依賴細胞周期蛋白的激酶抑制劑及其組合物和相關用途的製作方法

2023-12-08 20:07:56 2

專利名稱：依賴細胞周期蛋白的激酶抑制劑及其組合物和相關用途的製作方法
I.發明領域本發明普遍地涉及用作依賴細胞周期蛋白的激酶(cdk)抑制劑的化合物、含這類化合物的藥用組合物、配製藥用組合物的方法，或用這類化合物治療癌症、或增殖性疾病或其它疾病的方法，以及用於製備這類化合物的中間體和方法。
II.發明背景生物學中的一個最重要和基本的過程是由細胞周期介導的細胞分裂。該過程確保控制產生具有特定生物功能的後代細胞。它是高度調控的現象，對多種細胞內和外部來源的細胞信號產生應答。腫瘤促進和抑制基因產物的複雜網絡是該細胞信號過程的關鍵成分。過度表達腫瘤促進成分或隨後腫瘤抑制產物的損失將導致細胞增殖和腫瘤產生失控(Pardee，Science 246603-608，1989)。依賴細胞周期蛋白的激酶在調節細胞周期機器(machinery)中起關鍵作用。這些複合物由以下兩種成分組成催化亞單位(激酶)和調節亞單位(細胞周期蛋白)。迄今為止，已鑑別九種激酶亞單位(依賴細胞周期蛋白的激酶1-9)和幾種調節亞單位(細胞周期蛋白A-H、K、N和T)。每種激酶與特異性調節配偶體聯合在一起，組成活性催化部分。通過特殊的依賴細胞周期蛋白的激酶複合物調節細胞周期的每次轉換通過依賴細胞周期蛋白的激酶2/細胞周期蛋白E、依賴細胞周期蛋白的激酶4/細胞周期蛋白D1和依賴細胞周期蛋白的激酶6/細胞周期蛋白D2調節G1/S；通過依賴細胞周期蛋白的激酶2/細胞周期蛋白A和依賴細胞周期蛋白的激酶/細胞周期蛋白A調節S/G2；G2/M通過依賴細胞周期蛋白的激酶/細胞周期蛋白D調節。這些激酶的協同活性引導個體細胞通過複製過程，確保每批後代的活力(Sherr，Cell 731059-1065，1993；Draetta，Trends Biochem.Sci.15378-382，1990)。
越來越多的證據表明腫瘤發展和依賴細胞周期蛋白的激酶相關的機能障礙有關。過度表達細胞周期蛋白的調節蛋白和隨後的激酶活動過強與幾種癌症相關(Jiang，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 909026-9030，1993；Wang，Nature 343555-557，1990)。最近發現依賴細胞周期蛋白的激酶的內源性、高度特異性蛋白抑制劑對細胞增殖具有重要影響(Kamb等，Science 264436-440，1994；Beach，Nature 336701-704，1993)。這些抑制劑包括p16INK4(依賴細胞周期蛋白的激酶4/D1抑制劑)、p21CIP1(非特異性依賴細胞周期蛋白的激酶抑制劑)和p27KIP1(特異性依賴細胞周期蛋白的激酶2/E抑制劑)。最近的與依賴細胞周期蛋白的激酶2/A結合的p27的晶體結構顯示這些蛋白質如何通過與依賴細胞周期蛋白的激酶複合物進行多次相互作用，從而有效抑制激酶活性(Pavletich，Nature 382325-331，1996)。這些蛋白質通過與它們相應的依賴細胞周期蛋白的激酶複合物進行特異性相互作用，來幫助調節細胞周期。缺乏這些抑制劑的細胞易生長失控和形成腫瘤。這些證據導致人們積極尋找cdk家族的小分子抑制劑治療藥物。
III.發明概述本發明描述稱為依賴細胞周期蛋白的激酶酶類的有效抑制劑化合物。本發明提供通過給予治療有效量的至少一種本發明化合物或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體治療癌症或其它增殖性疾病或其它疾病的方法。本發明還提供通過給予治療有效的至少一種本發明化合物和另一種抗癌或抗增殖藥物的聯合藥物治療癌症或其它增殖性疾病或其它疾病的方法。
在某些實施方案中，本發明提供了具有式I結構的化合物或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體
其中R8代表取代或未取代的雜環或取代或未取代的嗎啉代、取代或未取代的哌嗪基或取代或未取代的環己基；F代表(CH2)n，其中n是1-6的整數，在一些實施方案中，n是1；Q代表取代或未取代的仲氨基取代基、取代或未取代的叔氨基取代基或取代或未取代的含氮雜環。
在一些實施方案中，n是1。
在一些實施方案中，式I中的Q代表叔氨基取代基，例如二烷基胺。在一些實施方案中，式I中的Q代表取代或未取代的含氮雜環例如嗎啉、哌啶、哌嗪或吡咯烷。在一些實施方案中，Q代表含氮雜芳基環、叔氨基取代基或取代或未取代的含氮雜環。
在一些實施方案中，R8代表 其中Z是O或NR」；且R」代表H或低級烷基。
在一些實施方案中，具有式I結構的化合物不包括一種或多種下列化合物
在一些實施方案中，式I化合物包括一種或多種在表中列出的化合物。例如，式I化合物可包括一種或多種化合物B1-B20和C2。
如上所述，在一些實施方案中，合適的取代基在每次出現時可獨立地包括烷基、氧代基、醯基氨基、羥基、羰基、磺醯基、酯、醯胺、NR」、羥基烷基、烷氧基烷基、芳基、雜環基、環烷基或低聚(乙二醇)。在一些實施方案中，當Q代表仲氨基取代基時，合適的取代基包括烷基、烷氧基烷基、羥基烷基和羥基烷氧基烷基。本領域技術人員應當容易地認識到，所列舉的取代基不是窮盡的，並且可以使用很多其它合適的取代基。
在某些實施方案中，本發明提供了具有式II結構的化合物或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體 其中B代表MnR8；Ar代表芳基或雜芳基環；V代表O、S或N-CN；W代表O、S或NR」；R』在每次出現時獨立地代表H、低級烷基或金屬抗衡離子；R」在每次出現時獨立地代表H或低級烷基；R5代表H、P(＝O)(OR』)2或MnQ；R6代表H、OH或MnQ，條件是R5和R6當中只有一個代表H；R7代表H、滷素、羥基、低級烷基或低級烷氧基；R8代表取代或未取代的烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環基或胺；M在每次出現時獨立地代表取代或未取代的亞甲基(包括C(＝O)和C(＝S))、NR」、O、S、S(O)或S(O2)；當存在於B中時，n代表1-4的整數，當存在於R5中時，n代表0-6的整數，當存在於R6中時，n代表1-3的整數；且Q代表取代或未取代的叔氨基取代基或含氮雜環。
在一些實施方案中，R8代表取代或未取代的嗎啉代、哌嗪基或環己基。
在一些實施方案中，R」代表H。
在一些實施方案中，R5代表MnQ。
在一些實施方案中，連接在Q上的M代表CH2、S(O2)、C(＝S)或C(＝O)。
在一些實施方案中，連接在Q上的M代表CH2。
在一些實施方案中，連接在Q上的M代表C(＝O)。
在一些實施方案中，連接在Q上的M代表取代的NR」。
在一些實施方案中，Q代表取代或未取代的含氮雜環。
在一些實施方案中，Q代表取代或未取代的叔氨基。
在一些實施方案中，R8代表取代或未取代的嗎啉代、哌嗪基或環己基。在一些實施方案中，R」代表H。而在一些實施方案中，至少一個出現的M代表CH2、取代的NR」，或者當連接在Q上時，代表CH2、S(O2)、C(＝S)或C(＝O)。
在一些實施方案中，Q代表取代或未取代的含氮雜芳基環。在一些實施方案中，Q代表取代或未取代的含氮雜環。在一些實施方案中，Q代表取代或未取代的叔氨基。在一些實施方案中，Q代表取代或未取代的仲氨基。
在某些實施方案中，本發明涉及具有以下結構的化合物或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體 C1。
在某些實施方案中，本發明涉及具有以下結構的化合物或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體 C5。
在一些實施方案中，本發明提供了純化或合成形式的一種或多種本文所述化合物。
在某些實施方案中，本發明提供了具有式II結構的化合物或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體 其中B代表MnR8；Ar代表芳基或雜芳基環；V代表O、S或N-CN；W代表O、S、S(O2)、C(＝O)、C(＝S)、CH2或NR」；R』在每次出現時獨立地代表H、低級烷基或金屬抗衡離子；R」在每次出現時獨立地代表H或低級烷基；R代表H或任選取代的低級烷基；R5代表MnJK；R6代表H、OH或MnQ；R7代表H、滷素、羥基、低級烷基或低級烷氧基；R8代表取代或未取代的烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環基或胺；J代表C(＝O)、C(＝S)或SO2；K代表OR』、N(R」)2或N(R』)SO2R」；M在每次出現時獨立地代表取代或未取代的亞甲基(包括C(＝O)和C(＝S))、NR」、O、S、S(O)或S(O2)；當存在於B中時，n代表1-7的整數，當存在於R5中時，n代表0-6的整數，當存在於R6中時，n代表1-3的整數；且
Q代表取代或未取代的含氮雜芳基環、仲氨基取代基、叔氨基取代基或含氮雜環。
在一些實施方案中，R8代表取代或未取代的嗎啉代、哌嗪基或環己基。在一些實施方案中，R」代表H。
在一些實施方案中，連接在Q上的M代表CH2、取代的NR」、S(O2)、C(＝S)或C(＝O)。
在一些實施方案中，R8代表取代或未取代的嗎啉代、哌嗪基或環己基。
在一些實施方案中，R」代表H。
在一些實施方案中，R5代表MnQ。
在一些實施方案中，連接在Q上的M代表CH2、S(O2)、C(＝S)或C(＝O)。
在一些實施方案中，連接在Q上的M是C(＝O)。
在一些實施方案中，連接在Q上的M代表CH2。
在一些實施方案中，連接在Q上的M代表取代的NR」。
在一些實施方案中，Q代表取代或未取代的叔氨基取代基。
在一些實施方案中，Q代表取代或未取代的含氮雜環。
在一些實施方案中，取代基在每次出現時獨立地包括烷基、氧代基、醯基氨基、羥基、羰基、磺醯基、酯、醯胺、NR」、羥基烷基、烷氧基烷基、芳基、雜環基、環烷基或低聚(乙二醇)。
在某些實施方案中，本發明提供了具有式II結構的化合物或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體 其中
B代表MnR8；Ar代表芳基或雜芳基環；V代表O、S或N-CN；W代表O、S、S(O2)、C(＝O)、C(＝S)、CH2或NR」；R』在每次出現時獨立地代表H、低級烷基或金屬抗衡離子；R」在每次出現時獨立地代表H或低級烷基；R代表H或任選取代的低級烷基；R5代表H、P(＝O)(OR』)2、MnJK或MnQ；R6代表H、OH或MnQ，條件是R5和R6當中只有一個代表H；R7在每次出現時獨立地代表H、滷素、羥基、低級烷基或低級烷氧基；R8代表取代或未取代的烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環基或胺；J代表C(＝O)、C(＝S)或SO2；K代表OR』、N(R」)2或N(R』)SO2R」；M在每次出現時獨立地代表取代或未取代的亞甲基(包括C(＝O)和C(＝S))、NR」、O、S、S(O)、S(O2)或CH2；當存在於B中時，n代表1-7的整數，當存在於R5中時，n代表0-6的整數，當存在於R6中時，n代表1-3的整數；且Q代表取代或未取代的含氮雜芳基環、仲氨基取代基、叔氨基取代基或含氮雜環；條件是不包括具有式IIa結構的化合物 其中W和Z獨立地代表O或NR」；R』在每次出現時獨立地代表H、低級烷基或金屬抗衡離子；
R」在每次出現時獨立地代表H或低級烷基；R5代表H、P(＝O)(OR』)2或MnQ；R6代表H、OH或MnQ，條件是R5和R6當中只有一個代表H；R7在每次出現時獨立地代表H、滷素、低級烷基或低級烷氧基；M在每次出現時獨立地代表取代或未取代的亞甲基(包括C(＝S)和C(＝O))、NR」、O、S、S(O)、S(O2)；n代表1-5的整數；且Q代表含氮雜芳基環、叔氨基取代基或取代或未取代的含氮雜環。
在一些實施方案中，式IIa中的Q代表叔氨基取代基例如二烷基胺。在一些實施方案中，式IIa中的Q代表取代或未取代的含氮雜環例如嗎啉、哌啶、哌嗪或吡咯烷。在一些實施方案中，Q代表含氮雜芳基環、叔氨基取代基或取代或未取代的含氮雜環。
在一些實施方案中，在式II中，B代表MnR8；Ar代表芳基或雜芳基環；V代表O、S或N-CN；W代表C(＝O)、C(＝S)、S(O2)或CH2；R』在每次出現時獨立地代表H、低級烷基、金屬抗衡離子或鹼土金屬抗衡離子；R」在每次出現時獨立地代表H或低級烷基；R代表H或任選取代的低級烷基；R5代表H、P(＝O)(OR』)2、MnJK或MnQ；R6代表H、OH或MnQ，條件是R5和R6當中只有一個代表H；R7代表H、滷素、羥基、低級烷基或低級烷氧基；R8代表取代或未取代的烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環基或胺；J代表C(＝O)、C(＝S)或SO2；K代表OR』、N(R」)2或N(R』)SO2R」；M在每次出現時獨立地代表取代或未取代的亞甲基(包括C(＝S)和C(＝O))、NR」、O、S、S(O)或S(O2)；當存在於B中時，n代表1-4的整數，當存在於R5中時，n代表0-6的整數，當存在於R6中時，n代表1-3的整數；且
Q代表取代或未取代的含氮雜芳基環、仲氨基取代基、叔氨基取代基或含氮雜環。
在一些實施方案中，Q代表叔氨基取代基例如二烷基胺，或取代或未取代的含氮雜環例如嗎啉、哌啶、哌嗪或吡咯烷。
在一些實施方案中，在式II中，B代表MnR8；Ar代表芳基或雜芳基環；V代表O、S或N-CN；W代表O、S、S(O2)、C(＝O)、C(＝S)、CH2或NR」；R』在每次出現時獨立地代表H、低級烷基、金屬抗衡離子或鹼土金屬抗衡離子；R」在每次出現時獨立地代表H或低級烷基；R代表H或任選取代的低級烷基；R5代表H、P(＝O)(OR』)2、MnJK或MnQ；R6代表H、OH或MnQ，條件是R5和R6當中只有一個代表H；R7代表H、滷素、羥基、低級烷基或低級烷氧基；R8代表取代或未取代的烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環基或胺；J代表C(＝O)、C(＝S)或SO2；K代表OR』、N(R」)2或N(R』)SO2R」；M在每次出現時獨立地代表取代或未取代的亞甲基(包括C(＝S)和C(＝O))、NR」、O、S、S(O)或S(O2)；當存在於B中時，n代表1-4的整數，當存在於R5中時，n代表0-6的整數，當存在於R6中時，n代表1-3的整數；且Q代表取代或未取代的仲氨基取代基。
在一些實施方案中，在式II中，B代表MnR8；Ar代表芳基或雜芳基環；V代表O、S或N-CN；W代表O、S、S(O2)、C(＝O)、C(＝S)、CH2或NR」；R』在每次出現時獨立地代表H、低級烷基、金屬抗衡離子或鹼土金屬抗衡離子；
R」在每次出現時獨立地代表H或低級烷基；R代表H或任選取代的低級烷基；R5代表MnJK，條件是R5不是CH2COOH；R6代表H、OH或MnQ；R7代表H、滷素、羥基、低級烷基或低級烷氧基；R8代表取代或未取代的烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環基或胺；J代表C(＝O)、C(＝S)或SO2；K代表OR』、N(R」)2或N(R』)SO2R」；M在每次出現時獨立地代表取代或未取代的亞甲基(包括C(＝S)和C(＝O))、NR」、O、S、S(O)或S(O2)；當存在於B中時，n代表1-4的整數，當存在於R5中時，n代表0-6的整數，當存在於R6中時，n代表1-3的整數；且Q代表取代或未取代的含氮雜芳基環、仲氨基取代基、叔氨基取代基或含氮雜環。
在一些實施方案中，在式II中，Q是取代或未取代的含氮雜芳基環，而R8可代表取代或未取代的嗎啉代、哌嗪基或環己基。在式II中，R」可代表H。
M還可以代表CH2。在一些實施方案中，在式II中，W代表CH2，且至少一個M代表取代的NR」。
在一些實施方案中，在式II中，Q代表取代或未取代的仲氨基。在一些實施方案中，在式II中，Q代表取代或未取代的叔氨基。在一些實施方案中，在式II中，Q代表取代或未取代的含氮雜環。
在一些實施方案中，在式II中，Q代表取代或未取代的含氮雜芳基環、叔氨基取代基或含氮雜環。
在一些實施方案中，在式II中，R5代表MnQ，且Q代表取代或未取代的含氮雜芳基環、叔氨基取代基或含氮雜環。
在一些實施方案中，在式II中，Q代表取代或未取代的叔氨基。
在一些實施方案中，在式II中，Q代表取代或未取代的含氮雜環。
在一些實施方案中，在式II中，R5代表MnQ，且Q代表取代或未取代的仲氨基。
在一些實施方案中，在式II中，R5代表MnQ，且Q代表取代或未取代的含氮雜芳基環。
在一些實施方案中，在式II中，R8代表取代或未取代的嗎啉代、哌嗪基或環己基。
在一些實施方案中，在式II中，R」代表H。
在一些實施方案中，在式II中，W代表CH2。
在一些實施方案中，在式II中，當與Q連接時，M是CH2、S(O2)、C(＝S)或C(＝O)。
在一些實施方案中，在式II中，當與Q連接時，M是CH2。
在一些實施方案中，在式II中，與Q連接的M是CH2、S(O2)、C(＝S)或C(＝O)。
在一些實施方案中，在式II中，V是O，M代表NH，且R8具有以下結構 其中Z代表O或NR」。
在一些實施方案中，AR代表苯基環，且所有出現的R6和R7代表H。
在某些實施方案中，本發明提供了具有式V結構的化合物或其前藥、異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體 其中
R8代表取代或未取代的雜環；Q代表取代或未取代的仲氨基取代基、叔氨基取代基或取代或未取代的含氮雜環。
如上所述，在一些實施方案中，R8可代表嗎啉代或哌嗪基環。
在一些實施方案在中，如上所述，Q可代表哌嗪、嗎啉、哌啶、吡啶、吡咯、唑、異唑、咪唑或吡唑。
一些實施方案包括選自A34、A36、A37、A44、A46和A76-A82的化合物或其前藥、異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體。
一些實施方案包括選自A47、A49、A51和A82的化合物或其前藥、異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體。
在一些實施方案中，W代表O、S(O2)、C(＝O)、C(＝S)、S、CH2或NR」。
如上所述，在一些實施方案中，W代表取代或未取代的含氮雜芳基環、叔氨基取代基或含氮雜環。
在某些實施方案中，每次出現時，合適的取代基可獨立包括烷基、氧代基、醯基氨基、羥基、羰基、磺醯基、酯、醯胺、NR」、羥基烷基、烷氧基烷基、芳基、雜環基、環烷基或低聚(乙二醇)。在某些實施方案中，其中Q代表仲氨基取代基，合適的取代基包括烷基、烷氧基烷基、羥基烷基和羥基烷氧基烷基。本領域技術人員將容易認識到列舉的取代基並非窮盡性，可使用許多其它合適的取代基。
某些實施方案可包括包含藥學上可接受的賦形劑和本文中公開的任何類型化合物的藥用組合物，而某些實施方案包括治療過度增殖性疾病的方法，該方法包括給予動物本文中公開的任何類型化合物。
在某些實施方案中，本文中公開的化合物可應用到抑制細胞增殖的方法中，這類方法包括使細胞與本文中公開類型的化合物接觸；或應用到治療病毒感染(例如由人免疫缺陷病毒(HIV)引起的感染)的方法中，這類方法包括給予哺乳動物本文中公開類型的化合物。某些實施方案包括治療或預防化學療法或放射療法引起的脫髮的方法，這類方法包括將本文中公開類型的化合物和一種或多種化學療法或放射療法聯合給予哺乳動物。本文中公開的化合物也可用於製備藥物。
本發明化合物還可用於治療病症例如過度增殖性病症。可將化合物對人或動物給藥。本發明化合物可用於抑制細胞增殖，例如通過將增殖的細胞與化合物接觸來實現所述作用。通過把化合物對哺乳動物給藥，本發明化合物還可用於治療病毒感染。
使用本發明化合物形成的藥物可用作治療或預防病症(例如過度增殖性病症)、病毒感染、化療誘導的脫髮、與依賴細胞周期蛋白的激酶活性有關的疾病等的藥物。藥物可用於治療本文描述的任何病症。
使用本發明化合物的各種方法是可以利用的。例如，可採用方法來抑制依賴細胞周期蛋白的激酶，包括給需要這種治療的宿主施用治療有效量的任何化合物。還可以採用方法來治療與依賴細胞周期蛋白的激酶有關的病症，包括給需要這種治療的宿主施用治療有效量的化合物。本發明還涉及治療人或其它動物的方法。在一些實施方案中，可使用包含治療有效量的一種或多種本發明化合物的組合物來治療人或其它動物。
在某些實施方案中，本發明提供一種新的藥用組合物，該組合物包含藥學上可接受的載體和治療有效量的式(I)或(II)化合物或本文中公開的任何其它化合物，或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體。
在另一個實施方案中，本發明提供一種新的治療癌症或其它增殖性疾病或其它疾病的方法，該方法包括給予有這種治療需要的宿主治療有效量的式(I)或(II)化合物或本文中公開的任何其它化合物，或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體。
在另一個實施方案中，本發明提供一種新的治療癌症或其它增殖性疾病或其它疾病的方法，該方法包括給予有這種治療需要的宿主治療有效量的(a)式(I)或(II)化合物或本文中公開的任何其它化合物，或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體；和(b)至少一種選自抗癌藥和抗增殖藥的化合物。
如本文所述，本發明抑制劑能抑制細胞周期機器，因而可用於調節細胞周期進程，最終控制細胞生長和分化。此類化合物可用於治療患者的與過度細胞增殖有關的疾病，例如癌症、銀屑病、涉及不需要白細胞增殖的免疫疾病；可用於治療再狹窄和其它平滑肌細胞疾病等。此類化合物還可用於抑制I型人免疫缺陷病毒(HIV-I)轉錄(Wang等，J.Virology 757266-7279(2001)。
本文中也描述了本發明化合物可用於製備藥物，該藥物可用於治療疾病例如本文中論述的那些疾病。
IV.附圖簡述

圖1表示以下情況暴露在化合物A37中所受影響(a)通過PIFACS分析進行的HCT-116細胞的細胞周期分析；(b)誘導PARP分裂。
圖2用(a)劑量反應；和(b)時程說明化合物A37對HCT-116腫瘤細胞產克隆(clongeneic)存活的不可逆作用。
圖3圖示化合物B16對HCT-116腫瘤細胞產克隆存活的不可逆作用，以時程表示。
圖4表示與暴露於相同化合物的停滯正常(IMR90)細胞相比，暴露於化合物A37的停滯腫瘤(HCT-116)細胞的生存力下降。
圖5代表用本發明各種化合物進行HCT-116異種移植腫瘤試驗得到的結果。
圖6表示用化合物A37進行A2780異種移植腫瘤試驗得到的結果，由(a)在各種劑量下腫瘤大小的時程；和(b)試驗中的顯著度量(salient metrics)表表示。
圖7表示用化合物A37進行PC3異種移植腫瘤試驗得到的結果，由(a)在各種劑量下腫瘤大小的時程；和(b)試驗中的顯著度量表表示。
圖8表示用化合物B16進行A2780異種移植腫瘤試驗得到的結果，由(a)在各種劑量下腫瘤大小的時程；和(b)試驗中的顯著度量表表示。
圖9表示CDK2/細胞周期蛋白E與加載CM5-抑制劑的晶片結合得到結果的實例。KD根據這些數據計算，等於8,0+/-2,8nM。
V.示例性實施方案詳述本發明涉及新的依賴細胞周期蛋白的激酶抑制劑(cdks)，尤其是但不僅僅是cdk/細胞周期蛋白複合物抑制劑。如本文中所述，本發明抑制劑能抑制細胞周期機器，因而可用於調節細胞周期進程，最終控制細胞生長和分化。此類化合物可用於治療患者的與過度細胞增殖有關的疾病，例如治療癌症、銀屑病、涉及不需要白細胞增殖的免疫疾病；可用於治療再狹窄和其它平滑肌細胞疾病等，更詳細論述如下。
在一個實施方案中，本發明提供具有式I結構的化合物，包括其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體 其中R8代表取代或未取代的雜環或取代或未取代的嗎啉代、取代或未取代的哌嗪基或取代或未取代的環己基；F代表(CH2)n，其中n是1-6的整數，在一些實施方案中，n是1；Q代表取代或未取代的仲氨基取代基、取代或未取代的叔氨基取代基或取代或未取代的含氮雜環。
在一些實施方案中，式I中的Q代表叔氨基取代基，例如二烷基胺。在一些實施方案中，式I中的Q代表取代或未取代的含氮雜環例如嗎啉、哌啶、哌嗪或吡咯烷。在一些實施方案中，Q代表含氮雜芳基環、叔氨基取代基或取代或未取代的含氮雜環。
在一些實施方案中，R8代表
其中Z是O或NR」；且R」代表H或低級烷基。
在一些實施方案中，具有式I結構的化合物不包括一種或多種下列化合物
在一些實施方案中，式I化合物包括一種或多種在表中列出的化合物。例如，式I化合物可包括一種或多種化合物B1-B20和C2。
如上所述，在一些實施方案中，合適的取代基在每次出現時可獨立地包括烷基、氧代基、醯基氨基、羥基、羰基、磺醯基、酯、醯胺、NR」、羥基烷基、烷氧基烷基、芳基、雜環基、環烷基或低聚(乙二醇)。在一些實施方案中，當Q代表仲氨基取代基時，合適的取代基包括烷基、烷氧基烷基、羥基烷基和羥基烷氧基烷基。本領域技術人員應當容易地認識到，所列舉的取代基不是窮盡的，並且可以使用很多其它合適的取代基。
在另一個實施方案中，本發明還提供具有式II結構的化合物，包括其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體 其中B代表MnR8；Ar代表芳基或雜芳基環例如苯環；V代表O、S或N-CN，優選O或S；W代表O、S、S(O2)、C(＝O)、C(＝S)、CH2或NR」；每次出現時，R』獨立代表H、低級烷基或金屬抗衡離子例如鹼或鹼土金屬抗衡離子；每次出現時，R」獨立代表H或低級烷基，優選H；R代表H或任選取代的低級烷基，優選具有選自酯、醯胺、醯基氨基或醯氧基的取代基；R5代表H、P(＝O)(OR』)2、MnJK或MnQ；R6代表H、OH或MnQ，優選條件是R5和R6中的一個且只有一個代表H；每次出現時，R7獨立代表H、滷素、羥基、低級烷基，例如甲基或低級烷氧基，例如甲氧基；R8代表取代或未取代的烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環基或胺；J代表C(＝O)、C(＝S)或SO2；K代表OR』、NR」或N(R』)SO2R」；每次出現時，M獨立代表取代或未取代的亞甲基(例如被低級烷基、氧代基、羥基等取代)、NR」、O、S、S(O)或S(O2)，優選NR」或CH2，或當與W或Q連接時，代表CH2、S(O2)、C(＝S)或C(＝O)；當在B中出現時，n代表0-10的整數，優選1-7或甚至1-4，在R5中出現時，代表0-6的整數，在R6中出現時，代表1-3的整數；和Q代表取代或未取代的含氮雜芳基環例如吡咯、四唑、唑、二唑、異唑、咪唑或吡唑；仲氨基取代基例如單烷基胺、芳基烷基胺、雜芳基烷基胺；叔氨基取代基例如二烷基胺；或含氮雜環例如嗎啉、哌啶、哌嗪、吡啶或吡咯烷。
在某些實施方案中，當K代表N(R』)SO2R」時，R」代表低級烷基。
在某些實施方案中，當R5為MnJK時，R5不為CH2COOH。
在某些實施方案中，每次出現時，合適的取代基獨立包括烷基、氧代基、羥基、烷氧基、羥基-烷氧基、羰基、磺醯基、酯、醯胺、NR」、烷基滷、醯基氨基，或取代或未取代的芳基、雜芳基、雜環基、環烷基、低聚(乙二醇)等。對本領域技術人員來講芳基和雜芳基可使用任何合適的取代基包括任何上述所列那些取代基是顯而易見的。
在某些實施方案中，R8代表任何以下取代基烷基、烯基、炔基、烷氧基、羥基-烷氧基、芳基、胺或雜芳基。在某些實施方案中，任何前述取代基可任選被任何所述取代基取代，或甚至被滷素、-CN、N3、NO2或滷代烷基取代。其它合適的取代基還可包括例如環己基、＝O、羰基、磺醯基、羧基、磺酸基(sulfoxyl)、醯胺、雜環、酯或醚。
在某些實施方案中，當在R5中出現並與R8連接時，M至少一次為取代的NR」。
在某些實施方案、包括任何以上實施方案中，R8具有以下形式 其中Z代表O或NR」。在某些實施方案中，R8代表嗎啉代或環己基。在某些此類實施方案中，Mn為NR」，優選NH。在某些實施方案中，V為O。
在某些實施方案中，W代表CH2。在某些此類實施方案中，M至少一次為取代的NR」。
在某些實施方案中，其中R」′存在並且為取代的低級烷基，該低級烷基被1-3(優選1)個選自以下的取代基取代低級烷基、低級滷代烷基、NR8R8a、NR」C(O)R8、＝O、COR8、CO2R8、NR」CO2R8、C(O)NR8R8a、NR」C(O)NR8R8a、NR」C(S)NR8R8a、C(S)NR8R8a、NR」SO2NR8R8a、SO2NR8R8a、NR』′SO2R8a、SO2R8a、NR』′SO2R8a、被0-5個R」′取代的C3-10碳環，和含1-4個選自O、N和S的雜原子的被0-3個R8取代的5元-10元雜環，其中R8代表H、C1-4滷代烷基、NR8aR8a、NR」C(O)OR8a、NR」C(O)R8a、COR8a、CO2R8a、CONR8aR8a、NHC(O)NR8aR8a、NHC(S)NR8aR8a、SO2NR8aR8a、SO2R8a、C1-4烷基、苯基、苄基、被任選被0-3個R」′取代的C2-10烯基取代的C5-10烷基、被0-3個R取代的C2-10炔基、-(CF2)mCF3、被0-5個R」′取代的C3-10碳環，以及被0-3個R取代的含1-4個選自O、N和S的雜原子的5元至10元雜環；每次出現時，R8a獨立代表選自H、低級烷基、苯基和苄基的基團。
在某些實施方案中，R」′含胺基酸殘基例如纈氨酸或甘氨酸殘基，例如R」′為通過醯胺或酯鍵被胺基酸殘基取代的低級烷基殘基。
在優選的實施方案中，R5W和R6在Ar上彼此相鄰(鄰位)，優選不和與三環母核連接的鍵相鄰(鄰位)。
在某些實施方案中，V代表S或N-CN。在某些實施方案中，Ar代表雜芳環。
在式II的某些實施方案中，W代表O、S或NR」。在某些實施方案中，R5代表H、P(＝O)(OR』)2或MnQ。在某些實施方案中，每次出現時，R7獨立代表滷素、羥基、低級烷基例如甲基或低級烷氧基例如甲氧基。在某些實施方案中，當出現在R5時，n代表0-5的整數，優選1-5，更優選2-4。
在式II的某些實施方案中，W代表O、CH2、C(＝O)、C(＝S)或SO2。在某些實施方案中，R5代表MnJK或MnQ。在某些實施方案中，R6和R7代表H。在某些實施方案中，M代表C(＝O)或CH2。在某些實施方案中，優選n為1，而在其它實施方案中，n可以為0。在某些實施方案中，優選J為C(＝O)，K為OR』或N(R』)SO2R」。在某些實施方案中，N(R』)SO2R」為NHSO2R」。
在某些實施方案中，Q代表取代或未取代的含氮雜芳環。在某些實施方案中，Q代表取代或未取代的雜芳環，例如含至少兩個氮原子的5元或6元環。在某些實施方案中，Q可以為取代或未取代的四唑或二唑。在某些實施方案中，Q可以為取代或未取代的吡啶、哌啶或哌嗪。
在某些實施方案中，Q代表仲氨基取代基。在某些此類實施方案中，仲氨基取代基上的取代基選自烷基、烷氧基烷基、羥基烷基和羥基烷氧基烷基。
在式II的某些實施方案中，W代表C(＝O)、SO2或C(＝S)，R6和R7代表H，R5代表MnQ，其中n代表0，Q代表取代或未取代的含氮雜芳環。在某些實施方案中，W代表CH2，R6和R7代表H，R5代表MnQ，其中n代表0，Q代表取代或未取代的含氮雜芳環。
在某些實施方案中，W代表S、O或NR」，R6和R7代表H，R5代表MnJK，其中n為1-3的整數，J為C(＝O)，K為OR』或N(R』)SO2R」。
在某些實施方案中，W代表S、O或NR」，R6和R7代表H，R5代表MnQ，其中n為1-3的整數，Q為取代或未取代的5元含氮雜環。在此類實施方案中，優選n為1。在某些實施方案中，Q含至少兩個氮原子。
在某些實施方案中，W代表S、O或NR」，R6和R7代表H，R5代表MnQ，其中n代表1-3的整數，Q為取代或未取代的6元含氮雜環。在某些此類實施方案中，n為2，Mn代表CH2C(＝O)。
在某些實施方案中，W代表O、S或NR」，R6和R7代表H，R5代表MnQ，其中M為CH2，n為1-3的整數，Q為取代或未取代的含氮雜環。
在某些實施方案中，其中Q代表取代的含氮雜環，例如哌嗪、嗎啉、哌啶、吡啶、噻唑、二唑、四唑、吡咯等，合適的取代基包括取代或未取代的烷基、氨基-烷基、烷氧基、芳烷基(例如苄基)、芳基(例如苯基)和雜芳基例如唑基、哌嗪基、吡啶基、吡咯基。在某些此類實施方案中，其中Q含不與M相連的氮，該氮例如被這樣的取代基取代。
在某些實施方案中，本發明涉及具有以下結構的化合物或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體 C1。
在某些實施方案中，本發明涉及具有以下結構的化合物或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體 C5。
在式II的某些實施方案中，本發明提供具有式IIa結構的化合物，包括其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體
其中W和Z獨立代表O或NR」；每次出現時，R』獨立代表H、低級烷基或金屬抗衡離子，例如鹼或鹼土金屬抗衡離子；每次出現時，R」獨立代表H或低級烷基，優選H；R5代表H、P(＝O)(OR』)2或MnQ；R6代表H、OH或MnQ，優選條件是R5和R6中的一個且只有一個代表H；每次出現時，R7獨立代表氫、滷素、低級烷基例如甲基、或低級烷氧基例如甲氧基；每次出現時，M獨立代表取代或未取代的亞甲基(例如被低級烷基、氧代基、羥基等取代)、NR」、O、S、S(O)或S(O2)，優選CH2，或當與W或Q連接時，代表CH2、S(O2)、C(＝S)或C(＝O)；當存在於R5時，n代表1-5的整數，優選2-4，當存在於R6時，n代表1-3的整數；和Q代表含氮雜芳基環例如吡咯、唑、異唑、咪唑或吡唑、叔氨基取代基例如二烷基胺、或取代或未取代的含氮雜環例如嗎啉、哌啶、哌嗪或吡咯烷。
在某些實施方案中，Q代表叔氨基取代基例如二烷基胺。在某些實施方案中，Q代表取代或未取代的含氮雜環例如嗎啉、哌啶、哌嗪或吡咯烷。在某些實施方案中，Q代表含氮雜芳環、叔氨基取代基、或取代或未取代的含氮雜環。
在某些實施方案中，具有式II結構的化合物不包括具有式IIa結構的化合物。
示例性式II和IIa化合物包括表B中所示那些化合物。
本發明還提供具有選自以下結構的化合物A3、A7至A29、A31、A33至A37、A40、A41、A44至A47、A49、A51、A56、A57、A65、A69至A82、C1、C2和C5，包括其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體。在某些實施方案中，本發明提供具有結構A37的化合物，包括其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體。
在另一個實施方案中，本發明提供分離的化合物A37代謝物的前藥或藥學上可接受的鹽。一個優選的這種實施方案為化合物A68或C5的前藥或藥學上可接受的鹽。
在另一個實施方案中，本發明提供具有選自以下結構的化合物B1至B20、C1、C2和C5，包括其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體。在一個優選的實施方案中，本發明提供具有B16或C5結構的化合物，包括其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體。在另一個實施方案中，本發明提供具有B3結構的化合物，包括其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體。
在另一個實施方案中，本發明提供分離的化合物B16代謝物的前藥或藥學上可接受的鹽。一個優選的這種實施方案為化合物B3的前藥或藥學上可接受的鹽。
在某些實施方案中，本發明提供具有式V結構的化合物或其前藥、異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體 其中R8代表取代或未取代的雜環；和
Q代表取代或未取代的叔氨基取代基或含氮雜環。
在本發明的其它實施方案中，表C、D和E中所示化合物為示例性化合物，本發明包括其中描述化合物的異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體。
在另一個實施方案中，本發明提供一種新的藥用組合物，該組合物含藥學上可接受的載體和治療有效量的式I、II或IIa化合物或本文中公開的任何化合物例如C5，或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體。在一個優選的實施方案中，這種藥用組合物包含治療有效量的選自以下的化合物A1至A82、B1至B20和C1至C5，或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體。在另一個實施方案中，這種藥用組合物包含治療有效量的化合物A37或B16代謝物的前藥或藥學上可接受的鹽，優選具有A68或C5結構的代謝物。
在一些實施方案中，本發明提供了一種或多種純化或合成形式的本文所述化合物。
在另一個實施方案中，本發明提供一種新的治療癌症、或其它增殖性疾病或其它疾病包括下述任何疾病或病症的方法，該方法包括給予有需要這種治療的宿主治療有效量的式I、II或IIa化合物或本文中公開的任何化合物，或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體。在某些實施方案中，至少一種選自抗癌藥物和抗增殖藥物的化合物可與式I、II或IIa化合物或本文公開的任何化合物，或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體聯合給藥。在一個優選的實施方案中，此類治療方法包括適當給予治療有效量的選自以下的化合物A1至A82、B1至B20和C1至C5，或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體。本文中使用的術語聯合給藥包括這樣的療法其中兩種治療藥物以單一製劑聯合給藥，例如以獨立的製劑同時或不同時間給藥，或作為治療方案的一部分另外給予患者。
在另一個實施方案中，本發明提供一種配製藥用組合物的方法，該組合物含治療有效量的式I、II或IIa化合物或本文中公開的任何化合物，或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體，和任選的藥學上可接受的載體。在一個優選的實施方案中，這種藥用組合物包含治療有效量的選自以下的化合物A1至A82、B1至B20和C1至C5，或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體。在另一個實施方案中，這種藥用組合物包含治療有效量的化合物A37或B16代謝物的前藥或藥學上可接受的鹽，優選具有A68或C5結構的代謝物。
在再一些實施方案中，本發明藥用組合物用於治療疾病，例如癌症和其它增殖性疾病或其它疾病包括下述任何疾病或病症。
在本發明的其中使用取代的基團的某些實施方案中，合適的取代基可包括例如滷素、羥基、羰基(例如酮、醛、羧基、酯、醯基)、硫代羰基(例如硫代酸酯、硫代乙酸酯、硫代甲酸酯)、烷氧基、磷醯基(例如膦酸酯、次膦酸酯)、磷酸酯、膦酸酯、次膦酸酯、氨基、氨基-烷基、醯氨基、脒、亞胺、氰基、硝基、疊氮基、巰基、烷硫基、醚、-CF3、烷基、烯基、炔基、環烷基、烷氧基、甲矽烷基、磺醯基(例如硫酸酯、磺醯氨基、氨磺醯基、磺酸酯)、雜環基、芳烷基(例如苄基)或芳族或雜芳族部分(例如苯基、唑基、哌嗪基、吡啶基、吡咯基)。此類取代基本身還可被取代或未被取代。
ii.定義本文中使用的以下術語和表達具有指定的含義。本發明化合物可含有不對稱取代的碳原子，因此可分離為旋光形式或外消旋體。如何製備旋光體為本領域所熟知，例如通過拆分外消旋體或用旋光性原料合成。除了特別指出的特定立體化學或異構體性式外，將包括結構的所有手性、非對映體、外消旋體和所有幾何異構體。所有用於製備本發明化合物的方法和其中製備的中間體視為本發明的一部分。
本發明將包括所有出現在本發明化合物上的原子同位素。同位素包括那些具有相同原子序數但不同質量數的原子。在一般的非限定性實例中，氫的同位素包括氚和氘。碳的同位素包括12C和14C。
術語「烷基」將包括具有明確數目碳原子的支鏈和直鏈飽和脂族烴基。烷基的實例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和仲戊基。此外，該術語包括未取代和取代的烷基，後者指烷基部分具有一個或多個被但不限於以下基團置換的氫取代基滷素、羥基、羰基、烷氧基、酯、醚、氰基、磷醯基、氨基、亞氨基、醯氨基、巰基、烷硫基、硫代酸酯、磺醯基、硝基、雜環基(heterocyclo)、芳基或雜芳基。本領域技術人員也將理解適當時，取代部分本身也可被取代。術語「低級烷基」指那些具有1至6個碳原子的烷基，優選1至4個碳原子，術語「低級烷氧基」指與氧原子連接的這類低級烷基。在某些實施方案中，優選烷基取代基為低級烷基取代基。
本文中使用的術語「滷代」或「滷素」指氟、氯、溴和碘。
術語「芳基」將表示芳族部分例如但不限於苯基、茚滿基或萘基。
術語「環烷基」和「雙環烷基」將表示任何穩定的環系統，它可以飽和或部分不飽和。這種基團的實例包括但不限於環丙基、環戊基、環己基、降冰片烷基、雙環[22]壬烷、金剛烷基或四氫萘基(1，2，3，4-四氫化萘)。
本文中使用的「碳環」或「碳環基」將表示任何穩定的3元至7元單環或雙環、或7元至13元雙環或三環，其中任何環可以為飽和、部分不飽和或芳族。此類碳環的實例包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、金剛烷基、環辛基、[3.0]雙環辛烷、[4.0]雙環壬烷、[4.0]雙環癸烷(萘烷)、[2.2]雙環辛烷、芴基、苯基、萘基、茚滿基、金剛烷基或四氫萘基(1，2，3，4-四氫化萘)。
本文中使用的術語「雜環」或「雜環系統」將表示飽和、部分不飽和或不飽和的穩定5元至7元單環或雙環、或7元至10元雙環雜環(芳族/雜芳基)，它由碳原子和1至4個獨立選自N、O和S的雜原子組成並包括任何雙環基團，其中以上定義的任何雜環與苯環稠合。氮和硫雜原子可任選被氧化。雜環可於任何雜原子或碳原子與其側基連接形成穩定結構。如果生成的化合物穩定，本文中所述雜環可在碳或氮原子上取代。如果特指的話，雜環上的氮可任選被季銨化。在某些實施方案中，當雜環的S和O原子總數超過1時，則這些雜原子無須彼此相鄰。優選雜環上的S原子總數不大於1。本文中使用的術語「芳雜環系統」將表示穩定的5元至7元單環或雙環、或7元至10元雙環雜環芳環，它由碳原子和1至4個獨立選自N、O和S的雜原子組成。優選芳雜環上的S和O原子總數不大於1。雜環的實例包括但不限於1H-吲唑、2-吡咯烷酮基、2H16H二噻嗪基、2H-吡咯基、3H-吲哚基、4-哌啶酮基、4aH-咔唑、4H-喹嗪基、6H-1，2，5-噻二嗪基、吖啶基、吖辛因基、苯並咪唑基、苯並呋喃基、苯並噻吩基(benzothiofuranyl)、苯並噻吩基(benzothiophenyl)、苯並唑基、苯並噻唑基、苯並三唑基、苯並四唑基、苯並異唑基、苯並異噻唑基、苯並咪唑啉酮基(benzimidazalonyl)、咔唑基、4aH-咔唑基、P-咔啉基、苯並二氫吡喃基、苯並吡喃基、肉啉基、十氫喹啉基、2H，6H二噻嗪基、二氫呋喃並[2，3-b]四氫呋喃、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚啉基(indolenyl)、二氫吲哚基、中氮茚基、吲哚基、異苯並呋喃基(isobenzofuranyl)、異苯並二氫吡喃基、異吲唑基、異二氫吲哚基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異唑基、嗎啉基、1，5-二氮雜萘基、八氫異喹啉基、二唑基、1，2，3-二唑基、1，2，4-二唑基、1，2，5-二唑基、1，3，4-二唑基、唑烷基、唑基、唑烷基嘧啶基(perimidinyl)、菲啶基、菲咯啉基、吩砒嗪基、吩嗪基、吩噻嗪基、苯氧硫雜環己二烯基(phenoxathiinyl)、吩嗪基、2，3-二氮雜萘基、哌嗪基、哌啶基、蝶啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、噠嗪基、吡啶並唑、吡啶並咪唑、吡啶並噻唑、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎寧環基、咔啉基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、6H-1，2，5-噻二嗪基、1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩並噻唑基、噻吩並唑基、噻吩並咪唑基、噻吩基(thiophenyl)、三嗪基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，2，5-三唑基、1，3，4-三唑基、呫噸基。優選的雜環包括但不限於吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、吲哚基、苯並咪唑基、1H-吲唑基、唑烷基、苯並三唑基、苯並異唑基、羥吲哚基、苯並唑啉基或靛紅醯基(isatinoyl)。還包括含例如以上雜環的稠環和螺環化合物。
本文中的「藥學上可接受的鹽」指本文公開化合物的衍生物，其中通過製備其酸或鹼鹽修飾母體化合物。藥學上可接受的鹽的實例包括但不限於鹼性殘基例如胺的礦物或有機酸鹽；酸性殘基例如羧酸的鹼鹽或有機鹽；等。藥學上可接受的鹽包括例如用無毒無機或有機酸形成的母體化合物的常規無毒鹽或季銨鹽。
例如，此類常規無毒鹽包括從無機酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等衍生的那些鹽；和用例如以下有機酸製備的鹽乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、雙羥萘酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、穀氨酸、苯甲酸、水楊酸、磺胺酸、2-乙酸基苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、羥乙磺酸等。
本發明藥學上可接受的鹽可通過常規化學方法，用含鹼性或酸性部分的母體化合物合成。通常，此類鹽可通過使這些化合物的游離酸或鹼形式在水或有機溶劑中，或在兩者的混合物中與化學計算量的適當鹼或酸反應製備；通常，優選非水介質如醚、EtOAc、乙醇、異丙醇或乙腈。合適鹽列於Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing Company，Easton，PA，1990，第1445頁，其內容通過引用結合到本文中。
本文中使用的短語「藥學上可接受的」指在合理的醫學判斷範圍內，那些適用於與人和動物組織接觸而無過多毒性、刺激性、變應性反應或其它問題或併發症的、與合理效益/風險比率相稱的化合物、物質、組合物和/或劑型。
本文中使用的術語「前藥」將包括當這種前藥給予哺乳動物患者時，在體內釋放本發明活性母體藥物的任何共價鍵合的載體。因為已知前藥可增加藥物許多需要的性質(即溶解度、生物利用度、可製備性等)，因此本發明化合物可以前藥的形式釋藥。因此，本發明將包括要求保護的化合物的前藥、釋放這類前藥的方法和含這類前藥的組合物。通過修飾化合物中的官能團來製備本發明的前藥，用常規操作或體內將該修飾物解離為母體化合物。前藥包括本發明化合物，其中羥基、氨基或巰基分別與當本發明前藥給予哺乳動物患者時，其解離形成游離羥基、游離氨基或游離巰基的任何基團鍵合。前藥的實例包括但不限於本發明化合物中醇和胺官能團的乙酸酯(鹽)、甲酸酯(鹽)和苯甲酸酯(鹽)衍生物。
術語「純的」或「純化的」是指分子中基本上不存在其它有機分子，尤其是雜質例如副產物或降解產物。在一些實施方案中，「純的」或「純化的」化合物是組成中具有至少80％重量，更優選95-99％重量，最優選至少99.8％重量的有機化合物(例如排除可存在於化合物的藥物製劑中的水、緩衝劑、賦形劑等分子)。
「取代的」將表示在使用表達「取代的」的原子上的一個或多個氫被選擇的指定基團置換，條件是所指定原子的正常價沒有超出，且該取代導致穩定的化合物。當取代基為酮或氧代(即＝O)基團時，則該原子上的2個氫被置換。在芳族部分不存在酮/氧代取代基。示例性取代基包括例如烷基、全氟烷基(例如三氟甲基)、滷素、羥基、羰基(例如羧基、烷氧基羰基、甲醯基或醯基)、硫代羰基(例如硫代酸酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、磷醯基、磷酸酯、膦酸酯、次膦酸酯、氨基、醯氨基、脒、亞胺、氰基、硝基、疊氮基、巰基、烷硫基、硫酸酯、磺酸酯、氨磺醯基、磺醯氨基、磺醯基、碳環基、雜環基、芳烷基、雜芳烷基或芳族或雜芳族部分。本領域技術人員將理解，如果適當的話，取代基例如雜環基、芳基、烷基等本身可被取代。
本發明化合物的術語「治療有效量」表示有效抑制一類稱為依賴細胞周期蛋白的激酶的酶的量，或治療宿主的癌症或其它增殖性疾病或其它疾病症狀的量。
本文中使用的術語「抗癌」或「抗增殖」藥物包括但不限於六甲蜜胺、白消安、苯丁酸氮芥、環磷醯胺、異環磷醯胺、氮芥、美法侖、塞替哌、克拉屈濱、氟尿嘧啶、氟尿苷、吉西他濱、硫鳥嘌呤、噴司他丁、甲氨蝶呤、6-巰基嘌呤、阿糖胞苷、卡莫司汀、洛莫司汀、鏈佐星、卡鉑、順鉑、奧沙利鉑、異丙鉑、四鉑、洛鉑、JM216、JM335、氟達拉濱、氨魯米特、氟他胺、戈舍瑞林、亮丙立德、醋酸甲地孕酮、醋酸環丙孕酮、他莫昔芬、阿那曲唑、比卡魯胺、地塞米松、己烯雌酚、潑尼松、博來黴素、放線菌素D、柔紅黴素、多柔比星、伊達比星、米託蒽醌、洛索蒽醌、絲裂黴素-c、普卡黴素、紫杉醇、多西他賽、託泊替康、伊立替康、9-氨基喜樹鹼(camptothecan)、9-硝基喜樹鹼、GS-211、JM 118、依託泊苷、替尼泊苷、長春鹼、長春新鹼、長春瑞濱、丙卡巴肼、天冬醯胺酶、培門冬酶、奧曲肽、雌莫司汀和羥基脲。
iii.劑量和製劑可通過給予本發明依賴細胞周期蛋白的激酶抑制劑，產生使活性藥物與哺乳動物體內藥物作用部位接觸的任何方法治療癌症或增殖性疾病或其它疾病。可通過任何已有的與藥物聯合使用的常規方法，以單獨治療藥物或以各治療藥物聯合的方式給予它們。本文中所述抑制劑的化學特性賦予化合物良好的溶解特性，使它們適用於以靜脈製劑、局部製劑、口服製劑以及以下更詳細論述的其它製劑給藥。它們可以單獨給藥，但優選以選擇給藥途徑和標準藥學實踐為基礎，與選擇的藥用載體一起給藥。在例如Remington′s Pharmaceutical Sciences(Remington′s Pharmaceutical Sciences.Mack Publishing Company，Easton，Pa.，USA 1985)書中論述了合適的載體(vehicle)和它們的製劑。
在另一方面，本發明提供藥學上可接受的組合物，該組合物含治療有效量的一種或多種本發明化合物例如上述化合物和一起配製的一種或多種藥學上可接受的載體(添加劑)和/或稀釋劑。如以下詳細描述，本發明藥用組合物尤其可配製成固體或液體給藥形式，包括適合以下給藥途徑的那些形式(1)口服給藥，例如頓服劑(drenches)(水或非水溶液或混懸液)、片劑、一次性大劑量注射液(boluses)、散劑、顆粒劑、舌用糊劑；(2)腸胃外給藥，例如通過皮下、肌內或靜脈內注射，例如無菌溶液或混懸液；(3)局部使用，例如用於皮膚的霜劑、軟膏劑或噴霧劑；或(4)陰道內或直腸內，例如陰道栓劑、霜劑或發泡劑。在某些實施方案中，藥用製劑可以為非熱原性的，即不升高患者體溫。
溼潤劑、乳化劑和潤滑劑，例如十二烷基硫酸鈉和硬脂酸鎂，以及著色劑、釋放劑、包衣材料、甜味劑、矯味劑和芳香劑、防腐劑和抗氧化劑也可加入組合物。
藥學上可接受的抗氧化劑的實例包括(1)水溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸、半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉等；(2)油溶性抗氧化劑，例如棕櫚酸抗壞血酸酯、丁基化羥基苯甲醚(BHA)、丁化羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α-生育酚等；和(3)金屬螯合劑，例如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。
給藥劑量自然隨以下已知因素而變例如具體藥物的藥效學特性、其給藥的模式和途徑；用藥者的年齡、健康和體重；症狀的性質和程度；協同治療的種類；治療的頻率；和需要的效果。預期活性成分的日劑量可為約0.001至約1000毫克/千克體重，優選的劑量為約0.1至約30mg/kg。
適用於給藥的組合物劑型每單位含約1mg至約100mg活性成分。在這些藥用組合物中，活性成分一般按組合物總重計佔約0.95％(重量)。活性成分可以固體劑型例如膠囊劑、片劑和散劑，或以液體劑型例如酏劑、糖漿和混懸劑經口給藥。它也可以無菌液體劑型經腸胃外給藥。
本發明製劑包括適合經口、鼻、局部(包括口頰和舌下)、直腸、陰道和/或腸胃外給藥的那些製劑。可便利地提供這些製劑的單位劑型，並可通過藥劑學領域任何熟知的方法製備。可與載體物質組合製備單一劑型的活性成分的量隨治療的宿主、具體的給藥模式而變。可與載體物質組合製備單一劑型的活性成分的量一般為達到療效的抑制劑的量。通常按100％計，該活性成分的量為約1％至約99％，優選約5％至約70％，最優選約10％至約30％。
製備這些製劑或組合物的方法包括將本發明化合物與載體和任選一種或多種助劑混合的步驟。一般而言，此類製劑通過將本發明抑制劑與液體載體或粉碎的固體載體或兩者均勻並充分混合，然後如需要使產品成形而製備。
適合經口給藥的本發明製劑可以是以下形式膠囊劑、扁囊劑、丸劑、片劑、錠劑(使用矯味基質，通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃芪膠)、散劑、顆粒劑或水或非水液體的溶液劑或混懸劑，或水包油或油包水液體乳劑，或酏劑或糖漿劑，或軟錠劑(使用惰性基質，例如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠)和/或漱口劑等，各自含預定量的本發明化合物作為活性成分。本發明抑制劑也可以一次性大劑量濃注射劑(bolus)、幹藥糖劑或貼劑給藥。
在用於經口給藥的本發明固體劑型(膠囊劑、片劑、丸劑、糖錠劑、散劑、顆粒劑等)中，活性成分與一種或多種藥學上可接受的載體例如檸檬酸鈉或磷酸二鈣和/或以下任何載體混合(1)填充劑或補充劑例如澱粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或矽酸；(2)粘合劑例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯膠；(3)保溼劑，例如甘油；(4)崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯澱粉、藻酸、某些矽酸鹽和碳酸鈉；(5)溶液阻滯劑例如石蠟；(6)吸收促進劑例如季銨化合物；(7)潤溼劑例如鯨蠟醇和甘油單硬脂酸酯；(8)吸收劑例如高嶺土和皂土粘土；(9)潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉及其混合物；和(10)著色劑。在膠囊劑、片劑和丸劑的情況中，這類藥用組合物還可包含緩衝劑。使用此類賦形劑如乳糖以及高分子量聚乙二醇等的同類固體組合物還可用作填充軟和硬明膠膠囊的填充劑。
片劑可通過任選與一種或多種助劑一起壓制或模製。壓製片可用粘合劑(例如明膠或羥丙基甲基纖維素)、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(例如澱粉羥乙酸鈉或交聯羧甲基纖維素鈉)、表面活性劑或分散劑製備。模製片可通過在合適的機器中模製經惰性液體稀釋劑潤溼的抑制劑粉末混合物而製備。
可任選將本發明片劑和其它藥用組合物的固體劑型例如糖錠劑、膠囊劑、丸劑和顆粒劑刻痕或用包衣材料和殼例如腸溶包衣材料和藥物製劑領域熟知的其它包衣材料製備。它們可以是使用例如提供需要釋放曲線的各種比例的羥丙基甲基纖維素、其它聚合物骨架材料、脂質體和/或微球體，來提供緩慢或控制釋放其中活性成分的劑型。它們可通過例如經截留細菌的濾器過濾，或通過將消毒劑加入無菌固體組合物中滅菌，可將該無菌固體組合物在臨用前溶於無菌水或某些其它無菌注射用介質。這些組合物也可任選含不透明劑，並可為它們只在或優先在胃腸道的某些部分任選以延滯方式釋放活性成分的組合物。可使用的植入組合物實例包括高分子物質和蠟。如果合適，活性成分還可以和一種或多種上述賦形劑一起為微囊形式。
經口給藥的本發明化合物的液體劑型包括藥學上可接受的乳劑、微乳、溶液、混懸液、糖漿和酏劑。除活性成分之外，液體劑型可含本領域常用的惰性稀釋劑，例如水或其它溶劑、增溶劑和乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄基酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油(尤其是棉子油、花生油、玉米油、胚芽(germ)油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇、脫水山梨醇的脂肪酸酯及其混合物。
除惰性稀釋劑之外，口服組合物還可包括助劑例如溼潤劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、矯味劑、著色劑、芳香劑和防腐劑。
除本發明活性抑制劑外，混懸液可含有懸浮劑例如乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、皂土、瓊脂、黃芪膠及其混合物。
可提供用於直腸或陰道給藥的本發明藥用組合物的栓劑製劑，該劑型可通過將一種或多種本發明化合物與一種或多種合適的無刺激性賦形劑或載體包括例如可可脂、聚乙二醇、栓劑蠟或水楊酸鹽(酯)混合製備，它在室溫下是固體，但體溫下是液體，因此在直腸或陰道腔熔化釋放活性抑制劑。
適用於陰道給藥的本發明製劑包括含本領域中已知合適載體的陰道栓劑、棉塞、霜劑、凝膠劑、糊劑、發泡劑或噴霧劑製劑。
用於局部或透皮給予本發明化合物的劑型包括散劑、噴霧劑、軟膏劑、糊劑、霜劑、洗劑、凝膠劑、溶液劑、貼劑和吸入劑。在無菌條件下，可將活性化合物與藥學上可接受的載體和可能需要的任何防腐劑、緩衝劑或推進劑混合。
除活性異戊烯基轉移酶抑制劑外，軟膏、糊劑、霜劑和凝膠劑可含有賦形劑，例如動物和植物脂肪、油、蠟、石蠟、澱粉、黃芪膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、矽酮、皂土、矽酸、滑石粉和氧化鋅或其混合物。
除本發明化合物外，散劑和噴霧劑可含有賦形劑例如乳糖、滑石粉、矽酸、氫氧化鋁、矽酸鈣和聚醯胺粉末，或這些物質的混合物。噴霧劑還可含有常用推進劑，例如含氯氟烴和揮發性的未取代烴例如丁烷和丙烷。
透皮貼劑還具有提供控制本發明化合物向體內釋放的優點。可通過將本發明抑制劑溶於或分散於適當的介質中製備此類劑型。還可用吸收促進劑增加透過皮膚的藥物流量。可通過提供速率控制膜，或將本發明化合物分散在聚合物骨架或凝膠中來控制這種流量的速度。
眼用製劑、眼軟膏劑、散劑、溶液劑等也包括在本發明的範圍內。
適用於腸胃外給藥的本發明藥用組合物包含一種或多種本發明抑制劑和組合應用的一種或多種藥學上可接受的無菌等滲水或非水溶液、分散體、混懸液或乳液，或在臨用前可重新組成為無菌注射溶液或分散體的無菌粉末，該組合物可含有抗氧化劑、緩衝劑、制菌劑、使製劑與預定接受者的血液等滲的溶質、或懸浮劑或增稠劑。
可用於本發明藥用組合物的合適水和非水載體的實例包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合適的混合物、植物油例如橄欖油、注射用有機酯例如油酸乙酯。例如通過使用包衣材料例如卵磷脂、通過維持分散體中必需粒徑和通過使用表面活性劑可保持適當的流動性，這些組合物還可含有助劑例如防腐劑、溼潤劑、乳化劑和分散劑。可加入各種抗菌劑和抗真菌劑例如尼泊金酯、三氯叔丁醇、苯酚山梨酸等確保防止微生物作用。可能還需要將等滲劑例如糖、氯化鈉等包括在組合物中。此外，可通過加入延遲吸收的試劑例如單硬脂酸鋁和明膠使注射藥物形式的吸收延長。
在某些情況中，為延長抑制劑的療效，需要減緩皮下或肌內注射抑制劑的吸收。這可通過使用具有較差水溶性的結晶或無定形物質的液體混懸液實現。因而，抑制劑的吸收速度取決於其溶解速度，而溶解速度又取決於結晶大小和結晶形式。或者，通過將抑制劑溶於或懸浮於油載體中實現使腸胃外給藥的抑制劑形式延遲吸收。
通過在可生物降解的聚合物例如在聚交酯-聚乙醇酸交酯中形成主題抑制劑的微囊包封骨架來製備注射用長效製劑形式。根據藥物與聚合物的比例和具體使用聚合物的性質，可控制藥物釋放的速度。其它可生物降解聚合物的實例包括聚(原酸酯)和聚(酐)。還可通過在脂質體或與身體組織相容的微乳中捕集藥物來製備長效注射製劑。
當本發明化合物作為藥物給予人和動物時，可單獨給予它們，或作為含例如0.1-99.5％(更優選0.5-90％)活性成分和組合使用的藥學上可接受載體的藥用組合物給予它們。
本發明製劑可經口、腸胃外、局部或直腸給予。它們自然要通過適用於每種給藥途徑的形式給予。例如，它們以片劑或膠囊劑的形式給予；通過注射劑、吸入劑、眼洗劑、軟膏劑、栓劑等給予；通過注射、輸注或吸入給予；通過洗劑或軟膏劑局部給予；和通過栓劑通過直腸給予。優選經口給藥。
本文中使用的短語「腸胃外給藥」和「腸胃外給予」表示非腸內給藥和局部給藥的模式，通常通過注射，非限定性包括靜脈內、肌內、動脈內、鞘內、囊內、眼眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛網膜下、脊柱內和胸骨內注射和輸注。
本文中使用的短語「全身給藥」、「全身給予」、「外周給藥」和「外周給予」表示給予不直接進入中樞神經系統的化合物、藥物或其它物質，例如皮下給藥，以便它進入患者全身，因而經歷代謝和其它類似過程。
不管選擇的給藥途徑，本主題方法中使用的CDK抑制劑可按合適的水合形式使用，和/或本發明藥用組合物可通過本領域技術人員已知的常規方法將其配製成藥學上可接受的劑型。
明膠膠囊劑含活性成分和載體粉末例如乳糖、澱粉、纖維素衍生物、硬脂酸鎂、硬脂酸等。可用類似稀釋劑製備壓製片。可將片劑和膠囊劑製成在數小時內提供連續釋放藥物的緩釋產品。可以給壓製片包糖衣或薄膜衣以掩蓋任何不愉快的味道和使片劑與空氣隔絕，或包腸衣以便片劑在胃腸道中選擇性崩解。也可以將類似固體組合物用作填充軟和硬明膠膠囊的填充劑；在這種關係中，優選的物質還包括乳糖和高分子量聚乙二醇。優選的製劑是油例如橄欖油、Miglyol或Capmul溶液或混懸液的軟明膠膠囊劑。可適當加入抗氧化劑以防止長期降解。
經口給藥的液體劑型可含有著色劑和矯味劑以增加患者的依從性。一般而言，水、合適的油、鹽水、乙醇、葡萄糖水溶液和有關的糖溶液、二元醇例如丙二醇或聚乙二醇或這些物質的混合物是腸胃外用溶液的合適載體。
可將以上公開化合物用生理緩衝液或滅菌水配製成其游離形式活性成分或其鹽的無菌溶液以用於靜脈內給藥。如需要可使用含糖載體液體(例如林格氏乳酸鹽或其它葡萄糖溶液)，條件是總含糖量不引起不需要的乳酸酸中毒水平。靜脈內給藥可通過一次性大劑量濃注(優選每日幾次)或通過在持續的時間內連續輸注進行。優選的一次性大劑量濃注或輸注的總劑量基本上根據患者的身體條件而變化；一般而言，它們通常為約25mg/kg至約250mg/kg。
優選腸胃外給藥的溶液含活性成分的水溶性鹽、合適的穩定劑以及酌情含緩衝物質。單獨或組合應用的抗氧化劑例如亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉或抗壞血酸是合適的穩定劑。還使用檸檬酸及其鹽以及EDTA鈉。此外，腸胃外用溶液可含有防腐劑，例如苯扎氯銨、尼泊金甲酯或尼泊金丙酯、三氯叔丁醇。在本領域標準參考教材Remington′sPharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing Company，Easton，PA，1990中有對合適藥用載體的描述，其內容通過引用結合至本文中。
使用表A、B和/或C的化合物的製劑、溶液以及其它製劑可按照PCT申請WO 03/033499和/或WO 04/092139中描述的方法製得，其中的教導引入本文以供參考。
iv.治療應用由於cdks一般在調節細胞增殖中起關鍵作用，本文中公開的化合物可用作可逆細胞抑制劑，可用於治療特徵為異常細胞增殖的任何疾病過程例如過度增殖性疾病，包括癌症、良性前列腺增生、家族腺瘤病性息肉病、神經纖維瘤病、銀屑病、真菌感染、內毒素性修克、肥大性疤痕形成、炎性腸病、移植排斥、與動脈粥樣硬化有關的血管平滑肌細胞增殖、銀屑病、肺纖維化、關節炎、腎小球腎炎、血管成形術或血管手術後再狹窄和其它手術後狹窄及再狹窄。見例如美國專利號6,114,365和6,107,305。
預期本文中公開的化合物可有效治療增殖性或過度增殖性疾病例如癌症、自身免疫性疾病、病毒性疾病、真菌疾病、神經變性疾病和心血管疾病。
更具體地講，本文中公開的化合物可有效治療各種癌症包括(但不限於)以下癌症癌，包括膀胱癌、乳腺癌、結腸癌、腎癌、肝癌、包括小細胞肺癌的肺癌、食道癌、膽囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宮頸癌、甲狀腺癌、前列腺癌和包括鱗狀上皮細胞癌的皮膚癌；造血系統淋巴性腫瘤，包括白血病、急性淋巴細胞白血病、急性成淋巴細胞白血病、B-細胞淋巴瘤、T-細胞淋巴瘤、何杰金淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤、毛狀細胞淋巴瘤和Burkett氏淋巴瘤；造血系統骨髓性腫瘤，包括急性和慢性骨髓性白血病、骨髓增生異常症候群和前髓細胞性白血病；源自間質的腫瘤，包括纖維肉瘤和橫紋肌肉瘤；中樞和外周神經系統腫瘤，包括星形細胞瘤、成神經細胞瘤、神經膠質瘤和神經鞘瘤；和其它腫瘤，包括黑色素瘤、精原細胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、xenoderoma pigmentosum、keratoctanthoma、甲狀腺濾泡性癌和卡波西肉瘤。
由於新近發現cdk5參與τ蛋白磷酸化(J.Biochem，117，741-749(1995))，提示本文中公開的化合物還可有效治療早老性痴呆。
本文中公開的化合物可誘導或抑制細胞凋亡。在多種人疾病中，細胞凋亡應答異常。作為細胞凋亡調節劑的本文所述化合物可有效治療癌症(包括但不限於上述那些種類)、病毒感染(包括但不限於皰疹病毒、痘病毒、埃-巴二氏(Epstein-Barr)病毒、辛培斯(Sindbis)病毒和腺病毒)、預防AIDS在感染HIV個體中發展、自身免疫性疾病(包括但不限於全身性紅斑狼瘡、自身免疫介導的腎小球腎炎、類風溼性關節炎、銀屑病、炎性腸病和自身免疫性糖尿病)、神經變性疾病(包括但不限於早老性痴呆、與AIDS有關的痴呆、帕金森病、肌萎縮性側索硬化、色素性視網膜炎、脊髓性肌萎縮和小腦變性)、骨髓增生異常症候群、再生障礙性貧血、與心肌梗塞有關的缺血性損傷、中風和再灌注損傷、心律失常、動脈粥樣硬化、毒素引發或酒精相關性肝病、血液病(包括但不限於慢性貧血和再生障礙性貧血)、骨骼系統變性疾病(包括但不限於骨質疏鬆症和關節炎)阿司匹林過敏性鼻竇炎、囊性纖維化、多發性硬化、腎病和癌性痛。
作為cdks抑制劑的本文中公開的化合物可調節細胞RNA和DNA合成的水平。因此，這些藥物可有效治療病毒感染(包括但不限於HIV、人乳頭狀瘤病毒、皰疹病毒、痘病毒、埃-巴二氏病毒、Sindbis病毒和腺病毒)。
本文中公開的化合物還可有效化學預防癌症。化學預防定義為通過阻斷引發致突變事件，或通過阻斷已受到損害的惡化前細胞發展或抑制腫瘤復發來抑制侵襲性癌症發展。
本文中公開的化合物還可有效抑制腫瘤血管生成和轉移。
本文中公開的化合物還可用於預防通常伴隨許多傳統化學療法方案出現的脫髮。例如，本發明CDK抑制劑可用於抑制毛囊中的細胞增殖，因此，使它們免受以增殖細胞為目標的細胞毒藥物的攻擊。
本文中公開的化合物還可用作以下其它蛋白激酶的抑制劑例如蛋白激酶C、her2、raf1、MEK1、MAP激酶、EGF受體、PDGF受體、IGF受體、PI3激酶、Wee l激酶、Src、Abl，因此可有效治療與其它蛋白激酶有關的疾病。
本發明化合物也可與已知抗癌治療例如放射療法或與以下細胞抑制劑或細胞毒藥物聯合使用(同時或序貫給予)例如但不限於DNA作用藥物例如順鉑或多柔比星；拓撲異構酶II抑制劑例如依託泊苷；拓撲異構酶I抑制劑例如CPT-11或託泊替康；微管蛋白作用藥物例如紫杉醇、多西他賽或epothilones；激素藥物例如他莫昔芬；胸苷酸合成酶抑制劑例如5-氟尿嘧啶；和抗代謝藥例如甲氨蝶呤。在此類聯合藥物中，本發明的化合物和製劑可有效預防或減少脫髮發生率，它通常是由放射療法或化學療法引起。
如果配成固定劑量，此類組合產品在下述劑量範圍內使用本發明化合物和其它活性藥物或在其批准的劑量範圍內治療。例如，發現cdc2抑制劑olomucine協同已知的細胞毒藥物誘導細胞凋亡(J.Cell Sci.，108，2897(1995))。當組合製劑不合適時，還可序貫給予本文中所述化合物和已知抗癌藥物或細胞毒藥物。本發明不受給藥順序的限定；可在給予已知抗癌藥物或細胞毒藥物之前或之後給予本文中所述化合物。例如，依賴細胞周期蛋白的激酶抑制劑flavopiridol的細胞毒活性受與抗癌藥物的給藥順序影響。Cancer Research，57，3375(1997)。
本文描述的所有實施方案適用於本發明的所有不同方面。在適當時，任何所描述的實施方案可以與一種或多種其它這樣的實施方案自由地合併。本發明化合物的各個實施方案、適於用這樣的化合物治療的病症的各個實施方案以及使用本發明化合物的治療方法的各個實施方案可以自由地彼此合併。
本文中更詳細地描述了本發明的具體實施方案。然而，這些是舉例說明性的實施方案，並且應當不解釋為在任何方面的限制。
等同方案本領域技術人員應當認識到或者能夠僅使用常規實驗來確定本文所述的本發明具體實施方案的很多等同方案。這樣的等同方案包括在權利要求書的範圍內。本領域技術人員還應當認識到，本文所述權利要求的實施方案或特徵的所有組合都在本發明範圍內。
v.合成可用下述方法和合成有機化學領域的已知合成方法，或本領域技術人員認識到的其衍生方法合成本發明化合物。優選的方法包括但不限於下述那些方法。下文引用的各參考文獻通過引用結合到本文中。
製備本文中公開的一些化合物的關鍵中間體是吡唑氨基腈、氨基羧醯胺和氨基酯。這些中間體的製備方法已在化學文獻中發表，在流程A(A.O.Abdelhamid等，J.Heterocycl.Chem.1984，21，1049)、B(C.C.Cheng和R.K.Robins，J.Org.Chem.1956，21，1240)、C(P.Schmidt和J.Druey，Helv.Chem.Acta 1956，39，986)中概述了幾種方法。還可參閱Tominaga等，J.Heterocycl.Chem.1990，27，775和PCT申請號WO 00/21926和WO 99/54308。多種肼和醛原料有市售，或可通過標準有機轉化方法製備。以下使用的取代基Ar表示芳環，被取代形成(conform)或轉化為本文公開的一些化合物的相應的芳基取代基。也可通過在鹼的存在下，用CH2(CN)2處理PrCOCl，用PCl5處理生成的化合物，然後使產物與ArNHNH2反應來製備一些化合物。
流程A
流程B 流程C 如流程D中所示，可將氨基腈II轉化為本發明吡唑並[3，4-d]嘧啶。總之，任選在合適的溶劑例如二氯甲烷存在下，通過用合適的鹼例如三乙胺處理將氨基羧醯胺醯化，隨後用式ArCH2COX醯滷優選醯氯處理，得到羧醯氨基腈V。或者，通過在合適的鹼和偶合試劑存在下，在合適的溶劑中，使氨基腈II與通式ArCH2CO2H的羧酸偶合可製備羧醯氨基腈V。已經對胺和羧酸的偶合作了綜述(Klausnew和Bodansky，Synthesis 1972，453-463)，本領域技術人員可認識到有多種實現該偶合的試劑。
流程D 可通過在約0℃至最高達100℃，在合適的鹼優選金屬氫氧化物或醇化物鹼存在下，在溶劑優選水、醇或水-醇混合物中，用過量過氧化氫處理，可完成將羧醯氨基腈V至本發明化合物的轉化。
或者，可通過在濃、強酸優選85％H3PO4中，加熱優選約1小時，將羧醯氨基腈V轉化為本發明化合物。流程E表示製備本發明化合物的另一種方法。在合適的溶劑優選低級鏈烷醇中，優選在溶劑的沸點下，用過量的其中R為例如低級烷基的式ArCH2CO2R的酯和過量的鹼優選金屬低級醇化物處理氨基醯亞胺III，得到本發明化合物。許多芳基乙酸酯有市售，或可通過在酸催化劑例如H2SO4或p-TsOH存在下，回流下用過量的醇ROH，優選用乙醇或甲醇作溶劑使市售芳基乙酸酯化一步製備。或者，優選在溶劑例如CH2Cl2中並採用催化劑例如DMAP，可使用偶合試例如DCC。
流程E 苯乙酸可通過酸或鹼水解芳基乙腈製備，而芳基乙腈可通過優選在溶劑例如DMF、MeOH、EtOH、水、DMSO或其混合物中，用CN-處理芳基滷化物製備。芳基乙酸酯的更多實例可在Arndt-Eistert(Meier和Zeller，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1975，14，32)或有關同系化反應條件下用芳基羧酸製備。
可通過與過量的式ArCH2CN腈和鈉反應，將式IV氨基酯轉化為本發明化合物。
流程F 優選該反應無溶劑(neat)加熱進行。
吡唑並[3，4-d]嘧啶酮還可按下述方法進一步製備，得到本發明其它化合物。可在Ar基團上進行親電芳族取代反應，引入取代基。這類反應包括但不限於硝化、醯化(Friedel-Crafts)、滷代、烷基化(Friedel-Crafts)、氯甲基化、磺化和氨甲基化(Mannich反應)。有機合成領域的技術人員熟悉進行這些反應的條件，通常涉及在催化劑的存在下，用芳基或雜芳基底物進行親電反應。在硝化或Mannich反應的情況中，優選催化劑為可作為溶劑的質子酸，其中親電體分別由硝石或胺和羰基組分原位生成。對於其它親電芳族取代反應，優選的催化劑為Lewis酸，包括但不限於FeX3、AlX3和ZnX2，其中X為滷素。
可通過與親電體包括但不限於醯滷、酸酐、異氰酸酯、氯甲酸酯、磺醯滷、烷基滷、內酯或酯反應，將以上製備的具有氨基的化合物衍生化。有機合成領域的技術人員熟悉這些加成反應的操作條件，通常涉及優選在溶液中，0℃至室溫下，將親電體加成到親核試劑上。可能需要加入鹼。應該指出，這些反應的產物還可在嘧啶酮的氮(N5)上與某些親電體反應。與需要的苯胺基或脂族基團相比，所得官能團(醯胺、氨基甲酸酯等)對鹼性水解的穩定性較差，可被解離恢復為N5上具有H的嘧啶酮。
使具有胺基的化合物與試劑例如滷代醯滷、α，β-不飽和醯滷，或滷代磺醯滷反應，得到中間體，該中間體可與親核試劑例如伯或仲胺、二胺、醇鹽、氨基醇或硫醇反應。
可通過活化和與親核試劑包括但不限於胺和醇反應，分別得到醯胺和酯，將以上製備的具有羧基的化合物衍生化。已經對胺和羧酸與碳二亞胺的偶合反應作了綜述(Klausnew和Bodansky，Synthesis1972，453-463)，本領域技術人員可認識到實現該反應可有多種其它試劑和可能對掩蔽活性官能團的保護基團有需要(Green and Wuts，″Protective Groups in Organic Synthesis″第二版，John Wiley Sons，1991)。上述為用酸製備酯的描述。可用合適的氫化物還原劑將這些醯胺和酯還原為胺和醇。
可優選在鹼的存在下，通過用光氣或光氣等同物活化，轉化為親電性物質(TetrahedronAsymmetry 1995，61，745；J.Org.Chem.1994，59，1937)，然後與親核試劑包括但不限於胺、醇和磺醯胺反應，分別得到脲、氨基甲酸酯和磺醯脲，將以上製備的具有氨基的化合物衍生化。有機合成領域的技術人員熟悉這些反應的操作條件和與處理光氣和光氣等同物有關的危險，因此應採取所有適當的防護措施。
製備本發明化合物可能需要的其它轉化包括還原酮、醛、酯、酸、醯胺或使用鋁和氫硼化物試劑的還原氨基化(J.Seyden-Penne，「Reductions by the Alumino and Borohydrides in OrganicSynthesis」VCH Publishers，Inc.，1991)和氧化以下基團，包括但不限於醇、醛、烯、硫醚、亞碸和雜芳基(Milos Hudlicky，″Oxidationsin Organic Chemistry″American Chemical Society，1990)。
可通過催化氫化或通過溶解金屬還原完成還原官能團例如烯、炔、氮、硝基或氰基。可通過用親核試劑包括但不限於CN-、胺、醇鹽、硫醇或負碳離子置換，完成進一步製備含與本發明化合物親電結合部位的中間體。本發明其它化合物還可通過用合適的硼酸或錫烷偶合芳基滷或三氟甲磺酸酯製備(Stille，J.K.，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1986，25，508；Suzuki，A.Pure Appl.Chem.1985，57，1749)。通過與親核試劑反應，得到仲醇，可將以上製備的具有羰基的化合物進一步衍生化。此類親核試劑包括但不限于格氏試劑(Grignardreagent)、烷基鋰、烯基鋰和炔基鋰試劑，以及烯丙基錫烷、矽烷等。還可通過重排例如Beckmann(Gawley，Org.React.1988，35，1)或其它重排進一步製備按上述製備的化合物。
以上製備的化合物還可通過直接金屬化製備有機鎂或有機鋰物質完成製備(Beak和Meyers，Acc.Chem.Res.1986，19，356-363；Beak和Snieckus，Acc.Chem.Res.1982，15，306-312；Katritzky，Lam和Sengupta，Prog Heterocycl.Chem.1989，11，1-29)或通過鋰-滷素交換用芳基滷完成製備(Parham和Bradsher，Acc.Chem.Res.1982，15，300-305)。
在流程1中提供製備本文中公開的式II、IIa化合物和某些其它化合物的方法，並可用於製備本發明化合物。取代基Z、R5、R6和R7代表式II中描述的取代基，或代表用標準有機轉化方法可轉化為那些取代基的取代基。P代表合適的保護基團。保護基團的實例包括羧酸酯、醇的甲矽烷基醚、醛的縮醛和酮的縮酮。已有對保護基團化學領域的綜述(Greene，T.W.；Wuts，P.G.M.Protective Groups in OrganicSynthesis，第2版；WileyNew York，1991)。用催化氫化將硝基鄰苯二甲酸二甲酯的硝基還原為胺。用乙酸酐和吡啶鹼將該苯胺醯化。在提高溫度下，合適的溶劑中，用強鹼處理得到的乙醯胺2和苯乙酮的混合物，得到需要的三酮3。本領域技術人員已知如Kilgore等，Industrial and Engineering Chemistry 34494-497，1946中所述製備三酮的其它方法。在提高溫度下，合適的溶劑中，用肼處理該三酮，得到茚並[1，2-c]吡唑啉酮環系統。
本領域技術人員已知如Lemke等，J.Heterocyclic Chem.191335-1340，1982；Mosher和Soeder，J.Heterocyclic Chem.8855-59，1971；Hrnciar和Svanygova，Collect.Czech.Chem.Commun.592734-40，1994中所述製備茚並[1，2-c]吡唑啉酮的其它方法。通過在合適的溶劑中，用強酸加熱，使醯胺去醯基化，得到苯胺4。該苯胺在標準條件下、合適的溶劑中，用醯氯醯化，得到需要的產物5。
流程1 製備本發明化合物的另一種方法見流程2。用本領域技術人員已知的方法，可用強酸使三酮3中間體脫醯基化，再用合適的醯氯醯化。隨後用前述流程1中相同條件，可將三酮6轉化為茚並[1，2-c]吡唑啉酮環系統。
流程2 製備流程2中三酮6的另一種方法按Rotberg和Oshkaya，Zh.Organ.Khim.884-87，1972；Zh.Organ.Khim.92548 2550，1973中所述，用1，3-二酮6a與3-硝基鄰苯二甲酸酐縮合。當無市售時，本領域技術人員可通過將必需的甲基酮乙醯化或三氟乙醯化，容易地製備1，3-二酮。可用多種方法包括催化氫化、在酸性條件下用鋅或鐵處理、或用其它還原劑例如連二亞硫酸鈉或氯化亞錫處理，完成使得到的硝基衍生物還原為苯胺6b。隨後可通過醯化，然後按前述流程2用肼處理，使苯胺6c轉化為本發明的茚並[1，2-c]吡唑啉酮。
製備茚並[1，2-c]吡唑啉酮環系統的另一種方法見流程3。不加溶劑，使二甲基肼與3-乙醯基吡啶反應，得到腙7。按流程1中所述類似方式處理該產物，得到需要的中間體8。
流程3 或者，可用活化的醯化N-氨基嗎啉或哌嗪環例如氨基甲酸硝基苯基酯處理6b。本領域技術人員已知按Rappoport，J.Org.Chem.492948-2953，1984中所述製備類似中間體的其它方法。通過與流程1中所述類似方式的順序處理該中間體。
儘管前述流程描述了其中W為氧的通用合成路線，按照該通用路線內容，本領域技術人員能夠預想和實施合成其中W不為氧的本發明其它化合物。例如，其中W選自S、S(O2)、C(＝O)、C(＝S)、CH2和NR」。
在隨後描述示例性實施方案的過程中，本發明的其它特徵將顯而易見，提供這些示例性實施方案為舉例說明本發明，本發明不受其限定。
v.實施例表A、B和C的化合物可如PCT申請WO 03/033499和/或WO04/092139所示來合成，其教導引入本文以供參考。
測定方案和結果通過一種或多種測定包括以下更詳細描述的那些測定方法證明本發明化合物的生物活性和效用測定1.用碘化丙錠和BrdU測定本發明化合物對細胞周期進程的抑制(結果見圖1和表2)。
測定2.暴露於本發明化合物的NCI系列(panel)代表的源自各種人腫瘤的寬範圍的60種細胞系生存力下降(結果見表3)。
測定3.在產克隆細胞存活測定中，本發明化合物對細胞的不可逆作用(結果見表3、圖2和圖3)。
測定4.用鈣黃綠素(Calcein)AM測定評估暴露於本發明化合物的HCT-116和IMR90細胞生存力下降(結果見表3和6)。
測定5.暴露於本發明化合物的停滯腫瘤細胞的生存力受抑制，而停滯正常細胞則不受抑制(結果見表4和圖4)。
測定6.本發明化合物在某些激酶生物化學測定中的抑制活性(結果見表5和6)。
測定7.化合物在異種移植腫瘤模型中的活性(結果見圖5、6、7和8)。
測定8.化合物與某些靶蛋白的親和力(結果見圖9)。
測定9.本發明化合物的抗病毒活性(結果見表7)。
測定1用碘化丙錠和BrdU分析細胞周期在細胞周期的G1、S和G2/M期細胞百分率通過用碘化丙錠給DNA染色來測定，並通過流式細胞儀用2N或4N DNA補體定量測定細胞數。用該方法評價對應於暴露於Cdk抑制劑的細胞周期的細胞分布改變。
碘化丙錠細胞染色法在按照下表1的T-25燒瓶中，在測試化合物的存在下，培養3批HCT-116細胞(100,000細胞/批)。在24、48和72小時進行分析。通過胰酶消化收集粘壁細胞，在Falcon 12×75流式細胞管中與飄浮細胞合併，通過離心收穫。傾去細胞沉澱中的培養基，加入100μl PI染色劑，將細胞在37℃溫育20-25分鐘。優選細胞計數不超過2×106-4×106/ml。然後將等體積(100μl)PI鹽加入細胞中，然後將其在4℃下溫育1-2小時。上Becton Dickinson FACScan流式細胞儀分析染色細胞。樣品避光。圖1表明當暴露於化合物A37時，細胞凋亡和核內再複製證明細胞末期停滯在G1和G2期。發現本發明的某些其它化合物包括化合物B16出現類似結果。
測定結合DNA的BrdU該方法測量當細胞經過細胞周期S期發展時，結合新合成DNA的核苷酸類似物BrdU的細胞百分比。用抑制BrdU結合來測量Cdk抑制劑對S期發展和DNA複製的影響。
BrdU標記的方法在T25瓶中接種3批HCT-116細胞(100,000細胞/批)，使其與以上測試化合物一起溫育。在24、48和72小時進行分析。將BrdU加入到各個T-25瓶中，儲備液自10mg/ml至10μM終濃度，在37℃下，再將細胞溫育16-18小時。然後按製造商的方案(BrdU Flow kit，BD-Pharmingen目錄編號2354KK)如下製備用於流式細胞儀分析的細胞從T25瓶中收穫(粘壁和飄浮)細胞，然後同上直接加入Falcon 12×75流式細胞管，隨後加入100μl Cytofix/Cytoperm緩衝液固定、透化(30分鐘，室溫)。然後用1ml Perm洗滌緩衝液洗滌細胞，將細胞沉澱再懸浮於100μl Cytoperm Plus緩衝液，在冰上溫育10分鐘。然後細胞再用1ml Perm洗滌緩衝液洗滌，在室溫下，在100μlCytofix/Cyto Perm緩衝液中重複固化10分鐘。然後細胞用1ml Perm洗滌緩衝液洗滌。下一步，用100μl DNA酶在37℃下處理細胞1小時以暴露結合的BrdU，隨後用1ml Perm洗滌緩衝液進行再一次洗滌步驟。用α-BrdU-FITC抗體(50μl 1∶50的抗體Perm洗滌緩衝液稀釋液)證明存在結合的BrdU。細胞避光，在室溫下溫育20-30分鐘。溫育後，用1ml Perm洗滌緩衝液洗滌細胞，再懸浮於300μl 2％FBS的PBS溶液中，上流式細胞儀分析。結果在表2中以抑制50％BrdU結合的化合物濃度(μM)列出。
測定2評價Cdk抑制劑對NCI系列人腫瘤細胞系的抑制在國立癌症研究院用60種細胞系系列對化合物進行的評價提供了大量在有關多種腫瘤種類和遺傳背景中效能的信息。該系列中包括源自白血病、黑色素瘤、肺癌、結腸癌、腦癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌和腎癌的細胞系。該系列的用途是提供測量化合物在許多與腫瘤轉化有關的基因中發生交替的細胞中的效能，這些基因包括p53、Her2/Neu以及涉及代謝的那些基因和導致多種耐藥性的那些基因。可用採用下述方案得到的這些細胞系的數據評價化合物的活性。
NCI系列測定的結果在表3中列出(NCI系列)，用兩種可提供數據的度量代表(a)將IC50(μM)小於10nM除外，計算全細胞系列平均-曲線中位值(Mean-Graph Mid-point)-平均IC50，該評價中等於10nM；(b)化合物抑制阿黴素抗性細胞系(ADR-res)的活性IC50(μM)。
本發明其它化合物在NCI測定中表現出以下活性(i)化合物A37平均-曲線中位值＜50nM和抑制ADR-res細胞生長的IC50＜100μM；(ii)化合物B16平均-曲線中位值＜50nM和抑制ADR-res細胞生長的IC50＜10μM。
體外癌篩選方法使細胞在RPMI-1640 10％FCS中生長，在96孔微量滴定板上接種，接種密度為5,000至40,000細胞/孔。在37℃、5％CO2下，將板溫育24小時。製備含兩倍需要終濃度的化合物(跨越4個數量級(log)的5個劑量)的培養基，向盛有100μl培養基和細胞的各孔中加入100μl，得到需要的終濃度。然後再將各板溫育48小時。
用測量總蛋白的磺基羅丹明(Sulforhodamine)B(SRB)試驗測定化合物對細胞生存力的影響。用冷TCA固定細胞至終濃度10％，在4℃下，溫育60分鐘。棄去上清液，各板用水洗滌5次，晾乾。向各孔中加入4％(w/v)SRB/1％乙酸溶液，在室溫下將各板溫育10分鐘。各板用1％乙酸洗滌5次，晾乾。用10mM trizma鹼溶解結合的染料，在板讀出器上、515nM處讀取吸收值。
測定3使用HCT-116細胞進行產克隆細胞存活測定的方案用該測定方法測定暴露一定時間後導致存活力不可逆損失的化合物濃度。通常，將細胞暴露於化合物1、2或5天，然後轉移至無化合物的生長培養基中。在無化合物的培養基中連續溫育多日後，統計回收的集落數，估算存活細胞數。
這種對本發明各種化合物的存活測定結果在表3(產克隆)中以抑制50％集落恢復的化合物濃度(IC50)(μM)列出。圖2表示化合物A37對HCT-116細胞的細胞活性不可逆抑制和這種抑制的時程關係，暴露於化合物24小時，其IC50＜50nM。在相同測定中，化合物B16顯示其IC50＜100nM，而在30至60min內，IC50達到100nM(圖3)。
測量暴露於化合物後細胞存活的方法將培養基(RPMI-1640、10％FCS、青黴素/鏈黴素)在水浴中預熱至37℃。在37℃、5％CO2下，溫育細胞並使其生長。通過胰酶消化回收分會合板中的細胞，用血細胞計數器計數。在15cm組織培養皿、25ml培養基中，接種1×104個細胞。每種測試化合物設置14個板，在37℃下溫育過夜。用培養基將化合物稀釋成7個濃度，用含測試化合物的培養基替換細胞中的培養基。每個濃度的待測化合物設置兩個板和兩個無化合物的對照板。同上將板溫育24、48或74小時，除去培養基，用新鮮培養基代替，再將板溫育7天，用PBS洗滌。集落用結晶紫溶液(0.4％結晶紫，20％乙醇)染色5分鐘，用蒸餾水洗滌兩次，計數。
測定4不存在血清蛋白和血清蛋白存在下，用鈣黃綠素AM生存力測定評價Cdk抑制劑用鈣黃綠素AM測定(分子探針)確定由細胞生存力損失測量的Cdk抑制劑的效力。鈣黃綠素AM是胞內酯酶的底物，它只在活細胞中分裂，產生可用螢光板讀出定量的螢光產物。該螢光信號與活細胞數成比例，因此對應暴露於Cdk抑制劑的細胞信號損失與生存力損失相關。該測定可從生存力損失中區分細胞周期停滯，其中細胞可能仍是活的，因此非常適合評價Cdk抑制劑。在這種測定中，有效細胞毒化合物可導致細胞生存力的顯著損失。
在人結腸直腸癌細胞系、HCT-116、正常人成纖維細胞、IMR90中測定細胞IC50。蛋白質調節的IC50也在HCT-116中測定。
這種生存力測定的結果在表3中列出(HCT-116(生存力/蛋白質調節的)和IMR-90)。本發明其它化合物對HCT-116細胞生存力IC50(μM，非蛋白質調節的)的測定見表6。
對其它細胞系類似細胞生存力測定同上。發現本發明其它化合物的IC50(μM)為(i)化合物A37HCT-116(＜50nM)，HCT-116蛋白質調節的(＜500nM)，A2780(＜10nM)，IMR90(＜50nM)；(ii)化合物B16HCT-116(＜10nM)，HCT-116蛋白質調節的(＜500nM)，A2780(＜10nM)，IMR90(＜100nM)。鈣黃綠素AM生存力測定方案。
通過胰酶消化回收分會合板中的HCT-116或IMR90細胞，將1,000或4,000個細胞分別接種在24孔皿中，在37℃、5％CO2下溫育過夜。在RPMI-1640、10％FCS中培養HCT-116細胞，而在α-極限必需培養基、10％FCS中培養IMR90細胞。過夜溫育使粘附後，吸出各孔中的培養基，加入含0至250nM濃度、總共跨越7個劑量的測試化合物的培養基。將板再次放入培養箱，再培養72小時(3日)。測定蛋白質調節的IC50所用培養基是RPMI-1640、10％FCS加1mg/ml酸性α-糖蛋白(Sigma G-9885)和45mg/ml人血清白蛋白(SigmaA3782)。與測試化合物一起溫育72小時後，細胞用1×PBS洗滌兩次，要特別注意除去所有剩餘緩衝液。
將50μg鈣黃綠素等份試樣(分子探針目錄編號C3100)溶於50μl DMSO製備5μM鈣黃綠素AM溶液。鈣黃綠素完全溶解後(室溫下10分鐘)，將其稀釋到10ml PBS。將鈣黃綠素/PBS(0.5ml)加入各孔。在37℃下(避光)，將板溫育75分鐘，在螢光板讀出計上讀取螢光信號(激發485/20，發射530/25)。
測定5停滯細胞測定需要依賴細胞周期蛋白的激酶(Cdk)活性促進細胞通過細胞分裂周期不同期的進程。在培養基中，正常非轉化細胞增殖需要生長因子的存在，通過除去血清除去它，導致Cdk活性喪失，結果當細胞進入靜止期G0時，退出細胞周期。因此，根據機械論觀點但不受理論束縛，與其轉化的對應細胞相比，Cdk抑制劑在停滯正常細胞中的效力應顯著降低。
用本發明某些化合物在停滯正常細胞(IMR90)和停滯腫瘤細胞(HT-116)上進行的生存力測定結果在下表4中列出。圖4表示化合物A37對停滯正常細胞(IMR90)和腫瘤細胞(HT-116)生存力的抑制活性增加。發現化合物A37對停滯HCT-116細胞的IC50＜50nM，而對停滯IMR90細胞的IC50＞10μM。化合物B16證實對停滯HCT-116細胞的IC50＜50nM，而對停滯IMR90細胞的IC50＞10μM。
通過血清飢餓停滯HCT-116和IMR90細胞來評價化合物效力對於每一待測化合物濃度，將HCT-116細胞一式三份，在含10％胎牛血清的RPMI 1640培養基、24孔皿中接種，接種密度為200或2,000個細胞/孔，在37℃、5％CO2下溫育過夜。除去含2,000細胞/孔板中的培養基，細胞用無血清培養基洗滌一次，將1ml無血清培養基加入細胞中。將含血清存在下的細胞和不存在血清的細胞的板再溫育6天。
對於待測的每一化合物濃度，將IMR90細胞一式三份，在含10％胎牛血清的MEM-α培養基、24孔皿中接種，接種密度為2,000或20,000個細胞/孔，在37℃、5％CO2下溫育過夜。除去20,000個細胞/孔皿的培養基，細胞用無血清培養基洗滌一次，將無血清培養基加入細胞中。將含血清存在下的細胞和不存在血清的細胞的板再溫育3天。
通過血清飢餓評價HCT-116和IMR90細胞的細胞周期停滯為確保除去血清後細胞確實脫離細胞周期，在各實驗中測定代表通過S期的那些進程的BrdU陽性細胞的百分率。對於該實驗，用只在活細胞中有活性的胞內酯酶的螢光底物SNARF-1同時評價細胞生存力。通過流式細胞儀對BrdU結合和SNARF-1分裂一起評價，在單細胞基礎上，提供對停滯細胞生存力的評價。為進行該分析，用SNARF-1使細胞染色如下，然後準備上述BrdU結合測定。
將HCT-116和IMR90細胞按下述密度接種在T25瓶的含血清培養基(分別為具有10％FCS的RPMI-1640或MEM-α)中。生長24小時後，除去培養基，洗滌細胞後，加入無血清培養基。
HCT-116+FCS 5,000個細胞HCT-116-FCS 100,000個細胞IMR90+FCS 100,000個細胞IMR90-FCS 200,000個細胞使IMR90細胞再生長3天，使HCT-116細胞再生長6天，然後用BrdU脈衝處理。在室溫下，將50μg SNARF-1(分子探針目錄編號C1272)等份試樣溶於50μl DMSO，保持10分鐘，然後稀釋到10mlPBS。將SNARF-1進一步稀釋為1∶64,000，然後向各細胞管中加入200μl，管中細胞已在血清存在下或無血清培養，並用BrdU脈衝處理20小時。將細胞在37℃下溫育30分鐘，然後用3ml PBS洗滌。
然後固定這些細胞，準備按上述測量BrdU結合。在FACScan流式細胞儀上測定活(FL-2)和BrdU陽性(FL-1)細胞百分率。
評價暴露於本發明化合物後停滯HCT-116和IMR90細胞的生存力在化合物的存在、37℃5％CO2下，將細胞溫育72小時(3天)如下，測定化合物對周期和停滯細胞的效力。將周期和停滯HCT-116細胞以及周期IMR90細胞暴露於5至250nM範圍中的6個劑量系列。對於停滯正常細胞，劑量範圍增加至50nM至25μM，補償預期的活性減少。
用鈣黃綠素AM測定評價暴露於化合物72小時對細胞生存力的影響。鈣黃綠素AM是只在活細胞中有活性的胞內酯酶的螢光底物。因此該底物分裂提供測量與細胞數成比例的生存力。
通過將50μg等份試樣(分子探針目錄編號C3100)溶於50μlDMSO製備鈣黃綠素AM儲備液。在室溫下，將該管溫育約10分鐘，確保鈣黃綠素完全溶解。將鈣黃綠素稀釋到10ml PBS中，製備終溶液，該溶液要避光。
將細胞中的培養基吸出，然後用1ml PBS洗滌細胞兩次，通過吸出徹底除去細胞中的PBS。用移液管將0.5ml鈣黃綠素/PBS溶液移入各孔中。將板在37℃下溫育75分鐘(避光)，在螢光板讀出(激發485/20，發射530/25)上讀數。
測定6生化激酶抑制測定酶Cdc2/細胞周期蛋白B購自市場。Cdk2/his-細胞周期蛋白E短期用Sf9細胞表達。Cdk2/細胞周期蛋白A、cdk4/細胞周期蛋白D1和cdk6/細胞周期蛋白D2，用Sf9細胞表達。蛋白激酶A(催化亞單位，來自牛心)和蛋白激酶C(大鼠腦的混合同工酶)，購自市場。
底物組蛋白H1購自市場。GST-Rb是與Rb蛋白379-928殘基N末端稠合的穀胱苷肽S-轉移酶。
測定通過用TCA沉澱測定測量結合組蛋白H1的[γ-32P]三磷酸腺苷放射性來測定Cdc2/細胞周期蛋白B活性。Cdc2/細胞周期蛋白B激酶和組蛋白H1購自市場。終測定液含50mM Tris.HCl、10mMMgCl2、1mM二硫蘇糖醇、50μM三磷酸腺苷、2μCi32P、10％二甲亞碸(來自化合物)、pH 7.5、20μg組蛋白H1、6U酶，50μL體積。加入1nM至10μM各濃度的化合物。加入酶，開始反應，在30℃下進行20min，然後加入20μL反應終止液(237mM乙二胺四乙酸二鈉、105mM三磷酸腺苷，pH 8.0)終止反應。加入35μL 70％(w/v)三氯乙酸沉澱蛋白，在96孔玻璃纖維濾板(Millipore，Inc.)上捕獲沉澱，用25％(w/v)三氯乙酸將其潤溼。濾器用25％(w/v)三氯乙酸洗滌10次，加入100μl閃爍體(Microscint 20，PackardInstruments)後，用閃爍計數測定結合32P的量。通過用化合物存在下結合放射性的量除以對照實驗中只含DMSO不含化合物下結合放射性的量來測定相對活性。計算前，所有結果減去在含50mM EDTA不含化合物實驗中測得的背景放射性。將數據代入標準方程測定化合物50％抑制濃度(IC50)P＝min+(max-min)(1/(1+(IC50/[I])s))(1)其中P＝1-相對活性為相對抑制，[I]是化合物濃度，max和min分別是最大和最小相對抑制(1和0)，s是所稱的Hill斜率。
用穀胱苷肽瓊脂糖捕獲試驗測定Cdk2/細胞周期蛋白E、Cdk2/細胞周期蛋白A、Cdk4/細胞周期蛋白D1和Cdk6/細胞周期蛋白D2活性。在Sf9昆蟲細胞中表達酶，為異二聚體，底物(GST-Rb)是與在大腸桿菌(E.coli)中表達的Rb成視網膜細胞瘤蛋白379-928殘基稠合的穀胱苷肽-S-轉移酶。該測定液含50mM Tris.HCl、10mMMgCl2、1mM二硫蘇糖醇、50μM三磷酸腺苷、2μCi[γ-33P]三磷酸腺苷、10％二甲亞碸(來自化合物)、pH 7.5、40μg GST-Rb和酶，100μL體積。加入1nM至10μM各濃度的化合物。使反應在30℃下進行15min，然後加入70μL反應終止液(237mM乙二胺四乙酸二鈉、105mM三磷酸腺苷，pH 8.0)終止反應。通過使其與穀胱苷肽瓊脂糖珠(Amersham)結合110min，捕獲GST-Rb，懸浮液通過玻璃纖維濾器過濾。用含0.3％(w/v)吐溫-20的磷酸鹽緩衝鹽水洗滌被截留的珠5次，加入100μl閃爍體後，用閃爍計數測定結合33P的量。通過用化合物存在下結合放射性的量除以對照實驗中只含DMSO不含化合物下結合放射性的量來測定相對活性。計算前，所有結果減去在含50mM乙二胺四乙酸二鈉不含化合物實驗中測得的背景放射性。通過將數據代入方程(1)測得化合物的50％抑制濃度(IC50)。
用以組蛋白H1為底物的TCA沉澱試驗測定蛋白激酶C和蛋白激酶A。對於蛋白激酶A，終測定液含50mM Tris、10mM MgCl2、1mM二硫蘇糖醇、pH 7.5、12μM三磷酸腺苷、10％(v/v)二甲亞碸(來自化合物)、20μg組蛋白H1、2μCi[γ-32P]三磷酸腺苷、0.2U蛋白激酶A，100μl測定液。蛋白激酶C測定液含50mM Tris、10mMMgCl2、1mM二硫蘇糖醇、0.8mM CaCl2、pH 7.5、5μM三磷酸腺苷、10％(v/v)二甲亞碸(來自化合物)、20μg組蛋白H1、2μCi[γ-32P]三磷酸腺苷、0.01U蛋白激酶C，50μl測定液。加入酶，開始測定，在30℃下使反應進行10min，然後加入0.4體積237mM乙二胺四乙酸二鈉、105mM三磷酸腺苷、pH 8.0終止反應。加入0.5體積75％(w/v)三氯乙酸，從終止反應中沉澱蛋白，通過96孔玻璃纖維過濾裝置(Millipore)過濾捕獲。濾器用25％(w/v)三氯乙酸洗滌10次，加入100μl閃爍體，用閃爍計數測定結合的[32P]磷酸酯的量。通過將數據代入方程(1)測得化合物的50％抑制濃度(IC50)。
以上測定結果在表5和表6列出。
測定7異種移植腫瘤模型藥物。合成本發明化合物，用生物相容載體配製以用於靜脈給藥。獲取CPT-11(Camptosar，Pharmacia)藥物，用5％葡萄糖-水(D5W)製備。所有製劑均為每周新制，將注射體積調整到體重(0.2ml/20g小鼠)。
小鼠/飼養。將得自Charles River的雌性nu/nu小鼠在安靜微隔離籠中飼養，提供自由進水和經輻射的標準齧齒動物飼料(PurinaPico-Lab Rodent Diet 20)。
測定最大耐受劑量(MTD)。將8周齡小鼠配對，按5-8隻動物為一組編組，用未知測試化合物進行初步毒性研究。動物用測試化合物每日靜脈注射處理，連續10日，每周稱重兩次。經常檢查任何藥物相關不良反應所致小鼠的臨床體徵。抗癌藥物在小鼠中的可接受毒性由NCI定義為平均組重量減少不超過20％，和經處理動物的毒性死亡率不超過10％。
標準方案。將單個1mm3腫瘤片斷(腫瘤brie)s.c.植入無胸腺裸小鼠(6-7周齡雄或雌性)體內，或將5-10×106組織培養來源的細胞植入協腹。開始時每周監測動物腫瘤生長兩次，然後當植入物接近約100mm3預定體積時，每天監測。當腫瘤生長至計算重量62-221mg時，將動物配對，編成合適的實驗治療組(8-10隻動物/組)，開始用測試化合物治療。陽性對照組按過去對照組給藥。計算腫瘤重量，每周兩次稱量體重，經常觀察動物出現的不良藥物反應。方案要求腫瘤質量達到1000mg的任何動物立即安樂死亡。
通過數字式卡尺測定腫瘤的長度和寬度以測量腫瘤。腫瘤重量用下式估計腫瘤重量(mg)＝(w2xl)/2其中w＝腫瘤寬度，l＝腫瘤長度，以mm計。這些值也可用體積單位(mm3)表示。
實驗性治療可導致腫瘤部分消退(PR)或完全消退(CR)。PR是其中在研究期間連續三天腫瘤大小是初始(第1天)大小的50％或小於初始大小但大於0.0mg，而當連續三天無可測量的腫瘤實質時，出現CR。治癒定義為其腫瘤縮小至0mg，並保持該狀態直至實驗結束的動物。
細胞殺死對數(Log cell kill)(LCK)是決定初始治療後被殺死腫瘤細胞百分率的計算結果，可用作定量測量效能
Log細胞殺死(LCK)＝(T-C)/(3.32)(Td)其中T＝治療組小鼠大小達到1000mg所需平均時間，C＝對照組腫瘤大小達到1000mg的平均時間，Td＝在指數生長期，用對照組腫瘤半對數生長曲線的線性回歸分析估計的腫瘤達兩倍的時間，3.32＝群體增加1-log10單位所需加倍數。每個LCK單位代表細胞殺死1-log10單位(例如1LCK＝90％殺死，2LCK＝99％殺死等)。我們認為當化合物的LCK值＞1時，相當於＞90％腫瘤細胞殺死，它們有顯著活性。
腫瘤生長抑制(TGI)是描述在一定時間內，化合物治療抑制腫瘤生長量的計算結果。它表示為％TGI＝100(1-T/C)其中T是在指定天，化合物治療組的平均腫瘤大小，而C是同一天載體對照組的平均腫瘤大小。
中毒死亡定義為化合物治療而非疾病狀態導致的死亡。如果最終化合物治療後腫瘤大小未達到1000mg，動物在1周內死亡，可認為毒性所致死亡。有在該點之後的非腫瘤有關的死亡記錄，但不認為是毒性死亡。
按以下慣例定義腫瘤消退如果腫瘤重量減輕至＜初始重量50％(＜50mg)，消退定義為部分(PR)。如果在實驗期間，腫瘤重量減少至小於可測量的重量，消退定義為完全(CR)。治癒定義為在觀察期結束時無腫瘤的動物。
結果圖6表示本發明的幾個化合物在HCT116異種移植腫瘤模型中獲得的結果。圖6表示化合物A37在A2780異種移植腫瘤模型中獲得的結果。圖7表示化合物A37在PC3異種移植腫瘤模型中獲得的結果。圖8表示化合物B16在A2780異種移植腫瘤模型中獲得的結果。
測定8測量靶分子和化合物之間的親和力為證實用於本文中提出用途的特定化合物的適用性，表徵這種化合物與其已知結合配偶體(如有)的結合性質可能有用。但這不應視為限定本發明範圍。
可測定化合物與它們相應的結合配偶體的親和力，例如用BIACORETM測定系統(Biacore AB，Uppsala，SE)。產生相似定量結果的其它系統例如Affinity Sensors(Cambridge，UK)開發的那些系統對本領域技術人員而言是顯而易見的。
在一個代表性方法中，分析化合物R與其已知結合配偶體CDK2/細胞周期蛋白E的結合。該分析在22℃下、BIACORE 2000 SPR-Biosensor上、含20mM HEPES(pH 7.4)、150mM NaCl、1mM DTT和0.005％吐溫20(蛋白質級，Calbiochem)的電泳緩衝液中進行。將10μM化合物R溶液在pH 8.0，通過醯胺偶聯化學與CM5傳感蛋白晶片(研究級)的葡聚糖表面偶聯。為表徵化合物R與蛋白質例如CDK2/細胞周期蛋白E的結合，將純化蛋白組分在電泳緩衝液中稀釋，得到9個不同蛋白濃度，然後使各濃度相繼通過該傳感蛋白表面，每個濃度的通過時間為5min，隨後按相同流動速度使電泳緩衝液在5min內通過該表面。在30μl/min流速下，測量在CM5-化合物R-加載晶片上的CDK2/細胞周期蛋白E複合物的締合和解離。每次實驗後，在下一個樣品載樣前，通過兩次連續注射3M鹽酸 (20秒，30μl/min)使晶片再生。
數據用Bioevaluation軟體3.1版(Biacore AB，Uppsala，SE)分析。將曲線歸一化至注射開始，和用對照表面得到的背景。分別測定締合和解離速度，或全部使用Langmuir 1∶l結合模型。用以下方程計算親和力(KD)KD＝k解離/k締合可用其它靶蛋白例如Cdk9、Cdk4等按以上方法進行類似操作。例如，Cdk9的抑制劑可有效治療或預防HIV和/或AIDS。
圖9表示由CDK2/細胞周期蛋白E與CM5-化合物R-加載晶片結合得到的結果實例。用這些數據計算的KD等於8,0+/-2,8nM。
測定9抗病毒活性在用低代(low passage)、臨床上分離的HIV-1ROJO感染的外周血單核細胞(PBMCs)中測量這些化合物對急性感染細胞的效能，評價本發明某些化合物的活性。使用這些正常人細胞可估計這些化合物的治療指數。將兩個供體的新鮮PBMCs合併，用PHA-P刺激48-72小時。然後在IL-2存在下培養細胞，通過致有絲分裂的信號引發來維持細胞分裂。按0.1的感染複數加入病毒。感染後，將細胞培養7天，然後評價效能。通過上清液中的逆轉錄酶活性水平測量病毒複製，細胞毒性用MTS試驗測定。兩次測定這些化合物抗HIV效能和細胞毒性的結果在表7中列出。
本文中引用的所有參考文獻、專利和出版物通過引用整體結合到本文。
表1.
用於測定1的化合物濃度範圍。
表2.
本發明某些化合物在上述BrdU結合測定中的結果。
表3本發明某些化合物在下列上述體外細胞活性測定中的結果用HCT-116細胞進行生存力和產克隆細胞存活測定，用IMR90細胞進行生存力測定，和兩個抗NCI細胞系列活性的測量(抗阿黴素抗性細胞系的「平均-曲線MID值」和IC50)。
表4.
本發明某些化合物在上述停滯細胞測定中的結果(IC50，nM)。
表5.
本發明某些化合物在上述生化抑制測定中的結果(IC50，μM)
表6.
其它化合物在上述生化抑制和HCT-116生存力測定(非蛋白質調節)中的結果。
表7本發明某些化合物抗病毒活性結果。IC50通過上清液中逆轉錄酶水平測量的50％病毒複製抑制；TC5050％細胞毒性(MTS)；TITC50/IC50。
表A





表B


















表C
表D從下表中可能的特徵選擇適當特徵產生的本發明其它化合物。例如從以下選擇中產生化合物A77無-嗎啉代-芳基-OCH2(CO)-哌嗪-CH3。
表E從下表中可能的特徵選擇適當特徵產生的本發明其它化合物。例如從以下選擇中產生化合物B3無-嗎啉代-芳基-CH2-哌嗪-CH2CH2OH。
權利要求
1.具有式I結構的化合物或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物和/或立體異構體 其中R8代表取代或未取代的雜環；F代表(CH2)n，其中n是1-6的整數；且Q代表取代或未取代的仲氨基取代基、取代或未取代的叔氨基取代基或取代或未取代的含氮雜環；條件是不包括下列化合物 A82。
2.權利要求1的化合物，其中n是1。
3.權利要求1或2的化合物，其中R8代表嗎啉代或哌嗪環。
4.權利要求1-3任一項的化合物，其中Q代表取代或未取代的吡咯烷、取代或未取代的哌嗪或取代或未取代的哌啶。
5.權利要求1的化合物，其中所述化合物選自
6.權利要求1-4任一項的化合物，其中Q代表取代的仲氨基取代基、取代的叔氨基取代基或取代的含氮雜環。
7.權利要求6的化合物，其中一個或多個取代基在每次出現時獨立地選自烷基、氧代基、醯基氨基、羥基、羰基、磺醯基、酯、醯胺、NR」、羥基烷基、烷氧基烷基、芳基、雜環基、環烷基或低聚(乙二醇)。
8.權利要求1-4任一項的化合物，其中R8具有以下結構 其中Z代表O或NR」，且R」代表H或低級烷基。
9.具有以下結構的化合物或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體
10.具有以下結構的化合物或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體
11.具有以下結構的純化或合成的化合物或其異構體、前藥、互變異構體、藥學上可接受的鹽、N-氧化物或立體異構體
12.藥用組合物，所述組合物包含藥學上可接受的賦形劑和權利要求1-11任一項的化合物。
13.治療過度增殖性病症的方法，所述方法包括給予動物權利要求1-11任一項的化合物。
14.抑制細胞增殖的方法，所述方法包括使所述細胞與權利要求1-11任一項的化合物接觸。
15.治療病毒感染的方法，所述方法包括給予哺乳動物權利要求1-11任一項的化合物。
16.權利要求15的方法，其中所述病毒感染由人免疫缺陷病毒(HIV)引起。
17.治療或預防化學療法或放射療法引起的脫髮的方法，所述方法包括聯合給予哺乳動物權利要求1-11任一項的化合物和一種或多種化學療法或放射療法。
18.治療過度增殖性病症的方法，所述方法包括給予動物權利要求11的化合物。
19.抑制細胞增殖的方法，所述方法包括使所述細胞與權利要求11的化合物接觸。
20.治療病毒感染的方法，所述方法包括給予哺乳動物權利要求11的化合物或包含治療有效量的所述化合物的組合物。
21.權利要求20的方法，其中所述病毒感染由人免疫缺陷病毒(HIV)引起。
22.權利要求1-11任一項的化合物在製備藥物中的用途。
23.權利要求22的應用，其中所述藥物是用於治療或預防選自過度增殖性病症、病毒感染、化療誘導的脫髮以及與依賴細胞周期蛋白的激酶活性有關的疾病的病症的藥物。
24.用於治療病症的權利要求1-11任一項的化合物。
25.權利要求24的化合物，其中所述病症選自過度增殖性病症、病毒感染、化療誘導的脫髮以及與依賴細胞周期蛋白的激酶活性有關的疾病。
26.抑制依賴細胞周期蛋白的激酶的方法，所述方法包括給需要這種治療的宿主施用有效量的權利要求1-11任一項的化合物或包含治療有效量的所述化合物的組合物。
27.治療與依賴細胞周期蛋白的激酶有關的病症的方法，所述方法包括給需要這種治療的宿主施用有效量的權利要求1-11任一項的化合物或包含治療有效量的所述化合物的組合物。
全文摘要
本發明涉及新的式(I)依賴細胞周期蛋白的激酶抑制劑(cdks)，以及尤其但不僅僅為cdk/細胞周期蛋白複合物抑制劑，其中取代基如權利要求書定義。如本文中所述，本發明抑制劑能抑制細胞周期機制，因此可用於調節細胞周期進程，最終控制細胞生長和分化。此類化合物可用於治療個體的過度細胞增殖相關性病症。
文檔編號C07F9/00GK1922180SQ200480042035
公開日2007年2月28日 申請日期2004年12月21日 優先權日2003年12月23日
發明者N·博科維奇, A·F·克盧格, C·奧爾曼, K·K·穆爾蒂, S·拉姆, 王忠國, 黃建星 申請人:Gpc生物科技公司