金雞製劑的質量控制方法

2023-11-07 18:42:52 1

專利名稱：金雞製劑的質量控制方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物製劑的質量控制方法，特別涉及治療婦科疾病的金雞製劑的
含量測定方法。
背景技術：
金雞膠囊為已上市藥品，批准文號為國藥準字Z45020293，具有清熱解毒，健脾除 溼，通絡活血功能，用於溼熱下注引起的附件炎。本品由金櫻根、雞血藤、千斤拔、功勞木、 兩面針、穿心蓮等藥材經提取精製而成。功勞木具有清熱燥溼、瀉火解毒之功效，民間常用 於清熱、解毒、治感冒等，其主要活性成分為生物鹼類，主要為鹽酸小檗鹼、鹽酸巴馬汀及藥 根鹼等；穿心蓮具有清熱解毒、消腫止痛、抗菌及抗癌作用，常用於急性細菌性痢疾、咽喉腫 痛、溫熱下痢、毒蛇咬傷、瘡癰疔毒、外傷感染等，其主要活性成分為二萜內酯類化合物，主 要有穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯、脫氧穿心蓮內酯等。 金雞膠囊標準中，含量測定的指標成分過少，唯一的測定成分為鹽酸小檗 鹼，難以有效保證產品質量，因此有必要建立多個指標成分進行質量控制。申請號為 20051020047 9. 4的專利公開了金雞膠囊中穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含量測定方法， 但該方法不能有效除去幹擾的雜質，色譜峰與雜峰分離不佳。文獻"反相高效液相色譜法測 定金雞膠囊中鹽酸巴馬汀及鹽酸小檗鹼的含量.中國醫院藥學雜誌.22(12) :723"報導了 金雞膠囊中鹽酸巴馬汀及鹽酸小檗鹼的含量測定方法，但該方法供試液製備需用中性氧化 鋁柱除雜，且流動相使用了對柱子損害較大的離子對試劑，而我們制定的含量測定方法供 試液製備簡單，流動相不需離子對試劑，且最終分離效果滿足含量測定的要求。

發明內容
本發明目的在於提供一種金雞製劑的質量控制方法，該質量控制方法包括鹽酸巴 馬汀與鹽酸小檗鹼的含量測定方法，和/或穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含量測定方 法。 金雞製劑中鹽酸巴馬汀與鹽酸小檗鹼的含量測定方法如下 金雞製劑的含量測定方法採用高效液相色譜法，該法包括色譜條件與系統適用性 試驗，對照品溶液的製備，供試品溶液的製備和鹽酸巴馬汀與鹽酸小檗鹼含量測定步驟。
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-磷酸二 氫鹽緩衝液(用磷酸調pH值至2. 8 3. 5) (25 35 : 75 65)為流動相；紫外檢測器。
對照品溶液的製備取鹽酸巴馬汀對照品、鹽酸小檗鹼對照品適量，精密稱定，加乙 腈-水(25 35 : 75 65)的混合溶液製成一定濃度的混合對照品溶液，即得。
供試品溶液的製備取金雞製劑藥物，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入一定體 積的鹽酸-甲醇(l : 25 200)混合溶液，稱定重量，冷浸，超聲處理，放冷至室溫，再稱定 重量，用鹽酸-甲醇(l : 25 200)混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精 密量取一定體積的續濾液，蒸乾，殘渣加乙腈_水(25 35 : 75 65)混合溶液使溶解，轉移至一定體積的量瓶中並稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。
每1ml含鹽酸巴馬汀20. 64ii g，含鹽酸小檗鹼15. 06 y g 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 20 1，注入液相色譜儀， 測定，即得。 所述流動相中的磷酸二氫鹽可以是磷酸二氫鉀或磷酸二氫鈉等，其濃度範圍為 0. Olmol/L 0. 08mol/L。所述的紫外檢測器的檢測波長較佳範圍是260nm 270nm或330nm 350nm。 所述的一定濃度的混合對照品溶液，鹽酸巴馬汀對照品的濃度範圍是5i! g/ml
50 ii g/ml，鹽酸小檗鹼對照品的濃度範圍是5 ii g/ml 50 y g/ml。 金雞製劑中鹽酸巴馬汀與鹽酸小檗鹼的含量測定優選方法如下 色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-磷酸
二氫鹽緩衝液(用磷酸調PH值至3. 0) (30 : 70)為流動相；紫外檢測器。 對照品溶液的製備取鹽酸巴馬汀對照品、鹽酸小檗鹼對照品適量，精密稱定，加
乙腈-水(30 : 70)的混合溶液製成一定濃度的混合對照品溶液，即得。 供試品溶液的製備取金雞製劑藥物，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入一定
體積的鹽酸-甲醇(i : ioo)混合溶液，稱定重量，冷浸，超聲處理，放冷至室溫，再稱定重 量，用鹽酸-甲醇(i : ioo)混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取 一定體積的續濾液，蒸乾，殘渣加乙腈-水(30 : 70)混合溶液使溶解，轉移至一定體積的 量瓶中並稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 20 ii 1，注入液相色譜儀，
測定，即得。 金雞製劑穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含量測定方法如下 色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-水
(45 55 : 55 45)為流動相；紫外檢測器。 對照品溶液的製備精密稱取穿心蓮內酯對照品、脫水穿心蓮內酯對照品適量， 加甲醇-水(100 50 : 0 50)製成一定濃度的穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的對照品 溶液，即得。 供試品溶液的製備取金雞製劑藥物，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲 醇-水(100 50 : 0 50)，稱定重量，浸泡，超聲處理，放冷，再稱定重量，加甲醇-水
(100 50 : 0 50)補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取一定體積的續濾液，置中性氧
化鋁柱上，用甲醇洗脫，收集洗脫液，置量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 20 ii 1，注入液相色譜儀，測 定，即得。 所述的紫外檢測器的檢測波長較佳範圍是穿心蓮內酯220nm 230nm，脫水穿心 蓮內酯220nm 230nm或250nm 260nm。 所述的一定濃度的穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的對照品溶液，穿心蓮內酯對照 液的濃度範圍是10 y g/ml 80 ii g/ml，脫水穿心蓮內酯對照液的濃度範圍是20 y g/ml 160 ii g/ml。 本發明金雞製劑中鹽酸巴馬汀與鹽酸小檗鹼、穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含
5量測定方法重現性好，各種製劑的取樣量是指去除外包材、按常規取樣量而定。 本發明所用的金雞製劑，是指按金雞膠囊處方比例製備，製劑包括片劑，膠囊劑，
顆粒劑，口含片，滴丸劑，口服液，煎膏劑等臨床或藥學上可接受的常用劑型。 本發明的質量控制方法精密度、穩定性、重現性良好，符合定量測定的要求。下面
實驗例用於進一步說明本發明的技術方案和技術效果。 實驗例1 :金雞膠囊中鹽酸巴馬汀與鹽酸小檗鹼的含量測定 l儀器、試藥與樣品 儀器日本島津LC-10ATvp高效液相色譜儀，日本島津SPD-10Avp紫外檢測器， 威瑪龍工作站；十八烷基矽烷鍵合矽膠色譜柱(AgilentTC-C18，4.6X150mm)，菲羅門C18 4X3. Omm保護柱；梅特勒-託利多AB265-S電子天平；HS-10260D超聲波清洗儀，天津市恆 奧科技發展有限公司。 試藥鹽酸小檗鹼化學對照品(含量測定用，批號110713-200208，中國藥品生物 製品檢定所提供)，鹽酸巴馬汀化學對照品(鑑別用，批號0732-200005，中國藥品生物制 品檢定所提供)，純度經檢查均符合含量測定用化學對照品的技術要求，鹽酸小檗鹼含量為 99.3%，鹽酸巴馬汀含量為99. 1%，測定時按100%計算；乙腈(色譜純)，水(自製雙蒸
水)，磷酸(分析純)，磷酸二氫鉀(分析純)。
樣品金雞膠囊。
2方法與結果
2. 1測定波長的選擇 根據鹽酸巴馬汀及鹽酸小檗鹼對照品紫外吸收光譜圖，兩者約在265nm和345nm 附近有最大吸收，在260nm 270nm及330nm 350nm範圍均有較大吸收。因此測定波長 在260nm 270nm及330nm 350nm範圍內均可較好地檢測出目標物，以波長為265nm為 最佳檢測波長。 2. 2對照品及供試品溶液的製備 對照品溶液的製備精密稱取鹽酸巴馬汀對照品10.32mg，鹽酸小檗鹼對照品 10.04mg，分別置100ml量瓶中，加乙腈-水(3 : 7)混合溶液使溶解，並稀釋至刻度，搖勻； 精密量取鹽酸巴馬汀對照品溶液2ml，鹽酸小檗鹼對照品溶液1. 5ml置10ml量瓶，加混合溶 液至刻度，搖勻，即得(每lml含鹽酸巴馬汀20. 64ii g，含鹽酸小檗鹼15. 06 y g)。
供試品溶液的製備取金雞膠囊內容物2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽 酸-甲醇(1 : 100)混合溶液50ml，稱定重量，冷浸30分鐘，超聲處理(功率260W，頻率 50kHz) 30分鐘，放冷至室溫，再稱定重量，用鹽酸-甲醇(1 : 100)混合溶液補足減失的重 量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液10ml，蒸乾，殘渣加乙腈-水(3 : 7)混合溶液 使溶解，轉移至5ml量瓶中並稀釋至刻度，搖勻，用O. 45iim微孔濾膜濾過，即得。
陰性樣品溶液的製備陰性樣品溶液是按處方比例稱取除功勞木外其餘味藥，按制 法製成功勞木陰性樣品，再取此陰性樣品按上述"供試品溶液的製備"方法製備不含功勞木 的陰性樣品溶液。 供試品溶液製備中，對提取方法和提取時間進行考察。①提取方法的考察了超聲 處理後過中性氧化鋁柱和不過中性氧化鋁柱的比較，結果表明兩者的提取效率無明顯差 別，且不過中性氧化鋁柱的樣品鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗鹼色譜均無幹擾，故提取方法無需過中性氧化鋁柱，操作較為簡單；②提取時間考察了超聲15分鐘、30分鐘和45分鐘，結果 表明超聲處理30分鐘已經可以提取完全。
2. 3色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑(Agilent TC-C18，4. 6X 150mm);保護 柱菲羅門C184X3. 0mm ;流動相乙腈-0. 05mol/L磷酸二氫鉀緩衝液(用磷酸調pH值至 3. 0) (30 : 70)為流動相；流速lml/min ;柱溫室溫；檢測波長265nm。
分別吸取對照品溶液、供試品溶液和不含功勞木的陰性樣品溶液各20iU，注入液 相色譜儀，測定。此條件下鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗鹼與其它組分達到基線分離，分離度R〉 1. 5，理論板數按鹽酸巴馬汀計算大於2000，按鹽酸小檗鹼計算大於2000，鹽酸巴馬汀保留 時間約為12分鐘，鹽酸小檗鹼保留時間約為14分鐘。陰性樣品溶液色譜在相應位置無吸 收峰，可見陰性無幹擾。 流動相曾考察了不同濃度的磷酸二氫鉀緩衝液，不同的pH值，不同的流動相比 例，結果表明緩衝液濃度為0. Olmol/L 0. 08mol/L，緩衝液pH值為2. 8 3. 5，流動相比 例為(25 35 : 75 65)時，目標物均能較好地分離。 2. 4方法學驗證結果對照品純度檢查以峰面積歸一化法計算鹽酸巴馬汀對照品 含量為99. 1%，鹽酸小檗鹼對照品含量為99.3%，符合含量測定要求，測定時按100%計 算。線性關係考察以鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗鹼進樣量C(i!g)為橫坐標，以峰面積積分A 為縱坐標進行線性回歸分析，得鹽酸巴馬汀回歸方程為A = 4. 59X 106C-1. 38X 104, r = 0. 9999 ;鹽酸小檗鹼回歸方程為:A = 4. 46X 106C-1. 24X 104，r = 0. 9997。表明鹽酸巴馬汀 進樣量在0. 1032 1. 032 ii g，鹽酸小檗鹼進樣量在0. 1004 1. 004 y g範圍內線性關係良 好，且直線通過原點。即對應鹽酸巴馬汀濃度為5. 16ii g/ml 51. 6ii g/ml，鹽酸小檗鹼濃 度為5. 02 ii g/ml 50. 2 ii g/ml 。精密度試驗鹽酸巴馬汀RSD為0. 63% ，鹽酸小檗鹼RSD 為1. 16%，表明精密度較好。穩定性試驗鹽酸巴馬汀72小時內峰面積平均為1881752，RSD 為1. 06% ;鹽酸小檗鹼72小時內峰面積平均為1338382， RSD為1. 17%，表明供試品溶液 在72h內穩定性較好。重複性試驗鹽酸巴馬汀含量平均值為4. 10mg/粒，RSD為0. 88%， 鹽酸小檗鹼含量平均值為2. 62mg/粒，RSD為0. 80% ，表明方法重複性較好。加樣回收率試 驗鹽酸巴馬汀平均回收率為96. 86%， RSD為1. 51%，鹽酸小檗鹼平均回收率為97. 38%， RSD為1. 86%，表明方法回收率較好。 實驗例2 :金雞膠囊中穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含量測定
1儀器、試藥與樣品 儀器日本島津LC-2010A高效液相色譜儀，島津SPD-M10Avp 二極體陣列檢測器， 日本島津SPD-10Avp紫外檢測器，島津LCSolution色譜工作站；十八烷基矽烷鍵合矽膠 色譜柱(Agilent TC-C18，4. 6X150mm)，菲羅門C18 4X3. Omm保護柱；梅特勒-託利多 AB265-S電子天平；HS-10260D超聲波清洗儀，天津市恆奧科技發展有限公司。
試藥穿心蓮內酯化學對照品(含量測定用，批號110797-200307，中國藥品生物 製品檢定所提供)，脫水穿心蓮內酯化學對照品(含量測定用，批號110854-200306，中國 藥品生物製品檢定所提供)衝性氧化鋁(200 300目，國藥集團化學試劑有限公司)；甲 醇(色譜純)，水(自製雙蒸水)。
樣品金雞膠囊
2方法與結果
2. 1測定波長的選擇 根據二極體陣列檢測器測定結果，穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯對照品溶液在約 225nm和254nm附近有最大吸收，穿心蓮內酯在220nm 230nm，脫水穿心蓮內酯在220nm 230nm及250nm 260nm均有較大吸收，均可作為測定波長。最佳測定波長為穿心蓮內酯 為225nm，脫水穿心蓮內酯為254nm。
2. 2對照品及供試品溶液的製備 對照品溶液的製備精密稱取穿心蓮內酯對照品25. 26mg，脫水穿心蓮內酯對照 品51.29mg，分別置25ml量瓶中，加甲醇使溶解，並稀釋至刻度，搖勻；分別精密量取穿心蓮 內酯對照品溶液、脫水穿心蓮內酯對照品溶液各3ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度， 搖勻，即得(每lml含穿心蓮內酯30. 312 ii g，含脫水穿心蓮內酯61. 548 y g)。
供試品溶液的製備取金雞膠囊內容物約3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密 加入甲醇50ml，稱定重量，浸泡2小時，超聲處理(功率260W，頻率40kHz) 40分鐘，放冷， 再稱定重量，加甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液20ml，置中性氧化鋁柱 (200 300目，5g，內徑lcm)上，用甲醇25ml洗脫，收集洗脫液，置50ml量瓶中，加甲醇稀 釋至刻度，搖勻，即得。 陰性樣品溶液的製備陰性樣品溶液是按處方比例稱取除穿心蓮外其餘藥味，按 製法製成穿心蓮陰性樣品，再取此陰性樣品按上述"供試品溶液的製備"方法製備不含穿心 蓮的陰性樣品溶液。 供試品溶液製備中，分別對浸泡時間、超聲時間及溶劑量進行考察。①浸泡時間的 考察中，考察了浸泡0小時、1小時、2小時和3小時，結果表明浸泡2小時即可；②超聲時間 考察了超聲20分鐘、30分鐘、40分鐘和60分鐘，結果表明超聲處理40分鐘已經可以提取 完全；③溶劑量的考察中，分別考察了加入甲醇25ml、50ml、100ml進行提取，結果所得含量 無明顯差異。 2. 3色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑(Agilent TC_C18，4. 6X 150mm);保護 柱菲羅門C18 4X3. Omm ;流動相甲醇-水(50 : 50);流速lml/min ;檢測波長穿心蓮 內酯為225nm、脫水穿心蓮內酯254nm。 分別吸取對照品溶液、供試品溶液和不含穿心蓮的陰性樣品溶液各10iU，注入液 相色譜儀，測定。此條件下穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯與其它組分達到基線分離，分離度 R > 1. 5，理論板數按穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯峰計算均大於3000，穿心蓮內酯保留時 間約為7分鐘，脫水穿心蓮內酯保留時間約為20分鐘。陰性樣品溶液在色譜的相應位置無 吸收峰，可見陰性無幹擾。 考察了不同比例的甲醇-水流動相，結果表明甲醇-水比例為45 55 : 55 45
時目標成分均可有效分離。 2. 4方法學驗證結果 線性關係考察以脫水穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯進樣量C為橫 坐標，以峰面積積分A為縱坐標進行線性回歸分析，得穿心蓮內酯回歸方程 為A = 2. 07X 106C+1. 97X 104， r = 0. 9999 ;脫水穿心蓮內酉旨回歸方程為A =1. 48X 106C+4. 81X104, r = 0. 9999。表明脫水穿心蓮內酯進樣量在0. 101 0. 808 y g，脫水穿心蓮內酯進樣量在0. 205 1. 641 g範圍內線性關係良好，且直線通過原點。即對應穿心蓮內酯濃度為10. 1 ii g/ml 80. 8ii g/ml，脫水穿心蓮內酯濃度為20. 5 y g/ml 164. 1 ii g/ml。精密度試驗穿心蓮內酯峰面積平均為646253， RSD為0. 07%，脫水穿心蓮內酯峰面積平均為960487， RSD為0. 10%，表明精密度較好。穩定性試驗穿心蓮內酯48小時峰面積平均為808383，RSD為0. 60%;脫水穿心蓮內酯48小時峰面積平均為1008845，RSD為1. 76X，表明供試品溶液在48h內穩定性較好。重複性試驗穿心蓮內酯含量平均值為1. 16mg/粒，RSD為1.4%，脫水穿心蓮內酯含量平均值為1. 95mg/粒，RSD為2. 2% ，表明方法重複性較好。加樣回收率試驗穿心蓮內酯平均回收率為101. 29%， RSD為2. 7%，脫水穿心蓮內酯平均回收率為99. 36%， RSD為2. 21 % ，表明方法回收率較好。
具體實施例如下 實施例1金雞膠囊中鹽酸巴馬汀與鹽酸小檗鹼的含量測定 色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-0. 05mol/L磷酸二氫鉀緩衝液(用磷酸調pH值至3. 0) (30 : 70)為流動相；檢測波長為265nm ;理論板數按鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗鹼計算均大於2000。 對照品溶液的製備取鹽酸巴馬汀對照品、鹽酸小檗鹼對照品適量，精密稱定，加乙腈-水(30 : 70)的混合溶液製成每lml含鹽酸巴馬汀20iig，含鹽酸小檗鹼15iig的混合對照品溶液，即得。 供試品溶液的製備取金雞膠囊內容物2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸_甲醇(1 : 100)混合溶液50ml，稱定重量，冷浸30分鐘，超聲處理30分鐘(功率260W，頻率50kHz)，放冷至室溫，再稱定重量，用鹽酸-甲醇(1 : 100)混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液10ml，蒸乾，殘渣加乙腈-水(30 : 70)混合溶液使溶解，轉移至5ml量瓶中並稀釋至刻度，搖勻，用0. 45 ii m微孔濾膜濾過，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20iU，注入液相色譜儀，測定，即得。 實施例2金雞膠囊中穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含量測定
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇_水(50 : 50)為流動相；穿心蓮內酯檢測波長為225nm，脫水穿心蓮內酯檢測波長為254nm;理論板數按穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯計算均大於3000。 對照品溶液的製備精密稱取穿心蓮內酯對照品、脫水穿心蓮內酯對照品適量，加甲醇製成每lml含穿心蓮內酯30ii g，含脫水穿心蓮內酯60 ii g的對照品溶液，即得。
供試品溶液的製備取金雞膠囊內容物約3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，浸泡2小時，超聲處理(功率260W，頻率40kHz) 40分鐘，放冷，再稱定重量，加甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液20ml，置中性氧化鋁柱(200 300目，5g，內徑lcm)上，用甲醇25ml洗脫，收集洗脫液，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測定，即得。 實施例3金雞膠囊中鹽酸巴馬汀與鹽酸小檗鹼的含量測定
9
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-0. 02mol/L磷酸二氫鈉緩衝液(用磷酸調pH值至3. 0) (25 : 75)為流動相；檢測波長為260nm ;理論板數按鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗鹼計算均大於2000。 對照品溶液的製備取鹽酸巴馬汀對照品、鹽酸小檗鹼對照品適量，精密稱定，加乙腈-水(25 : 75)的混合溶液製成每lml含鹽酸巴馬汀10i!g，含鹽酸小檗鹼10iig的混合對照品溶液，即得。 供試品溶液的製備取金雞膠囊內容物0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸_甲醇(1 : 100)混合溶液25ml，稱定重量，冷浸30分鐘，超聲處理40分鐘，放冷至室溫，再稱定重量，用鹽酸-甲醇(1 : 100)混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液10ml，蒸乾，殘渣加乙腈-水(25 : 75)混合溶液使溶解，轉移至5ml量瓶中並稀釋至刻度，搖勻，用O. 45iim微孔濾膜濾過，即得。 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測定，即得。 實施例4金雞膠囊中穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含量測定
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇_水(45 : 55)為流動相；穿心蓮內酯檢測波長為220nm，脫水穿心蓮內酯檢測波長為250nm;理論板數按穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯計算均大於3000。 對照品溶液的製備精密稱取穿心蓮內酯對照品、脫水穿心蓮內酯N2對照品適量，加甲醇製成每lml含穿心蓮內酯10i! g，含脫水穿心蓮內酯20 ii g的對照品溶液，即得。
供試品溶液的製備取金雞膠囊內容物約8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，浸泡過夜，超聲處理60分鐘，放冷，再稱定重量，加甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10ml，置中性氧化鋁柱(200 300目，8g，內徑lcm)上，用甲醇40ml洗脫，收集洗脫液，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5iU，注入液相色譜儀，測定，即得。 實施例5金雞膠囊中鹽酸巴馬汀與鹽酸小檗鹼的含量測定 色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-0. 08mol/L磷酸二氫鉀緩衝液(用磷酸調pH值至3. 0) (35 : 65)為流動相；檢測波長為255nm ;理論板數按鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗鹼計算均大於2000。 對照品溶液的製備取鹽酸巴馬汀對照品、鹽酸小檗鹼對照品適量，精密稱定，加乙腈-水(35 : 65)的混合溶液製成每lml含鹽酸巴馬汀50i!g，含鹽酸小檗鹼50iig的混合對照品溶液，即得。 供試品溶液的製備取金雞膠囊內容物8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸_甲醇(1 : 200)混合溶液25ml，稱定重量，冷浸2小時，超聲處理60分鐘，放冷至室溫，再稱定重量，用鹽酸-甲醇(1 : 200)混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液10ml，蒸乾，殘渣加乙腈-水(35 : 65)混合溶液使溶解，轉移至5ml量瓶中並稀釋至刻度，搖勻，用O. 45iim微孔濾膜濾過，即得。 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5iU，注入液相色譜儀，測定，即得。
實施例6金雞膠囊中穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含量測定
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇_水(55 : 45)為流動相；檢測波長為230nm;理論板數按穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯計算均大於3000。 對照品溶液的製備精密稱取穿心蓮內酯對照品、脫水穿心蓮內酯對照品適量，加甲醇製成每lml含穿心蓮內酯80ii g，含脫水穿心蓮內酯160 ii g的對照品溶液，即得。
供試品溶液的製備取金雞膠囊內容物約lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇100ml，稱定重量，浸泡4小時，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，加甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液50ml，置中性氧化鋁柱(200 300目，8g，內徑lcm)上，用甲醇40ml洗脫，收集洗脫液，置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20iU，注入液相色譜儀，測定，即得。 實施例7金雞片中鹽酸巴馬汀與鹽酸小檗鹼的含量測定 色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-0. 05mol/L磷酸二氫鉀緩衝液(用磷酸調pH值至3. 1) (32 : 68)為流動相；檢測波長為258nm ;理論板數按鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗鹼計算均大於2000。 對照品溶液的製備取鹽酸巴馬汀對照品、鹽酸小檗鹼對照品適量，精密稱定，加乙腈-水(32 : 68)的混合溶液製成每lml含鹽酸巴馬汀30i!g，含鹽酸小檗鹼30iig的混合對照品溶液，即得。 供試品溶液的製備取金雞片除去包衣，研細，取3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸_甲醇(1 : 25)混合溶液40ml，稱定重量，冷浸1小時，超聲處理50分鐘，放冷至室溫，再稱定重量，用鹽酸-甲醇(1 : 25)混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液10ml，蒸乾，殘渣加乙腈-水(32 : 68)混合溶液使溶解，轉移至5ml量瓶中並稀釋至刻度，搖勻，用0. 45iim微孔濾膜濾過，即得。 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測定，即得。 實施例8金雞片中穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含量測定 色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇_水(54 : 46)為流動相；檢測波長為222nm;理論板數按穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯計算均大於3000。 對照品溶液的製備精密稱取穿心蓮內酯對照品、脫水穿心蓮內酯對照品適量，加甲醇製成每lml含穿心蓮內酯20ii g，含脫水穿心蓮內酯40 ii g的對照品溶液，即得。
供試品溶液的製備取金雞片除去包衣，研細，取2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇80ml，稱定重量，浸泡3小時，超聲處理40分鐘，放冷，再稱定重量，加甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液40ml，置中性氧化鋁柱(100 200目，6g，內徑lcm)上，用甲醇40ml洗脫，收集洗脫液，置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測定，即得。 實施例9金雞顆粒中鹽酸巴馬汀與鹽酸小檗鹼的含量測定
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-0. 06mol/L磷酸二氫鉀緩衝液(用磷酸調pH值至2. 9) (28 : 72)為流動相；檢測波長為350nm ;理論板數按鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗鹼計算均大於2000。 對照品溶液的製備取鹽酸巴馬汀對照品、鹽酸小檗鹼對照品適量，精密稱定，加乙腈-水(28 : 72)的混合溶液製成每lml含鹽酸巴馬汀20i!g，含鹽酸小檗鹼10iig的混合對照品溶液，即得。 供試品溶液的製備取金雞顆粒研細，取5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸_甲醇(1 : 100)混合溶液50ml，稱定重量，冷浸2. 5小時，超聲處理35分鐘，放冷至室溫，再稱定重量，用鹽酸-甲醇(1 : 100)混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液10ml，蒸乾，殘渣加乙腈-水(28 : 72)混合溶液使溶解，轉移至5ml量瓶中並稀釋至刻度，搖勻，用0. 45iim微孔濾膜濾過，即得。 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測定，即得。 實施例10金雞顆粒中穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含量測定
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-水(53 : 47)為流動相；穿心蓮內酯檢測波長為223nm，脫水穿心蓮內酯檢測波長為257nm;理論板數按穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯計算均大於3000。 對照品溶液的製備精密稱取穿心蓮內酯對照品、脫水穿心蓮內酯對照品適量，加甲醇製成每lml含穿心蓮內酯60 ii g，含脫水穿心蓮內酯120 ii g的對照品溶液，即得。
供試品溶液的製備取金雞顆粒研細，取4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，浸泡1. 5小時，超聲處理35分鐘，放冷，再稱定重量，加甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液20ml，置中性氧化鋁柱(100 200目，4g，內徑lcm)上，用甲醇20ml洗脫，收集洗脫液，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各15iU，注入液相色譜儀，測定，即得。 實施例11金雞含片中鹽酸巴馬汀與鹽酸小檗鹼的含量測定 色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-0. 07mol/L磷酸二氫鉀緩衝液(用磷酸調pH值至3. 2) (29 : 71)為流動相；檢測波長為330nm ;理論板數按鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗鹼計算均大於2000。 對照品溶液的製備取鹽酸巴馬汀對照品、鹽酸小檗鹼對照品適量，精密稱定，加乙腈-水(29 : 71)的混合溶液製成每lml含鹽酸巴馬汀20i!g，含鹽酸小檗鹼10iig的混合對照品溶液，即得。 供試品溶液的製備取金雞含片研細，取5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸_甲醇(1 : 100)混合溶液50ml，稱定重量，冷浸2小時，超聲處理20分鐘，放冷至室溫，再稱定重量，用鹽酸-甲醇(1 : 100)混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液10ml，蒸乾，殘渣加乙腈-水(29 : 71)混合溶液使溶解，轉移至10ml量瓶中並稀釋至刻度，搖勻，用0. 45 ii m微孔濾膜濾過，即得。 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測定，即得。
實施例12金雞含片中穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含量測定
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇_水(47 : 53)為流動相；檢測波長為228nm;理論板數按穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯計算均大於3000。 對照品溶液的製備精密稱取穿心蓮內酯對照品、脫水穿心蓮內酯對照品適量，加甲醇製成每lml含穿心蓮內酯30ii g，含脫水穿心蓮內酯20 i！ g的對照品溶液，即得。
供試品溶液的製備取金雞含片研細，取3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，浸泡3小時，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，加甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液20ml，置中性氧化鋁柱(100 200目，5g，內徑lcm)上，用甲醇25ml洗脫，收集洗脫液，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測定，即得。
權利要求
一種金雞製劑的質量控制方法，該質量控制方法包括鹽酸巴馬汀與鹽酸小檗鹼的含量測定方法，和/或穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含量測定方法鹽酸巴馬汀與鹽酸小檗鹼的含量測定方法為色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-磷酸二氫鹽緩衝液(用磷酸調pH值至2.8～3.5)(25～35∶75～65)為流動相；紫外檢測器。對照品溶液的製備取鹽酸巴馬汀對照品、鹽酸小檗鹼對照品適量，精密稱定，加乙腈-水(25～35∶75～65)的混合溶液製成混合對照品溶液，即得。供試品溶液的製備取金雞製劑藥物，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入一定體積的鹽酸-甲醇(1∶25～200)混合溶液，稱定重量，冷浸，超聲處理，放冷至室溫，再稱定重量，用鹽酸-甲醇(1∶25～200)混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取一定體積的續濾液，蒸乾，殘渣加乙腈-水(25～35∶75～65)混合溶液使溶解，轉移至一定體積的量瓶中並稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5～20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含量測定方法為色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-水(45～55∶55～45)為流動相；紫外檢測器。對照品溶液的製備精密稱取穿心蓮內酯對照品、脫水穿心蓮內酯對照品適量，加甲醇-水(100～50∶0～50)製成穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的對照品溶液，即得。供試品溶液的製備取金雞製劑藥物，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-水(100～50∶0～50)，稱定重量，浸泡，超聲處理，放冷，再稱定重量，加甲醇-水(100～50∶0～50)補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取一定體積的續濾液，置中性氧化鋁柱上，用甲醇洗脫，收集洗脫液，置量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5～20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
2. 如權利要求1所述的金雞製劑的質量控制方法，其特徵在於該方法包括 鹽酸巴馬汀與鹽酸小檗鹼的含量測定方法為色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-磷酸二氫鹽 緩衝液(用磷酸調PH值至3. 0) (30 : 70)為流動相；紫外檢測器。對照品溶液的製備取鹽酸巴馬汀對照品、鹽酸小檗鹼對照品適量，精密稱定，加乙 腈-水(30 : 70)的混合溶液製成一定濃度的混合對照品溶液，即得。供試品溶液的製備取金雞製劑藥物，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入一定體積的鹽酸-甲醇(i : ioo)混合溶液，稱定重量，冷浸，超聲處理，放冷至室溫，再稱定重量，用鹽 酸-甲醇(i : ioo)混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取一定體積 的續濾液，蒸乾，殘渣加乙腈-水(30 : 70)混合溶液使溶解，轉移至一定體積的量瓶中並 稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 20iU，注入液相色譜儀，測定，即得。穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含量測定方法為色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇_水(45 55 : 55 45)為流動相；紫外檢測器。對照品溶液的製備精密稱取穿心蓮內酯對照品、脫水穿心蓮內酯對照品適量，加甲 醇-水(100 50 : 0 50)製成一定濃度的穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的對照品溶液， 即得。供試品溶液的製備取金雞製劑藥物，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-水 (100 50 : 0 50)，稱定重量，浸泡，超聲處理，放冷，再稱定重量，加甲醇-水(100 50 : 0 50)補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取一定體積的續濾液，置中性氧化鋁柱上，用甲醇洗脫，收集洗脫液，置量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 20iU，注入液相色譜儀，測定，即得。
3. 如權利要求1或2所述的金雞製劑的質量控制方法，其特徵在於該方法中鹽酸巴馬 汀與鹽酸小檗鹼的含量測定方法的流動相中的磷酸二氫鹽為是磷酸二氫鉀或磷酸二氫鈉， 其濃度範圍為0. Olmol/L 0. 08mol/L。
4. 如權利要求1或2所述的金雞製劑的質量控制方法，其特徵在於該方法中鹽酸巴 馬汀與鹽酸小檗鹼的含量測定方法的紫外檢測器的檢測波長範圍是260nm 270nm或 330nm 350nm。
5. 如權利要求1或2所述的金雞製劑的質量控制方法，其特徵在於該方法中鹽酸巴馬 汀與鹽酸小檗鹼的含量測定方法的鹽酸巴馬汀對照品的濃度範圍是5ii g/ml 50ii g/ml， 鹽酸小檗鹼對照品的濃度範圍是5 ii g/ml 50 ii g/ml。
6. 如權利要求1或2所述的金雞製劑的質量控制方法，其特徵在於該方法中穿心 蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含量測定方法中紫外檢測器的檢測波長範圍是穿心蓮內酯 220nm 230nm，脫水穿心蓮內酯220nm 230nm或250nm 260nm。
7. 如權利要求1或2所述的金雞製劑的質量控制方法，其特徵在於該方法中穿心蓮內 酯與脫水穿心蓮內酯的含量測定方法中的穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的對照品溶液，穿 心蓮內酯對照液的濃度範圍是10ii g/ml 80ii g/ml，脫水穿心蓮內酯對照液的濃度範圍 是20 ii g/ml 160 ii g/ml 。
全文摘要
本發明公開一種金雞製劑的質量控制方法，採用的是高效液相色譜法，此方法精密度、穩定性、重現性良好，能夠有效地控制金雞製劑的產品質量。
文檔編號A61K36/185GK101721530SQ20091011456
公開日2010年6月9日 申請日期2009年11月18日 優先權日2009年11月18日
發明者梁月釗, 榮燕李, 陳曉軍, 黃園 申請人:廣西匯科藥物研究有限責任公司