一種egcg的提純方法及獲得的egcg和藥物組合物的製作方法

2023-09-20 07:11:55 1

一種egcg的提純方法及獲得的egcg和藥物組合物的製作方法
【專利摘要】本發明屬於天然產物化學提純【技術領域】及藥物領域中藥物組合物的應用，尤其涉及一種EGCG的提純方法及獲得的EGCG和藥物組合物。該方法是以低含量EGCG的茶多酚為原料，裝柱後原料經溶解、洗脫、收集、濃縮、結晶、乾燥而得；獲得的EGCG與漢防己甲素組成藥物組合物製備治療老年痴呆症藥物的應用。本發明的EGCG提純方法操作簡便，耗能低，溶解劑和洗脫液用量低，起到成本低、環保的效果，得到的EGCG純度≥99％，收率≥90％，有利於大規模的推廣和應用；EGCG藥物組合物，不但可以延緩老年痴呆症的發生進程，更體現出顯著的治療效果，增強患者的記憶恢復能力，無副作用，藥效明顯的組合物，具有廣闊的醫藥前景。
【專利說明】一種EGCG的提純方法及獲得的EGCG和藥物組合物

【技術領域】
[0001]本發明屬於天然產物化學提純【技術領域】及其藥物領域中藥物組合物的應用，尤其涉及一種EGCG的提純方法及獲得的EGCG和藥物組合物。

【背景技術】
[0002]EGCG，即表沒食子兒茶素沒食子酸酯，是從綠茶中提取精製而得。綠茶茶多酚的主要成分是兒茶素。其中又包括表兒茶素(EC)/表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)等，而EGCG約佔兒茶素總量的50%。研究表明EGCG具有較強的抗氧化性和預防癌症及心血管疾病的功能，並可以提高癌細胞對化療的敏感性，同時降低化療對心臟的毒性。同時EGCG具有抗自由基DNA損害，抗輻射和紫外線，阻止油脂過氧化，減少血清中低密度膽固醇、超低密度膽固醇和甘油三酯的含量，幹擾癌細胞生存所需的信號傳遞，抑制飲食中的致癌物質，與腸、肝、和肺中的其他酶和抗氧化劑作用共同阻止某些致癌物質的活力，清除自由基，抵禦汙染、日曬和吸菸的影響，防治皮膚老化和起皺等作用。綠茶中的多酚類化合物EGCG與老年痴呆症相關性研究(中國藥理通訊2007年第二十四卷第二H月)已證實綠茶中的一種多酚類化合物EGCG能防止Aβ澱粉樣斑積聚，通過日常飲食補充，將是防治早老年性痴呆症的有效方法。同時據文獻資料顯示，EGCG在治療癌症，修復DNA、抗腫瘤等方面有較強的藥理作用，能夠增強免疫系統的功能，抑制肝脂和膽固醇的增長，抑制腫瘤的生長，對痢疾傷害、金黃色葡萄球菌也有極強的抑制作用。目前EGCG主要應用於食品添加劑、保健品等產品。
[0003]由於從綠茶中提取出來的多酚類物質其化學結構與性質都極其相似，都具有強極性，一般的分離方法都很難將其分開。目前從茶多酚中直接提取表沒食子兒茶素沒食子酸酯單體的方法主要有柱層析法、高速逆流分配色譜法、離子反應法，乙醯化法等。中國專利申請CN1136024C公開了一種單體兒茶素的逆流色譜分離製備方法，該分離方法是先配製以乙酸乙酯:乙醇:水構成固定相、流動相的溶劑體系進行表沒食子兒茶素沒食子酸酯、沒食子兒茶素沒食子酸酯得分離，得到的提純物的純度可到98%，但是目前逆流色譜技術一次分離樣品的量小，分離周期長，難以應用於工業生產。中國專利CN102311419A公開了一種高含量EGCG的精製提純方法，該提純方法主要是利用乙酸乙酯與石油醚按1:1混合液溶解樣品，用乙酸乙酯-石油醚-乙酸按比例混合作為洗脫液，原料經上柱、洗脫、濃縮、析晶、乾燥而得，得到的產品含量大於98%，收率大於80%，但是該方法配製溶解液和洗脫液操作繁瑣，得到的產品的含量和收率效果沒有達到最大化。
[0004]漢防己甲素(又名粉防己鹼)來源於防己科植物粉防己(Stephania tetrandra
S.Moore)的根，已有研究發現漢防己甲素為一良好的慢通道阻滯劑。臨床主要用於治療早期輕度高血壓。金滿文等報導漢防己甲素對動物的乳頭肌，免心房及主動脈系等心血管方面均呈現不同的藥理作用。
[0005]老年痴呆症,又稱阿爾茨海默病(Alzhimer』 s Disease, AD),是一種中樞神經系統的退行性疾病，其臨床表現為認知和記憶能力的不斷惡化，日常生活能力進行性減退以及出現各種精神分裂症狀和行為障礙。隨著疾病的發展，患者會逐漸喪失生活自理能力，給患者的個人家庭和社會帶來沉重的負擔。老年痴呆症的發病機制目前仍不明確，關於老年痴呆症發病機制的主流學說是β澱粉樣蛋白級聯假說。該假說認為β澱粉樣蛋白樣前體(APP)異常降解生成過量的Αβ蛋白，並在腦內沉積形成老年斑的核心，其可激活小膠質細胞，引起炎症反應，損傷線粒體引起能量代謝障礙，生成過多氧自由，導致機體的氧化應激損害，激活細胞凋亡途徑。另一方面，Αβ還能激活蛋白激酶，促使tau蛋白異常磷酸化，損傷膽鹼能神經元，引起中樞膽鹼能系統的病變。這些病理變化又促進Αβ的生成和異常堆積，產生正反饋的級聯放大效應，最終導致神經元的減少和遞質釋放異常。在研究EGCG對老年痴呆症治療的實驗中， 申請人:意外的發現，EGCG與漢防己甲素組成的藥物組合物用於治療老年痴呆症時效果明顯，EGCG和漢防己甲素聯合用於老年痴呆症的治療時，兩種藥物可以體現顯著的協同作用既可以延緩老年痴呆症的發生進程，同時顯現出顯著的治療效果，增強患者的記憶恢復能力，減緩老年痴呆症患者的痛苦。


【發明內容】

[0006]為了解決現有技術中EGCG提純含量低，收率低存在的缺陷和為了克服目前老年痴呆症治療藥物藥效不明確、藥物毒副作用大的缺陷。本發明的第一個目的在於提供一種EGCG的提純方法，該方法以低含量EGCG的茶多酚為原料(低含量EGCG是指EGCG的含量為40-50%)，其步驟如下:
(1)裝柱:採用幹法將矽膠裝於直徑為5cm，高為80cm的玻璃層析柱中；
(2)溶解:用70%的乙醇浸泡低含量EGCG的茶多酚後倒入矽膠柱中進行層析； (3)洗脫:接著加入洗脫劑進行洗脫；
(4)收集:使用薄層層析收集各洗脫段液的EGCG洗脫段液；
(5)濃縮:將EGCG收集液合併後濃縮，得到EGCG浸膏；
(6)結晶^fEGCG浸膏置於錐形瓶中，加入75%乙醇，然後在65°C水浴加熱，邊加熱邊攪拌，溶解I h，放置過夜結晶，過濾，收集晶體；
(7)乾燥:將晶體置於70°C條件下減壓乾燥，乾燥後即可得到EGCG粉末。
[0007]經發明人不斷的研究，發現茶多酚和EGCG的最佳浸提溶劑為70%的乙醇，乙醇的添加量與低含量EGCG的茶多酚的添加量的重量比為3~4:1時，其浸提量達到最大化。其中層析矽膠是採用70~90目層析矽膠，發明人經過大量的實驗發現，矽膠的添加量與低含量EGCG的茶多酚的添加量的重量比為1:5~1:7時，其分離效果最好；所述的洗脫劑是乙酸乙酯與石油醚的體積比為3:5飛:7混合溶劑；驟(6)中的乙醇的添加量與低含量EGCG的茶多酚的添加量的重量比為1:7、時，其結晶效果最佳。
[0008]與現有技術相比，本發明的優點在於:本發明的EGCG的提純方法操作簡單、減壓乾燥溫度低，達到節能的效果、溶解劑和洗脫液用量低，起到成本低、環保的效果；而且本發明得到的EGCG粉末收率高、純度高，收率> 90%，純度> 99%。
[0009]本發明的第二個目的在於提供一種治療老年痴呆症的藥物組合物，根據上述的純方法獲得的EGCG用來製備預防或治療老年痴呆症藥物藥物組合物，該藥物組合物包含EGCG和漢防己甲素，EGCG和漢方己甲素的重量份數比為1_5:1_5，其中EGCG和漢方己甲素的重量份數比優選為3:2。本發明所述的藥物組合物對老年痴呆症的治療作用主要是由於其對Αβ的聚集的抑制作用，其與其他採用不同治療機制的老年痴呆症藥物聯用可以取得意想不到的治療或預防效果。實驗證明，藥物聯用不僅可以增強藥物的治療效果，而且可以降低藥物不良反應以及機體對藥物的耐藥性。基於此，本發明提供一種治療老年痴呆症的含有EGCG和漢防己甲素的藥物組合物。 申請人:發現，該藥物組合物用於老年痴呆症的治療時，兩種藥物可以體現顯著的協同作用(參見本發明實施例7和實施例8)，不但可以延緩老年痴呆症的發生進程，更體現出顯著的治療效果，增強患者的記憶恢復能力，可以減輕老年痴呆症患者的痛苦。

【具體實施方式】
[0010]下面採用具體實施例進一步說明本發明的內容
以下內容是結合具體的優選實施方式對本發明所作的進一步詳細說明，不能認定本發明的具體實施只局限於這些說明。對於本發明所屬【技術領域】的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應當視為屬於本發明的保護範圍。
[0011]實施例1、本發明的EGCG提純工藝如下:
(1)裝柱:採用幹法將100g的70目矽膠裝於直徑為5cm，高為80cm的玻璃層析柱中；
(2)溶解:加入60ml的70%的乙醇浸泡20g茶多酚後倒入矽膠柱中進行層析；
(3)洗脫:接著加入體積比為3:5的乙酸乙酯-石油醚混合溶劑進行洗脫；
(4)收集:使用薄層層析收集各洗脫段液的EGCG洗脫段液；
(5)濃縮:將EGCG收集液合併後濃縮，得到EGCG浸膏；
(6)結晶:將EGCG浸膏置於的錐形瓶中，加入75%乙醇140ml，然後在65°C水浴加熱，邊加熱邊攪拌，溶解I h，放置過夜結晶，過濾，收集晶體；
(7)乾燥:將晶體置於70°C條件下減壓乾燥，乾燥後即可得到18.4g EGCG粉末，收率達92%，經HPLC檢測其純度達99.3%。
[0012]實施例2、本發明的EGCG提純工藝如下:
(1)裝柱:採用幹法將120g的70目矽膠裝於直徑為5cm，高為80cm的玻璃層析柱中；
(2)溶解:加入70ml的70%的乙醇浸泡20g茶多酚後倒入矽膠柱中進行層析；
(3)洗脫:接著加入體積比為4:6的乙酸乙酯-石油醚混合溶劑進行洗脫；
(4)收集:使用薄層層析收集各洗脫段液的EGCG洗脫段液；
(5)濃縮:將EGCG收集液合併後濃縮，得到EGCG浸膏；
(6)結晶:將EGCG浸膏置於的錐形瓶中，加入75%乙醇160ml，然後在65°C水浴加熱，邊加熱邊攪拌，溶解lh，放置過夜結晶，過濾，收集晶體；
(7)乾燥:將晶體置於70°C條件下減壓乾燥，乾燥後即可得到19g EGCG粉末，收率達95%，經HPLC檢測其純度達99.6%。
[0013]實施例3、本發明的EGCG提純工藝如下:
(1)裝柱:採用幹法將14 0g的70目矽膠裝於直徑為5cm，高為80cm的玻璃層析柱中；
(2)溶解:加入80ml的70%的乙醇浸泡20g茶多酚後倒入矽膠柱中進行層析；
(3)洗脫:接著加入體積比為5:7的乙酸乙酯-石油醚混合溶劑進行洗脫；
(4)收集:使用薄層層析收集各洗脫段液的EGCG洗脫段液；(5)濃縮:將EGCG收集液合併後濃縮，得到EGCG浸膏；
(6)結晶:將EGCG浸膏置於的錐形瓶中，加入75%乙醇180ml，然後在65°C水浴加熱，邊加熱邊攪拌，溶解I h，放置過夜結晶，過濾，收集晶體；
(7)乾燥:將晶體置於70°C條件下減壓乾燥，乾燥後即可得到18.6g EGCG粉末，收率達93%，經HPLC檢測其純度達99.4%。
[0014]對比實驗例一、一種高含量EGCG精製提純工藝:
對比實驗例一同中國專利CN102311419A的實施例一至實施例五。
[0015]由本發明的實施例1-3與中國專利CN102311419A的實施例一至五可以得出，本發明的EGCG提純方法得出的EGCG粉末，收率和純度都比中國專利CN102311419A的收率和純度高，而且本發明的EGCG的提純方法操作簡單、減壓乾燥溫度低，達到節能的效果、溶解劑和洗脫液用量低，成本低，環保；收率大於90 %，純度大於99 %，有利於工業化的生產。
[0016]實施例4、一種治療老年痴呆症的藥物組合物:

【權利要求】
1.一種EGCG的提純方法，該方法以低含量EGCG的茶多酚為原料，其特徵在於，包括以下步驟: (1)裝柱:採用幹法將矽膠裝於直徑為5cm，高為80cm的玻璃層析柱中； (2)溶解:用70%的乙醇浸泡低含量EGCG的茶多酚後倒入矽膠柱中進行層析； (3)洗脫:接著加入洗脫劑進行洗脫； (4)收集:使用薄層層析收集各洗脫段液的EGCG洗脫段液； (5)濃縮:將EGCG收集液合併後濃縮，得到EGCG浸膏； (6)結晶:將EGCG浸膏置於錐形瓶中，加入75%乙醇,然後置於65°C水浴加熱,邊加熱邊攪拌，溶解I h，放置過夜結晶，過濾，收集晶體； (7)乾燥:將晶體置於70°C條件下減壓乾燥，乾燥後即可得到EGCG粉末。
2.根據權利要求1所述的EGCG的提純方法，其特徵在於，步驟(1)中乙醇的添加量與低含量EGCG的茶多酚的添加量的重量比為3~4:1。
3.根據權利要求1所述的EGCG的提純方法，其特徵在於，層析矽膠是採用70~90目層析矽膠，矽膠的添加量與低含量EGCG的茶多酚的添加量的重量比為1:5~1:7。
4.根據權利要求1所 述的EGCG的提純方法，其特徵在於，步驟(3)中洗脫劑是乙酸乙酯與石油醚的體積比為3:5飛:7的混合溶劑。
5.根據權利要求1所述的EGCG的提純方法，其特徵在於，步驟(6)中的乙醇的添加量與低含量EGCG的茶多酚的添加量的重量比為1:7~9。
6.根據權利要求1-5任一所述的提純方法獲得的EGCG。
7.一種治療老年痴呆症的藥物組合物，其特徵在於，它含有如權利要求6所述的EGCG和漢方己甲素。
8.根據權利要求7的治療老年痴呆症的藥物組合物，其特徵在於，EGCG和漢方己甲素的重量份數比為1-5:1-5，其中EGCG和漢方己甲素的重量份數比優選為3:2。
【文檔編號】A61K31/353GK104130232SQ201410393252
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2014年8月12日 優先權日:2014年8月12日
【發明者】李威, 李選民, 張雄修 申請人:四川天予植物藥業有限公司