一種sncg基因在乳腺癌的診斷和激素治療中的應用的製作方法
2024-01-19 14:26:15 4
專利名稱：一種sncg基因在乳腺癌的診斷和激素治療中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及ー種SNCG基因的應用，具體地說，是ー種SNCG基因在乳腺癌的診斷和激素治療中的應用。
背景技術：
乳腺癌是最常見和最重要的乳腺疾病，發病率逐年上升，以上海為例，1972年，上海女性的乳腺癌發病率為每10萬人中有17人，1992年上升到每10萬人中有34人，2000 年，則迅速上升至每10萬人中有56. 2人。也就是說，從1992-2000年8年間的上升幅度，超過了 1972-1992年20年間的上升幅度，成為女性發病率最高的惡性腫瘤，嚴重危害廣大婦女的身心健康。作為ー種雌激素依賴的腫瘤，對雌激素及雌激素受體(estrogen receptor, ER)狀況在乳腺癌致病、進展以及治療中的研究日益受到重視，乳腺癌的激素治療成為與化療具同等重要地位的綜合處理方法，但其同時也遭遇腫瘤細胞耐藥而治療失敗的瓶頸。因此，對乳腺癌激素和受體調控的深入探索，並在此基礎上建立新的防治策略成為當今世界生物醫學界研究的重大課題。腫瘤分期、淋巴結轉移以及ER狀態等是與乳腺癌進展有關的經典臨床病理指標。 隨著醫學分子生物學的不斷發展，越來越多的腫瘤標記物被發現於乳腺癌的發生發展密切相關，有資料顯示，SNCG表達與乳腺癌的分期呈明顯正相關性，可能是乳腺癌新的預後指標。SNCG是Shi最早克隆出的ー種新的人類基因，經證實，其與乳腺癌特異基因1 (breast cancer specific genel，BCSG1)為同一基因。SNCG是ー種特異的在乳腺癌中有選擇性表達的基因，是利用BLAST程序搜尋大約500000條表達序列標籤(expressed sequence tag, EST)得到的ー個含8條EST編碼SNCG的基因，其中7條來自乳腺cDNA文庫，僅1條在腦庫，而7條EST中有6條來自乳腺腫瘤文庫。近年來，申請人利用逆轉錄-鏈式聚合酶反應 (reverse transcription-polymerase chain reaction , RT-PCR)> Western bolt 口原位雜交(in situ hybridization，ISH)等技術檢測SNCG在不同乳腺組織的表達，發現大多數進展期乳腺癌的腫瘤上皮細胞出現SNCG表達。研究顯示，36%的乳腺癌檢測到SNCG表達， 其中SNCG表達率在III / IV期乳腺癌高達81%，而在I / II期乳腺癌僅為15% ；SNCG的表達與乳腺癌的分期呈明顯正相關性(/X0. 001)；經過5年密切跟蹤隨訪後發現，28%SNCG表達陽性者出現遠處轉移(包括胸腔、肺和骨等)，遠多於SNCG表達陰性者(僅6%)，/M). 006 ；Cox回歸分析顯示，SNCG表達陽性者的復發、轉移風險高於SNCG表達陰性者(HR 4.515，95% CI 1. 188-17. 154，P=O. 027)。統計生存分析發現SNCG表達陽性者3年無病生存率(Disease Free Survival, DFS)和 5 年 DFS 分別為 78% 和 44%，較 SNCG 表達陰性者 3 年 DFS (94%) 和5年DFS (94%)明顯降低Gd=O. 014)，從而首次提出SNCG可能是乳腺癌新的預後指標。中國專利文獻CN101497922A，
公開日2009年8月5日，發明名稱為PNMA5基因的應用。該發明公開了ー種PNMA5基因的應用，用於製備診斷肝癌的產品和製備治療肝癌的藥物，該發明的PNMA5基因，可作為診斷肝癌的特異標緻基因，使肝癌診斷更加準確、快速， 且為防治肝癌提供了新的治療靶點和有效新藥。但是關於SNCG基因在乳腺癌的診斷和激素治療中的應用，目前還未見報導。
發明內容
本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供ー種SNCG基因在乳腺癌的診斷和激素治療中的應用。為實現上述目的，本發明採取的技術方案是一種SNCG基因在乳腺癌的診斷和激素治療中的應用，所述的SNCG基因通過調節ER活性狀態而影響乳腺癌的激素治療。所述的SNCG基因通過調節抗雌激素治療敏感性影響乳腺癌的激素治療。所述的SNCG基因在製備診斷乳腺癌的產品中的應用。所述的診斷乳腺癌的產品包括用RT-PCR、定時定量PCR或免疫檢測診斷乳腺癌的產品。本發明優點在於
1、SNCG基因表達調節對ER和激素治療敏感性的作用，開創了乳腺癌激素治療的新思
路；
2、SNCG基因表達調節對ER和激素治療敏感性的作用，提高了開發治療乳腺癌的新藥的可能性；
3、SNCG基因可作為診斷乳腺癌的特異標誌基因，使乳腺癌診斷更加準確、快速。
附圖1是實施例2中細胞生長曲線圖。附圖2是實施例3中細胞周期統計結果圖。附圖3是實施例5中基因在mRNA水平的表達情況示意圖。附圖4是實施例6中western blot對蛋白的檢測示意圖。附圖5是實施例7中Transwel 1拍照結果示意圖。附圖6是實施例7中Transwel 1統計結果示意圖。附圖7是實施例8中Wfestern blot檢測結果示意圖。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明提供的具體實施方式
作詳細說明。實施例1慢病毒載體的構建與包裝一、實驗材料
(一)主要設備
YJ-875超淨工作檯、CO2培養箱3111型、-80°C低溫冰箱、LDZX-40BI型壓カ蒸汽滅菌器、TGL-16G型臺式高速離心機、Nanopure超純水儀、流式細胞儀、AA-200型電子天平、 carton顯微鏡CCD攝像系統、CK40-F200型倒置顯微鏡、XSP-2C生物顯微鏡、螢光定量PCR 儀、蛋白印跡電泳儀、90-2型磁力攪拌器、孔徑101，tm的多聚酯濾膜、微量移液槍等。(ニ)主要藥品及試劑
穀氨醯胺(L-Glutamine)、ニ甲基亞碸(DMSO)、胰蛋白酶、胎牛血清、DMEM培養粉、鼠抗人單克隆PE-⑶133/1、小鼠抗人ERalpha受體抗體、小鼠抗人BCRP抗體、兔抗人SNCG抗體、alpha-actin抗體-SC-8432、MTT、聚丙烯醯胺、SNCG siRNA lentiviral particle gene silencers、Contro丄 shRNA Lentiviral Particles、ViraPower Bsd Lentiviral Support Kit。(三)主要溶液配製 1.細胞培養用溶液配製
(1)磷酸鹽緩衝液(0.lmol/L PBS, pH 7. 4)
NaCl 8. OOg，KCl 0. 20g, Na2HPO4 1. 56g, KH2PO4 0. 20g 加雙蒸水定容至100ml，用孔徑0. 22um微孔濾膜過濾除菌，4°C保存備用。(2) DMEM完全培養基
採用DMEM培養粉，按說明配製成DMEM基礎培養液；加入NaHCO3 (終濃度0. 08%)，小牛血清終濃度為10%，適量的HEPES、抗生素(終濃度為100U/ml青黴素和100ug/ml鏈黴素) 和3%穀氨醯胺(終濃度lOumol/ml)。(3)胰蛋白酶消化液
用無鈣、鎂離子Hank』S液配製終濃度為0. 25%(w/v)的胰蛋白酶溶液，過濾除菌，4°C保存。(4) EDTA 消化液
用0.01 mol/L PBS緩衝液配製終濃度為lmmol/L EDTA (w/v)的消化溶液，過濾除菌，
4°C保存。(5)細胞凍存液
即含10% DMSO和30%小牛血清的完全培養基。(6)胎牛血清
新生胎牛血清購於Gibco公司，臨用前56°C熱滅活30min，4°C冰箱保存備用。2.其它試劑配製
(2)0.5 mol / L EDTA (PH8. 0) EDTA. 2H20186. Ig 雙蒸水 800ml
1 mol/L NaOH 適量調節 PH 至 8. 0， 加雙蒸水定容至1000ml。(3) IOmM Tris (PH 7. 5) Tris 1. 2114g
DEPC處理的雙蒸水800ml
濃鹽酸適量調節PH至7. 5
加DEPC處理的雙蒸水溶解定容至1000ml。(4) 5 X TBE 緩衝液 Tris 54g 硼酸 27. 5g
0. 5mol / L EDTA (PH 8.0)20mL 加雙蒸水溶解定容至 1000ml。(5) 6 X凝膠載樣緩衝液 溴酚藍0. 25%ニ甲苯青0.25%
蔗糖40% (W / V)，4°C保存
(6)5mg/ml MTT的配製稱取MTT 0. 5克，溶於100 ml的磷酸緩衝液(PBS)，用0. 22um 濾膜過濾以除去溶液裡的細菌，放4°C避光保存備用。(7) western blot 溶液的配製
1) 2mol/L Tris-HCL(PH8. 8) 100ml 稱取 24. 2g Tris 鹼，加入 50ml ddH20，緩慢加入濃鹽酸至PH8. 8，冷卻至室溫，加入ddH20至100ml。2) lmol/L Tris-HCL(PH6. 8) 100ml 稱取 12. Ig Tris鹼，加入50ml ddH20，緩慢加入濃鹽酸至PH6. 8，冷卻至室溫，加入ddH20至100ml。3) 10%SDS 100ml 稱取 IOgSDS,加入 ddH20 至 100ml，室溫保存。4) 10%過硫酸銨0. 5g過硫酸銨加入5ml ddH20,密封后存放於4°C。5)電泳緩衝液:3gTris鹼14. 4g甘氨酸，IgSDS加入IL水溶解 6)轉移緩衝液:1. 93gTris鹼9g甘氨酸加入ddH20至1し7)TBS :5mlTris-HCL (2mol/L，PH7. 5),37. 5mlNaCl (4mol/L)加 ddH20 至 1L，調 PH 值至7.5，臨用前加入Tween20 (1:1000)。8)封閉液5%脫脂奶粉溶於TBST溶液。ニ、實驗步驟
1. 1將已有的克隆質粒(RG204173) P-CMV-SNCG內的基因經過酶切(SgfI-MluI)Jfg 的片段轉入慢病毒載體(pLenti6. 3)，並測序驗證後進行轉染。1.2轉染前一天將四31~細胞鋪於IOcm板，當細胞密度達到80%左右即可進行 PEI轉染。將下列DNA加入一個已裝有480ul 1* HBS( PH 7.4)滅菌管混勻。1. 3將10* PEI劇烈振蕩後加入到360ul 1* HBS ( PH 7. 4)滅菌管混勻。 1. 4將混勻的PEI加入到裝有DNA的滅菌管中，用槍頭吹吸15次混勻，室溫培養 30分鐘。1. 5吸去待轉染細胞的培養液換成5ml無血清DMEM培養，待DNA靜置時間到達， 將DNA混合液逐滴均勻加入到細胞培養皿中，用手輕搖混勻平皿。1.6 6-8小時後，將無血清DMEM移去，換成13ml 10%血清的正常DMEM於37°C培養包裝病毒。1. 7在隨後的三天，每天收集細胞上清於ー個滅菌的50ml管中保存於4°C，隨後更換新鮮培養液。1. 8收集的細胞上清液經過0. 45um 一次性濾器過濾，除去細胞碎片。1. 9將35ml過濾的上清加入到ー個高速離心管中，離心管用培養液平衡並用封 ロ膜封ロ，4°C，70000g離心2小時後，用移液管小心移去上清，加入Iml培養液並用移液管小心吹吸大概20下至沉澱溶解。1.10收集到的病毒根據所需量，在終濃度6-lOng/ul polybrene存在下加入到 70%左右目的細胞的6孔板中，6孔板於37°C 2500rpm離心30分鐘後，置於37°C培養驗證效率即可。實施例2 MTT法測細胞的増殖活性一、實驗材料(參見實施例1)ニ、實驗步驟
MTT溶液配置稱取MTT 0. 5克，溶於100 ml的磷酸緩衝液(PBS)中，用0. 22 μ m濾膜過濾以除去溶液裡的細菌，放4°C避光保存即可。1)細胞依據不同試驗分組，轉染不同的載體後，每孔加入細胞培養液培養池， 24h, 48h，72h，每組選擇三個復孔。2)拿出培養箱後，每孔加入500μ 1細胞培養液和50μ 1 MTT溶液(5mg/ml)。37°C 培養箱內孵育4小吋。3)小心吸出細胞培養液，加入500μ 1 DMS0，震蕩lOmin，使結晶物充分溶解。4)每孔分別取出100 μ 1，加入96孔板中進行檢測。選擇490nm波長，以對照孔調零，在酶標儀上測定各孔的吸光值。以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪製細胞生長曲線圖。三、實驗結果
如圖1所示，圖1是細胞生長曲線圖，橫坐標為細胞培養的不同時間點，縱坐標為MTT 試驗中讀取OD值，OD值越高，代表細胞細胞活力越強。不同的組別如圖1所示，我們可以看出，與其它各組相比，轉染SNCG-shRNA組，也就是抑制SNCG表達的實驗組，在72h時間點， 細胞活力最低，和對照組相比，具有統計學差異，P<0. 05，表明該細胞在低表達SNCG的情況下，細胞整體活力較低。相反，過表達SNCG組，細胞在48Κ7 !時間點OD值都最高，細胞活力最強，且差異具有統計學意義，表明SNCG高表達情況下，細胞活力較高。實施例3流式檢測細胞周期一、實驗材料(參見實施例1)
ニ、實驗步驟
1)取各實驗組細胞，胰酶消化後，離心，PBS洗一遍；
2)上述細胞分別製成單細胞懸液，調整細胞數為1X IO6個/し3 )加入冰預冷的70%的乙醇固定，4°C，1 _2小時。4)離心棄去固定液，3mlPBS重懸5min。5)加入 150 ul RNaseA (250-500 ug/ml PBS 稀釋)重懸細胞，37°C消化 30 分鐘。6) 400 目的篩網過濾 1 次，500-1000r/min 離心 5min,棄去 PBS。7)用 Iml PI (50ug/ml)染液染色，4°C避光 30min。8)流式細胞儀檢測，PI用488nm氬離子雷射器激發，由630帶通濾光片接收，通過FSC/SSC散點圖。細胞周期統計結果如下
如圖2所示，圖2是細胞周期統計結果圖，Cell cycle實驗統計結果，橫坐標為不同細胞周期狀態，縱坐標為處在該細胞周期的細胞佔總細胞數的比例。圖2中可見，過表達SNCG 後，G2/M期細胞減少；下調SNCG後，G2/M期細胞增多，說明SNCG的表達高低對於細胞周期產生了影響。但是，和對照組相比，過表達或是抑制SNCG組，P值均無顯著性差異，說明 SNCG的表達高低對於細胞周期的影響並不大。實施例4細胞培養及轉染試驗一、實驗材料(參見實施例1)
ニ、實驗步驟人T47D細胞株培養於含5%胎牛血清的1640培養基中，於37°C、5% CO2培養箱內培養。轉染前一天將貼壁生長的細胞進行胰酶消化、鋪板，使轉染當天細胞密度達到90%。按照以下分組進行轉染
陰性對照組-1 (陰性對照，加入空shRNA)；
陰性對照組-2 (陰性對照，加入對照lentivirus vector)；
實驗組-1 (加入shRNA-SNCG)，實驗組-2 (加入lenti-SNCG)，每組設3個復孔。轉染步驟按LipofectamineTiCOOO說明書進行。M h後消化稀釋細胞(1 10)至新鮮培養基中， 48 h後加G418 (800mg/L)篩選，約2周左右獲得陽性單克隆，用含800mg/L G418的培養基擴大培養，約8周獲得穩定表達SNCGshRNA、陰性對照質粒的T47D細胞。實施例5 RT-PCR方法檢測SNCG以及ER、BCRP的mRNA的表達一、實驗材料(參見實施例1)
ニ、實驗步驟
1)細胞總RNA的抽提純化
(1) 1 X IO7細胞倒入1. 5mlEP離心管中加入ImlRNArose試劑。(2)勻漿室溫放置5min，然後在4°C以離心カ為12000g離心5min。(3)上清液倒入另ー EP離心管中，按照Iml的RNArose使用200 μ 1的比例在上清液中加入氯仿，用力顛倒離心管以混勻，室溫靜置IOmin使之分層後，4°C，以離心カ為 12000g 離心 15min。(4)小心將上層水相移至另外ー個離心管中，再加入等體積異丙醇，混勻，室溫放 i IOmin0(5)4°C，以12000 g離心lOmin，小心棄上清，管底見少許白色沉澱，為分離出的總
RNA。(6)在離心管中按照Iml的RNArose使用至少Iml 75%乙醇的比例加入75%乙醇來回顛倒離心管混勻片刻後，4°C，7500g離心5min，小心棄上清。(7)室溫靜置IOmin使RNA沉澱恰好乾燥，加入201，tl DEPC處理的雙蒸水溶解 RNA，取1 μ 1用於樣品純度和濃度測定。2) RNA樣品濃度及純度測定
取上述溶解的樣品加入IOmM的Tris (ΡΗ7. 5)，用紫外分光光度儀測定濃度及純度。RNA 濃度(UgAil)=OD26tlX 100X40 / 1000。RNA 純度根據 OD26tl / OD28tl 進行判定。本實驗 RNA 樣品OD260 / OD280均在1. 80以上，符合實驗要求。3)逆轉錄(RT)合成 cDNA
(1)在經DEPC水處理的微量離心管中建立如下逆轉錄反應體系
MgCl22ul
10XRT BufferIul
dNTP MixtureIul
RNase Inhibitor0. 25ul
AMV Reverse Transcriptase0. 5ul
Random 9 mers0. 5ul 實驗樣品總RNARNase Free dH90
補足總體積IOul
(2)在混勻器上充分混勻
(3)按照以下條件在PCR儀上進行逆轉錄反應
30 0C 42 0C 99 0C 5 0C
IOmin 30min 5min
5min 一個循環後，20°C保存。 4)聚合酶鏈反應(PCR)
按下列參數加樣10 μ ι體系，每個PCR擴增體系如下
cDNA模板
上遊引物(lumol/μ 1) 下遊引物(lumol/μ 1) Sub green mix
2μ 1 0. 1 μ 1 0. 1 μ 1
加滅菌雙蒸餾水至體積10 μ 1，將加好樣的PCR管置Applied Biosystems9700反應，程序如下50°C 2mins,95°C 2mins,60°C 30s (40 個循環)。以 GAPDH 作為校正。三、實驗結果
請參照圖3，圖3是基因在mRNA水平的表達情況示意圖，Lenti-vector為轉染慢病毒空載組，Ienti-SNCG為過表達SNCG組，sh-RNA為轉染空載幹擾RNA組，shRNA-SNCG為幹擾 SNCG基因組。該圖橫坐標為基因名稱，縱坐標為該基因與GAPDH表達量的比值，反應基因在 mRNA水平的表達高低情況，不同顏色的柱狀圖代表不同的處理組。圖3反應如下信息
1.與對照組相比，Ienti-SNCG組的SNCG基因表達量顯著升高，shRNA-SNCG組表達量發生顯著降低，表明SNCG過表達或者被抑制的兩個模型在mRNA水平驗證成功。2.與對照組相比，在SNCG過表達的情況下，ER基因的mRNA表達量增高；在SNCG 被抑制情況下，ER基因的mRNA表達量降低；即在mRNA水平，SNCG基因表達量的高低直接影響ER基因的表達量，並且是正相關，即SNCG的高表達會誘發ER的高表達，SNCG的低表達同樣會導致ER的低表達；而SNCG對BCRP基因的表達量幾乎沒有影響。實施例6 western blot方法檢測SNCG以及ER、BCRP的表達的影響一、實驗材料(參見實施例1)
ニ、實驗步驟
1)裝配好灌膠用的模具，配置10%分離膠10ml，小心將凝膠溶液用吸管緩慢加入模具內。在分離膠溶液上覆蓋ー層ddH20，可消除氣泡並使凝膠表面變得平整。2)等待30-60min，使凝膠聚合，吸盡分離膠上的溶液，配置5%的積層膠細1，將積層膠用吸管加至分離膠上面，直至凝膠溶液到達前玻璃板的頂端，將梳子插入凝膠內，確保梳齒的末端沒有氣泡。3)等待30min待凝膠聚合後，小心拔出梳子。將凝膠放入電泳槽內，將電泳緩衝液加入內外電泳槽中，使凝膠上下端均浸泡在緩衝液中。4)取蛋白樣品加至樣品孔中，接好電極，以100V電壓進行電泳2小吋，電泳結束後取出凝膠
5)打開轉移盒，用轉移緩衝液將海綿墊完全浸透，海綿上放置一張浸溼的濾紙，小心將凝膠放置於濾紙上，再將硝酸纖維素膜放在膠面上，膜上再放一張浸溼的濾紙，用一乾淨小試管滾過以消除所有氣泡，將另ー塊海綿浸溼後放在凝膠膜上，關上轉移盒插入轉移池。在轉移池中注滿轉移緩衝液。連接好電極，恆壓100V轉移1.5小吋。6)免疫檢測將膜放入8ml封閉液中，室溫輕搖1小時，棄去封閉液；加入1:200 稀釋的抗體，溫和搖動，4°C孵育過夜；棄去ー杭，用TBS洗膜10minX4次；棄去TBS，加入 1:1000稀釋的HRP標記的ニ抗，室溫溫和搖動1小時；棄去ニ抗，用TBS洗膜IOminX4次； 棄去TBS，用吸水紙將膜吸乾，加入螢光底物，吸乾膜上的水分，曝光，顯影定影。三、實驗結果
請參照圖4，圖4是western blot對蛋白的檢測示意圖，本試驗通過western blot技術針對蛋白水平的檢測，條帶亮度越高，表明該蛋白表達量越高。圖4中結果表明
1.與對照組相比，Ienti-SNCG組的SNCG蛋白表達量顯著升高，shRNA-SNCG組的SNCG 蛋白表達量發生顯著降低，各組蛋白上樣以actin蛋白校正，表明在蛋白水平SNCG過表達或者被抑制試驗成功。2. SNCG過表達的情況下，與對照組相比，ER蛋白的表達量增高；SNCG被抑制情況下，與對照組相比，ER蛋白的表達量降低；即在蛋白水平，SNCG蛋白表達量的高低直接影響 ER蛋白的表達量，並且是正相關，即SNCG蛋白表達升高的情況下，ER蛋白表達也會升高，反之亦然。而對BCRP基因的表達量幾乎沒有影響。這些結果與實施例5中mRNA水平結果ー致。實施例7 Transwell遷移侵襲實驗檢測SNCG對細胞的侵襲增殖促進作用一、實驗材料(參見實施例1)
ニ、實驗步驟
DTranswell小室製備=Chemicon公司的ECM550系列說明書要求，將小室放入培養板中，在上室加入300μ1預溫的無血清培養基，室溫下靜置15-30min，使基質膠再水化，再吸去剰餘培養液。2)消化細胞，終止消化後離心棄去培養液，用PBS洗1-2遍，用含BSA的無血清培養基重懸。調整細胞密度至5X105。3)取細胞懸液100_200μ1加入Transwell小室，常規培養48h。4)用棉籤擦去基質膠和上室內的細胞，0. 1%結晶紫染色，染色後可以用33%醋酸脫色，使用的是Leica DC 300F正置顯微鏡進行觀察和拍照，把Transwel 1小室反過來底朝上就可清楚看到小室底膜上下室側附著的細胞。隨機選取16個視野，使用的顯微鏡所看到的視野的直徑剛好是Chemicon公司的ECM550系列小室底面膜的直徑的1/4。三、實驗結果
Transwell拍照結果如圖5所示，Transwell統計結果如圖6所示。Transwell拍照結果中，見到的紫色細胞越多，表明細胞的侵襲カ越強，其具體的細胞數見統計結果柱狀圖。綜合二者，可以看出
和對照組(lenti-vector)相比，SNCG過表達組侵襲細胞數明顯增多；和對照組 (shRNA)相比，SNCG被抑制組侵襲細胞數明顯減少；表明SNCG基因高表達的細胞具有更強的細胞侵襲能力，SNCG低表達的細胞則細胞侵襲能力降低。
實施例8建立荷瘤鼠模型和分組一、實驗材料(參見實施例1)
ニ、實驗步驟
在接種細胞前2周，肌注2 mg雌ニ醇，將12隻裸鼠隨機分為3組(1) T47D組，收集對數生長期的T47D細胞5 X IO7個，接種於裸鼠皮下，之後每周肌注2 mg雌二醇；(2) 對照組，注射等體積注射用水；(3) lv-SNCG-T47D組，注射轉染Iv-SNCG的T47D細胞；(4) shRNA-SNCG-T47D 組，注射轉染 shRNA_SNCG 的 T47D 細胞。30 d後處死裸鼠，分離瘤體後測量直徑，計算腫瘤體積，VW-I / 2ab (a為最大長徑，b為橫徑)。Western blot檢測ER、BCRP、P53、C_ERB2的表達情況(方法同上)。結果見表1。表 權利要求
1.ー種SNCG基因在乳腺癌的診斷和激素治療中的應用，其特徵在幹，所述的SNCG基因通過調節雌激素受體活性狀態而影響乳腺癌的激素治療。
2.根據權利要求1所述的SNCG基因在乳腺癌的診斷和激素治療中的應用，其特徵在幹，所述的SNCG基因通過調節抗雌激素治療敏感性影響乳腺癌的激素治療。
3.根據權利要求1所述的SNCG基因在乳腺癌的診斷和激素治療中的應用，其特徵在幹，所述的SNCG基因在製備診斷乳腺癌的產品中的應用。
4.根據權利要求1所述的SNCG基因在乳腺癌的診斷和激素治療中的應用，其特徵在幹，所述的診斷乳腺癌的產品包括用RT-PCR、定時定量PCR或免疫檢測診斷乳腺癌的產
全文摘要
本發明涉及一種SNCG基因在乳腺癌的診斷和激素治療中的應用，所述的SNCG基因通過調節ER活性狀態而影響乳腺癌的激素治療。所述的SNCG基因在製備診斷乳腺癌的產品中的應用。本發明優點在於SNCG基因表達調節對ER和激素治療敏感性的作用，開創了乳腺癌激素治療的新思路；SNCG基因表達調節對ER和激素治療敏感性的作用，提高了開發治療乳腺癌的新藥的可能性；SNCG基因可作為診斷乳腺癌的特異標誌基因，使乳腺癌診斷更加準確、快速。
文檔編號G01N33/574GK102586407SQ20111000512
公開日2012年7月18日 申請日期2011年1月12日 優先權日2011年1月12日
發明者吳克瑾, 林清, 王永坤, 翁子毅, 陸雲姝 申請人:上海交通大學醫學院附屬新華醫院