一種測試強陰離子交換固相萃取柱性能的方法
2024-02-06 13:18:15
專利名稱：一種測試強陰離子交換固相萃取柱性能的方法
技術領域：
本發明涉及色譜分析技術，具體的說是一種測試強陰離子交換固相萃取柱性能的方法。
背景技術：
固相萃取(Solid Phase Extraction,簡稱SPE)是從20世紀80年代中期開始發展起來的一種樣品前處理技術。它是通過固體吸附劑的選擇性吸附和洗脫將液體樣品(固體樣品也可先製成液體樣品)中的目標化合物與幹擾化合物分離，以達到富集、分離、淨化樣品的目的。SPE是一個包括液相和固相的物理萃取過程，在固相萃取過程中，吸附劑對目標化合物的吸附力大於樣品母液，當樣品通過SPE柱時，目標化合物被吸附在固體表面，其他組分則隨樣品母液通過柱子，最後再用適當的溶劑將目標化合物洗脫並收集，然後進行色譜分析。固相萃取與傳統的液液萃取相比有以下4個優點(1)可以獲得高的回收率和高的富集倍數；(2)減少了高純有機溶劑的用量，減少了對環境的汙染，同時減少了有機溶劑中的雜質對被測分析物的影響；(3)無相分離操作，避免了乳化影響，易於收集分析物組分；(4)操作簡單、快速、易於實現自動化。在過去的二十多年裡，SPE已經成為最有用的樣品前處理技術，用於色譜分析之前的快速、選擇性的樣品製備，從而延長色譜系統的壽命，改善定性和定量分析性能。它也可將目標分析物的原始基質環境變成較為簡單以適合後續分析的體系，從而一定程度上緩解了對分析儀器的要求。固相萃取技術是目前環境、食品、生物等領域廣泛應用的樣品前處理方法。但是由於SPE柱與材料種類繁多，不同種類、不同品牌間性能存在很大差異，使得測量結果不確定性增加。針對SPE柱及材料的評價目前還沒有形成體系，缺乏行之有效的測試方法。因此，研究SPE柱與SPE材料的評價方法，建立SPE柱測試評價的方法與參數， 對於保證產品質量，正確選擇與使用SPE柱非常必要。強陰離子交換固相萃取柱主要應用於濫用藥物和生物體液中的藥物化合物、除去食品/農產品樣品中的脂肪酸、尿液中的有機酸、土壤中的除草劑等醫藥和環境樣品前處理。所以，評價強陰離子交換固相萃取柱有很大的現實意義。
發明內容
本發明目的在於提供一種測試強陰離子交換固相萃取柱性能的方法。為實現上述目的，本發明所採用的技術方案為一種測試強陰離子交換固相萃取柱性能的方法將強陰離子交換固相萃取柱特異性吸附目標化合物磺基水楊酸或鳥苷5'-磷酸二鈉，而後檢測目標化合物在固相萃取柱上的有效保留，進而實現對強陰離子交換固相萃取柱性能的測試。首先強陰離子交換固相萃取柱活化，將強陰離子交換固相萃取柱依次用甲醇、蒸餾水和乙酸鈉水溶液衝洗萃取柱，以淨化萃取柱，並提高其活性；其次上樣將目標化合物溶液逐漸加入到固相萃取柱迫使目標化合物溶液通過固定相，使目標化合物保留在固定相上；最後通過洗脫液氨水水溶液和甲醇的混合溶液洗脫，使目標化合物洗脫下來，而後進行測定，計算回收率。所述強陰離子交換固相萃取柱活化，對強陰離子交換固相萃取柱衝洗，依次採用 3ml甲醇、3ml水、3ml的0. 05mol/L乙酸鈉水溶液活化，控制的液體流速在0. 3 1. Oml/ min。所述目標化合物溶液為0. 6 1. 3mg/ml的磺基水楊酸或0. 6 1. 3mg/ml鳥苷5'-磷酸二鈉，上樣體積為3 6ml。所述目標化合物洗脫前將固相萃取柱依次用3ml蒸餾水、3ml 甲醇淋洗固相萃取柱，控制的液體流速在0. 3 1. Oml/min。所述洗脫液為5%氨水的水溶液和甲醇，5%氨水的水溶液和甲醇的體積比為50-100 50-0，控制的液體流速在0. 3 1. Oml/min。所述測定回收率，將收集的洗脫液定容後通過液相色譜進行分析其濃度，而後計算回收率
回收率 ％= c/c。X100%式中，c為洗脫溶液的濃度，C0為上樣標準溶液的濃度。所述液相色譜分析條件當目標化合物為磺基水楊酸時流動相為按體積比為 70 30的乙腈和濃度為0. 05mol/L的磷酸二氫鉀；流速為1. O 1. 8ml/min ；柱溫為30°C; 紫外檢測波長為215nm ；進樣量為10 20 μ L ；當目標化合物為鳥苷5』-磷酸二鈉時流動相為按體積比為30 70的乙腈和濃度為0. 05mol/L磷酸二氫鉀；流速為1. O 1. 8ml/min ； 柱溫為30°C ；紫外檢測波長為253nm ；進樣量為10 20 μ L。本發明所具有的優點1.本發明分別採用磺基水楊酸和鳥苷5』_磷酸二鈉為目標化合物，建立了測試評價強陰離子交換固相萃取柱的方法。2.本發明通過優化上樣溶劑、淋洗溶劑組成與條件，能夠保證在測試中檢測化合物在固相萃取柱上的有效保留。3.本發明建立了洗脫保留於固相萃取柱上的目標化合物的溶劑組成條件，能夠將吸附於固相萃取柱上的目標物全部洗脫，用於液相色譜檢測。4.本發明建立了液相色譜分離條件，並通過測試計算上樣回收率的方法進行不同品牌固相萃取柱性能綜合比較分析評價。該測試方法的建立，能夠有效評價強陰離子交換固相萃取柱的吸附性能、重複性等性能。
圖1為磺基水楊酸在不同流動相比例的色譜圖。圖2為磺基水楊酸在不同品牌強陰離子交換固相萃取柱上回收率結果圖。圖3為鳥苷5'-磷酸二鈉在不同品牌強陰離子交換固相萃取柱上回收率結果圖。
具體實施例方式實施例1用磺基水楊酸作為目標化合物對圖2中Agela Cleanert強陰離子交換固相萃取柱進行測試
強陰離子交換固相萃取柱依次採用3ml甲醇、3ml水、3ml的0. 05mol/L乙酸鈉水溶液活化，流速為0. 5ml/min,然後取目標化合物1. 000mg/ml磺基水楊酸5ml上樣。而後依次採用3ml水、3ml甲醇淋洗固相萃取柱，速度為0. 5ml/min，最後用5ml體積比為50/50的 5%氨水溶液和甲醇洗脫，速度為0. 5ml/min，收集洗脫溶液，定容於5ml，過水相濾膜之後， 進行高效液相色譜分析。流動相為按體積比為70 30的乙腈和濃度為0.05mol/L的磷酸二氫鉀；流速為 1. 7ml/min ；柱溫為30°C;紫外檢測波長為215nm ；進樣量為20 μ L(參見圖1)。所述測定回收率，將收集的洗脫液定容後通過液相色譜進行分析其濃度。每個溶液進行3次分析取平均值。重複上述實驗共兩次。而後計算回收率回收率c/cQX100%，式中，c和Cq(Cq為1.000mg/ml)分別為洗脫溶液和上樣標準溶液的濃度。按照上述步驟，改變洗脫溶劑中5%氨水溶液和甲醇比例分別為70/30和100/0， 重複進行實驗。測試濃度數據和回收率數據見表1和圖2。表1 5%氨水水溶液-甲醇不同體積比時磺基水楊酸的回收率
權利要求
1.一種測試強陰離子交換固相萃取柱性能的方法，其特徵在於將強陰離子交換固相萃取柱特異性吸附目標化合物磺基水楊酸或鳥苷5'-磷酸二鈉，而後檢測目標化合物在固相萃取柱上的有效保留，進而實現對強陰離子交換固相萃取柱性能的測試。
2.按權利要求1所述的測試強陰離子交換固相萃取柱性能的方法，其特徵在於首先強陰離子交換固相萃取柱活化，將強陰離子交換固相萃取柱依次用甲醇、蒸餾水和乙酸鈉水溶液衝洗萃取柱，以淨化萃取柱，並提高其活性；其次上樣將目標化合物溶液逐漸加入到固相萃取柱迫使目標化合物溶液通過固定相，使目標化合物保留在固定相上；最後通過洗脫液氨水水溶液和甲醇的混合溶液洗脫，使目標化合物洗脫下來，而後進行測定，計算回收率。
3.按權利要求2所述的測試強陰離子交換固相萃取柱性能的方法，其特徵在於所述強陰離子交換固相萃取柱活化，對強陰離子交換固相萃取柱衝洗，依次採用Siil甲醇、3ml 水、3ml的0. 05mol/L乙酸鈉水溶液活化，控制的液體流速在0. 3 1. Oml/min。
4.按權利要求2所述的測試強陰離子交換固相萃取柱性能的方法，其特徵在於所述目標化合物溶液為0. 6 1. 3mg/ml的磺基水楊酸或0. 6 1. 3mg/ml鳥苷5'-磷酸二鈉， 上樣體積為3 6ml。
5.按權利要求2所述的測試強陰離子交換固相萃取柱性能的方法，其特徵在於所述目標化合物洗脫前將固相萃取柱依次用3ml蒸餾水、3ml甲醇淋洗固相萃取柱，控制的液體流速在 0. 3 1. Oml/min。
6.按權利要求2所述的測試強陰離子交換固相萃取柱性能的方法，其特徵在於所述洗脫液為5%氨水的水溶液和甲醇，5%氨水的水溶液和甲醇的體積比為50-100 50-0，控制的液體流速在0. 3 1. Oml/min。
7.按權利要求2所述的測試強陰離子交換固相萃取柱性能的方法，其特徵在於所述測定回收率，將收集的洗脫液定容後通過液相色譜進行分析其濃度，而後計算回收率回收率 ％= c/c0X100%式中，c為洗脫溶液的濃度，C0為上樣標準溶液的濃度。
8.按權利要求2所述的測試強陰離子交換固相萃取柱性能的方法，其特徵在於所述液相色譜分析條件當目標化合物為磺基水楊酸時流動相為按體積比為70 30的乙腈和濃度為0. 05mol/L的磷酸二氫鉀；流速為1. O 1. 8ml/min ；柱溫為30°C ；紫外檢測波長為 215nm ；進樣量為10 20 μ L ；當目標化合物為鳥苷5』 -磷酸二鈉時流動相為按體積比為 30 70的乙腈和濃度為0. 05mol/L磷酸二氫鉀；流速為1. O 1. 8ml/min ；柱溫為30°C ； 紫外檢測波長為253nm ；進樣量為10 20 μ L。
全文摘要
本發明涉及色譜分析技術，具體的說是一種測試強陰離子交換固相萃取柱性能的方法。將強陰離子交換固相萃取柱特異性吸附目標化合物磺基水楊酸或鳥苷5′-磷酸二鈉，而後檢測目標化合物在固相萃取柱上的有效保留，進而實現對強陰離子交換固相萃取柱性能的測試。發明建立了液相色譜分離條件，並通過測試計算上樣回收率的方法進行不同品牌固相萃取柱性能綜合比較分析評價。該測試方法的建立，能夠有效評價強陰離子交換固相萃取柱的性能。
文檔編號G01N30/02GK102192957SQ201010118320
公開日2011年9月21日 申請日期2010年3月5日 優先權日2010年3月5日
發明者張慶合, 馬康 申請人:中國計量科學研究院