用於免疫血清學滲濾法檢測動物疾病抗體、抗原的反應盒的製作方法

2023-12-09 06:41:26

專利名稱：用於免疫血清學滲濾法檢測動物疾病抗體、抗原的反應盒的製作方法
技術領域：
本實用新型涉及動物疾病的檢測裝置技術領域，尤其涉及用於免疫血清學 滲濾法檢測動物疾病抗體、抗原的反應盒。
背景技術：
應用免疫血清學滲濾法，例如金標免疫滲濾法診斷動物疾病以其快捷、簡 便、直觀、敏感性和特異性優良而得到越來越廣泛的應用。其檢測裝置以往都 是由一裝有硝酸纖維素膜和吸水墊的盒體，與一設有點樣及觀察用孔的盒蓋組合而成的塑料反應盒。例如，沈麗英，幹小仙等金標免疫滲濾法(DIGFA) 快速檢測血吸蟲循環抗原的研究.中國人獸共患病雜誌，2000， 16(1) :12-14， 報導的測定裝置由三部分組成(1)為4.0 cm X3.0cmX0.6cm的塑料小盒，分 盒體與盒蓋兩部分，蓋上有一直徑為l.Ocm的圓孔，(2)吸水填料，(3)硝酸維生 素膜。王發鎖，陳雙紅等。複合金標法同步檢測HBsAg、抗-HBc的研究。海 軍醫學雜誌，2002， 23 (4) :334-335;所用反應盒的外觀為4. 7cm X3. lcmX 0.6cm，分盒體與盒蓋兩部份，在盒蓋上有一個直徑0.9cm的圓孔。此外，張素 娥等(2000)、虞蔚巖等(2002)、劉玉冰等(2001)報導的反應盒外觀均為4. 0 cm X3.0cmX0.6cm的塑料小盒，在盒蓋上有一直徑為0. 5cm的圓孔。而盧福莊、 張雪娟等斑點金標免疫滲濾法診斷家畜血吸蟲病的敏感性和特異性.浙江 農業學報，2006， 18 (6) :453-457 ;採用的反應盒為3cmX2. 5cmX0. 6cm的 塑料小盒，在盒蓋中央有一直徑為0.8cm的小孔，盒內也裝有吸水填料和硝酸 纖維素膜，與其他報導有所不同的是該孔可同時檢測4個樣品。上述國內的測定裝置多為仿照國外同類產品而設計，所以與國外的樣品外觀大同小異，通常一塊3-4. 7 cmX2. 5-3. 1 cmXO. 6 cm的反應盒只有一個直徑為 0.5-l.Ocm的點樣孔，大多僅可檢測一個樣品，僅個別可檢測l-4個樣品。這在 大規模疾病普查時，使用很不方便，也易出差錯，限制了檢測的效率，並明顯 增大了檢測成本。發明內容本實用新型目的是，針對現有用於免疫血清學滲濾法檢測動物疾病抗體、 抗原反應盒所存在的一盒基本僅能檢測一個樣品，導致檢測效率低、成本高與 使用不便等的缺陷，對反應盒所設點樣、觀察用孔的數量，形狀及其面積進行 改進，實現每盒設多孔，每孔可點多個樣品，從而達到顯著提高檢測效率、降 低檢測成本及使用方便的目的。本實用新型目的通過以下技術方案來實現。 用於免疫血清學滲濾法檢測動物疾病抗體、抗原的反應盒，包括設有點樣 孔的盒蓋和裝置吸水填料與硝酸纖維素膜的盒體，其特徵在於所述盒蓋上設 有單排至三排，每排有5至10個點樣孔；所述的點樣孔為圓角長條曲面形孔；所述盒蓋與盒體的長度、寬度及盒體的高度隨反應盒所設點樣孔的增加而加長。 所述盒蓋的面上各點樣孔的側面標有序號，使各樣品可按序號點樣，避免差錯，並節省了對反應盒的排列時間。所述盒體四邊上口沿的中間處設有凹槽，以便於撬開盒蓋，重新裝填吸水填料和硝酸纖維素膜；另外也有利於排出空氣，使試劑容易被吸水填料吸附， 形成滲濾反應。在所述盒蓋的底面和盒體內，設置有相匹配的榫頭與卯座，以使盒蓋與盒 體緊密結合組成反應盒。所述盒蓋所設圓角長條曲面形點樣孔的底部四周呈凸起狀，使其能緊壓在 盒體中的硝酸纖維素膜面上，以防止所加試劑從它們之間因緊壓不夠所形成的 縫隙中流失，起不到滲濾作用。所述盒蓋的底面周邊內沿設置有條狀突起，以防止盒蓋與盒體結合後在外 力作用下發生水平位移而折斷細小的榫頭。所述盒蓋的底面點樣孔眼的四周設置有短圓柱狀突起，以壓緊固定硝酸纖 維素膜，防止該膜在操作或搬運過程中發生位移。本實用新型的有益效果是(1) 在一塊長條形反應盒上設置了單排至三排，每排有5 10個圓角長條曲面形點樣孔，每塊反應盒上有5 30個點樣孔，按每孔點2 4個樣品，可檢測 10 120個樣品，平均每個樣品所需反應盒成本僅為傳統單孔反應盒的1/7至 1/5;在每個點樣孔的上側標有序號後，既節省了成批檢測時按序排布反應盒的時間，又避免了差錯。(2) 把以往圓形的點樣孔改成圓角長條曲面形孔後，縮小了孔的截面積，在 滴加同樣量的試劑時截面積越小，滲濾時間越長，膠體金試劑與點在硝酸纖維 素膜上之抗原或抗體間的反應時間則越長，抗原與抗體結合越充分，可以提高 陽性檢出率與靈敏度。(3) 本實用新型適當增加了盒體的高度(由一般的0.6cm增加到0.8、 0.9或1.0cm)，可以填充較多的吸水填料，以使隨點樣數的增加而增加的試劑，在 與樣品反應固定後，所剩餘的試劑能充分被吸附在吸水墊料上；與以往的單孔反 應盒相比，本實用新型平均每個樣品所消耗的吸水填料，硝酸纖維素膜和診斷 試劑等原材料用量至少減少1/2。(4) 本實用新型設計合理，在盒蓋與盒體上分別設置了凹槽、榫頭、卯座、點樣孔的底面四周呈凸起狀、點樣孔的底面四周設置短圓柱狀突起及條狀突起 等輔助部件後，使盒蓋與盒體結合牢固，內置的硝酸纖維素膜及吸水墊固定性 好，便於攜帶與操作，實用性強。


圖l單排五孔反應盒整體示意圖。 圖2單排五孔反應盒盒蓋正面俯視圖。 圖3單排五孔反應盒盒蓋反面俯視圖。圖4單排五孔反應盒盒蓋反面側視圖。 圖5單排五孔反應盒盒蓋反面橫端側視圖。 圖6單排五孔反應盒盒體正面俯視圖。 圖7單排五孔反應盒盒體側面透視圖。 圖8單排五孔反應盒盒體橫端側面透視圖。 圖9雙排十孔反應盒盒蓋正面俯視圖。 圖IO三排三十孔反應盒盒蓋正面俯視圖。 上述圖中l為盒蓋，2為盒體，3為點樣孔，4為序號，5為凹槽，6為榫 頭，7為條狀突起，8為圓柱狀突起，9為卯座。
具體實施方式
以下通過實施例結合附圖對本實用新型作進一步的詳細說明，但這並不是對 本實用新型的具體限定。 實施例l:(單排5孔反應盒)根據圖1至圖8所示，製成9cmxl.8cmx0.8cm的塑料反應盒，該盒由盒蓋1和盒體2兩大部分組成；在盒蓋1的中央設有5個0.7cmx0.4cm圓角長條 曲面形點樣孔3;在各點樣孔3的上側盒蓋1面上標有序號4;點樣孔3的底部 四周呈凸起狀；盒體2四邊上口沿的中間處各設一個小凹槽5;盒蓋1的底面 和盒體2內，設置有相匹配的榫頭6與卯座9結構；盒蓋l的底面周邊內沿共 設置有6根條狀突起7;盒蓋1的底面點樣孔3眼的四周共設置有12個短圓柱 狀突起8;安裝時，先在盒體2內裝上8.5cmxl.0cmx0.7cm的以吸水海棉為材 料的吸水墊料，緊貼吸水墊料上面放置一張8cmx0.8cm硝酸纖維素膜後，再將 盒蓋1蓋上，即成用於免疫血清學滲濾法檢測動、植物疾病抗體的塑料反應盒。 在使用時，每個點樣孔3內可點2個樣品，該盒共可點10個樣品。實施例2:(雙排10孔反應盒)根據圖9所示，製成13.0cmX3. 5cmX 1. Ocm的塑料反應盒，分盒蓋1和盒 體2兩部分，在盒蓋1的中央設2排各5個1. 6cmX0. 4cm圓角長條曲面形點樣 孔3;與單排5個孔反應盒相比，盒蓋l除了多一排點樣孔3之外，在其底面 兩排孔的中間加一條加強筋和6個榫頭6，相應地在盒體2中間也增加了一排6 個卯座9，其高度與盒體周邊高度相同；因此，該盒的凹槽5為6個，榫頭6 與卯座9各為18個，條狀突起7為8根，短圓柱狀突起8為24個；以上增加 榫頭、卯座的目的是使盒蓋與盒體結合更牢固，不會因吸水墊料的增加而使盒 蓋蓋不緊；另外點樣孔3的長度加大為1. 6cmX0. 4cm，使每個點樣孔3中可點 4個樣品，每塊長條形反應盒共可檢測40個樣品，進一步降低檢測成本。由於 反應孔的加長，使反應盒的總長度也變長，達到了13cm，寬度為3.5cm。其餘 結構、部件與實施例1單排5孔反應盒相同。安裝時，盒體2內先裝上2條12. 5cmX1.0cmX0.9cm吸水墊料，在每條吸水墊上面各放置一張12. OcmXO. 8cm硝酸纖維素膜，合上盒蓋1後，即成雙排 10孔塑料反應盒。雙排10孔長條形反應盒在疾病的大規模普査時使用起來比較方便，反應盒 的成本比單排5個孔長條形反應盒更低廉。實施例3:(三排30孔反應盒)根據圖10所示，製成19. 5cmX5.3cmX0.9cm的塑料反應盒，分盒蓋1和 盒體2兩部分，在盒蓋1的中央設3排各有10個1. lcmXO. 5cm圓角長條曲面 形點樣孔3，該反應盒的特點是，除了盒蓋1有三排點樣孔3之外，在其底面 每兩排點樣孔3的中間多了一條加強筋和6個榫頭6;在盒體2中間設有二排 各6個卯座9，其高度與盒體2周邊高度相同；因此，該盒的凹槽5為6個， 榫頭6與卯座9各為44個，條狀突起7為12根，短圓柱狀突起8為66個，其 餘結構、部件與實施例1反應盒相同。安裝時，盒體2內先裝上3條19. OcmX 1. OcmXO. 8cm吸水墊料，再在每條 吸水墊料上面放置一張18.5cmX0.9cm硝酸纖維素膜，合上盒蓋1，即成三排 30孔塑料反應盒。該盒點樣孔3的長度為1. lcmXO. 5cm，每個點樣孔3可以點 3個樣品；每排有10個點樣孔3，每塊反應盒共可檢測90個樣品，在成批樣品 待檢時比單排5個孔反應盒的使用更方便，成本也更低廉。對下述試驗例所述試液的說明甲液pH為6.47，由PBS+0.5y。BSA製備而成的洗滌液； 乙液血吸蟲抗原膠體金試劑，經膠體金的製備；血吸蟲可溶性抗原與純 化抗原的製備；膠體金pH值的調整及血吸蟲抗原包被膠體金等步驟製備而成。具體製備方法詳見專利申請號200510050188. 1說明書； 試驗例1:(一排5孔反應盒應用於牛血吸蟲病抗體檢測)人工感染血吸蟲尾蚴201 325條的牛5頭，在感染後O、 21、 28、 35、 42、 49和56天分別採血製備血紙及血清各35份。用打孔機(直徑0. 55cm)裁取0. 24 cm2血紙圓片一片，加0. 5mL生理鹽水浸泡30分鐘；血清0. OlmL加0. 79mL生理 鹽水，則為80倍血清稀液釋。利用實施例1製備的單排5孔反應盒和圓孔直徑 0.8cm的傳統單孔反應盒，用內徑lram的玻璃毛細管吸取血紙浸出液或血清稀 釋液，在反應盒的點樣孔中點樣，單排5孔反應盒的每個孔可點2個樣品，傳 統的單孔反應盒按常規僅點1個樣品，3分鐘後，往單排5孔反應盒的每個點 樣孔中加甲液l滴，往傳統單孔反應盒的點樣孔中滴加2滴甲液，待甲液滲濾 過硝酸纖維素膜而被吸入吸水墊料後，再往單排5孔反應盒的每個點樣孔中加 l滴血吸蟲抗原膠體金試劑(乙液)，往單孔反應盒的點樣孔中加2滴乙液，待 乙液滲入後再分別加1滴或2滴蒸餾水，待蒸餾水滲入後即可觀察檢測結果， 若出現紅色斑點可判為血吸蟲病陽性，粉紅色判為可凝，黃色或不顯色的為陰 性。結果，上述兩種反應盒均可以檢測出全部感染血吸蟲尾呦28 56天的血紙 或血清中的血吸蟲抗體。單排5個點樣孔反應盒的同一點樣孔中的2個樣品和 不同孔之間沒有發生交叉汙染，不影響檢測結果。傳統4. 0 cm X3. OcmXO. 6cm的單孔塑料小盒(圓孔直徑1. Ocm)空盒的重 量為3.742g, 3cmX2. 5cmX0.6cm的單孔塑料小盒(圓孔直徑0. 8cm)空盒的重 量為2. 506g，而本實用新型9cmX 1. 8cmX0. 8cm的塑料單排5孔反應盒空盒的 重量為5.265g，共可檢測10個樣品，平均檢測一個樣品所耗用塑料原料僅為 上述兩種傳統塑料小盒的1/7與1/5多一點。假如採用多排多孔反應盒，可節 省的原料將更加可觀。單排5孔反應盒每個點樣孔的面積為0. 2456cm2左右，而直徑0. 8cm單孔反 應盒(圓孔中等大小)圓孔的面積為0. 5024cm2,差不多是多孔反應盒小孔面積的 2倍。所以其每個孔所加各種試劑的用量剛好是多孔反應盒每個小孔的2倍， 而多孔反應盒一個孔可點2個樣品，所以後者檢測一個樣品實際試劑耗用量僅 為傳統單孔反應盒的1/4。另外吸水墊料的用量也相應減少了。這樣就進一步 降低了採用多孔反應盒的檢測成本。試驗例2:(雙排10孔反應盒應用於兔血吸蟲病抗體檢測)人工感染50 500條血吸蟲尾呦的兔5隻，在0、 21、 28、 35、 42和49 天分別採血製備血紙及血清各30份；健康兔10隻，分別採制血紙和血清。用 打孔機裁取0. 24 cm2血紙圓片1片，加0. 5mL生理鹽水浸泡30分鐘；血清0. OlmL 加0. 79mL生理鹽水，則為80倍血清稀液釋。利用實施例2製備的雙排10孔反 應盒和傳統的單孔反應盒，用內徑lmm的玻璃毛細管吸取血紙浸出液或血清稀 釋液，在雙排10孔反應盒的點樣孔中點樣(毛細管與反應盒小孔中的硝纖維素 膜輕觸0.5秒，約lul血樣被硝酸纖維素膜吸附呈圓點狀斑點)，每個點樣孔 點4個樣品，在單孔反應盒的小孔中點1個樣品，3分鐘後，往每個點樣孔中 滴加2滴甲液，待甲液滲入吸水墊料後，再往每個孔中加2滴乙液，待乙液滲 入後加2滴蒸餾水，待蒸餾水滲入後觀察檢測結果，出現紅色斑點的樣品為血 吸蟲病陽性，粉紅色判為可凝，黃色或不顯色的為陰性。結果兩種反應盒之間 的檢測結果完全相同，均可以檢測出全部感染血吸蟲尾蚴28 56天的兔血紙或 兔血清中的血吸蟲抗體，人工感染血吸蟲尾蚴前及感染後21天前為陰性反應， 10隻健康兔血樣也均為陰性反應。試驗證明，在雙排10孔反應盒的同一孔中4 個樣品之間，同一塊反應盒中不同樣品之間沒有發生交叉汙染，不會影響檢測結果。試驗例3:(三排30孔反應盒應用於豬囊蟲病抗體的檢測)人工感染囊蟲21天、35天病豬血清20份，自然感染囊蟲病陽性豬血清8 份，囊蟲病陰性豬血清62份，囊蟲病豬血紙5份，來自健康豬群豬血紙85份。 血清用無菌生理鹽水作1: 128倍稀釋備用，血紙用打孔機裁取0.24 cm2血紙 圓片一片，加0. 3mL生理鹽水浸泡，每隔10分鐘搖動一次，30分鐘後即成血 紙浸出液。用實施例3的三排30孔反應盒，以玻璃毛細管吸取血清稀釋液或血 紙浸出液點樣，每孔點3個樣品，2分鐘後，每孔滴加洗滌液2滴，待洗滌液 滲入吸水墊料後，滴加囊蟲抗原膠體金試劑2滴，待滲入後再加蒸餾水2滴， 觀察反應結果，結果表明，自然感染囊蟲病陽性豬血清稀釋液、人工感染21 天、35天囊蟲病豬血紙浸出液或血清稀釋液點樣處均顯現紅色斑點，而健康豬 和囊蟲病陰性豬血紙浸液或血清稀釋液點樣處顯示淡粉色斑點、黃色斑點或不 顯示斑點。說明該反應盒也能應用於家畜囊蟲病抗體的檢測。試驗例4:(單排5孔反應盒應用於豬弓形體病抗體的檢測)從蘭州獸醫研究所購進豬弓形體病陽性豬血清8份，陰性血清2份，査病 原體法確診為弓形體病豬血清6份，健康豬血清34份，用無菌生理鹽水稀釋 160倍。用毛細管取血樣在實施例1的單排5孔反應盒上點樣，3分鐘後用洗滌 液往每個點樣孔中滴加洗滌液1滴，待洗滌液滲入硝酸纖維素膜下的墊料後， 滴加豬弓形體抗原膠體金試劑l滴，待試劑滲入後，每孔加蒸餾水l滴，待蒸 餾水滲入後觀察反應結果，顯示紅色斑點判為陽性，粉紅色判為可凝，黃色斑 點或不顯示斑點判為陰性。結果8份弓形體陽性血清和6份自然感染弓形體病豬血清均為陽性反應，36份弓形體陰性豬和健康豬血清顯示陰性反應。說明本外觀新型反應盒也可用於弓形體抗體的檢測。試驗例5多孔反應盒用於牛血吸蟲病抗原的檢測人工感染血吸蟲尾呦前健康牛血清5份，人工感染血吸蟲尾呦後42天牛血 清5份，血清用生理鹽水作40倍稀釋，用內徑lmm的玻璃毛細管吸取血清稀 釋液，點在實施例1製備的單排多孔反應盒上，在同一個孔內點同一頭牛感染 前後的2個樣品，3分鐘後每孔加1滴洗滌液，待洗滌液滲入後，加1滴血吸 蟲抗體膠體金試劑，待試劑滲入後加1滴蒸餾水，蒸餾水滲入後觀察斑點顏色。 結果只有感染42天的樣品點樣處顯示紅色斑點可判定為陽性。
權利要求1. 用於免疫血清學滲濾法檢測動物疾病抗體、抗原的反應盒，包括設有點樣孔(3)的盒蓋(1)和裝置吸水填料與硝酸纖維素膜的盒體(2)，其特徵在於所述盒蓋(1)上設有單排至三排，每排有5至10個點樣孔(3)；所述的點樣孔(3)為圓角長條曲面形孔；所述盒蓋(1)與盒體(2)的長度、寬度及盒體(2)的高度隨反應盒所設點樣孔(3)的增加而加長。
2、 根據權利要求1所述的反應盒，其特徵在於所述盒體(2)四邊上口沿 的中間處設有凹槽(5)。
3、 根據權利要求1所述的反應盒，其特徵在於所述盒蓋(1)的底面和盒 體(2)內，設置有相匹配的榫頭(6)與卯座(9)。
4、 根據權利要求1所述的反應盒，其特徵在於所述盒蓋(1)所設圓角長 條曲面形點樣孔(3)的底部四周呈凸起狀。
5、 根據權利要求1所述的反應盒，其特徵在於所述盒蓋(1)的底面周邊 內沿設置有條狀突起(7)。
6、 根據權利要求1所述的反應盒，其特徵在於所述盒蓋(1)的底面點樣 孔(3)眼的四周設置有短圓柱狀突起(8)。
專利摘要本實用新型公開了用於免疫血清學滲濾法檢測動物疾病抗體、抗原的反應盒，屬於動物疾病的檢測裝置技術領域。該反應盒包括盒蓋(1)和盒體(2)，在盒蓋(1)的正面上設有單排至三排，每排有5至10個圓角長條曲面形點樣孔(3)和序號(4)，盒蓋(1)的底面上設有榫頭(6)、短圓柱狀突起(7)及條狀突起(8)，在盒體(2)內設有凹槽(5)、卯座(9)等部件。該盒一次可檢測10～120個樣品，使用方便，平均每個樣品所需反應盒成本僅為傳統單孔反應盒的1/7至1/5，硝酸纖維素膜、試劑及吸水填料等耗材也節省1/2以上。該盒可在動物疾病大規模檢測中推廣應用。
文檔編號G01N33/543GK201096782SQ20072011220
公開日2008年8月6日 申請日期2007年7月20日 優先權日2007年7月20日
發明者媛 付, 俞國喬, 馮尚連, 盧福莊, 張雪娟, 顧小根 申請人:浙江省農業科學院