用於泌尿道感染的分子標記物的製作方法

2023-12-06 13:20:41

專利名稱：用於泌尿道感染的分子標記物的製作方法
技術領域：
本發明涉及用於測定作為診斷標記物的血漿和尿中的降鈣素原水平以鑑定患有泌尿道感染的患者的體外方法、用於執行所述測定的體外方法、用於診斷患有泌尿道感染的患者的試劑盒、以及降鈣素原在診斷泌尿道感染中的有用性。
背景技術：
泌尿道感染(UTI)是一個非常常見的問題，往往與尿導管的使用相關(Hooton TM 等.Clin Infect Dis. 2010Mar 1，50 (5) : 625-63)，並且通常是由腸和外生殖器中的腐生菌引起的，而在不太常見的情況下是由真菌和病毒引起的。這些有機體在某些條件下可以經由尿道定植到泌尿道中，直至到達膀胱。在臨床上，泌尿系感染表現有發熱、排尿困難、痛性尿淋浙、尿頻、尿急、和中度下背痛。
所述臨床症狀未必足以提供診斷，尤其是在重症監護病房中，在重症監護病房中， 患者往往無法交流他們的症狀,並且各種合併症往往會掩蓋感染的準確起源。
因此，對於分離所涉及的病原體以及評估任何併發症並鑑定出特異性療法兩者來說，都需要實驗室檢測。
用於診斷泌尿道感染的可選技術的代表為尿培養。該檢測使得能夠分離引起感染的細菌，並通過抗菌譜評估對抗生素的敏感性或抗性。獲得尿培養結果所需要的時間取決於所涉及的微生物種類，在24至48小時之間不等。
在等待結果期間，往往執行僅根據臨床觀察結果的經驗性治療，這會導致抗生素療法的不恰當使用，以及進行了完全沒有必要的(陰性的)尿培養的患者。
因此，非常重要的是需要鑑定出用於UTI早期診斷的新工具，所述新工具能夠預測可能的併發症並改善結果，尤其是在某些「棘手」的情況下，例如在危重新生兒或患者中。發明內容
本發明涉及用於診斷和/或監測泌尿道感染的體外方法和試劑盒。本文所述發明是基於這一發現，即患者尿樣品中的降鈣素原濃度具有用於診斷泌尿道感染的預測性數值。此外，本發明人還觀察到，在患有泌尿道感染的患者中，尿中的降鈣素原濃度大於血漿的降鈣素原濃度，而在未受泌尿道感染影響的患者中，尿中的降鈣素原濃度低於血漿的降鈣素原濃度。測定尿中的降鈣素原濃度可用於診斷泌尿道感染的存在，所述診斷是通過將患者尿中的濃度值與標準值進行比較和/或根據血漿降鈣素原濃度與尿中的降鈣素原濃度之間的比例關係。
因此，本發明的主題是用於診斷和/或監測泌尿道感染的體外方法，所述方法包括這樣的階段，即其中測定患者的尿樣品中的降鈣素原濃度。
本發明的主題還是上述方法，所述方法還包括這樣的階段，即其中還測定了所述患者的血漿降鈣素原的濃度。
本發明的主題也是用於泌尿道感染的體外診斷和/或監測和/或嚴重性評估的試劑盒，所述試劑盒包含用於測定尿樣品和任選的血漿樣品中的降鈣素原濃度所必需的試劑的等分試樣。
本發明的主題也是降鈣素原用於診斷和/或監測泌尿道感染的應用。
本發明具有的優點是，能夠使用非常簡單的非侵入性方法以及比在被稱為尿培養的技術中使用的那些方法更快的方法來診斷和/或監測患有泌尿道感染的患者。根據以下對某些實施方式的詳細描述，本發明的優點、特點和使用方法是顯而易見的，所述實施方式是作為實施例，而不是限制性的。


圖I.尿培養陽性的人群。該圖顯示了 10名患有泌尿道感染的患者的PCTur (尿的降鈣素原)和PCTpl (血漿的降鈣素原)的值。
圖2.尿培養陰性的人群。該圖顯示了 10名無泌尿道感染的患者的PCTur (尿的降鈣素原)和PCTpl (血漿的降鈣素原)的值。
圖I和2顯示，在尿培養陽性的人群中，10例中有9例的PCTur值大於PCTpl值， 而在屬於尿培養陰性人群的患者中，沒有I例患者的PCTur值大於PCTpl值。
發明詳述
本說明書提供了用於診斷和/或監測泌尿道感染的體外方法。本發明的方法使得有可能診斷和/或監測泌尿道感染。本發明的方法使得有可能診斷泌尿道感染的存在或不存在、根據單次測定來評估(診斷)感染的嚴重性(即，降鈣素原的濃度越高，感染就越嚴重， 第一次測定時的風險分級)、以及在治療感染的過程中監測感染的進展。
本說明書中的術語「泌尿道感染」是指大量微生物(細菌、真菌和/或病毒)入侵正常情況下為無菌的泌尿道，如此決定了泌尿道上皮的炎性反應。
可引起泌尿道感染的微生物的實例是大腸埃希桿菌(E.Coli)、奇異變形桿菌(Proteus Mirabilis)、幾腸球菌(Ε· Faecalis)、Saprophyticus、葡萄球菌屬 (Staphylococcus)、腸球菌屬(Enterococcus)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、假單胞菌屬 (Pseudomonas)、白色念珠菌(Candida albicans)等。流行病學數據表明，在三分之一的病例中，泌尿道感染與尿導管的使用相關。本發明可適用於帶有永久性或臨時性泌尿醫療裝置(導管、腎造瘻、膀胱造瘻)的患者和沒有這些裝置的所有年齡的患者兩種。
本發明的方法包括這樣的階段，即其中測定患者的尿樣品中的降鈣素原濃度。降鈣素原(PCT)是降鈣素的前體，降鈣素是由甲狀腺的髓質神經內分泌C細胞產生的、負責鈣穩態的激素。
有利的是，本發明的方法還包括這樣的階段，即在此期間，還測定了所述患者的血漿樣品中的降鈣素原濃度。不僅測定了尿中的降鈣素原，而且還測定了血漿中的降鈣素原， 這可以在已對其尿和血漿進行分析的患者中更準確地診斷泌尿道感染的存在或不存在。事實上，由本發明人執行的臨床研究已經表明，在患有泌尿道感染的所有患者中，尿中的降鈣素原的值大於血漿中的降鈣素原的值，而在陰性患者中，該值是較低的。該實施方式可用於，例如其尿降鈣素原的值不足以給出關於泌尿道感染存在或不存在的明確指徵的患者， 或者呈現出複雜的臨床情況(例如，可能存在泌尿道感染和全身感染兩種)的患者。
一般來說，為了測定尿和/或血漿中的降鈣素原的濃度，本領域專家公知的、能夠用於測定生物流體中的降鈣素原濃度的任何方法，均可以被認為適合於本說明書的目的。 例如，定量和半定量的商品化的免疫分析，例如LUMItest PCT化學發光、LIAISON BRAHMS PCT 、TRACE: KRYPTOR 、BRAHMS PCT、PCT -Q。可以修改分析條件，以避免由尿基質的組分造成的可能干擾。
測定待檢測的尿和/或血漿樣品中的降鈣素原的濃度是通過將樣品與對降鈣素原特異性的一級抗體在適當的溫度下孵育適當長的時間，所述一級抗體以合適的濃度懸浮在適當的緩衝液中。本說明書中的術語抗體是指完整的抗體或抗體的片段；抗體片段包括但不限於片段？(&13』)2和？&13』或單鏈抗體。
對於本說明書的目的而言，術語「對降鈣素原特異性的一級抗體」是指能夠與降鈣素原的任何部分選擇性結合的任何抗體。
目前，特定蛋白質的選擇性抗體的開發是使用實驗室手冊中教導的常規技術來執行的，並且許多公司還提供了開發所述抗體的服務。因此，沒有必要在本說明書中提供關於抗體的產生的更多詳情，所述抗體還可以訂購自合適的公司。
因此，為了產生對降鈣素原特異性的一級抗體，任何標準技術將足以用於開發多克隆和單克隆兩種抗體。此外，對降鈣素原特異性的抗體還可以在市場上獲得(例如商業抗體，可以使用的商業抗體是Abcam公司的代碼為ab53897 (兔多克隆)、ab90489 (小鼠單克隆)、ab24454 (連接了 HRP的小鼠單克隆)、abl4817 (連接了 HRP的小鼠單克隆)的商業抗體)，並且可以用於本發明的目的，而無需在本說明書 中提供更多的詳情。關於一級抗體孵育方案的詳情是本領域技術人員公知的，並且如果使用商業抗體，則供應商的說明書中給出了詳情。這些孵育方案包括使用合適的緩衝液，例如PBS (磷酸鹽緩衝鹽溶液)或者如果使用商業抗體，則為製造商特別推薦的緩衝液。
為了檢測一級抗體，一級抗體可以標記有選自以下的在抗體標記中常用的任何化合物，並且在特定情況下，可以使用螢光團羥基香豆素、氨基香豆素、甲氧基香豆素、銪、 釤、FITC、Cy3、Cy5、Cy2、Cy7、XL665或酶例如鹼性磷酸酶或過氧化物酶。
可選地，如果使用了未直接標記的一級抗體，則可以使用任何標記的第二抗體來檢測一級抗體，第二抗體選擇性地識別所述一級抗體。正如在文獻中已知的，第二抗體是對一級抗體的恆定區、也稱為Fe部分特異性的，而恆定區又取決於開發一級抗體本身時所用的動物的類型。換言之，正是用所涉及的表位(一級抗體)免疫時所用的動物的類型限定了第二抗體的性質，因此，例如，如果一級抗體是從兔中獲得的，那麼第二抗體就是抗兔的；如果被免疫的動物是羊，那麼第二抗體就是抗羊的；如果一級抗體是在小鼠中開發出來的，那麼第二抗體就是抗小鼠的第二抗體；等等。
第二抗體可以標記有選自以下的在抗體標記中常用的任何化合物，並且在特定情況下，可以使用螢光團羥基香豆素、氨基香豆素、甲氧基香豆素、銪、釤、FITC、Cy3, Cy5, Cy2、Cy7、XL665或酶例如鹼性磷酸酶或過氧化物酶。
在一個實施方式中，可以使用抗降鈣素原的一級抗體和抗降鈣素原的第二抗體來測定降鈣素原的濃度，所述抗降鈣素原的一級抗體例如與螢光標記物如銪連接的多克隆抗體，所述抗降鈣素原的第二抗體識別與一級抗體識別的表位不同的表位，例如與螢光標記物如XL665連接的單克隆抗體。
可以通過手動執行本發明的方法，或者可以使用本領域技術人員已知的能夠自動執行所述方法的任何儀器例如實驗室儀器如KryptorBRAHMS來執行本發明的方法，或者，可以使用用於測定血漿降鈣素原的其它方法(例如 LUMItest PCT-LIAISON 、BRAHMS PCT -Q)。
在一個實施方式中，將尿中的降鈣素原濃度的值與指示泌尿道感染存在或不存在的一個或多個值比較，因為小於O. 05ng/mL的濃度預測不存在泌尿道感染，和/或大於O.3ng/mL的濃度預測存在泌尿道感染。
在一個實施方式中，本發明的方法可以包括這樣的附加步驟，即其中將尿中的降鈣素原濃度的值與血漿中的降鈣素原濃度的值比較，因為尿中的降鈣素原濃度與血漿中的降鈣素原濃度之比大於I預測存在泌尿道感染。
本發明的主題也是用於體外診斷和/或預測泌尿道感染的試劑盒，所述試劑盒包含用於測定尿樣品和任選的血漿樣品中的降鈣素原濃度所必需的試劑的等分試樣。
因此，第一次提供了可用於鑑定患有泌尿系感染的患者和/或從特定治療方案的角度監測感染過程的快速工具。
試劑盒在其最簡單的形式中含有特異性的抗降鈣素抗體的一個或多個等分試樣以及隨附的活頁，所述活頁例如含有關於對診斷結果的解釋、以及任選的用於收集和儲存尿和/或血漿樣品的方法的說明。對於本說明書的目的來說，可以在本文要求保護的試劑盒中包含可以與降鈣素原選擇性結合的任何抗體。具體來說，試劑盒可含有一種或多種抗降鈣素原的抗體，所述抗體是各自針對例如蛋白質的不同表位開發的，並且所述抗體有可能可以與常見抗體標記物例如螢光團或酶連接。在適當的情況下，試劑盒可包括使用市場上的單克隆和/或多克隆的抗降鈣素原的抗體。試劑盒還可以含有隨附的活頁。這些活頁可以指示試劑盒的組分和推薦的方案。此外，說明書還可以含有關於對所分析的尿和血漿樣品所獲得的降鈣素原值的解釋的信息，並且更具體地，如上所述，小於O. 05ng/mL的尿降鈣素原濃度預測不存在泌尿道感染，大於O. 3ng/mL的濃度預測存在泌尿道感染，並且 PCTur/PCTpl之比>1預測存在泌尿道感染，其中PCTur是患者的尿降鈣素原，而PCTpl是血漿降鈣素原。
試劑盒還可以含有對一級抗體特異性的第二抗體的一個或多個等分試樣。如本領域技術人員已知的，並且如上所述，第二抗體必須能夠特異性識別所用一級抗體的恆定部分；因此，選擇要使用的第二抗體，將取決於用相關表位所免疫的動物。第二抗體可以標記有抗體標記中常用的任何化合物。
試劑盒還可以含有陰性和/或陽性對照的一個或多個等分試樣。陰性對照是指沒有泌尿道感染的患者的任何尿或血漿樣品。在一個具體實施方式
中，陰性對照可以用降鈣素原濃度小於O. 05ng/mL的尿樣品代表。
陽性對照能夠用於檢驗所執行的程序的正確性和所用方法的可能的有效性，因為它可以含有患有泌尿道感染的患者的血漿或尿樣品。具體來說，最適合的、但本發明不受此限制的陽性對照是降鈣素原濃度大於O. 3ng/mL的尿樣品。
試劑盒還可以含有用於檢測尿和/或血漿中的降鈣素原的試劑的一個或多個等分試樣。這些試劑由可用於執行各種不同步驟的任何溶液組成，所述步驟導致鑑定出分析樣品中的降鈣素原濃度的值。具體來說，可以使用緩衝溶液，例如但不限於PBS (磷酸鹽緩衝鹽溶液)；封閉液，例如補充有牛血清白蛋白的PBS。
本發明的主題也是降鈣素原在泌尿道感染的診斷、監測、和嚴重性評估中的應用， 所述泌尿道感染例如與尿導管的使用相關的感染。
下面所報告的是用於闡述包含在本說明書中的報告的實驗結果和實施例不能將這些實施例認為是對上述說明和權利要求的限制。
關於在懷疑患有泌尿道感染的患者的臨床研究中使用的人群的說明
將住在I⑶的、懷疑患有泌尿道感染的患者招募在臨床研究中。各患者冋時接受以下檢測
標準的尿分析(化學和物理檢查)和尿培養；
血漿PCT ；
尿PCT。
根據尿培養結果，接收了 10名尿培養陽性的對象和10名尿培養陰性的對象。
接收了共20名患者(9名女性和11名男性)，平均年齡為70歲。所選擇的患者的年齡從33到91歲不等。
每個患者必須表現出以下納入標準中的至少一項
-發熱或體溫過低；
-白細胞增多/白細胞減少；
-下背痛和/或排尿困難；
-其他無法解釋的SIRS體徵；
-FUO ；
_ 復發的 UTI。
排除標準包括
I.少尿/無尿；
2.存在輸尿管乙狀結腸吻合術；
3.阻礙獲得足夠尿樣品的腎功能異常；
4.肝功能衰竭。
如果不超過兩種的微生物具有105CFU/mL的發展(在14_30%的情況下為多種微生物的病因)，則認為尿培養是陽性的。在念珠菌(Candida spp.)的情況下,認為顯著性閾值為104CFU/mL。對於革蘭氏陽性菌(特別是凝固酶陰性的腸球菌和葡萄球菌)來說也是如此， 而在抗菌治療的情況下，傾向於認為小於105CFU/mL的計數是顯著性的。_4] 臨床研究的結果
尿培養陽性的人群顯示出，在10例中有9例的尿PCT高於血漿PCT (圖I)。
尿PCT平均值為I. 4ng/mL,而血漿PCT平均值為O. 4ng/mL。尿PCT的範圍在O. 36 和2. 54ng/mL之間，而血漿PCT的範圍在O. 06和I. 22ng/mL之間。
尿PCT值的中值為I. 25ng/mL,而血漿PCT值的中值為O. 24ng/mL。
尿PCT與血漿PCT之比具有在O. 8和25. 33ng/mL之間的值，平均值為7. 32ng/mL， 中值為 4. 86ng/mL。
對象的平均溫度為37. 02°C，其中I名患者的溫度<35°C，3名患者彡36 °C並 <37°C，4名患者彡37°C並<38°C，以及彡2名患者38°C。
白血細胞值(正常值4. 50至10. 00X IO3/μ L)的範圍在5. 37和22. 12X IO3/μ L之間，其中平均值為12. 22X 103/yL，中值為11. 55X IO3/μ L。
嗜中性粒細胞百分數(正常值40. O至75. 0%)在67. 3至88. 4%的範圍內，平均值為 78. 8%ο
對象的肌酐(正常值O. 50至O. 90mg/dL)範圍從最小的O. 3到最大的2. 85mg/dL, 平均值為O. 78mg/dL。
為了計算肌酐清除率的值,使用以下Cockcroft-Gault公式
男性[(140-年齡)X體重(kg) / (血清肌酐X 72)]
女性[(140-年齡)X體重(kg) X O. 85/ (血清肌酐 X 72) ]
在研究對象中，清除率在27至226. 8ml/分鐘的範圍內，其中平均值為129. 16ml/ 分鐘，中值為115. 4ml/分鐘。
尿培養陰性的人群顯示，在所有患者中，尿PCT低於血漿PCT。
尿PCT平均值為O. 6ng/mL，而血漿PCT平均值為4. 44ng/mL。尿PCT的範圍在O. 13 和I. 38ng/mL之間，而血漿PCT的範圍在O. 35和25. 72ng/mL之間。
尿PCT值的中值為O. 36ng/mL,而血漿PCT值的中值為I. 36ng/mL。
尿PCT和血漿PCT之比具有在O. 03和O. 9ng/mL之間的值，平均值為O. 40ng/mL, 中值為 O. 37ng/mL。
對象的平均溫度為37. 7°C，其中I名患者的溫度彡36°C並<37°C，I名患者彡37°C 並<38°C，以及8名患者彡38°C。
白血細胞值的範圍在4. 27和39. 2 X IO3/μ L之間，其中平均值為12. 86 X IO3/μ L， 中值為 8. 61 X IO3/μ Lo
嗜中性粒細胞百分數的範圍在65. 5和93. 9%之間，平均值為85. 5%。
對象的肌酐範圍從最小的O. 55到最大的I. 61mg/dL,平均值為O. 97mg/dL。
使用Cockcroft-Gault公式,肌酐清除率在38. 4至169. 4ml/分鐘的範圍內，其中平均值為78. 72ml/分鐘，中值為76. Iml/分鐘。
在尿培養陰性患者的人群中，在尿培養陰性人群中的所有10名患者中均觀察到PCTur值低於PCTpl值，而在尿培養陽性的人群中，只有I例患者的PCTur值低於 PCTpl值(圖2)。後者是所接收的唯一一名具有嚴重腎功能障礙的對象，該患者表現出，用 Cockcroft-Gault公式估算的肌酐清除率值為27ml/分鐘。因此，有可能的是，在患有嚴重腎功能障礙的對象中，PCT蓄積在血漿中，而沒有適當地排洩到尿中，這導致儘管培養陽性， 但PCTpl值大於PCTur值。
在尿培養陽性的人群中，PCTur值的中值為I. 25ng/mL，而在尿培養陰性的人群中，該值為O. 36ng/mL，這顯示了兩組之間的明顯差異。
PCTpl的中值也顯示出顯著性差異在尿培養陽性的人群中，該值(O. 24ng/mL)表示大多數對象沒有任何其他感染；而在尿培養陰性的人群中，該值(I. 36ng/mL)表示大多數患者具有細菌感染(圖24)。
為了評估PCT測定的準確性是否受到尿用作樣品基質的影響，將不能檢測到PCT 的健康個體的尿和血清樣品各5份摻入重組的PCT，並在KRYPTOR PCT分析中進行測定。尿中PCT的回收比血清中PCT的回收低20-30%。因此，尿中回收降低的程度是相對小的，並且，即使尿和血清中的回收不相同，上面所得出的結論仍然有效。在本發明臨床樣品中測得8的尿PCT值可以通過將它們乘以I. 25進行校正，以計入尿基質中降低的回收。
統計分析
將從臨床研究結果推算出的數據進行統計分析，以評估是否PCTur/PCTpl比率>1 能夠以一定的靈敏度和特異性診斷泌尿道感染。
患有感染的患者無感染的患者合計檢測+AbA+b檢測+CdC+d合計A+cB+d
患有感染的患者無感染的患者合計檢測+9O9檢測+I1011合計101020
靈敏度是感染的患者對檢測呈陽性的概率，在我們的實例中
靈敏度=a/a+c=9/(9+1) =0. 9,即 90%。
另一方面，特異性是健康對象對檢測呈陰性的概率，在我們的實例中
特異性=d/b+d=10/(0+10) =1，即 100%
我們還可以計算陽性預測值(PPV)，PPV相當於患有感染並因此被正確診斷為感染的檢測呈陽性的對象的比例
PPV=a/a+b 的=9/ (9+0) =1，即 100%。
實施例I測定血■漿的降鈣素原
使用BRAHMS PCT靈敏KRYPTOR從患者收集用於分析的血液樣品，BRAHMS PCT靈敏KRYPTOR是為人血清或血漿樣品(EDTA，肝素)的自動免疫螢光分析中的降鈣素原劑量設計的試劑盒。該定量方法使用連接了螢光標記物的抗降鈣素原的羊多克隆抗體、銪穴狀化合物和其他物質例如包含牛血清白蛋白、未免疫小鼠的免疫球蛋白、和氟化鉀的緩衝液；也連接了螢光標記物XL665的抗降鈣素的小鼠單克隆抗體，以及緩衝液、牛血清白蛋白、小鼠免疫球蛋白、氟化鉀；最後，準備使用時，可利用由人血清、Kathon、EDTA形成的稀釋液。
該分析中的PCT測定是基於TRACE技術(時間分辨擴增爭奪發射(Time-Resolved Amplifed scramble Emission)),所述技術測定從免疫複合物延時發射出的信號。用氮雷射器在337nm處激發樣品，供體(穴狀化合物)發射出620nm的長壽命的在毫秒範圍內的螢光信號，而受體(XL665)產生665nm的短壽命的在納秒範圍內的信號。如果形成了免疫複合物，則在665nm處同時出現受體信號的信號放大和壽命延長，並且可以以微秒測定該信號。
PCT分子被夾在兩種抗體之間，通過測定信號長度，獲得了 PCT值，PCT值與信號的9發射時間成正比。
實施例2測定尿的降鈣素原
在夾緊流出口並消毒後，用注射器從尿導管的適當引流位置取出尿樣品。將約4mL 尿轉移到合適的管中，並運送到分析實驗室。一旦取出樣品後，就根據如實施例I所述為血漿PCT提供的方案執行尿PCT的測定。_6] 參考文獻
Hooton TM等.美國傳染病學會的2009年國際臨床實踐指南與尿導管相關的成人泌尿道感染的診斷、預防、和治療(Diagnosis, prevention, and treatment of catheter-associated urinary tract infection in adults:2009International Clinical Practice Guidelines from the Infectious Diseases Society of America). Clin Infect Dis. 2010Mar I;50 (5):625-63。
權利要求
1.用於診斷和/或監測泌尿道感染的體外方法，其包括測定患者尿樣品中降鈣素原濃度的步驟。
2.權利要求I的方法，其還包括測定所述患者血漿中降鈣素原濃度的步驟。
3.權利要求I或2的方法，其中通過對降鈣素原特異性的一級抗體來測定降鈣素原濃度。
4.權利要求3的方法，其中所述一級抗體用選自以下的螢光染料直接標記羥基香豆素、氨基香豆素、甲氧基香豆素、銪、釤、FITC、Cy3、Cy5、Cy2、Cy7、XL665。
5.權利要求3的方法，其中通過用選自以下的化合物標記的第二抗體來測定降鈣素原濃度輕基香豆素、氨基香豆素、甲氧基香豆素、銪、衫、FITC、Cy3、Cy5、Cy2、Cy7、XL665。
6.權利要求5的方法，其中所述第二抗體是對所述一級抗體特異性的。
7.權利要求1-6任一項的方法，其中所述泌尿道感染與尿導管的使用相關。
8.權利要求1-7任一項的方法，其還包括將尿中的所述降鈣素原濃度與一個或多個值進行比較的步驟，由此，低於O. 05ng/ml的濃度預測不存在泌尿道感染，和/或大於O. 3ng/ ml的濃度預測存在泌尿道感染。
9.權利要求2-8任一項的方法，其還包括將尿中的所述降鈣素原濃度的值與血漿中的所述降鈣素原濃度的值進行比較的步驟，由此，尿中的所述降鈣素原濃度與血漿中的所述降鈣素原濃度之間的比大於I預測存在泌尿道感染。
10.用於體外診斷和/或監測泌尿道感染的試劑盒，其包含用於測定尿樣品和任選的血漿樣品中降鈣素原濃度所需要的試劑的等分試樣。
11.權利要求10的試劑盒，其包含對降鈣素原特異性的一級抗體的一個或多個等分試樣。
12.權利要求11的試劑盒，其中所述一級抗體是用選自以下的化合物直接標記的抗體輕基香豆素、氨基香豆素、甲氧基香豆素、銪、衫、FITC、Cy3、Cy5、Cy2、Cy7、XL665。
13.權利要求12的試劑盒，其還包含用選自以下的化合物的標記的第二抗體的一個或多個等分試樣羥基香豆素、氨基香豆素、甲氧基香豆素、銪、釤、FITC、Cy3, Cy5, Cy2, Cy7, XL665。
14.權利要求10-13任一項的試劑盒，其中所述試劑包括緩衝溶液的一個或多個等分試樣和/或結合溶液的一個或多個等分試樣和/或用於檢測標記的抗體的試劑的一個或多個等分試樣。
15.權利要求10-14任一項的試劑盒，其還包含陰性對照的一個或多個等分試樣和/或陽性對照的一個或多個等分試樣。
16.權利要求15的試劑盒，其中所述陰性對照是降鈣素原濃度低於O.05ng/ml的尿樣品，並且所述陽性對照是降鈣素原濃度大於O. 3ng/ml的尿樣品。
17.降鈣素原用於診斷和/或監測泌尿道感染的應用。
18.權利要求17的降鈣素原的應用，其中所述泌尿道感染與尿導管的使用相關。
全文摘要
本發明涉及用於測定作為診斷標記物的血漿和尿中的降鈣素原水平以鑑定患有泌尿道感染的患者的體外方法、用於執行所述測定的體外方法、用於診斷患有泌尿道感染的患者的試劑盒、以及降鈣素原在診斷泌尿道感染中的有用性。
文檔編號G01N33/569GK102939542SQ201180014501
公開日2013年2月20日 申請日期2011年3月15日 優先權日2010年3月18日
發明者弗朗切斯科·瓊塔, 弗朗切斯科·福爾弗裡, 加達·瑟裡 申請人:B.R.A.H.M.S 有限公司