一種馬尾松抗逆保健菌根菌劑及其應用方法
2024-02-27 19:03:15
專利名稱：一種馬尾松抗逆保健菌根菌劑及其應用方法
技術領域：
本發明涉及一種促進馬尾松樹生根、生長，改善水分、養分代謝，改良土壤和抗逆保健提高生產力的馬尾松抗逆保健菌根菌劑及其應用方法，特別是對馬尾松病害如落葉病，根部病害如立枯病、猝倒病等具有較好的抑制作用。
背景技術：
馬尾松分布極廣，遍布於華中華南各地，是中國南部主要材用樹種，經濟價值高。目前，主要採用化學方法殺滅松樹病蟲害，這種方法會汙染大氣、水環境，造成土壤板結，增強病菌、害蟲對農藥的抗藥性，殺傷有益生物，同時對人體的健康產生危害。隨著科學技術的發展和人們認識程度的提高，提出了生物保健劑的理論。它不僅對防治對象的選擇性強，可以專一性作用於靶標有害生物，而且對人畜等生物比較安全，與環境的相容性好，對天敵比較安全，不易產生抗性。大部分馬尾松病害與寄主松樹的生長勢、健康狀況有著非常密切的關係，寄主起著主導性作用。目前解決松樹生長勢、健康狀況的技術已有很多，如施肥、灌溉、使用植物生長劑等，但都是單一的措施而且不能長期有效且持續性差。研究表明，外生菌根菌可與樹木根系形成菌根提高樹木抗性。外生菌根菌不僅能殺死病原菌的營養體，而且能以病原菌為營養，生長十分茂盛，能抑制病原菌繁殖體及休眠體的形成；外生菌根菌能分泌非揮發性的殺菌活性物質，使病原菌的細胞質消解。外生菌根還可以幫助宿主適應鹽鹼環境，通過增加植株對磷等礦質營養元素的吸收，改善鹽脅迫引起的營養虧缺；改變植物體內離子平衡，降低其生理毒害；增加植株對水分的吸收和利用能力，緩解生理性乾旱；還有些菌根真菌能寄生在致病菌上形成重寄生，將致病菌溶解或殺死。此外，外生菌根能改善樹木水分、養分代謝。菌根有密集的菌絲網，增強吸收各種礦物營養的能力，特別是對磷的吸收更為顯著。有許多菌根類型，尤其是擔子菌的菌絲在土壤中能延伸很長。大量菌根和菌絲使更多的營養元素吸收到菌根中，供給寄主樹木。土壤中，幾乎有95% 99%的磷是以不可給態存在，菌根菌產生磷酸酶，使不可給態磷轉化為可給態磷。菌根菌還能增加對銅、鋅等微量元素的吸收。有些樹種如松樹和橡樹，種植在缺少外生菌根的土壤上就不能成活或生長不良，必須接種菌根真菌後才能成活和正常生長。菌根真菌能分解土壤中的有機質，加速土壤養分循環，改善土壤結構，提高土壤中養分的有效性。有的菌根菌能直接固定空氣中的游離氯素，促進植物對碳水化合物的合成，對防止地力衰退、促進林木生長起到重要作用。
發明內容
為了解決松樹病害化學防治存在的缺點和不足，結合松樹病害防治措施和長效提高林木生產力措施，提出了強化松樹生根、生長，增強樹勢來預防松樹病害的解決方案，即一種馬尾松樹的抗逆保健菌根菌劑及其應用方法。該發明不僅能促進松樹的生根、生長，而且能夠改善水分、養分代謝，改良土壤，提高生產力，增強馬尾松的抗病能力。本發明所採用的技術方案是
一種馬尾松樹的抗逆保健菌根菌劑，由菌根菌劑和萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液按照重量比=800-1000 : I配製而成；所述的菌根菌劑為橙黃乳燕(Lactarius akahatsu)和紅汁乳燕(Lactarius hatsudake)分別採用固體發酵培養基發酵而成的培養物中的一種或兩種；所述的萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液濃度為IOOOppm ；在固體發酵培養之前先將橙黃乳燕(Lactarius akahatsu)或紅汁乳恭(Lactarius hatsudake)經過斜面固體培養基和液體搖床培養基培養得到菌液,然後接種到固體發酵培養基中培養；所述的固體發酵培養基配方為草炭米糠豆餅粉蔗糖按質量比= 80-100 50-80 10-20 I ;菌液接種量為固體發酵培養基體積的4_6%，發酵溫度為25°C _28°C，發酵時間8-12天；所述的液體搖床培養條件液體培養基採用不加瓊脂的H)培養基；用直徑6mm的無菌打孔器，切取斜面固體平板上培養的橙黃乳菇(Lactarius akahatsu)或紅汁乳菇(Lactarius hatsudake)菌片,接種於盛有250ml液體培養基的500ml三角瓶中，每瓶接種3-5片；置25°C -28°C、轉速200_220r · mirT1搖床上恆溫水浴培養7_10d，得到菌液；所述的澄黃乳燕(Lactariusakahatsu)和紅汁乳燕(Lactarius hatsudake)均 採自馬尾松樹林。所述抗逆保健菌根菌劑在配製時，需將菌根菌劑粉碎至2-3_大小後再與萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液混合均勻。所述的斜面固體培養條件採用PDA培養基20被％馬鈴薯汁lOOOmL、葡萄糖18g、磷酸二氫鉀3. 08、硫酸鎂1.28、瓊脂2(^、維生素810.018 ;培養溫度範圍是25°C _28°C;pH範圍是5-6 ;製成培養基用於一級斜面培養7-10天。上述的抗逆保健菌根菌劑的應用方法，其特徵在於，施用於馬尾松樹樹根或者種植馬尾松樹的土壤中，促進馬尾松樹的生長，提高馬尾松樹抗逆性，從而增強松樹抗馬尾松落葉病、立枯病和猝倒病的能力；提高馬尾松樹的成活率和生長速度。具體是在馬尾松造林時，將所述的抗逆保健菌根菌劑與林地土壤按重量比I : I. 5的比例充分混合，再按照I千克抗逆保健菌根菌劑40千克水的比例加入水製成泥漿，將馬尾松樹幼苗根系蘸漿，然後種植；或者是在馬尾松人工成林時，每225g所述的抗逆保健菌根菌劑中加入25g的聚丙烯醯胺型保水劑，充分混合後，在距離樹體I米的土壤中挖坑埋入即可。優選在距離樹體I米的土壤中四個不同的方向挖坑，坑的深度為25cm，每個坑放入的量為250克。本發明的有益效果是，既促進馬尾松樹的生根、生長，改善水分、養分代謝，改良土壤，提高生產力又增加松樹抗禦馬尾松落葉病、立枯病、猝倒病的能力，具有持續控制松樹病害的特點。
具體實施例方式以下結合實施例旨在進一步說明本發明，而非限制本發明。實施例I :採用接菌試驗，測試篩選馬尾松林採摘的橙黃乳燕Lactarius akahatsu、紅汁乳恭 Lactarius hatsudake、香乳 Lactarius camphorates、舌甘口未乳恭 Lactariusglyciosmus、香亞環乳 Lactarius subzonarius、尖頂乳 Lactarius subdulcis、波寧乳 Lactarius porninsis、稀裙鸞乳 Lactarius gerardii、粗質乳 Lactariusdeterrimus、絨毛乳 Lactarius echinatus、稀裙乳 Lactarius hygrophoroides、絨白乳燕Lactarius vellereus、多汁乳燕Lactarius volemus等13種乳燕菌劑接種對2年生馬尾松苗木成活率的影響。接種3個月後,發現接橙黃乳燕(Lactarius akahatsu)、紅汁乳菇(Lactarius hatsudake)的馬尾松苗木的成活率最高，苗木的成活率分別為81. 57%和77. 82%，比對照提高28. 15%和26. 26%，接種其它菌種的苗木的成活率較低。實驗結果表明，接種橙黃乳燕(Lactarius akahatsu)、紅汁乳燕(Lactarius hatsudake)分別對馬尾松苗木的成活率都具有促進作用，有利於提高馬尾松人工造林的有效性。
將篩選出來的橙黃乳燕(Lactarius akahatsu)或紅汁乳恭(Lactariushatsudake)經過斜面固體培養基和液體搖床培養基培養得到菌液。固體培養條件培養基為PDA (20 %馬鈴薯汁lOOOmL、葡萄糖18g、磷酸二氫鉀3. 0g、硫酸鎂I. 2g、瓊脂20g、維生素BIO. Olg);培養溫度範圍是28°C ；pH範圍是5. 6 ;製成培養基用於一級斜面培養7天。液體培養條件液體培養基用F1D培養基；用直徑6_的無菌打孔器，切取固體平板上培養的橙黃乳菇或紅汁乳菇菌片，接種於盛有250ml液體培養基的三角瓶(500ml)中，每瓶接種3片。置28°C、轉速ΖΟΟι^π ιΓ1搖床上恆溫水浴培養7d，得到培養菌液。得到菌液後進行菌根菌劑生產。菌根菌劑生產所用菌種為橙黃乳菇或紅汁乳菇液體菌種。菌劑固體發酵培養基為，草炭米糠豆餅粉蔗糖=80 : 50 : 10 : I，接種上述菌液，接種量為發酵培養基體積的5%，基質的溼度以手抓捏感溼潤而無積水流下為合適，生產所用溫度為28°C，8天為一個生產周期。將生產好的菌根菌劑粉碎，將萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶解為IOOOppm的液體，然後按菌根菌劑萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液= 900 I的比例充分混合均勻，即得到馬尾松抗逆保健菌根菌劑。產品在常溫下密封保存，保質期一年以上。實施例2產品的使用方法(I)利用馬尾松造林時，將製備好的本發明抗逆保健菌根菌劑(橙黃乳菇固體發酵製備的保健菌根菌劑)與造林地土壤按重量比I : I. 5的比例充分混合，並加入適量水(I千克抗體保健菌根菌劑40千克水)，充分攪拌製成泥漿，以泥漿能粘在根系上即可。(2)用於馬尾松人工成林時，每225g本發明抗逆保健菌根菌劑(紅汁乳菇固體發酵製備的保健菌根菌劑)中加入25g的聚丙烯醯胺型保水劑，充分混合後，在距離樹體I米左右的土壤中挖坑埋入即可。採用方式(I)的使用方法，將I年生馬尾松幼苗根系蘸漿後栽培，對照(CK)為不使用抗逆保健菌根菌劑處理的馬尾松幼苗。結果見表1，100天後，對馬尾松苗生長指標及其抗病性進行測定。通過蘸根，使育苗根系首先在植物激素的作用下快速生根，提高了根莖t匕，擴大苗木對水分的吸收面積，促進了整株的快速發育，然後在根際土中的菌根菌與根系形成菌根，進一步擴大根系的吸收面積，加速地上部分的生長，實現既促進了苗木的生長、增強樹勢，又提高了其抗病性的作用。表I抗逆保健菌根菌劑對馬尾松苗生長及抗病性的影響"μ苗高胸徑病害發生情況蹄『·
況_
平均增長平均增長猝倒病立枯病衣任東
發生率發生率 0(cm) (cm) (cm) (cm) (%) (%) (/o)
接種20.15 3.42 0.38 0.12 5.61 6.83 90.46CK16.73 / 0.26 /23.16 30.24 74.92試驗結果表明，接種抗逆保健菌根菌劑使苗高提高了 20.44%，胸徑提高了46. 15% ;猝倒病發生率減少了 17.55%，立枯病發生率減少了 23. 94%，存活率提高了15. 54%。說明本抗逆保健菌根菌劑及其應用方法可促進馬尾松苗的生長，減少苗木猝倒病和立枯病的發生率，提高存活率。採用方式(2)的使用方法，將抗逆保健菌根菌劑施用於15年生馬尾松人工林時，在距離樹體I米左右的土壤中四個不同的方向挖坑，坑的深度為25cm，每個坑放入的量為250克，然後覆土、澆水；對照(CK)為不施用抗逆保健菌根菌劑的15年生馬尾松人工林。12個月後，對馬尾松生長指標和抗病性進行測定，結果見表2。表2抗逆保健菌根菌劑對15年生馬尾松生長及抗病性的影響
"μ 樹高增量胸徑增量 15胃n _____情況
平均(cm) 提高(cm) 平均(cm) 提高(cm)病f______生率(％)
接種66.1215.841.080.2910.17
CK50.28/0.79/42.39試驗結果表明，接種抗逆保健菌根菌劑使15年生馬尾松樹高增量提高了31. 50%，胸徑增量提高了 36. 71 %;落葉病發生率減少了 32. 22%。說明本抗逆保健菌根菌劑及其應用方法可促進馬尾松生長，減少落葉病的發生。採用橙黃乳菇和紅汁乳菇兩種菌固體發酵的混合物製備的抗逆保健菌根菌劑及其應用方法也能達到上述類似的優異效果。
權利要求
1.一種馬尾松樹的抗逆保健菌根菌劑，其特徵在於，由菌根菌劑和萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液按照重量比= 800-1000 I配製而成；所述的菌根菌劑為橙黃乳菇(Lactarius akahatsu)和紅汁乳燕(Lactarius hatsudake)分別米用固體發酵培養基發酵而成的培養物中的一種或兩種；所述的萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液濃度為IOOOppm ； 在固體發酵培養之前先將橙黃乳燕(Lactarius akahatsu)或紅汁乳燕(Lactariushatsudake)經過斜面固體培養基和液體搖床培養基培養得到菌液，然後接種到固體發酵培養基中培養；所述的固體發酵培養基配方為草炭米糠豆餅粉蔗糖按質量比=80-100 50-80 10-20 I ;菌液接種量為固體發酵培養基體積的4_6%，發酵溫度為250C _28°C，發酵時間8-12天; 所述的液體搖床培養條件液體培養基採用不加瓊脂的H)培養基；用直徑6mm的 無菌打孔器，切取斜面固體平板上培養的橙黃乳菇(Lactarius akahatsu)或紅汁乳菇(Lactarius hatsudake)菌片,接種於盛有250ml液體培養基的500ml三角瓶中，每瓶接種3-5片；置25°C -28°C、轉速200_220r · mirT1搖床上恆溫水浴培養7_10d，得到菌液； 所述的澄黃乳燕(Lactarius akahatsu)和紅汁乳燕(Lactarius hatsudake)均米自馬尾松樹林。
2.根據權利要求I所述的抗逆保健菌根菌劑，其特徵在於，將菌根菌劑粉碎至2-3mm大小後再與萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液混合均勻，即得到抗逆保健菌根菌劑。
3.根據權利要求I所述的抗逆保健菌根菌劑，其特徵在於，所述的斜面固體培養條件採用PDA培養基20被％馬鈴薯汁lOOOmL、葡萄糖18g、磷酸二氫鉀3. 0g、硫酸鎂I. 2g、瓊脂20g、維生素BI O. Olg ;培養溫度範圍是25°C _28°C ;pH範圍是5_6 ;製成培養基用於一級斜面培養7-10天。
4.權利要求1-3任一項所述的抗逆保健菌根菌劑的應用方法，其特徵在於，施用於馬尾松樹樹根或者種植馬尾松樹的土壤中，促進馬尾松樹的生長，提高馬尾松樹抗逆性，從而增強松樹抗馬尾松落葉病、立枯病和猝倒病的能力；提高馬尾松樹的成活率和生長速度。
5.根據權利要求4所述的應用方法，其特徵在於，具體是在馬尾松造林時，將所述的抗逆保健菌根菌劑與林地土壤按重量比I : I. 5的比例充分混合，再按照I千克抗逆保健菌根菌劑40千克水的比例加入水製成泥漿，將馬尾松樹幼苗根系蘸漿，然後種植。
6.根據權利要求4所述的應用方法，其特徵在於，具體是在馬尾松人工成林時，每225g所述的抗逆保健菌根菌劑中加入25g的聚丙烯醯胺型保水劑，充分混合後，在距離樹體I米的土壤中挖坑埋入即可。
7.根據權利要求6所述的應用方法，其特徵在於，在距離樹體I米的土壤中四個不同的方向挖坑，坑的深度為25cm，每個坑放入的量為250克。
全文摘要
本發明公開了一種針對馬尾松(Pinus massoniana)的抗逆保健菌根菌劑及其應用方法，由菌根菌劑和植物激素萘乙酸或吲哚-3-乙酸複合而成；所述的菌根菌劑為橙黃乳菇(Lactarius akahatsu)或紅汁乳菇(Lactarius hatsudake)採用固體發酵培養基發酵而成。通過造林時對苗木根系進行蘸漿處理或埋於馬尾松林土壤中，不僅能促進馬尾松的生根、生長，還能增強樹勢，提高抗逆性，預防馬尾松落葉病以及松苗立枯病和猝倒病的發生。
文檔編號A01G1/00GK102630709SQ201210087510
公開日2012年8月15日 申請日期2012年3月29日 優先權日2012年3月29日
發明者劉劍, 劉君昂, 吳瑤, 周國英, 李河, 李琳, 譚益民 申請人:中南林業科技大學