酶免疫試劑盒的製作方法

2023-12-09 04:07:11

專利名稱：酶免疫試劑盒的製作方法
技術領域：
本發明涉及醫學檢測技術領域，尤其涉及孕婦產前病原體IgM抗體測試技術領域。
為了搞好計劃生育工作實行優生優育，在婦女懷孕後一般要檢測TORCH(弓形體、風疹病毒、巨細胞病毒、單純皰疹病毒)特異性IgM抗體。目前，國際上用間接酶免疫吸附試驗來檢測TORCH-IgM的診斷試劑盒有美國Maxim生物技術公司、HOPE公司、加拿大Microbix公司的產品，上述這些試劑盒，都只能在不同的板條孔中分別檢測TOX、RV、CMV、HSV四種病原體的IgM，以上方法有三個共同的缺點，一是IgM型類風溼因子(IgM-RF)的幹擾作用，它本質是抗自身IgG的IgM，抗原與其特異性的IgG形成複合物結合IgM-RF引起假陽性反應；二是特異IgG能競爭性地佔有特異性IgG能競爭性地有特性IgM與抗原的結合部位產生假陰性反應；三是檢測成本高，每個被檢者每次得花160元左右。
本發明的目的在於，提供一種克服上述缺陷的試劑盒，檢測時，可在板條每個孔中同時檢出TOX、RV、CMV、HSV四種病原體的IgM，易於TORCH-IgM合檢初篩，簡化了操作，節約了成本，使用方便，效果好。
本發明的技術方案是這樣實現的本發明包括盒體，設在盒體內的多孔板條和設在盒體內的用液，在多孔板條的每孔內，由包被液包被能引起胎兒先天性畸形的TORCH抗原，來檢測孕婦血TORCH-IgM抗體，包被液和其他用液所含成份分別為(1)包被液含有碳酸氫鈉、碳酸鈉、尿素、鹽酸胍和雙蒸水，(2)其他用液包含洗滌液、標本稀釋液、封閉液、底物稀釋液、酶底物液的配製和抗人IgM酶聯物，其中(a)洗滌液內含有氯化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、雙蒸水和吐溫-20，(b)封閉液內含氯化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二納、吐溫-20、羊血清和雙蒸水，(c)標本稀釋液內含氯化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氨二鈉、吐溫-20、羊血清、葡萄球菌A蛋白、甘氨酸和雙蒸水，(d)底物稀釋液含有檸檬酸、檸檬酸三鈉和雙蒸水，(e)酶底物液內含3，3＇5，5＇-四甲基聯苯胺、二甲亞碸、底物稀釋液、過氧化脲，(f)抗人IgM酶聯物，辣根過氧化物酶與純化的抗人IgM單克隆抗體相聯，包被液及用液成份含量分別為(1)1000ml包被液含量碳酸氫鈉2．93g碳酸鈉 1．59g尿素0．06-0．60g鹽酸胍 0．09-0．90g雙蒸水 1000mlTOX抗原、RV抗原、CMV抗原和HSV抗原各10-5000ug(2)1000ml洗滌液的含量
氯化鈉8．7g磷酸二氫鉀0．2g磷酸氫二鈉2．33g吐溫-20 1-10ml雙蒸水990-999ml(3)1000ml封閉液的含量羊血清5-300ml洗滌液700-995ml(4)1000ml標本稀釋液含量葡萄球菌A蛋白 5-20mg甘氨酸0．1-5g封閉液1000ml(5)1000ml底物稀釋液配製如下檸檬酸9-13g檸檬酸三鈉10-15g雙蒸水1000ml(6)酶底物液3，3＇，5，5＇-四甲基聯苯胺 200mg二甲亞碸 200ml過氧化脲 250ml底物稀釋液 800ml包被液包被板條的方法是將上述用液各自經混合備用，用包被液稀釋TORCH抗原，使終濃度分別為弓形體抗原、風疹病毒抗原、巨細胞病毒抗原、單純皰疹病毒-1型抗原各10-5000ug／1000ml，將TORCH抗原混懸液加入多孔反應板的孔內(100Ul／孔)置於37℃溫箱內2小時後，然後在4℃下6-12小時，甩掉包被液，用洗滌液清洗後，加封閉液，110ul／孔，再置於4℃條件下6-12小時，甩去封閉液，用洗滌液、雙蒸水清洗，叩盡板條孔中的水，20-28℃晾乾。
本發明的優點是1、採用這一技術可在同一孔裡同時檢出TOX、RV、CMV、HSV四種病原體的IgM，易於合檢初篩，簡化了操作，檢測人員的工作量可減少3／4，節約了成本1／2，使用方便。
2、減少了非特異性。在稀釋液中加入0．5-2mg％葡萄球菌A蛋白和0．01-0．5％甘氨酸37℃20分鐘處理被檢血清較好地克服了背景技術的第一、二個缺點。在封閉液中加入濃度為0．5-30％的羊血清，進一步降低了試驗的非特異反應。
3、增加了固相載體吸附性。①由於用尿素處理蛋白質，使蛋白質部分變性後再包被酶標板；②又由於用鹽酸胍在包被前處理病毒顆粒抗原，能將較大顆粒裂解為較小的亞單位。所以增加了固相載體吸附量。
4、提高了酶免診斷方法敏感性。①由於使用高親和力的酶標抗人IgM單克隆抗體取代酶標抗人IgM多克隆抗體。②又由於選擇更理想的底物，3，3＇，5，5＇-四甲基聯苯胺是酶免技術中過氧化物酶的一種新的生色底物，其優點是敏感性高，另外還有產生的有色產物穩定、本底反應低、無致癌性等。還由於臨用前用過氧化脲-檸檬酸緩衝液稀釋，不僅提高了酶免診斷方法敏感性，還提高了該緩衝液的穩定性。
介紹實施例
本發明包括盒體、設在盒體內的多孔板條和設在盒體內的用液，在多孔板條的每孔內，包被能引起胎兒先天性畸形的TORCH抗原，來檢測孕婦血TORCH-IgM抗體，將包被液和其他用液配置混合備用，先用包被液(0．05mol／L，PH9．6碳酸緩衝液的基礎上加0．003mol／L尿素和0．003mol／L鹽酸胍)稀釋TORCH抗原，使終濃度分別為TOX抗原10ug／100ml、RV抗原170ug／100ml、CMV抗原110ug／100ml、HSV-1抗原110ug／100ml。將此TORCH抗原混懸液置37℃2小時後包被板條，100ul／孔，置入4℃冰箱6-12小時後甩掉包被液，用洗液洗1次後，用封閉液封閉，110ul／孔，置4℃冰箱6-12小時。甩去封閉液後，用洗液和雙蒸水各洗1次，叩盡板條孔中的水，20-28℃晾乾，裝入塑膠袋，並放入適量變色矽膠密封，置入-20℃冰箱備用。
權利要求
1.一種酶免疫試劑盒，它包括盒體、設在盒體內的多孔板條和設在盒體內的用液，其特徵在於，在多孔板條的每孔內，由包被液包被能引起胎兒先天性畸形的TORCH抗原，檢測孕婦血TORCH-IgM抗體，包被液和其他用液所含成份為(1)包被液含碳酸氫鈉、碳酸鈉、尿素、鹽酸胍和雙蒸水，(2)其他用液包含洗滌液、封閉液、標本稀釋液、底物稀釋液、酶底物的配製和抗人IgM酶聯物，其中(a)洗滌液內含有氯化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、吐溫-20、雙蒸水，(b)封閉液內含有氯化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、吐溫-20、羊血清和雙蒸水，(c)標本稀釋液內含氯化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、吐溫-20、羊血清、葡萄球菌A蛋白、甘氨酸和雙蒸水，(d)底物稀釋液含有檸檬酸、檸檬酸三鈉和雙蒸水，(e)酶底物液含有3，3＇，5，5＇-四甲基聯苯胺、二甲亞碸底物稀釋液、過氧化脲，(f)抗人IgM酶聯物，辣根過氧化物酶與純化的抗人IgM單克隆抗體相聯，1000ml包被液及各用液的成份含量分別為(1)包被液含量碳酸氫鈉2．93g碳酸鈉 1．59g尿素 0．06-0．60g鹽酸胍0．09-0．90g雙蒸水1000mlTOX抗原、RV抗原、CMV抗原和HSV抗原各10-5000ug，(2)洗滌液的含量如下氯化鈉8．70g磷酸二氫鉀0．20g磷酸氫二鈉2．33g吐溫-20 1-10ml雙蒸水990-999ml(3)封閉液配製如下羊血清5-300ml洗滌液700-995ml(4)標本稀釋液葡萄球菌A蛋白 5-20mg甘氨酸1-5g封閉液1000ml(5)底物稀釋液配製如下檸檬酸9-13g檸檬酸三鈉10-15g雙蒸水1000ml(6)酶底物液3，3＇，5，5＇-四甲基聯苯胺 200mg二甲亞碸 200ml過氧化脲 250ml底物稀釋液 800ml
2.一種生產酶免疫試劑盒的工藝方法，其特徵在於，包被液包被板條的方法是，將包被液和其他用液各配置混合後備用，用包被液稀釋TORCH抗原，使終濃度分別為弓形體抗原、風疹病毒抗原、原細胞病毒抗原、單純皰疹病毒-1型抗原各10-5000ug／1000ml，將TORCH抗原混懸液加入多孔板條的孔內100μl／孔置於37℃溫箱內2小時後，然後在4℃下6-12小時，甩掉包被液，用洗滌液清洗後，用封閉液封閉，110μl／孔，再置於4℃條件下6-12小時，甩去封閉液用洗滌液、雙蒸水清洗，叩盡板條孔中的水，20-28℃晾乾。
全文摘要
本發明涉及醫學檢測技術領域,尤其涉及孕婦產前病原體IgM抗體測試技術領域。本發明包括盒體,設在盒體內的多孔板條和設在盒內的用液,在多孔板條的每一孔內包被能引起胎兒先天畸形的TORCH病毒抗原,檢測TORCH－IgM抗體,包被液內含有碳酸氫鈉、碳酸鈉、尿素、鹽酸胍和雙蒸水,用液包含有洗滌液、封閉液、稀釋液、酶底物和抗人IgM的酶聯物。本發明在板條每個孔中可以一次同時檢出TOX、RV、CMV、HSV四種病原體的IgM,易於TORCH－IgM合檢初篩,簡化了操作,節約了成本,使用方便,效果好。
文檔編號G01N33/535GK1294301SQ99114528
公開日2001年5月9日 申請日期1999年11月1日 優先權日1999年11月1日
發明者嚴華 申請人:揚州大學