一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒的製作方法
2024-01-29 03:40:15 2
一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，它含有：(1)包被硝基咪唑抗原的酶聯板或包被硝基咪唑特異性抗體的酶聯板；(2)酶標記硝基咪唑特異性抗體或酶標記硝基咪唑抗原；(3)硝基咪唑標準品溶液；(4)底物顯色液；(5)終止液；(6)濃縮洗滌液；(7)濃縮復溶液。本發明樣品前處理過程簡單，檢測時間短、費用低廉，靈敏度和檢測限都大幅度提高且能同時檢測大批樣品，可以使試劑盒的檢測限達到0.05μg/g，比儀器方法的檢測限1μg/g要提高20倍。
【專利說明】一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒
[0001]【【技術領域】】
本發明涉及一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，為一種檢測動物源性食品中硝基咪唑的酶聯免疫試劑盒。
[0002]【【背景技術】】
甲硝唑、二甲硝唑和洛硝噠唑是屬於常用硝基咪唑類藥物，用於預防和治療特定病菌和原生動物疾病。由於硝基咪唑類化合物具有潛在的致癌性、誘導有機突變性，故歐盟和我國已禁止在任何動物源性食品中使用該類藥物。目前測定硝基咪唑類的方法主要有氣相色譜法和氣相色譜質譜聯用法、高效液相色譜法和高效液相色譜質譜聯用法。但因這些檢測方法投入成本高，檢測時間長，方法複雜，現階段不適宜在我國廣泛推廣使用。我公司研製出硝基咪唑類ELISA快速檢測試劑盒，其方法簡單，時間短，檢測成本低，相比市面上的同類國產和進口產品，不僅價格低廉，質量還具有絕對優勢，具有穩定性強，檢測結果重複率高的特點。農業部發布的193號公告的《食品動物禁用的獸藥及其他化合物清單》中，硝基咪唑在所有食品動物肌肉中禁止使用。因此，為確保動物源性食品的安全和對外出口貿易的發展，建立準確可靠，靈敏度高的定性定量方法是十分必要的。本發明由此產生。
[0003]【
【發明內容】
】 為解決現有技術的上述技術問題，本發明的目的是提供一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，樣品前處理過程簡單，檢測時間短、費用低廉，靈敏度和檢測限都大幅度提高且能同時檢測大批樣品。
[0004]為達到上述目的，本發明是通過以下技術方案實現的:
本發明為一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，它含有:
(I)包被硝基咪唑抗原的酶聯板或包被硝基咪唑特異性抗體的酶聯板；(2)酶標記硝基咪唑特異性抗體或酶標記硝基咪唑抗原；(3)硝基咪唑標準品溶液；(4)底物顯色液；(5)終止液；(6)濃縮洗滌液；(7)濃縮復溶液。
[0005]包被硝基咪唑抗原的酶聯板或包被硝基咪唑特異性抗體的酶聯板的製備步驟為:
(1)用包被緩衝液將硝基咪唑半抗原與載體蛋白偶聯物或抗抗體以0.02、.08μδ/πι1濃度稀釋成抗原稀釋液或抗體稀釋液；
(2)向酶聯板的每孔中加入ΙΟΟμΙ已經稀釋好的抗原稀釋液或抗抗體稀釋液，37°C溫育2h，傾去包被液，用洗滌液洗滌4次，每次15~30s，拍幹；
(3)向酶聯板的每孔中加入150-200μ1封閉液，37°C溫育l~2h，傾去孔內液體，乾燥後用鋁膜真空密封保存。
[0006]所述緩衝液為pH值9.6、0.05mol/L、含有0.5%甲醇的碳酸鹽緩衝液；所述的洗滌液為含有8%~15%吐溫-20的去離子水或超純水；所述的封閉液是含有8%~15%的脫脂奶和1%惰性蛋白的溶液；該載體蛋白可為牛血清白蛋白、雞卵清蛋白、兔血清蛋白、人血清白蛋白、人血纖維蛋白、血藍蛋白等大分子載體。
[0007]所述的硝基咪唑酶標記抗原為採用戊二醛法將標記酶與硝基咪唑半抗原進行偶聯得到。
[0008]所述的硝基咪唑特異性抗體為單克隆抗體或多克隆抗體。
[0009]所述單克隆抗體製備的步驟為:
(I)、動物免疫程序:採用Balb/c小鼠作為免疫動物，免疫原(硝基咪唑半抗原與鑰孔槭血藍蛋白的偶聯物)免疫劑量為8(TlO(^g/只，首免時將免疫原與等量的弗氏完全佐劑混合製成乳化劑，頸背部皮下多點注射，間隔2~3周取相同劑量免疫原加等量弗氏不完全佐劑混合乳化，加強免疫一次，四免後腹腔加強免疫一次，3天後取脾細胞；(2)、細胞融合與克隆化:取免疫Balb/c小鼠脾細胞，按5~10:1比例與SP2/0骨髓瘤細胞融合，採用間接競爭ELISA測定細胞上清液，篩選陽性孔，利用有限稀釋法對陽性孔進行克隆化，直到得到穩定分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞株；(3)、細胞凍存和復甦:取處於對數生長期的雜交瘤細胞用凍存液製成f 5X106個/ml的細胞懸液，分裝於凍存管，在液氮中長期保存，復甦時取出凍存管，立即放入37°C水浴中速融，離心去除凍存液後，移入培養瓶內培養；(4)、單克隆抗體的製備與純化:採用體內誘生法，將Balb/c小鼠(8周齡)腹腔注入滅菌石蠟油 0.5ml/只，7~14天後腹腔注射雜交瘤細胞5X 105~106個/只，7~10天後採集腹水，用辛酸-飽和硫酸銨法進行腹水純化，小瓶分裝，-20°C保存；(5)、抗體凍乾粉可將腹水在37°C環境下烘乾，放入_20°C保存；(6)、抗體工作液是用抗體稀釋液將抗體以0.02、.08μδ/πι1濃度進行稀釋。
[0010]所述多克隆抗體製備的步驟為:採用紐西蘭大白兔作為免疫動物，免疫原(硝基咪唑半抗原與鑰孔槭血藍蛋白的偶聯物)免疫劑量為lrng/kg，首免時將免疫原與等量的弗氏完全佐劑混合製成乳化劑，頸背部皮下多點注射，間隔3~4周取相同劑量免疫原加等量弗氏不完全佐劑混合乳化，加強免疫一次，共免疫5次，最後一次不加佐劑。最後一次免疫7~10天後採血，測定血清抗體效價，心臟採血，經硫酸銨分級沉澱得到純化的多克隆抗體。
[0011]當標記酶為過氧化物酶時底物顯色液為過氧化氫或過氧化脲與四甲基聯苯胺硫酸鹽混合溶液、終止液為0.1~0.5mol/L的硫酸或鹽酸緩衝液；當標記酶為半乳糖甘酶時，底物顯色液為0.5mol/L磷酸鉀緩衝液，終止液為2mol/L的檸檬酸緩衝液。
[0012]所述的濃縮洗滌液為去離子水或超純水。
[0013]所述的濃縮復溶液為含1%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩衝液。
[0014]本發明的有益效果如下:
本發明提供的檢測動物源性食品中硝基咪唑殘留的酶聯免疫試劑盒及方法，樣品前處理過程簡單，檢測時間短、費用低廉，靈敏度和檢測限都大幅度提高且能同時檢測大批樣品。當標記酶為過氧化物酶時底物顯色液為過氧化氫或過氧化脲與四甲基聯苯胺硫酸鹽混合溶液時，可將靈敏度提高到0.05Pg/L，使試劑盒的檢測限達到0.05Pg/g，比儀器方法的檢測限lKg/g要提高20倍。
[0015]【【具體實施方式】】
下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明，但本發明的保護範圍並不限於此。
[0016]本發明的硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒包含有:它含有:(I)包被硝基咪唑抗原的酶聯板或包被硝基咪唑特異性抗體的酶聯板；(2)酶標記硝基咪唑特異性抗體或酶標記硝基咪唑抗原；(3)硝基咪唑標準品溶液；(4)底物顯色液；(5)終止液；(6)濃縮洗滌液；
(7)濃縮復溶液。[0017]包被硝基咪唑抗原的酶聯板或包被硝基咪唑特異性抗體的酶聯板的製備步驟為: (1)用包被緩衝液將硝基咪唑半抗原與載體蛋白偶聯物或抗抗體以0.02、.08μδ/πι1濃度稀釋成抗原稀釋液或抗體稀釋液；
(2)向酶聯板的每孔中加入ΙΟΟμΙ已經稀釋好的抗原稀釋液或抗抗體稀釋液，37°C溫育2h，傾去包被液，用洗滌液洗滌4次，每次15~30s，拍幹；
(3)向酶聯板的每孔中加入150-200μ1封閉液，37°C溫育廣2h，傾去孔內液體，乾燥後用鋁膜真空密封保存。
[0018]在本發明中緩衝液為pH值9.6,0.05mol/L、含有0.5%甲醇的碳酸鹽緩衝液；所述的洗滌液為含有8%~15%吐溫-20的去離子水或超純水；所述的封閉液是含有8%~15%的脫脂奶和1%惰性蛋白的溶液；本發明試劑盒中硝基咪唑包被抗原是採用混合酸酐法將硝基咪唑半抗原與載體蛋白進行偶聯得到的，該載體蛋白可為牛血清白蛋白、雞卵清蛋白、兔血清蛋白、人血清白蛋白、人血纖維蛋白、血藍蛋白等大分子載體。
[0019]當標記酶為過氧化物酶時底物顯色液為過氧化氫或過氧化脲與四甲基聯苯胺硫酸鹽混合溶液、終止液為0.1~0.5mol/L的硫酸或鹽酸緩衝液；當標記酶為半乳糖甘酶時，底物顯色液為0.5mol/L磷酸鉀緩衝液，終止液為2mol/L的檸檬酸緩衝液。
[0020]包被硝基咪唑抗原或抗體的載體物質可為聚苯乙烯、纖維素、聚丙烯醯胺、聚乙烯、聚丙烯、交聯葡聚糖、玻璃、矽橡膠、瓊脂糖凝膠等；載體的形式可以是試管、微量反應板凹孔、小珠、小圓片等；濃縮洗滌液為去離子水或超純水；濃縮復溶液為含1%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩衝液。
[0021]以上方法製備的酶聯板具有很好的穩定性，經過冷熱穩定性試驗，酶聯板的相關技術參數均在正常範圍，且包被原有良好的特異性。
[0022]本發明所述試劑盒中酶標記物為酶標記硝基咪唑特異性抗體或酶標記硝基咪唑抗原，所用酶可為過氧化物酶或半乳糖甘酶，本發明優選過氧化物酶；酶標記物形式可為凍乾粉、濃縮液和工作液；酶標記物工作液所用的稀釋液為含有50%甘油(可防止放入_20°C環境的酶標記物凍結，亦可長時間保持酶標記物的生物活性)、1%的疊氮化鈉防腐劑(便於保存)的溶液。
[0023]本發明試劑盒中酶標記硝基咪唑特異性抗體為過氧化物酶標記硝基咪唑特異性抗體，其製備步驟為:將抗體與過氧化物酶(HRP)進行偶聯，採用的方法是戊二醛法，採用戊二醛法使得抗體與辣根過氧化物酶的結合率升高，傳統GA —步法偶聯反應不易控制，反應速度快的分子易發生自生聚合，且偶聯效率不高。為了解決這些問題，我們將一步法進行了改進，克服了一步法的缺點。首先在被偶聯的兩種分子中，與偶聯劑反映較弱的分子先用過量的偶連劑活化，然後去處多餘的偶連劑；第二步將一端與某種分子連接的偶連劑，通過改變反應條件而與另一種分子連接起來。二步法雖然操作較繁，但偶連效率提高，而且形成的同分子聚合物減少。
[0024]硝基咪唑酶標記抗原為採用戊二醛法將標記酶與硝基咪唑半抗原進行偶聯得到。
[0025]本發明所述試劑盒中硝基咪唑特異性抗體為鼠源單克隆抗體或兔源多克隆抗體，免疫原是採用混合酸酐法將硝基咪唑半抗原與雞卵清蛋白(OVA)行偶聯得到的；抗體形式可為凍乾粉、濃縮液、工作液；抗體稀釋液為PH值7.4,0.08mol/L、含有0.3%明膠、5%。土溫-80和5%。甲醇的磷酸鹽緩衝液。
[0026]所述的硝基咪唑特異性抗體為單克隆抗體或多克隆抗體。
[0027]單克隆抗體製備的步驟為:
(I)、動物免疫程序:採用Balb/c小鼠作為免疫動物，免疫原(硝基咪唑半抗原與鑰孔槭血藍蛋白的偶聯物)免疫劑量為8(TlO(^g/只，首免時將免疫原與等量的弗氏完全佐劑混合製成乳化劑，頸背部皮下多點注射，間隔2~3周取相同劑量免疫原加等量弗氏不完全佐劑混合乳化，加強免疫一次，四免後腹腔加強免疫一次，3天後取脾細胞；(2)、細胞融合與克隆化:取免疫Balb/c小鼠脾細胞，按5~10:1比例與SP2/0骨髓瘤細胞融合，採用間接競爭ELISA測定細胞上清液，篩選陽性孔，利用有限稀釋法對陽性孔進行克隆化，直到得到穩定分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞株；(3)、細胞凍存和復甦:取處於對數生長期的雜交瘤細胞用凍存液製成f 5X106個/ml的細胞懸液，分裝於凍存管，在液氮中長期保存，復甦時取出凍存管，立即放入37 °C水浴中速融，離心去除凍存液後，移入培養瓶內培養；(4)、單克隆抗體的製備與純化:採 用體內誘生法，將Balb/c小鼠(8周齡)腹腔注入滅菌石蠟油
0.5ml/只，7~14天後腹腔注射雜交瘤細胞5X 105~106個/只，7~10天後採集腹水，用辛酸-飽和硫酸銨法進行腹水純化，小瓶分裝，-20°C保存；(5)、抗體凍乾粉可將腹水在37°C環境下烘乾，放入_20°C保存；(6)、抗體工作液是用抗體稀釋液將抗體以0.02、.08μδ/πι1濃度進行稀釋。
[0028]所述多克隆抗體製備的步驟為:採用紐西蘭大白兔作為免疫動物，免疫原(硝基咪唑半抗原與鑰孔槭血藍蛋白的偶聯物)免疫劑量為lmg/kg，首免時將免疫原與等量的弗氏完全佐劑混合製成乳化劑，頸背部皮下多點注射，間隔3~4周取相同劑量免疫原加等量弗氏不完全佐劑混合乳化，加強免疫一次，共免疫5次，最後一次不加佐劑。最後一次免疫7~10天後採血，測定血清抗體效價，心臟採血，經硫酸銨分級沉澱得到純化的多克隆抗體。
[0029]本發明所述試劑盒中硝基咪唑標準品溶液為六個濃度梯度的硝基咪唑溶液，硝基咪唑稀釋液為0.02M的磷酸鹽緩衝液。
[0030]本發明所述試劑盒中試劑的配製具體為:
a.硝基咪唑標準溶液:硝基咪唑系列標準溶液6瓶，濃度為0μ8/1、0.05Pg/L、0.15μδ/L、0.45Pg/L、l.35Pg/L、4.05Pg/L，I~3ml/ 瓶；
b.包被緩衝液:pH值9.6、0.05mol/L、含有0.5%甲醇的碳酸鹽緩衝液；
c.封閉液:含有8%~15%的脫脂奶和1%惰性蛋白的溶液；
d.洗滌液:含有8%~15%吐溫-20的去離子水或超純水，3(T50ml/瓶，I瓶；
e.酶標記物:酶標記抗抗體工作液或酶標記硝基咪唑抗原工作液，7~12ml/瓶，I瓶；
f.底物顯色液過氧化氫或過氧化脲與四甲基聯苯胺硫酸鹽混合溶液，l(Tl5ml/瓶，I
瓶；
g.底物顯色液對硝基磷酸鹽緩衝液:pH8.1、含有MgC12 0.01%的100mmolTris-HCl ；
h.終止液2mol/L硫酸、鹽酸或2mol/L氫氧化鈉緩衝液，5~8ml/瓶，I瓶；
1.抗體稀釋液:pH值7.4,0.08mol/L、含有0.3%明膠、5%。土溫-80和5%。甲醇的磷酸鹽緩衝液；
j.濃縮復溶液:含有5%甲醇、1%小牛血清(BSA)的磷酸鹽緩衝液，為正常使用濃度的5~10倍，30~50ml/瓶，I瓶。[0031]本發明所述檢測動物源性食品中硝基咪唑的方法，包括了以下步驟:
(1)樣品前處理；
(2)用本發明所述的試劑盒進行檢測；
(3)分析檢測結果。
[0032]1、本發明中樣品前處理方法為:
樣本前處理需配製:
配液1:pH 10.6 0.1M 碳酸鹽緩衝液 稱取4.66g無水碳酸鈉,0.5g碳酸氫鈉 去離子水500ml溶解。
[0033]配液2:2M氫氧化鈉溶液
稱取40g氫氧化鈉，加入去離子水500ml溶解。
[0034](A)組織、蜂蜜(雞、鴨肉/肝臟、魚、蟲下、等)
(樣本稀釋倍數0.5)
(1)取3g樣本，加3ml0.1M碳酸鹽緩衝溶液振蕩至蜂蜜全部溶解；
(2)加入9ml乙酸乙酯，振蕩5分鐘，室溫4000轉/分，離心5分鐘；
(3)取上層有機相6ml至另一離心管中，加入2ml乙酸乙酯，2ml2M氫氧化鈉溶液，振蕩5分鐘，室溫4000轉/分，離心5分鐘；
(4)取4ml清澈上層有機相至乾淨玻璃試管中，56°C水浴氮氣/空氣吹乾；
(5)加入正己烷1ml，渦動30s，再加入0.5ml復溶液混合30秒，室溫4000轉/分以上，離心5分鐘；
(6)去除上層有機相，取下層50μ1液體用於分析。
[0035]2、用本發明所述的試劑盒進行檢測的步驟:
將所需試劑從冷藏環境中取出，在室溫下平衡30分鐘，每種液體使用前均須搖勻。注意標準液均需做2個平行試驗。
[0036]抗體工作液和酶標濃縮液混合:將抗體工作液和酶標濃縮液按10:1體積比混合均勻(B卩10001抗體工作液+1001酶標濃縮液，此混合液現配現用，不能保存)
加501標準品或樣品，於對應微孔中，再加50 μ I抗體工作液和酶標濃縮液混合液,用膜蓋好，25°C下避光反應30分鐘。
[0037]洗板:小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩幹，加洗滌液2501/孔，每次浸泡15?30秒，充分洗漆4 — 5次,用吸水紙拍幹
顯色:每孔先各加入底物液A 50 μ 1，再各加入底物液B 50 μ 1，輕輕晃蕩混勻，並在25°C下避光反應15分鐘。
[0038]讀數:每孔各加50 μ I終止液，在酶標儀於450nm處測定OD值(建議用450/630nm雙波長檢測，在5分鐘內讀完數據)。
[0039](3)分析檢測結果:
所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以第一個標準(O標準)的吸光度值(BO)再乘以100%，即百分吸光度值。
【權利要求】
1.一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，其特徵在於，它含有: (1)包被硝基咪唑抗原的酶聯板或包被硝基咪唑特異性抗體的酶聯板； (2)酶標記硝基咪唑特異性抗體或酶標記硝基咪唑抗原； (3)硝基咪唑標準品溶液； (4)底物顯色液； (5)終止液； (6)濃縮洗滌液； (7)濃縮復溶液。
2.根據權利要求1所述的一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，其特徵在於，包被硝基咪唑抗原的酶聯板或包被硝基咪唑特異性抗體的酶聯板的製備步驟為: (1)用包被緩衝液將硝基咪唑半抗原與載體蛋白偶聯物或抗抗體以0.02、.08μδ/πι1濃度稀釋成抗原稀釋液或抗體稀釋液； (2)向酶聯板的每孔中加入ΙΟΟμΙ已經稀釋好的抗原稀釋液或抗抗體稀釋液，37°C溫育2h，傾去包被液，用洗滌液洗滌4次，每次15~30s，拍幹； (3)向酶聯板的每孔中加入150-200μ1封閉液，37°C溫育廣2h，傾去孔內液體，乾燥後用鋁膜真空密封保存。
3.根據權利要求2所述的一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，其特徵在於，所述緩衝液為PH值9.6、濃度為0.05mol/L、含有0.5%甲醇的碳酸鹽緩衝液；所述的洗滌液為含有8%~15%吐溫-20的去離子水或超純水；所述的封閉液是含有8%~15%的脫脂奶和1%惰性蛋白的溶液；該載體蛋白可為牛血清白蛋白、雞卵清蛋白、兔血清蛋白、人血清白蛋白、人血纖維蛋白、血藍蛋白等大分子載體。
4.根據權利要求1所述的一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，其特徵在於，所述的硝基咪唑酶標記抗原為採用戊二醛法將標記酶與硝基咪唑半抗原進行偶聯得到。
5.根據權利要求1所述的一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，其特徵在於，所述的硝基咪唑特異性抗體為單克隆抗體或多克隆抗體。
6.根據權利要求5所述的一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，其特徵在於，所述單克隆抗體製備的步驟為: (1)動物免疫程序:採用Balb/c小鼠作為免疫動物，免疫原(硝基咪唑半抗原與鑰孔槭血藍蛋白的偶聯物)免疫劑量為8(TlO(^g/只，首免時將免疫原與等量的弗氏完全佐劑混合製成乳化劑，頸背部皮下多點注射，間隔2~3周取相同劑量免疫原加等量弗氏不完全佐劑混合乳化，加強免疫一次，四免後腹腔加強免疫一次，3天後取脾細胞； (2)細胞融合與克隆化:取免疫Balb/c小鼠脾細胞，按5~10:1比例與SP2/0骨髓瘤細胞融合，採用間接競爭ELISA測定細胞上清液，篩選陽性孔，利用有限稀釋法對陽性孔進行克隆化，直到得到穩定分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞株； (3)細胞凍存和復甦:取處於對數生長期的雜交瘤細胞用凍存液製成f5X106個/ml的細胞懸液，分裝於凍存管，在液氮中長期保存，復甦時取出凍存管，立即放入37°C水浴中速融，離心去除凍存液後，移入培養瓶內培養； (4)單克隆抗體的製備與純化:採用體內誘生法，將Balb/c小鼠(8周齡)腹腔注入滅菌石蠟油0.5ml/只，7~14天後腹腔注射雜交瘤細胞5 X 105~106個/只，7~10天後採集腹水，用辛酸-飽和硫酸銨法進行腹水純化，小瓶分裝，_20°C保存； (5)抗體凍乾粉可將腹水在37°C環境下烘乾，放入-20°C保存； (6)抗體工作液是用抗體稀釋液將抗體以0.02、.08μδ/πι1濃度進行稀釋。
7.根據權利要求5所述的一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，其特徵在於，所述多克隆抗體製備的步驟為:採用紐西蘭大白兔作為免疫動物，免疫原(硝基咪唑半抗原與鑰孔槭血藍蛋白的偶聯物)免疫劑量為lmg/kg，首免時將免疫原與等量的弗氏完全佐劑混合製成乳化劑，頸背部皮下多點注射，間隔3~4周取相同劑量免疫原加等量弗氏不完全佐劑混合乳化，加強免疫一次，共免疫5次，最後一次不加佐劑；最後一次免疫7~10天後採血，測定血清抗體效價，心臟採血，經硫酸銨分級沉澱得到純化的多克隆抗體。
8.根據權利要求1所述的一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，其特徵在於，當標記酶為過氧化物酶時底物顯色液為過氧化氫或過氧化脲與四甲基聯苯胺硫酸鹽混合溶液、終止液為0.1-0.5mol/L的硫酸或鹽酸緩衝液；當標記酶為半乳糖甘酶時，底物顯色液為0.5mol/L磷酸鉀緩衝液，終止液為2mol/L的檸檬酸緩衝液。
9.根據權利要求1所述的一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，其特徵在於，硝基咪唑標準品溶液為六個濃度梯度的硝基咪唑溶液，硝基咪唑稀釋液為磷酸鹽緩衝液，硝基咪唑標準溶液濃度為:0μg/L、0.05Pg/L、0.15Pg/L、0.45Pg/L、l.35Pg/L、4.05Pg/L，I~3ml/瓶。
10.根據權利要求1所述的一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，其特徵在於，所述的濃縮復溶液為含1%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩衝液。
【文檔編號】G01N33/544GK103713123SQ201410001028
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2014年1月2日 優先權日:2014年1月2日
【發明者】唐俊, 譚彩蓮, 覃波強 申請人:中山市粵爾生物技術有限公司