西瑞香素的提取方法及含西瑞香素的藥物的製作方法
2023-12-03 06:36:41 5
專利名稱：西瑞香素的提取方法及含西瑞香素的藥物的製作方法
技術領域：
本發明涉及中藥飲片中藥物成分的提取方法及含該成分的藥物。
背景技術：
惡性腫瘤(癌症)是一種危害人民生命健康的嚴重疾病，目前臨床應用的抗腫瘤製劑多數為化學合成，毒副作用高而且價格較為昂貴。中藥取材於天然動植物，毒副作用小，其中尤以從藥材了哥王中提取出的西瑞香素治療惡性腫瘤效果最為顯著。
了哥王是常用中草藥，又名南嶺蕘花，為瑞香科蕘花屬植物，始載於《嶺南採藥錄》，性寒味苦，微辛，有毒。功能清熱解毒，化痰散結，通經利水。分布在我國長江以南及東南亞一帶，盛產於浙江、江西等地，為半常綠小灌木，全年可採，一般夏季採葉，秋季採根。根系挖後洗淨，曬乾備用，或剝取根內皮曬乾備用，或趁鮮時切片曬乾備用，或蒸熟切片曬乾備用。在民間，了哥王常於其他中草藥配伍，廣泛可用於治療支氣管炎、肺炎、腮腺炎、淋巴結炎、風溼痛、晚期血吸蟲病腹水、瘡癤癰疽、惡性腫瘤等。西瑞香素能從了哥王中提取，為淡黃色針狀結晶，分子式為C19H12O7，分子結構式如下所示， ，熔點溫度為250～252℃，UVλmax(MeoH)nm為211，230，267，350。EI-MS(m/z)352[M+]，309，179。薄層檢識，在紫外線下呈藍紫色螢光。西瑞香素經廣泛研究可用於治療多種癌症，倍受關注和重視。但是現有西瑞香素提取技術差、收率不足0.004％，且純度低於90％，導致大量資源浪費和西瑞香素的生產成本居高不下，且迄今為止無含西瑞香素製劑的報導。
發明內容
本發明的目的是為了解決現有西瑞香素提取技術差、收率不足0.004％，且純度低於90％，導致大量資源浪費和西瑞香素的生產成本居高不下的問題，而提供的西瑞香素的提取方法及含西瑞香素的藥物。
西瑞香素按以下步驟提取(一)將洗淨的了哥王粉碎成粒徑小於10目的顆粒，然後放入溫度為85～100℃、濃度為50％～85％的乙醇提取2～3次，每次提取時間為2～4h，並在提取液溫度為85～90℃的條件下過濾；(二)合併濾液，再將濾液在0.08MPa、40～60℃的條件下濃縮為固相物；(三)濃縮後的固相物依次經石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，每種溶劑分別萃取3～4次；(四)合併乙酸乙酯萃取液進行乾燥，然後將乾燥的萃取物經2次矽膠柱層析分離，並用體積比為100～80∶0～20的氯仿—甲醇液梯度洗脫；(五)合併洗脫液，再在0.08MPa、40～60℃的條件下乾燥為固相物，之後用與步驟四體積濃度相同的氯仿—甲醇液溶解、再次進行重結晶，冷凍乾燥12h，即得到西瑞香素。
第一種含西瑞香素的藥物按重量份數比由45～55份西瑞香素、40～50份微晶纖維素和3～7份硬脂酸鎂製成。
第二種含西瑞香素的藥物按重量份數比由8～12份西瑞香素和38～42份玉米澱粉製成。
第三種含西瑞香素的藥物每1000ml由30g西瑞香素、300ml純淨水、4ml矯味劑和餘量的單糖漿製成。
第四種含西瑞香素的藥物按重量份數比由90～110份西瑞香素、85～95份澱粉和8～12份硬脂酸鎂製成。
第五種含西瑞香素的藥物每1000ml由30g西瑞香素，100～200ml濃度為2％的吐溫-80，10～90g氯化鈉和餘量的注射用水製成。
本發明提取方法西瑞香素的收率為0.014％～0.03％，是現有提取方法收率的3倍以上，而且本發明提取方法西瑞香素的純度為97.00％～99.99％，遠遠滿足國家中藥一類新藥製劑所要求的單一化學成分(純度要求90％以上)的規定。本發明西瑞香素的提取方法簡便、高效、成本低、提取條件溫和、可批量大規模生產，適合產業化生產。
本發明含西瑞香素的五種藥物對惡性腫瘤均有明顯抑制作用，藥物成分單一且輔料均為常用、劑型穩定性強、毒副作用低，安全性高。
圖1是具體實施方式
一提取獲得的西瑞香素的紫外吸收光譜圖；圖2是具體實施方式
一提取獲得的西瑞香素的13C-NMR譜圖；圖3是具體實施方式
一提取獲得的西瑞香素的1H-NMR譜圖；圖4是具體實施方式
一提取獲得的西瑞香素HPLC純度檢測結果圖。
具體實施例方式
具體實施方式
一本實施方式西瑞香素按以下步驟提取(一)將洗淨的了哥王粉碎成粒徑小於10目的顆粒，然後放入溫度為85～100℃、濃度為50％～85％的乙醇提取2～3次，每次提取時間為2～4h，並在提取液溫度為85～90℃的條件下過濾；(二)合併濾液，再將濾液在0.08MPa、40～60℃的條件下濃縮為固相物；(三)濃縮後的固相物依次經石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，每種溶劑分別萃取3～4次；(四)合併乙酸乙酯萃取液進行乾燥，然後將乾燥的萃取物經2次矽膠柱層析分離，並用體積比為100～80∶0～20的氯仿-甲醇液梯度洗脫；(五)合併洗脫液，再在0.08MPa、40～60℃的條件下乾燥為固相物，之後用與步驟四體積濃度相同的氯仿—甲醇液溶解、再次進行重結晶，冷凍乾燥12h，即得到西瑞香素。
本實施方式製備出的西瑞香素淡黃色針狀結晶，經UV、MS、NMR法以及其它物理化學方法鑑定為西瑞香素(Daphnoretin)。
對本實施方式提取獲得的西瑞香素進行紫外吸收光譜檢測，檢測結果如圖1所示，紫外吸收光譜中UVλmax(MeoH)nm為211nm、230nm、267nm和350nm，與西瑞香素特徵吸收波長一致。對本實施方式提取獲得的西瑞香素進行核磁共振(13C-NMR)檢測，檢測結果如圖2所示。對本實施方式提取獲得的西瑞香素進行核磁共振(1H-NMR)檢測，檢測結果如圖3所示。圖2和圖3的波譜數據與文獻報導西瑞香素的波譜結果相同，說明提取獲得的化合物是西瑞香素。對所獲得的西瑞香素進行HPLC(高效液相色譜法)純度檢測(色譜條件Waters 600s Controller，Waters 717自動進樣器，Waters 996二極體陣列監測器；色譜柱Phenomenex LUNAC18，4.6mm×250mm，5μm；流動相甲醇-水40∶60；流速0.8ml/min；柱溫室溫；檢測波長44nm；進樣體積20μl。)，檢測結果見圖4，圖4中色譜峰3為西瑞香素色譜峰，根據面積歸一化法計算(計算數據如表1所示)，所得西瑞香素純度為99.75％。
表1
具體實施方式
二本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟(一)中粉碎的了哥王顆粒放入溫度為90～95℃、濃度為60％～80％的乙醇提取3次，每次提取時間為3h。其它步驟及參數與實施方式一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟(一)中粉碎的了哥王顆粒放入溫度為95℃、濃度為65％～70％的乙醇提取。其它步驟及參數與實施方式一相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟(一)中粉碎的了哥王顆粒放入溫度為90℃、濃度為75％的乙醇提取。其它步驟及參數與實施方式一相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟(一)中提取液溫度為85℃的條件下過濾。其它步驟及參數與實施方式一相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟(一)中提取液溫度為90℃的條件下過濾。其它步驟及參數與實施方式一相同。
具體實施方式
七本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟(二)中濾液在0.08MPa、45～55℃的條件下濃縮為固相物。其它步驟及參數與實施方式一相同。
具體實施方式
八本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟(二)中濾液在0.08MPa、50℃的條件下濃縮為固相物。其它步驟及參數與實施方式一相同。
具體實施方式
九本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟(四)中用體積比為95～85∶5～15的氯仿一甲醇液梯度洗脫。其它步驟及參數與實施方式一相同。
具體實施方式
十本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟(四)中用體積比為90∶10的氯仿—甲醇液梯度洗脫。其它步驟及參數與實施方式一相同。
具體實施方式
十一本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟(四)中用氯仿液洗脫。其它步驟及參數與實施方式一相同。
具體實施方式
十二本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟(五)中在0.08MPa、50℃的條件下乾燥為固相物。其它步驟及參數與實施方式一相同。
具體實施方式
十三本實施方式含西瑞香素的藥物按重量份數比由45～55份西瑞香素、40～50份微晶纖維素和3～7份硬脂酸鎂製成。
本實施方式含西瑞香素的藥物製成片劑，每片重0.3g。本實施方式含西瑞香素的藥物每日服用2～3次，每次1～2片。喉癌、肺癌、肝癌、宮頸癌、前列腺癌、乳腺癌和皮膚癌惡性腫瘤患者各30名，服用本實施方式含西瑞香素的藥物40～60天後其中198名患者體內惡性腫瘤縮小、減少，食慾增加，病情好轉；其中10名患者體內惡性腫瘤無明顯變化；另外2名患者病情繼續惡化。
具體實施方式
十四本實施方式與具體實施方式
十三的不同點是含西瑞香素的藥物按重量份數比由50份西瑞香素、45份微晶纖維素和5份硬脂酸鎂製成。其它與實施方式十三相同。
各腫癌症患者服用本實施方式含西瑞香素的藥物40～60天後總有效率高達96％以上。
具體實施方式
十五本實施方式含西瑞香素的藥物按重量份數比由8～12份西瑞香素和38～42份玉米澱粉製成。
本實施方式含西瑞香素的藥物製成顆粒劑，其中每500mg藥物中約含西瑞香素100mg。本實施方式含西瑞香素的藥物每日服用2～3次，每次服藥0.5～1.0g。肺癌、肝癌和喉癌惡性腫瘤患者各50名，服用本實施方式含西瑞香素的藥物40～60天後其中141名患者體內惡性腫瘤縮小、減少，食慾增加，病情好轉；其中8名患者體內惡性腫瘤無明顯變化；另外1名患者病情繼續惡化。
具體實施方式
十六本實施方式與具體實施方式
十五的不同點是含西瑞香素的藥物按重量份數比由10份西瑞香素和40份玉米澱粉製成。其它與實施方式十五相同。
各腫癌症患者服用本實施方式含西瑞香素的藥物40～60天後總有效率高達96％以上。
具體實施方式
十七本實施方式含西瑞香素的藥物每1000ml由28～32g西瑞香素、30ml純淨水、3～5ml矯味劑和餘量的單糖漿製成。
本實施方式含西瑞香素的藥物製成糖漿劑，其中每1ml糖漿中約含西瑞香素30mg。本實施方式含西瑞香素的藥物每日服用2～3次，每次服藥6～100ml。喉癌、肺癌、肝癌、乳腺癌和皮膚癌惡性腫瘤患者各30名，服用本實施方式含西瑞香素的藥物50～60天後其中142名患者體內惡性腫瘤縮小、減少，食慾增加，病情好轉；其中8名患者體內惡性腫瘤無明顯變化。
具體實施方式
十八本實施方式與具體實施方式
十七的不同點是含西瑞香素的藥物每1000ml由30g西瑞香素、300ml純淨水、4ml矯味劑和餘量的單糖漿製成。其它與實施方式十七相同。
各腫癌症患者服用本實施方式含西瑞香素的藥物50～60天後總有效率高達97％以上。
具體實施方式
十九本實施方式與具體實施方式
十七的不同點是矯味劑為大孔型離子交換樹脂Amferlite IRP 88、大孔型離子交換樹脂Amferlite IRP64、山梨醇、糖精鈉、甜蜜素、天冬甜肽、Sucralose、talin或乙醯舒泛-K。其它與實施方式十七相同。
本實施方式中大孔型離子交換樹脂Amferlite IRP 88和大孔型離子交換樹脂Amferlite IRP 64由美國RohmItaas公司生產。本實施方式中的矯味劑均可購買得到。
具體實施方式
二十本實施方式含西瑞香素的藥物按重量份數比由90～110份西瑞香素、85～95份澱粉和8～12份硬脂酸鎂製成。
本實施方式含西瑞香素的藥物製成膠囊，每粒膠囊中藥物重0.2g。本實施方式含西瑞香素的藥物每日服用2～3次，每次1～2粒。喉癌、肺癌和肝癌惡性腫瘤患者各50名，服用本實施方式含西瑞香素的藥物40～60天後其中145名患者體內惡性腫瘤縮小、減少，食慾增加，病情好轉；其中2名患者體內惡性腫瘤無明顯變化；另外3名患者病情繼續惡化。
具體實施方式
二十一本實施方式本實施方式與具體實施方式
二十的不同點是含西瑞香素的藥物按重量份數比由100份西瑞香素、90份澱粉和10份硬脂酸鎂製成。其它與實施方式二十相同。
各腫癌症患者服用本實施方式含西瑞香素的藥物40～60天後總有效率高達96％以上。
具體實施方式
二十二本實施方式含西瑞香素的藥物每1000ml由30g西瑞香素，100～200ml濃度為2％的吐溫-80，10～90g氯化鈉和餘量的注射用水製成。
本實施方式含西瑞香素的藥物製成注射液，其中每10ml注射液中約含西瑞香素30mg。本實施方式含西瑞香素的藥物每日靜脈注射1～2次，每次服藥滴注100ml。喉癌、肺癌、肝癌、乳腺癌和皮膚癌惡性腫瘤患者各30名，服用本實施方式含西瑞香素的藥物40～50天後其中144名患者體內惡性腫瘤縮小、減少，食慾增加，病情好轉；其中6名患者體內惡性腫瘤無明顯變化。
具體實施方式
二十三本實施方式本實施方式與具體實施方式
二十二的不同點是含西瑞香素的藥物每1000ml由30g西瑞香素，120～170ml、濃度為2％的吐溫-80，30～60g氯化鈉和餘量的注射用水製成注射劑。其它與實施方式二十二相同。
各腫癌症患者靜脈注射本實施方式含西瑞香素的藥物40～50天後總有效率高達97％以上。
權利要求
1.西瑞香素的提取方法，其特徵在於西瑞香素按以下步驟提取(一)將洗淨的了哥王粉碎成粒徑小於10目的顆粒，然後放入溫度為85～100℃、濃度為50％～85％的乙醇提取2～3次，每次提取時間為2～4h，並在提取液溫度為85～90℃的條件下過濾；(二)合併濾液，再將濾液在0.08MPa、40～60℃的條件下濃縮為固相物；(三)濃縮後的固相物依次經石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，每種溶劑分別萃取3～4次；(四)合併乙酸乙酯萃取液進行乾燥，然後將乾燥的萃取物經2次矽膠柱層析分離，並用體積比為100～80∶0～20的氯仿-甲醇液梯度洗脫；(五)合併洗脫液，再在0.08MPa、40～60℃的條件下乾燥為固相物，之後用與步驟四體積濃度相同的氯仿-甲醇液溶解、再次進行重結晶，冷凍乾燥12h，即得到西瑞香素。
2.根據權利要求1所述的西瑞香素的提取方法，其特徵在於步驟(一)中粉碎的了哥王顆粒放入溫度為90～95℃、濃度為60％～80％的乙醇提取3次，每次提取時間為3h。
3.根據權利要求1所述的西瑞香素的提取方法，其特徵在於步驟(四)中用體積比為95～85∶5～15的氯仿-甲醇液梯度洗脫。
4.根據權利要求1所述的西瑞香素的提取方法，其特徵在於步驟(四)中用體積比為90∶10的氯仿-甲醇液梯度洗脫。
5.根據權利要求1所述的西瑞香素的提取方法，其特徵在於步驟(四)中用氯仿液洗脫。
6.含權利要求1提取的西瑞香素的藥物，其特徵在於含西瑞香素的藥物按重量份數比由45～55份西瑞香素、40～50份微晶纖維素和3～7份硬脂酸鎂製成。
7.含權利要求1提取的西瑞香素的藥物，其特徵在於含西瑞香素的藥物按重量份數比由8～12份西瑞香素和38～42份玉米澱粉製成。
8.含權利要求1提取的西瑞香素的藥物，其特徵在於含西瑞香素的藥物每1000ml由28～32g西瑞香素、300ml純淨水、3～5ml矯味劑和餘量的單糖漿製成。
9.含權利要求1提取的西瑞香素的藥物，其特徵在於含西瑞香素的藥物按重量份數比由90～110份西瑞香素、85～95份澱粉和8～12份硬脂酸鎂製成。
10.含權利要求1提取的西瑞香素的藥物，其特徵在於含西瑞香素的藥物每1000ml由30g西瑞香素，100～200ml濃度為2％的吐溫-80，10～90g氯化鈉和餘量的注射用水製成。
全文摘要
西瑞香素的提取方法及含西瑞香素的藥物，它涉及中藥飲片中藥物成分的提取方法及含該成分的藥物。它解決了現有西瑞香素提取技術差、收率不足0.004％，且純度低於90％，導致大量資源浪費和西瑞香素的生產成本居高不下的問題。西瑞香素提取醇提取了哥王、再濃縮、萃取、層析、洗脫、重結晶、乾燥，即得到西瑞香素。含西瑞香素的藥物按重量份數比由45～55份西瑞香素、40～50份微晶纖維素和3～7份硬脂酸鎂製成。本發明提取方法西瑞香素的收率為0.014％～0.03％且純度為97.00％～99.99％。本發明提取方法高效、成本低、適合產業化生產。本發明藥物對惡性腫瘤均有明顯抑制作用，藥物成分單一且穩定性強，毒副作用低，安全性高。
文檔編號A61K9/08GK101016286SQ20071007185
公開日2007年8月15日 申請日期2007年3月7日 優先權日2007年3月7日
發明者杜智敏, 楊振宇, 郭薇 申請人:哈爾濱醫科大學附屬第二醫院