利用玉米秸稈製備木黴菌可溼性粉劑的方法

2023-12-03 11:06:06

專利名稱：利用玉米秸稈製備木黴菌可溼性粉劑的方法
技術領域：
本發明涉及一種農用生物殺菌劑，特別是利用玉米秸稈製備木黴菌可溼性粉劑的方法，屬農用微生物殺菌劑技術領域。
背景技術：
在一個農業生產大國內，每年收穫農作物後的秸杆可高達上億噸，這是一項可回收利用的珍貴資源。中國專利200510012912.1公開過一種以玉米秸稈為原料生產木黴生物殺菌劑的製備方法，該方法改變製備木黴殺菌劑需要使用玉米粉、糖蜜、麥麩等價格較貴的原料的狀況，利用秸杆等廉價原料製備木黴殺菌劑，既可以變廢為寶解決秸杆利用問題，又可以使用低價環保的木黴殺菌劑防治病害，收到了較好的社會效益和經濟效益。但是這種方法存有下列不足之處1.在固體發酵階段木黴分生孢子的產孢量較低，2.固體發酵物木黴分生孢子收集的工序繁複，上述問題制約了木黴素高效生產，也影響到該方法的廣泛推廣，故有待於進一步改進。

發明內容
本發明用於解決上述已有技術之缺陷而提供一種利用玉米秸稈製備木黴菌可溼性粉劑的方法，該方法可以大幅度增加固體發酵時木黴分生孢子生成量，該方法還省去了木黴分生孢子收集的繁複工序。
本發明所稱問題是通過以下技術方案解決的一種利用玉米秸稈製備木黴菌可溼性粉劑的方法，其特別之處是，它以玉米秸杆粉為原料按照如下步驟製備a.原料加工選擇無黴變玉米秸稈，粉碎成20目粉狀備用；b.液體發酵培養基成分麩皮0.5-0.8克，(NH4)2SO40.2-0.4克，KH2PO40.1-0.3克，CaCO30.1-0.3克，葡萄糖1-3克，以上述物質配製液體發酵培養基100毫升，調整液體的PH值為5.5-6，高壓滅菌30-40分鐘，待物料冷卻後接入篩選好的拮抗性木黴菌種，於26-28℃振蕩培養36-48小時，停止培養備用；
c.固體發酵取粉碎好的玉米秸稈粉8-10克，(NH4)2SO40.12-0.14克，MgSO40.002-0.004克，KH2PO40.004-0.006克，柿葉提取物0.004-0.005克，其中，柿葉提取物先用5毫升酒精溶解，把上述物質加200毫升水溶解，再放入玉米秸稈粉，攪拌均勻，蓋好瓶塞，高壓滅菌30-40分鐘，待物料冷卻後接入步驟b的1-2毫升液體培養液，攪拌均勻，放於28℃的恆溫培養箱中，保持溼度65～85％進行固體培養96小時，培養好的固體發酵物料在不高於40℃環境中乾燥後備用；d.可溼性粉劑的製備把風乾好的固體發酵物40-50克，WLNPK2-3克，D5001-2克，潤溼劑3-4克，填料(硅藻土)40-50克用氣流粉碎機粉碎至325目，再用混合設備充分混合均勻，即製備木黴菌可溼性粉劑。
上述利用玉米秸稈製備木黴菌可溼性粉劑的方法，所述柿葉提取物的提取工藝如下把乾燥無黴變的柿子葉15-20克放入1000毫升兩口瓶中，一口連接冷凝器回收酒精，一口接溫度計，加入30％的酒精液700-800毫升，使液面超過物料，然後加熱到70-80℃提取2-3小時，倒出提取過的柿葉，把提取液過濾，然後用蒸發器蒸發，回收酒精，再把蒸發剩餘物料放入乾燥箱，在100-110℃烘成乾粉備用。
上述利用玉米秸稈製備木黴菌可溼性粉劑的方法，所述拮抗性木黴菌種為綠色木黴，並經紫外光照射誘變選育。
本發明使用廉價的玉米秸稈粉為原料，替代目前使用的澱粉等類原料，採用液-固兩相發酵工藝，製備生物殺菌劑。與現有技術相比具有如下創新之處1.添加少量的柿葉提取物，可促使木黴菌生物量大幅提高，使固體發酵物的木黴分生孢子產量提高5倍；2.省去了固體發酵物木黴分生孢子收集的繁複工序，該方法把固體發酵物直接粉碎，把沒有利用的纖維素粉碎後作為可溼性粉劑的填料，既降低成本，又可以作為噴施藥液中的木黴孢子萌發和生長的營養物質，提高藥劑的防治效果，提高了製備木黴菌的生產效率。本發明對人畜和生態環境無害，無殘留，不產生抗藥性。採用玉米秸稈粉為主要原料，生產成本低於化學農藥多菌靈，速克靈等。本發明還可以消耗大量玉米秸稈，不僅避免因焚燒玉米秸稈造成的大氣汙染，還可以變廢為寶，具有很好的經濟效益和社會效益，是發展高效，綠色，生態農業理想的生物農藥。
具體實施例方式
本發明在木黴菌固體發酵時，添加少量柿葉提取物，該物質為類磺酮物質，可促使木黴菌生物量大幅提高，試驗表明，添加柿葉提取物後，固體發酵的木黴分生孢子產量提高近5倍，因而大幅提高了物料利用率和生產效益。此外，現有技術中固體發酵物木黴分生孢子收集的工序繁複，不便於操作，本發明把固體發酵物直接粉碎，將沒有利用的纖維素粉碎後既可作為可溼性粉劑的填料，降低惰性填料的使用量，降低成本；又可以作為噴施藥液中的木黴孢子萌發和生長的營養物質，提高藥劑的防治效果。但由於固體發酵物中除了木黴分生孢子外，大部分是沒有被利用的纖維素粉，需用分散劑使其在配製藥液時均勻分散在水中。本發明採用南京某科技有限公司生產的WLNPK和D500兩種產品作為複合分散劑，分散效果較好。
以下提供幾個具體實施例實施例1.
a.原料加工選擇無黴變玉米秸稈，粉碎成20目粉狀備用；b.液體發酵培養基成分麩皮0.5克，(NH4)2SO40.2克，KH2PO40.2克，CaCO30.1克，葡萄糖2克，以上述物質配製液體發酵培養基100毫升，調整液體的PH值為5.5，高壓滅菌35分鐘，待物料冷卻後接入篩選好的拮抗性木黴菌種，於28℃振蕩培養36小時，停止培養備用；c.固體發酵取粉碎好的玉米秸稈粉8克，(NH4)2SO40.12克，MgSO40.002克，KH2PO40.004克，柿葉提取物0.004克，其中，柿葉提取物先用5毫升酒精溶解，把上述物質加200毫升水溶解，再放入玉米秸稈粉，攪拌均勻，蓋好瓶塞，高壓滅菌35分鐘，待物料冷卻後接入步驟b的1.5毫升液體培養液，攪拌均勻，放於30℃的恆溫培養箱中，保持溼度65％進行固體培養96小時。培養好的固體發酵物料在不高於40℃環境中乾燥後備用；d.可溼性粉劑的製備把風乾好的固體發酵物40克，WLNPK 2克，D500 1克，潤溼劑3克，填料(硅藻土)40克用氣流粉碎機粉碎至325目，再用混合設備充分混合均勻，即製備木黴菌可溼性粉劑。
柿葉提取物的提取工藝如下把乾燥無黴變的柿子葉15克放入1000毫升兩口瓶中，一口連接冷凝器回收酒精，一口接溫度計，加入30％的酒精液700毫升，使液面超過物料，然後加熱到70℃提取3小時，倒出提取過的柿葉，把提取液過濾，然後用蒸發器蒸發，回收酒精。再把蒸發剩餘物料放入乾燥箱，在105℃左右烘成乾粉備用。
實施例2.
a.原料加工選擇無黴變玉米秸稈，粉碎成20目粉狀備用；b.液體發酵培養基成分麩皮0.8克，(NH4)2SO40.2克，KH2PO40.3克，CaCO30.3克，葡萄糖3克，以上述物質配製液體發酵培養基100毫升，調整液體的PH值為6，高壓滅菌40分鐘，待物料冷卻後接入篩選好的拮抗性木黴菌種，於26℃振蕩培養45小時，停止培養備用；
c.固體發酵取粉碎好的玉米秸稈粉9克，(NH4)2SO40.13克，MgSO40.003克，KH2PO40.006克，柿葉提取物0.005克，其中，柿葉提取物先用5毫升酒精溶解，把上述物質加200毫升水溶解，再放入玉米秸稈粉，攪拌均勻，蓋好瓶塞，高壓滅菌40分鐘，待物料冷卻後接入步驟b的2毫升液體培養液，攪拌均勻，放於30℃的恆溫培養箱中，保持溼度75％進行固體培養96小時。培養好的固體發酵物料在不高於40℃環境中乾燥後備用；d.可溼性粉劑的製備把風乾好的固體發酵物50克，WLNPK 3克，D500 2克，潤溼劑3.5克，填料(硅藻土)50克用氣流粉碎機粉碎至325目，再用混合設備充分混合均勻，即製備木黴菌可溼性粉劑。
柿葉提取物的提取工藝如下把乾燥無黴變的柿子葉18克放入1000毫升兩口瓶中，一口連接冷凝器回收酒精，一口接溫度計，加入30％的酒精液750毫升，使液面超過物料，然後加熱到80℃提取2小時，倒出提取過的柿葉，把提取液過濾，然後用蒸發器蒸發，回收酒精。再把蒸發剩餘物料放入乾燥箱，在100℃左右烘成乾粉備用。
實施例3.
a.原料加工選擇無黴變玉米秸稈，粉碎成20目粉狀備用；b.液體發酵培養基成分麩皮0.7克，(NH4)2SO40.3克，KH2PO40.1克，CaCO30.2克，葡萄糖1克，以上述物質配製液體發酵培養基100毫升，調整液體的PH值為6，高壓滅菌30分鐘，待物料冷卻後接入篩選好的拮抗性木黴菌種，於27℃振蕩培養48小時，停止培養備用；c.固體發酵取粉碎好的玉米秸稈粉10克，(NH4)2SO40.14克，MgSO40.004克，KH2PO40.0045克，柿葉提取物0.0045克，其中，柿葉提取物先用5毫升酒精溶解，把上述物質加200毫升水溶解，再放入玉米秸稈粉，攪拌均勻，蓋好瓶塞，高壓滅菌30分鐘，待物料冷卻後接入步驟b的1毫升液體培養液，攪拌均勻，放於30℃的恆溫培養箱中，保持溼度80％進行固體培養96小時。培養好的固體發酵物料在不高於40℃環境中乾燥後備用；d.可溼性粉劑的製備把風乾好的固體發酵物45克，WLNPK 2.5克，D500 1.5克，潤溼劑4克，填料(硅藻土)45克用氣流粉碎機粉碎至325目，再用混合設備充分混合均勻，即製備木黴菌可溼性粉劑。
柿葉提取物的提取工藝如下把乾燥無黴變的柿子葉20克放入1000毫升兩口瓶中，一口連接冷凝器回收酒精，一口接溫度計，加入30％的酒精液800毫升，使液面超過物料，然後加熱到75℃提取2.5小時，倒出提取過的柿葉，把提取液過濾，然後用蒸發器蒸發，回收酒精。再把蒸發剩餘物料放入乾燥箱，在110℃左右烘成乾粉備用。
本發明中所用拮抗性木黴菌種為綠色木黴，並經紫外光照射誘變選育。所謂紫外光照射誘變選育，是指按如下工藝進行的選育先製備PDA(土豆200克，葡萄糖20克，瓊脂18克，水1000ml)培養基平板，把拮抗性木黴菌種接種在平板上，在25℃恆溫培養5天產生綠色木黴分生孢子。加滅菌水10毫升洗脫孢子，製成濃度為106/ml個孢子的懸浮液。取PDA平板，每板吸取0.1毫升懸浮液，均勻塗在平板表面，放在恆溫培養箱中在25℃恆溫培養一天，然後在蔽光條件下，30瓦紫外燈，距離燈管30cm處照射80分鐘。然後用黑紙包好，放在4℃培養箱中低溫培養12小時。再放入25℃恆溫培養黑暗。3天後選取生長快速的菌株，接入PDA培養基純化培養，作為下次紫外誘變的菌種。直到選出拮抗性好，能很好分解纖維素的木黴菌株。
本發明對農作物及經濟作物的真菌性土傳病害如灰黴病、白粉病、枯萎病、霜黴病等有很好的防治效果(60-80％)。可以在病害發生初期稀釋800倍液噴施，也可以灌根使用。每畝地用量300克。除了可以有效地防治農作物葉面病害外，還可以明顯促進植物生長，增加農作物產量10％。
權利要求
1.一種利用玉米秸稈製備木黴菌可溼性粉劑的方法，其特徵在於它以玉米秸杆粉為原料並按照如下步驟製備a.原料加工選擇無黴變玉米秸稈，粉碎成20目粉狀；b.液體發酵培養基成分麩皮0.5-0.8克，(NH4)2SO40.2-0.4克，KH2PO40.1-0.3克，CaCO30.1-0.3克，葡萄糖1-3克，以上述物質配製液體發酵培養基100毫升，調整液體的PH值為5.5-6，高壓滅菌30-40分鐘，待物料冷卻後接入篩選好的拮抗性木黴菌種，於26-28℃振蕩培養36-48小時，停止培養備用；c.固體發酵取粉碎好的玉米秸稈粉8-10克，(NH4)2SO40.12-0.14克，MgSO40.002-0.004克，KH2PO40.004-0.006克，柿葉提取物0.004-0.005克，其中，柿葉提取物先用5毫升酒精溶解，把上述物質加200毫升水溶解，再放入玉米秸稈粉，攪拌均勻，高壓滅菌30-40分鐘，待物料冷卻後接入步驟b的1-2毫升液體培養液，攪拌均勻，放於28℃的恆溫培養箱中，保持溼度65～80％進行固體培養96小時，培養好的固體發酵物料在不高於40℃環境中乾燥後備用；d.可溼性粉劑的製備把風乾好的固體發酵物40-50克，WLNPK2-3克，D500 1-2克，潤溼劑3-4克，填料硅藻土40-50克用氣流粉碎機粉碎至325目，再用混合設備充分混合均勻，即製備木黴菌可溼性粉劑。
2.根據權利要求1所述的利用玉米秸稈製備木黴菌可溼性粉劑的方法，其特徵在於所述柿葉物按如下工藝提取把乾燥無黴變的柿子葉15-20克放入1000毫升兩口瓶中，加入30％的酒精液700-800毫升，使液面超過物料，然後加熱到70-80℃提取2-3小時，把提取液過濾，然後用蒸發器蒸發，回收酒精，再把蒸發剩餘物料放入乾燥箱，在100-110℃烘成乾粉備用。
3.根據權利要求1或2所述的利用玉米秸稈製備木黴菌可溼性粉劑的方法，其特徵在於所述拮抗性木黴菌種為綠色木黴，並經紫外光照射誘變選育。
全文摘要
一種利用玉米秸稈製備木黴菌可溼性粉劑的方法，屬農用微生物殺菌劑技術領域，用於解決提高製備效率和產品性能的問題。其技術方案是，它以玉米秸杆粉為原料經原料加工、液體發酵、固體發酵、可溼性粉劑的製備等步驟製成，其中，在固體發酵時添加柿葉提取物促使木黴菌生物量大幅提高，並將固體發酵物添加WLNPK、D500、潤溼劑、填料等直接粉碎，省去了了固體發酵物木黴分生孢子收集的繁複工序。本發明提高了利用玉米秸稈製備木黴菌的生產效率，使該項技術更便於推廣應用。本發明對人畜和生態環境無害，無殘留，不產生抗藥性，生產成本低於化學農藥多菌靈，速克靈等，還可以變廢為寶，具有很好的經濟效益和社會效益。
文檔編號A01N25/14GK101044864SQ200710061668
公開日2007年10月3日 申請日期2007年4月6日 優先權日2007年4月6日
發明者田連生, 陳菲, 高海霞, 單旭輝 申請人:田連生