四價cd47-抗體恆定區融合蛋白用於治療的製作方法

2023-12-08 08:23:11

專利名稱：四價cd47-抗體恆定區融合蛋白用於治療的製作方法
四價CD47-抗體恆定區融合蛋白用於治療
本發明涉及用作藥物的、特別地用於預防或治療自身免疫病和炎性疾病(例如過敏性哮喘和炎性腸病)的可溶性SIRPa結合蛋白。本發明更具體地涉及包含至少兩個雙價異源二聚體的複合物的可溶性SIRPa結合蛋白，其中每個異源二聚體基本上由以下組成
(i)第一單價單鏈多肽，其包含與抗體的重鏈恆定區的N端部分融合的第一 SIRPa結合結構域；和
(ii)第二單價單鏈多肽，其包含與抗體的輕鏈恆定區的N端部分融合的第二 SIRPa結合結構域。本發明的一個具體實施方案進一步由圖I顯示。
SIRPa (⑶172a)是由包括巨噬細胞、粒細胞和常規樹狀細胞(DC)的髓系細胞表達以及在神經元細胞上的免疫受體(van den Berg等人，2008, Trends in Immunol., 29(5) 203-6)。SIRPa 是 CD47 的低親和力配體(Rebres 等人，2001, J. Biol. Chem.； 276(37) :34607-16 ;Hatherley 等人，2007 J. Biol. Chem. ；282(19) 14567-75 ；Hatherley 等人，2008 ；Mol.Cell ;31 (2) 266-77)，並且SIRP α與CD47的相互作用組成了基於黏附和雙向信號傳導控制的細胞通訊體系，所述細胞通訊體系調節免疫系統和神經元系統中的多種細胞功能。這些功能包括移行、細胞成熟、巨噬細胞吞噬作用和髓樣樹狀細胞的細胞因子產生(van den Berg 等人，2008 Trends in Immunol. 29 (5) 203-6 ；Sarfati 2009, Curr. Drug. Targets,9(10) 852-50)。
來自動物模型的數據表明SIRP α/⑶47相互作用可以有助於或甚至控制幾種病症的發病機理，所述病症包括自身免疫病、炎性疾病(Okuzawa等人，2008，BBRC ；371 (3) 561-6 ;Tomizawa 等人，2007，J. Tmmunol ； 179 (2) :869_877);局部缺血性疾病(Isenberg 等人，2008, Arter. Thromb Vase. Biol. ,28(4) 615-21 ；Isenberg 2008, Am. J. Pathol., 173(4) : 1100-12)或腫瘤學相關疾病(Chan 等人，2009，PNAS，106 (33) : 14016-14021 ; Majeti等人，2009，Cell，138 (2) :286_99)。調節SIRP a/CD47途徑因此可以是用於多種疾病的有希望的治療性選項。
已經建議使用針對⑶47、SIRPa或⑶47衍生的結合SIRP a的多肽的抗體作為治療手段(W0 1998/40940、WO 2004/108923、W02007/133811、WO 2009/046541)。此外，結合SIRPa的CD47衍生的融合蛋白在疾病(如TNBS-結腸炎(Fortin等人，2009，J Exp Med.，206(9) :1995_2011)、朗格漢斯細胞移行(J. Immunol. 2004,172 =4091-4099)和關節炎(VLST Inc, 2008, Exp. Opin. Therap. Pat. , 18 (5) :555_561))的動物模型中是有效的。
此外，提出SIRP α/0)47參與控制吞卩遼作用(van den Berg等人，2008, Trends in Immunol. ,29(5) :203_6)，並且聲稱通過SIRP α結合多肽進行幹涉來增進NOD小鼠系中的人幹細胞植入(W0 2009/046541)，表明含有⑶47胞外結構域(E⑶)的治療劑用於人幹細胞移植中的潛在益處。
本發明提供了可溶性結合蛋白，它們包含第一和第二多肽鏈的異源二聚體，每種鏈包含與抗體恆定區序列融合的結合部分。這些可溶性蛋白用作治療劑。
本發明還提供用作治療劑的改進的可溶性SIRP α結合蛋白。與現有技術的⑶47 蛋白融合物相比，如本發明中所定義的結合SIRPa的抗體樣蛋白可以提供增加針對靶向的表達SIRPa的細胞的親合力，同時維持優異的可發展性特徵的手段。另外，不受任何理論約束，預期較高的親合力導致較長的藥物動力學半壽期，因而提供增強的治療效能。這些新的研究結果提供了靶向表達SIRPa的細胞的新治療工具並且代表治療性前景，特別地對於多種自身免疫病和炎性疾病、癌症或幹細胞移植而言是如此。
因此，在一個方面，本發明提供一種可溶性蛋白，它包含至少兩個異源二聚體的複合物，其中每個異源二聚體基本上由以下組成toon] α)第一單價單鏈多肽，其包含與抗體的重鏈恆定區融合的哺乳動物結合分子的區域；和
(ii)第二單價單鏈多肽，其包含與抗體的輕鏈恆定區融合的相同結合分子的區域。
在另一個方面，本發明提供一種可溶性蛋白，它包含至少兩個異源二聚體的複合物，其中每個異源二聚體基本上由以下組成
(i)第一單價單鏈多肽，其包含與抗體的ChI恆定重鏈區融合的哺乳動物結合分子的區域；和
(ii)第二單價單鏈多肽，其包含與抗體的(V〖亙定輕鏈區融合的相同結合分子的區域。
在優選的實施方案中，每種單鏈多肽是單價的，每個異源二聚體是二價的，並且每個複合物是至少四價的。本發明的異源二聚體和可溶性蛋白具有每條多肽鏈價態是I價。 與現有技術的分子相比，本發明的可溶性蛋白具有增加的價態。通過在每種第一和第二單鏈多肽中併入相同的結合分子，每個異源二聚體的價態是兩價，即，異源二聚體內部的每條鏈可以結合一個單獨的結合配偶體或對相同的結合配偶體結合兩次。這將與其中第一和第二多肽鏈的異源二聚體的價態是I價(即，同時需要兩條鏈以結合這種結合配偶體)的現有技術分子(例如WO 01/46261中披露的那些)形成對比至這樣的程度兩個異源二聚體的複合物具有的價態是2價。因而，本發明的兩個二價異源二聚體的複合物具有四價態(四價)，即，這個複合物可以結合多達四個結合配偶體，或對相同的結合配偶體結合多達四次。 本發明的異源二聚體是雙價，並且異源二聚體的複合物具有價態nx2，其中η是該複合物內部所包含的異源二聚體的數目。在優選的實施方案中，該複合物包含兩個異源二聚體並且具有價態4。包含多於兩個異源二聚體的複合物具有大於4的價態(例如6、8或10的價態)。本發明可溶性蛋白的增加的價態導致較高的親合力，有利地影響半壽期和效能。
因此，在一個方面，本發明提供一種具有至少4價(或至少是四價)的可溶性蛋白，它包含至少兩個異源二聚體的複合物，其中每個異源二聚體基本上由以下組成
(i)第一單價單鏈多肽，其包含與抗體的重鏈恆定區融合的哺乳動物結合分子的區域；和
(ii)第二單價單鏈多肽，其包含與抗體的輕鏈恆定區融合的相同哺乳動物結合分子的區域。
在另一個方面，本發明提供一種具有至少4價的可溶性蛋白，它包含至少兩個異源二聚體的複合物，其中每個異源二聚體基本上由以下組成
(i)第一單價單鏈多肽，其包含與抗體的ChI恆定重鏈區融合的哺乳動物結合分子的區域；和
(ii)第二單價單鏈多肽，其包含與抗體的(V〖亙定輕鏈區融合的相同結合分子的區域。
在一個優選的方面，該結合分子的區域是相同的。因此，本發明提供一種具有至少 4價的可溶性蛋白，它包含至少兩個異源二聚體的複合物，其中每個異源二聚體基本上由以下組成
(i)第一單價單鏈多肽，其包含與抗體的重鏈恆定區融合的哺乳動物結合分子的區域；和
(ii)第二單價單鏈多肽，其包含與抗體的輕鏈恆定區融合的相同哺乳動物結合分子的相同區域。
在另一個方面，本發明提供一種具有至少4價的可溶性蛋白，它包含至少兩個異源二聚體的複合物，其中每個異源二聚體基本上由以下組成
(i)第一單價單鏈多肽，其包含與抗體的ChI恆定重鏈區融合的哺乳動物結合分子的區域；和
(ii)第二單價單鏈多肽，其包含與抗體的(V〖亙定輕鏈區融合的相同結合分子的相同區域。
在一個優選的實施方案中，哺乳動物結合分子的區域與抗體序列的N端部分(SP， 與ChI區和Cl恆定區)融合。
在一個實施方案中，結合分子是細胞因子、生長因子、激素、信號傳導蛋白、低分子量化合物(藥物)、配體或細胞表面受體。優選地，該結合分子是哺乳動物單體的或同型聚合的細胞表面受體。結合分子的區域可以是完整分子或其可以保留該結合分子的生物學活性的部分或片段。結合分子的區域可以是胞外區域或結構域。在一個實施方案中，所述哺乳動物單體的或同型聚合的細胞表面受體包含免疫球蛋白超家族(IgSF)結構域，例如它包含⑶47的胞外結構域。
在一個優選的實施方案中，可溶性蛋白是一種抗體樣蛋白(下文還稱作並定義為 Fusobody)，其中抗體的兩條臂的可變區由SIRPa結合結構域替換，從而提供多價的可溶性蛋白。
這種結合SIRP α的Fusobody的一個實例在圖I中顯示。
在一個實施方案中，本發明涉及分離的可溶性結合SIRPa的蛋白質或結合 SIRPa的Fusobody，其包含兩個二價異源二聚體的四價複合物，其中每個異源二聚體基本上由以下組成
(i)第一單鏈多肽，其包含在抗體的恆SchI重鏈區的N端部分處融合的第一 SIRPa結合結構域；和，
(ii)第二單鏈多肽，其包含在抗體的恆定Q輕鏈區的N端部分處融合的第二 SIRPa結合結構域。
在優選的實施方案中，可溶性蛋白或結合SIRPa的Fusobody的每個異源二聚體的所述第一單鏈多肽還包含與所述ChI區融合的免疫球蛋白的Ch2和Ch3區，從而重構抗體的全長恆定重鏈。所述ChU Ch2和Ch3區可以衍生自人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4相應區域的野生型或突變變體，其具有沉默的效應子功能和/或減少的細胞殺傷性ADCC或CDC效應子功能，例如減少的ADCC效應子功能。
在一個實施方案中，所述可溶性蛋白或結合SIRPa的Fusobody與人SIRP α以 10 μ M或更小，例如4 μ M或更小，例如I μ M或更小，O. I μ M或更小的Kd結合，如表面等離子體共振法如BiaCORE測定法所測量。在一個實施方案中，可溶性蛋白或結合SIRPa的 Fusobody與人SIRP α以O. I至10 μ M範圍內的Kd結合。
在另一個實施方案中，所述可溶性蛋白或結合SIRPa的Fusobody促進SIRP a + 白細胞如SIRPa +U937細胞以20nM或更小，例如2nM或更小，例如200pM和20nM之間的 EC50的黏附，如基於板的細胞黏附測定法中所測量。
在另一個實施方案中，所述可溶性蛋白或結合SIRP α的Fusobody抑制體外產生的單核細胞衍生性樹狀細胞中金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) Cowan菌株粒子刺激的促炎細胞因子釋放。
例如，所述可溶性蛋白或結合SIRPa的Fusobody以2nM或更小、O. 2nM或更小、 例如20pM和2nM之間的IC5tl抑制體外產生的單核細胞衍生性樹狀細胞中金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) Cowan菌株粒子刺激的促炎細胞因子釋放,如樹狀細胞細胞因子釋放測定法中所測量。
在另一個相關的實施方案中，每個異源二聚體的所述第一和第二單鏈多肽由二硫鍵共價地結合，例如使用相應ChI區和Q區的半胱氨酸殘基之間的天然二硫鍵。
在一個實施方案中，第一和第二 SIRPa結合結構域可以經肽接頭分別與ChI區和 Q區融合。在另一個實施方案中，第一和/或第二 SIRP α結合結構域在肽接頭不存在下直接與相應的ChI區和Q區融合。
在一個優選實施方案中，所述可溶性蛋白或結合SIRPa的Fusobody基本上由兩個異源二聚體組成，其中每個異源二聚體的所述第一單鏈多肽包含免疫球蛋白恆定部分的鉸鏈區，並且這兩個異源二聚體彼此通過半胱氨酸之間的二硫鍵在它們鉸鏈區處穩定締口 ο
在一個實施方案中，本發明的可溶性蛋白包含選自以下的至少一個SIRPa結合結構域
⑴人⑶47的胞外結構域；
(ii)SEQ ID NO 4的多肽或保留SIRPa結合特性的SEQ ID NO 4的片段；和
(iii)與 SEQ ID NO :4 具有至少 60、70、80、90、95、96、97、98 或 99%序列同一性並保留SIRP α結合特性的SEQ ID NO :4的變體多肽。
在一個具體實施方案中，全部SIRPa結合結構域具有相同的胺基酸序列。例如， 全部 SIRP α 結合結構域由 SEQ ID NO 4 或 SEQ ID NO :3 或 SEQ ID NO :21 或 SEQ ID NO 23 或 SEQ ID NO 27 組成。
在一個具體實施方案中，本發明的所述可溶性蛋白或結合SIRP α的Fusobody包含兩個異源二聚體，其中每個異源二聚體基本上由SEQ ID NO 5的第一單鏈多肽和SEQ ID NO 6的第二單鏈多肽組成。與抗體的重鏈和輕鏈相似，所述第一和第二單鏈多肽至少經一個二硫鍵穩定締合。在相關的實施方案中，可溶性蛋白或結合SIRPa的Fusobody包含兩個異源二聚體，其中每個異源二聚體的第一和第二單鏈多分別與相應SEQ ID NO 5和SEQ ID NO 6的第一和第二單鏈多肽具有至少60、70、80、90、95、96、97、98或99%序列同一性， 同時保留如上文所述的結合SIRPa的Fusobody的有利功能特徵。
具體而言，在一個具體實施方案中，這種可溶性蛋白或結合SIRPa的Fusobody與人SIRP α以10 μ M或更小、4 μ M或更小、或者2 μ M或更小、例如O. I μ M和10 μ M之間的Kd彡口口。
在一個具體實施方案中，本發明的結合SIRP α的Fusobody的四個SIRP α結合結構域是在序列上相同的。例如，所述結合SIRPa的Fusobody分別由SEQ ID NO :5和SEQ ID NO 6的第一和第二單鏈多肽組成。
本發明還涉及用作藥物或診斷工具，例如用於自身免疫病和急性及慢性炎性病症的治療或診斷中的此類可溶性蛋白或Fusobody、特別地是結合SIRPa的蛋白質或 Fusobody。具體而言，結合SIRPa的蛋白質或Fusobody用於治療選自Th2介導的氣道炎症、過敏性病症、哮喘、炎性腸病和關節炎的病症。
本發明的可溶性蛋白或Fusobody也可以在有需求的受試者中用於治療或診斷局部缺血性病症、白血病或其他癌症或用於增加造血幹細胞植入。
定義
為了可以更輕易地理解本發明，首先定義某些術語。額外的定義在遍及的詳細描述中給出。
術語SIRPa指顯示與⑶47整聯蛋白締合蛋白黏附的人信號調節蛋白α (也稱為CD172a或SHPS-1)。ASIRPa包括SEQ ID NO :1，但是還包括而不限於任何天然多態性變體，例如，包括人SIRPa的單核苷酸多態性(SNP)或剪接變體。表I中描述了人類中在 SIRPa核苷酸序列中發現的剪接變體或SNP的實例。
表I :SIRPa蛋白的變體
權利要求
1.一種可溶性蛋白，包含至少兩個異源二聚體的複合物，其中每個異源二聚體基本上由以下組成(i)第一單價單鏈多肽，其包含與抗體的重鏈恆定區融合的哺乳動物結合分子的區域；和( )第二單價單鏈多肽，其包含與抗體的輕鏈恆定區融合的相同結合分子的區域。
2.一種可溶性蛋白，包含至少兩個異源二聚體的複合物，其中每個異源二聚體基本上由以下組成(i)第一單價單鏈多肽，其包含與抗體的ChI恆定重鏈區融合的哺乳動物結合分子的區域；和( )第二單價單鏈多肽，其包含與抗體的Q恆定輕鏈區融合的相同結合分子的區域。
3.根據權利要求I或權利要求2所述的可溶性蛋白，其中所述哺乳動物結合分子的所述區域是相同的。
4.根據權利要求I至3中任一項所述的可溶性蛋白，其中所述哺乳動物結合分子是蛋白質、細胞因子、生長因子、激素、信號傳導蛋白、炎性介質、低分子量化合物、配體、細胞表面受體或其片段。
5.根據權利要求4所述的可溶性蛋白，其中所述哺乳動物結合分子是單體的或同聚的細胞表面受體的胞外結構域。
6.根據權利要求5所述的可溶性蛋白，其中所述哺乳動物單體的或同聚的細胞表面受體包含IgSF結構域。
7.根據權利要求5或權利要求6所述的可溶性蛋白，其中哺乳動物單體的細胞表面受體的所述胞外結構域是CD47的胞外結構域。
8.一種可溶性蛋白，包含兩個異源二聚體的複合物，其中每個異源二聚體基本上由以下組成(i)第一單價單鏈多肽，其包含在抗體的ChI恆定重鏈區的N端部分處融合的第一 SIRPa結合結構域，和( )第二單價單鏈多肽，其包含在抗體的Q恆定輕鏈區的N端部分處融合的第二 SIRPa結合結構域。
9.一種可溶性蛋白，包含兩個異源二聚體的複合物，其中每個異源二聚體基本上由以下組成(i)第一單價單鏈多肽，其包含與抗體的重鏈恆定區融合的第一 SIRP a結合結構域;和( )第二單價單鏈多肽，其包含與抗體的輕鏈恆定區融合的第二 SIRP a結合結構域。
10.根據權利要求I至9中任一項所述的可溶性蛋白，其中所述第一和第二單價單鏈多肽分別與ChI恆定重鏈和Q恆定輕鏈的N端部分融合。
11.根據權利要求8至10中任一項所述的可溶性蛋白，其中所述第一和第二SIRPa結合結構域在彼此之間共有至少60、70、80、90、95、96、97、98或99%序列同一性。
12.根據權利要求7至11中任一項所述的可溶性蛋白，其以4μΜ或更小的KD與人 SIRPa結合，如BiaCORE測定法中所測量。
13.根據權利要求8至12中任一項所述的可溶性蛋白，其促進SIRPa+白細胞以2nM或更小EC5tl的黏附，如基於板的細胞黏附測定法中所測量。
14.根據權利要求8至13中任一項所述的可溶性蛋白，其抑制體外產生的單核細胞衍生性樹狀細胞的金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) Cowan菌株粒子刺激的促炎細胞因子釋放。
15.根據權利要求14所述的可溶性蛋白，其以O.2nM或更小的IC5tl抑制體外產生的單核細胞衍生性樹狀細胞中金黃色葡萄球菌Cowan菌株粒子刺激的促炎細胞因子釋放，如樹狀細胞細胞因子釋放測定法中所測量。
16.根據權利要求I至15中任一項所述的可溶性蛋白，其中每個異源二聚體的所述第一和第二單鏈多肽由二硫鍵共價地連接。
17.根據權利要求8至16中任一項所述的可溶性蛋白，其中每個異源二聚體具有在肽接頭不存在下與相應恆定區融合的其第一和第二 SIRPa結合結構域。
18.根據權利要求8至16中任一項所述的可溶性蛋白，其中每個異源二聚體具有經肽接頭與相應恆定區融合的其第一和第二 SIRPa結合結構域。
19.根據權利要求18所述的可溶性蛋白，其中所述肽接頭由5-20個胺基酸組成。
20.根據權利要求18或權利要求19所述的可溶性蛋白，其中所述肽接頭是甘氨酸和絲氨酸胺基酸的聚合物、優選地是(GGGGS)n，其中η是I和4之間的任何整數，優選地是2。
21.根據權利要求I至20中任一項所述的可溶性蛋白，其基本上由兩個異源二聚體組成，其中每個異源二聚體的所述第一單鏈多肽包含免疫球蛋白恆定部分的鉸鏈區，並且所述至少兩個異源二聚體是彼此通過所述鉸鏈區處的二硫鍵穩定締合的。
22.根據權利要求9至21中任一項所述的可溶性蛋白，其中抗體的C0I區、Ch2區和CH3 區衍生自人IgGl、gG2、或IgG4相應區域的沉默突變體，所述沉默突變體具有降低的ADCC效應子功能。
23.根據權利要求8至22中任一項所述的可溶性蛋白，其中至少一個SIRPa結合結構域選自(i)人CD47的胞外結構域；(ii)SEQID NO 4的多肽或保留SIRPa結合特性的SEQ ID NO 4的片段；和(iii)SEQID NO :4 的變體多肽，其與 SEQ ID NO :4 具有至少 60、70、80、90、95、96、97、 98或99%序列同一性並保留SIRP a結合特性。
24.根據權利要求8至23中任一項所述的可溶性蛋白，其中全部SIRPa結合結構域具有相同的胺基酸序列。
25.根據權利要求24所述的可溶性蛋白，其中SIRPa結合結構域的所述相同胺基酸序列選自 SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO 21 和 SEQ ID NO :23。
26.一種包含兩個異源二聚體的可溶性蛋白，其中所述異源二聚體包含(i)SEQ ID NO 5的第一單鏈多肽和SEQ ID NO 6的第二單鏈多肽；(ii)SEQID NO 18的第一單鏈多肽和SEQ ID NO 6的第二單鏈多肽；(iii)SEQID NO 19的第一單鏈多肽和SEQ ID NO 20的第二單鏈多肽；(iv)SEQ ID NO 12的第一單鏈多肽和SEQ ID NO 13的第二單鏈多肽；(V)SEQ ID NO 24的第一單鏈多肽和SEQ ID NO 25的第二單鏈多肽；(vi)SEQ ID NO 36的第一單鏈多肽和SEQ ID NO 37的第二單鏈多肽；(vii)SEQID NO 38的第一單鏈多肽和SEQ ID NO 39的第二單鏈多肽；(viii)SEQID NO 40的第一單鏈多肽和SEQ ID NO 41的第二單鏈多肽；(ix)SEQID NO 42的第一單鏈多肽和SEQ ID NO 43的第二單鏈多肽；(x)SEQID NO 44的第一單鏈多肽和SEQ ID NO 45的第二單鏈多肽；(xi)SEQID NO 46的第一單鏈多肽和SEQ ID NO 47的第二單鏈多肽；(xii)SEQID NO 48的第一單鏈多肽和SEQ ID NO 49的第二單鏈多肽；(xiii)SEQID NO 50的第一單鏈多肽和SEQ ID NO 51的第二單鏈多肽；(xiv)SEQID NO 52的第一單鏈多肽和SEQ ID NO 53的第二單鏈多肽；(Xv)SEQ ID NO 54的第一單鏈多肽和SEQ ID NO 55的第二單鏈多肽；(xvi)SEQID NO 56的第一單鏈多肽和SEQ ID NO 57的第二單鏈多肽；(xvii)SEQID NO 58的第一單鏈多肽和SEQ ID NO 20的第二單鏈多肽；或(xviii)SEQID NO 29的第一單鏈多肽和SEQ ID NO 20的第二單鏈多肽。
27.根據權利要求9至25中任一項所述的可溶性蛋白，包含與根據權利要求26所述的可溶性蛋白的相應第一和第二單鏈多肽具有至少60、70、80、90、95、96、97、98或99%序列同一性的所述第一單鏈和第二單鏈多肽序列。
28.根據權利要求9至25中任一項所述的可溶性蛋白，包含與根據權利要求26所述的可溶性蛋白的相應第一和第二單鏈多肽具有至少60、70、80、90、95、96、97、98或99%序列同一性的SIRPa結合結構域序列。
29.根據權利要求I至28中任一項所述的可溶性蛋白，包含(i)由SEQ ID NO 10的核苷酸序列編碼的重鏈；和由SEQ ID NO 11的核苷酸序列編碼的輕鏈，( )由SEQ ID NO 59的核苷酸序列編碼的重鏈；和由SEQ ID NO 60的核苷酸序列編碼的輕鏈，(iii)由SEQID NO 61的核苷酸序列編碼的重鏈；和由SEQ ID NO 62的核苷酸序列編碼的輕鏈，(iv)由SEQID NO 63的核苷酸序列編碼的重鏈；和由選自SEQ IDNO 64的核苷酸序列編碼的輕鏈，(V)由SEQ ID NO 65的核苷酸序列編碼的重鏈；和由SEQ ID NO 66的核苷酸序列編碼的輕鏈，(vi)由SEQID NO 67的核苷酸序列編碼的重鏈；和由SEQ ID NO 68的核苷酸序列編碼的輕鏈，(vii)由SEQID NO 69的核苷酸序列編碼的重鏈；和由SEQ ID NO 70的核苷酸序列編碼的輕鏈，(viii)由SEQID NO 71的核苷酸序列編碼的重鏈；和由SEQ ID NO 72的核苷酸序列編碼的輕鏈，(ix)由SEQID NO 73的核苷酸序列編碼的重鏈；和由SEQ ID NO 74的核苷酸序列編碼的輕鏈，(X)由SEQ ID NO 75的核苷酸序列編碼的重鏈；和由SEQ ID NO 76的核苷酸序列編碼的輕鏈，(xi)由SEQID NO 77的核苷酸序列編碼的重鏈；和由SEQ ID NO 78的核苷酸序列編碼的輕鏈，(xii)由SEQID NO 79的核苷酸序列編碼的重鏈；和由SEQ ID NO 80的核苷酸序列編碼的輕鏈，(xiii)由SEQID NO :81的核苷酸序列編碼的重鏈；和由SEQ ID NO :82的核苷酸序列編碼的輕鏈，(xiv)由SEQID NO 83的核苷酸序列編碼的重鏈；和由SEQ ID NO 84的核苷酸序列編碼的輕鏈，(XV)由SEQ ID NO 85的核苷酸序列編碼的重鏈；和由SEQ ID NO 86的核苷酸序列編碼的輕鏈，(xvi)由SEQID NO 87的核苷酸序列編碼的重鏈；和由SEQ ID NO 60的核苷酸序列編碼的輕鏈，或(xvii)由SEQID NO 88的核苷酸序列編碼的重鏈；和由SEQ ID NO 60的核苷酸序列編碼的輕鏈。
30.根據權利要求I至29中任一項所述的可溶性蛋白，用作藥物或診斷工具。
31.根據權利要求30所述的可溶性蛋白，用於自身免疫病、急性和慢性炎性疾病的治療或診斷。
32.根據權利要求31所述的可溶性蛋白，用於治療選自Th2介導的氣道炎症、過敏性疾病、哮喘、炎性腸病和關節炎的疾病。
33.根據權利要求30所述的可溶性蛋白，用於局部缺血性疾病、白血病或其他癌症的治療。
34.根據權利要求30所述的可溶性蛋白，用於在有需求的受試者中增加造血幹細胞植入。
35.一種藥物組合物，包含與一種或多種可藥用載體組合的根據權利要求1-29中任一項所述的可溶性蛋白。
36.根據權利要求35所述的藥物組合物，額外地包含至少一種其他有效成分。
37.一種分離的核酸，其編碼根據權利要求1-29中任一項所述的可溶性蛋白的一個異源二聚體的至少一條單鏈多肽。
38.一種克隆載體或表達載體，其包含選自以下的至少一個核酸SEQID N010 ；SEQ ID NO : 11、SEQ ID NO :59、SEQ ID NO :60、SEQ ID NO :61、SEQ ID NO :62、SEQ ID NO :63、SEQ ID NO :64、SEQ ID NO :65、SEQ ID NO :66、SEQ ID NO :67、SEQ ID NO :68、SEQ ID NO :69、 SEQID NO :70、SEQ ID NO :71、SEQ ID NO :72、SEQ ID NO :73、SEQ ID NO :74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO :76、SEQ ID NO :77、SEQ ID NO :78、SEQ ID NO :79、SEQ ID NO :80、SEQ ID NO 8USEQ ID NO :82、SEQID NO :83、SEQ ID NO :84、SEQ ID NO :85、SEQ ID NO :86、SEQ ID NO :87、和 SEQ ID NO :88。
39.一種適用於產生根據權利要求1-29中任一項所述的可溶性蛋白的重組宿主細胞， 包含編碼所述蛋白質的所述異源二聚體的所述第一和第二單鏈多肽和任選地分泌信號的核酸。
40.根據權利要求39所述的重組宿主細胞，包含穩定整合於基因組中的SEQID NO`10 ；SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :59、SEQ ID NO :60、SEQ ID NO :61、SEQ ID NO :62、SEQ ID NO 63,SEQ ID NO :64、SEQID NO :65、SEQ ID NO :66、SEQ ID NO :67、SEQ ID NO :68、SEQ ID NO :69、SEQ ID NO :70、SEQ ID NO :71、SEQ ID NO :72、SEQ ID NO :73、SEQ ID NO :74、SEQ ID NO 75,SEQ ID NO :76、SEQ ID NO :77、SEQID NO :78、SEQ ID NO :79、SEQ ID NO :80、SEQ ID NO :81、SEQ ID NO :82、SEQ ID NO :83、SEQ ID NO :84、SEQ ID NO :85、SEQ ID NO :86、 SEQ ID NO :87、和 SEQ ID NO 88 的核酸。
41.根據權利要求39或權利要求40所述的重組宿主細胞，其中所述宿主是哺乳動物細胞系。
42.一種用於產生根據權利要求I至29中任一項所述的可溶性蛋白的方法，包括在產生所述可溶性蛋白的適宜條件下培養根據權利要求39至41中任一項所述的宿主細胞和分離所述蛋白質。
全文摘要
本發明涉及用作藥物的、特別地用於預防或治療自身免疫病和炎性疾病(例如過敏性哮喘和炎性腸病)的可溶性SIRPα結合蛋白。本發明更具體地涉及包含兩個異源二聚體的複合物的可溶性SIRPα結合蛋白，其中每個異源二聚體基本上由以下組成(i)第一單價單鏈多肽，其包含在抗體的重鏈恆定區的N端部分處融合的第一SIRPα結合結構域；和(ii)第二單價單鏈多肽，其包含在抗體的CL輕鏈恆定區的N端部分處融合的第二SIRPα結合結構域。本發明還涉及如

圖1中所顯示的可溶性結合SIRPα的抗體樣蛋白。
文檔編號A61P11/06GK102939303SQ201080064426
公開日2013年2月20日 申請日期2010年12月21日 優先權日2009年12月22日
發明者T·胡貝爾, F·科爾賓格, M·薩爾法蒂, K·韋爾岑巴赫 申請人:諾瓦提斯公司