肝細胞生長因子的特異性結合物的製作方法

2023-10-09 23:14:54

肝細胞生長因子的特異性結合物的製作方法
【專利摘要】本發明描述與肝細胞生長因子(HGF)相互作用的特異性結合物。本發明還描述通過給予藥物有效量的HGF特異性結合物治療癌症的方法。本發明描述還描述用HGf特異性結合物檢測樣品中HGF的量的方法。
【專利說明】肝細胞生長因子的特異性結合物
本申請是申請日為2004年7月16日，申請號為200480026298.8 (PCT / US2004 /018936)，發明名稱為「肝細胞生長因子的特異性結合物」的發明專利申請的分案申請。
[0001]本申請要求2003年7月18日提交的美國臨時申請號60 / 488,681的權利，對於任何目的其通過引用結合到本文中。
發明領域
[0002]本發明涉及結合肝細胞生長因子(HGF)的特異性結合物。本發明還描述了組合物、所述組合物的生產方法以及治療各種病症的方法，所述病症例如某些類型的癌症，包括但不限於實體瘤和血液惡性癌症(hematologic malignancies)。
發明背景
[0003]肝細胞生長因子(HGF)已被鑑定為肝細胞的有效促分裂原。HGF還被鑑定為成纖維細胞和平滑肌的分泌性蛋白，其誘導上皮細胞的運動性。HGF在文獻中也稱為分散因子(SF)。
[0004]HGF是主要由間充質細胞產生的多功能異源二聚體多肽，其充當Met受體酪氨酸激酶(Met)的配體。人Met受體也稱為「c-met」。已顯示通過Met受體酪氨酸激酶-HGF (Met-HGF)途徑的信號轉導導致一系列細胞應答，包括但不限於增殖(有絲分裂)、分散(運動性)、通過基質刺激細胞運動(侵襲)和分支形態發生。體內Met-HGF信號轉導途徑(Met-HGF)在例如神經誘生、肝再生、傷口癒合、血管生成、生長、侵襲、形態分化和正常胚胎發育中起到作用。除這些功能之外，Met-HGF對在人類癌症中也起到作用。已顯示異常Met-HGF信號轉 導參與腫瘤發生，特別是參與侵襲性和轉移性表型的發展。已發現某些病原體如瘧疾利用異常Met-HGF信號轉導。參見Carrolo等，Nat Med.20039(11):1363-9 (2003年10月12日)，對於任何目的其內容通過引用結合到本文中。
[0005]此外，一些研究小組報告說，HGF在血管生成和在血管生成相關疾病(如增殖性糖尿病性視網膜病)中起到作用。參見例如Grant, D.S.等，Proc.Nat.Acad.Sc1.U.S.A.90(5) 1937-41 (1993) ；Bussolino 等，J.Cell Biol., 119(3):629-641 (1992)；Montesano 等，Cell，67:901-908(1991) ;Canon 等，Br.J.0phthalmol.84(7):732-5(2000)。HGF在凋亡或者說程序性細胞死亡中也可能起到作用。當正常調節機制未能維持增殖和凋亡之間的平衡，從而導致細胞過量積累時，即可產生腫瘤。取決於生物背景，HGF不但可實現增殖，而且可實現凋亡。
[0006]因為HGF參與許多生理過程，在某些情況下，擁有能調節其活性的分子是有益的。例如，在某些情況下，這種分子可用於治療各種不同類型的癌症。
發明概述
[0007]在某些實施方案中，本發明提供包含至少一個選自⑶Rla、⑶R2a和⑶R3a的互補決定區(CDR)的分離多肽。
其中⑶Rla包含胺基酸序列a bcdefghijklmnop q,其中胺基酸a選自賴氨酸、精氨酸或穀氨醯胺；胺基酸b選自絲氨酸或丙氨酸；胺基酸c是絲氨酸；胺基酸d是穀氨醯胺；胺基酸e選自絲氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；胺基酸f選自纈氨酸或異亮氨酸或者不存在；胺基酸g選自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸h選自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸i是絲氨酸或者不存在；胺基酸j是絲氨酸或者不存在；胺基酸k選自天冬醯胺、蘇氨酸或者不存在；胺基酸I選自天冬醯胺、異亮氨酸或纈氨酸；胺基酸m選自賴氨酸、精氨酸、天冬醯胺或天冬氨酸；胺基酸n選自天冬醯胺或絲氨酸；胺基酸ο選自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬醯胺；胺基酸P是亮氨酸；胺基酸q選自丙氨酸、甘氨酸或天冬醯胺；
其中CDR2a包含胺基酸序列r s t u v w x，其中胺基酸r選自色氨酸、丙氨酸、纈氨酸、穀氨酸或甘氨酸；胺基酸s是丙氨酸；胺基酸t是絲氨酸；胺基酸u選自蘇氨酸、絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸V選自精氨酸或亮氨酸；胺基酸w選自穀氨酸、穀氨醯胺或丙氨酸；胺基酸X選自絲氨酸、天冬醯胺或蘇氨酸；
其中CDR3a包含胺基酸序列y z a' h' c' d' e' f' g' h',其中胺基酸y選自穀氨醯胺或亮氨酸；胺基酸z選自穀氨醯胺、天冬醯胺或精氨酸；胺基酸a'選自酪氨酸、組氨酸、丙氨酸或絲氨酸；胺基酸V選自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬醯胺或異亮氨酸；胺基酸c'選自絲氨酸、甘氨酸或天冬醯胺；胺基酸d'選自脯氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；胺基酸^是脯氨酸；胺基酸P是脯氨酸或者不存在；胺基酸^是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或異亮氨酸；胺基酸V是蘇氨酸或天冬醯胺；
其中所述多肽與抗體重鏈聯合，能夠結合肝細胞生長因子(HGF)。
[0008]在某些實施方案中，本發明提供包含至少一個選自⑶Rib、⑶R2b和⑶R3b的互補決定區(CDR)的分離多肽
其中⑶Rlb包含胺基酸序列a b c d e f g，其中胺基酸a是絲氨酸或者不存在；胺基酸b選自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸c選自天冬氨酸、甘氨酸、絲氨酸、纈氨酸、蘇氨酸或異亮氨酸；胺基酸d是酪氨酸；胺基酸e選自酪氨酸或甘氨酸；胺基酸f選自異亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；胺基酸g選自組氨酸、天冬醯胺或絲氨酸；
其中⑶R2b包含胺基酸序列h ijklmnopqrstuvw x,其中胺基酸h選自色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、天冬醯胺或穀氨酸；胺基酸i選自異亮氨酸、苯丙氨酸或纈氨酸；胺基酸j選自天冬醯胺、絲氨酸、色氨酸或酪氨酸；胺基酸k選自脯氨酸、絲氨酸、酪氨酸或組氨酸；胺基酸I選自天冬醯胺、絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸m選自絲氨酸或甘氨酸；胺基酸η選自甘氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸ο選自甘氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸或天冬醯胺；胺基酸P選自蘇氨酸、異亮氨酸或賴氨酸；胺基酸q選自天冬醯胺或酪氨酸；胺基酸r選自酪氨酸或組氨酸；胺基酸s選自丙氨酸或天冬醯胺；胺基酸t選自穀氨醯胺、天冬氨酸或脯氨酸；胺基酸u選自賴氨酸或絲氨酸；胺基酸V選自苯丙氨酸、纈氨酸或亮氨酸；胺基酸w選自穀氨醯胺或賴氨酸；胺基酸X選自甘氨酸或絲氨酸；
其中 CDR3b包含胺基酸序列y z b' c' cT e' f' g' h' P k' l m' n' ο'Pi Qi r'，其中胺基酸y選自穀氨酸、天冬氨酸、絲氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸z選自亮氨酸、穀氨酸、天冬氨酸、組氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸Y選自穀氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；胺基酸V選自亮氨酸、天冬醯胺、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸V選自精氨酸、絲氨酸、穀氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸cT是甘氨酸或者不存在；胺基酸V選自色氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸P是天冬氨酸或者不存在；胺基酸^選自絲氨酸或精氨酸或者不存在；胺基酸V是絲氨酸或者不存在；胺基酸P選自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸V選自酪氨酸、穀氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸V選自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸1』選自酪氨酸、天冬氨酸、組氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸V選自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸選自甘氨酸、纈氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸V選自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸V選自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；胺基酸V是天冬氨酸；胺基酸r'選自纈氨酸、酪氨酸、異亮氨酸或脯氨酸；
其中所述多肽與抗體輕鏈聯合，能夠結合HGF。
[0009]在某些實施方案中，本發明提供分離的特異性結合物，其中所述特異性結合物包含:
(i)包含至少一個選自⑶Rla、⑶R2a和⑶R3a的互補決定區(OTR)的第一多肽 其中CDRla包含胺基酸序列a bcdefghijklmnop q,其中胺基酸a選自賴氨酸、精氨酸或穀氨醯胺；胺基酸b選自絲氨酸或丙氨酸；胺基酸c是絲氨酸；胺基酸d是穀氨醯胺；胺基酸e選自絲氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；胺基酸f選自纈氨酸或異亮氨酸或者不存在；胺基酸g選自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸h選自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸i是絲氨酸或者不存在；胺基酸j是絲氨酸或者不存在；胺基酸k選自天冬醯胺、蘇氨酸或者不存在；胺基酸I選自天冬醯胺、異亮氨酸或纈氨酸；胺基酸m選自賴氨酸、精氨酸、天冬醯胺或天冬氨酸；胺基酸η選自天冬醯胺或絲氨酸；胺基酸ο選自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬醯胺；胺基酸P是亮氨酸；胺基酸q選自丙氨酸、甘氨酸或天冬醯胺；
其中⑶R2a包含胺基酸序列r s t u v w x，其中胺基酸r選自色氨酸、丙氨酸、纈氨酸、穀氨酸或甘氨酸；胺基酸s是丙氨酸；胺基酸t是絲氨酸；胺基酸u選自蘇氨酸、絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸V選自精氨酸或亮氨酸；胺基酸w選自穀氨酸、穀氨醯胺或丙氨酸；胺基酸X選自絲氨酸、天冬醯胺或蘇氨酸；
其中CDR3a包含胺基酸序列y z a' h' c' d' e' f' g' h',其中胺基酸y選自穀氨醯胺或亮氨酸；胺基酸z選自穀氨醯胺、天冬醯胺或精氨酸；胺基酸a'選自酪氨酸、組氨酸、丙氨酸或絲氨酸；胺基酸W選自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬醯胺或異亮氨酸；胺基酸c'選自絲氨酸、甘氨酸或天冬醯胺；胺基酸d'選自脯氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；胺基酸^是脯氨酸；胺基酸P是脯氨酸或者不存在；胺基酸^是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或異亮氨酸；胺基酸V是蘇氨酸或天冬醯胺；
其中所述第一多肽與抗體重鏈聯合，能夠結合肝細胞生長因子(HGF)；
(ii)包含至少一個選自⑶Rib、⑶R2b或⑶R3b的互補決定區(OTR)的第二多肽
其中⑶Rlb包含胺基酸序列a b c d e f g，其中胺基酸a是絲氨酸或者不存在；氨基
酸b選自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸c選自天冬氨酸、甘氨酸、絲氨酸、纈氨酸、蘇氨酸或異亮氨酸；胺基酸d是酪氨酸；胺基酸e選自酪氨酸或甘氨酸；胺基酸f選自異亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；胺基酸g選自組氨酸、天冬醯胺或絲氨酸；其中⑶R2b包含胺基酸序列h ijklmnopqrstuvw x,其中胺基酸h選自色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、天冬醯胺或穀氨酸；胺基酸i選自異亮氨酸、苯丙氨酸或纈氨酸；胺基酸j選自天冬醯胺、絲氨酸、色氨酸或酪氨酸；胺基酸k選自脯氨酸、絲氨酸、酪氨酸或組氨酸；胺基酸I選自天冬醯胺、絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸m選自絲氨酸或甘氨酸；胺基酸η選自甘氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸ο選自甘氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸或天冬醯胺；胺基酸P選自蘇氨酸、異亮氨酸或賴氨酸；胺基酸q選自天冬醯胺或酪氨酸；胺基酸r選自酪氨酸或組氨酸；胺基酸s選自丙氨酸或天冬醯胺；胺基酸t選自穀氨醯胺、天冬氨酸或脯氨酸；胺基酸u選自賴氨酸或絲氨酸；胺基酸V選自苯丙氨酸、纈氨酸或亮氨酸；胺基酸w選自穀氨醯胺或賴氨酸；胺基酸X選自甘氨酸或絲氨酸；
其中 CDR3b包含胺基酸序列 y z a' b' c' c』 e' f' g' h' P k' l' m' n'o'P』 Q』 r'，其中胺基酸y選自穀氨酸、天冬氨酸、絲氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸z選自亮氨酸、穀氨酸、天冬氨酸、組氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸V選自穀氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；胺基酸V選自亮氨酸、天冬醯胺、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸選自精氨酸、絲氨酸、穀氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸cT是甘氨酸或者不存在；胺基酸V選自色氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸P是天冬氨酸或者不存在；胺基酸^選自絲氨酸或精氨酸或者不存在；胺基酸V是絲氨酸或者不存在；胺基酸P選自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸V選自酪氨酸、穀氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸V選自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸P選自酪氨酸、天冬氨酸、組氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸V選自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸V選自甘氨酸、纈氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸V選自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸V選自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；胺基酸V是天冬氨酸；胺基酸r'選自纈氨酸、酪氨酸、異亮氨酸或脯氨酸；
其中所述第二多肽與抗體輕鏈聯合，能夠結合HGF。
[0010]在某些實施方案中，本發明提供包含至少一種選自SEQ ID NO:24，26，28，30，32，34，36，38，40和42的胺基酸序列的分離多肽。
[0011]在某些實施方案中，本發明提供包含至少一種選自SEQ ID NO =25,27,29,31,33,35，37，39，41和43的胺基酸序列的分離多肽。
[0012]在某些實施方案中，本發明提供包含至少一種選自SEQ ID NO:1，3，5，7，9，11，13，15,17和19的核苷酸序列的分尚核酸分子。
[0013]在某些實施方案中，本發明提供包含至少一種選自SEQ ID NO:2,4,6,8,10,12,14,16,18和20的核苷酸序列的分尚核酸分子。
[0014]在某些實施方案中，本發明提供編碼包含至少一個選自CDRla、CDR2a和CDR3a的互補決定區(CDR)的多肽的分離核酸分子
其中⑶Rla包含胺基酸序列a bcdefghijklmnop q,其中胺基酸a選自賴氨酸、精氨酸或穀氨醯胺；胺基酸b選自絲氨酸或丙氨酸；胺基酸c是絲氨酸；胺基酸d是穀氨醯胺；胺基酸e選自絲氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；胺基酸f選自纈氨酸或異亮氨酸或者不存在；胺基酸g選自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸h選自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸i是絲氨酸或者不存在；胺基酸j是絲氨酸或者不存在；胺基酸k選自天冬醯胺、蘇氨酸或者不存在；胺基酸I選自天冬醯胺、異亮氨酸或纈氨酸；胺基酸m選自賴氨酸、精氨酸、天冬醯胺或天冬氨酸；胺基酸η選自天冬醯胺或絲氨酸；胺基酸ο選自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬醯胺；胺基酸P是亮氨酸；胺基酸q選自丙氨酸、甘氨酸或天冬醯胺；
其中⑶R2a包含胺基酸序列r s t u v w x，其中胺基酸r選自色氨酸、丙氨酸、纈氨酸、穀氨酸或甘氨酸；胺基酸s是丙氨酸；胺基酸t是絲氨酸、胺基酸u選自蘇氨酸、絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸V選自精氨酸或亮氨酸；胺基酸w選自穀氨酸、穀氨醯胺或丙氨酸；胺基酸X選自絲氨酸、天冬醯胺或蘇氨酸；
其中CDR3a包含胺基酸序列y z a' h' c' d' e' f' g' h',其中胺基酸y選自穀氨醯胺或亮氨酸；胺基酸z選自穀氨醯胺、天冬醯胺或精氨酸；胺基酸a'選自酪氨酸、組氨酸、丙氨酸或絲氨酸；胺基酸V選自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬醯胺或異亮氨酸；胺基酸c'選自絲氨酸、甘氨酸或天冬醯胺；胺基酸d'選自脯氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；胺基酸V是脯氨酸；胺基酸P是脯氨酸或者不存在；胺基酸^是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或異亮氨酸；胺基酸V是蘇氨酸或天冬醯胺；
其中所述多肽與抗體重鏈聯合，能夠結合肝細胞生長因子(HGF)。
[0015]在某些實施方案中，本發明提供編碼包含至少一個選自⑶Rib、⑶R2b和⑶R3b的互補決定區(CDR)的多肽的分離核酸分子
其中⑶Rlb包含胺基酸序列a b c d e f g，其中胺基酸a是絲氨酸或者不存在；胺基酸b選自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸c選自天冬氨酸、甘氨酸、絲氨酸、纈氨酸、蘇氨酸或異亮氨酸；胺基酸d是酪氨酸；胺基酸e選自酪氨酸或甘氨酸；胺基酸f選自異亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；胺基酸g選自組氨酸、天冬醯胺或絲氨酸；
其中⑶R2b包含胺基酸序列h ijklmnopqrstuvw x,其中胺基酸h選自色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、天冬醯胺或穀氨酸；胺基酸i選自異亮氨酸、苯丙氨酸或纈氨酸；胺基酸j選自天冬醯胺、絲氨酸、色氨酸或酪氨酸；胺基酸k選自脯氨酸、絲氨酸、酪氨酸或組氨酸；胺基酸I選自天冬醯胺、絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸m選自絲氨酸或甘氨酸；胺基酸η選自甘氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸ο選自甘氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸或天冬醯胺；胺基酸P選自蘇氨酸、異亮氨酸或賴氨酸；胺基酸q選自天冬醯胺或酪氨酸；胺基酸r選自酪氨酸或組氨酸；胺基酸s選自丙氨酸或天冬醯胺；胺基酸t選自穀氨醯胺、天冬氨酸或脯氨酸；胺基酸u選自賴氨酸或絲氨酸；胺基酸V選自苯丙氨酸、纈氨酸或亮氨酸；胺基酸w選自穀氨醯胺或賴氨酸；胺基酸X選自甘氨酸或絲氨酸；
其中 CDR3b包含胺基酸序列 y z a, b' c, d' e' f' g' h' P k' i' m' n' ο'Pi Qi r'，其中胺基酸y選自穀氨酸、天冬氨酸、絲氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸z選自亮氨酸、穀氨酸、天冬氨酸、組氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸Y選自穀氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；胺基酸V選自亮氨酸、天冬醯胺、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸V選自精氨酸、絲氨酸、穀氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸cT是甘氨酸或者不存在；胺基酸V選自色氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸P是天冬氨酸或者不存在；胺基酸^選自絲氨酸或精氨酸或者不存在；胺基酸V是絲氨酸或者不存在；胺基酸^選自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸V選自酪氨酸、穀氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸V選自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸選自酪氨酸、天冬氨酸、組氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸V選自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸選自甘氨酸、纈氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸V選自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸V選自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；胺基酸V是天冬氨酸；胺基酸r'選自纈氨酸、酪氨酸、異亮氨酸或脯氨酸；
其中所述多肽與抗體輕鏈聯合，能夠結合HGF。
[0016]在某些實施方案中，本發明提供產生選自1.24.1、1.29.1、1.60.1、1.61.3、
1.74.3、1.75.1,2.4.4,2.12.1,2.40.1 和 3.10.1 的抗體的分離細胞系。
[0017]在某些實施方案中，本發明提供抑制HGF結合Met的方法，所述方法包括給予HGF特異性結合物。
[0018]在某些實施方案中，本發明提供包含至少一種選自SEQ ID NO:164和165的胺基酸序列的多肽。
[0019]在某些實施方案中，本發明提供基本由至少一種選自SEQ ID NO:164和165的胺基酸序列組成的多肽。
[0020]在某些實施方案中，本發明提供能夠結合至少一種選自SEQ ID NO:164和165的胺基酸序列的特異性結合物。
[0021]在某些實施方案中，本發明提供能夠結合至少一種選自SEQ ID NO:164和165的胺基酸序列的抗體或抗原結合域。
[0022]在某些實施方案中，本發明提供獲得能夠結合肝細胞生長因子(HGF)的抗體的方法，所述方法包括將至少一種選自SEQ ID NO:164和165的多肽給予動物和從動物獲得能夠結合HGF的抗體。
[0023]在某些實施方案中，本發明提供通過給予包含至少一種選自SEQ ID NO:164和165的胺基酸序列的多肽，來降低或防止特異性結合物結合肝細胞生長因子(HGF)的方法。
[0024]在某些實施方案中，本發明提供通過給予由至少一種選自SEQ ID NO:164和165的胺基酸序列組成的多肽，來降低或防止特異性結合物結合肝細胞生長因子(HGF)的方法。
[0025]由本文提供的公開內容，本發明的其他實施方案將顯而易見。
本發明還涉及以下實施方案:
1.一種分離的多肽，所述多肽包含至少一個選自⑶RlaXDR2a和⑶R3a的互補決定區(CDR)
其中⑶Rla包含胺基酸序列a bcdefghijklmnop q,其中胺基酸a選自賴氨酸、精氨酸或穀氨醯胺；胺基酸b選自絲氨酸或丙氨酸；胺基酸c是絲氨酸；胺基酸d是穀氨醯胺；胺基酸e選自絲氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；胺基酸f選自纈氨酸或異亮氨酸或者不存在；胺基酸g選自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸h選自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸 i是絲氨酸或者不存在；胺基酸j是絲氨酸或者不存在；胺基酸k選自天冬醯胺、蘇氨酸或者不存在；胺基酸I選自天冬醯胺、異亮氨酸或纈氨酸；胺基酸m選自賴氨酸、精氨酸、天冬醯胺或天冬氨酸；胺基酸η選自天冬醯胺或絲氨酸；胺基酸ο選自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬醯胺；胺基酸P是亮氨酸；胺基酸q選自丙氨酸、甘氨酸或天冬醯胺；
其中⑶R2a包含胺基酸序列r stuvw X，其中胺基酸r選自色氨酸、丙氨酸、纈氨酸、穀氨酸或甘氨酸；胺基酸s是丙氨酸；胺基酸t是絲氨酸；胺基酸u選自蘇氨酸、絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸V選自精氨酸或亮氨酸；胺基酸w選自穀氨酸、穀氨醯胺或丙氨酸；胺基酸X選自絲氨酸、天冬醯胺或蘇氨酸；
其中CDR3a包含胺基酸序列y z a' h' c' d' e' f' g' h',其中胺基酸y選自穀氨醯胺或亮氨酸；胺基酸z選自穀氨醯胺、天冬醯胺或精氨酸；胺基酸a'選自酪氨酸、組氨酸、丙氨酸或絲氨酸；胺基酸W選自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬醯胺或異亮氨酸；胺基酸c'選自絲氨酸、甘氨酸或天冬醯胺；胺基酸d'選自脯氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；胺基酸^是脯氨酸；胺基酸P是脯氨酸或者不存在；胺基酸^是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或異亮氨酸；胺基酸V是蘇氨酸或天冬醯胺；
其中所述多肽與抗體重鏈聯合，能夠結合肝細胞生長因子(HGF)。
2.實施方案I的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQID NO:24，26，28，30，32，34，36，38，40和42的胺基酸序列。
3.實施方案I的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQID NO =60,61,62,63,64,65,66,67,68和69的胺基酸序列。
4.實施方案I的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQID NO:70,71,72,73,74,75,76，77，78和79的胺基酸序列。
5.實施方案I的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQID NO =80,81,82,83,84,85,86，87，88和89的氣基酸序列。
6.實施方案1-5中任一項的多肽，其中所述多肽是特異性結合物。
7.實施方案1-5中任一項的多肽，其中所述多肽是抗體。
8.一種分離的多肽，所述多肽包含至少一個選自⑶RlbXDR2b和⑶R3b的互補決定區(CDR)
其中⑶Rlb包含胺基酸序列ab cdef g，其中胺基酸a是絲氨酸或者不存在；胺基酸b選自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸c選自天冬氨酸、甘氨酸、絲氨酸、纈氨酸、蘇氨酸或異亮氨酸；胺基酸d是酪氨酸；胺基酸e選自酪氨酸或甘氨酸；胺基酸f選自異亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；胺基酸g選自組氨酸、天冬醯胺或絲氨酸；
其中⑶R2b包含胺基酸序列h ijklmnopqrstuvw x,其中胺基酸h選自色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、天冬醯胺或穀氨酸；胺基酸i選自異亮氨酸、苯丙氨酸或纈氨酸；胺基酸j選自天冬醯胺、絲氨酸、色氨酸或酪氨酸；胺基酸k選自脯氨酸、絲氨酸、酪氨酸或組氨酸；胺基酸I選自天冬醯胺、絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸m選自絲氨酸或甘氨酸；胺基酸η選自甘氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸ο選自甘氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸或天冬醯胺；胺基酸P選自蘇氨酸、異亮氨酸或賴氨酸；胺基酸q選自天冬醯胺或酪氨酸；胺基酸r選自酪氨酸或組氨酸；胺基酸s選自丙氨酸或天冬醯胺；胺基酸t選自穀氨醯胺、天冬氨酸或脯氨酸；胺基酸u選自賴氨酸或絲氨酸；胺基酸V選自苯丙氨酸、纈氨酸或亮氨酸；胺基酸w選自穀氨醯胺或賴氨酸；胺基酸X選自甘氨酸或絲氨酸；
其中CDR3b包含胺基酸序列y z a' b' c, d' e' f' g' h' P k' I' m' n' ο'Pi Qi r1，其中胺基酸y選自穀氨酸、天冬氨酸、絲氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸z選自亮氨酸、穀氨酸、天冬氨酸、組氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸V選自穀氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；胺基酸V選自亮氨酸、天冬醯胺、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸選自精氨酸、絲氨酸、穀氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸cT是甘氨酸或者不存在；胺基酸V選自色氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸P是天冬氨酸或者不存在；胺基酸^選自絲氨酸或精氨酸或者不存在；胺基酸V是絲氨酸或者不存在；胺基酸P選自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸V選自酪氨酸、穀氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸V選自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸P選自酪氨酸、天冬氨酸、組氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸V選自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸V選自甘氨酸、纈氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸V選自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸V選自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；胺基酸V是天冬氨酸；胺基酸r'選自纈氨酸、酪氨酸、異亮氨酸或脯氨酸；
其中所述多肽與抗體輕鏈聯合，能夠結合HGF。
9.實施方案8的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQID NO =25,27,29,31,33,35,37，39，41和43的胺基酸序列。
10.實施方案8的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQID NO =90,91,92,93,94,95,96，97，98和99的胺基酸序列。
11.實施方案8的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQID NO:100,101,102,103,104，105，106，107，108 和 109 的胺基酸序列。
12.實施方案8的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQID N0:110,111,112,113,114，115，116，117，118 和 119 的胺基酸序列。` 13.實施方案8-12中任一項的多肽，其中所述多肽是特異性結合物。
14.實施方案8-12中任一項的多肽，其中所述多肽是抗體。
15.一種分離的特異性結合物，其中所述特異性結合物包含:
(i)包含至少一個選自⑶Rla、⑶R2a和⑶R3a的互補決定區(OTR)的第一多肽
其中⑶Rla包含胺基酸序列a bcdefghijklmnop q,其中胺基酸a選自賴氨酸、精氨酸或穀氨醯胺；胺基酸b選自絲氨酸或丙氨酸；胺基酸c是絲氨酸、胺基酸d是穀氨醯胺；胺基酸e選自絲氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；胺基酸f選自纈氨酸或異亮氨酸或者不存在；胺基酸g選自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸h選自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸i是絲氨酸或者不存在；胺基酸j是絲氨酸或者不存在；胺基酸k選自天冬醯胺、蘇氨酸或者不存在；胺基酸I選自天冬醯胺、異亮氨酸或纈氨酸；胺基酸m選自賴氨酸、精氨酸、天冬醯胺或天冬氨酸；胺基酸η選自天冬醯胺或絲氨酸；胺基酸ο選自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬醯胺；胺基酸P是亮氨酸；胺基酸q選自丙氨酸、甘氨酸或天冬醯胺；
其中⑶R2a包含胺基酸序列r stuvw x，其中胺基酸r選自色氨酸、丙氨酸、纈氨酸、穀氨酸或甘氨酸；胺基酸s是丙氨酸；胺基酸t是絲氨酸；胺基酸u選自蘇氨酸、絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸V選自精氨酸或亮氨酸；胺基酸w選自穀氨酸、穀氨醯胺或丙氨酸；胺基酸X選自絲氨酸、天冬醯胺或蘇氨酸；其中CDR3a包含胺基酸序列y z a' b' c' d' e1 f' g' h',其中胺基酸y選自穀氨醯胺或亮氨酸；胺基酸z選自穀氨醯胺、天冬醯胺或精氨酸；胺基酸a'選自酪氨酸、組氨酸、丙氨酸或絲氨酸；胺基酸V選自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬醯胺或異亮氨酸；胺基酸c'選自絲氨酸、甘氨酸或天冬醯胺；胺基酸d'選自脯氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；胺基酸^是脯氨酸；胺基酸P是脯氨酸或者不存在；胺基酸^是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或異亮氨酸；胺基酸V是蘇氨酸或天冬醯胺；
其中所述第一多肽與抗體重鏈聯合，能夠結合肝細胞生長因子(HGF)；
(ii)包含至少一個選自⑶Rib、⑶R2b或⑶R3b的互補決定區(OTR)的第二多肽其中⑶Rlb包含胺基酸序列a b c d e f g，其中胺基酸a是絲氨酸或者不存在；胺基酸b選自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸c選自天冬氨酸、甘氨酸、絲氨酸、纈氨酸、蘇氨酸或異亮氨酸；胺基酸d是酪氨酸；胺基酸e選自酪氨酸或甘氨酸；胺基酸f選自異亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；胺基酸g選自組氨酸、天冬醯胺或絲氨酸；
其中⑶R2b包含胺基酸序列h ijklmnopqrstuvw x,其中胺基酸h選自色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、天冬醯胺或穀氨酸；胺基酸i選自異亮氨酸、苯丙氨酸或纈氨酸；胺基酸j選自天冬醯胺、絲氨酸、色氨酸或酪氨酸；胺基酸k選自脯氨酸、絲氨酸、酪氨酸或組氨酸；胺基酸I選自天冬醯胺、絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸m選自絲氨酸或甘氨酸；胺基酸η選自甘氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸ο選自甘氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸或天冬醯胺；胺基酸P選自蘇氨酸、異亮氨酸或賴氨酸；胺基酸q選自天冬醯胺或酪氨酸；胺基酸r選自酪氨酸或組氨酸；胺基酸s選自丙氨酸或天冬醯胺；胺基酸t選自穀氨醯胺、天冬氨酸或脯氨酸；胺基酸u選自賴氨酸或絲氨酸；胺基酸V選自苯丙氨酸、纈氨酸或亮氨酸；胺基酸w選自穀氨 醯胺或賴氨酸；胺基酸X選自甘氨酸或絲氨酸；
其中 CDR3b包含胺基酸序列y z b' c' cT e' f' g' h' P k' m' n' ο'Pi Qi r'，其中胺基酸y選自穀氨酸、天冬氨酸、絲氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸z選自亮氨酸、穀氨酸、天冬氨酸、組氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸Y選自穀氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；胺基酸V選自亮氨酸、天冬醯胺、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸V選自精氨酸、絲氨酸、穀氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸cT是甘氨酸或者不存在；胺基酸V選自色氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸P是天冬氨酸或者不存在；胺基酸^選自絲氨酸或精氨酸或者不存在；胺基酸V是絲氨酸或者不存在；胺基酸P選自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸V選自酪氨酸、穀氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸V選自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸選自酪氨酸、天冬氨酸、組氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸V選自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸V選自甘氨酸、纈氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸V選自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸V選自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；胺基酸V是天冬氨酸；胺基酸r'選自纈氨酸、酪氨酸、異亮氨酸或脯氨酸；
其中所述第二多肽與抗體輕鏈聯合，能夠結合HGF。
16.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含至少一種選自SEQ ID NO =24,26,28，30，32，34，36，38，40 和 42 的胺基酸序列。17.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含至少一種選自SEQID NO =25,27,29,31,33,35,37,39,41 和 43 的胺基酸序列。
18.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含SEQID NO:24和25的胺基酸序列。
19.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含SEQID NO:26和27的胺基酸序列。
20.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含SEQID NO:28和29的胺基酸序列。
21.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含SEQID NO:30和31的胺基酸序列。
22.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含SEQID NO:32和33的胺基酸序列。
23.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含SEQID NO:34和35的胺基酸序列。
24.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含SEQID NO:36和37的胺基酸序列。
25.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含SEQID NO:38和39的胺基酸序列。
26.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含SEQID NO:40和41的胺基酸序列。
27.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含SEQID NO:42和43的胺基酸序列。
28.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含至少一種選自SEQID NO =60,61,62,63，64，65，66，67,68 和 69 的氛基酸序列。
29.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含至少一種選自SEQID NO =70,71,72，73，74，75，76，77，78 和 79 的胺基酸序列。
30.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含至少一種選自SEQID NO =80,81,82，83，84，85，86，87，88 和 89 的胺基酸序列。
31.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含至少一種選自SEQID NO =90,91,92，93，94，95，96，97，98 和 99 的胺基酸序列。
32.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含至少一種選自SEQID NO =100,101,102，103，104，105，106，107，108 和 109 的胺基酸序列。
33.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含至少一種選自SEQID NO:110,111,112，113，114，115，116，117，118 和 119 的胺基酸序列。
34.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含
包含第一可變區的重鏈，所述第一可變區包含選自SEQ ID NO:25，27，29，31，33，35，37，39，41和43的胺基酸序列；
包含第二可變區的輕鏈，所述第二可變區包含選自SEQ ID NO:24，26，28，30，32，34，36，38，40 和42的胺基酸序列。35.實施方案34的特異性結合物，其中所述特異性結合物具有至少一種選自以下的性質:a)與至少一種選自 1.24.1,1.29.1,1.60.1,1.61.3,1.74.3,1.75.1,2.4.4,2.12.1、2.40.1和3.10.1的抗體競爭與HGF的結合；b)與至少一種選自1.24.1,1.29.1,1.60.K
1.61.3,1.74.3,1.75.1,2.4.4,2.12.1,2.40.1 和 3.10.1 的抗體結合相同的 HGF 表位；和 c)與至少一種選自 1.24.1,1.29.1,1.60.1,1.61.3,1.74.3,1.75.1,2.4.4,2.12.1、
2.40.1和3.10.1的抗體結合相同的抗原。
36.實施方案15的特異性結合物，所述結合物包含
包含第一可變區的重鏈，所述第一可變區包含的胺基酸序列與選自SEQ ID NO:25,27,29，31，33，35，37，39，41和43的胺基酸序列有至少90%、95%或99%的一致性；
包含第二可變區的輕鏈，所述第二可變區包含的胺基酸序列與選自SEQ ID NO:24,26,28，30，32，34，36，38，40和42的胺基酸序列有至少90%、95%或99%的一致性。 37.實施方案36的特異性結合物，其中所述特異性結合物具有至少一種選自以下的性質:a)與至少一種選自 1.24.1,1.29.1,1.60.1,1.61.3,1.74.3,1.75.1,2.4.4,2.12.1、
2.40.1和3.10.1的抗體競爭與HGF的結合；b)與至少一種選自1.24.1,1.29.1,1.60.1、
1.61.3,1.74.3,1.75.1,2.4.4,2.12.1,2.40.1 和 3.10.1 的抗體結合相同的 HGF 表位；和 c)與至少一種選自 1.24.1,1.29.1,1.60.1、1.61.3、1.74.3、1.75.1,2.4.4,2.12.1、
2.40.1和3.10.1的抗體結合相同的抗原。
38.實施方案15-37中任一項的特異性結合物，其中所述特異性結合物是抗體。
39.實施方案38的抗體，其中重鏈和輕鏈通過連接基團連接。
40.實施方案38的抗體,所述抗體為單Fv抗體。
41.實施方案38的抗體，所述抗體為免疫功能性免疫球蛋白片段。
42.實施方案38的抗體，所述抗體為Fab抗體。
43.實施方案38的抗體，所述抗體為Fab』抗體。
44.實施方案38的抗體，所述抗體為(Fab』)2抗體。
45.實施方案38的抗體，所述抗體為完全人抗體。
46.實施方案38的抗體，所述抗體為人源化抗體。
47.實施方案38的抗體，所述抗體為嵌合抗體。
48.實施方案38的抗體，其中所述抗體抑制HGF與c-Met受體的結合。
49.一種分離的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQ ID NO:24, 26，28，30，32，34，36，38，40和42的胺基酸序列。
50.一種分離的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQ ID NO:25，27，29，31，33，35，37，39，41和43的胺基酸序列。
51.一種分離的核酸分子，所述核酸分子包含至少一種選自SEQ ID ΝΟ:1，3，5，7，9，11，13，15，17和19的核苷酸序列。
52.—種分離的核酸分子,所述核酸分子包含至少一種選自SEQ ID NO:2,4,6,8,10,12，14，16，18和20的核苷酸序列。
53.一種分離的核酸分子，所述核酸分子編碼包含至少一個選自⑶
的互補決定區(CDR)的多肽
其中⑶Rla包含胺基酸序列a bcdefghijklmnop q,其中胺基酸a選自賴氨酸、精氨酸或穀氨醯胺；胺基酸b選自絲氨酸或丙氨酸；胺基酸c是絲氨酸；胺基酸d是穀氨醯胺；胺基酸e選自絲氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；胺基酸f選自纈氨酸或異亮氨酸或者不存在；胺基酸g選自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸h選自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸i是絲氨酸或者不存在；胺基酸j是絲氨酸或者不存在；胺基酸k選自天冬醯胺，蘇氨酸或者不存在；胺基酸I選自天冬醯胺，異亮氨酸或纈氨酸；胺基酸m選自賴氨酸、精氨酸、天冬醯胺或天冬氨酸；胺基酸η選自天冬醯胺或絲氨酸；胺基酸ο選自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬醯胺；胺基酸P是亮氨酸；胺基酸q選自丙氨酸、甘氨酸或天冬醯胺；
其中⑶R2a包含胺基酸序列r stuvw x，其中胺基酸r選自色氨酸、丙氨酸、纈氨酸、穀氨酸或甘氨酸；胺基酸s是丙氨酸；胺基酸t是絲氨酸、胺基酸u選自蘇氨酸、絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸V選自精氨酸或亮氨酸；胺基酸w選自穀氨酸、穀氨醯胺或丙氨酸；胺基酸X選自絲氨酸、天冬醯胺或蘇氨酸；
其中CDR3a包含胺基酸序列y z a' h' c' d' e' f' g' h',其中胺基酸y選自穀氨醯胺或亮氨酸；胺基酸z選自穀氨醯胺、天冬醯胺或精氨酸；胺基酸a'選自酪氨酸、組氨酸、丙氨酸或絲氨酸；胺基酸V選自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬醯胺或異亮氨酸；胺基酸c'選自絲氨酸、甘氨酸或天冬醯胺；胺基酸d'選自脯氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；胺基酸V是脯氨酸；胺基酸P是脯氨酸或者不存在；胺基酸^是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或異亮氨酸；胺基酸V是蘇氨酸或天冬醯胺； 其中所述多肽與抗體重鏈聯合，能夠結合肝細胞生長因子(HGF)。
54.實施方案53的核酸分子，所述核酸分子包含選自SEQID NO: 1，3，5，7，9，11，13，15，17和19的核苷酸序列。
55.一種分離的核酸分子，所述核酸分子編碼包含至少一個選自⑶RlbXDR2b和⑶R3b的互補決定區(CDR)的多肽
其中⑶Rlb包含胺基酸序列ab cdef g，其中胺基酸a是絲氨酸或者不存在；胺基酸b選自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸c選自天冬氨酸、甘氨酸、絲氨酸、纈氨酸、蘇氨酸或異亮氨酸；胺基酸d是酪氨酸；胺基酸e選自酪氨酸或甘氨酸；胺基酸f選自異亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；胺基酸g選自組氨酸、天冬醯胺或絲氨酸；
其中⑶R2b包含胺基酸序列h ijklmnopqrstuvw x,其中胺基酸h選自色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、天冬醯胺或穀氨酸；胺基酸i選自異亮氨酸、苯丙氨酸或纈氨酸；胺基酸j選自天冬醯胺、絲氨酸、色氨酸或酪氨酸；胺基酸k選自脯氨酸、絲氨酸、酪氨酸或組氨酸；胺基酸I選自天冬醯胺，絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸m選自絲氨酸或甘氨酸；胺基酸η選自甘氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸ο選自甘氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸或天冬醯胺；胺基酸P選自蘇氨酸、異亮氨酸或賴氨酸；胺基酸q選自天冬醯胺或酪氨酸；胺基酸r選自酪氨酸或組氨酸；胺基酸s選自丙氨酸或天冬醯胺；胺基酸t選自穀氨醯胺、天冬氨酸或脯氨酸；胺基酸u選自賴氨酸或絲氨酸；胺基酸V選自苯丙氨酸、纈氨酸或亮氨酸；胺基酸w選自穀氨醯胺或賴氨酸；胺基酸X選自甘氨酸或絲氨酸；
其中 CDR3b包含胺基酸序列 y z a, b' c' cT e' f' g' h'k' 1' m' n' ο
'Pi Qi r'，其中胺基酸y選自穀氨酸、天冬氨酸、絲氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸Z選自亮氨酸、穀氨酸、天冬氨酸、組氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸V選自穀氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；胺基酸V選自亮氨酸、天冬醯胺，甘氨酸、組氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸選自精氨酸、絲氨酸、穀氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸CT是甘氨酸或者不存在；胺基酸V選自色氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸P是天冬氨酸或者不存在；胺基酸g'選自絲氨酸或精氨酸或者不存在；胺基酸V是絲氨酸或者不存在；胺基酸P選自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸V選自酪氨酸、穀氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸V選自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸1'選自酪氨酸、天冬氨酸、組氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸選自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸選自甘氨酸、纈氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸V選自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸V選自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；胺基酸V是天冬氨酸；胺基酸r'選自纈氨酸、酪氨酸、異亮氨酸或脯氨酸；
其中所述多肽與抗體輕鏈聯合，能夠結合HGF。
56.實施方案55的核酸分子，所述核酸分子包含選自SEQ ID NO:2，4，6，8，10，12，14，.16，18和20的核苷酸序列。
57.一種宿主細胞，所述細胞包含實施方案53的核酸分子。
58.一種宿主細胞，所述細胞包含實施方案55的核酸分子。
59.一種分離的細胞系，所述細胞系產生實施方案34或36的特異性結合物。
60.實施方案59的分離的細胞系，其中所述特異性結合物是抗體。
61.一種分離的細胞系，所述細胞系產生選自1.24.1,1.29.1,1.60.1、1.61.3、.1.74.3、1.75.1,2.4.4,2.12.1,2.40.1 和 3.10.1 的抗體。
62.—種組合物，所述組合物包含實施方案34或36的特異性結合物及藥物可接受載體。
63.實施方案62的組合物，其中所述特異性結合物是抗體。
64.一種組合物，所述組合物包含實施方案34或36的特異性結合物及至少一種選自以下的藥物:安莎黴素抗生素的格爾德黴素家族的成員；Grb2 Src同源物2的拮抗劑；Gabl調節劑；顯性負性Src ；von-Hippel-Landau抑制劑；非類固醇抗炎藥物(NSAID) ;COX_2抑制劑；Celebrex?(塞來考昔)；Vi0XX?(羅非考昔)；血管內皮生長因子(VEGF) ;VEGF調節劑；成纖維細胞生長因子(FGF)調節劑；表皮生長因子(EGF)調節劑；角質形成細胞生長因子(KGF) ;KGF相關分子；KGF調節劑；基質金屬蛋白質酶(MMP)調節劑；IL_2 ；Proleukin ；Herceptin ；Rituxan ；Zevalin ；Erbitux ;依帕珠單抗；抗 OPGL 抗體;Ang_2 抑制劑；抗VEGF-2抗體；Avast in ;抗腫瘤劑；抗有絲分裂劑；抗代謝物和磺酸烷基酯。
65.實施方案64的組合物，其中所述特異性結合物是抗體。
66.一種治療患者的癌症的方法，所述方法包括給予實施方案62的組合物。
67.一種治療患者的癌症的方法，所述方法包括給予實施方案63的組合物。
68.一種治療患者的癌症的方法，所述方法包括給予實施方案64的組合物。
69.一種治療患者的癌症的方法，所述方法包括給予實施方案65的組合物。
70.一種治療患者的實體瘤的方法，所述方法包括給予實施方案62的組合物。
71.一種治療患者的實體瘤的方法，所述方法包括給予實施方案63的組合物。72.—種治療患者的實體瘤的方法，所述方法包括給予實施方案64的組合物。
73.一種治療患者的實體瘤的方法，所述方法包括給予實施方案65的組合物。
74.一種治療患者的癌症的方法，所述方法包括給予實施方案34或36的特異性結合物及至少一種化療治療。
75.實施方案74的方法，其中所述特異性結合物在給予化療治療之前給予。
76.實施方案74的方法，其中所述特異性結合物在給予化療治療的同時給予。
77.實施方案74的方法，其中所述特異性結合物在給予化療治療之後給予。
78.一種治療患者的癌症的方法，所述方法包括給予實施方案34或36的特異性結合物及放療。
79.實施方案78的方法，其中所述特異性結合物在給予放療之前給予。
80.實施方案78的方法，其中所述特異性結合物在給予放療的同時給予。
81.實施方案78的方法，其中所述特異性結合物在給予放療之後給予。
82.—種檢測樣品中肝細胞生長因子(HGF)水平的方法，所述方法包括將樣品與實施方案34或36的特異性結合物接觸。
83.實施方案82的方法，其中 所述特異性結合物是抗體。
84.—種抑制HGF與Met結合的方法，所述方法包括給予HGF特異性結合物。
85.實施方案84的方法，其中所述特異性結合物是抗體。
86.實施方案84的方法，其中所述特異性結合物包含至少一種選自SEQID NO =25,27,29,31,33,35,37,39,41 和 43 的胺基酸序列。
87.實施方案84的方法，其中所述特異性結合物包含至少一種選自SEQID NO =24,26,28，30，32，34，36，38，40 和 42 的胺基酸序列。
88.一種多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQ ID NO:164和165的胺基酸序列。
89.一種多肽，所述多肽基本由至少一種選自SEQ ID NO:164和165的胺基酸序列組成。
90.一種特異性結合物，所述結合物能夠結合至少一種選自SEQ ID NO:164和165的
胺基酸序列。
91.一種抗體或抗原結合域，其能夠結合至少一種選自SEQ ID NO:164和165的胺基酸序列。
92.一種獲得能夠結合肝細胞生長因子(HGF)的抗體的方法，所述方法包括給予動物至少一種選自SEQ ID NO:164和165的多肽，並從該動物獲得能夠結合HGF的抗體。
93.一種降低或防止任何一種實施方案18-27的特異性結合物與肝細胞生長因子(HGF)結合的方法，所述方法通過給予包含至少一種選自SEQ ID NO:164和165的胺基酸序列的多肽來進行。
94.一種降低或防止任何一種實施方案18-27的多肽與肝細胞生長因子(HGF)結合的方法,所述方法通過給予由至少一種選自SEQ ID NO:164和165的胺基酸序列組成的多肽來進行。
95.一種降低或防止特異性結合物與肝細胞生長因子(HGF)結合的方法，所述方法通過給予包含至少一種選自SEQ ID NO:164和165的胺基酸序列的多肽來進行。
96.一種降低或防止特異性結合物與肝細胞生長因子(HGF)結合的方法，所述方法通過給予由至少一種選自SEQ ID NO:164和165的胺基酸序列組成的多肽來進行。
附圖簡述
[0026]圖1A顯示某些抗HGF抗體的κ輕鏈的進化系統樹，說明它們的種系關係。種系基因標識標在抗體名稱的右邊。圖1B顯示某些抗HGF抗體的K輕鏈可變區的胺基酸序列比對。種系基因標識標在左邊。比對序列上的粗線表不⑶R區。
[0027]圖2Α顯示某些抗HGF抗體的Y重鏈的進化系統樹，說明它們的種系關係。種系基因標識標在抗體名稱的右邊。圖2Β顯示某些抗HGF抗體的Y重鏈可變區的胺基酸序列比對。種系基因標識標在左邊。比對序列上的粗線表不⑶R區。
[0028]圖3顯示編碼某些抗HGF抗體的輕鏈和重鏈的可變區的DNA序列。對於每個序列，均標出抗體名稱、種系標識和序列ID。下劃線為天然信號肽序列。還顯示人K、IgGl和IgG2恆定區的DNA序列。[0029]圖4顯示某些抗HGF抗體的輕鏈和重鏈的可變區的胺基酸序列。對於每個序列，均標出抗體名稱、種系標識和序列ID。下劃線為天然信號肽序列。還顯示人K、IgGl和IgG2恆定區的胺基酸序列。
[0030]圖5顯示某些抗HGF抗體的輕鏈和重鏈的互補決定區(CDR)的胺基酸序列。對於每個序列，均標出抗體名稱和序列ID。圖5A顯示某些抗HGF抗體的輕鏈CDR的胺基酸序列，其中在圖5A中:
輕鏈 CDRl 共有序列(CDRla) (SEQ ID NO:166):ab c d e fg h i j k I m η o pq，其
中胺基酸a選自賴氨酸、精氨酸或穀氨醯胺；胺基酸b選自絲氨酸或丙氨酸；胺基酸c是絲氨酸；胺基酸d是穀氨醯胺；胺基酸e選自絲氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；胺基酸f選自纈氨酸或異亮氨酸或者不存在；胺基酸g選自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸h選自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸i是絲氨酸或者不存在；胺基酸j是絲氨酸或者不存在；胺基酸k選自天冬醯胺、蘇氨酸或者不存在；胺基酸I選自天冬醯胺、異亮氨酸或纈氨酸；胺基酸m選自賴氨酸、精氨酸、天冬醯胺或天冬氨酸；胺基酸η選自天冬醯胺或絲氨酸；胺基酸ο選自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬醯胺；胺基酸P是亮氨酸；胺基酸q選自丙氨酸、甘氨酸或天冬醯胺
輕鏈CDR2共有序列(CDR2a) (SEQ ID NO:167):r s t u v w x，其中胺基酸r選自色氨酸、丙氨酸、纈氨酸、穀氨酸或甘氨酸；胺基酸s是丙氨酸；胺基酸t是絲氨酸；胺基酸u選自蘇氨酸、絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸V選自精氨酸或亮氨酸；胺基酸W選自穀氨酸、穀氨醯胺或丙氨酸；胺基酸X選自絲氨酸、天冬醯胺或蘇氨酸
輕鏈 CDR3 共有序列(CDR3a) (SEQ ID NO:168):yza/ b' c' d' e' f' g' h'，其中胺基酸y選自穀氨醯胺或亮氨酸；胺基酸z選自穀氨醯胺、天冬醯胺或精氨酸；胺基酸a'選自酪氨酸、組氨酸、丙氨酸或絲氨酸；胺基酸b'選自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬醯胺或異亮氨酸；胺基酸V選自絲氨酸、甘氨酸或天冬醯胺；胺基酸cT選自脯氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；胺基酸^是脯氨酸；胺基酸P是脯氨酸或者不存在；胺基酸^是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或異亮氨酸；胺基酸V是蘇氨酸或天冬醯胺。
圖5B顯示某些抗HGF抗體的重鏈⑶R的胺基酸序列，其中在圖5B中:
重鏈cDRl共有序列(cDRlb) (SEQ ID NO:169):a b c d e f g，其中胺基酸a是絲氨酸或者不存在；胺基酸b選自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸c選自天冬氨酸、甘氨酸、絲氨酸、纈氨酸、蘇氨酸或異亮氨酸；胺基酸d是酪氨酸；胺基酸e選自酪氨酸或甘氨酸；胺基酸f選自異亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；胺基酸g選自組氨酸、天冬醯胺或絲氨酸重鏈 cDR2 共有序列(cDR2b) (SEQ ID No:170):hi j k Im n o p qr st u y w x、其中胺基酸h選自色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、天冬醯胺或穀氨酸；胺基酸i選自異亮氨酸、苯丙氨酸或纈氨酸；胺基酸j選自天冬醯胺、絲氨酸、色氨酸或酪氨酸；胺基酸k選自脯氨酸、絲氨酸、酪氨酸或組氨酸；胺基酸1選自天冬醯胺、絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸m選自絲氨酸或甘氨酸；胺基酸n選自甘氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸ο選自甘氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸或天冬醯胺；胺基酸P選自蘇氨酸、異亮氨酸或賴氨酸；胺基酸q選自天冬醯胺或酪氨酸；胺基酸r選自酪氨酸或組氨酸；胺基酸s選自丙氨酸或天冬醯胺；胺基酸t選自穀氨醯胺、天冬氨酸或脯氨酸；胺基酸u選自賴氨酸或絲氨酸；胺基酸V選自苯丙氨酸、纈氨酸或亮氨酸；胺基酸w選自穀氨醯胺或賴氨酸；胺基酸X選自甘氨酸或絲氨酸重鏈cDR3共有序列(cDR3b) (SEQ ID NO:171):y z a' b' c' d' e' f' g' h' i' j'k'i' m'n'o'p'q'r'，其中胺基酸y選自穀氨酸、天冬氨酸、絲氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸z選自亮氨酸、穀氨酸、天冬氨酸、組氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸a'選自穀氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；胺基酸b'選自亮氨酸、天冬醯胺、甘氨酸，組氨酸，酪氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸c'選自精氨酸，絲氨酸、穀氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸d'是甘氨酸或者不存在；胺基酸V選自色氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸f'是天冬氨酸或者不存在；胺基酸g'選自絲氨酸或精氨酸或者不存在；胺基酸h'是絲氨酸或者不存在；胺基酸P選自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸j'選自酪氨酸、穀氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸k'選自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸l'選自酪氨酸、天冬氨酸、組氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸m'選自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸Y選自甘氨酸、纈氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸V選自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸p'選自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；胺基酸q'是天冬氨酸；胺基酸r'選自纈氨酸、酪氨酸、異亮氨酸或脯氨酸。
[0031]圖6顯示實施例8中討論的某些抗HGF抗體的Kd測定結果。圖6A顯示動力學法所得數據。圖6B顯示平衡/溶液(equilibrium / solution)法所得數據。
[0032]圖7顯示實施例8中討論的蛋白質印跡的放射自顯影圖，所述蛋白質印跡測試某些抗體結合人HGF和結合小鼠HGF的能力。左邊的圖片(1-4道)顯示在非還原條件下進行實驗所得的放射自顯影圖。右邊的圖片(5-8道)顯示在還原條件下進行實驗所得的放射自顯影圖。
[0033]圖8顯示實施例8中討論的實驗所得的螢光激活細胞分選儀(FACS)數據，所述實驗評估某些抗體與某些靶標的結合。圖8的上部顯示無特異性結合物的對照樣品FACS數據。圖片I和2(左起)顯示分別與FITC和PE孵育的無靶標的對照樣品的數據。圖片3和4顯示分別包含FITC和PE標記的d5HGF、但無特異性結合物的對照樣品的數據。實線下面的圖片顯示測試五種抗HGF抗體的實驗的FACS數據。對於每種抗體，第一個圖片(左起)顯示無靶標的對照樣品的數據，第二至第四個圖片顯示其中靶標分別為人HGF、小鼠HGF和人d5HGF的實驗的數據。[0034]圖9A顯示編碼鄰近多克隆位點的親和素的質粒的示意圖，如在實施例8中討論，所述質粒用以產生包含親和素和靶蛋白的融合蛋白。圖9B顯示雞親和素的序列。
[0035]圖1OA和IOB顯示某些融合蛋白的示意圖及實施例8C和8D討論的使用這些融合蛋白的結合測定的結果。圖1OC顯示某些含點突變、插入或缺失的融合蛋白的示意圖。圖1OD顯示人和小鼠HGF在胺基酸451-731區域中的胺基酸序列(分別為SEQ ID N0.120和121)，同時標出相應的共有序列(SEQ ID N0.122)。
[0036]圖1lA和IlB顯示實施例8E中討論的人HGF的蛋白酶保護實驗的HPLC分析結果。圖1lC顯示該實驗中通過結合抗體2.12.1而被保護免受蛋白酶解消化的肽的胺基酸序列。
[0037]圖12A-12D顯示實施例8中討論的競爭性結合測定的結果。
[0038]圖13顯示實施例9中討論的中和測定的IC50數據。
[0039]圖14顯示實施例10中討論的PC3細胞中和測定的數據。
[0040]圖15顯示實施例10中討論的U-87細胞抑制測定的數據。
[0041]圖16顯示實施例11中討論的實驗的結果，所述實驗評估某些抗HGF抗體對小鼠中U-87MG異種移植腫瘤的作用。圖16A顯示微量殘留疾病(minimal residual disease)模型中抗體2.4.4對U-87MG異種移植腫瘤生長的劑量反應數據。圖16B顯示確立的疾病模型中抗體2.4.4對U-87異種移植腫瘤生長的劑量反應數據。圖16C、16D、16E和16F顯示U-87微量殘留疾病模型(16C和16D)中或U-87確立的疾病模型(16E和16F)中檢測抗HGF抗體的直接比較( head-to-head)實驗的數據。
某些示例性實施方案詳述
[0042]應當理解，以上概述和以下詳述只是示例性和說明性的，並不是對要求保護的本發明進行限制。在本申請中，除非另有具體規定，使用單數形式包含複數含義。在本申請中，除非另有規定，使用「或(或者)」表示「和/或」。此外，使用術語「包括」及其其他形式如「包括的」並不表示限制意義。還有，除非另有具體規定，術語如「元件」或「組分」不但涵括包含一個單位的元件和組分，而且涵括包含不只一個亞單位的元件和組分。同樣，使用術語「部分(portion) 」可包括部分(moiety)的一部分(part)或者整個部分(moiety)。
[0043]本文使用的段落標題只是為了組織目的，不能解釋為限制所描述的主題。本申請中引用的所有文件或文件部分，包括但不限於專利、專利申請、文章、書籍和論文，對於任何目的通過引用整體清楚地結合到本文中。
定義
[0044]重組DNA、寡核苷酸合成和組織培養和轉化(例如電穿孔、脂質轉染)可使用標準技術。酶反應和純化技術可按照廠商說明書，或者按照本領域的常規，或者按照本文的描述來進行。前述技術和方法通常可按照本領域公知的常規方法，或者按照本說明書中引用和討論的各種一般的和更具體參考文獻的描述來進行。參見例如Sambrook等，MolecularCloning:A Laboratory Manual (第 2 版，Cold Spring Harbor Laboratory Press, ColdSpring Harbor7N.Y.(1989)),對於任何目的其通過引用結合到本文中。除非提供了具體的定義，本文描述的涉及分析化學、合成有機化學及醫學和藥物化學的所用術語以及實驗室方法和技術是本領域公知和常用的。化學合成、化學分析、藥物製備、製劑和傳遞以及患者治療可使用標準技術。[0045]按照本發明公開內容進行使用的以下術語，除非另有指明，應理解為具有以下含乂:
[0046]術語「肝細胞生長因子」或「HGF」指Nakamura 等，Nature342:440-443 (1989)中提出的多肽或其片斷以及相關多肽，包括但不限於等位變體、剪接變體、衍生變體、置換變體、缺失變體和/或插入變體、融合多肽和種間同源物。在某些實施方案中，HGF多肽包括末端殘基，例如但不限於前導序列殘基、靶向殘基、氨基末端甲硫氨酸殘基、賴氨酸殘基、tag殘基和/或融合蛋白殘基。
[0047]術語「特異性結合物」指特異性結合靶標的天然或非天然分子。特異性結合物的實例包括但不限於蛋白質、肽、核酸、碳水化合物、脂質和小分子化合物。在某些實施方案中，特異性結合物是抗體。在某些實施方案中，特異性結合物是抗原結合區。
[0048]術語「HGF特異性結合物」指特異性結合HGF的任何部分的特異性結合物。在某些實施方案中，HGF特異性結合物是抗HGF抗體。在某些實施方案中，特異性結合物是抗原結合區。
[0049]術語「多克隆抗體」指結合同一抗原的不同表位的抗體的異質混合物。
[0050]術語「單克隆抗體」指由同一核酸分子編碼的一組抗體。在某些實施方案中，單克隆抗體由單一雜交瘤或其他細胞系產生，或者由轉基因哺乳動物產生。單克隆抗體通常識別同一表位。術語「單克隆」不限於任何具體的抗體產生方法。
[0051]術語「嵌合抗體」指這樣的抗體，其中抗體的一部分與具體物種或具體抗體類別的序列同源，但抗體的另一部分與不同物種或抗體類別的序列同源。參見例如美國專利第4，816，567 號和 Morrison 等，Proc Natl Acad Sci (USA)，81:6851-6855 (1985)。
[0052]術語「CDR移植抗體」指其中來自一種抗體的CDR插入到另一種抗體的構架中的抗體。在某些實施方案中，CDR的來源抗體和構架的來源抗體屬不同的種。在某些實施方案中，CDR的來源抗體和構架的來源抗體屬不同的同種型。
[0053]術語「多特異性抗體」指其中兩個或更多個可變區結合不同表位的抗體。表位可以在相同或不同的靶標上。在某些實施方案中，多特異性抗體是識別相同或不同抗原上的兩種不同表位的「雙特異性抗體」。
[0054]術語「催化抗體」指其中連接有一個或多個催化部分的抗體。在某些實施方案中，催化抗體是包含細胞毒部分的細胞毒抗體。
[0055]術語「人源化抗體」指這樣的抗體，其中抗體構架區的全部或部分來源於人，但一個或多個CDR區的全部或部分來源於另一物種，如小鼠。
[0056]術語「完全人抗體」指其中⑶R和構架均基本包含人序列的抗體。在某些實施方案中，完全人抗體在非人哺乳動物中產生，包括但不限於小鼠、大鼠和兔形目動物。在某些實施方案中，完全人抗體在雜交瘤細胞中產生。在某些實施方案中，完全人抗體重組產生。
[0057]術語「抗獨特型抗體」指特異性結合另一種抗體的抗體。
[0058]術語「特異性結合」指特異性結合物以比其結合非靶標更大的親和力結合靶標的能力。在某些實施方案中，特異性結合指結合靶標的親和力是對非靶標的親和力的至少10、
50、100、250、500或1000倍大。在某些實施方案中，親和力通過親和ELISA測定來檢測。在某些實施方案中，親和力通過BIAcore測定來檢測。在某些實施方案中，親和力通過動力學法來檢測。在某些實施方案中，親和力通過平衡/溶液法來檢測。[0059]術語「表位」指能夠被特異性結合物結合的分子部分。在某些實施方案中，表位通常包含分子的化學活性表面基團，例如胺基酸或碳水化合物側鏈，且具有特異性三維結構特徵以及特異性電荷特徵。表位可以是連續的或者非連續的。在某些實施方案中，表位可以是模擬的，因為它們包含與用以產生抗體的表位相似的三維結構，但不包含或者只包含一些見於用以產生抗體的表位的胺基酸殘基。
[0060]術語「抑制和/或中和表位」指這樣的表位，其當被特異性結合物結合時，導致體內、體外和/或原位生物活性下降。在某些實施方案中，中和表位位於或者涉及靶標的生物活性區域。
[0061]術語「激活表位」指這樣的表位，其當被特異性結合物結合時，導致體內、體外和/或原位生物活性激活或維持。在某些實施方案中,激活表位位於或者涉及祀標的生物活性區域。
[0062]本文所用的術語「分離多核苷酸」意指基因組、cDNA的多核苷酸，或者合成起源的多核苷酸，或者它們的某些組合，由於其來源，「分離多核苷酸」(I)與其中天然發現該分離多核苷酸的多核苷酸的全部或一部分無關，(2)與其天然不相連的多核苷酸相連，或者(3)沒有作為更大序列的一部分天然出現。
[0063]本文所指的術語「分離蛋白」意指由cDNA、重組RNA編碼或者合成來源的蛋白質，或者它們的某些組合，其(I)沒有至少某些其通常發現與其伴隨的蛋白質，(2)基本沒有相同來源(例如相同物種)的其他蛋白質，(3)由不同物種的細胞表達，(4)在自然界中不出現。
[0064]術語「多肽」在本文中用作普通術`語，指天然蛋白質或這種蛋白質缺失、插入和/或置換天然序列的一個或多個胺基酸的修飾。在某些實施方案中，多肽缺失、插入和/或置換至少一個但不超過50、30、20、15、10、8、5或3個天然序列的胺基酸。
[0065]本文所用的應用於某個對象的術語「天然」指該對象可在自然界中找到。例如，存在於可從自然界來源分離到的生物體(包括病毒)、且未被人們在實驗室中或者以其他方式有意修飾的多肽或多核苷酸序列是天然的。
[0066]本文所用的術語「有效連接」指組分處於允許它們以其預定方式發揮功能的關係之中。例如，與編碼序列「有效連接」的控制序列如此連接，使得在與控制序列相容的條件下，編碼序列的表達得以實現。
[0067]本文所用的術語「控制序列」指可實現它們所連接的編碼序列的表達和加工的多核苷酸序列。取決於宿主生物體，這種控制序列的種類可能不同。根據某些實施方案,原核生物的控制序列可包括啟動子、核糖體結合位點和轉錄終止序列。根據某些實施方案，真核生物的控制序列可包括啟動子、一種或多種增強子和轉錄終止序列。在某些實施方案中，「控制序列」可包括前導序列和/或融合伴侶序列(fusion partner sequence)。
[0068]本文所指的術語「多核苷酸」意指長度為至少10個鹼基的聚合形式的核苷酸。在某些實施方案中，鹼基可為核糖核酸或脫氧核糖核酸或任何一類型的核苷酸的修飾形式。該術語包括單鏈和雙鏈形式的DNA。
[0069]本文所指術語「寡核苷酸」包括通過天然和/或非天然寡核苷酸鍵連接在一起的天然的和修飾的核苷酸。寡核苷酸是多核苷酸的子集，通常包含200個鹼基或更少鹼基的長度。在某些實施方案中，寡核苷酸的長度為10-60個鹼基。在某些實施方案中，寡核苷酸的長度為12、13、14、15、16、17、18、19或20-40個鹼基。寡核苷酸可以是單鏈或雙鏈，例如
用於構建基因突變體。寡核苷酸可以是有義或反義寡核苷酸。
[0070]術語「天然核苷酸」包括脫氧核糖核酸和核糖核酸。術語「修飾核苷酸」包括帶有修飾或取代糖基等的核苷酸。術語「寡核苷酸鍵」包括寡核苷酸鍵如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、苯胺基硫代磷酸酯(phosphoroani1thioate)、苯胺基磷酸酯(phoshoraniIadate)、氨基憐酸酯等。參見例如 LaPlanche 等,Nucl.Acids Res.，14:9081 (1986) ；Stec 等，J.Am.Chem.Soc.，106:6077 (1984) ；Stein 等，Nucl.Acids Res.，16:3209(1988) ;Zon 等，Ant1-Cancer Drug Design, 6:539 (1991) ;Zon 等，Oligonucleotidesand Analogs:A Practical Approach,第 87-108 頁(F.Eckstein 編輯,Oxford UniversityPress, Oxford England(1991)) ；Stec 等，美國專利第 5, 151, 510 號；UhImann 和 Peyman,Chemical Reviews, 90:543 (1990)，對於任何目的這些文獻的公開內容通過引用結合到本文中。在某些實施方案中，寡核苷酸可包括用於檢測的標記。
[0071]可通過公知的方法容易地計算相關多肽的一致性和相似性。這種方法包括但不限於以下文獻中描述的方法:Computational Molecular Biology, Lesk, A.Μ.(編輯),Oxford University Press, New York(1988) ；Biocomputing:Informatics andGenome Projects, Smith, D.W.(編輯)，Academic Press, New York (1993) ；ComputerAnalysis of sequence Data, Part I, Griffin, A.M.和 Griffin, H.G.(編輯)，HumanaPress, New Jersey (1994) ；Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G.,Academic Press (1987) ；Sequence Analysis Primer, Gribskov, M.^PDevereux, J.(編輯)，M.Stockton Press, New York(1991)；及 Carillo 等，SIAM J.Applied Math.,48:1073(1988)。
[0072]某些一致性測定方法被設計成在受試序列之間產生最大配對。一致性測定方法在可公開獲得的計 算機程序中有描述。測定兩個序列之間一致性的電腦程式方法包括但不限於 GCG 程序包，包括 GAP (Devereux 等，Nucl.Acid.Res.，12:387 (1984)；Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, WI> BLASTP> BLASTN 和FASTA (Altschul 等，J.Mol.Biol.,215:403-410 (1990))。BLASTX 程序可從美國國家生物技術信息中心(National Center for Biotechnology Information, NCBI)和其他來源(BLAST 手冊，Altschul 等 NCB / NLM / NIH Bethesda, MD20894 ；Altschul 等，出處同上(1990))公開獲得。也可用著名的Smith Waterman算法測定一致性。
[0073]某些用以比對兩個胺基酸序列的比對方案可能導致兩個序列中只有較短一段區域配對，而這個小的比對區域可具有非常高的序列一致性，儘管兩個全長序列之間並沒有顯著的關係。因此，在某些實施方案中，選定的比對方法(GAP程序)將導致跨越靶多肽的至少50個連續胺基酸的比對。
[0074]例如，使用GAP 計算機算法(Genetics Computer Group, University ofWisconsin, Madison, WI)，比對兩個待測定序列一致性百分率的多肽，以對它們各自的胺基酸進行最佳配對(「配對範圍」，由算法確定)。在某些實施方案中，空位開放罰分(計算為3乘以平均對角線；「平均對角線」是所用的比較矩陣的對角線的平均值；「對角線」是由具體比較矩陣分配給各個完全胺基酸配對的分數或數值)和空位拓展罰分(其通常為空位開放罰分的十分之一)，以及比較矩陣如PAM250或BL0SUM62與算法一起使用。在某些實施方案中，算法中也使用標準的比較矩陣(PAM 250比較矩陣參見Dayhoff等,Atlas of ProteinSequence and Structure, 5 (3) (1978) ;BL0SUM62 比較矩陣參見 Henikoff 等，Proc.Natl.Acad.Sci 美國，89:10915-10919 (1992))。
[0075]在某些實施方案中，用於多肽序列比較的參數包括以下:
算法:Needleman 等，J.Mol.Biol.，48:443-453 (1970)；
比較矩陣:Henikoff等，出處同上(1992)的BLOSUM 62 ；
空位罰分:12 空位長度罰分:4 相似性閾值:0
[0076]GAP程序可使用以上參數。在某些實施方案中，上述參數是使用GAP算法進行多肽比較的默認參數(末端空位無罰分)。[0077]在某些實施方案中，特異性結合物包含這樣的重鏈，其包含的可變區包含與選自SEQ ID NO:25，27，29，31，33，35，37，39，41和43的胺基酸序列有至少90% —致性的胺基酸序列。在某些實施方案中，特異性結合物包含這樣的重鏈，其包含的可變區包含與選自SEQID NO:25,27,29,31,33,35,37,39,41和43的胺基酸序列有至少95%—致性的胺基酸序列。在某些實施方案中，特異性結合物包含這樣的重鏈，其包含的可變區包含與選自SEQ IDNO:25，27，29，31，33，35，37，39，41和43的胺基酸序列有至少99%—致性的胺基酸序列。
[0078]在某些實施方案中，特異性結合物包含這樣的輕鏈，其包含的可變區包含與選自SEQ ID NO: 24，26，28，30，32，34，36，38，40和42的胺基酸序列有至少90% —致性的胺基酸序列。在某些實施方案中，特異性結合物包含這樣的輕鏈，其包含的可變區包含與選自SEQID NO:24，26，28，30，32，34，36，38，40和42的胺基酸序列有至少95% —致性的胺基酸序列。在某些實施方案中，特異性結合物包含這樣的輕鏈，其包含的可變區包含與選自SEQ IDNO: 24，26，28，30，32，34，36，38，40和42的胺基酸序列有至少99%—致性的胺基酸序列。
[0079]本文所用的二十種常見胺基酸及其縮寫遵循常規用法。參見Immunology--ASynthesis,(第 2 版，E.S.Golub 和 D.R.Gren (編輯)，Sinauer Associates, Sunderland,Mass, (1991))，對於任何目的其通過引用結合到本文中。二十種常見胺基酸的立體異構體(例如D-胺基酸)、非天然胺基酸如α _，α - 二取代胺基酸、N-烷基胺基酸、乳酸及其他非常見胺基酸也可以作為本發明多肽的合適組分。非常見胺基酸的實例包括:4_羥脯氨酸、
Y-羧基穀氨酸、a-N, N, N-三甲基賴氨酸、g-N-乙醯賴氨酸、O-磷酸絲氨酸、N-乙醯絲氨酸、N-甲醯甲硫氨酸、3-甲基組氨酸、5-羥賴氨酸、σ -N-甲基精氨酸及其他類似的胺基酸和亞胺基酸(例如4-羥脯氨酸)。依據標準用法和慣例，在本文所用的多肽符號中，左手方向是氨基末端方向，右手方向是羧基末端方向。
[0080]類似地，除非另有指定，單鏈多核苷酸序列的左手末端是5'末端；雙鏈多核苷酸序列的左手方向稱為Y方向。新生RNA轉錄物的Y至:V添加方向稱為轉錄方向；DNA鏈上具有與RNA相同的序列且位於RNA轉錄物的5'末端的5'的序列區域稱為「上遊序列」;DNA鏈上具有與RNA相同的序列且位於RNA轉錄物的:V末端的Y的序列區域稱為「下遊序列」。
[0081]保守胺基酸置換可包括非天然胺基酸殘基，其通過化學肽合成而不是通過在生物體系中合成而摻入。這些保守胺基酸置換包括肽模擬物和胺基酸部分的其他顛倒或反向形式。
[0082]根據共同的側鏈性質，可將天然殘基分類如下:
1)疏水性殘基:正亮氨酸，Met,Ala, Val, Leu, He ；
2)中性親水性殘基:Cys，Ser，Thr，Asn，Gln；
3)酸性殘基:Asp,Glu ；
4)鹼性殘基:His,Lys, Arg ；
5)影響鏈方向的殘基:Gly,Pro ；
6)芳族殘基:Trp,Tyr, Phe。
[0083]例如，非保守置換可包括這些類別中的某一類別的成員與另一類別的成員互換。這種置換殘基可被引入到人抗體中與非人抗體同源的區域，或者被引入到分子中的非同源區域。
[0084]根據某些實施方案，在造成這種變化時，可考慮胺基酸的親水性指數。根據每種胺基酸的疏水性和電荷特徵，給予其親水性指數。它們為:異亮氨酸(+4.5);繳氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8);苯丙氨酸(+2.8);半胱氨酸/胱氨酸(+2.5);甲硫氨酸(+1.9);丙氨酸(+1.8);甘氨酸(-0.4);蘇氨酸(-0.7);絲氨酸(-0.8);色氨酸(-0.9);酪氨酸(-1.3);脯氨酸(-1.6);組氨酸(-3.2);穀氨酸(-3.5);穀氨醯胺(-3.5);天冬氨酸(-3.5);天冬醯胺(-3.5);賴氨酸(-3.9);及精氨酸(-4.5) ο
[0085]親水性胺基酸指數在賦予蛋白質活性生物功能方面的重要性為本領域所認識。Kyte等，J.Mol.Biol.，157 =105-`131 (1982)。已知可用某些胺基酸置換具有類似親水性指數或分數的其他胺基酸，且仍保持類似的生物活性。在根據親水性指數造成這種變化時，在某些實施方案中，包括其親水性指數在±2之內的胺基酸置換。在某些實施方案中，包括其親水性指數在± I之內的胺基酸置換，還在某些實施方案中，包括其親水性指數在±0.5之內的胺基酸置換。
[0086]本領域還認識到，可根據親水性有效地造成相似胺基酸的置換，特別是在所創建的生物功能性蛋白質或肽意在用於免疫學實施方案中的情況下，猶如本發明的情況。在某些實施方案中，蛋白質的由其鄰近胺基酸的親水性所決定的最大局部平均親水性與其免疫原性和抗原性相關，即與該蛋白質的生物性質相關。
[0087]已給這些胺基酸殘基分配以下親水性值:精氨酸(+3.0);賴氨酸(+3.0);天冬氨酸(+3.0±1);穀氨酸(+3.0±1);絲氨酸(+0.3);天冬醯胺(+0.2);穀氨醯胺(+0.2)；甘氨酸(O);蘇氨酸(-0.4);脯氨酸(_0.5±1);丙氨酸(-0.5);組氨酸(-0.5);半胱氨酸(-1.0);甲硫氨酸(-1.3) -M氨酸(-1.5);亮氨酸(-1.8);異亮氨酸(-1.8);酪氨酸(-2.3);苯丙氨酸(-2.5)和色氨酸(-3.4)。在根據類似的親水性值造成變化時，在某些實施方案中，包括其親水性值在± 2之內的胺基酸置換，在某些實施方案中，包括其親水性值在±1之內的胺基酸置換，還在某些實施方案中，包括其親水性值在±0.5之內的胺基酸置換。還可根據親水性從一級胺基酸序列鑑別表位。這些區域也稱為「表位核心區」。
[0088]示例性的胺基酸置換在表1中顯示。
胺基酸置換
【權利要求】
1.一種分離的多肽，所述多肽包含至少一個選自⑶RlaXDR2a和⑶R3a的互補決定區(CDR) 其中⑶Rla包含胺基酸序列a bcdefghijklmnop q,其中胺基酸a選自賴氨酸、精氨酸或穀氨醯胺；胺基酸b選自絲氨酸或丙氨酸；胺基酸c是絲氨酸；胺基酸d是穀氨醯胺；胺基酸e選自絲氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；胺基酸f選自纈氨酸或異亮氨酸或者不存在；胺基酸g選自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸h選自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸i是絲氨酸或者不存在；胺基酸j是絲氨酸或者不存在；胺基酸k選自天冬醯胺、蘇氨酸或者不存在；胺基酸I選自天冬醯胺、異亮氨酸或纈氨酸；胺基酸m選自賴氨酸、精氨酸、天冬醯胺或天冬氨酸；胺基酸η選自天冬醯胺或絲氨酸；胺基酸ο選自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬醯胺；胺基酸P是亮氨酸；胺基酸q選自丙氨酸、甘氨酸或天冬醯胺； 其中⑶R2a包含胺基酸序列r s t u v w x，其中胺基酸r選自色氨酸、丙氨酸、纈氨酸、穀氨酸或甘氨酸；胺基酸s是丙氨酸；胺基酸t是絲氨酸；胺基酸u選自蘇氨酸、絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸V選自精氨酸或亮氨酸；胺基酸w選自穀氨酸、穀氨醯胺或丙氨酸；胺基酸X選自絲氨酸、天冬醯胺或蘇氨酸； 其中⑶R3a包含胺基酸序列y z a』 b』 c』 d』 e』 f g』 h』，其中胺基酸y選自穀氨醯胺或亮氨酸；胺基酸z選自穀氨醯胺、天冬醯胺或精氨酸；胺基酸a』選自酪氨酸、組氨酸、丙氨酸或絲氨酸；胺基酸b』選自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬醯胺或異亮氨酸；胺基酸c』選自絲氨酸、甘氨酸或天冬醯胺；胺基酸d』選自脯氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；胺基酸e』是脯氨酸；胺基酸f是脯氨酸或者不存在；胺基酸g』是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或異亮氨酸；胺基酸h』是蘇氨酸或天冬醯胺；和其中所述多肽與抗體重鏈聯合，能夠結合肝細胞生長因子(HGF)。
2.一種分離的多肽，所 述多肽包含至少一個選自⑶RlbXDR2b和⑶R3b的互補決定區(CDR) 其中⑶Rlb包含胺基酸序列a b c d e f g，其中胺基酸a是絲氨酸或者不存在；胺基酸b選自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸c選自天冬氨酸、甘氨酸、絲氨酸、纈氨酸、蘇氨酸或異亮氨酸；胺基酸d是酪氨酸；胺基酸e選自酪氨酸或甘氨酸；胺基酸f選自異亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；胺基酸g選自組氨酸、天冬醯胺或絲氨酸； 其中⑶R2b包含胺基酸序列h ijklmnopqrstuvw x,其中胺基酸h選自色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、天冬醯胺或穀氨酸；胺基酸i選自異亮氨酸、苯丙氨酸或纈氨酸；胺基酸j選自天冬醯胺、絲氨酸、色氨酸或酪氨酸；胺基酸k選自脯氨酸、絲氨酸、酪氨酸或組氨酸；胺基酸I選自天冬醯胺、絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸m選自絲氨酸或甘氨酸；胺基酸η選自甘氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸ο選自甘氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸或天冬醯胺；胺基酸P選自蘇氨酸、異亮氨酸或賴氨酸；胺基酸q選自天冬醯胺或酪氨酸；胺基酸r選自酪氨酸或組氨酸；胺基酸s選自丙氨酸或天冬醯胺；胺基酸t選自穀氨醯胺、天冬氨酸或脯氨酸；胺基酸u選自賴氨酸或絲氨酸；胺基酸V選自苯丙氨酸、纈氨酸或亮氨酸；胺基酸w選自穀氨醯胺或賴氨酸；胺基酸X選自甘氨酸或絲氨酸； 其中 CDR3b 包含胺基酸序列 y z a，b』 c』 d』 e』 f' g』 h』 i』 j』 k』 I』 m』 n』 o』p』 q』 r』，其中胺基酸y選自穀氨酸、天冬氨酸、絲氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸z選自亮氨酸、穀氨酸、天冬氨酸、組氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸a』選自穀氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；胺基酸b』選自亮氨酸、天冬醯胺、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸c』選自精氨酸、絲氨酸、穀氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸d』是甘氨酸或者不存在；胺基酸e』選自色氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸f』是天冬氨酸或者不存在；胺基酸g』選自絲氨酸或精氨酸或者不存在；胺基酸h』是絲氨酸或者不存在；胺基酸i』選自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸j』選自酪氨酸、穀氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸k』選自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸I』選自酪氨酸、天冬氨酸、組氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸m』選自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸η』選自甘氨酸、纈氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸o』選自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸P』選自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；胺基酸q』是天冬氨酸；胺基酸r』選自纈氨酸、酪氨酸、異亮氨酸或脯氨酸；和 其中所述多肽與抗體輕鏈聯合，能夠結合HGF。
3.一種分離的特異性結合物，其中所述特異性結合物包含: (i)包含至少一個選自⑶Rla、⑶R2a和⑶R3a的互補決定區(OTR)的第一多肽 其中⑶Rla包含胺基酸序列a bcdefghijklmnop q,其中胺基酸a選自賴氨酸、精氨酸或穀氨醯胺；胺基酸b選自絲氨酸或丙氨酸；胺基酸c是絲氨酸、胺基酸d是穀氨醯胺；胺基酸e選自絲氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；胺基酸f選自纈氨酸或異亮氨酸或者不存在；胺基酸g選自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸h選自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸i是絲氨酸或者不存在；胺基酸j是絲氨酸或者不存在；胺基酸k選自天冬醯胺、蘇氨酸或者不存在；胺基酸I選自天冬醯胺、異亮氨酸或纈氨酸；胺基酸m選自賴氨酸、精氨酸、天冬醯胺或天冬氨酸；胺基酸η選自天冬醯胺或絲氨酸；胺基酸ο選自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬醯胺；`胺基酸P是亮氨酸；胺基酸q選自丙氨酸、甘氨酸或天冬醯胺； 其中⑶R2a包含胺基酸序列r s t u v w x，其中胺基酸r選自色氨酸、丙氨酸、纈氨酸、穀氨酸或甘氨酸；胺基酸s是丙氨酸；胺基酸t是絲氨酸；胺基酸u選自蘇氨酸、絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸V選自精氨酸或亮氨酸；胺基酸w選自穀氨酸、穀氨醯胺或丙氨酸；胺基酸X選自絲氨酸、天冬醯胺或蘇氨酸； 其中⑶R3a包含胺基酸序列y z a』 b』 c』 d』 e』 f g』 h』，其中胺基酸y選自穀氨醯胺或亮氨酸；胺基酸z選自穀氨醯胺、天冬醯胺或精氨酸；胺基酸a』選自酪氨酸、組氨酸、丙氨酸或絲氨酸；胺基酸b』選自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬醯胺或異亮氨酸；胺基酸c』選自絲氨酸、甘氨酸或天冬醯胺；胺基酸d』選自脯氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；胺基酸e』是脯氨酸；胺基酸f是脯氨酸或者不存在；胺基酸g』是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或異亮氨酸；胺基酸h』是蘇氨酸或天冬醯胺；和其中所述第一多肽與抗體重鏈聯合，能夠結合肝細胞生長因子(HGF)； (ii)包含至少一個選自⑶Rib、⑶R2b或⑶R3b的互補決定區(OTR)的第二多肽 其中⑶Rlb包含胺基酸序列a b c d e f g，其中胺基酸a是絲氨酸或者不存在；胺基酸b選自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸c選自天冬氨酸、甘氨酸、絲氨酸、纈氨酸、蘇氨酸或異亮氨酸；胺基酸d是酪氨酸；胺基酸e選自酪氨酸或甘氨酸；胺基酸f選自異亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；胺基酸g選自組氨酸、天冬醯胺或絲氨酸； 其中⑶R2b包含胺基酸序列h ijklmnopqrstuvw x,其中胺基酸h選自色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、天冬醯胺或穀氨酸；胺基酸i選自異亮氨酸、苯丙氨酸或纈氨酸；胺基酸j選自天冬醯胺、絲氨酸、色氨酸或酪氨酸；胺基酸k選自脯氨酸、絲氨酸、酪氨酸或組氨酸；胺基酸I選自天冬醯胺、絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸m選自絲氨酸或甘氨酸；胺基酸η選自甘氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸ο選自甘氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸或天冬醯胺；胺基酸P選自蘇氨酸、異亮氨酸或賴氨酸；胺基酸q選自天冬醯胺或酪氨酸；胺基酸r選自酪氨酸或組氨酸；胺基酸s選自丙氨酸或天冬醯胺；胺基酸t選自穀氨醯胺、天冬氨酸或脯氨酸；胺基酸u選自賴氨酸或絲氨酸；胺基酸V選自苯丙氨酸、纈氨酸或亮氨酸；胺基酸w選自穀氨醯胺或賴氨酸；胺基酸X選自甘氨酸或絲氨酸； 其中 CDR3b 包含胺基酸序列 y z a』 b』 c』 d』 e』 f' g』 h』 i』 j』 k』 I』 m』 n』 o』p』 q』 r』，其中胺基酸y選自穀氨酸、天冬氨酸、絲氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸z選自亮氨酸、穀氨酸、天冬氨酸、組氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸a』選自穀氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；胺基酸b』選自亮氨酸、天冬醯胺、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸c』選自精氨酸、絲氨酸、穀氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸d』是甘氨酸或者不存在；胺基酸e』選自色氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸f』是天冬氨酸或者不存在；胺基酸g』選自絲氨酸或精氨酸或者不存在；胺基酸h』是絲氨酸或者不存在；胺基酸i』選自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸j』選自酪氨酸、穀氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸k』選自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸I』選自酪氨酸、天冬氨酸、組氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸m』選自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸η』選自甘氨酸、纈氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸o』選自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸P』選自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；胺基酸q』是天冬氨酸；胺基酸r』選自纈氨酸、酪氨酸、異亮氨酸或脯氨酸；和 其中所述第二多肽與抗體輕鏈聯合，`能夠結合HGF。
4.能夠結合至少一種由選自SEQID NO: 123、164和165的胺基酸序列組成的多肽的抗體，其中所述抗體能夠中和HGF與Met的結合。
5.能夠結合HGF的β亞單位的抗體，其中所述抗體能夠中和HGF與Met的結合。
6.能夠結合人/小鼠嵌合HGF多肽的抗體，其中所述嵌合多肽包含具有代替同源小鼠序列的人HGF胺基酸507-585的小鼠HGF分子，其中所述抗體不顯著結合小鼠HGF，並且其中所述抗體能夠中和HGF與Met的結合。
7.能夠中和HGF與c-Met結合的分離的抗體，所述抗體與至少一種選自以下的抗體競爭結合HGF: a.包含輕鏈和重鏈的抗體，所述輕鏈包含SEQID NO: 24的殘基23-殘基129的胺基酸序列和所述重鏈包含SEQ ID NO: 25的殘基20-殘基141的胺基酸序列； b.包含輕鏈和重鏈的抗體，所述輕鏈包含SEQID NO: 26的殘基21-殘基133的胺基酸序列和所述重鏈包含SEQ ID NO: 27的殘基20-殘基137的胺基酸序列； c.包含輕鏈和重鏈的抗體，所述輕鏈包含SEQID NO: 28的殘基23-殘基129的胺基酸序列和所述重鏈包含SEQ ID NO: 29的殘基20-殘基139的胺基酸序列；d.包含輕鏈和重鏈的抗體，所述輕鏈包含SEQID NO: 30的殘基23-殘基129的胺基酸序列和所述重鏈包含SEQ ID NO: 31的殘基20-殘基148的胺基酸序列； e.包含輕鏈和重鏈的抗體，所述輕鏈包含SEQID NO: 32的殘基23-殘基129的胺基酸序列和所述重鏈包含SEQ ID NO: 33的殘基20-殘基139的胺基酸序列； f.包含輕鏈和重鏈的抗體，所述輕鏈包含SEQID NO: 34的殘基23-殘基129的胺基酸序列和所述重鏈包含SEQ ID NO: 35的殘基20-殘基144的胺基酸序列； g.包含輕鏈和重鏈的抗體，所述輕鏈包含SEQID NO: 36的殘基21-殘基133的胺基酸序列和所述重鏈包含SEQ ID NO: 37的殘基20-殘基142的胺基酸序列； h.包含輕鏈和重鏈的抗體，所述輕鏈包含SEQID NO: 38的殘基21-殘基128的胺基酸序列和所述重鏈包含SEQ ID NO: 39的殘基20-殘基139的胺基酸序列；i.包含輕鏈和重鏈的抗體，所述輕鏈包含SEQID NO: 40的殘基23-殘基129的胺基酸序列和所述重鏈包含SEQ ID NO: 41的殘基20-殘基140的胺基酸序列；和 j.包含輕鏈和重鏈的抗體，所述輕鏈包含SEQ ID NO: 42的殘基21-殘基128的胺基酸序列和所述重鏈包含SEQ ID NO: 43的殘基20-殘基139的胺基酸序列。
8.一種分離的核酸分子，所述核酸分子編碼包含至少一個選自⑶Rla、⑶R2a和⑶R3a的互補決定區(CDR)的多肽 其中⑶Rla包含胺基酸序列a bcdefghijklmnop q,其中胺基酸a選自賴氨酸、精氨酸或穀氨醯胺；胺基酸b選自絲氨酸或丙氨酸；胺基酸c是絲氨酸；胺基酸d是穀氨醯胺；胺基酸e選自絲 氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；胺基酸f選自纈氨酸或異亮氨酸或者不存在；胺基酸g選自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸h選自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸i是絲氨酸或者不存在；胺基酸j是絲氨酸或者不存在；胺基酸k選自天冬醯胺，蘇氨酸或者不存在；胺基酸I選自天冬醯胺，異亮氨酸或纈氨酸；胺基酸m選自賴氨酸、精氨酸、天冬醯胺或天冬氨酸；胺基酸η選自天冬醯胺或絲氨酸；胺基酸ο選自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天 冬醯胺；胺基酸P是亮氨酸；胺基酸q選自丙氨酸、甘氨酸或天冬醯胺； 其中⑶R2a包含胺基酸序列r s t u v w x，其中胺基酸r選自色氨酸、丙氨酸、纈氨酸、穀氨酸或甘氨酸；胺基酸s是丙氨酸；胺基酸t是絲氨酸、胺基酸u選自蘇氨酸、絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸V選自精氨酸或亮氨酸；胺基酸w選自穀氨酸、穀氨醯胺或丙氨酸；胺基酸X選自絲氨酸、天冬醯胺或蘇氨酸； 其中⑶R3a包含胺基酸序列y z a』 b』 c』 d』 e』 f g』 h』，其中胺基酸y選自穀氨醯胺或亮氨酸；胺基酸z選自穀氨醯胺、天冬醯胺或精氨酸；胺基酸a』選自酪氨酸、組氨酸、丙氨酸或絲氨酸；胺基酸b』選自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬醯胺或異亮氨酸；胺基酸c』選自絲氨酸、甘氨酸或天冬醯胺；胺基酸d』選自脯氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；胺基酸e』是脯氨酸；胺基酸f是脯氨酸或者不存在；胺基酸g』是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或異亮氨酸；胺基酸h』是蘇氨酸或天冬醯胺；和 其中所述多肽與抗體重鏈聯合，能夠結合肝細胞生長因子(HGF)。
9.一種分離的核酸分子，所述核酸分子編碼包含至少一個選自⑶Rib、⑶R2b和⑶R3b的互補決定區(CDR)的多肽 其中⑶Rlb包含胺基酸序列a b c d e f g，其中胺基酸a是絲氨酸或者不存在；胺基酸b選自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸c選自天冬氨酸、甘氨酸、絲氨酸、纈氨酸、蘇氨酸或異亮氨酸；胺基酸d是酪氨酸；胺基酸e選自酪氨酸或甘氨酸；胺基酸f選自異亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；胺基酸g選自組氨酸、天冬醯胺或絲氨酸； 其中⑶R2b包含胺基酸序列h ijklmnopqrstuvw x,其中胺基酸h選自色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、天冬醯胺或穀氨酸；胺基酸i選自異亮氨酸、苯丙氨酸或纈氨酸；胺基酸j選自天冬醯胺、絲氨酸、色氨酸或酪氨酸；胺基酸k選自脯氨酸、絲氨酸、酪氨酸或組氨酸；胺基酸I選自天冬醯胺，絲氨酸或天冬氨酸；胺基酸m選自絲氨酸或甘氨酸；胺基酸η選自甘氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸ο選自甘氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸或天冬醯胺；胺基酸P選自蘇氨酸、異亮氨酸或賴氨酸；胺基酸q選自天冬醯胺或酪氨酸；胺基酸r選自酪氨酸或組氨酸；胺基酸s選自丙氨酸或天冬醯胺；胺基酸t選自穀氨醯胺、天冬氨酸或脯氨酸；胺基酸u選自賴氨酸或絲氨酸；胺基酸V選自苯丙氨酸、纈氨酸或亮氨酸；胺基酸w選自穀氨醯胺或賴氨酸；胺基酸X選自甘氨酸或絲氨酸； 其中 CDR3b 包含胺基酸序列 y z a，b』 c』 d』 e』 f' g』 h』 i』 j』 k』 I』 m』 n』 o』p』 q』 r』，其中胺基酸y選自穀氨酸、天冬氨酸、絲氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸z選自亮氨酸、穀氨酸、天冬氨酸、組氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；胺基酸a』選自穀氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；胺基酸b』選自亮氨酸、天冬醯胺，甘氨酸、組氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸C，選自精氨酸、絲氨酸、穀氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；胺基酸d』是甘氨酸或者不存在；胺基酸e』選自色氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸f』是天冬氨酸或者不存在；胺基酸g』選自絲氨酸或精氨酸或者不存在；胺基酸h』是絲氨酸或者不存在；胺基酸i』選自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸j』選自酪氨酸、穀氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸k』選自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸I』選自酪氨酸、天冬氨酸、組氨酸或色氨酸或者不存在；胺基酸m』選自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或絲氨酸或者不存在；胺基酸η』選自甘氨酸、纈氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；胺基酸o』選自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；胺基酸P』選自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；氨`基酸q』是天冬氨酸；胺基酸r』選自纈氨酸、酪氨酸、異亮氨酸或脯氨酸；和 其中所述多肽與抗體輕鏈聯合，能夠結合HGF。
10.一種組合物，所述組合物包含權利要求1或2的分離的多肽、權利要求3的分離的特異性結合物或權利要求4-7中任一項的抗體，以及藥物可接受載體。
【文檔編號】G01N33/53GK103880955SQ201310572240
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2004年7月16日 優先權日:2003年7月18日
【發明者】T.L.伯吉斯, A.考克森, L.L.格林, K.張 申請人:安姆根有限公司, 安姆根弗裡蒙特公司