定量。但是，如果變成低濃度的內毒素，則體系全體的凝膠化就會推遲，由此，所觀測到的濁度變化也隨之變慢，以致於難以測定至一定水平的變化到達，在此情況下，靈敏度必然變得遲鈍。因此，很難說凝膠化法和比濁時間分析法都是適合於需要急救的情況或者可測定許多檢品的方法。此外，在比濁時間分析法中往往產生與內毒素無關的非特異性的混濁，因此，有可能欠缺測定精度。另外，凝膠化法的測定界限濃度為3pg/ml，比濁時間分析法的測定界限濃度為lpg/ml左右。予以說明，作為適用於凝膠化反應測定裝置的比濁時間分析法，即使假定適合採用專利文獻I所示的散射測光法，但作為替換為溶液全體的凝膠化的變化觀察的定量法，仍然不能解決上述問題。另一方面，雖然顯色合成底物法與凝膠化法和比濁時間分析法相比，測定時間縮短至約30分鐘左右，但是在臨床試樣等天然物的測定中，有時發生由作為使用人工底物的弊端而混在的非特異性蛋白分解酶所引起的偽陽性反應，難以對臨床試樣等進行特異度較高的測定，引發喪失測定的可靠性的問題。另外，測定準備工作繁瑣，測定界限濃度也為3p g/ml,劣於比池時間分析法。另外，在專利文獻1、2中，均是以對內毒素的長時間測定為前提，只不過是提供了穩定水溶液中的內毒素或者抑制內毒素的活化的方法。另外，專利文獻3、4由於是以比濁時間分析法為前提，為了求得內毒素的量，必須引起溶液全體的凝膠化、通過濁度估算其凝膠化速度、由此演算內毒素的濃度。在該方面，專利文獻5是本申請人之前申請的方式，例如，在含有內毒素的試樣中混合試劑，一邊抑制混合溶液全體的凝膠化、一邊使凝膠粒子出現，通過光學檢測裝置檢測該凝膠粒子的出現時間點。相對於例如專利文獻3、4的方式那樣的以混合溶液全體的凝膠化狀態為檢測對象，該方式由於以相當於混合溶液從溶膠相相變至凝膠相的時間點的凝膠粒子生成開始時間點作為檢測對象，因此與專利文獻3、4的方式相比，能夠在短時間內以高靈敏度捕捉混合溶液向凝膠化的轉移現象，在此方面優異。
本申請人為了更為便捷地使用該方式，發現了對溶膠相向凝膠相的穩定相轉變進行控制的新型凝膠粒子測定試劑，至此完成了本發明。本發明提供在早期(快速地)測定凝膠粒子的生成開始時間點方面有效的凝膠粒子測定試劑及使用其的測定方法。解決課題的手段第I項發明為一種凝膠粒子測定試劑，其混合在含有作為測定對象的目標物質的試樣中，在使所述目標物質發生凝膠粒子化後使用，其特徵在於，包含:與所述目標物質之間發生凝膠化反應的試劑基劑；和添加到該試劑基劑中的、對所述試樣具有可溶性並以0.002 1%的濃度溶解、且促進集中在規定範圍粒徑的凝膠粒子生成的、生物學惰性的粒子形成促進因子。第2項發明為第I項發明所述的凝膠粒子測定試劑，其特徵在於，上述粒子形成促進因子為可溶性的熱變性蛋白質。第3項發明為第I項發明所述的凝膠粒子測定試劑，其特徵在於，上述粒子形成促進因子為可溶性的、惰性的、生物來源的高分子或石油高分子化學成分來源的多孔微粒。第4項發明為第I 3任一項發明所述的凝膠粒子測定試劑，其特徵在於，作為測定對象的目標物質為內毒素和/或β -D-葡聚糖，試劑基劑為鱟試劑。第5項發明為一種凝膠粒子測定方法，其通過凝膠化反應使試樣中的目標物質發生粒子化來進行測定，其特徵在於，包括:收納工序，在至少一部分具有使光入射的入射部和使光射出的出射部的試樣池中，收納含有作為測定對象的目標物質的試樣和含有用於使所述目標物質發生凝膠化的第I 4任一項發明所述的凝膠粒子測定試劑的溶液；攪拌工序，為了抑制該試樣池內的含有試樣和試劑溶液的混合溶液全體發生凝膠化，使用攪拌裝置攪拌所述混合溶液；光照射工序，由設置在所述試樣池的入射部外部的入射光源對所述試樣池內的含有試樣和試劑溶液的混合溶液照射相干光；檢測工序，使用設置在所述試樣池的出射部外部的檢測裝置，檢測在所述試樣池內的含有試樣和試劑溶液的混合溶液中對在所述混合溶液從溶膠相相變至凝膠相的時間點生成的凝膠粒子發生散射或透射的光成分；和凝膠粒子生成判別工序，基於上述檢測工序得到的檢測輸出，判別混合溶液內的所述凝膠粒子的生成開始時間點。發明效果根據第I項發明，可以提供在早期測定凝膠粒子的生成開始時間點方面有效的凝膠粒子測定試劑。根據第2或第3項發明，使用代表性的粒子形成促進因子，可以簡單地製造凝膠粒子測定試劑。
根據第4項發明，可適用於作為測定對象的目標物質的內毒素和/或β -D-葡聚糖的定量。根據第5項發明，可以早期(快速地)測定凝膠粒子的生成開始時間點。


[圖1](a)是表示本發明採用的凝膠粒子測定試劑的實施方式的概要的說明圖、(b)是表示本實施方式所採用的凝膠粒子測定方法的模式圖、(C)為表示作為(b)的測定方法的測定原理的凝膠化反應進行工序中的反應時間與散射光強度的關係的說明圖。[圖2](a)為示意性表示使用本實施方式的凝膠粒子測定試劑時產生的凝膠粒子的生成過程的說明圖、(b)為示意性表示使用比較方式的凝膠粒子測定試劑時產生的凝膠粒子的生成過程的說明圖。[圖3]為示意性表示使用鱟試劑時的內毒素的凝膠化反應過程的說明圖。[圖4]是表示實施方式I的凝膠粒子測定裝置的說明圖。[圖5]Ca)是表示實施方式I中所用雷射光源、後方散射光檢測器的構成例的說明圖、(b)為(a)的一部分截面平面說明圖。[圖6](a)是表示實施方式I所用的試樣池的分解斜視圖、(b)為其截面說明圖。[圖7](a)是表不對凝膠粒子照射相干光時的散射光的散射方向的說明圖、(b)是表示伴隨凝膠粒子的粒徑變化的散射光的光度分布的說明圖。[圖8]是表示實施方式I的凝膠粒子測定裝置的數據分析處理的一例的流程圖。[圖9](a)是表示對已知內毒素濃度的試樣進行後方散射測光的凝膠粒子的檢測例的說明圖，(b)是表示使用(a)的結果的標準曲線製作例的說明圖。[圖10](a)是表示對添加有標準品內毒素的水試樣，使用實施方式I的凝膠粒子測定裝置進行後方散射測光的實測數據例的說明圖，(b)是表示對添加有與(a)相同的標準品內毒素的水試樣，使用比較方式I的凝膠粒子測定裝置進行前方散射測光的實測數據例的說明圖，(C)是表示對添加有與(a)相同的標準品內毒素的水試樣，使用比較方式2的凝膠粒子測定裝置進行前方透射光的實測數據例的說明圖。[圖11](a) (b)是表示實施方式I的凝膠粒子測定裝置的變形方式的說明圖。[圖12]Ca)是表示實施方式2的凝膠粒子測定裝置的說明圖、(b)是從(a)中B方向觀察的矢量圖。[圖13]是表示實施方式2的凝膠粒子測定裝置的數據分析處理的一例的流程圖。[圖14]Ca)是表示對已知內毒素濃度的試樣進行透射測光的凝膠粒子的檢測例的說明圖，(b)是表示使用(a)的結果的標準曲線製作例的說明圖。[圖15](a) (C)是表示在實施例1中，作為粒子形成促進因子，在利用無內毒素、經熱變性的血漿的方式下，改變相對於同一內毒素濃度(10pg/ml)的該血漿濃度時的凝膠粒子的生成過程的說明圖(1)，Ca)表示血漿濃度為0.2%的情況、(b)表示血漿濃度為0.1%的情況、(c)表示血漿濃度為0%的情況。[圖16](a) (b)是表示在實施例1中，作為粒子形成促進因子，在利用無內毒素、經熱變性的血漿的方式下，改變相對於同一內毒素濃度(10pg/ml)的該血漿濃度時的凝膠粒子的生成過程的說明圖(2)，Ca)表示血漿濃度為10%的情況、(b)表示血漿濃度為5%的情況。[圖17](a) (b)是表示在實施例1中，作為粒子形成促進因子，在利用無內毒素、經熱變性的血漿的方式下，改變相對於同一內毒素濃度(10pg/ml)的該血漿濃度時的凝膠粒子的生成過程的說明圖(3)，(a)表示血漿濃度為1%的情況、(b)表示血漿濃度為0.5%的情況。[圖18]是表不圖15 圖17的相對於同一內毒素濃度(10pg/ml)的熱變性血眾蛋白質濃度與直至凝膠粒子開始生成的反應時間之間的關係的圖。[圖19]是表示對於在凝膠粒子測定試劑中添加作為粒子形成促進因子的變性蛋白質的實施例2和在凝膠粒子測定試劑中代替實施例2的變性蛋白質添加未變性蛋白質的比較例，使濃度變化時的凝膠粒子的生成過程的說明圖。[圖20]是表示對於實施例2和比較例，變性蛋白質、未變性蛋白質的濃度與直至生成凝膠粒子的反應時間之間的關係的圖。[圖21](a) (C)是表示在實施例3中，在對含有一定量的內毒素(10pg/ml)的樣品試樣作為粒子形成促進因子利用精製後的熱變性白蛋白(DA denatured Albumin)的方式下，在改變該DA濃度時所產生的凝膠粒子的生成過程的說明圖(1)，Ca)表示DA濃度為1%的情況、(b)表示DA濃度為0.8%的情況、(c)表示DA濃度為0.4%的情況。[圖22](a) (C)是表示在實施例3中，在對含有一定量的內毒素(10pg/ml)的樣品試樣作為粒子形成 促進因子利用精製後的熱變性白蛋白(DA denatured Albumin)的方式下，在改變該DA濃度時所產生的凝膠粒子的生成過程的說明圖(2)，(a)表示DA濃度為0.2%的情況、(b)表示DA濃度為0.1%的情況、(c)表示DA濃度為0.05%的情況。[圖23](a) (d)是表示在實施例3中，在對含有一定量的內毒素(10pg/ml)的樣品試樣作為粒子形成促進因子利用精製後的熱變性白蛋白(DA denatured Albumin)的方式下，在改變該DA濃度時所產生的凝膠粒子的生成過程的說明圖(3)，(a)表示DA濃度為0.02%的情況、(b)表示DA濃度為0.01%的情況、(c)表示DA濃度為0.001%的情況、(d)表示DA濃度為0.0001%的情況。[圖24]是表示圖21 圖23的實施例3的DA濃度與直至凝膠粒子開始生成的反應時間的關係的圖。[圖25]是表示實施例3中利用的作為粒子形成促進因子的變性白蛋白的利用電子顯微鏡觀察所得結構的說明圖。[圖26]是示意性表示在凝膠粒子生成過程中變性白蛋白發揮的作用的說明圖。[圖27]是表示在血液凝固反應中本發明的實用例的說明圖。[圖28](a) (b)是表示在抗原抗體反應中本發明的實用例的說明圖。
具體實施例方式◎實施方式的概要圖1 (a)是表示本發明所用的實施方式的凝膠粒子測定試劑的概要說明圖。該圖中，凝膠粒子測定試劑R是混合在含有作為測定對象的目標物質St的試樣S(參照圖1 (b))中，在使上述目標物質St發生凝膠粒子化後使用的試劑，包含與上述目標物質St之間發生凝膠化反應的試劑基劑I ;以及，添加到該試劑基劑I中的、對上述試樣S具有可溶性並以0.002 1%的濃度溶解，且促進集中在規定範圍粒徑的凝膠粒子G生成的、生物學惰性的粒子形成促進因子2。予以說明，本申請的粒子形成促進因子2的濃度值用體積百分比(V / V)進行標明。該圖中，當存在對試樣S的目標物質St具有特異反應性的試劑R時，就會以依賴於試樣S中的目標物質St的濃度的比例，引起該目標物質St與試劑R發生特異性反應的現象。在該反應過程中，試劑R受到目標物質St的刺激，使規定的因子活化，作為其起因，是在規定的酶發生活化時，例如水溶性蛋白質由於酶的作用而發生分解反應時，轉變成不溶性的蛋白質，引致凝膠粒子G的出現。本實施方式中，上述目標物質St只要是能夠與測定試劑R之間發生凝膠化反應、生成凝膠粒子G，就可廣泛包擴各種物質。例如可舉出內毒素或β-D-葡聚糖。另外，試劑基劑I還可包含與目標物質St進行凝膠化反應的因子(酶等)。例如，目標物質St為內毒素或β -D-葡聚糖時，則代表地可舉出鱟試劑，但並不限定於鱟試劑，只要是鱟(Limulus)以外的鱟類的阿米巴樣血細胞成分中所含的基因組能與內毒素或β-D-葡聚糖發生特異性反應，則當然也可以利用該阿米巴樣血細胞水解物來製作試劑基劑St。進而，粒子形成促進因子2需要對試樣S是可溶性的。其原因在於，假設為不溶性時，在正確把握凝膠粒子的生成開始時間點方面有存在阻礙的危險。另外，粒子形成促進因子2隻要是能作為促進直至凝膠粒子G的產物(例如酶的產物)的凝集的凝集因子發揮作用、起到促進凝膠粒子G形成的作用的物質即可。此時，作為粒子形成促進因子2，推測其起到使導致凝膠粒子G形成的鱟反應最終產物凝固素聚集成一定尺寸的作用。這裡， 當添加粒子形成促進因子2時，如圖2(a)示意性表示的那樣，隨著時間的經過不會生成無限制、無定型大小的各種粒徑，而是生成成為集中在規定範圍粒徑(圖2中，相對於粒徑I 32的水平，偏向更小的S尺寸的範圍)的凝膠粒子G的產物，其發生凝集，迅速成為凝膠粒子G。這裡所說的「規定範圍的粒徑」只要是易於凝集的較小尺寸即可，也可包含在某一範圍內。予以說明，僅為參考，可以理解在不添加粒子形成促進因子2時的凝膠化反應的凝膠粒子G的生成過程中，如圖2 (b)示意性表示的那樣，在粒徑並未集中至規定範圍的狀態下生成成為凝膠粒子G的產物，該產物的生成時間也比添加粒子形成促進因子2時延遲。而且，粒子形成促進因子2需要為0.002 1%的濃度。此時，當小於0.002%時，對於促進凝膠粒子G的形成是不充分的，而超過1%時，添加了過剩的粒子形成促進因子2，相反發現抑制凝集反應的傾向。推測這是因為當粒子形成促進因子2過多時，凝固素分子分散、相互的作用反而相互幹涉的結果。而且，粒子形成促進因子2需要是生物學惰性的。這是由於，例如採用生物學活性的因子時，則因子的特性隨活性發生變化，導致不僅作為因子的作用不穩定、而且還可能會影響到試劑基劑I的反應本身。這裡，作為粒子形成促進因子2的代表性方式，例如可舉出可溶性的熱變性蛋白質。作為該熱變性蛋白質，包括血漿蛋白質類、酶類、植物蛋白質類、蛋清白蛋白等。例如血漿蛋白質通過對稀釋溶液進行熱處理(例如120°C、20分鐘高壓滅菌處理)可作為可溶性的熱變性蛋白質獲得。另外，作為粒子形成促進因子2，只要是成為所謂粒子形成的微小的凝膠化核的物質即可，因此未必是熱變性蛋白質，作為粒子形成促進因子2的其他代表方式，可舉出生物體來源的高分子或石油高分子化學成分來源的多孔微粒。但對於這些物質，也要求可溶性、且生物學惰性。
上述生物體來源的高分子中例如包括纖維素、多糖類、糖蛋白等，另外，來自石油高分子化學成分的多孔微粒例如可舉出納米顆粒樹脂等。接著，在本實施方式中，對使用上述凝膠粒子測定試劑R的凝膠粒子測定方法的概要進行說明。本實施方式中，凝膠粒子測定方法如圖1 (b)所示，是通過凝膠化反應將試樣S中的目標物質St粒子化而進行測定的凝膠粒子測定方法，其包括以下工序:收納工序，在至少一部分具有使光入射的入射部和使光射出的出射部的試樣池3中收納含有作為測定對象的目標物質St的試樣S和含有用於使上述目標物質St發生凝膠化的上述凝膠粒子測定試劑R的溶液；攪拌工序，為了抑制該試樣池3內的含有試樣S和試劑R溶液的混合溶液W全體發生凝膠化、使用攪拌裝置4攪拌上述混合溶液W ;光照射工序，由設置在上述試樣池3的入射部外部的入射光源5對上述試樣池3內的含有試樣S和試劑R溶液的混合溶液W照射相干光；檢測工序，使用設置在上述試樣池3的出射部外部的檢測裝置6，檢測在上述試樣池3內的含有試樣S和試劑R溶液的混合溶液W中對在上述混合溶液W從溶膠相相變至凝膠相的時間點生成的凝膠粒子G發生散射或透射的光成分；以及，凝膠粒子生成判別工序，基於上述檢測工序得到的檢測輸出，判別混合溶液W內的上述凝膠粒子G的生成開始時間點。在這種凝膠粒子測定方法中，使用試樣池3、攪拌裝置4、入射光源5、檢測裝置6、以及未圖示的控制裝置(例如計算機)。這裡，試樣池3隻要至少一部分具有使光入射的入射部和使光射出的出射部即可，其形狀並不限定於具有圓筒狀周壁，可以具有多邊形周壁。另外，從穩定地保持作為酶反應的鱟反應的測定條件的觀點考慮，優選該試樣池3設置在未圖示的恆溫槽內的方式。作為攪拌裝置4，只要是能對含有試樣S和試劑R溶液的混合溶液W賦予攪拌作用，就可以廣泛地包括各種攪拌裝置，當然可以採用內置而直接進行攪拌的方式，也可以適宜地選擇利用空氣實施攪拌作用、或利用振蕩實施攪拌作用等方式。進而，攪拌裝置4的攪拌程度要求達到能夠抑制試樣池3內含有試樣S和試劑R溶液的混合溶液W全體發生凝膠化。特別地，從利用攪拌裝置4確實地進行攪拌操作的觀點考慮，試樣池3優選內置有能夠直接攪拌池容器內含有試樣S和試劑R溶液的混合溶液W的攪拌裝置4。進而，作為入射光源5，只要是能夠照射相干光的光源即可，不限定於由雷射光源發出的雷射，除了可以製成例如能使鈉燈的光那樣的單色光通過針孔那樣的光源之外，還可使用高亮度LED和濾光器來構成。另外，作為檢測裝置6，只要是設置在與入射光源5不同的位置、且能夠檢測散射光或透射光、或者設置在與入射光源5同一側、且能夠檢測返回至入射光源後方的散射光成分的裝置即可。例如在檢測裝置6設置在與入射光源5不同的位置的方式中，可以對透射光或散射光的任一種進行檢測，但例如在檢測裝置6的配設部位是透射光及散射光混在的方式中，當採用透射光檢測方式時，則優選在檢測裝置6與試樣池3之間具備散射光除去裝置的方式，該散射光除去裝置用於除去被凝膠粒子G散射的相位偏離的散射光中射向檢測裝置6的那部分光。作為該散射光除去裝置，可舉出能阻斷散射光成分而僅使透射光成分通過的偏振濾光器。予以說明，相反地，在檢測散射光的方式中，優選根據相同原理採用透射光除去裝置除去透射光的方式。另一方面，例如在用檢測裝置6檢測後方散射光時，既可以是在來自入射光源5的入射光的周圍直接檢測上述後方散射光成分的方式，或者也可以是聚集來自入射光源5的入射光周圍的光、用玻璃纖維等導光部件導入至任意場所來進行檢測的方式。另外，為了不被後方散射光檢測裝置6檢出雜散光,優選米用用於除去來自入射光源5入射的光中的雜散光成分的雜散光除去裝置(在試樣池3的周壁內或外部設置光吸收材料，或使試樣漫反射的結構)，所述雜散光成分為在所述混合溶液W中返回到入射光源5側方向的透射光或散射光成分。進而，作為演算裝置只要是能夠具體化上述凝膠粒子生成判別工序的裝置即可，代表性地可採用根據上述檢測裝置6的檢測結果，計測檢測輸出的變動成分，並根據該計測結果判別上述混合溶液W內的凝膠粒子G的生成開始時間點的方法。這裡，作為檢測光的變動成分的計測方法，例如可舉出在將檢測輸出平均化或平穩化的同時進行過濾化的方法。另外，作為演算裝置，是判別凝膠粒子G的生成開始時間點的裝置即可，但並不限定於此，可以是廣泛地判別凝膠粒子G的生成狀態。此時的「判別凝膠粒子的生成狀態」是指，不僅包括能夠直接判別與凝膠粒子的生成狀態有關的信息，而且包括判別可基於凝膠粒子的生成狀態進行判別的信息(例如目標物質的定量信息)。此處，凝膠粒子G的生成狀態是指廣泛地包括凝膠粒子的生成開始(出現)時間點、生成過程的變化、生成結束時間點、生成量等，因此，在本實施方式中，只要至少包括上述混合溶液W從溶膠相向凝膠相的相轉變的時間(時間點)即可，此外還可以包括其他事項。接著，根據圖1 (C)對利用圖1 (b)所示的凝膠粒子測定方法(例如採用散射光檢測方式)的凝膠粒子G的生成開始時間點的測定原理進行說明。本實施方式中，如圖1 (b)所示，在試樣S和試劑R溶液的混合溶液W中沒有凝膠粒子G的情況(相當於混合溶液W為溶膠相的情況)下，從入射光源5發出的照射光Bm沒有被凝膠粒子遮住，因此，該照射光Bm不會被凝膠粒子B散射，沒有被檢測裝置6檢出的散射光成分。因此，使用檢測裝置6檢測的散射光強度大致保持為O (參照圖1 (C)P1X進而，如圖1 (b)所示，在試樣S和試劑R溶液的混合溶液W中開始生成凝膠粒子G的情況(相當於混合溶液W開始從溶膠相向凝膠相發生相轉變的情況)下，由於凝膠粒子G的存在，由入射光源5發出的照射光Bm被遮住一部分，因此，該照射光Bm發生散射，該散射光成分被檢測裝置6檢測出來。因而，利用檢測裝置6獲得的檢測輸出從作為穩定區域的O水平上升、發生變化(參照圖1 (c)P2)。然後，如圖1 (b)所示，在試樣S和試劑R溶液的混合溶液W中逐漸生成凝膠粒子G的情況下，由入射光源5發出的透射光Bm由於逐漸生成的大量凝膠粒子G的存在，散射程度逐漸增加，被檢測裝置6檢測到的散射光成分也逐漸增加。因此，利用檢測裝置6獲得的檢測輸出逐漸增加，使用檢測裝置6檢測到的散射光強度以變化點P2為界逐漸上升、發生變化(參見圖1 (c)的P3)。在上述的實施方式中，示出了基於照射於混合溶液W中的照射光Bm的散射光的變動成分，判別與混合溶液W從溶膠相向凝膠相的相轉變的時間(時間點)有關的凝膠粒子的生成開始時間點(相當於圖1 (C)P2)的方式。接著，以內毒素為例，示意性示出內毒素的凝膠化反應過程，如圖3所示。在該圖中，一旦(I)所示的內毒素的刺激傳遞到鱟試劑，首先，如(2)所示，因子C(Factor C)被活化,成為活化因子C(Activated Factor C),接著，由於活化因子C的作用，如(3)所示，因子B (Factor B)被活化,成為活化因子B (Activated Factor B)。然後，由於活化因子B的作用，如(4)所示，凝固酶原變成凝固酶，如(5)所示，該凝固酶將凝固蛋白原(水溶性蛋白質)分解，生成凝固素(不溶性蛋白質)。該凝固素(不溶性蛋白質)一旦在該條件下被攪拌，全體的凝膠化被抑制，就會作為凝膠粒子G出現，一旦靜置，則如(6)所示，溶液體系全體發生聚合化/凝膠化。總之，可以理解，其反應過程如下:在試樣S的目標物質St為內毒素的情況下，通過向混合溶液W賦予一定的攪拌狀態,可以抑制混合溶液W全體的凝膠化，同時在該狀態下，當內毒素的刺激傳遞給鱟試劑R時，就可能在凝固酶的周圍產生出凝固素(不溶性蛋白質)的凝膠粒子G，凝固素(不溶性蛋白質)作為凝膠粒子G生成後，凝膠粒子G就逐漸生成。另外還發現，內毒素的刺激傳遞給鱟試劑R反應流(級聯反應)的速度(鱟反應速度)依賴於內毒素濃度，內毒素濃度越高，鱟反應速度越快，含有凝固素(不溶性蛋白質)的凝膠粒子G的出現時間就越早。因此，只要能夠在混合溶液內精度良好地檢測散射光或透射光變化，就可以把握作為凝膠粒子G的生成開始時間點的含有上述凝固素(不溶性蛋白質)的凝膠粒子G的出現時間，這是本實施方式的凝膠粒子測定方法的基礎。這種凝膠粒子測定方法與例如以往的凝膠化法或比濁時間分析法的測定原理(在利用鱟試劑R的反應過程中，在靜置的條件下，在被活化的凝固酶的影響下最終達到反應體系的溶液全體發生凝 膠化，利用濁度來定量測定該體系全體均勻地發生凝膠化的過程的方式)完全不同。一般而言，對於臨床試樣中內毒素的測定的要求，特別是在救命救急的目的下，簡便而快速的測定為第一要求。對於在以往方法的比濁時間法中成為問題「靈敏度差導致的測定水平低」和「測定時間長度帶來的不便」等事項，通過採用上述的測定方式而被更可靠地消除。S卩，本實施方式的凝膠粒子測定方法從原理上來說，通過均勻地攪拌含有試樣和鱟試劑的混合溶液W，由此，在均勻的反應下，不是作為混合溶液體系全體，而是在局部產生微小的凝膠粒子，通過對其照射雷射那樣的相干的均勻的光引起散射，通過對其進行檢測，檢測與通過添加內毒素而引起凝膠粒子出現的與溶膠相向凝膠相的相轉變有關的相轉變點，通過計測直至達到該相轉變點的時間，可以推測鱟試劑中的內毒素的量。簡要地說，本實施方式的凝膠粒子測定方法是不追求混合溶液體系全體的變化(凝膠化)，而著眼於直至引起相轉變的時間(凝膠粒子的生成開始時間點)為依賴於內毒素濃度的反應這一事實，由此，與以往方法的比濁時間法相比，可以更快地檢測出內毒素。以下根據附圖所示的實施方式更詳細地說明本發明。◎實施方式I本實施方式I的凝膠粒子測定裝置具有注入含有內毒素的試樣的試樣池100，用使用鱟試劑的凝膠化反應測定例如作為試樣的目標物質的內毒素的濃度。
—凝膠粒子測定裝置一在本實施方式中，凝膠粒子測定裝置如圖4所示構成。在該圖中，試樣池100設置在預先確定的測定臺上，在本實施方式中，將配置在恆溫槽115內的含有試樣S和試劑R的混合溶液W置於一定的恆溫環境(例如37°C )下，使測定條件為恆定。本實施方式中，試樣S的對象是含有作為目標物質的內毒素。另一方面，試劑R含有作為試劑基劑的與上述內毒素發生凝膠化反應的鱟試劑、和添加到該鱟試劑中的粒子形成促進因子。這裡，作為粒子形成促進因子，使用對試樣S為可溶性的熱變性蛋白質(例如血漿蛋白質、蛋清白蛋白等)，對試樣S的濃度調整為0.002
1%左右。這裡，粒子形成促進因子可以與鱟試劑一起提供，或者也可以與鱟試劑分開提供。作為前者的代表性方式，可舉出在鱟試劑中預先添加粒子形成促進因子，然後製成例如凍乾粉末狀的構成，作為後者的代表性方式，可舉出為了對用於測定的血液等試樣R進行稀釋，與例如凍乾粉末狀的鱟試劑分開製作的、加入有粒子形成促進因子的稀釋液的方式。但是，在後者的方式中，為了使粒子形成促進因子在凝膠化反應時與鱟試劑共存，必須在凝膠化反應前與鱟試劑一起進行充分地攪拌。另外，符號120是為了攪拌試樣池100內的混合溶液W而驅動試樣池100內的磁性攪拌子121的攪拌驅動裝置，例如，對混合溶液W賦予一定的攪拌狀態，一邊均勻地攪拌混合溶液W，一邊抑制混合溶液W的全體凝膠化。特別是在本例中，攪拌驅動裝置120的構成為:對由內置在試樣池100內的底壁的磁性體構成的攪拌子(攪拌棒)121，使磁力引起的攪拌力起作用的攪拌驅動源(磁性攪拌器)。另外，符號130為設置在試樣池100的側周壁的外側且照射相干光的雷射光源。在本例中，如圖5 (a) (b)所示，來自雷射光源130的相干光Bm沿橫切試樣池100的大致直徑部分的路徑照射，其光徑d設定為相對於生成的凝膠粒徑(例如0.2 2 μ m左右)為充分大的值(例如5 20 μπι左右)。進而，符號140在試樣池100的外部設置在與雷射光源130同側，為檢測來自雷射光源130的照射光Bm由在試樣池100內的混合溶液中生成的凝膠粒子散射的光中返回到雷射光源130側方向的後方散射光成分的後方散射光檢測器。在本例中，後方散射光檢測器140具有在中央部開設有通孔142的筒狀的檢測器主體141，在該檢測器主體141的通孔142中，使從雷射光源130照射到試樣池100內的照射光通過，同時，與該檢測器主體141的試樣池100的側周壁外面對向地設置環狀檢測面143，進而，在該檢測器主體141內的一部分中組裝可以感知由環狀檢測面143檢出的散射光的光二極體等受光元件(未圖示)。在此，後方散射光檢測器140的檢測精度設定為:在來自雷射光源130的照射光Bm的通過面積內可以根據I個或多個凝膠粒子的有無來檢測後方散射光量變化的程度。予以說明，後方散射光檢測器140的環狀檢測面143可以與試樣池100的側周壁外表面接觸或非接觸式地配置 ，但從良好地保持後方散射光成分的檢測性的觀點考慮，優選接觸配置的方式。
進而，在本實施方式中，在試樣池100的外部夾持試樣池100，在上述雷射光源130的相反側設置雜散光除去部件150。該雜散光除去部件150與從雷射光源130照射到試樣池100內的照射光Bm直接透射到達試樣池100的相反側周壁的區域及其周邊區域相對應，配置光吸收材料。這樣，在試樣池100的一部分設有雜散光除去部件150的理由如下所述。S卩，在來自雷射光源130的照射光被例如凝膠粒子散射的光中，返回至雷射光源130側的後方散射光成分以外的散射光成分、或者直接透過生成的凝膠粒子周圍的透射光成分可以成為被試樣池100的內壁等反射而朝向後方散射光檢測器140的雜散光成分，其中，尤其是指向性高的雜散光成分為透射光成分及朝向與透射光成分相同的方向的散射光成分，因此，在與它們相對應的位置上可以設置雜散光除去部件150。符號160為讀取來自後方散射光檢測器140的檢測輸出、執行例如圖8所示的數據分析處理的數據分析裝置，170為顯示由數據分析裝置160分析出的分析結果的顯示器。該數據分析裝置160由包括CPU、ROM、RAM、I/O接口等的計算機系統構成，例如在ROM內預先貯存圖8所示的數據分析處理程序，基於來自後方散射光檢測器140的檢測輸出，在CPU中執行數據分析處理程序。

予以說明，來自後方散射光檢測器140的檢測輸出利用例如未圖示的增幅器進行電流電壓變換後，利用AD變換器進行AD變換，收集入數據分析裝置160中。下面，基於圖6 (a) (b)，對本實施方式中使用的試樣池100的構成例及向試樣池100的攪拌子121、試樣S的導入例進行詳述。在該圖中，試樣池100由例如由玻璃材料一體化成型且上部開口的橫截面為圓形的有底的筒狀容器101構成，在其上部形成凸緣部102，同時，在該凸緣部102的下部形成頸部103，在凸緣部102及頸部103上形成小徑孔部104，在內部形成比該小徑孔部104的直徑大的大徑空間部105。然後，在該試樣池100內，含有內毒素的試樣和產生凝膠化反應的試劑106例如以凍乾粉末狀預先無菌且無內毒素地(一般稱為「無內毒素」或「無熱原的」)方式被收納，同時，預先收納採用磁性材料的攪拌子121。進而，在該試樣池100的小徑孔部104上嵌入由橡膠等彈性材料構成的密封栓108。該密封栓108成形為剖面大致T字狀，其頭部108a載置於試樣池100的凸緣部102上，其腳部108b以密接於小徑孔部104的狀態被插入。另外，在密封栓108的腳部108b的一部分上設有凹槽108c。進一步地，試樣池100的凸緣部102及密封栓108的頭部108a用例如鋁製的蓋狀的保持蓋109覆蓋，該保持蓋109嵌入於試樣池100的凸緣部102的周壁，從外側包圍保持密封栓108。另外，在該保持蓋109的例如中央部，面向密封栓108的頭部108a形成孔部109ao另外，如圖6 (a) (b)所示，試樣池100在筒狀容器101的小徑孔部104開放的狀態下收納試劑106和攪拌子121，在該狀態下，用密封栓108密封筒狀容器101的小徑孔部104，同時，用保持蓋109覆蓋該密封栓108。這種試樣池100作為凝膠粒子測定裝置的附屬品或測定試劑盒供給用戶。
另外，作為向本實施方式的試樣池100的筒狀容器101中導入試樣S的導入法，例如可舉出利用保持蓋109的孔部109a在密封栓108中用注射針等穿孔具(未圖示)穿孔，經由該穿孔用注入器(未圖示)注入試樣S的方法。進而，為了容易地進行試樣S的導入，以使筒狀容器101內相對於大氣壓保持規定負壓的水平設定密封栓108的密封方法。下面，對本實施方式的凝膠粒子測定裝置的工作情況進行說明。在本實施方式中，如圖4所示，在試樣池100中注入含有內毒素的試樣S後，將未圖示的啟動開關進行打開操作，開始利用凝膠粒子測定裝置的測定順序。就該測定順序而言，用攪拌驅動裝置120旋轉攪拌子121，攪拌試樣池100內的含有試樣S和鱟試劑的混合溶液W。由此，使得混合溶液W全體被均勻地攪拌，同時，抑制混合溶液W全體發生凝膠化。另外，就測定順序而言，從雷射光源130向試樣池100內的混合溶液W照射相干光Bm，用後方散射光檢測器140檢測在混合溶液W中散射的光中朝向雷射光源130側方向的後方散射光成分，同時，將後方散射光檢測器140的檢測輸出採集入數據分析裝置160。另一方面，在試樣池100內的混合溶液W中，內毒素的刺激傳遞到鱟試劑,產生圖3所示的鱟反應，在抑制混合溶液W全體凝膠化的狀態下，依次生成凝膠粒子G。在本實施方式中，在來自雷射光源130的相干光Bm的通過面積內生成例如I個凝膠粒子G時，將其作為與混合溶液W從溶膠相轉變為凝膠相的相轉變點的時間有關的凝膠粒子G的生成開始時間點。在這種反應過程中，例如如圖8所示，數據分析裝置160在將來自後方散射光檢測器140的檢測輸出作為散射光量數據(數字數據)讀取後，進行平均化、過濾化處理，由此計測散射光量數據的變動成分。接著，基於散射光量數據的變動成分，提取出由後方散射光檢測器140檢出的散射光量數據的增加變化點(相當於圖1 (c) P2),通過參照預先規定的標準曲線，確定試樣S的內毒素濃度(ETX濃度)，顯示在顯示器170上。在本例中，標準曲線表示內毒素濃度(ETX濃度)和至達到散射光量數據的增加變化點為止的時間閾值之間的關係，基於達到散射光量數據的增加變化點的時間和標準曲線的相關性，確定內毒素濃度(ETX濃度)。另外，在顯示器170中，除了內毒素濃度(ETX濃度)以外,還切換顯示散射光量數據的時序數據、散射光量數據的變動成分的時序計測數據等數據。特別是，在本實施方式中，通過著眼於試劑R，能夠進一步促進凝膠粒子G的生成開始時間點。該方面通過後述的實施例闡明。在此，對本實施方式中採用的標準曲線的製作例進行說明。使用本實施方式I的凝膠粒子測定裝置，例如如下確定預先確定的實驗條件，對添加有各種內毒素濃度(例如10、1、0.lpg/ml)的樣品試樣時的鱟試劑，用凝膠粒子測定裝置研究利用後方散射光檢測器140的散射光度(散射光量數據)的變化。本例中使用的實驗條件如下所述。.雷射光源130:紅色光或藍色光
.後方散射光檢測器140:光二極體.攪拌子(攪拌棒)121的轉速:1000rpm 恆溫條件:37°C圖9 Ca)是相對於內毒素濃度10pg/ml、lpg/ml、0.lpg/ml的樣品試樣,對散射光強度追隨各自的時間經過而描繪的圖。予以說明，圖9 (a)的縱軸表示散射光強度(用Uy表示圖中的最大散射光強度刻度)，橫軸表示反應時間(用tx[例如IOOmin]表示圖中的最大反應時間刻度)。在該圖中，各條件的散射光強度的變化均顯示達到維持大致O的恆定水平的部分的時間並增加的傾向。該散射光強度的增加變化點相當於凝膠粒子的生成開始時間點(含有內毒素的樣品試樣從溶膠相向凝膠相的相轉變的時間)，推測是指由凝膠化開始時產生的增光。為了求出該凝膠化的開始時間，在本實施方式中，在圖9 (a)的圖中，手動求出近似於恆定散射光度的部分的直線(通常為O)與近似於散射光強度逐漸傾斜增加的變化部分的直線的交點，求出各自的凝膠化開始時間(反應時間)t (10),t (l)、t (0.1)。進而，在本實施方式中，使用由圖9 (a)的圖求出的凝膠化開始時間t (10)、t (I)、t (0.1)的值製作標準曲線(參照圖9 (b))。在圖9(b)中，標準曲線是通過將X軸設為作為內毒素濃度的ETX濃度(log變換)、將Y軸設為凝膠化開始時間，描繪各凝膠化開始時間的值並對這些值利用最小二乘法繪製直線而求出的。此時，凝膠化開始時間的值相對於各內毒素濃度的樣品試樣呈直線關係，表示相關係數高的相關性。即，例示本實施方式中求出的標準曲線的一例時，如下所述。內毒素濃度(pg/ml)凝膠化開始時間(min.)10pg/ml:t (10) = 12 (min.)lpg/ml:t (1) = 20 (min.)0.lpg/ml:t (0.1) = 70 (min.)與此相比，使用採用和光純藥工業株式會社制的比濁時間分析法的內毒素試劑盒
(凝膠化反應測定裝置)，研究內毒素濃度和凝膠化時間，結果，可得到如下的結果。
權利要求
1.凝膠粒子測定試劑，其混合在含有作為測定對象的目標物質的試樣中，在使所述目標物質發生凝膠粒子化後使用，其特徵在於，包含: 與所述目標物質之間發生凝膠化反應的試劑基劑；和 添加到該試劑基劑中的、對所述試樣具有可溶性並以0.002 1%的濃度溶解、且促進集中在規定範圍粒徑的凝膠粒子生成的、生物學惰性的粒子形成促進因子。
2.權利要求1所述的凝膠粒子測定試劑，其特徵在於，所述粒子形成促進因子為可溶性的熱變性蛋白質。
3.權利要求1所述的凝膠粒子測定試劑，其特徵在於，所述粒子形成促進因子為可溶性的、惰性的、生物來源的高分子或石油高分子化學成分來源的多孔微粒。
4.權利要求1 3任一項所述的凝膠粒子測定試劑，其特徵在於，作為測定對象的目標物質為內毒素和/或β -D-葡聚糖，試劑基劑為鱟試劑。
5.凝膠粒子測定方法，其通過凝膠化反應使試樣中的目標物質發生粒子化來進行測定，其特徵在於，包括: 收納工序，在至少一部 分具有使光入射的入射部和使光射出的出射部的試樣池中，收納含有作為測定對象的目標物質的試樣和含有用於使所述目標物質發生凝膠化的權利要求I 4任一項所述的凝膠粒子測定試劑的溶液； 攪拌工序,為了抑制該試樣池內的含有試樣和試劑溶液的混合溶液全體發生凝膠化，使用攪拌裝置攪拌所述混合溶液； 光照射工序，由設置在所述試樣池的入射部外部的入射光源對所述試樣池內的含有試樣和試劑溶液的混合溶液照射相干光； 檢測工序，使用設置在所述試樣池的出射部外部的檢測裝置，檢測在所述試樣池內的含有試樣和試劑溶液的混合溶液中對在所述混合溶液從溶膠相相變至凝膠相的時間點生成的凝膠粒子發生散射或透射的光成分；和 凝膠粒子生成判別工序，基於上述檢測工序得到的檢測輸出，判別混合溶液內的所述凝膠粒子的生成開始時間點。
全文摘要
本發明提供在早期測定凝膠粒子的生成開始時間點方面有效的凝膠粒子測定試劑。凝膠粒子測定試劑(R)是混合在包含作為測定對象的目標物質(St)的試樣(S)中，在使上述目標物質(St)發生凝膠粒子化後使用的凝膠粒子測定試劑，其包含與所述目標物質(St)之間發生凝膠化反應的試劑基劑(1)；以及，添加到該試劑基劑(1)中的、對所述試樣(S)具有可溶性並以0.002～1%的濃度溶解的、且促進集中在規定範圍粒徑的凝膠粒子(G)生成的、生物學惰性的粒子形成促進因子(2)。
文檔編號G01N33/483GK103168243SQ20118005003
公開日2013年6月19日 申請日期2011年10月18日 優先權日2010年10月18日
發明者小幡徹, 土谷正和 申請人:小幡徹