套裝人參皂甙標準對照品及其分離製備方法
2023-12-10 04:16:11 1
專利名稱：套裝人參皂甙標準對照品及其分離製備方法
技術領域：
本發明涉及一種分析測試領域尤其是高效液相色譜法(HPLC)應用的套裝高純度人參皂甙標準對照品及其分離製備方法。
背景技術：
目前，中草藥現代化發展及保健食品的興起，人參製品的產品質量控制已得到高度重視；人參皂甙的含量是其質量控制的關鍵指標；高效液相色譜法(HPLC)具有高的分離定量能力，並可對各皂甙單體進行定量測定，但此方法的開展需要有相應各皂甙單體的高純度對照品，以利於方法的外標法定量測定。但目前提供的人參皂甙標準對照品的純度低，僅為95％(HPLC)，且多數需要進口；尤其是對照品均為單體，經常難買齊全，且價格昂貴。其製備方法有的是單純用液相色譜法，其分離量小，成本高，只能自己用於科研；二是用矽膠柱層析反覆多次進行分離，手續麻煩，純度達不到要求。
發明內容
本發明的目的是提供一種產品純度高的套裝人參皂甙單體標準對照品及一種回收率高，產品純度高的製備方法。
該套裝標準對照品中同時包括有產品純度達98％以上的人參皂甙Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1六種單體。
其製備方法包括以下步驟(一)常壓矽膠柱層析預純化(1)樣品的準備取由五加科植物人參Panax ginseng C.A.Mey.的根或莖葉，用80％乙醇提取並經濃縮、樹脂吸附淨化得到的總皂甙含量大於50％的人參提取物；(2)製備玻璃層析柱採用100～200目層析矽膠為固定相，於120℃活化4-15小時，冷後以溼法裝柱；裝柱用的溶劑為氯仿∶甲醇∶水＝(65～75)∶(35～25)∶10(下層溶液)；(3)常壓柱層析分離將人參提取物用甲醇溶解後，與失活矽膠按提取物與矽膠重量比為(4～8)∶10範圍內配製混合，蒸乾溶劑後將固體部分研碎，裝入製備好的玻璃層析柱柱頭；(4)氯仿∶甲醇∶水＝(65～75)∶(35～25)∶10進行洗脫，洗脫流動相流速為5～15mL/min，各皂甙洗脫順序)為Rb2、Rg1、Re、Rd、Rc、Rb1；(5)分段收集洗脫液，各部分收集液蒸乾後得中間產物，各單體皂甙含量在30～80％範圍；其中未分離的各單體主要以兩種皂甙混合形式存在，如Rb2+Rg1、Rg1+Re、Re+Rd、Rd+Rc、Rc+Rb1；(二)等度高效製備色譜分離純化；A、分離固定相為反相C18填料，流動相如下Rb2與Rg1的分離採用20-35％乙腈，Rg1與Re的分離採用15～30％的乙腈，Re與Rd的分離採用20～35％的乙腈，而Rd與Rc、Rc與Rb1的分離採用25～40％的乙腈。
B、同步採用紫外檢測器於203nm監視流出曲線而指導產品收集；(三)收集液於水浴上濃縮後於冰箱(4℃)中冷卻析晶，得各單體產品；(四)將單體分別裝入瓶中，再將各單體組合為一套，而形成套裝人參皂甙標準對照品。
用本方法得到的最終單體產品用紫外、紅外及梯度高效液相色譜鑑定其純度並進行產品質量控制，本對照品純度＞98％，各單體品種齊；可作為人參製品(含人參原材料、人參提取物、中草藥及保健食品等)中人參皂甙高效液相色譜測定的定量、定性標準對照品。
圖1為Rb2的等度製備色譜圖。
圖2為Rb1的等度製備色譜圖。
圖3為Rg1的等度製備色譜圖。
圖4為Rc的等度製備色譜圖。
圖5為Re、Rd的等度製備色譜圖。
具體實施例方式實施例一、矽膠柱層析1、幹法上樣 將6克人參莖葉提取物(總皂甙＞70％)溶於10ml甲醇中，所得溶液分幾次加入10克未活化的矽膠中，在水浴鍋上混勻、烘乾，貯存在乾燥器中備用。
2、溼法裝柱 將於120℃活化12h的矽膠，冷卻，裝入充滿流動相的玻璃空柱(5cm×70cm)，柱長約50cm，靜置過夜。
3、流動相準備VCHCl3∶VMeOH∶VH2O＝65∶35∶10，配好搖勻，靜置澄清，取下層。
4、將樣品裝於矽膠柱中，用流動相開始淋洗，前600ml不收集，以後每100ml收集一杯，第4-7杯合併蒸乾，得人參皂甙Rb2粗品；第9-14杯合併蒸乾，得人參皂甙Rg1粗品；第17-26杯合併蒸乾，得人參皂甙Re、Rd的粗品；第27-34杯合併蒸乾，得人參皂甙Rc的粗品；第41-47杯合併蒸乾，得人參皂甙Rb1的粗品。二、HPLC進行半製備分離1、Rb2的製備色譜柱Prep Nova_pakR HR C18 6um 7.8×300mmHPLC column流動相30％CH3CN流速4ml/min檢測波長203nm進樣量1ml樣液濃度約10mg/ml，色譜圖如圖1。2、Rb1的製備色譜柱Prep Nova_pakR HR C18 6um 7.8×300mmHPLC column流動相30％CH3CN流速4ml/min檢測波長203nm 進樣量1ml樣液濃度約10mg/ml，色譜圖如圖2。3、Rg1的製備色譜柱Prep Nova_pakR HR C18 6um 7.8×300mmHPLC column流動相20％CH3CN流速4ml/min檢測波長203nm進樣量1ml樣液濃度約10mg/ml，色譜圖如圖3。4、Rc的製備色譜柱Prep Nova_pakR HR C18 6um 7.8×300mmHPLC column流動相28％CH3CN流速4ml/min
檢測波長203nm進樣量1ml樣液濃度約10mg/ml，色譜圖如圖4。5、Re、Rd的製備色譜柱Prep Nova_pakR HR C18 6um 7.8×300mmHPLC column流動相0-25min 25％CH3CN 25-55min 30％CH3CN流速4ml/min檢測波長203nm進樣量1ml樣液濃度約10mg/ml，色譜圖如圖5。
三、收集液於水浴上濃縮後於冰箱(4℃)中冷卻析晶，得各單體產品；四、將單體分別裝入瓶中，再將各單體組合為一套，而形成套裝人參皂甙標準對照品。
權利要求
1.套裝人參皂甙標準對照品，其特徵在於每套包括有產品純度達98％以上的人參皂甙Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1六種單體。
2.一種套裝人參皂甙標準對照品的分離製備方法，其特徵在於包括以下步驟(一)常壓矽膠柱層析預純化(1)樣品的準備取由人參的根或莖葉，用80％乙醇提取並經濃縮、樹脂吸附淨化得到的總皂甙含量大於50％的人參提取物；(2)製備玻璃層析柱採用100～200目層析矽膠為固定相，於120℃活化4-15小時，冷後以溼法裝柱；裝柱用的溶劑為氯仿∶甲醇∶水＝(65～75)∶(35～25)∶10(下層溶液)；(3)常壓柱層析分離將人參提取物用甲醇溶解後，與失活矽膠按提取物與矽膠重量比為(4～8)∶10範圍內配製混合，蒸乾溶劑後將固體部分研碎，裝入製備好的玻璃層析柱柱頭；(4)用氯仿∶甲醇∶水＝(65～75)∶(35～25)∶10進行洗脫，洗脫流動相流速為5～15mL/min，各皂甙洗脫順序為Rb2、Rg1、Re、Rd、Rc、Rb1；(5)分段收集洗脫液，各部分收集液蒸乾後得中間產物，其中未分離的各單體主要以兩種皂甙混合形式存在，如Rb2+Rg1、Rg1+Re、Re+Rd、Rd+Rc、Rc+Rb1；(二)等度高效製備色譜分離純化；A、分離固定相為反相C18填料，流動相如下Rb2與Rg1的分離採用20-35％乙腈，Rg1與Re的分離採用體積比為15～30％的乙腈，Re與Rd的分離採用體積比為20～35％的乙腈，而Rd與Rc、Rc與Rb1的分離採用25～40％的乙腈；B.同步採用紫外檢測器於203nm監視流出曲線而指導產品收集；(三)收集液於水浴上濃縮後於冰箱(4℃)中冷卻析晶，得各單體產品；(四)將單體分別裝入瓶中，再將各單體組合為一套，形成套裝人參皂甙標準對照品。
全文摘要
本發明涉及一種分析測試領域尤其是高效液相色譜法(HPLC)應用的套裝高純度人參皂甙標準對照品及其分離製備方法。該套裝標準對照品中同時包括有產品純度達98%以上的人參皂甙Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1六種單體。其製備方法包括:常壓矽膠柱層析預純化:等度高效製備色譜分離純化;冷卻析晶,得各單體產品,將單體分別裝入瓶中,再將各單體組合為一套,而形成套裝人參皂甙標準對照品。
文檔編號G01N30/02GK1374522SQ02113930
公開日2002年10月16日 申請日期2002年1月25日 優先權日2002年1月25日
發明者陳波, 姚守拙, 羅旭標 申請人:湖南師範大學