細胞凋亡的方法、基因和蛋白的製作方法

2023-06-11 01:25:26

專利名稱：：細胞凋亡的方法、基因和蛋白的製作方法
技術領域：
：本發明涉及調節細胞凋亡的基因和蛋白的鑑定。特別是，本發明涉及可用於鑑定細胞凋亡調節劑的方法中的酵母菌株、使用所述酵母菌株的篩選方法以及由此而鑑定的基因和蛋白。本發明還涉及鑑定的基因和蛋白的醫療用途。細胞凋亡調節蛋白的異常表達經常是引起多種疾病如癌症、風溼性關節炎、神經變性和心血管疾病的原因。許多證據都強烈表明，在各種神經變性中，細胞凋亡促進神經細胞的死亡。如在中風、脊髓損傷(spinalcordtrauma)、頭部損傷(headinjmy)、脊髓性肌萎縮(spinalmuscularatrophy,SMA)、肌萎縮側索硬化(amyotrophiclateralsclerosis,ALS)、阿爾茨海默氏病(Alzheimer'sdisease,AD)、帕金森氏病(Parkinson'sdisease,PD)和亨廷頓病(Huntington'sdisease,HD)中所觀察到的，細胞凋亡在人神經變性病中起重要作用。在營養因子匱乏的情況下，促凋亡分子Bax是交感神經元和運動神經元死亡所必需的。而且，成年Bax缺失性轉基因小鼠比其野生型副本具有更多的神經元。這些發現表明，在許多神經元集群(neuronalp叩ulations)中，Bax在發育過程中調控自然發生的細胞死亡。也觀察到，在胚胎期(embryoniclife),Bax是外周和CNS神經元自然發生死亡的關鍵調節劑(Davies,2000)。在一定的實驗條件下，已知的抗凋亡蛋白Bel-2和Bcl-xL可中和Bax的活性。設想當促凋亡蛋白的濃度超過抗凋亡蛋白的濃度時，會刺激凋亡。此類凋亡包括線粒體中的變化，其最終導致稱為半胱天冬酶(caspases)的絲氨酸蛋白酶家族的激活。這導致死亡細胞從內部被消化，這是一種細胞凋亡標誌對調節細胞凋亡的基因和蛋白特別是負調控(即抑制)細胞凋亡的那些蛋白的更多了解，可以設計出新的治療法，從而可防止細胞凋亡的不適當激活
背景技術：
：或細胞凋亡一旦開始便阻止其進行。發現這些抗細胞凋亡基因和蛋白將利於為以不適當的細胞凋亡為特徵的疾病包括急性和慢性神經變性病研發新的實踐性治療方法。細胞凋亡在神經變性中的作用中風、AD、PD、HD、SMA和包括ALS的運動神經元病都與細胞凋亡有關。和包括細胞膨大、質膜裂解和大量細胞死亡的壞死不同，細胞凋亡包括伴隨半胱天冬酶激活、氧化應iKf丐穩態紊亂(perturbedcalciumhomeostasis)以及線粒體功能障礙(mitochondrialdysfbnction)的個體細胞凋亡。一些生存信號(survivalsignals)通過抑制氧自由基和穩定轉穩態以及線粒體障礙，而免受細胞凋亡危害。在多種形式的細胞凋亡中，線粒體的表現是氧自由基產生的增加、線粒體膜上孔的開放以及細胞色素C的釋放。作為此的證據，錳超氧化物歧化酶和環孢菌素A(cyclosporineA)，兩者抑制氧化應激和膜孔形成，在一些實驗模型中也防止神經元死亡(Pong,2003;Sullivan等,2005)。B細胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白家族包括促和抗細胞凋亡成員兩者。在神經元中，抗細胞凋亡成員包括Bcl-2和Bcl-xL;促細胞凋亡成員包括Bcl-2相關X蛋白(Bax)和Bcl相關死亡啟動子(Bad)。例如，Bcl-2在細胞培養物和轉基因小鼠中的過量表達可增加神經元對興奮性毒性損傷、代謝損傷以及氧化損傷誘發的死亡的抗性。缺少Bax的神經元免遭細胞凋亡的危害。Bcl-2蛋白可通過與和線粒體有關的蛋白的相互作用來調控細胞死亡，導致跨線粒體膜的陰離子發生變化(Soane&Fiskum,2005;Kirkland寧，2002)。半胱天冬酶是絲氨酸蛋白酶。半胱天冬酶-8應答死亡受體(如Fas、p75神經營養素受體)而激活。這些上遊的半胱天冬酶激活效應器半胱天冬酶(如半胱天冬酶-3)，且能不依賴線粒體的改變(mitochondrialalterations)而誘發細胞凋亡(Davies,2000)。這些效應器半胱天冬酶也應答線粒體的變化，和釋放細胞色素C而激活，隨後激活脫氧核糖核酸酶。半胱天冬酶也可切割各種蛋白，如AMPA、肌動蛋白等。Par-4的水平快速增力口(Mundle,2005)。Par-4的羰基端亮氨酸拉鏈結構域對於促凋亡功能以及其與其他蛋白包括蛋白激酶C和Bcl-2的相互作用來說是必需的(Leroy等,2005)。在細胞凋亡的初始階段，死亡信號激活細胞內的級聯反應，包括氧自由基和Ca^水平的增加、產生Par-4以及促凋亡Bcl-2家族成員(Bax和Bad)移位至線粒體膜。某些半胱天冬酶(如半胱天冬酶-8)可在細胞死亡過程的早期，在線粒體變化之前或獨立於線粒體的變化而起作用。細胞凋亡的效應器階段涉及線粒體C^+和氧自由基水平的增加、線粒體膜中通透性轉運孔(permeabilitytransitionpores)的形成以及細胞色素C向細胞溶膠中的釋放。細胞色素C與細胞凋亡蛋白酶激活因子l(Apaf-l)和半胱天冬酶-9形成複合體(Hajra&Liu,2004)。在細胞凋亡的降解階段，激活的半胱天冬酶-9激活半胱天冬酶-3，導致半胱天冬酶和其他酶底物分解；在質膜上發生變化(在細胞表面形成氣泡並暴露磷脂醯絲氨酸)；通過巨噬細胞/小膠質細胞釋放剌激細胞吞噬作用的信號；核染色質濃縮和斷裂(Budihardjo等，1999)。在許多情況下，線粒體變化在細胞死亡決定中可能非常關鍵。已知在神經元中觸發細胞凋亡的信號包括缺少神經營養素的支持，Bax是喪失了NGF的交感神經元的凋亡死亡所需的。在NGF剝奪後(NGFwithdrawal),Bax從細胞質移位至這些細胞的線粒體並誘導細胞色素C的釋放。NGF從交感神經元中退出導致線粒體衍生的活性氧分子(reactiveoxygenspecies,ROS)增加。抑制這些ROS可抑制細胞凋亡。Bax缺失可阻斷死亡，防止ROS爆發，因此，Bax位於增加的ROS的上遊(Heaton等，20(B)。穀氨酸受體的過量激活，如，通過鈣流入或興奮性毒性(Johnston,2005)。m氧化應激的增加，如自由基(如過氧化物陽離子自由基、羥基自由基)破壞細胞的脂質、蛋白和核酸(Halliwell&Whiteman,2004)。代謝應激，如在中風後或者老化期間，ATP產生所需的葡萄糖、氧和其他分子減少(Poon等，2004)。環境毒素(Valko等，2005;Savolainen等，1998)。已知是抗凋亡觸發劑的因子包括端粒酶(tolemerase)由催化性反轉錄酶亞單位(TERT)，RNA模板和調節蛋白組成。端粒酶活性在發育過程中增加，隨後負調節。在研究神經元死亡的發育和神經變性病的實驗模型中，端粒酶活性和TERT與神經元對細胞凋亡抗性的增加相關。TERT在神經元中的抗凋亡作用，在線粒體變換和半胱天冬酶激活前的早期步驟會顯現出(Simg等,2005)。應激可誘導神經營養因子和熱休克蛋白的表達。祌經營養因子反過來以自分泌或旁分泌的方式來激活細胞表面受體介導的激酶信號通路，從而誘導編碼蛋白如抗氧化酶的存活促進基因的表達。神經營養因子(腦衍生的祌經營養因子(brain-derivedneurotrophicfactor,BDNF))、神經生長因子(nervegrowthfactor,NGF)、鹼性成纖維細胞生長因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)以及細胞因子(腫瘤壞死因子(TNF)-a、纖毛神經營養因子(dliaryneurotrophicfactor,CNTF)以及白血病抑制因子(leukaemiainhibitoryfactor,LIF))在神經元死亡的實驗模型中可防止神經元死亡(Zweifel等,2005)。熱休克蛋白是許多蛋白的伴侶蛋白，維持蛋白的穩定性。它們也直接與半胱天冬酶相互作用，抑制半胱天冬酶的激活(8^6(11^&Csermely，2004)。f5不但促進神經元死亡也激活4種不同的存活通路(Distelhorst&Shore,2004)。(a)通過爭丐/轉調蛋白依賴性蛋白激酶激活蛋白激酶B(Yano等,2005;Chong等，2005)。(b)調節細胞對應激的應答，通過環式AMP應答元件結合蛋白(cyclic-AMPresponseelement-bindingprotein,CREB)激活轉錄，其可在細胞死亡發育模型中促進神經元存活(Yano等,2005;Rouaux等，2004)。(c)激活肌動蛋白切斷蛋白凝溶膠蛋白(gelsolin)，其誘導肌動蛋白的解聚作用，導致通過膜NMDA受體和電壓依賴性鈣通道抑制鈣流入。這可通過與NMDA受體和通道蛋白相互作用的調節性肌動蛋白-結合蛋白而發生。(d)鈣和分泌性澱粉樣前體蛋白a，其增加環式GMP產生，可誘導鉀通道和轉錄因子NF-KB的激活，並增加神經元對激動性毒性細胞凋亡的抗性(Cardoso&Oliveira，2003)。很難在遭受神經變性病的患者大腦中展示細胞凋亡。細胞凋亡通常快速發生(兒小時)，因此在任一時間點，很少有細胞能表現典型特徵。因此，支持細胞凋亡的許多證據都來自動物和細胞培養模型。在AD中，在海馬中觀察到早期變化，以後也在皮質中觀察到。在此有一些鈣介導的蛋白水解和氧化應激的一些證據。DNA損傷和半胱天冬酶活性增加，和細胞凋亡相關基因如Bcl-2家族成員、Par-4和DNA損傷應答基因表達變化已發現於患有AD的患者大腦中與澱粉樣沉澱物(amyloidd印osits)有關的神經元內。對來自AD患者大腦組織樣品的基因表達譜進行分析表明，稱為NCKAPI(NCK相關蛋白l)的抗凋亡基因的表達顯著降低(Yamamoto&Behl,2001)。已顯不，澱粉樣前體蛋白(amyloidprecursorprotein,APP)、Presenilin1(PS1)和Presenilin2(PS2)基因中的突變導致AD早期發作。卩分泌酶(BACE)切割APP導致40-42肽A卩以及稱為sAPPp的分泌產物的產生。它的發生機率僅為5-10%。通常a分泌酶(金屬蛋白酶的ADAMs家族)切割APP，但不產生AP，且分泌神經突促sAPPa(neuritepromotingsAPPa)。在培養的神經元中AP暴露可直接誘發細胞凋亡，並增強對氧化應激引起的死亡的脆弱性。AP可能通過膜脂質過氧化反應來敏化神經元。這會損害ATP酶、葡萄糖和穀氨酸轉運蛋白的功能，導致膜去極化、ATP損耗、過量鈣流入以及線粒體功能障礙。抑制脂質過氧化反應的抗氧化劑和穩定細胞鈣體內平衡的藥劑可保護神經元免受A(3誘導的細胞凋亡。神經營養因子和細胞因子也可抵禦A卩。APP、PS1以及PS2中的突變都可引起AP產生的增加，並且在某些情況下，也引起更具毒性的形式的A卩42的增加。APP也是半胱天冬酶-3的底物。半胱天冬酶介導的APP切割可釋放稱為C31的羰基端肽，其是細胞凋亡的有效誘導劑。當突變體PS1在培養的細胞中以及在轉基因和基因敲入(knock-in)小鼠中表達時，神經元對各種剌激(insults)包括營養因子剝奪、暴露給AP或穀氨酸以及能量喪失誘發的死亡，都變得敏感。突變體PS1在Par-4產生、線粒體功能障礙和半胱天冬酶激活之前的早期階段起作用。當神經元暴露於可能的破壞性氧化和代謝刺激中時，內質網中的鈣穩態會受到破壞，而使更多的鈣得到釋放。抑制ER鈣釋放的試劑包括丹曲洛林(dantrolene)和xestospongin，可抵消突變的作用。在PD中，多巴胺神經元在腦黑質(substantianigra)中退化。環境和遺傳因素可使多巴胺神經元對年齡相關的氧化應激和能量不足的增加變得敏化。環境毒素已經說明一"r暴露於毒素1-甲基-4-苯基-1，2,3,6-四氫嘧啶(MPTP)的猴子和人顯示出帕金森氏病樣症狀。患有PD的患者大腦組織在多巴胺神經元的死亡中表現出了細胞凋亡相關的DNA損壞和基因激活。在腦黑質的多巴胺神經元死亡之前，多巴胺神經元中的Par-4水平增加，且Par-4表達的抑制可保護多巴胺神經元免於死亡。在PD模型中，半胱天冬酶-1抑制齊i」、抑制大分子合成的藥劑以及神經營養因子如神經膠質細胞衍生的神經營養因子(glialcell-derivedneurotrophicfactor,GDNF)可保護多巴胺神經元。在很少的情況下，a突觸核蛋白(a-synuclein，其是Lewy體中的組分)中的突變會引起帕金森氏病病例。在培養細胞終突變的a突觸核蛋白的表達會促進細胞凋亡。通常，帕金蛋白(Parkin)和遍在蛋白參與通過細胞凋亡來移除突觸核蛋白。如果此過程發生錯誤，如出現缺陷性帕金蛋白基因，則不會發生細胞凋亡。如果在這些細胞中未除去突觸核蛋白，則其逐漸累積且對多巴胺有毒。在此情況下，突觸核蛋白在Lewy體內發生聚集。一些患有PD的患者缺乏線粒體複合體1，這就造成或利於細胞氧化應激的增加。魚藤酮引起的慢性複合體1抑制會在大鼠中誘發PD的特徵，包括選擇性的黑質紋狀體的多巴胺能退化和具有a突觸核蛋白陽性內含物的Lewy體。在魚藤酮誘導的多巴胺能SH-SY5Y細胞的細胞死亡中，魚藤酮誘發Bad去磷酸化，而沒有改變Bad蛋白的量。魚藤酮也增加了顯示形態變化的細胞中a突觸核蛋白的量。魚藤酮引起BAD的減少和與14-3-3蛋白結合的a突觸核蛋白的增加。由神經鈣調蛋白引起的去磷酸化會激活Bad。神經鈣調蛋白(calcineurin)抑制劑他克莫司(Tacrolimus)(FK506)抑制魚藤酮誘導的Bad去磷酸化和細胞凋亡。抑制在Bad下遊起作用的半胱天冬酶-9可完全抑制魚藤酮誘導的細胞凋亡。MPP+抑制線粒體複合體1和順烏頭酸酶活性，從而導致增加11202產生、TfR表達以及a突觸核蛋白表達和聚集。過量表達a突觸核蛋白的細胞加劇MPPT的毒性，而反義a突觸核蛋白處理會在成神經細胞瘤細胞中完全中止MPP+誘導的細胞凋亡，而不影響氧化劑的產生。MPP+處理的細胞中a突觸核蛋白細胞毒性作用的增加歸因於促分裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPK)禾卩蛋白酶體功會g的抑制(Kalivendi等，2004)。作為研究細胞凋亡工具的酵母如上文所述，僅有少數幾種己知的細胞凋亡調節劑，其中一些促進細胞死亡而其他的則防止細胞死亡。在釀酒酵母(Sacc/2aram少cecewWs/ae)中表達的人促凋亡蛋白可以以線粒體不依賴或依賴的方式抑制細胞的生長，並且在功能性線粒體存在時，可引起細胞死亡。在垂死的酵母細胞中表現出了許多哺乳動物細胞凋亡的標誌，且己知的抗凋亡蛋白可克服線粒體依賴的酵母死亡。因此，細胞凋亡調節劑的酵母篩選系統可以作為有用的模擬人體系統(humansystem),且可調査不能按照哺乳動物試驗系統來進行處理的領域(如不依賴線粒體的生長抑制通路)。在GB2326413和Greenhalf等(1996)中，發明人事先描述了在酉良酒酵母菌株HT444中篩選假定的細胞凋亡抑制劑的cDNA的方法。將pRS305酵母整合載體，其含有在GAL10啟動子、SUC2轉錄終止子和LEU2選擇性標記基因調控下的編碼人Bax蛋白的多核苷酸，整合入HT444細胞，獲得酵母菌株HT444—bax。在半乳糖存在時，人Bax蛋白的表達終止了HT444Jmx細胞的生長並將其殺死。當HT444—bax細胞用含有編碼bd-2和bcl-xL的多核苷酸的酵母質粒轉化時，這些蛋白的表達會在Bax-表達細胞中修復酵母細胞的生長。利用這種系統，篩選人小腦cDNA文庫。Greenhalf等(1996)證明了，儘管Bax誘導總能在任何情況下防止酵母細胞生長，但其不能在"小(petite)"細胞中引起死亡，所述"小"細胞因為缺少功能性線粒體而不能呼吸。這表明，Bax介導的生長抑制和細胞死亡與線粒體功能和呼吸有關。與在缺乏線粒體時候不能存活的哺乳動物細胞不同，酵母有可行替代方式——發酵途徑。在酵母中半乳糖是沒有葡萄糖有效的呼吸抑制劑。因此，在酵母中在半乳糖誘導性啟動子的指導下表達Bax會導致呼吸作用，且比在葡萄糖誘導性啟動子的指導下的Bax表達導致意義更深遠的細胞死亡(當酵母細胞進行發酵時)。Manon等(1997)報導了Bax誘導的生長抑制與線粒體細胞色素C氧化酶水平的條低和細胞色素C從線粒體向細胞溶膠的釋放增加有關。後來，Ligr等(1998)證實Bax觸發細胞中的細胞凋亡變化，所述變化與哺乳動物細胞中的細胞凋亡變化非常相似。Xu&Reed(1998)用功能性酵母篩選系統鑑定了哺乳動物細胞凋亡的抑制劑，Bax抑制劑l(BI-1)，所述系統利用Bax在半乳糖誘導性啟動子的指17導下在酵母菌株BF264-15Dau中表達。US2005/0148062描述了在釀酒酵母菌株INVScl中，表達小鼠Bax-a蛋白的Ty轉座子載體用於分析Bax-誘導性細胞死亡中不同基因表達的用途。Matsuyama等(1999)在1999年回顧了酵母作為細胞凋亡研究工具的用途，Priault等(2003)回顧了酵母在細胞死亡中作為研究Bax/線粒體相互作用的工具。
發明內容本發明人如今研發了釀酒酵母菌株W303baxleu，其在鑑定調節細胞凋亡的基因和蛋白的功能性篩選系統中特別有用。如下文所述，酵母菌株W303baxleu在篩選細胞凋亡的調節劑方面，具有優於以前報導的任何菌株的特性。特別是，利用W303baxleu，假陽性率驚人地低。實際上，本發明人發現與另外的等同體W303菌株相比，其在ADE2、HIS3或TRP1基因座中已經整合了Bax表達盒，酵母菌株W303baxleu具有非常低的假陽性率。因此，預料，利用W303baxleu將能更快速且費用較低地鑑定出可能的治療靶標。實際上，利用W303baxleu，本發明人已經鑑定出許多可能的新細胞凋亡調節劑(參閱表1)，本發明人已經獨立地證實，其中的一些調節劑在哺乳動物細胞中與Bax介導的細胞凋亡抑制劑具有相同的活性。第一方面，本發明提供了釀酒酵母細胞，其具有基因型M4r-a、^fe2-7、印W、/^-3、/ew2-〃2、歸-仏縮-75、固3-7禾口函7-凰且其含有在整合於LEU2染色體基因座的半乳糖誘導性啟動子的調控下編碼功能性Bax多肽的多核苷酸。釀酒酵母CAN1基因是精氨酸透性酶。c朋/-7^突變在具有常規leu、ura或ade標記的菌株中通常是沉默突變，因此不可能知道ra"7-川0突變存在於此類菌株中。然而，^"/-/^突變在招5突變體細胞(如W303a)中會引起--個問題。如果培養於外源性組氨酸中，則這些細胞具有緩慢的生長表型。這種緩慢的生長表型在存在外源性組氨酸時(其在菌株如//"J突變體中對於生長絕對是必需的)有助於篩選且排除假陽性。在不期望受理論束縛的情況下，本發明人認為，攜帶"w/-/W突變以及人&"完整拷貝(優選，利用酵母偏愛密碼子合成的，且任選地在C末端處的c-myc標籤)的其他His突變體酵母菌株，有助於在Bax-介導的細胞凋亡篩選中排除假陽性，特別是在也是Mat-a的菌株中(與M2f-cc相反)。第二方面，本發明提供了釀酒酵母細胞，其具有基因型M4『-a,a^2-7，/ei^-3，/ew2-//2，/z/d-//,/z/d-/5，wra3-ow/-7W，且含有酵母整合質粒，所述質粒含有在半乳糖誘導啟動子的調控下編碼功能性Bax多肽的多核苷酸，且其適宜在丄^72染色體基因座處整合。所謂"適宜在Z五f/2染色體基因座處整合"，我們意指設計和構建用於在丄五W基因座處耙向整合的質粒。優選，釀酒酵母細胞是W303M4ra(也稱為W303-1A和W303a)。W303是熟知的酵母菌株。該菌株通過用含有的質粒轉化W301-18A(Rothstein,1983，M"/z.￡"^;mo/.101:202-211)，而製備成二倍體。二倍體分裂獲得等基因的M4ra(W303-1A)和M4ralpha(W303-lB)菌株(Thomas&Rothstein，1989:Ce//56:619-630)。如http:〃www.yeastgenome.org/straintable.shtml弁W303所述，W303具有下列基因型/ewU,7",.入.ca"7-wra3-7;fi^e2-7//2&3-_/7，75//p/n.+7。W303-1A具有j^p/-/突變(I7L,F328V,K343E,N571D)，該突變完全破壞了Ybplp功能，導致對氧化應激的敏感性增加(Veal等，2003)。W303也包含bud4突變，該突變導致單倍體以軸向和兩極發芽方式的混合形式發芽(Voth,等，2005)。另外，最初的W303菌株包含ra必-5"等位基因(在位置535，G變成R;參閱Fan等，1996,Gewef/cs142:749)。Bud4和Rad5是細胞分裂周期相關基因。有關W303的更詳細信息可從http:〃www.yeastgenome.org/community/W303.html獲得，將其全部內容以參考的方式併入本文。功能性人Bax多肽的胺基酸序列列於SEQIDNo:3(圖61)中。其他適宜的功能性Bax多肽在本領域內是熟知的，包括描述於GB2326413、Greenhalf等(1996)、Manon等(1997)、Ligr等(1998)以及Xu&Reed(1998)(同上)中的那些。功能性Bax多肽可以是人Bax序列，或其促凋亡片段或變體。Bax也稱為BCL2-相關的X蛋白但CL2-associated^protein)。就"功能性"Bax多肽而言，我們意指能在下文所述的實驗條件下在酵母細胞中誘導細胞死亡的多肽。適宜的酵母細胞包括W303細胞。如果功能性Bax多肽在下文所述的實驗條件下也能在哺乳動物細胞中誘導細胞死亡，則其是優選的。適宜的哺乳動物細胞是HEK293、COS-l和SH-SY5Y細胞。在大量哺乳動物細胞系中可證實在酵母中觀察的結果；選擇HEK293細胞，是因為據稱它們具有神經元特徵。就"功能性Bax多肽"而言，其包括人Bax基因的基因產物以及其天然存在的變體。人Baxp轉錄物變體的mRNA序列——其編碼最長的同種型(P)，可見於登錄號NM—004324中，且同種型p(isoformp)的相應多肽序列可見於登錄號NPJ)04315中。與變體(3相比，人Baxoi轉錄物變體含有不同的3，編碼區和3，URT。與(3同種型相比，其編碼具有更短且不同C末端的同種型(a)。(x變體的mRNA序列，其編碼a同種型，見於登錄號NM—138761中，且a同種型的相應多肽序列見於登錄號NP—620116中。人Bax同種型a與同種型甲非常相似。如果功能性Bax多肽是已知在大多數細胞中存在的a同種型，則其是優選的。Baxa型在殺死細胞方面比(3和A型更有效。與變體卩相比，人BaxY轉錄變體在編碼區缺少導致翻譯移碼的片段。與同種型P相比，所得的y同種型具有更短且不同的C末端。y變體的mRNA序列，其編碼y同種型，可見於登錄號nm—138762中，且y同種型的相應多肽序列可見於登錄號np一620117中。與變體(3相比，人BaxA轉錄變體在編碼區缺少一片段，且包含不同的3'編碼區和3，UTR。翻譯依然保留在框內並產生這樣一種同種型(A),與同種型卩相比，該同種型丟失一內部片段並具有更短且不同的C末端。A變體的mRNA序列，其編碼A同種型，可見於登錄號NoNM—138763中，且同種型△的相應多肽序列可見於登錄號NoNP—620118中。與變體(3相比，人Baxs轉錄變體在編碼區含有額外的片段，且具有不同的3'編碼區和3'UTR。該額外的片段引起翻譯移碼，因而導致與同種型P相比具有更短且不同的C末端的同種型(s)。s變體的mRNA序列，其編碼s同種型，可見於登陸號NM—138764中，且同種型s的相應多肽序列可見於登錄號NP—620119中。與變體卩相比，人Baxcj轉錄物變體含有不同的3'編碼區和3'UTR。它編碼與同種型(3相比具有更短且不同C末端的同種型(cj)。ci變體的mRNA序列，其編碼(J同種型，可見於登錄號NMJ38765中，且同種型o的相應多肽序列可見於登錄號NP—620120中。編碼功能性Bax的多核苷酸通常由重組DNA技術製備。適宜克隆、操作、修飾和表達核酸以及純化表達的蛋白的技術在本領域內是熟知的，並且描述於例如Sambrook等(2001)"Afo/ecw/arC7om.wg,a丄a^ora/or少AfawwW，3rdedition,Sambrook等(編輯)，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,USA中。功能性Bax多肽不必是全長多肽，也不必與野生型Bax多肽具有相同的序列，只要其保留了至少一些野生型Bax的促凋亡活性，g卩，功能性Bax多肽在下文所述的條件下必須保留至少一些野生型Bax促進凋亡性細胞死亡或抑制細胞生長的能力。因此，功能性Bax多肽包括全長Bax多肽的衍生物，其保留了至少一些野生型Bax的促凋亡活性。適宜的衍生物包括保留了至少一些野生型Bax促凋亡活性的全長Bax多肽的變體或片段，或全長的多肽的變體或片段。所謂人Bax的"片段"，我們意指促進凋亡性細胞死亡的多肽的任何部分。這可通過本文所述的方法進行試驗，且優選在W303細胞中進行試驗。通常，片段具有至少30%的SEQIDNO:3(列於圖61中)的功能性Bax多肽的促凋亡活性。更優選，片段具有至少50%、優選至少70%且更優選至少90。/。的SEQIDNO:3的功能性Bax多肽的促凋亡活性。最優選，片段具有100%或更多的SEQIDNO:3的功能性Bax多肽的促凋亡活性。全長Bax的變體或其片段變體包括在一個或多個位置處的胺基酸插入、缺失和取代，無論保守或非保守。所謂"保守取代"，意指組合如Gly、Ala;Val、lie、Leu;Asp、Gu;Asn、Gin;Ser、Thr;Lys、Arg;禾卩Phe,Tyr。此類修飾利用如Sambrook等(2001)(同上)中所述的蛋白質工程和定點誘變的方法來實現。優選，與全長人Bax或各自Bax片段相比，變體Bax或變體Bax片段保留了至少90%的序列同一性。更優選，與全長Bax或各自Bax片段相比，變體Bax或變體Bax片段具有至少91。/。、92%、93%、94%或95%的序列同--性，且仍然更優選至少96。/。、97%、98%或99%的序列同一性。優選變體Bax或變體Bax片段保留了至少30%的SEQIDNO:3的功能性Bax多肽的促凋亡活性。如果變體Bax或變體Bax片段具有至少50%、優選至少70%、更優選至少90%的SEQIDNO:3的功能性Bax多肽的促凋亡活性，則其是更優選的。最優選，變體Bax或變體Bax片段具有100%或更多的SEQIDNO:3(列於圖61中)的功能性Bax多肽的促凋亡活性。應該理解，來自哺乳動物物種而非人的功能性Bax多核苷酸和多肽可用於本發明中，而且還可以構建全長Bax多肽的片段或變體。優選，如本領域所熟知的(Bennetzen&Ha11，1982)，為酵母對編碼功能性Bax多肽的多核苷酸的密碼子進行優化。SEQIDNO:2是編碼功能性Bax多肽的多核苷酸的實例，其具有為酵母而優化的密碼子，且其編碼的功能性Bax多肽顯示於SEQIDNO:3(兩條序列都列於圖61中)中。半乳糖誘導的啟動子可以是GAL1或GAL10啟動子(Johnston,1987)。優選，用SUC2轉錄終止子序列終止編碼釀酒酵母細胞中功能性Bax多肽的多核苷酸(Reeder&Lang,1994)。其他適宜的轉錄終止子在本領域內是已知的，包括PH05和ADH1。出於本發明的目的，在半乳糖存在時，功能性Bax多肽在釀酒酵母細胞中的表達優選導致細胞死亡。但，對於小酵母細胞來說，功能性Bax多肽的表達導致細胞生長的抑制而不是死亡。在本發明優選的實施方案中，釀酒酵母細胞是如下文所述的菌株W303baxleu。W303M4T-a菌株用於產生W303baxleu。W303M4r-a((W303-lA))目錄號為YSC1058可從開放系統(OpenSystems)獲得。如下文所詳細討論的，當功能性Bax多肽在半乳糖存在的情況下在本發明第一方面或第二方面的釀酒酵母細胞內表達時，功能性Bax多肽的凋亡作用事實上足以抑制所有細胞的生長並殺死它們。因此，這些酵母細胞在篩選Bax介導的細胞凋亡抑制劑的方法中特別有用，因為這些酵母菌株的背景即假陽性水平非常低(參閱圖53)。在此篩選方法中，將多個多核苷酸，通常是cDNA文庫，引入酵母細胞，誘導多核苷酸的表達。僅含有推斷的細胞凋亡抑制劑的細胞能表現出生長，且表現出生長的每一個細胞都含有推斷的細胞凋亡抑制劑。含有在半乳糖存在下負調節由GAL1/GAL10啟動子介導的轉錄蛋白的細胞是假陽性。其他可能的假陽性包括含有及儀的自發"非致死"突變體的細胞(其是不可能的)，以及在具體的基因中含有突變的細胞，這些突變使所述細胞對Bax的致死作用有抗性(如酵母基因中的突變使Bax的作用在酵母細胞中無效)。因此，本發明提供了試劑盒，其包含本發明第一方面或第二方面的酵母細胞，以及用於進行篩選Bax介導的細胞凋亡抑制劑方法的其他組分。通常，試劑盒包含適宜將多核苷酸文庫轉化至酵母細胞的酵母質粒載體。優選，酵母質粒載體在誘導啟動子的調控下適宜表達來自文庫的多核苷酸。適宜的酵母質粒載體包括pYES2(Stratagene)。可以理解，可使用本領域中已知的任何2-micron(多拷貝)或著絲粒(單拷貝)酵母穿梭載體(yeastshuttlevector^試劑盒還可包含誘導來自文庫的多核苷酸在酵母細胞中表達的試劑。許多適宜的可誘導啟動子以及它們對應的誘導劑在酵母遺傳學領域內是已知的。例如，四環素誘導啟動子、甲硫氨酸誘導啟動子和半乳糖誘導啟動子在本領域內都是熟知的。其他適宜的啟動子包括ADH2乙醇脫氫酶啟動子(在葡萄糖中受到抑制，當葡萄糖耗盡時得以誘導，並產生酒精)，以及CUP1金屬硫蛋白啟動子(存在012+、Z^+時，受到誘導)。如果誘導多核苷酸在酵母細胞中表達的試劑是半乳糖，則其是優選的。在任何情況下，在試劑盒中包含半乳糖是有利的，因為必需要誘導功能性Bax多肽的表達。試劑盒還可包含實施多核苷酸文庫篩選方法的說明書，所述文庫通常是Bax介導的細胞凋亡抑制劑的cDNA文庫。如下文實施例中所述，本發明人利用本發明第一方面定義的酵母細胞篩選Bax介導的細胞凋亡的抑制劑。在酵母中編碼功能性Bax多肽的多核苷酸受半乳糖誘導的啟動子的調控，其在葡萄糖存在時是關閉的(OFF)，但存在半乳糖時是打開的(ON)。因此，功能性Bax多肽僅在存在半乳糖時表達，且在半乳糖存在時殺死所有的酵母細胞。作為此篩選方法的對照，已證實，Bxl-2和Bcl-xL與功能性Bax多肽的共表達，在含有半乳糖作為唯一碳源的培養基中，防止Bax誘導的細胞死亡。半乳糖允許呼吸(即線粒體介導的)生長，而葡萄糖則允許發酵和呼吸生長。因此，在篩選中營救Bax介導的死亡的已鑑定的基因/蛋白是中止經由線粒體的死亡的那些基因/蛋白。換句話說，認23為這些已鑑定的基因/蛋白可以保護線粒體的功能。在酵母表達載體中擴增人海馬cDNA文庫，獲得1.2x106個單個克隆，並轉化至W303baxleu酵母細胞中，所述酵母細胞包含完整的Bax盒且不產生"背景"(參閱圖53)。在為避免在葡萄糖中生長而含有半乳糖作為唯一碳源的平板上，直接篩選轉化體，隨後影印培養(replica-plated)。(影印培養很重要，因為直接依賴半乳糖生長的細胞應該是含有目的質粒來源的抗凋亡基因的細胞)。篩選3.Sx101個單個酵母轉化體(根據在對照試驗中在葡萄糖平板上獲得的轉化體進行計算，以測定每次轉化中獲得的細胞數量)。從在半乳糖中，即在存在功能性Bax多肽的情況下，在生長的細胞內分離質粒。將純化的質粒再轉化至含有Bax的酵母細胞中，並再次檢查對細胞死亡的預防。將在酵母中明確阻止Bax介導的細胞死亡且產生了目的抗凋亡多核苷酸的那些質粒的多核苷酸插入體進行測序。如實施例中所述，對人海馬cDNA文庫實施這種篩選方法鑑定出了在酵母中抑制Bax介導的細胞凋亡和細胞生長的16個多核苷酸(對應於基因或部分基因)。因此在鑑定的16個多核苷酸中，一個是Bcl-2Al，為Bcl-2的同源物，Bcl-2為己知的細胞凋亡抑制劑。作為篩選方法的結果，Bcl-2A1的鑑定完全是原理驗證(proof-of-principle)，該方法高度適合且有效地篩選是或編碼Bax介導的細胞凋亡抑制劑的多核苷酸。因此第四方面，本發明提供了篩選多核苷酸的方法，所述多核苷酸是或編碼Bax介導的細胞凋亡抑制劑，所述方法包括(a)在酵母質粒載體中提供多核苷酸的文庫；(b)將多核苷酸文庫轉化至本發明第一或第二方面定義的酵母細胞；(c)將轉化的酵母在酵母質粒載體中允許功能性Bax多肽和多核苷酸表達的條件下平板接種；以及(d)鑑定在歩驟(c)的條件下生長的一個或多個酵母菌落。其中酵母菌落的生長表示酵母質粒載體中的多核苷酸是或編碼Bax介導的細胞凋亡的抑制劑。優選，多核苷酸文庫是cDNA文庫，其可從如人腦組織、與糖尿病有關的組織或細胞、與風溼性關節炎有關的組織，或從細胞系等來源中產生。cDNA文庫也可從癌組織、心臟組織、肌肉組織或病毒或細菌基因組中產生。通常，酵母質粒載體中的多核苷酸文庫受誘導啟動子的調控。適宜地，誘導啟動子可以是四環素誘導啟動子、甲硫氨酸誘導啟動子、半乳糖誘導啟動子、ADH2乙醇脫氫酶啟動子(存在葡萄糖時受到抑制，當葡萄糖耗盡時得以誘導並產生酒精)，或CUP1金屬硫蛋白啟動子(存在Cu2、Zn、寸得以誘導)。通常，半乳糖誘導啟動子是GAL1或GALIO。許多適宜的酵母質粒載體在本領域內是已知的，包括pYES2(Stratagene)和本領域中已知的其他2-micron(多拷貝)或著絲粒(單拷貝)酵母穿梭載體。如果轉化步驟(b)是高效轉化則其是優選的。通常，平板接種步驟(c)包括，在一種已知的標準酵母生長培養基中、在3(TC下、以半乳糖作為唯一的碳源，將平板接種的酵母細胞溫育至少72小時可能最多7天。顯然，如果酵母質粒載體中的多核苷酸受除半乳糖之外的試劑誘導的啟動子的調控，則也包括該誘導試劑。在可選擇的實施方案中，Bax多肽可受ADH2啟動子而不是GLA啟動子的調控，例如，為了篩選出能中止小細胞(其可在沒有功能性線粒體的情況下生長)中Bax介導的細胞生長抑制的蛋白。如同對酵母遺傳學領域技術人員是顯然易見的，所述方法可以進一步包括一種或多種下列步驟，通常所有三種步驟(e)從步驟(d)中鑑定的酵母菌落中分離酵母細胞；(f)從步驟(d)中鑑定的酵母菌落中或從步驟(e)中分離的酵母細胞中分離酵母質粒載體；以及(g)對來自步驟(f)中分離的酵母質粒載體的多核苷酸(即插入物)進行測序。如下文實施例中所述的，所述方法通常還包括步驟(h)再次對來自存在於步驟(d)鑑定的酵母菌落中的質粒載體的多核苷酸，或被所述多核苷酸編碼的多肽進行在細胞凋亡模型中抑制Bax介導的細胞凋亡的能力檢測。另外或可選地，所述方法還包括步驟(i)修飾來自存在於步驟(d)中鑑定的酵母菌落中的質粒載體的多核苷酸，並檢測該修飾的多核苷酸，或被所述修飾的多核苷酸編碼的多肽在細胞凋亡模型中抑制Bax介導的細胞凋亡的能力。進一歩，所述方法還可以包含步驟(i)基於歩驟(g)中獲得的序列數據，鑑定來自步驟(d)鑑定的酵母菌落中的多核苷酸，並檢測對應於鑑定的多核苷酸的多核苷酸，或被所述對應多核苷酸編碼的多肽在細胞凋亡模型中抑制Bax介導的細胞凋亡的能力。因為從步驟(d)鑑定的酵母菌落中獲得的多核苷酸可能並不編碼全長的天然存在的多肽，因此，對於與鑑定的多核苷酸對應的多核苷酸，我們則包括了鑑定的多核苷酸的全長版本，其編碼全長的天然存在的多肽。同時，因為對應於鑑定的多核苷酸的基因可能會編碼幾種多肽同種型，對於與鑑定的多核苷酸對應的多核苷酸，我們包括編碼天然存在的多肽的不同同種型的多核苷酸。另外，因為鑑定的多核苷酸可能具有不同於天然存在的多核苷酸序列的序列，因此，通常，如果cDNA文庫是從細胞系中獲得的，對於與鑑定的多核苷酸對應的多核苷酸，我們包括天然存在的多核苷酸。另外，由於多核苷酸可能分離自非人cDNA文庫，對於與鑑定的多核苷酸對應的多核苷酸，我們包括來自另一物種的鑑定的多核苷酸的同源物，優選人同源物。細胞凋亡的適宜模型包括細胞凋亡的酵母細胞模型、哺乳動物細胞模型和體內模型。檢驗多核苷酸是否在細胞內具有抑制Bax介導的細胞凋亡能力的酵母模型可以是上文本發明第一方面所述的一個模型，如W303baxleu。檢驗多核苷酸是否在細胞內具有抑制Bax介導的細胞凋亡能力的哺乳動物模型可以是幾乎任何哺乳動物細胞或細胞系。如下文實施例中所述的，選擇HEK293細胞系，因為預料來自海馬cDNA文庫的已鑑定抗凋亡基因在神經元細胞中有效，而且HEK293還具有一些神經元特徵(至少，其通常用作難以利用的典型神經元細胞的替代物)。例如，可用攜帶編碼指示分子(indicatormolecule)的報告基因的指示質粒(indicatorplamsid)轉染細胞，並通過檢測表達的指示分子來測量細胞死亡或凋亡的程度。如，根據製造商的建議，在用表達大腸桿菌(3半乳糖苷酶指示劑的指示質粒轉染的細胞中，細胞凋亡的程度可通過卩半乳糖苷酶ELISA(BoehringerMannheim)來進行測定。凋亡活性的程度也可通過將細胞用X-gal染色後，在顯微鏡下，對表達p半乳糖苷酶的藍色細胞進行可視化計數來測定。作為另一個實例，在用表達綠色螢光蛋白的指示質粒轉染的細胞中，細胞凋亡的程度可通過利用流式細胞儀(FACScan，Becton-Dickinson)或螢光顯微鏡測量總細胞群中螢光細胞的分數(fraction)來進行測定。在存在CHX時，也可通過將細胞暴露於抗Fas抗體來測量DNA降解，其指示細胞凋亡。之後，提取細胞中的DNA，用常規方案純化。可利用檢測細胞死亡或細胞凋亡的任何方法，如下文或Sellers等(1994)、Telford等(1994)禾口Poirier,Ed.(1997)jp。/tos/s7"ec/zw—屍ratoco/s，HumanaPress,Totowa，NJ，USA中所述的那些方法。細胞凋亡的時程可通過測量磷脂醯絲氨酸在細胞表面的表達量來分析，如用FITC標記的AnnexinV來檢測，和/或通過利用碘化丙啶的染料排除法(dye-exclusion)來分析。這兩個試驗可以利用可商購試劑盒如ApoAlertAnnexinV細胞凋亡試劑盒(Clontech)，根據製造商的建議，並利用流式細胞儀(FACScan,Becton-Dickinson)或螢光顯微鏡來進行。作為神經變性中細胞凋亡的體內模型，可利用化學品(其導致PD或AD)來在小鼠或大鼠腦內誘導細胞凋亡。作為癌症中細胞凋亡的體內模型，可注射導致腫瘤形成的腫瘤細胞，隨後測定是否任何試劑都能誘導細胞凋亡(即月中瘤鈹縮)。如本領域熟練的'技術人員所理解的，所述方法還可包括將具有在細胞凋亡的體內模型中抑制Bax介導的細胞凋亡能力的多核苷酸或多肽配製成藥學可接受組合物的步驟。如本文所述，可對人海馬cDNA文庫進行上文所述的篩選多核苷酸的方法，所述多核苷酸是或編碼Bax介導的細胞凋亡的抑制劑。鑑定出16種中止酵母細胞凋亡系統中Bax介導的細胞死亡的多核苷酸(對應於基因或部分基因)，並列於表l中。tableseeoriginaldocumentpage27tableseeoriginaldocumentpage28在哺乳動物細胞凋亡系統中，檢測Bcl-2Al、SNCA、FKBP2(FKBP-13)、EEF1A1和VAMP3，且證實每種都具有與Bax介導的細胞凋亡抑制劑一樣的活性。已報導Bcl-2Al是細胞凋亡的抑制劑。因此，得出作為篩選方法的結果而鑑定出的其他的11種多核苷酸也是或編碼哺乳動物中Bax介導的細胞凋亡的抑制劑這一結論是合理的。因此，第五方面，本發明提供了在細胞中抵抗Bax介導的細胞凋亡的方法，所述方法包括向細胞施用多肽或任意一種所述多肽的抗凋亡衍生物或編碼任意一種所述多肽或衍生物的多核苷酸，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、固GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽。通常，體外進行所述方法。通常，細胞是哺乳動物細胞，如人細胞，儘管由實施例來看其是明確的，但細胞可以來自其他物種，如酵母。細胞可以來自已建立的細胞系、原代細胞培養物或存在於離體組織中的細胞。可選地，體內進行所述方法。多肽、其促凋亡衍生物以及編碼任何所述多肽或衍生物的多核苷酸很明顯具有作為研究細胞凋亡的研究工具的用途。它們在篩選調節細胞凋亡的其他治療劑的方法中也有用，如下文所述。第六方面，本發明提供了多肽或任意一種所述多肽的促凋亡衍生物或編碼任意一種所述多肽或衍生物的多核苷酸在製備抵抗細胞中Bax介導的細胞凋亡的藥物中的用途，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、函GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1禾口含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽。所謂"抵抗細胞中Bax介導的細胞凋亡"，我們意指抑制或阻止細胞中Bax介導的細胞凋亡。可以理解，本發明第五方面的多肽、衍生物和多核苷酸以及本發明第六方面的藥物可適宜地抵抗會發生線粒體功能障礙的任何細胞凋亡，因為Bax的凋亡作用可由其他的蛋白或由外源性/內源性化學品來進行模擬。例如，已知星孢菌素(staurospaurine)能模擬Bax的作用。因此，本發明第五方面的多肽、衍生物和多核苷酸以及本發明第六方面的藥物可以適宜地抵抗星孢菌素誘導的細胞死亡。利用蛋白質化學技術，例如，利用部分蛋白水解(外水解或內水解)，或通過重新合成(denovosynthesis),可製備任何既定多肽的衍生物。可選地，可通過重組DNA技術來製備所述衍生物。克隆、操作、修飾和表達核酸以及純化表達的蛋白質的適宜技術在本領域內是熟知的，且描述於例如Sambrook等(2001)"Mo/ecw/arC7om."g，a/MoratoryMawwa/'',3fedition,Sambrook等(編車葺)，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,USA中。這些多肽的適宜"抗凋亡衍生物"包括能抑制細胞內Bax介導的細胞凋亡的其片段以及全長多肽或其片段的修飾物。29就給定多肽的"修飾"而言，我們包括在一個或多個位置處保守或非保守的胺基酸的插入、缺失、和取代。此類修飾物可稱為給定多肽的類似物。所謂"保守取代"意指組合，如Gly,Ala;Val，Ile,Leu;Asp,Glu;Asn,Gln;Ser,Thr;Lys,Arg;禾tlPhe,Tyr。此類修飾可利用蛋白質工程和定點誘變的方法製備，如Sambrook等(2001)(同上)所述的。給定多肽的其他修飾包括添加NH2或COOH末端標籤，從而可以讓蛋白進入細胞。海馬是已知在神經變性病中遭受細胞凋亡的大腦區域。因為抗凋亡多核苷酸是從人海馬cDNA文庫中鑑定的，所以得出每一個鑑定的抗凋亡多核苷酸或其編碼的抗凋亡多肽在抵抗神經變性病中有用是合理的。因此，本發明的第七方面提供了多肽或該多肽的抗凋亡衍生物或編碼任何所述多肽或其衍生物的多核苷酸在醫學中的用途，所述多肽選自FKBP2、SNCA、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、固GCS1、SCD5、HRMT1L1和由包含SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽。第八方面，本發明提供了藥用組合物，其包含選自FKBP2、SNCA、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB德、固GCS1、SCD5、HRMT1L1禾口由包含SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的多肽，或任何這些多肽的抗凋亡衍生物，或編碼任何所述多肽或衍生物的多核苷酸，以及藥學上可接受載體或賦形劑。另外，許多其他症狀或病症都與細胞或組織中不適當的Bax介導的細胞凋亡有關，如心血管疾病中的心血管細胞(Reeve等，2005)，風溼性關節炎中的滑膜細胞(Baier等，2003)，以及糖尿病中的胰腺B細胞(Cnop等，2005;Millet等，2005)。因此，第九方面，本發明提供了抵抗患者中選自神經變性病或病症、心血管病、風溼性關節炎和糖尿病的疾病或病症的方法，所述方法包括向患者施用選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的多肽，或任何這些多肽的抗凋亡衍生物，或編碼任何所述多肽或衍生物的多核苷酸。心血管病在世界範圍內是死亡的主要原因。功能喪失或心肌細胞死亡是世界範圍內死亡的主要原因的心血管病的主要貢獻性作用。在病症如心力衰竭和心肌梗死中的細胞死亡與細胞凋亡有關。已在非心肌細胞中研究了細胞凋亡途徑，並認為在心肌細胞中存在相似途徑。這些途徑包括由膜結合死亡受體的連接、促凋亡因子從線粒體釋放或內質網處的應激發動的死亡。細胞凋亡的關鍵調節劑包括抑制劑半胱天冬酶(IAPs)、Bd-2蛋白家族、生長因子、應激蛋白、f丐和氧化劑。凋亡信號的高度組織化和前兆性的特性意味著其很易於操作。對細胞凋亡過程的透徹理解能在大多數的適宜點上促進幹擾，從而減輕心肌衰竭和功能障礙(Reeve等,2005)。所謂"抵抗"患者的疾病、不適或病症，我們意指治療、預防、或改善具體不適或病症的症狀。可利用本發明的治療方法和用途治療的神經變性病包括中風、脊髓損傷、頭部損傷、脊髓性肌萎縮症(SMA)、包括肌萎縮側索硬化(ALS)的運動神經元病、阿爾茨海默氏病(ALS)、帕金森氏病(PD)和亨廷頓病(HD)。因此，第十方面，本發明提供了選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、畫GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1禾口含有由SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的多肽，或任何這些多肽的抗凋亡衍生物，或編碼任何所述多肽或衍生物的多核苷酸，在製備抵抗患者中選自神經變性病或病症、心血管病、風溼性關節炎和糖尿病的疾病或病症的藥物中的用途。FKBP2FKBP2(也稱為FK506結合蛋白2以及FKBP13)是結合免疫抑制劑FK506和雷帕黴素(rapamydn)的蛋白家族的成員。FKBP2基因的長度為3kb，包含6個外顯子，並位於人染色體11ql3.1-ql3.3(DiLella等，1992)上。Partaledis&Berlin(1993)描述了釀酒酵母的FKB2基因，其編碼與人FKBP-13具有57%的序列同一性的人FKBP-13同源物，表明FKB2/FKB13在內質網(ER)的蛋白質運輸(proteintrafficking)中起作用。根據GenBank登錄號NP—476433，FKB2基因編碼的蛋白是親免素(immunophilins)蛋白家族的成員，其在免疫調節和與蛋白摺疊和運輸有關的基本的細胞過程中起作用。FKB2編碼的蛋白是順反式脯氨醯異構酶(cis-tnmsprolylisomerase)，其結合免疫抑制劑FK506和雷帕黴素。據認為其功能是作為ER伴侶蛋白，且也可充當膜骨架支架的組分。這個基因具有編碼相同的同種型的兩種可選擇性剪接的變體。已描述了該基因的多個聚醯腺苷酸化位點，但還未確定該基因的全長特性。FKBP2在殘基1-21處具信號肽(如NP一476433所界定的)，且成熟的多肽位於殘基22-142處。FKBP2是肽基脯氨醯異構酶(EC5.2丄8)。就本發明人的學識而言，FKBP2與細胞凋亡無關。因此，本發明包括通過向細胞施用FKBP2多肽或其抗凋亡衍生物或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗細胞中Bax介導的細胞凋亡。同樣，就本發明人的學識而言，FKBP2與任何神經變性病無關。實際上，豐艮據OnlineMendelianInheritanceinMan(OMIM，ReferenceNo.186946)，FKBP2與任何疾病狀態都無關，且就本發明人所知，FKBP2未用於治療上。因此，本發明包括FKBP2多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸在醫學中的用途。本發明也包括通過向患者施用FKBP2多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗患者的神經變性病。就"FKBP2多肽"而言，我們意指包括人FKPB2基因的基因產物，包括其天然存在的變體。對應於人FKBP2mRNA的cDNA序列可見於GenBank登錄號NoNM_057092(變體2)和NM—004470(變體l)中。與變體1相比，轉錄物變體2在5'UTR具有不同的外顯子，雖然這兩個變體中的編碼區相同。人FKBP2多肽包括GenBank登錄號NP_476433中發現的胺基酸序列，以及其天然存在的變體。適宜的FKBP2的"抗凋亡衍生物"包括FKBP2的抗凋亡片段。所謂FKBP2的"抗凋亡片段"，我們意指具有抑制細胞中Bax-介導的細胞凋亡能力的FKBP2多肽的任何部分。通常，該片段具有至少30。/。的全長人FKBP2的抗凋亡活性。更優選，該片段具有至少50%、優選至少70%以及最優選至少90%的全長人FKBP2活性。最優選，該片段具有100%或更多的全長人FKBP2的抗凋亡活性。適宜的FKBP2的"抗凋亡衍生物"也包括具有抑制細胞中Bax-介導的細胞凋亡能力的全長FKBP2的修飾物或其片段。優選，與全長FKBP2或其各自的FKBP2片段相比，修飾的FKBP2或修飾的FKBP2片段保留了至少80%或至少85%或至少90%的序列同一性。更優選，與全長FKBP2或其各自的FKBP2片段相比，修飾的FKBP2或修飾FKBP2片段具有至少91%，或至少92%，或至少93%，或至少94%，或至少95%的序列同一性，且仍然更優選，至少96%，或至少97%，或至少98%或至少99%的序列同一性。優選，修飾的FKBP2或修飾的FKBP2片段保留了至少30%的全長人FKBP2的抗凋亡活性。更優選，如果修飾的FKBP2或FKBP2衍生物具有至少50%，優選至少70%，且更優選至少90M的全長人FKBP2的活性。最優選，修飾的FKBP2或修飾的FKBP2片段具有100%或更多的全長人FKBP2的抗凋亡活性。對於FKBP2，我們也包括了來自其他物種的FKBP2基因的同源基因產物。就"同源基因產物"而言，我們包括與GenBank登錄號NP—476433中的人FKBP2胺基酸序列具有至少80。/。序列同一性的FKBP2多肽。更優選，同源基因產物包括與人FKBP2具有至少85%或至少90%序列同一性的FKBP2多肽。仍然更優選，同源基因產物包括與人FKBP2具有至少9in/。，或至少92%，或至少93%，或至少94%,或至少95%，或至少96%，或至少97%，或至少98%的序列同一性。最優選，同源基因產物包括與人FKBP2胺基酸序列具有至少99%的序列同一性。可以理解，對於FKBP2施用於非人受試者的應用，FKBP2優選來自與該受試者相同的物種。如果將FKBP2施用於人類受試者，則FKBP2優選是人FKBP2，或其抗凋亡片段或變體。儘管在來自人和酵母的FKBP2蛋白之間，僅有47%的序列同一性(完全匹配)和69%的序列同源性(可接受的保守殘基)，但人FKBP2可補足酵母細胞中失活的FKBP2突變(數據未顯示)。就編碼FKBP2的多核苷酸而言，我們包括編碼人FKBP2多肽以及其天然存在的變體的cDNA。編碼人FKBP2mRNA的cDNA序列可見於NM一057092和NM一004470中。我們也包括其他的序列，其根據遺傳密碼的簡併性，也編碼FKBP2多肽。將最初由本發明人鑑定的編碼FKBP2的多核苷酸(SEQIDNo:6)確定為全長片段。通過PCR，從cDNA文庫中將這個基因再克隆，並且在C末端加上標籤用於蛋白表達。33FKBP2是肽基脯氨醯異構酶(EC5.2丄8;也稱為肽基脯氨醯順反式異構酶)。有3種不同的肽基脯氨醯異構酶家族親環素(cyclophilins)，FKBPs，和另一個包括來自大腸桿菌的小細胞蛋白的家族。這3種家族結構上不相同，並且可分別通過環孢菌素A、FK-506和5-羥基-l,4-萘醌抑制來區分(http:〃www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/EC5/2/l/8.html)。不希望受限於任何理論，本發明人認為，由於FKBP2是肽基脯氨醯異構酶(EC5.2丄8;也稱為肽基脯氨醯順反式異構酶)，因此肽基脯氨醯異構酶活性有助於其抗凋亡活性是可能的。因此，其他的肽基脯氨醯異構酶，特別是其他的FKBPs以及編碼它們的多核苷酸，也可用於抵抗細胞凋亡。這是特別沒有預料到的，因為親環素D，一種肽基脯氨醯異構酶，其過表達已知能夠增強細胞凋亡過程(Li等，2004)。而且，抑制肽基脯氨醯異構酶(也稱為親免素)己用作預防神經變性的靶標。a突觸核蛋白(SNCA)snca是突觸核蛋白家族的成員，該家族也包括P、y突觸核蛋白。突觸核蛋白在大腦中大量表達，且a和P突觸核蛋白選擇性地抑制磷脂酶D2。SNCA可用於整合突觸前信號和膜運輸。SNCA缺失與帕金森氏病(PD)的發病機理有關。SNCA肽是患有阿爾茨海默症(PD)患者大腦內澱粉樣斑的主要成分。已經鑑定出兩種不同的SNCA剪切轉錄物。就本發明人的學識而言，以前並未證實SNCA是Bax介導的細胞凋亡的抑制劑。因此，本發明包括通過向細胞施用SNCA多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗細胞中Bax介導的細胞凋亡。同樣，儘管SNCA與AD和PD有關(OMIMReferenceNo.163890)，就本發明人的學識而言，以前並未建議使用SNCA多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗患者的神經變性病。實際上，就本發明人所知，SNCA並未用於醫療上。因此，本發明包括SNCA多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸，供用於醫學中。本發明也包括通過向患者施用SNCA多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗患者的神經變性病。在實施方案中，本發明包括通過向患者施用SNCA多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗患者除PD的AD之外的神經變性病。就"SNCA多肽"而言，我們意指括人SNCA基因的基因產物，包括其天然存在的變體。對於人SNCA基因，己經描述了編碼不同蛋白同種型的兩種可選擇的轉錄物變體。對應於人SNCAmRNA的cDNA序列可見於GenBank登錄號NM—000345(同種型NACP140)禾口Genbank登錄號NM—007308(同種型NACP112)中。NACP140轉錄物是較長的轉錄物，並編碼較長的NACP140同種型(GenBank登錄號NP—000336)。與變體NACP140相比，NACP112轉錄物缺少可選的框內片段，從而產生了與同種型NACP140相比具有不同c末端的較短蛋白(同種型NACP112;GenBank登錄號NP一009292)。人SNCA多肽的胺基酸序列包括見於GenBank登錄號NP—000336和NP一009292的序列以及其天然存在的變體。在本文所述的篩選實驗中鑑定的SNCA序列是來自NACP140變體。適宜的SNCA"抗凋亡變體"包括SNCA的抗凋亡片段。就SNCA的"抗凋亡片段"M言,我們意指具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的SNCA多肽的任何部分。通常，該片段具有至少30%的SEQIDNO:5的SNCA多肽的抗凋亡活性。更優選，該片段具有至少50%，優選至少70%，且更優選至少90%的SEQIDNO:5的SNCA多肽活性。最優選，該片段具有100%或更多的SEQIDNO:5的SNCA多肽的抗凋亡活性。適宜的SNCA"抗凋亡衍生物"，也包括全長SNCA或其片段的修飾物，其具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡的能力。優選，修飾的SNCA或修飾的SNCA片段保留全長SNCA或各自的SNCA片段的至少80%，或至少85%，或至少90%的序列同一性。更優選，修飾的SNCA或修飾的SNCA片段與全長SNCA或其各自的SNCA片段具有至少91%，或至少92%，或至少93%，或至少94%或至少95%的序列同一性，甚至更優選至少96%，或至少97%，或至少98%或至少99%的序列同一性。優選，修飾的SNCA或修飾的SNCA片段保留至少30%的全長人SNCA的抗凋亡活性。更優選，修飾的SNCA或SNCA衍生物具有至少50%，優選至少70%和更優選至少90%的全長人SNCA的活性。最優選，修飾的SNCA或修飾的SNCA片段具有至少100%或更多的全長人SNCA的抗凋亡活性。就SNCA而言，我們也包括來自其他物種的SNCA基因的同源基因產物。就"同源基因產物"而言，我們包括與GenBank登錄號NP—000336和NP—009292中的人SNCA胺基酸序列具有至少80%序列同一性的SNCA多肽。更優選，同源基因產物包括與人SNCA具有至少85%或至少90%序列同一性的SNCA多肽。仍然更優選，同源基因產物包括與人SNCA具有至少91%，或至少92%，或至少93%，或至少94%，或至少95%，或至少96%，或至少97%，或至少98。/。的序列同一性的SNCA多肽。最優選，同源基因產物包括與GenBank登錄號NP_000336或NP—009292中的人SNCA胺基酸序列具有至少99M的序列同一性的SNCA多肽。可以理解，對於向非人類受試者施用SNCA的應用，SNCA優選來自與該受試者相同的物種。如果將SNCA施用於人類受試者，則SNCA優選是人SNCA，或其抗凋亡片段或變體。就編碼SNCA的多核苷酸而言，我們包括編碼人SNCA多肽以及其天然存在的變體的cDNA。編碼人SNCAmRNA的cDNA序列見於GenBank登錄號NM一000345和NM一007308中。我們也包括其他的序列，其根據遺傳密碼的簡併性也編碼SNCA多肽。編碼SNCA的抗凋亡片段的多核苷酸的實例列於SEQIDNO:5中。編碼SNCA的多核苷酸(SEQIDNO:5)，其最初是由本發明人鑑定的，認為是全長的片段將插入片段從3'端測序，最後讀出的幾個核苷酸是N's。隨後，利用相同的用於篩選的海馬cDNA文庫，通過PCR，克隆全長轉錄物，最初分離的克隆和全長PCR片段的Bax救援能力是相同的。EEF1A真核生物延伸因子lA(eEFlA,原來稱為EFla)是蛋白質合成中關鍵的因子，其中其促進氨醯化的tRNA向核糖體A位點轉移。在哺乳動物中可發現兩種分化表達的eEFIA同種型，稱為eEFlA-1和eEFlA-2。在人類中，eEFlA-和eEFlA-2同種型具有92.6%的序列同一性(參閱圖67)。根據NP—001393，EEFlA-1基因編碼延伸因子1複合體a亞單位的同種型，其負責氨醯化的tRNA向核糖體的酶促遞送。這種同種型(al)表達於大腦、胎盤、肺、月千、腎和胰中，而其他的同種型(a2)則表達於大腦、心臟和骨骼肌中。在66。/。的患有費爾蒂綜合症(Fetysyndrome)的患者中，al同種型被鑑定為自身抗原。eEFlA基因位於人染色體6ql4上，但已發現其在許染色體上具有多拷貝，其中的一些，如果非全部，代表了不同的假基因。延伸因子1的a亞單位(EEF1A)與氨醯化的tRNA和80S核糖體的結合有關。在此過程中，GTP水解成GDP。為了實現此功能，EEF1A具有結合鳥嘌呤核苷酸、80S核糖體和氨醯化tRNAs的結構域。同時，EEF1A與EEF1的卩亞單位相互作用，將結合的GDP轉變成GTP。人EEF1A的初級結構由Brands等(1986)測定。Ditzel等(2000)將EEF1A1鑑定為66%患有費爾蒂綜合症患者的自身抗體，費爾蒂綜合症的特徵是伴有風溼性關節炎、脾腫大以及嗜中性白細胞的外周破壞而導致的嗜中性白細胞減少症。根據Lamberti等(2004)所做的綜述，EEF1A與細胞凋亡有關(未指明是EEF1A1還是EEF1A2或兩者)。Lamberti等也報導了EEF1A2在預防半胱天冬酶3-介導的細胞凋亡中起作用。基於EEF1A2的抗凋亡作用，Thornton等(2003)提出，EEF1A1也可能抑制細胞凋亡。Talapatra等(2001)在篩選預防由白細胞介素剝奪引起的細胞凋亡的基因中，鑑定出EEF1A1。就本發明人的學識而言，EEF1A1與Bax介導的細胞凋亡無關。因此，本發明包括通過向細胞施用EEF1A1多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗細胞中Bax介導的細胞凋亡。同樣，就本發明人的學識而言，EEF1A1與任何神經變性病無關。因此，本發明包括通過向患者施用EEF1A1多肽或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗患者的神經變性病。就"EEF1A1多肽"(真核生物翻譯延伸因子l(xl)而言，我們意指人EEF1A1基因的基因產物，包括其天然存在的變體。對應於人EEF1A1mRNA的cDNA見於GenBank登錄號NM一001402中。人EEF1A1多肽包括見於GenBank登錄號NP—001393中的胺基酸序列，以及其天然存在的變體。適宜的EEF1A1"抗凋亡衍生物"包括EEF1A1的抗凋亡片段。就EEF1Al的"抗凋亡片段"而言，我們意指具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的EEF1A1多肽的任何部分。通常，所述片段具有至少30。/。的全長人EEF1A1的抗凋亡活性。更優選，所述片段具有至少50%，優選至少70%以及更優選至少90。/。的全長人EEF1A1的活性。最優選，所述片段具有100%或更多的全長人EEF1A1的抗凋亡活性。適宜的EEF1A1"抗凋亡衍生物"也包括具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的全長EEF1A1的片段，或其片段的全長序列的修飾物。優選，與全長EEF1A1，或各自的EEF1A1片段相比，修飾的EEF1A1或修飾的EEF1A1片段保留了至少93%的序列同一性。更優選，修飾的EEF1A1或修飾的EEF1A1片段與全長EEF1A1，或各自的EEF1A1片段具有至少94%或至少95%的序列同一性，仍然更優選，至少96%，或至少97%，或至少98%或至少99%的序列同一性。優選，修飾的EEF1A1或修飾的EEF1A1片段保留了至少30。/。的全長人EEFlAl的抗凋亡活性。更優選，修飾的EEF1A1或修飾的EEF1A1衍生物具有至少50%，優選至少70%以及更優選至少90%的全長人EEF1A1的活性。最優選，修飾的EEF1A1或修飾的EEF1A1片段具有100%或更多的全長人EEF1A1的抗凋亡活性。就EEF1A1而言，我們也包括來自其他物種的EEF1A1基因的同源基因產物。就"同源基因產物"而言，我們包括與GenBank登錄號NP—001393中的人EEF1A1胺基酸序列具有至少93。/。的序列同一性的EEFlAl多肽。更優選，同源基因產物包括與人EEF1A1具有至少94%，或至少95%，或至少96%，或至少97%，或至少98。/o的序列同一性的EEFlAl多肽。最優選，同源基因產物包括與人EEF1A1胺基酸序列具有至少99%的序列同一性的EEF1A1多肽。可以理解，對於向非人類受試者施用於EEF1A1的應用而言，EEF1A1優選來自與所述受試者相同的物種。如果將EEF1A1施用於人類受試者，則EEF1A1優選是人EEF1A1或其抗凋亡片段或變體。就編碼EEF1A1的多核苷酸而言，我們包括編碼人EEF1A1多肽以及其天然存在的變體的cDNA。編碼人EEFlAlmRNA的cDNA序列見於GenBank登錄號NM—001402。我們也包括其他的序列，其根據遺傳密碼的簡併性也編碼EEF1A1多肽。編碼EEF1A1抗凋亡片段的多核苷酸的實例列於SEQIDNo:7中(為了證實其作用隨後在酵母和HEK293細胞中克隆全長EEF1Al)。VAMP3VAMP3是泡囊相關膜蛋白(vesicle-associatedmembraneprotein,VAMP)/突觸囊泡蛋白(synaptobrevin)家族的成員。VAMPs以及突觸融合蛋白(Syntaxins)，和25KD的突角蟲小體相關蛋白(synaptosomal-associatedprotein,SNAP2"是與突觸泡囊和突觸前膜(presynapticmembmnce)的停泊禾卩/或融合有關的蛋白複合體的主要組分。因為VAMP3與其他已知的VAMPs有髙度同一性、其廣泛的組織分布以及其亞細胞定位，該基因編碼的蛋白被認為是齧齒動物縮纖蛋白(cellubrevin)的人等同物。在血小板中，所述蛋白駐留於由於鈣或凝血酶剌激而未固定於細胞質膜上的區室(compartment)中。就本發明人的學識而言，VAMP3與細胞凋亡無關。因此，本發明包括通過向細胞施用VAMP3多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗細胞中Bax介導的細胞凋亡。已發現VAMP3是人染色體lp36上的基屈座中的25個基因之一，其與早發性隱性帕金森氏病直接有關(vanDuijn等,200r)。然而，VAMP3並不直接與任何神經變性病或症狀有關。實際上，根據OMIMReferenceNo603657，VAMP3並不與任何疾病狀態有關，就本發明人所知，VAMP3並未用於醫療上。因此，本發明包括VAMP3多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸，供用於醫學中。因此，本發明也包括通過向患者施用VAMP3多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗患者的神經變性病或症狀。就VAMP3多肽(泡囊相關膜蛋白3)而言，我們意指包括人VAMP3基因的基因產物，包括其天然存在的變體。對應於人VAMP3mRNA的cDNA序列見於GenBank登錄號NM—004781中。人VAMP3多肽包括見於GenBank登錄號NPJ)04772中的胺基酸序列以及其天然存在的變體。適宜的VAMP3"抗凋亡衍生物"包括VAMP3的抗凋亡片段。就VAMP3的"抗凋亡片段"而言，我們意指具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的VAMP3多肽的任何部分。通常，所述片段具有至少30%的全長人VAMP3的抗凋亡活性。更優選，所述片段具有至少50%，優選至少70%且更優選至少卯％的全長人VAMP3的活性。最優選，所述片段具有100%或更多的全長人VAMP3的抗凋亡活性。適宜的VAMP3"抗凋亡衍生物"也包括具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的全長VAMP3的片段，或其片段的全長多肽的修飾物。優選，與全長的VAMP3或各自的VAMP3片段相比，修飾的VAMP3或修飾的39VAMP3片段保留了至少90%的序列同一性。更優選，修飾的VAMP3或修飾的VAMP3片段與全長的VAMP3或各自的VAMP3片段具有至少91%、92%、93%、94%或95%的序列同一性，更優選至少96%、97%、98%或99%的序列同一性。優選，修飾的VAMP3或修飾的VAMP3片段保留了至少30%的全長人VAMP3的抗凋亡活性。更優選，修飾的VAMP3或VAMP3衍生物具有至少50%，優選至少70%且更優選至少90%的全長人VAMP3的活性。最優選，修飾的VAMP3或修飾的VAMP3片段具有100%或更多的全長人VAMP3的抗凋亡活性。就VAMP3而言，我們也包括來自其他物種的VAMP3基因的同源基因產物。就"同源基因產物"而言，我們包括與GenBank登錄號NP—004772中的VAMP3的胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VAMP3多肽。更優選，同源基因產物包括與人VAMP3具有至少95%,或至少96%，或至少97%，或至少98%序列同一性的VAMP3多肽。最優選，同源基因產物包括與人VAMP3胺基酸序列具有至少99°/。序列同一性的VAMP3多肽。可以理解，對於向非人類受試者施用VAMP3的應用而言，VAMP3優選來自與受試者相同的物種。如果將VAMP3施用於人類受試者，則VAMP3優選是人VAMP3，或其抗凋亡片段或變體。就編碼VAMP3的多核苷酸而言，我們包括編碼人VAMP3多肽以及其天然存在的變體的cDNA。編碼人VAMP3mRNA的cDNA序列見於GenBank登錄號NM—004781中。我們也包括其他的序列，其根據遺傳密碼的簡併性也編碼VAMP3多肽。編碼VAMP3的抗凋亡片段的多核苷酸的實例列於SEQIDNo:8中。編碼VAMP3的多核苷酸(SEQIDNo:8)分離自酵母篩選用作全長片段。SNAP25突觸泡囊膜停泊和融合由位於泡囊膜(vesiclemembrane,v-SNAREs)和靶標膜(targetmembrane,t-SNAREs)上的SNAREs(可溶性N-乙基順丁烯二醯亞胺敏感因子附著蛋白受體)介導。組裝的v-SNARE/t-SNARE複合體由--朿四股螺旋(fourhelices)組成，其中1個由v-SNARE提供，其他的3由t-SNARE提供。對於細胞質膜上的.t-SNAREs而言，突觸融合蛋白提供一個螺旋，SNAP25編碼的蛋白貢獻其他的兩個螺旋。因此，SNAP25的基因產物是與神經遞質釋放的調節有關的突觸前細胞質膜蛋白。就本發明人的學識而言，SNAP25與細胞凋亡無關。因此，本發明包括通過向細胞施用SNAP25多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗細胞中Bax介導的細胞凋亡。就本發明人的學識而言，SNAP25與任何神經變性病或症狀無關。實際上，根據OMIMReferenceNo.600322，SNAP25與任何疾病狀態無關，並且就本發明人所知，SNAP25並未用於醫療上。因此，本發明包括SNAP25多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸，供用於醫學中。本發明也包括向患者施用SNAP25多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗患者的神經變性病或病症。就SNAP25(突觸小體相關蛋白25kDa)而言，我們意指包括人SNAP25基因的基因產物，包括其天然存在的變體。人SNAP25基因的編碼不同蛋白同種型的兩種可選擇轉錄物變體已有描述。對應於人SNAP25mRNA的cDNA序列(變體l)見於GenBank登錄號NM一003081中。變體1含有8個外顯子並編碼同種型SNAP25A。對應於人SNAP25mRNA的cDNA序列(變體2)見於GenBank登錄號NM—130811中，並且與轉錄物變體1相比其含有伺隔外顯子5(altemateexon5)。這導致同種型SNAP25B與同種型SNAP25A的長度相同，並且含有相同的N和C末端，但內部具有9個胺基酸殘基的差異。人SNAP25A和SNAP25B多肽的胺基酸序列包括分別見於GenBank登錄號NP—003072和NP—570824中的序列，以及其天然存在的變體。本文所述的篩選試驗中鑑定的SNAP25序列來自同種型B。適宜的SNAP25"抗凋亡衍生物"包括SNAP25抗凋亡片段。就SNAP25"抗凋亡片段"而言，我們意指具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的SNAP25A或SNAP25B多肽的任何部分。通常，所述片段具有至少30%的由SEQIDNo:9的多核苷酸編碼的SNAP25多肽片段的抗凋亡活性。更優選，所述片段具有至少50%，優選至少70%且更優選至少90%的由SEQIDNo:9的多核苷酸編碼的SNAP25多肽的抗凋亡活性。最優選，所述片段具有至少100%或更多由SEQIDNo:9的多核苷酸編碼的SNAP25多肽片段的抗凋亡活性。適宜的SNAP25"抗凋亡衍生物"也包括具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的全長SNAP25A或SNAP25B的修飾物，或其片段的修飾物。優選，與全長SNAP25A，SNAP25B或其各自的片段相比，修飾的SNAP25A，SNAP25B或其修飾的片段保留了至少90%的序列同一性。更優選，修飾的SNAP25A，SNAP25B或其修飾的片段與全長SNAP25A，或SNAP25B,或其各自的片段具有至少91%、92%、93%、94%或95%的序列同一性，並且仍然更優選，至少96%、97%、98%或99的序列同一性。優選，修飾的SNAP25或其修飾的片段保留了至少30%的由多核苷酸SEQIDNo:9編碼的SNAP25多肽的抗凋亡活性。更優選，修飾的SNAP25或修飾的衍生物具有至少50%，優選至少70。/。且更優選至少90%的由多核苷酸SEQIDNo:9編碼的SNAP25多肽的抗凋亡活性。最優選，修飾的SNAP25或其修飾的片段具有100%或更多的由多核苷酸SEQIDNo:9編碼的SNAP25多肽的抗凋亡活性。就SNAP25而言，我們包括來自其他物種的SNAP25基因的同源基因產物。就"同源基因產物"而言，我們包括與GenBank登錄號NP—003072和NP—570824中的人SNAP25胺基酸序列具有至少90%的序列同一性的SNAP25多肽。更優選，同源基因產物包括與人SNAP25A或SNAP25B具有至少91%，或至少92%,或至少93%，或至少94%，或至少95%，或至少96%，或至少97%，或至少98。/。的序列同一性的SNAP25多肽。最優選，同源基因產物包括與人SNAP25A或SNAP25B胺基酸序列具有至少99%的序列同一性的SNAP25多肽。可以理解，對於將SNAP25施用於非人類受試者的應用而言，SNAP25優選來自與受試者相同的物種。如果將SNAP25施用於人類受試者，則SNAP25優選是人SNAP25同種型，或其抗凋亡片段或變體。就編碼SNAP25的多核苷酸而言，我們包括編碼人SNAP25多肽以及其天然存在的變體的cDNA。編碼人SNAP25的cDNA序列見於GenBank登錄號NM—003081和NM—130811中。我們也包括其他的序列，其根據遺傳密碼的簡併性，也編碼SNAP25多肽。編碼SNAP25抗凋亡片段的多核苷酸的實例列於SEQIDNO:9中，其是近全長的片段，丟失了編碼最初幾個胺基酸的核苷酸。RIMS3RIMS3描述於Wang等(2000)和Wang&Sudhof(2003)中。RIMS1是Rab3s的推斷性效應器蛋白，Rabs3為突觸GTP結合蛋白。RIM1靠近突觸的活性地帶(activezone)，在此，其以GTP依賴方式與位於突觸泡囊上的Rab3相互作用。R1M2與RIM1高度同源，且也主要在大腦中表達。與RIM1—樣，RIM2含有與Rab3結合作為GTP功能的N末端鋅指紋結構域、中心PDZ結構域和由長的可選擇剪接的序列分開的兩個C末端C(2)結構域。RIM2基因的3，末端產生編碼稱為NIM2的較小蛋白的獨立的mRNA。NIM2的組成是獨特的N末端序列，緊跟著RIM2的C末端部分。資料庫搜索鑑定出第三個RIM/NIM相關基因，其編碼稱為NIM3N(RIMS3)的NIM同種型。與RIMs—樣，NIMs調節胞吐作用。RIMs和NIMs中的保守和可變序列的組合說明，這些蛋白的單個結構域為胞吐過程中相互作用的分子提供結合位點。就本發明人的學識而言，RIMS3與細胞凋亡無關。因此，本發明提供了通過向細胞施用RIMS3多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗細胞中Bax介導的細胞凋亡。就本發明人的學識而言，RIMS3與任何神經變性病或病症無關。實際上，就本發明人所知，RIMS3與任何疾病狀態無關，並且之前也未用於醫療上。因此，本發明包括RIMS3多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸，供用於醫學中。因此，本發明也包括通過向患者施用RIMS3多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗所述患者的神經變性病或症狀。就"RIMS3多肽"(調節突觸膜的胞吐作用3;也稱為Rab-3相互作用分子3和Nim3)，我們意指包括人RIMS3基因的基因產物，包括其天然存在的變體。對應於人RIMS3mRNA的cDNA序列見於GenBank登錄號NM—014747中。人RIMS3多肽包括見於GenBank登錄號NP—055562中的胺基酸序列，以及其天然存在的變體。適宜的RIMS3"抗凋亡衍生物"包括RIMS3的抗凋亡片段。就RIMS3"抗凋亡片段"而言，我們意指具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的RIMS3多肽的任何部分。通常，所述片段具有至少30%的由SEQIDNO:10的多核苷酸編碼的RIMS3多肽片段的抗凋亡活性。更優選，所述片段具有43至少50%，優選至少70%以及更優選至少90%的由SEQIDNO:10的多核苷酸編碼的RIMS3多肽的抗凋亡活性。最優選，所述片段具有100%或更多的由SEQIDNO:10的多核苷酸編碼的RIMS3多肽的抗凋亡活性。適宜的RIMS3"抗凋亡衍生物"也包括具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的全長RIMS3的修飾物或其片段的修飾物。優選，與全長RIMS3或其各自修飾的片段相比，修飾的RIMS3或修飾的RIMS3片段保留了至少90%的序列同一性。更優選，修飾的RIMS3或其修飾的片段與全長RIMS3或各自修飾的片段具有至少91%、92%、93%、94%或95%的序列同一性，並且仍然更優選至少96%、97%、98%或99%的序列同一性。優選，修飾的RIMS3或其修飾的片段保留了至少30%的由多核苷酸SEQIDNO:10編碼的RIMS3多肽的抗凋亡活性。更優選，修飾的RIMS3或修飾的衍生物具有至少50%，優選至少70%以及更優選至少90%的由多核苷酸SEQIDNO:10編碼的RIMS3多肽的抗凋亡活性。最優選，修飾的RIMS3或其修飾的片段具有100%或更多的由多核苷酸SEQIDNO:10編碼的RIMS3多肽的抗凋亡活性。就RIMS3而言，我們也包括來自其他物種的RIMS3基因的同源基因產物。就"同源基因產物"而言，我們包括與GenBank登錄號NP一055562中的人RIMS3的胺基酸序列具有至少80%序列同一性的RIMS3多肽。更優選，同源基因產物包括與人RIMS3具有至少85%或至少90%序列同一性的RIMS3多肽。仍然更優選，同源棊因產物包括與人RIMS3具有至少91%，或至少92%,或至少93%，或至少94%，或至少95%，或至少96%，或至少97%，或至少98y。的序列同一性的RIMS3多肽。最優選，同源基因產物包括與人RIMS3胺基酸序列具有至少99%的序列同一性的RIMS3多肽。可以理解，對於將RIMS3施用於非人類受試者的應用，RIMS3優選來自與受試者相同的物種。如果將RIMS3施用於人類受試者，則RIMS3優選是人RIMS3或其抗凋亡片段或變體。就編碼RIMS3的多核苷酸而言，我們包括編碼人RIMS3多肽的cDNA以及其天然存在的變體。編碼人RIMS3的cDNA序列見於GenBank登錄號NM—014747中。我們也包括其他的序列，其根據遺傳密碼的簡併性，也編碼RIMS3多肽。從酵母篩選中分離的編碼RIMS3的多核苷酸(SEQIDNO:IO)是全長的。RAB40BRAB40B是RAS致癌基因家族的成員(也稱為RAR或SEC4L)。GTPases的Ras超家族的許多成員與造血細胞的調節有關，在生長、存活、分化、細胞因子的產生、趨化、泡囊運輸和吞噬作用中起作用。現在RAS蛋白超家族包括超過150種小GTPase(不同於大的異三聚體GTPase，G蛋白)。它包括6個亞家族Ras、Rho、Ran、Rab、Arf和Kir/Rem/Rad亞家族。它們表現出顯著而全面的胺基酸同一性，特別是與鳥嘌呤核苷酸交換因子相互作用的區域，該區域催化它們的激活。小GTP結合蛋白Rab家族的演化已由Pereira-Leal&Seabra(2001)進行了描述。調節內吞和胞吐泡囊運輸途徑的調節對維持少突細胞的結構和功能組織結構是必需的。泡囊運輸途徑受以下協同調控(1)供體室(donorcompartment)中載體泡囊的形成；(2)泡囊沿著細胞骨架的元件運動；以及(3)泡囊靶向受體室(acceptorcompartment)並和它融合。真核生物細胞中，調節這些事件的機制是保守的。Rab蛋白是調節泡囊形成、泡囊運動和泡囊靶向機制中的關鍵組分。Rab蛋白家族的每一個成員都調節具體的泡囊運輸途徑。就本發明人的學識而言，RAB40B與細胞凋亡無關。因此，本發明包括通過向細胞施用RAB40B多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗細胞中Bax介導的細胞凋亡。就本發明人的學識而言，RAB40B與任何神經變性病或症狀無關。實際上，就本發明人所知，RAB40B與任何疾病狀態無關並且之前未用於醫療上。因此，本發明包括RAB40B多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸，供用於醫學中。本發明也包括通過向患者施用RAB40B多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗所述患者中神經變性病或症狀。就"RAB40B多肽"而言，我們意指包括人RAB40B基因的基因產物，包括其天然存在的變體。對應於人RAB40mRNA的cDNA序列見於GenBank登錄號NM—006822。人RAB40B多肽包括見於GenBank登錄號NP一006813中的胺基酸序列，以及其天然存在的變體。適宜的RAB40B"抗凋亡衍生物"包括RAB40B的抗凋亡片段。就RAB40B"抗凋亡片段"而言，我們意指具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的RAB40B多肽的任何部分。通常，所述片段具有至少30%的由多核苷酸SEQIDN0:11編碼的RAB40B多肽片段的抗凋亡活性。優選，所述片段具有至少50%，優選至少70%且更優選至少90%的由多核苷酸SEQIDNO:ll編碼的RAB40B多肽的抗凋亡活性。最優選，所述片段具有100%或更多的由多核苷酸SEQIDNO:ll編碼的RAB40B多肽的抗凋亡活性。適宜的RAB40B"抗凋亡衍生物"也包括具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的全長RAB40B的修飾物或其片段的修飾物。優選，與全長RAB40B或其各自的片段相比，修飾的RAB40B或修飾的RAB40B片段保留了至少90%的序列同一性。更優選，修飾的RAB40B或其修飾的片段與全長RAB40B或各自的RAB40B片段具有至少91%、92%、93%、94%或95%的序列同一性，並仍然更優選至少96%、97%、98%或99%的序列同一性。優選，修飾的RAB40B或其修飾的片段保留了至少30%的由多核苷酸SEQIDNO:ll編碼的RAB40B多肽的抗凋亡活性。更優選，修飾的RAB40B或修飾的衍生物具有至少50%,優選至少70%並更優選至少90%的由多核苷酸SEQIDNO:l1編碼的RAB40B多肽的抗凋亡活性。最優選，修飾的RAB40B或其修飾的片段具有100%或更多的由多核苷酸SEQIDNO:ll編碼的RAB40B多肽的抗凋亡活性。就RAB40B而言，我們也包括來自其他物種的RAB40B基因的同源基因產物。就"同源基因產物"而言，我們包括與GenBank登錄號NP—006813中人RAB40B胺基酸序列具有至少90%序列同一性的RAB40B多肽。更優選，同源基因產物包括與人RAB40B具有至少91%，或至少92%，或至少93%，或至少94%，或至少95%，或至少96%，或至少97%，或至少98%的序列同一性的RAB40B多肽。最優選，同源基因產物包括與人RAB40B胺基酸序列具有至少99%的序列同一性的RAB40B多肽。可以理解，對於將RAB40B施用於非人類受試者的應用而言，RAB40B優選來自與所述受試者相同的物種。如果將RAB40B施用於人類受試者，則RAB40B優選是人RAB40B或其抗凋亡片段或變體。就編碼RAB40B的多核苷酸而言，我們包括編碼人RAB40B多肽以及其天然存在的變體的cDNA。編碼人RAB40B的cDNA序列見於GenBank登錄號NM—006822中。我們也包括其他的序列，其根據遺傳密碼的簡併性也編碼RAB40B多肽。編碼RAB40B的抗凋亡片段的多核苷酸的實例列於SEQIDNO:ll中。然而，在從Bax介導的細胞凋亡中營救酵母細胞方面，全長RAB40B比SEQIDNO:11的這種片段更有效。HMGCSlHMGCSl(3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A合成酶l)是細胞質酶，其使乙醯輔酶A和乙醯乙醯輔酶A縮合形成HMG-輔酶A還原酶的底物HMG-輔酶A。乙醯輔酶A+H20+乙醯乙醯輔酶A0(S)-3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A+輔酶A。HMG輔酶A合成酶在合成固醇如膽固醇和類異戊二烯之前也與從HMG輔酶A中產生甲羥戊酸的途徑有關。線粒體HMG輔酶A合成酶基因是過氧物酶體增殖激活受體(2eroxisomegroliferator-旦ctivatedeceptor,PPAR)的革巴標，並且這種受體通過脂肪酸調節這種基因的誘導。人細胞質3-羥基甲基戊二醯輔酶A合成酶己由Rokosz(1994)做了描述。就本發明人的學識而言，HMGCS1與細胞凋亡無關。因此，本發明包括通過向細胞施用HMGCS1多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗細胞中Bax介導的細胞凋亡。儘管HMG輔酶A還原酶和AD之間有關聯，但HMG輔酶A合成酶和AD之間沒有已知的關聯。就本發明人的學識而言，HMGCSl與任何神經變性病或症狀無關。就本發明人的學識而言，HMGCSl與任何神經變性病或症狀無關。實際上，根據OMIMReferenceNo142940，HMGCSl與任何疾病狀態無關，就本發明人所知，HMGCSl未用於醫療上。因此，本發明包括HMGCSl多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸，供用於醫學中。本發明也包括通過向患者施用HMGCSl多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗所述患者中神經變性病或症狀。就HMGCSl多肽而言，我們意指包括人HMGCSl基因的基因產物，包括其天然存在的變體。對應於人HMGCS1mRNA的cDNA序列見於GenBank登錄號NM—002130中。人HMGCSl多肽包括見於GenBank登錄號NP002121中的胺基酸序列，以及其天然存在的變體。適宜的HMGCSl"抗凋亡衍生物"包括HMGCSl的抗凋亡片段。就HMGCSl的"抗凋亡片段"而言，我們意指具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的HMGCSl多肽的任何部分。通常，所述片段具有至少30%的由SEQIDNO:2的多核苷酸編碼的HMGCSl多肽片段的抗凋亡活性。更優選，所述片段具有至少50%，優選至少70%且更優選至少90%的由多核苷酸SEQIDNO:12編碼的HMGCSl多肽的抗凋亡活性。最優選，所述片段具有100%或更多的由多核苷酸SEQIDNO:12編碼的HMGCSl多肽的抗凋亡活性。適宜的HMGCSl"抗凋亡衍生物"也包括具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的全長HMGCSl的修飾物或其片段的修飾。優選，與全長人HMGCS1(如NP一002121中所界定的)或其各自的片段相比，修飾的HMGCSl或修飾的HMGCSl片段保留了至少90%的序列同一性。更優選，修飾的HMGCSl或其修飾的片段與全長HMGCSl或各自的HMGCS1片段具有至少91%、92%、93%、94%或95的序列同一性，並且仍然更優選至少96%、97%、98%或99%的序列同一性。優選，修飾的HMGCSl或其修飾的片段保留了至少30%的由多核苷酸SEQIDNO:12編碼的HMGCSl多肽的抗凋亡活性。更優選，修飾的iHMGCSl或修飾的衍生物具有至少50%,至少70%且更優選至少90%的由多核苷酸SEQIDNO:12編碼的HMGCSl多肽的抗凋亡活性。最優選，修飾的HMGCSl或其修飾的片段具有100%或更多的由多核苷酸SEQIDNO:12編碼的HMGCSl多肽的抗凋亡活性。就HMGCS1而言，我們也包括來自其他物種的HMGCSl基因的同源基因產物。就"同源基因產物"而言，我們包括與GenBank登錄號NP—002121中人HMGCSl胺基酸序列具有至少80%序列同一性的HMGCSl多肽。更優選，同源基因產物包括與人HMGCSl具有至少85%或至少90%序列同一性的HMGCSl多肽。仍然更優選，同源基因產物包括與人HMGCSl具有至少91%,或至少92%，或至少93%，或至少94%，或至少95%，或至少96%，或至少97%，或至少98%的序列同一性的HMGCSl多肽。最優選，同源基因產物包括與人HMGCSl胺基酸序列具有至少99%的序列同一性的HMGCSl多肽。可以理解，對於將HMGCSl施用於非人類受試者的應用，HMGCSl優選是來自與所述受試者相同的物種。如果將HMGCSl施用於人類受試者，則HMGCSl優選是人HMGCSl或其抗凋亡片段或變體。就編碼HMGCS1的多核苷酸而言，我們包括編碼人HMGCS1多肽以及其天然存在的變體的cDNA。編碼人HMGCS1的cDNA序列見於GenBank登錄號NM一002130中。我們也包括其他的序列，其根據遺傳密碼的簡併性也編碼HMGCS1多肽。編碼HMGCS1的抗凋亡片段的多核苷酸的實例列於SEQIDNO:12中，其是HMGCS1的部分3'序列。SCD5SCD5(硬脂醯輔酶A去飽和酶5;以前稱為醯基輔酶A去飽和酶4同種型a;ACOD4)，與其他的硬脂醯輔酶A去飽和酶(SCD;EC1.14.99.5)—樣，催化從飽和脂肪酸生物合成單不飽和脂肪酸中的關鍵步驟。這個反應包括在亞甲基間隔的脂肪醯基輔酶A的色譜中在的碳9和10之間引入順式雙鍵。就本發明人的學識而言，SCD5與細胞凋亡無關。因此，本發明包括通過向細胞施用SCD5多肽，或其凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗細胞中Bax介導的細胞凋亡。就本發明人的學識而言，SCD5與任何神經變性病或症狀無關。實際上，根據OMIMReferenceNo608370，SCD5與任何疾病狀態無關，就本發明人所知，SCD5並未用於治療上。因此，本發明包括SCD5多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸，供用於醫學中。本發明也包括通過向患者施用SCD5多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗患者中神經變性病或症狀。就"SCD5多肽"而言，我們也意指包括人SCD5基因的基因產物，包括其天然存在的變體。對應於人SCD5mRNA的cDNA序列見於GenBank登錄號BC048971.1中。人SCD5多肽包括見於GenBank登錄號AAH48971中的胺基酸序列以及其天然存在的變體。適宜的SCD5"抗凋亡衍生物"包括SCD5的抗凋亡片段。就SCD5"抗凋亡片段"而言，我們意指具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的SCD5多肽的任何部分。通常，所述片段具有至少30%的由SEQIDNO:13的多核苷酸編碼的SCD5多肽片段的抗凋亡活性。優選，所述片段具有至少50%，優選至少70%以及更優選至少卯％的由多核苷酸SEQIDNO:13編碼的SCD5多肽的抗凋亡活性。最優選，所述片段具有100%或更多的由多核苷酸SEQIDNO:13編碼的SCD5多肽的抗凋亡活性。適宜的SCD5"抗凋亡衍生物"包括具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的全長SCD5的修飾物，或其片段的修飾物。優選，與全長人SCD5(如AAH48971中所界定的)或其各種片段相比，修飾的SCD5或修飾的SCD5片段保留了至少90。/。的序列同一性。更優選，修飾的SCD5或其修飾的片段與全長SCD5或各自的SCD5片段具有至少91%、92%、93%、94%或95%的序列同一性，以及仍然更優選至少96%、97%、98%或99%的序列同一性。優選，修飾的SCD5或其修飾的片段保留了至少30%的由多核苷酸SEQIDNO:13編碼的SCD5多肽的抗凋亡活性。更優選，修飾的SCD5或修飾的衍生物具有至少50%，優選至少70。/。且更優選至少90G/。的由多核苷酸SEQIDNO:13編碼的SCD5多肽的抗凋亡活性。最優選，修飾的SCD5或其修飾的片段具有100%或更多的由多核苷酸SEQIDNO:13編碼的SCD5多肽的抗凋亡活性。就SCD5而言，我們也包括來自其他物種的SCD5基因的同源基因產物。就"同源基因產物"而言，我們包括與GenBank登錄號AAH48971中的人SCD5胺基酸序列具有至少8(P/。的序列同一性的SCD5多肽。更優選，同源基因產物包括與人SCD5具有至少85%或至少90%序列同一性的SCD5多肽。仍然更優選，同源基因產物包括與人SCD5具有至少91%，或至少92%，或至少93%，或至少94%，或至少95%，或至少96%，或至少97%，或至少98%序列同一性的SCD5多肽。最優選，同源基因產物包括與人SCD5胺基酸序列具有至少99%的序列同一性的SCD5多肽。可以理解，對於將SCD5施用於非人類受試者的應用，SCD5優選來自與所述受試者相同的物種。如果將SCD5施用於人類受試者，則SCD5優選是人SCD5或其抗凋亡片段或變體。就編碼SCD5的多核苷酸而言，我們包括編碼人SCD5多肽以及其天然存在的變體的cDNA。編碼人SCD5的cDNA序列見於GenBank登錄號BC048971.1中。我們也包括其他的序列，其根據遺傳密碼的簡併性也編碼SCD5多肽。編碼SCD5抗凋亡片段的多核苷酸的實例列於SEQIDNO:13牛i。ATP2A250ATP2A2(也稱為ATP2B和SERCA2)編碼一種SERCACa2+ATP酶(EC3.6.3.8)，該酶是位於肌肉細胞的肌質網或內質網中的細胞內泵。這種酶催化與鈣從胞質溶膠向肌質網腔運輸偶聯的ATP的水解，並參與收縮/舒張周期的調節。根據Shull等(2003)，細胞質膜CaS運輸ATP酶(PMCAs)將Ca"+從細胞中排出，且肌質(內質)網Ca2+ATP酶(SERCAs)以及分泌途徑Ca2+ATP酶(SPCAs)在胞內器官中螯合Ca2+。然而，單個同種型的具體生理功能依然了解的很少。對這些基因中攜帶無效突變的小鼠和人的研究，使得這些信息得以公開。在細胞質膜Ca2+ATP酶同種型2(PMCA2)中具有靶向或自發突變的小鼠完全耳聾，並且由於在內耳的感覺毛細胞中缺少PMCA2而具有平衡缺陷。在人類中，SERCA1中的突變(ATP2Al)引起Brody病(Brodydisease),其是骨骼肌舒張損害；缺失一拷貝的SERCA2(ATP2A2)基因會引起達裡耶病(Darierdisease),—種皮膚病；並且缺失一拷貝的SPCA1(ATP2C1)基因會弓I起Hailey-Haiiey病(Hailey-Haileydisease)，為另一種皮膚病。在小鼠中，SERCA2無效突變體出生後就死亡，雜合子SERCA2突變體的心臟機能消弱並且鱗狀上皮細胞癌的發病率很高。SERCA3無效突變體可以存活且看起來是健康的，但主動脈平滑肌的上皮依賴性舒張受到破壞，並且胰腺(3細胞中Ca"信號受到改變。表型的多樣性顯示，各種C,運輸ATP酶同種型會提供非常不同的生理功能。達裡耶病是罕見的常染色體顯性遺傳模式的皮膚病。油膩性丘疹(greasypapules)和斑塊出現在脂漏性部位(seborrheicarea)以及彎曲部位(flexures)中，並且幾乎所有的患者都有指甲異常。它的特徵是表皮細胞和異常角化(abnormalkeratinisation)之間附著的丟失，並且棘層分解現象(acantholysis)和角化不良(dyskeratosis)是典型的組織學發現。根本的缺陷是染色體12q23-24上ATP2A2基因突變的結果，所述基因編碼肌質/內質網鈣ATP酶(SERCA2)。棘層分解現象被認為是由橋粒斷裂(desmosomebreakdown)引起。達裡耶病(也稱為Darier-White病(Darier-Whitedisease)禾卩毛囊角化症(keratosisfollicularis))是由單倍體不足(haplo-insufficiency)引起的顯性遺傳病。口服類維生素是最有效的治療法，但它們的副作用很麻煩。局部類維生素、局部皮質甾類、外科手術和雷射手術都有擁護者，但有效的證據很少(Cooper&Burge,2003)。達裡耶病有時伴隨情緒病(mooddisorder),如躁鬱症(bipolardisorder)(Kato,2001)。ATP2A2在達裡耶病中的作用由Foggia&Hovnanian(2004)做了綜述。根據Dhitavat等(2004)，在達裡耶病中，橋粒附著的丟失會觸發失巢凋亡(anoikis)，這是一種以角質細胞中細胞分離為特徵的細胞凋亡。這種細胞凋亡被認為是繼發於(^2+運輸活性改變。為了支持它們的假說，Dhitavat等(2004)引用了Jackisch等(2000)的用毒胡蘿蔔素(thapsigargin)抑制SERCA泵會在多種表皮細胞中觸發細胞凋亡這一發現。Prasad等(2005)描述了ATP2A2單倍體不足使小鼠易於發生鱗狀上皮細胞腫瘤。然而，與Dhitavat辨2004)的發現完全相反，Prasad等P00》引用Qu等(2004)，指出"由SERCA2抑制劑毒胡蘿蔔素誘導的ER應激表現出能防止p53介導的細胞凋亡"。因此，就本發明人的學識而言，ATP2A2與Bax介導的細胞凋亡並不直接相關。因此，本發明包括向細胞施用ATP2A2多肽，或其凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗細胞中Bax介導的細胞凋亡。儘管達裡耶病和躁鬱症共病，但就本發明人的學識而言，ATP2A2並不與任何神經變性病或症狀直接相關。實際上，在本發明中，並不認為雙極障礙是神經變性病或症狀。因此，本發明也包括通過向患者施用ATP2A2多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗所述患者中神經變性病或症狀。就"ATP2A2多肽"而言，我們意指包括人ATP2A2基因的基因產物，包括其天然存在的變體。人ATP2A2基因的編碼不同蛋白同種型的兩種可選擇轉錄物變體已有描述。對應於人ATP2A2mRNA(變體l)的cDNA序列見於GenBank登錄號NMJ70665中。對應於人ATP2A2mRNA(變體2)的cDNA序列見於GenBank登錄號NM—001681中。轉錄物變體1(NM—170665)編碼ATP2A2蛋白的較長同種型。轉錄物變體2(NM—001681)利用編碼區3'末端的可選擇剪接位點，而獲得比變體1更靠前的終止密碼子。同種型2與同種型1相比具有更短的不同C末端。人ATP2A2變體1和ATP2A2變體2多肽的胺基酸序列包括分別見於GenBank登錄號NP—733765和NP_001672中的適宜的ATP2A2"抗凋亡衍生物"包括ATP2A2的抗凋亡片段。就ATP2A2"抗凋亡片段"而言，我們意指具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的ATP2A2多肽(同種型1或同種型2)的任何部分。通常，所述片段具有至少30%的由SEQIDNO:14的多核苷酸編碼的ATP2A2多肽片段的抗凋亡活性。更優選，所述片段具有至少50%，優選至少70%且更優選至少90%的多核苷酸SEQIDNO:14編碼的ATP2A2多肽的抗凋亡活性。最優選，所述片段具有100%或更多的由多核苷酸SEQIDNO:14編碼的ATP2A2多肽的抗凋亡活性。適宜的ATP2A2"抗凋亡衍生物"也包括具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的全長ATP2A2(無論是同種型1還是同種型2)的修飾物，或其片段的修飾物。優選，與全長人ATP2A2(如NP一733765或NPJ)01672中界定的)或其各自的片段相比，修飾的ATP2A2，或修飾的ATP2A2片段保留了至少90%的序列同一性。更優選，修飾的ATP2A2或其修飾的片段與全長ATP2A2或各自的ATP2A2片段具有至少91%、92%、93%、94%或95%的序列同一性，並且仍然更優選至少96%、97%、98%或99%的序列同一性。優選，修飾的ATP2A2或其修飾的片段保留了至少30%的由多核苷酸SEQIDNO:14編碼的ATP2A2多肽的抗凋亡活性。更優選，修飾的ATP2A2或修飾的衍生物具有至少50%，優選至少70%以及更優選至少90%的由多核苷酸SEQIDNO:14編碼的ATP2A2多肽的抗凋亡活性。最優選，修飾的ATP2A2或其修飾的片段具有100%或更多的由多核苷酸SEQIDNO:14編碼的ATP2A2多肽的抗凋亡活性。就ATP2A2而言，我們也包括來自其他物種的ATP2A2基因的同源基因產物。就"同源基因產物"而言，我們包括與GenBank登錄號NP—733765或NP—001672中的人ATP2A2胺基酸序列具有至少90%序列同一性的ATP2A2多肽。更優選，同源基因產物包括與人ATP2A2具有至少91%，或至少92%，或至少93%，或至少94%，或至少95%,或至少96%,或至少97%，或至少98%序列同-一性的ATP2A2多肽。最優選，同源基因產物包括與人ATP2A2胺基酸序列具有至少99%序列同一性的ATP2A2多肽。可以理解，對於將ATP2A2施用於非人類受試者的應用，ATP2A2優選是來自與所述受試者相同的物種。如果將ATP2A2施用於人類受試者，則ATP2A2優選是人ATP2A2或其抗凋亡片段或變體。就編碼ATP2A2的多核苷酸而言，我們包括編碼人ATP2A2多肽和其天然存在的變體的cDNA。編碼人ATP2A2的cDNA序列見於GenBank登錄號NM—170665和NM—001681中。我們也包括其他的序列，其根據遺傳密碼的簡併性也編碼ATP2A2多肽。編碼ATP2A2的抗凋亡片段的多核苷酸的實例列於SEQIDNO:14中。HRMT1L1HRMT1L1(異質核核糖核蛋白甲基轉移酶樣蛋白1;也稱為hmtllikel;蛋白精氨酸n-甲基轉移酶2;prmt2)是精氨酸甲基轉移酶，其作用於RNA結合蛋白如異質核核糖核蛋白。就本發明人的學識而言，HRMT1L1與細胞凋亡無關。因此，本發明包括通過向細胞施用HRMT1L1多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗細胞中Bax介導的細胞凋亡。就本發明人的學識而言，HRMT1L1與任何神經變性病或症狀無關。實際上，根據OMIMReferenceNo601961，HRMT1L1與任何疾病狀態無關，就本發明人所知，其並未用於醫療上。因此，本發明包括HRMT1L1多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸，供用於醫學中。本發明也包括通過向患者施用HRMT1L1多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗患者中的神經變性病或症狀。就"HRMT1L1多肽"而言，我們意指包括人HRMT1L1基因的基因產物，包括其天然存在的變體。人HRMT1L1基因的編碼相詞的蛋白同種型的兩種可選擇轉錄物變體已有描述。對應於人HRMT1L1mRNA(變體l)的cDNA序列，其為較長的轉錄物，見於GenBank登錄號NM—206962中。對應於人HRMTlLlmRNA(變體2)的cDNA序列見於GenBank登錄號NM一001535中。變體2與變體1的5'URT不同。人HRMT1L1多肽的胺基酸序列包括見於GenBank登錄號NP—996845和NP—001526的序列，以及其天然存在的變體。適宜的HRMT1L1"抗凋亡衍生物"包括HRMT1L1的抗凋亡片段。就HRMT1L1"抗凋亡片段"而言，我們意指具有抑制細胞中Bax介導的細胞54凋亡能力的HRMTILI多肽的任何部分。通常，所述片段具有至少30%的由SEQIDNO:15的多核苷酸編碼的HRMTILI多肽的抗凋亡活性。更優選，所述片段具有至少50%,優選至少70%以及更優選至少90%的由SEQIDNO:15的多核苷酸編碼的HRMTILI多肽的抗凋亡活性。最優選，所述片段具有100。/。或更多的由SEQIDNO:15的多核苷酸編碼的HRMTILI多肽的抗凋亡活性。適宜的HRMTILI"抗凋亡衍生物"也包括具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的全長HRMTILI的修飾物或其片段的修飾物。優選，與全長人HRMT1L1(如NP—996845中所界定的)或其各自的片段相比，修飾的HRMTILI或修飾的HRMTILI片段保留了至少90%的序列同一性。更優選，修飾的HRMTILI或其修飾的片段與全長HRMTILI或其各自的片段具有至少91%、92%、93%、94%或95%的序列同一性，並且仍然更優選至少96%、97%、98%或99%的序列同一性。優選，修飾的HRMTILI或其修飾的片段保留了至少30。/。的由SEQIDNO:15的多核苷酸編碼的HRMTILI多肽的抗凋亡活性。更優選，修飾的HRMTILI或修飾的衍生物具有至少50%，優選至少70%以及更優選至少90%的由多核苷酸SEQIDNO:15編碼的HRMTILI多肽的抗凋亡活性。最優選，修飾的HRMTILI或其修飾的片段具有100%或更多的由多核苷酸SEQIDNO:15編碼的HRMTILI多肽的抗凋亡活性。就HRMTILI而言，我們也包括來自其他物種的HRMTILI基因的同源基因產物。就"同源基因產物"而言，我們包括與GenBank登錄號NP—996845中的人HRMT1L胺基酸序列具有至少80%序列同一性的HRMT1L多肽。更優選，同源基因產物包括與人HRMTILI具有至少85%或至少90%序列同一性的HRMTILI多肽。仍然更優選，同源基因產物包括與人HRMTILI具有至少91%,或至少92%，或至少93%,或至少94%，或至少95%，或至少96%,或至少97%，或至少98%的序列同一性的HRMTILI多肽。最優選，同源基因產物包括與人HRMT1L1胺基酸序列具有至少99%的序列同一性的HRMTILI多肽。可以理解，對於將HRMTILI施用於非人類受試者的應用，所述HRMT1L]優選來自與所述受試者相同的物種。如果將HRMT1L1施用於人類受試者，則HRMTILI優選是人HRMTILI或其抗凋亡片段或其變體。就編碼HRMT1L1的多核苷酸而言，我們包括編碼人HRMT1L1多肽和其天然存在的變體的cDNA。編碼人HRMT1L1的cDNA序列見於GenBank登錄號NM一206962和NM—001535中。我們也包括其他的序列，其根據遺傳密碼的簡併性也編碼HRMT1L1多肽。編碼HRMT1L1的抗凋亡片段的多核苷酸的實例列於SEQIDNO:15中，其是近乎全長的HRMT1L1多核苷酸。之前功能未知的來自人染色體3p的序列如SEQIDNO:16(參閱圖63)所界定的來自人染色體3p的多核苷酸存在於克隆RP11-605M1圖譜3p(cloneRP11-605M1map3p)(GenBank登錄號AC087091)和克隆智人(/Zo附o^f/ms)3BACRP11-114K9(GenBank登錄號AC011609)上。克隆RP11-605M1全序列的長度是153013個核苷酸，SEQIDNO:16從核苷酸91339-91958。克隆RP11-114K9的全序列長度是184680個核苷酸，且SEQIDNO:16從核苷酸79443-80063。兩個可讀框存在於SEQIDNO:16中(如圖63中箭頭所示)。ORF-2見於SEQIDNO:16的98-217bp位置處，ORF-3見於SEQIDNO:16的260-361bp位置處，且這些ORFs可能編碼下列兩種短的多肽(分別為SEQIDNos:20和21):蛋白-ORF-2:ML脂LGLVAFVLEKLFLEDESAVHVILQVMWHLFFKLKM蛋白-ORF-3:MCQEFKNVSYWCVCALFQESTFSVFQLTAPFPS就本發明人的學識而言，不但如SEQIDNO:16中所界定的來自人染色體3p的多核苷酸與細胞凋亡無關，由SEQIDNO.16的多核苷酸編碼的多肽、含有SEQIDNO:16的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽也與細胞凋亡無關。因此，本發明包括通過向細胞施用SEQIDNO:16的多核苷酸編碼的多肽，或含有SEQIDNO:16的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽，或其抗凋亡衍生物或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗所述細胞中Bax介導的細胞凋亡。就本發明人的學識而言，以前不但如SEQIDNO:16中所界定的來自人染色體3p的多核苷酸與任何神經變性病或症狀無關，而且由SEQIDNO:16的多核苷酸編碼的多肽、含有SEQIDNO:16的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽也與任何神經變性病或症狀無關。實際上，就本發明人所知，此類多肽與任何疾病狀態無關且以前並未用於醫療上。因此本發明包括SEQIDNO:16的多核苷酸編碼的多肽，或含有SEQIDNO:16的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸，供用於醫學中。本發明包括通過向細胞施用SEQIDNO:16的多核苷酸編碼的多肽，或含有SEQIDNO:16的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸，來抵抗患者中的神經變性病或症狀。適宜的"抗凋亡衍生物"包括SEQIDNO:16的多核苷酸編碼的多肽的抗凋亡片段，或含有SEQIDNO:16的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽的抗凋亡片段，或含有SEQIDNO:16的天然存在的多核苷酸轉錄物編碼的多肽的抗凋亡片段。就"抗凋亡片段"而言，我們意指具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的所述多肽的任何部分。通常，所述片段具有至少30%的SEQIDNO:16的多核苷酸編碼的多肽片段的抗凋亡活性。更優選，所述片段具有至少50%,優選至少70%以及更優選至少90%的SEQIDNO:16的多核苷酸編碼的所述多肽片段的抗凋亡活性。最優選，所述片段具有100%或更多的SEQIDNO:16的多核苷酸編碼的所述多肽片段的抗凋亡活性。適宜的"抗凋亡衍生物"也包括SEQIDNO.16的多核苷酸編碼的多肽的修飾物，或含有SEQIDNO:16的多核苷酸編碼的多肽的全長天然存在的多肽的修飾物，或含有SEQIDNO:16的天然存在的多核苷酸轉錄物編碼的多肽的修飾物，或上述多肽片段的修飾物，所述修飾物具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡的能力。優選，與SEQIDNO:16的多核苷酸編碼的多肽或其各自的片段相比，修飾的衍生物的對應部分保留了至少90%的序列同一性。更優選，修飾的衍生物的對應部分或其修飾的片段與SEQIDNO:16的多核苷酸編碼的多肽或其各自的片段具有至少91%、92%93%94%或95%的序列同一性，且仍然更優選具有至少96%、97%、98%或99%的序列同一性。優選，修飾的多肽或其修飾的片段保留了至少30%的SEQIDNO:16的多核苷酸編碼的多肽的抗凋亡活性。更優選，修飾的多肽或修飾的片段具有至少50%，優選至少70%且更優選至少90%的SEQIDNO:16的多核苷酸編碼的多肽的抗凋亡活性。最優選，修飾的多肽或其修飾的片段具有100%或更多的SEQ1DNO:16的多核苷酸編碼的多肽的抗凋亡活性。可以理解，對於將這種基因/多肽施用於受試者的應用，優選其來自與所述受試者相同的物種，特別是如果受試者是人類受試者。以前功能未知的來自人染色體22Q11.22-12.2的序列如SEQIDNO:17(參閱圖64)中所界定的來自人染色體22ql1.22-12.2的多核苷酸存在於克隆CTA-373H7(GenBank登錄號Z99774)上。克隆CTA-373H7的完整序列長度是73239個核苷酸，且SEQIDNO:17是從核苷酸41798-42499。4個可讀框位於SEQIDNO:17內(如圖64中箭頭所示)，其中的兩個編碼45個殘基的的多肽，其他的兩個編碼30個胺基酸殘基的多肽。這4個ORF位於SEQIDNO:17中的下列位置ORF-8:149-241;ORP-4:153-290;ORF-9:431-523;以及ORF-5:565-702。SEQIDNO:17與智人cDNAFLJ45323fis(克隆BRHIP3006390)(GenBank登錄號AK127256)在5292個核苷酸的4445-5146處具有很強的同源性。就本發明人的學識而言，之前，不但如SEQIDNO:17中所界定的來自人染色體22ql1.22-12.2的多核苷酸與細胞凋亡無關，SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽、或含有SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽也與細胞凋亡無關。因此，本發明包括通過向細胞施用SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽，或含有SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽，或其抗凋亡衍生物或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗細胞中Bax介導的細胞凋亡。同時，就本發明人的學識而言，之前不但如SEQIDNO:17中所界定的來自人染色體22ql1.22-12.2的多核苷酸與任何神經變性病或病症無關，SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽、或含有SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽也與任何神經變性病或病症無關。實際上，就本發明人所知，此類多肽與任何疾病狀態無關，並且並未用於治療上。因此，本發明包括SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽，或含有SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸，供用於醫學上。本發明包括通過向細胞施用SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽，或含有SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗患者中神經變性病或症適宜的"抗凋亡衍生物"包括SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽的抗凋亡片段，或含有SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽的抗凋亡片段，或含有SEQIDNO:17的天然存在的多核苷酸轉錄物編碼的多肽的抗凋亡片段。就"抗凋亡片段"而言，我們意指具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的多肽的任何部分。通常，所述片段具有至少30%的SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽片段的抗凋亡活性。更優選，所述片段具有至少50%，優選至少70%且更優選至少90%的SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽片段的抗凋亡活性。最優選，所述片段具有100%或更多的SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽片段的抗凋亡活性。適宜的"抗凋亡衍生物"也包括SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽的修飾物，或含有SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽的全長天然存在的多肽的修飾物，或含有SEQIDNO:17的天然存在的多核苷酸轉錄物編碼的多肽的修飾物，或上述多肽片段的修飾物，所述修飾物具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡的能力。優選，與SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽或其各自的片段相比，修飾的衍生物的對應部分保留了至少90%的序列同一性。更優選，修飾的衍生物的對應部分或其修飾的片段與SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽或其各自的片段具有至少91%、92%、93%、94%或95%的序列同一性，且仍然更優選具有至少96%、97%、98%或99%的序列同一性。優選，修飾的多肽或其修飾的片段保留了至少30%的SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽的抗凋亡活性。更優選，修飾的多肽或修飾的片段具有至少50%，優選至少70%且更優選至少90%的SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽的抗凋亡活性。最優選，修飾的多肽或其修飾的片段具有100%或更多的SEQIDNO:17的多核苷酸編碼的多肽抗凋亡活性。可以理解，對於將這種基因/多肽施用於受試者的應用，其優選來自與所述受試者相同的物種，特別是如果受試者是人類受試者。以前功能未知的來自人線粒體分離物WH6967的基因組的序列智人線粒體分離物WH6967(GenBank登錄號AY255145)具有16588個核59苷酸的完整基因組長度。SEQIDNO:18(參閱圖65)中所界定的多核苷酸是從核苷酸8492-9143。兩個可讀框位於SEQIDNO:18中的下列位置(如圖65中的箭頭所示)ORF-3:25-168和ORF-5:535-651。就本發明人的學識而言，之前不但如SEQIDNO:18所界定的來自人線粒體分離物WH6967基因組的多核苷酸與細胞凋亡無關，且SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽、或含有SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽也與細胞凋亡無關。因此，本發明包括通過向細胞施用SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽，或含有SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗Bax介導的細胞凋亡。儘管已知某些線粒體蛋白與疾病狀態有關，但就本發明人的學識而言，之前不但如SEQIDNO:18所界定的來自人線粒體分離物WH6967基因組的多核苷酸與任何神經變性病或症狀無關，且SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽、或含有SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽也與任何神經變性病或症狀無關。實際上，就本發明人所知，此類多肽與任何疾病狀態無關，且並未用於醫療上。因此本發明包括SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽，含有SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸，供用於醫學上。因此，本發明包括通過向細胞施用SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽，或含有SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸來抵抗患者中的神經變性病或症狀。適宜的"抗凋亡衍生物"包括SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽的抗凋亡衍生物，或含有SEQIDNO:8的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽的抗凋亡片段，或含有SEQIDNO:18的天然存在的多核苷酸轉錄物編碼的多肽的抗凋亡片段。就"抗凋亡片段"而言，我們意指具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡能力的多肽的任何部分。通常，所述片段具有至少30%的SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽片段的抗凋亡活性。更優選，所述片段具有至少50%，優選至少70%且更優選至少90%的SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽片段抗凋亡活性。最優選，所述片段具有100%或更多的SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽片段的抗凋亡活性。適宜的"抗凋亡衍生物"也包括SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽的修飾物，或含有SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽的全長天然存在的多肽的修飾物，或含有SEQIDNO:18的天然存在的多核苷酸轉錄物編碼的多肽的修飾物，或所述多肽的片段的修飾物，所述修飾物具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡的能力。優選，與SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽或其各自的片段相比，修飾的衍生物對應的部分保留了至少90%的序列周一性。更優選，修飾的衍生物的對應部分或其修飾的片段與SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽或其各自的片段具有至少91%、92%、93%、94%或95%的序列同一性，且仍然更優選至少96%、97%、98%或99%的序列同一性。優選，修飾的多肽或其修飾的片段保留了至少30%的SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽的抗凋亡活性。更優選，修飾的多肽或修飾的片段具有至少50%，優選至少70%且更優選至少90%的SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽的抗凋亡活性。最優選，修飾的多肽或其修飾的片段具有100%或更多的SEQIDNO:18的多核苷酸編碼的多肽的抗凋亡活性。可以理解，對於將這種基因/多肽施用於受試者的應用，其優選是來自與所述受試者相同的物種，特別是如果受試者是人類受試者。以前功能未知的來自人線粒體分離物S1216的基因組的序列智人線粒體分離物S1216(GenBank登錄號AY289093)具有16569個核苷酸的完整基因組長度。如SEQIDNo:19(參閱圖66)所界定的多核苷酸是從核苷酸7717-8283。兩個可讀框位於SEQIDNo:19中的下列位置(圖66中箭頭所示)ORF-2:178-279和ORF-l:355-462。就本發明人的學識而言，之前，不但如SEQIDNo:19中所界定的來自人線粒體分離物S1216的基因組的多核苷酸與細胞凋亡無關，且SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽、或含有SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽也與細胞凋亡無關。因此，本發明包括通過向細胞施用SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽，或含有SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸，來抵抗細胞中Bax介導的細胞凋亡。儘管，已知線粒體基因組在一些疾病狀態中會受到影響，但就本發明人的學識而言，之前不但如SEQIDNo:19中所界定的來自人線粒體分離物S1216的基因組的多核苷酸與任何神經變性病或症狀無關，且SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽、或含有SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽也與任何神經變性病或症狀無關。實際上，就本發明所知，此類多肽與任何疾病狀態無關，且以前並未用於醫療上。因此，本發明包括SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽，或含有SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸，供用於醫學上。本發明包括通過向細胞施用SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽，或含有SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽，或其抗凋亡衍生物，或編碼所述多肽或衍生物的多核苷酸，來抵抗患者中的神經變性病或症狀。就本發明人的學識而言，之前不但如SEQIDNo:19中所界定的來自人線粒體分離物S1216的基因組的多核苷酸與細胞凋亡或任何神經變性病無關，且SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽、或含有SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽也與細胞凋亡或任何神經變性病無關。適宜的"抗凋亡衍生物"包括SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的抗凋亡片段，或含有SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的天然存在的多肽的抗凋亡片段，或含有SEQIDNo:19的多核苷酸的天然存在的多核苷酸轉錄物編碼的多肽的抗凋亡片段。就"抗凋亡片段"而言，我們意指具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡的多肽的任何部分。通常，所述片段具有至少30。/。的SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽片段的抗凋亡活性。更優選，所述片段具有至少50%，優選至少70%且更優選至少90%的SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽片段的抗凋亡活性。最優選，所述片段具有100%或更多的SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽片段的抗凋亡活性。適宜的"抗凋亡衍生物"也包括SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的修飾物，或含有SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的全長天然存在的多肽的修飾物，或含有SEQIDNo:19的天然存在的多核苷酸轉錄物編碼的多肽的修飾物，或所述多肽片段的修飾物，所述修飾物具有抑制細胞中Bax介導的細胞凋亡的能力。優選，與SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽或其各自的片段相比，修飾的衍生物的對應部分保留了至少90%的序列同一性。更優選，修飾的衍生物的對應部分或其修飾的片段與SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽或其各自的片段具有至少91%、92%、93%、94%或95%的序列同一性，且仍然更優選至少96%、97%、98%或99%的序列同一性。優選，修飾的多肽或其修飾的片段保留了至少30。/o的SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的抗凋亡活性。更優選，修飾的多肽或修飾的片段具有至少50%，優選至少70%且更優選至少90%的SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的抗凋亡活性。最優選，修飾的多肽或其修飾的片段具有100%或更多的SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的抗凋亡活性。可以理解，對於將這種基因/多肽施用於受試者的應用，其優選來自與所述受試者相同的物種，特別是如果受試者是人類受試者。可以理解，可用於本發明的第五至第十方面的上述多肽的進一步修飾物可包括含有上文所述的多肽或其片段或編碼所述多肽的多核苷酸或其片段的化合物以及另一個試劑。優選，所述化合物保留了至少30%的上文所述的各自人多肽的抗凋亡活性。更優選，所述化合物具有至少50%，優選至少70%且更優選至少90%，或100%或更多的如上文所述的各自人多肽的抗凋亡活性。所述試劑可用於與所述多肽或多核苷酸融合、組合、結合、連接或其他形式的結合，如本領域中所所熟知的。可用的試劑包括可將多肽或多核苷酸靶向於靶組織如海馬的靶向部分(targetingmoieties)。適宜的靶向部分包括蛋白轉導結構域如HIV-Tat、觸角足(antennapedia)、PTD-5和賴氨酸同聚體。第十一方面，本發明提供了提高細胞中Bax介導的細胞凋亡的方法，所述方法包括使細胞與多肽的抑制劑或拮抗劑接觸，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RJMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽。通常，體外進行所述方法。通常，所述細胞是哺乳動物細胞，如人細胞，儘管其根據實施例是清楚的，但所述細胞可來自其他的物種如酵母。所述細胞可來自構建的細胞系、原發細胞培養物，或離體組織中存在的細胞。可選地，可體內進行所述方法。第十二方面，本發明提供了多肽的抑制劑或拮抗劑在製備用於提高患者細胞中Bax介導的細胞凋亡的藥物中的用途，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB權、畫GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽。第十三方面，本發明提供了多肽的抑制劑或拮抗劑，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、畫GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽；或編碼任何所述抑制劑或拮抗劑的多核苷酸，供用於醫學中。第十四方面，本發明提供了藥用組合物，其含有多肽的抑制劑或拮抗劑，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多月太；或編碼任何所述抑制劑或拮抗劑的多核苷酸；以及藥學上可接受的載體或賦形劑。提高Bax介導的細胞凋亡可用於抵抗癌症，特別是腦瘤。癌細胞是永生性，因為當正常的細胞應該經歷細胞凋亡的時候，它們卻不能經歷細胞凋亡。通過從特定組織發現細胞凋亡抑制劑，我們可以通過負調節抑制細胞凋亡過程的蛋白的表達來治療癌症。第十五方面，本發明提供了抵抗患者癌症的方法，所述方法包括向患者施用多肽的抑制劑或拮抗劑，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB權、固GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽；或編碼任何所述抑制劑或拮抗劑的多核苷酸。第十六方面，本發明提供了多肽的抑制劑或拮抗劑，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、腿GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽，或編碼任何所述抑制劑或拮抗劑的多核苷酸，在製備用於抵抗患者癌症的藥物中的用途。適宜的上述多肽的抑制劑或拮抗劑包括與所述多肽選擇性結合的抗體。適宜的抗體可由熟練的技術人員利用本領域建立已久的技術來製備。抑制上述多肽的抗凋亡活性的抗體特別優選用於抗癌療法，且利用本領域中已知的和本文所述的方法來選擇它們的活性。就選擇性結合指定的多肽的抗體而言，我們意指抗體分子以比不相關的多肽更強的親和力結合該多肽，如人血清白蛋白(humanserumalbumin,HSA)。優選，抗體以比不相關的多肽大至少5，或至少10或至少50倍的親和力結合指定的多肽。更優選，抗體分子以比不相關的多肽大至少100，或至少1,000，或至少10,000倍的親和力結合指定的多肽。所述結合可用本領域中熟知的方法來測定，如Biacor滻系統之一。優選，抗體分子選擇性結合指定的多肽，而不會顯著地結合體內的其他多肽。儘管具有更高親和力的抗體甚至更優選，但優選，抗體對於指定多肽上的靶表位的親和力是至少10-8M。。就"抗體"或"抗體分子"而言，我們不但包括本領域所熟知的全免疫球蛋白分子也包括其片段如Fab、F(ab')2、Fv以及保留抗原結合位點的其他片段。同樣，術語抗體也包括抗體的遺傳工程衍生物，如含有分離的V結構域的單鏈Fv分子(scFv)和單結構域抗體(dAbs)。術語也包括抗體樣分子，其可利用噬菌體展示技術或其他的結合指定多肽或指定多肽的具體區域的分子的隨機選擇技術來製備。因此，術語抗體包括含有結構，優選肽結構的所有分子，所述結構是天然抗體的識別位點(即結合或連接表位或抗原的抗體的--部分)的一部分。有關保留抗體特異性結合位點的抗體片段的合成技術的一般綜述，見Winter&Milstein(1991)7Vaft^349,293-299。就"ScFv分子"而言，我們意指其中VH和Vl伴侶結構域(partnerdomains)經由可變寡肽連接的分子。基因工程的抗體，如ScFv抗體可利用下列文獻中描述的技術和方法來製備Huston等(1988)"Proteinengineeringofantibodybindingsites:recoveryofspecificactivityinananti-digoxinsinglechainFv65analogueproducedin￡.co/z'",屍rac.AW.」cfld5W.85,pp.5879-5883，禾口A.Pluckthun,(1991)"Antibodyengineering;Advancesfromuseof五.co//expressionsystems",5/o々ec/wo/ogy9(6):545-51。利用抗體片段而不是全抗體的優勢是多方面的。較小尺寸的片段可導致藥學特性的改善，如更好地滲透到耙位點。除去了全抗體的效應子功能，如補體(complement)結合。Fab、Fv、ScFv和dAb抗體片段可表達於大腸桿菌內或從大腸桿菌中分泌，從而可以很容易地產生大量抗體片段。全抗體和F(ab')2片段是二價的。就"二價的"而言，我們意指抗體和F(ab')2片段具有兩個抗原結合位點。相反，Fab、Fv、ScFv和dAb片段是單價的，僅有一個抗原結合位點。優選，抗體是單克隆抗體。在某些情況下，特別是如果將抗體重複施用於人類患者，優選單克隆抗體是人單克隆抗體或人源化的單克隆抗體。本文所述的活性的適宜單克隆抗體可通過已知的技術來製備，如"M朋oc/o朋/^油力Ww爿AWfl咖fl/o/fec/2w々was"，HZola(CRCPress,1988)禾口"Mowoc/o憩/./fy6W<iowfif^to/Z)Oi//&svrec/zw—as"，SGRHurrell(CRCPress,1982)中的那些技術。優選，抗體是人源化的抗體。以已知的方式，可將適當製備的非人源化的抗體進行"人源化"，例如，通過將小鼠抗體的CDR區插入到人抗體的構架內。利用Verhoeyen等(1988)5We打ce，239，1534-1536和Kettleborough等，(1991)/Vote/"五wg/ween'wg,14(7)，773-783中記載的技術和方法，可製備人源化的抗體。利用重組技術，可製備完全人源化的抗體。通常，使用含有上億不同抗體的大文庫。與以前採用例如鼠抗體的嵌合或人源化不同，這種技術不依賴動物的免疫來產生特異性抗體。相反，重組文庫含有大量的預製備的抗體變體，這樣該文庫就很可能會具有至少一種對任何抗原具有特異性的抗體。因此，利用此類文庫，可鑑定具有期望結合特性的現有抗體。為了以有效的方式發現文庫中的優良結合體，我們設計了將表型即抗體或抗體片段與其基因型即編碼基因相聯繫的各種系統。最常用的此類系統就是所謂的噬菌體展示系統，其中抗體片段作為與噬菌體包被蛋白的融合物表達、顯示於絲狀噬菌體顆粒的表面，同時攜帶編碼所展示的分子的遺傳信息(McCafferty等，1990，M7加-e348:552-554)。可以通過結合正討論的抗原來挑選出對特定抗原具有特異性的噬菌體展示抗體片段。隨後，對分離的噬菌體進行擴增，並將編碼選擇的抗體可變區的基因任選地轉換成其他的抗體形式，如全長的免疫球蛋白，並利用本領域中熟知的適當的載體和宿主細胞進行高量表達。展示的抗體對噬菌體顆粒的特異性的形式可以不同。最常用的形式是Fab(Griffiths等，1994.五7kffiOJ.13:3245-3260)和單鏈(scFv)(Hoogenboom等，1992，JM^/歷o/.227:381-388)，兩者都含有抗體的可變抗原結合結構域。單鏈形式是由經由柔性連接體連接於可變的輕結構域(vl)的可變重結構域(Vh)組成(US4,946,778)。在作為治療劑使用之前，可將抗體轉變成可溶的形式，如Fab或scFv，並進行同樣的分析。在以後的步驟中，可將確定具有期望的特性的抗體片段轉變成其他的形式，如全長抗體。WO98/32845和Soderlind等(2000)A^mk歷。rec/z"o/.18:852-856，描述了在抗體文庫中產生變異性的技術。來自這種文庫的抗體片段都具有相同的構架區且僅在它們的CDRs之間有不同。因為構架區是種系序列(germlines叫uence)，因此，預料來自文庫或利用相同的技術產生的相似的文庫的抗體的免疫原性特別低(Soderlind等，2000)。這種特性對於治療性抗體來說是非常有價值的，其降低了患者形成針對施用抗體的抗體的風險，據此降低了變態反應的風險，阻斷了抗體的出現，且能形成較長的抗體細胞質半壽期。因此，當開發用於人的治療性抗體時，如今，優先於早期的雜交瘤技術，而利用現代的重組文庫技術(Soderlind等，2001,Cow6.Oze肌&歷g/zT7zrawg/z;^4:409-416)。上述多肽的其他適宜的抑制劑或拮抗劑包括對編碼上述多肽的核苷酸具有特異性且阻止它們表達的siRNA、反義多肽以及核酶分子。小型幹擾RNA由Hannon等.7Ntowe，418(6894):244-51(2002)、Bru腿elkamp等，Sc/ewce21,21(2002)以及Sui等，Ato/Jcad,OS^99,5515-5520(2002)作了描述。RNA幹擾(RNAinterference,RANi)是在動物中由雙鏈RNA(dsRNA)引發的序列特異性轉錄後基因沉默過程，所述雙鏈RNA與鈣沉默基因在序列上同源。序列特異性mRNA降解調節劑通常是21和22個核苷酸的小型幹擾RNA(siRNAs)，其在體內可通過核糖核酸酶III從較長的dsRNAs切割下而產生。己證明，21個核苷酸的siRNA雙鏈體能特異性地抑制內源和異源基因的表達(Elbashir等(2001)Atowre411:494-498)。在哺乳動物細胞中，認為siRNA必須是由如下文所述的兩個互補的21mers所組成，因為較長的雙鏈(ds)RNAs將激活PKR(dsRNA-依賴性蛋白激酶)並抑制全部的蛋白合成。通過參考其cDNA序列，可很容易地設計對編碼任何上述多肽的多核苷酸具有選擇性的雙鏈體siRNA分子。例如，通過參考上文所列的GenBank登錄號中的cDNA序列，或鑑定為實施例中所述篩選結果的cDNA序列(圖62-66中的SEQIDNos:5-19)，來進行設計。通常，選擇以AA雙核苷酸為起始的第一個21mer的序列，所述21mer序列為從抑制劑甲硫氨酸密碼子下遊起的至少120個核苷酸。優選與其互補的RNA序列成為第一個RNA寡核苷酸。第二個RNA序列應該優選與第一個在其3'端具有額外的UU雙核苷酸的最初19個殘基互補。一旦設計完，可利用本領域中熟知的方法合成準備合成的RNA分子。利用任何如本文所述的適宜方法，可將siRNAs引入患者的細胞。通常，例如通過包含於適宜的載體或運載工具，來保護RNA免受細胞外環境破壞。優選，脂質體介導的轉移。特別優選，使用oligofectamine法。通過參考其cDNA或基因序列，如本領域中所知的，可很容易地設計對編碼任何上文所列的多肽的多核苷酸具有選擇性的反義核酸。反義核酸，如寡核苷酸，是單鏈核酸，其可特異性地結合互補的核酸序列。通過結合於適當的靶序列，形成RNA-RNA、DNA-DNA或RNA-DNA雙鏈。因為它們與基因的有義鏈或編碼鏈互補，因此經常將這些核酸稱為"反義"。近來，已證明形成三螺旋是可能的，其中寡核苷酸與DNA雙鏈結合。據發現，寡核苷酸會識別DNA雙螺旋的大溝內的序列。從而，形成三螺旋。這表明，合成經由識別大溝的氫結合位點而特異性結合雙鏈DNA的序列特異性分子是可能的。通過結合於靶核苷酸，上述寡核苷酸可抑制靶核苷酸的功能。其可能的結果是例如阻斷了轉錄、加工、poly(A)添加、複製、翻譯或促進細胞抑制機制如促進RNA降解。在實驗室內製備反義寡核苷酸，隨後引入細胞，例如通過從細胞培養基微注射或吸收而進入細胞，或在用攜帶反義基因的質粒或逆轉錄病毒或其他的載體轉染後，讓它們在細胞中表達。首先發現反義寡核苷酸在細胞培養物中抑制下列病毒的病毒複製或表達勞斯肉瘤病毒(Roussarcomavims)、水泡口炎病毒(vesicularstomatitisvirus)、1型單純皰疹病毒(herpessimplexvimstype1)、猴病毒(simianvirus)和流感病毒(influenzavirus)。]t匕後，在包括兔網狀細胞裂解物和小麥胚芽提取物的無細胞系統中，對反義寡核苷酸抑制mRNA翻譯進行了廣泛研究。利用與AIDSHIV反轉錄病毒RNA互補的寡核苷酸，已經離體證明了翻譯寡核苷酸對病毒功能的抑制(Goodchild,J.1988"InhibitionofHumanImmunodeficiencyVirusReplicationbyAntisenseOligodeoxynucleotides",屍亂胸/.加d5W.(m^)85(15),5507-11)。Goodchild的研究表明，與Poly(A)信號互補的寡核苷酸最有效；靶向RNA5，末端，特別是帽和5N未翻譯區、鄰近引物結合位點和位於引物結合位點的寡核苷酸也有效。帽、5'未翻譯區和Poly(A)信號位於在反轉錄病毒RNA末端(R區)重複的序列內，且與它們互補的寡核苷酸可與RNA結合兩次。通常反義寡核苷酸的長度為15-35個鹼基。例如，顯示20mer寡核苷酸會抑制表皮生長因子受體mRNA的表達(Witters箏，C""cw7>e"/53:41-50(1999))，且25mer寡核苷酸會降低促腎上腺皮質激素表達高於90%(Frankel箏，JA/^mswrg91:261-7(1999))。然而，應該理解，可以利用長度在此範圍外的寡核苷酸，例如10、11、12、13或14個鹼基，或36、37、38、39或40個鹼基。反義寡核苷酸可全身施用。可選地，且優選，通過體內限制多核苷酸對其既定基因座的有效性，提高以鹼基配對為特徵的該多核苷酸的固有結合特異性，從而允許施用更低的劑量且使全身效果最小化。因此，可將多核苷酸局部施用於癌症，以實現期望的效果。在期望的基因座上，多核苷酸的濃度比全身施用多核苷酸時高的多，且可利用顯著較低的總量，來獲得治療效果。局部高濃度的多核苷酸提高了靶向細胞的滲透，且有效阻斷了靶核苷酸序列的翻譯。可以理解，反義試劑也包括較大的分子，其結合編碼任何上述多肽的多核苷酸(mRNA或基因)，且實質阻止該蛋白的表達。因此，基本上與各自mRNA互補的反義分子也是可以預料到的。較大的分子可從任何適宜的基因構建體(geneticconstruct)中表達且遞送至患者。通常，表達反義分子的基因構建體含有至少可操作地連接於可在細胞中表達反義分子的啟動子的cDNA或基因的一部分。優選，該基因構建體適於遞送至人細胞。核酶是RNA或RNA蛋白複合體，其以位點特異性方式切割核酸。核酶具有特異性的催化結構域，其具有核酸內切酶活性。例如，大量核酶高度特異性地加速磷酸酯轉移反應，經常僅切割寡核苷酸底物中幾個磷酸酯中的一個。這種特異性歸因於底物需要在化學反應之前經由特異性的鹼基配對相互作用先結合核酶的內部引導序列(intemalguidesequence,IGS)。作為涉及核酸的序列特異性切割/連接反應的一部分，首先觀察了核酶的催化作用。例如，美國專利第5,354，855號報導了某些核酶可充當核酸內切酶，其序列特異性比已知的核酸內切酶更強，且接近了DNA限制酶的序列特異性。因此，基因表達的序列特異性核酶介導的抑制可特別適宜於治療應用，且可通過參考上文給出的GenBank登錄號中列出的cDNA序列或參考SEQIDNOs:5-19來設計。也可設計抑制編碼任何上述多肽的基因轉錄的其他製劑，例如利用Isalan等(7V^所otec/ww/,19(7):656-60(2001))禾口Urnov(歷oc/7em屍/zarmaco/，64(5-6):919(2002))所述的基因工程轉錄抑制劑。它們也可另外選擇，例如利用本發明稍後方面所述的篩選方法。治療(治療)可作用於人或動物。優選，本發明的方法用於治療人。為了施用於個體，通常將上文本發明的第五至第十六方面所述的各種治療劑配製成藥用組合物，即與藥學上可接受載體或賦形劑一起使用。就"藥學上可接受的"而言，包括無菌和無熱源配製劑。適宜的藥學上載體在藥學領域是熟知的。載體必須是與治療劑一致意義上的"可接受的"，且對其接受者無害。通常，載體是無菌且無熱源的水或鹽水；然而其他的可接受載體也可使用。在一實施方案中，本發明的藥用組合物或配製劑是用於非腸道施用，更特別是用於靜脈內施用，例如通過注射。適宜非腸道施用的配製劑包括含水或不含水的無菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑和使該製劑與既定的接受者血液等滲的溶質；和含水和不非含水的無菌懸浮液，其可包括懸浮劑和增稠劑。在可選的優選實施方案中，藥用組合物適宜局部施用於患者。優選，配製劑是含有每日劑量或單位、每日亞劑量或其適當部分的單位70劑量的活性成分。治療劑可以下列形式口服或通過任何非腸道途徑施用以含有活性組分的藥用配製劑的形式，任選地以非毒性有機或無機酸或鹼、加成鹽的形式，以藥學上可接受劑量的形式。依賴於待治療的疾病和患者，以及施用途徑，組合物可以以變化的劑量施用。在本文中，術語"治療劑"包括多肽，和多核苷酸和其它分子，除非本文另外說明外。例如，在某些情況下，術語"治療劑"是僅指多肽或僅指多核苷酸，且會在文中進行清楚的說明。在人治療中，治療劑可單獨施用，但通常以與根據既定的施用途徑和標準的藥學實踐選擇的適宜藥用賦形劑、稀釋劑或載體的混合物的形式來施用。例如，治療劑可以片劑、膠囊、卵形囊劑(ovules)、酏劑(dixirs)、溶液或懸浮液的形式口服、口腔或舌下施用，上述製劑可含有增味劑或著色劑用於速釋、緩釋或控釋施用。本發明的化合物也可經由陰莖海綿體注射施用。此類片劑可含有賦形劑，如微晶纖維、乳糖、檸檬酸鈉、碳酸鈣、磷酸氫鈣、和甘氨酸；崩解劑，如澱粉(優選玉米、馬鈴薯或木薯澱粉)、羧甲澱粉鈉(sodiumstarchglycollate)、交聯羧甲基纖維素糹內(croscarmellosesodium)和某些複合矽酸鹽；以及顆粒粘合劑(granulationbinders),如聚乙烯吡咯垸酮、羥丙基甲基纖維素(hydroxypropylmethylcelMose,HPMC)、l聖丙基纖維素(hydroxy-propylcellulos，HPC)、蔗糖、明膠和阿拉伯樹膠。另外，也可包括潤滑劑如硬脂酸鎂、硬脂酸、山嵛酸甘油酯和滑石。也可使用相似類型的固體組合物作為明膠膠囊中的填充物。在此情況下，優選的賦形劑包括乳糖、澱粉、纖維素、乳糖或高分子量聚乙二醇。對於含水懸浮液和/或酏劑來說，治療劑也可以與各種甜味劑、或調味劑、著色劑或染料組合；與乳化劑和/或懸浮劑組合；以及與稀釋劑如水、乙醇、丙二醇和丙三醇或其組合進行混合。治療劑也可以非腸道施用，例如，靜脈內、動脈內、腹膜內、鞘內(intrathecally)、心室內、胸骨內、頭顱內、肌肉內或皮下施用，或它們可通過輸注技術施用。它們最好以無菌含水溶液的形式使用，所述溶液可含有其他的物質，如足夠的鹽或葡萄糖，以使該溶液與血液等滲。如果需要，該含水溶液可適當地進行緩衝處理(優選處理為pH3-9)。在無菌的條件下製備合適的非腸道製劑可通過本領域熟練的技術人員熟知的標準藥學技術來實現。適宜非腸道施用的配製劑包括含水或不含水的無菌注射溶液，其可含有使該配製劑與既定的接受者的血液等滲的抗氧化劑、緩衝液、抑菌劑和溶質;以及含水和不含水無菌懸浮液，其可包括懸浮劑和增稠劑。該配製劑可存在於單位劑量或多劑量容器內，如密封的安瓿和小瓶，並且保存冷凍乾燥(凍幹)的條件下，僅需要在要使用前加入無菌液體載體(例如注射用水)。可根據上文所述的無菌粉、顆粒和片劑型來製備臨時注射溶液和懸浮液。為了給人類患者口服或非腸道施用，治療劑的日劑量水平通常是從1-1000mg/成人(即約0.015-15mg/kg)，以單次劑量或多次劑量來施用。因此，例如，如果適當，治療劑的片劑或膠囊可含有lmg-1000mg的活性試劑用於每次單獨、兩次或多次施用。醫師可在任何情況下決定何種實際劑量最適合每位個體患者，並且隨著具體患者的年齡、體重和應答而變化。上述劑量是平均情況的示例。當然，存在個別的情況，其中更高或更低的劑量範圍是更有利的，並且在本發明的範圍內。治療劑可以鼻內施用，或通過吸入施用，並且便利地以乾粉吸入器或氣霧劑噴射呈遞的形式，用適宜的推進劑從加壓容器、泵、噴霧器(spray)或霧化器中遞送，所述的推進劑為如二氯二氟甲烷、三氯一氟甲烷、二氯四氟乙烷、氫氟垸(hydrofluoroalkane)如1，1,1,2-四氟乙垸(HFA134A3或1,1,1,2,3,3,3,-七氟丙垸(HFA227EA3)、二氧化碳或其他適宜的氣體。在加壓氣霧劑的情況下，可通過閥門遞送計量的量來測定劑量單位。加壓容器、泵、噴霧器或噴霧器可含有活性化合物的溶液或懸浮液，例如，使用乙醇和推進劑的混合物作為溶劑，其可另外含有潤滑劑，如山梨醇三油酸酯(sorbitantrioleate)。可將吸入器或吹藥器(insufflator)中使用的膠囊和藥筒(例如由明膠製成)，配成含有治療劑和適宜的粉末基質(如乳糖、或澱粉)的粉末混合物。優選配製氣霧劑劑或乾粉劑，而使得每一次計量的劑量或"噴出"(puff)含有至少lmg遞送至患者的治療劑。應當認識到，氣霧劑形式的日總劑量針對不同患者而不同，並且在一天內以單次劑量或通常多次劑量施用。可選地，以栓劑或陰道栓劑的形式施用治療劑，或它們也可以以洗劑、溶液、乳劑、軟膏(ointment)或爽身粉形式局部應用。治療劑也可以透皮施用，例如，通過使用皮膚貼(skinpatch)。它們也可以通過眼睛途徑施用，特別是對於治療眼睛疾病。可以根據本發明治療的眼睛疾病包括青光眼、色素性視網膜炎(retinitispigmentosa)、白內障形成(cataractformation)、視網膜母細胞瘤(retinoblastoma)、視網膜缺血(retinalischemia)以及糖尿病視網膜病變(diabeticretinopathy)。對於眼科應用，治療劑可配製為等滲的pH調節的無菌生理鹽水形式的微粉化懸浮液，或優選，等滲的pH調節的無菌生理鹽水形式的溶液，任選地與防腐劑如苯扎氯銨組合。可選地，它們也可配製成藥膏，如凡士林藥膏。對於局部應用於皮膚，可將治療劑配製為含有活性化合物的適宜的軟膏，所述的適宜化合物懸浮於或者溶解於例如具有下列一種或多種物質的混合物中礦物油、液體凡士林(liquidpetrolatum)、白色凡士林(whitepetrolatum)、丙二醇、聚乙烯聚丙烯化合物、乳化蠟(emulsifyingwax)和水。可選地，可將其配製成適宜的洗劑或乳劑，懸浮或溶解於例如一種或多種下列物質的混合物中礦物油、山梨醇單硬脂酸酯(sorbitanmonostearate)、聚乙二醇、'液體石蠟、聚山梨醇酯60(polysorbate60)、十六醇酯蠟(cetylesterswax)、鯨蠟醇(cetearylalcohol)、2-辛基十二烷醇(octyldodecano1)、苯甲醇和水。適宜在口腔中局部施用的配製劑包括，含有在調味成分通常為蔗糖和阿拉伯樹膠或黃芪膠中的活性成分的錠劑(lozenges);含有在惰性成分如明膠和丙三醇或蔗糖和阿拉伯樹膠中的活性成分的軟錠劑(pastilles);以及含有在適宜的液體載體中的活性成分的漱口液(mouth-washes)。對於獸醫學應用來說，可依據常規獸醫學實踐將治療劑以適宜的可接受配製劑施用，且獸醫學外科醫生可以決定最適宜於具體動物的給藥方案和施用途徑。在一實施方案中，多肽遞送可利用可注射的維持釋放藥物遞送系統來進行。對它們進行特別設計以減少注射頻率。此類系統的實例是NutropinDepot,其將重組.人生長激素(recombinanthumangrowthhormone,rhGH)封裝於生物可降解的微滴中，該微滴一旦注射，則在維持期緩慢釋放rhGH。可通過直接將藥物釋放於所需部位的外科植入裝置來施用多肽。例如，Vitrasert直接將更昔洛韋(ganciclovir)釋放入眼睛中來治療CMV視網膜炎。直接將這種有毒藥劑應用於疾病部位可以實現有效地治療，而沒有藥物的明顯全身副作用。電穿孔治療(electroporationtherapy，EPT)系統也可用來施用多肽。遞送脈衝電場至細胞的裝置增加細胞膜對藥物的滲透性，而導致顯著提高細胞內藥物遞送。多肽也可通過電引入(electroincorporation,EI)來遞送。當皮膚表面直《5高至30pm的小顆粒進行與電穿孔所用相同或類似的電脈衝時，會出現EI。在EI中，這些顆粒穿過角質層(stratumcomeum)，進入皮膚的更深層。顆粒可負載或包被有藥物或基因，或可僅充當在皮膚上產生孔的"子彈"，藥物通過所述孔進入。多肽遞送的可選擇方法是熱敏感的ReGel注射系統。低於體溫時，ReGd是可注射液體，而在體溫時，其立即形成凝膠儲庫(gdreservior)，該儲庫緩慢消蝕並溶解為已知安全的生物可降解多聚體。隨著生物多聚體逐漸溶解，活性藥物就得以遞送。多肽藥物也可口服遞送。這個方法利用體內維生素B12口服吸收的自然過程來共同遞送蛋白和肽。通過擺脫維生素Bi2吸收系統，蛋白或肽可穿過腸壁。在維生素B^類似物和藥物之間合成複合物，該複合物既保留了對複合物的維生素B^部分中固有因子(intrinsicfactor,IF)的顯著親和力，也保留了複合物藥物部分的顯著生物活性。多核苷酸可通過任何有效方法來施用，例如非腸道(如靜脈內、皮下、肌肉內)，或通過口服、鼻腔或其他允許寡核苷酸進入患者血流並在其中循環的其他方式。除了局部施用的多核苷酸外，還提供了優選全身施用的多核苷酸，但其在不進行局部施用時也有效用。通常範圍為每次施用給成人約0.1-約10g的劑量對於此目的是有效的。如下文所述，可將多核苷酸作為如適宜的基因構建體來施用，且遞送至患者中表達它們的地方。通常，將基因構建體中的多核苷酸可操作地連接於可在細胞中表達化合物的啟動子。利用本領域中熟知的方法，例如Sambrook等(2001)中的方法，可製備本發明的基因構建體。儘管遞送多核苷酸的基因構建體可以是DNA或RNA，但優選它們是DNA。優選，使基因構建體適應遞送於人細胞。將基因構建體引入動物細胞體內細胞的方式和方法在本領域內是己知的。例如，本發明的構建體可通過任何常規的方法引入細胞，如包含反轉錄病毒的方法以便將構建體插入細胞的基因組。如在Kuriyama等(1991,Ce//&rac.a^/F，c.16,503-510)中，施用純化的反轉錄病毒。利用本領域熟知的方法，可製備含有上文所述多核苷酸的反轉錄病毒DNA構建體。為了從此類構建體中產生活性反轉錄病毒，通常使用培養於含有10。/。胎牛血清(FCS)的Dulbecco改進的Eagle培養基(DMEM)中的親嗜性psi2包裝細胞系(ecotropicpsi2packagingcellline)。細胞系的轉染可便利地利用磷酸鈣共沉澱的方式，且通過添加G418至終濃度lmg/ml，來選擇出穩定的轉化體(假定反轉錄病毒構建碼頭含有neoK基因)。分離並擴大獨立的菌落，並除去培養物的上清液，通過0.45pm的孔尺寸過濾器過濾，並保存於-70。C下。對於向腫瘤細胞引入反轉錄病毒來說，例如，直接注射反轉錄病毒上清液是很方便的，該上清液中己經加入了10jig/ml的聚季胺(polybrene)。對於直徑超過10mm的腫瘤來說，注射0.1ml-lml的反轉錄病毒上清液是合適的，優選0.5ml。可選地，如Culver等(1992,5Wewce256，1550-1552)所述，可注射產生反轉錄病毒的細胞。可對引入的產生反轉錄病毒的細胞進行基因改造，從而產生反轉錄病毒載體顆粒，以便連續的載體產生會出現於原位腫瘤塊(tumormass)中。因此，如果與反轉錄病毒載體產生細胞混合，就可成功地體內轉導增殖的上皮細胞。靶向性反轉錄病毒也可用於本發明，例如，可將賦予特異性結合親和性的序列基因改造成預先就有病毒基因(對於這種以及其他基因治療的靶向載體，參閱Miller&Vile(1995)9,190-199)。其他的方法包括將構建體簡易地遞送至細胞，用於在限定的時間內表達，或者在整合於基因組後，在更長的時間內表達。後一個方法的實例包括脂質體((NSssander等(1992)Qmcer52,646-653))。其他的遞送方法包括作為載體的經由抗體-聚賴氨酸橋攜帶外源DNA的腺病毒(參閱Curiel(1993)/Vog.MedF/ra/.40,l-18)以及運鐵蛋白-聚陽離子共軛物(Wagner等(19卯)屍rac.Ato/.Jcfld5W.aSL487，3410-3414)。這些方法的第一個方法中，聚陽離子-抗體複合物是與本發明的DNA構建體或其他的基因構建體形成的，其中所述抗體對野生型腺病毒或變體腺病毒是特異性的，所述變體腺病毒引入了新的結合抗體的表位。聚陽離子部分經由與磷酸鹽骨架的相互作用結合DNA。腺病毒，因為其含有未改變的纖維蛋白和腺病毒亞單位蛋白，因此被引入細胞內部，且與本發明的DNA構建體一起攜帶進入細胞。優選，聚陽離子為聚賴氨酸。在可選的方法中，採用利用受體介導的內吞作用來攜帶DNA大分子進入細胞的高效核酸遞送系統。這可由將離子運輸蛋白運鐵蛋白與結合核酸的聚陽離子結合來實現。將人運鐵蛋白或雞同源物伴清蛋白或其組合通過二硫鍵共價連接於小型DNA結合蛋白精蛋白或各種大小的聚賴氨酸。這些修飾性運鐵蛋白分子維持了其結合其相關受體和有效地介導將鐵運輸到細胞的能力。不依賴核酸大小(從短寡核苷酸到21，OOObp的DNA)，運鐵蛋白-聚陽離子分子與本發明的DNA構建體或其他的基因構建體形成電泳穩定的複合體。當將運鐵蛋白-聚陽離子和本發明的DNA構建體或其他的基因構建體的複合體提供給腫瘤細胞時，預料構建體可在細胞中高水平表達。可以利用由Cotten等(1992)V^/.Jcad89,6094-6098所述方法產生的缺陷性或化學滅活的腺病毒顆粒的內體破裂活性(endosome-disruptionactivity),來高效地受體介導遞送本發明的DNA構建體或其他的基因構建體。這種方法顯然依賴於下列事實即腺病毒適合從內體中釋放其DNA而無需經溶酶體的通道，且在存在例如連接於本發明的DNA構建體或其他的基因構建體的運鐵蛋白時，細胞以與腺病毒顆粒相同的途徑，吸收構建體。這種方法的優勢在於不需要使用複雜的反轉錄病毒構建體；不存在與如用反轉錄病毒感染時發生的永久性基因組修飾；以及靶向性表達系統偶聯了靶向遞送系統，因而降低了對其他細胞類型的毒性。可以理解，"裸DNA"和與陽離子和中性脂質複合的DNA也可用於將本發明的DNA引入待治療的單個細胞中。基因治療的非病毒方法描述於Ledley(1995，//wwawGewe777era/7_y6,1129-1144)中。可選的靶向遞送系統也是已知的，如WO94/10323中所述的修飾性腺病毒系統，其屮，通常DNA攜帶於腺病毒或腺病毒樣顆粒中。Michael等(1995)7Tera;^2，660-668描述了修飾腺病毒，從而來將細胞選擇性部分添加到纖維蛋白中。在p53缺陷性人腫瘤細胞中選擇性複製的突變體腺病毒，如Bischoff等(1996)Sc/ewce274,373-376所描述的那些，也可用於將本發明的基因構建體遞送至細胞。因此，可以理解，本發明的進一方面提供了含有本發明基因構建體的病毒或病毒源顆粒。其他適宜的病毒、病毒載體或病毒樣顆粒包括慢病毒載體、HSV、腺相關病毒(adeno-associatedviral,AAV)、基於AAV的載體、疫苗和細小病毒。向患者遞送多核苷酸的方法對本領域技術人員來說是熟知的，包括使用免疫脂質體、病毒載體(包括疫苗、修飾的疫苗和腺病毒)，以及通過直接遞送DNA，例如利用基因槍和電穿？L。而且，將多核苷酸遞送至患者靶組織的治療方法在本領域內也是熟知的。對於涉及治療神經變性病的應用，優選，將治療劑或配製劑直接施用於患者的大腦或大腦的具體區域如海馬。將治療劑直接靶向或遞送於身體的具體區域包括大腦的方法，對本領域技術人員而言是熟知的。如，美國專利第6,503,242號描述了用於直接將治療劑遞送至海馬的植入性導管裝置。在一個實施方案中，通過例如腰椎穿刺(lumbarpuncture)(參閱例如Kapadia等(1996)7Vewmyw^10:585-587)，注射入腦脊液，來將包括載體的治療劑分布於CNS的廣泛區域。可選地，使用立體定向微注射技術(stereotacticmicroinjectiontechniques),可指導治療劑向大腦具體位點的準確遞送。例如，將正治療的受試者安置於立體定向框架基座(stereotacticframebase)(MRI兼容)，然後，利用高解析度的MRI成像，來測定待治療的具體區域的三維定位。隨後將MRI圖像轉移至具有適當的立體定向軟體的計算機中，使用大量圖像來測定治療劑微注射的靶位點和軌道。這種軟體將軌道轉換成三維坐標，從而精確記錄立體框架。對於頭顱內遞送的情況來說，暴露頭骨，並在入口位點鑽孔，用立體定向裝置對針進行定位並且確保在預定深度植入。可將治療劑遞送至CNS區域，如海馬、脊髓細胞、腦千(骨髓、腦橋和中腦)、小腦、中腦(丘腦、視丘下部)、終腦(紋狀體、大腦皮層，或皮質、枕葉、顳葉、頂葉或額葉內)，或其組合。在另一個實施方案中，利用其他的適宜局部遞送的遞送方法，如血腦屏障的局部滲透，來遞送治療劑。將病毒或非病毒載體遞送至中樞神經系統的細胞。在一個實施方案中，77本發明使用腺相關病毒(adeno-associatedviral,AAV)載體，用於遞送編碼治療劑或就是治療劑的多核苷酸。產生病毒載體如AAV載體的方法在本領域中是熟知的(參閱Sambrook#"，2001，同上)。利用已知的技術構建AVV載體，提供至少可操作連接的調控元件組分，包括轉錄起始區、為治療劑或者編碼治療劑的多核苷酸、轉錄終止區以及至少一種轉錄後調節序列。選擇在靶向細胞中有功能的調控元件。美國專利申請第20050025746號描述了將編碼治療劑的腺相關載體(AAV)局部遞送至與神經變性病有關的大腦具體區域如海馬、基底節的丘腦核、mesaphilia和丘腦的遞送系統。優選，利用中樞神經系統(centralnervoussystem,CNS)特異性啟動子，如神經元特異性啟動子(如神經絲啟動子(Byme和Ruddle，1989)和神經膠質特異性啟動子(Morii等1991))來指導多核苷酸優先在CNS細胞中表達。優選，啟動子是組織特異性的且在中樞神經系統外基本上是沒有活性的，或者啟動子的活性在中樞神經系統要比在其他的細胞或組織中高。例如，對脊髓細胞、腦幹(骨髓、腦橋和中腦)、小腦、中腦(丘腦、視丘下部)、終腦(紋狀體、大腦皮層，或皮質、枕葉、顳葉、頂葉或額葉內)或其組合具有特異性的啟動子。啟動子可以是對具體細胞型特異性的，如CNS中的神經元或神經膠質細胞。如其在神經膠質細胞是有活性的，則其可能是對星形膠質細胞、少突角質細胞、室管膜細胞(ependymalcells)、雪旺細胞(Schwa皿cells)、或微膠質(microglia)特異性的。如果其在神經元中是有活性的，則其可能是對具體類型神經元特異性的，如運動神經元、感覺神經元或中間神經元。優選，啟動子對大^f具體區域如皮質、stratium、黑質和海馬中的細胞是特異性的。適宜的神經元特異性啟動子包括但不限於，神經元特異性烯醇酶(NSE;Olivia等(1991);GenBank登錄號X51956)和人神經絲輕鏈啟動子(NEFL;Rogaev等(1992);GenBank登錄號L04147)。神經膠質特異性啟動子包括但不限於，神經膠質纖維狀酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)啟動子(Morii等(1991);GenBank登錄號M65210)、S100啟動子(Morii等(1991);GenBank登錄號M65210)和穀氨酸合成酶啟動子(Vanden等(1991);GenBank登錄號X59834)。在優選的實施方案中，神經元特異性烯醇酶(neuronspecificenolase,NSE)啟動子位於基因上遊(g卩5')的側翼。在另一個優選的實施方案中，延伸因子la(EF)啟動子位於目的基因上遊(即5，)的側翼。可用的海馬特異性啟動子是海馬特異性糖皮質激素受體(glucocorticoidreceptor,GR)基因啟動子。可選地，對於治療心血管疾病來說，Svensson等(1999)描述了通過心肌內注射或冠狀動脈內輸注親心性載體如重組腺相關病毒載體，來遞送重組基因至心肌細胞，導致轉基因在鼠心肌細胞體內表達。Melo等(2004)評述了心臟病的基於基因和細胞的治療法。可選的優選施用途徑是經由導管或支架(stent)。支架是一種局部基因遞送的有利方式，因為它們為延長基因洗脫(geneelution)和相對動脈壁(opposedarterialwalls)的高效轉導(efficienttransduction)提供了平臺。這種基因遞送策略具有降低病毒載體全身傳播的潛力，因而降低了宿主的免疫應答。已顯示，合成的和天然存在的支架包被(stentcoatings)都有潛力延長基因洗脫，而沒有顯著的副反應(Sharif等,20(M)。優選，將編碼抗體分子的多核苷酸可操作地連接於靶向和/或調節序列，靶向和/或調節序列指導抗體表達至動脈且優選動脈壁。因此，多核苷酸可以在侵染的個體內產生特異性抗體。適宜的靶向和調節序列對技術人員而言是已知的。可能需要能暫時調節多核苷酸在細胞中的表達。因此，期望多核苷酸的表達直接或間接地(參閱下文)受可由小分子的濃度調節的啟動子的調控，當期望激活或更有可能抑制(依賴於小分子是否影響所述啟動子的激活或抑制)抗體由多核苷酸表達時，將所述小分子施用於患者。如果表達構建體是穩定的，即能在細胞內表達抗體(在存任何必需的調節分子的情況下)至少1周、1、2、3、4、5、6、8個月或1或多年的時期，則這特別有利。因此，可將多核苷酸可操作地連接於調節啟動子。調節啟動子的實例包括下列文獻中提到的那些Rivera等(1999)ProcNatlAcadSciUSA96(15),8657-62(由雷帕黴素(rapamycin)，一種口服的生物有效性藥物，利用兩個分離的腺病毒或腺相關病毒(AAV)來調控，一種為編碼可誘導的人生長激素(humangrowthhormone,hGH)靶基因，另一種為雙向雷帕黴素調節的轉錄因子)；Magari等(1997)JClinInvest100(11)，2865-72(由雷帕黴素調控)；Bueler(1999)腸/CA謹380(6)，613-22(腺相關病毒載體綜述)；Bohl等(1998)Blood92(5),1512-7(由腺相關病毒載體中的強力黴素調控)；Abmzzese等(1996)JMolMed74(7),379-92(評述了誘導因子，如激素、生長因子、細胞因子、細胞抑制劑、輻射、熱休克和相關應答元件)。另一個將治療劑靶向胰腺細胞用於治療糖尿病、靶向滑膜細胞用於治療風溼性關節炎，或靶向具體癌症的方法是將細胞凋亡抑制性多肽與由抗原而產生的抗體結合，所述抗體由這些疾病狀態中的相關細胞大量產生。第十七方面，本發明提供了鑑定能調節基因表達的化合物的方法，所述基因是選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCSl、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和轉錄信息具有含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的cDNA序列的基因，所述方法包括提供含有可操作地連接於啟動子和/或基因的調節部分的報導基因，所述的基因是選自FKBP2、EEF1Al、SNCA、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCSl、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和轉錄信息具有含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的cDNA序列的基因；將細胞與候選化合物接觸；以及測量報導基因的表達。其中報導基因對應候選化合物的表達改變能鑑定出能調節基因表達的化合物，所述基因選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCSl、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和轉錄信息具有含有SEQIDNo:16,SEQIDNo:17,SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的cDNA序列的基因。報導基因表達的增加表明，鑑定的化合物能增加從天然存在的啟動子的各種多肽的體內表達。報導基因表達的減少表明，鑑定的化合物降低從其天然存在的啟動子的各自多肽的體內表達。本領域中許多報導基因是已知的，包括P-GAL、GFP和水母發光蛋白(其依賴細胞內鈣的增加而發光)。就"選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1的基因和轉錄信息具有含有SEQIDNo:16，SEQIDNo:17,SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的cDNA序列的基因的基因"而言，我們意指天然基因組序列，其當轉錄時能編碼多肽。基因的80天然基因組序列可含有內含子。啟動子是由DNA序列形成的表達調控元件，該DNA序列允許RNA聚合酶的結合和轉錄發生。測定基因啟動子區序列的方法在本本領域內是熟知的。通過鑑定已知的基元，可測定啟動子區的存在，並通過已鑑定序列的突變分析來證實。優選，啟動子序列位於基因轉錄起始位點和轉錄起始位點上遊(5，)5kb之間的區域，所述基因選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB機、固GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和轉錄信息具有含有SEQIDNo:16,SEQIDNo:17,SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的cDNA序列的基因。更優選，其位於轉錄起始位點和起始位點上遊(5')的3kb或2kb或1kb或500bp之間的區域，且仍然更優選，其位於轉錄起始位點上遊(5，)的250bp內。調節區或轉錄元件如增強子，比啟動子相對於基因的位置更難預測。然而許多指示調節區的基元得到充分的表徵，且此類影響相關基因轉錄水平的區域可根據這些基元來鑑定。此類區域的功能可由熟知的方法來證明，如突變分析和體外DNA結合分析，包括DNA足跡法(DNAfootprinting)和凝膠遷移率變動分析(gelmobilityshiftassays)。影響基因轉錄的調節區可能位於轉錄起始點和相對轉錄起始點上遊5'的20kb或10kb或7kb或5kb或3kb，或更優選1kb處之間的區域，或位於該基因的內含子中，所述基因選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和轉錄信息具有含有SEQIDNo:16,SEQIDNo:17，SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的cDNA序列的基因。人SNCA基因的基因組序列可見於人PAC27M07中，且a-突觸核蛋白翻譯起始位點上遊10.7kbDNA片段(位置l卯40-29776)可用作功能性啟動子序歹l」(Touchman等，2001)。SNCA基因登錄號是AF163864,轉錄起始位點在該PAC中的位置29777處。通過參考有關該基因組序列中啟動子和調節區的位置的序列數據和上述位置信息，可容易地鑑定人SNCA基因中的其他適宜的啟動子和/或調節部分。人FKBP2基因的基因組序列(智人11號染色體基因組重疊群)可見於GenBank登錄號NTJ)33卯3中，且基因組全序列(外顯子和內含子)開始於該基因組序列的位置9314208。因此，通過參考有關該基因組序列中啟動子和調節區的位置的序列數據和上述位置信息，可容易地鑑定FKBP2基因中的適宜啟動子和/或調節部分。人EEF1A1基因的基因組序列可見於GenBank登錄號AL603910(來自6號染色體中克隆RP11-505P4的人DNA序列)中，且基因組全序列(外顯子和內含子)開始於該基因組的位置113397(互補物)。因此，通過參考有關該基因組序列中啟動子和調節區的位置的序列數據和上述位置信息，可鑑定人EEF1A1基因中的適宜啟動子和/或調節部分。人VAMP3基因的基因組序列可見於GenBank登錄號Z98884(來自染色體lp36.21-36.33中RP3-467L1的人DNA序列)，且轉錄起始位點在該基因組序列的位置50661處。因此，通過參考有關該基因組序列中啟動子和調節區的位置的序列數據和上述位置信息，可容易地鑑定人VAMP3基因中適宜的啟動子和/或調節部分。人SNAP25基因的基因組序列見於GenBank登錄號NT011520(智人22號染色體基因組重疊群)中，且基因組全序列(外顯子和內含子)開始於該基因組序列中的位置9347813處。因此，通過參考有關該基因組序列中啟動子和調節區的位置的序列數據和上述位置信息，可容易地鑑定人SNAP25基因中的適宜啟動子和/或調節部分。人RIMS3基因的基因組序列可見於GenBank登錄號AL031289(來自染色體lp33-34.2中克隆RP4-739H11的人DNA序列)，且基因組全序列(外顯子和內含子)開始於該基因組序列中的位置56606處。因此，通過參考有關該基因組序列中啟動子和調節區的位置的序列數據和上述位置信息，可容易地鑑定人RIMS3基因中的適宜啟動子和/或調節部分。人RAB40B基因的基因組序列見於GenBank登錄號NT—086886(智人17號染色體的重疊群)中，且基因組全序列開始於該基因組序列中的位置176808S4處。因此，通過參考有關該基因組序列中啟動子和調節區的位置的序列數據和上述位置信息，可容易地鑑定人RAB40B基因中的適宜啟動子和/或調節部分。人HMGCS1編碼區上遊的其他序列可見於GenBank登錄號NoBC000297中，其是mRNA序列的延伸。編碼區開始於該序列的位置106處。人HMGCSl基因的適合啟動子和/或調節部分位於GenBank登錄號BC000297中的序列的最初105個核苷酸處。不管怎樣，通過參考有關該基因組序列中啟動子和調節區的位置的序列數據和上述位置信息，技術人員可容易地鑑定有關人HMGCS1啟動子區域的其他信息。人SCD5編碼區上遊的其他序列可見於GenBank登錄號NoNM一001037582中，其是mRNA序列的延伸。編碼區開始於該序列的位置236處。人SCD5基因的適合啟動子和/或調節部分位於GenBank登錄號NM—001037582中的序列的最初235個核苷酸處。不管怎樣，通過參考有關該基因組序列中啟動子和調節區的位置的序列數據和上述位置信息，技術人員可容易地鑑定有關人SCD5啟動子區域的其他信息。人ATP2A2基因的基因組序列可見於GenBank登錄號NT—009775(智人12號染色體的基因組重疊群)。人ATP2A2基因的適合啟動子和/或調節部分，通過參考有關該基因組序列中啟動子和調節區的位置的序列數據和上述位置信息，技術人員可很容易地鑑定。人HRMT1L1基因的基因組序列可見於GenBank登錄號AP001761(智人21q染色體基因組DNA)，且其基因組全序列(外顯子和內含子)開始於該基因組序列的558處。因此，通過參考有關該基因組序列中啟動子和調節區的位置的序列數據和上述位置信息，可容易地鑑定人HRMT1L1基因中的適宜啟動子和/或調節部分。通常，報導基因表達的增加表示，該化合物是Bax介導的細胞凋亡的抑制劑，而報導基因表達的降低則表示，該化合物是Bax介導的細胞凋亡的啟動子。因此，本發明包括鑑定能調節細胞中Bax介導的細胞凋亡的化合物的方法，如本發明的第十七方面所述，所述方法包括鑑定調節基因表達的化合物，所述基因選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和轉錄信息具有含有SEQIDNo:16,SEQIDNo:17,SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的cDNA序列的基因；並在Bax介導的細胞凋亡分析中檢測已鑑定的化合物。在上文和實施例中描述了適宜的基於細胞的和體內細胞凋亡分析。第十八方面，本發明提供了鑑定能調節Bax介導的細胞凋亡的化合物的方法，所述方法包括提供在可誘導啟動子的調控下表達功能性Bax多肽且在天然存在的啟動子和/或調節序列的調控下表達選自如下多肽的細胞FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB權、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽；將細胞在誘導功能性Bax多肽表達的條件下與候選化合物接觸；以及進行細胞凋亡分析，其中，與未和候選化合物接觸的細胞相比，細胞凋亡水平的變化表示該化合物能調節Bax介導的細胞凋亡。上文和實施例中描述了適宜的基於細胞的和體內細胞凋亡分析。本發明人認為，細胞凋亡水平的增加表示，該化合物抑制從其天然存在的啟動子開始的多肽表達，因此是一種促凋亡化合物。細胞凋亡水平的降低表示，該化合物增強或促進了從其天然存在的啟動子開始的多肽表達，因此是Bax介導的細胞凋亡的抑制劑。在本發明的這一方面，細胞通常是哺乳動物細胞，優選人細胞。細胞優選來自已用構建體轉染的細胞系，該構建體含有在可誘導或組成型啟動子的調控下編碼功能性Bax多肽的多核苷酸。優選，細胞是腦細胞，更優選海馬細胞。適宜的細胞系包括SH-SY5Y和PC3細胞。另外，大鼠和小鼠海馬衍生性原發細胞可購買獲得。優選，細胞在多肽的天然存在的啟動子和/或調節序列的調控下，在缺少候選化合物時，表達選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的多肽。這樣，候選化合物可上調或下調多肽的表達，分別導致Bax介導的細胞凋亡水平的降低或增加。可選地，細胞在天然存在的啟動子和/或調節序列的調控下，在缺少候選化合物時，可不表達選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、固GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的多肽。這樣，僅候選化合物上調多肽的表達可被檢測到，從而，鑑定出抑制Bax介導的細胞凋亡的化合物。第十九方面，本發明提供了篩選與多肽結合的化合物的方法，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1，和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽，或其適宜的抗凋亡衍生物，所述方法包括將多肽與候選化合物接觸；檢測含有多肽和候選化合物的複合體的存在；以及任選地，鑑定任何結合於多肽的化合物。優選，FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2和HRMT1L1多肽，以及含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽，是如上文所述的人多肽。這些多肽的適宜的抗凋亡衍生物也如上文所述。可以理解，與選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、固GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的多肽或其適宜的抗凋亡衍生物結合的化合物可調節所述多肽的活性。通常，與多肽結合的化合物將抑制或拮抗多肽的活性。然而，在某些情況下，與多肽結合的化合物將增強或促進多肽的活性。在優選的實施方案中，候選化合物其本身就是肽或多肽。與這些多肽結合的適宜肽或多肽可使用本領域中已知的方法來鑑定。一種方、法，其由Scott和Smkh(1990)5We"ce249，386-390andCwirla等(1990)/Voc.7Va//.JcW.5W.87，6378-6382公開，包括篩選大量絲狀噬菌體的文庫，如M13或fd，所述文庫的每一個成員具有不同的與該噬菌體表面上的蛋白融合的肽。利用重複結合方案，選擇出那些與多肽結合的文庫的成員，且一旦將結合最緊密的噬菌體純化，則可通過對編碼表面蛋白融合的DNA測序來簡單地測定多肽的序列。另一個可用的方法是可從Novagen，Inc.,597ScienceDrive,Madison,WI53711購買獲得的NovaTope(TM)系統。該方法基於產生細菌克隆的文庫，其中每一個克隆都穩定地表達從候選蛋白衍生的小85肽，認為結合肽存在於該候選蛋白中。通過標準的提升法(standardliftmethods)利用抗體或其他結合劑作為探針，來篩選所述文庫。通過DNA測序來測定結合肽的準確胺基酸序列，可直接分析陽性克隆。利用Lam等(1991)Nature354,82-84公開的與單個物種多肽結合的玻璃珠文庫或Houghten等(1991)Nature354，84-86所公開的合成多肽組合文庫或Pimrng等在US5143854中公開的固體支持物上的單個合成多肽序列矩陣的進一步方法也可用於鑑定結合的肽。可以理解，特別優選能高通量操作的篩選分析。實例包括基於細胞的分析和蛋白-蛋白結合分析。可以使用基於SPA的系統(親近閃爍檢測(ScintillationProximityAssay);AmershamInternational)。例如，可按如下進行鑑定能調節蛋白激酶活性的化合物的檢測。製備含有閃爍體和可磷酸化的多肽的玻璃珠。將所述玻璃珠與含有蛋白激酶和"P-ATP或^P-ATP的樣品以及試驗化合物混合。通常，在96孔板中完成這個步驟。隨後，利用適宜的閃爍計數器，用適合3^或"PSPA分析的已知參數，對平板進行計數。僅與閃爍體結合的"P或"P，即僅僅和多肽結合的"P或3^，可以得到檢測。也可利用此類分析的變體，如其中，多肽是通過與抗體結合而固定於閃爍玻璃珠上。檢測多肽/多肽相互作用的其他方法包括，超過濾和電噴霧質譜(ionspraymassspectroscopy)/HPLC法或其他的物理和分析方法。可以利用例如本領域熟練的技術人員熟知的螢光能量共振轉移(FluorescenceEnergyResonanceTransfer,FRET)法，其中，兩種螢光標記的實體的結合可通過測量彼此相互接近時螢光標記的相互作用進行測量。檢測多肽與大分子例如DNA、RNA、蛋白和磷脂的結合的可選方法，包括表面等離子體共振檢測(surfaceplasmonresonanceassay),例如，Plant等(1995)」朋/"歷oc/jew226(2),342-348所述的。可利用對多肽進行標記的方法，如用放射性或螢光標記的多肽。鑑定能與選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的多肽或其適宜的抗凋亡衍生物結合的化合物的另一種方法是這樣一種方法其中讓多肽與化合物接觸，並檢測和/或測量任何與所述多肽結合的化合物。可測定所述化合物與多肽的結合常數。檢測和/或測量(定量)化合物與多肽結合的適宜方法對本領域技術人員而言是熟知的，並且可利用如能高通量操作的方法如基於晶片的方法來進行。NewerVLSIPSTM技術能產生非常小的晶片，其含有數以萬計或更多的不同分子探針。這些生物晶片或陣列將探針排成陣列，每一個探針分配以具體的位置。產生的生物晶片在每個位置都具有例如10jimi的等級(scale)。晶片可用於測定候選化合物是否能與晶片上的任何探針相互作用。在選定的試驗條件下，將陣列暴露於候選化合物中後，掃描裝置可檢査陣列中的每個位置並測定候選化合物是否與該位置的探針相互作用。生物晶片或陣列可用於各種篩選技術，用於獲得有關探針或候選化合物的信息。例如，肽文庫可用作探針來篩選藥物。可將肽暴露於受體中，並鑑定與受體結合的那些探針(美國專利5,874,219)。靶向結合和調節這些多肽活性的蛋白的另一種方法是酵母雙雜交系統(Fields&Song(1989)Atowre340:245-246)，其中可用本發明的多肽"捕獲"結合蛋白。期望體內鑑定出調節選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的多肽。因此，可以理解，可選擇用於所述方法中的試劑和條件，以便選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽的多肽，或其適宜的抗凋亡衍生物，與相互作用多肽之間的相互作用，與天然存在的多肽和天然存在的相互作用多肽之間的相互作用在體內實質上是相同的。可選地，所述方法可用作"文庫篩選"方法，其是本領域中技術人員熟知的術語。因此，例如，本發明的篩選方法可用於檢測(且任選地鑑定)能體內表達多肽的多肽活化劑的多核苷酸，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、固GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNO:19的多核苷酸編碼的多S太。在適宜載體內的表達文庫的等分試樣可用於檢測產生所需結果的能力。可以理解，在本文所述的篩選方法中，鑑定的化合物可以是類藥化合物(drug-likecompound)或用於研發類藥化合物的先導化合物(leadcompound)。術語"類藥化合物"對本領域熟練的技術人員而言是熟知的，並包括的意思是具有使其適宜在醫學上使用的特徵的化合物，如作為藥物中的活性成分。因此，例如，類藥化合物可以是有機化學技術，較不優選分子生物學或生物化學技術合成的分子，且優選是小於5000道爾頓且水溶性的小分子。類藥化合物可額外地具有與具體蛋白或多種蛋白選擇性相互作用的特徵，並且是生物可利用的和/或能滲透靶細胞膜，但可以理解，這些特徵並非必需的。術語"先導化合物"同樣對於本領域熟練的技術人員而言是熟知的，包括的意思是儘管自身不適宜用作藥物(例如，因為其對既定的靶標具有很弱的效力，在其作用具有非選擇性，不穩定，難溶，難以合成，或具有不良的生物有效度)但可為設計具有更多期望特徵的其他化合物提供起始點的化合物。因此，本發明篩選方法的實施方案提供了鑑定藥類化合物或用於研發類藥化合物的先導化合物的方法，所述化合物會在體內調節多肽的活性，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽，所述方法包括將試驗化合物與多肽或其適宜的抗凋亡變體接觸，測定多肽的活性與在缺少試驗化合物的情況下的多肽或其抗凋亡片段的活性相比是否改變。本發明第十七、十八和十九方面的篩選方法還包括檢測鑑定的化合物在細胞凋亡模型或適宜的疾病模型中抑制Bax介導的細胞凋亡的能力。另外或可選地，本發明第十七、十八和十九方面的篩選方法還包括修飾鑑定的化合物並在細胞凋亡模型或適宜的疾病模型中檢測修飾的化合物。上文或實施例中描述了細胞凋亡的適宜模型。來自阿爾茨海默氏病動物模型的細胞培養物，其可用於篩選和檢測藥效，描述於美國專利申請第20050172344號中。剌激性神經系統疾病的動物模型尤其是AD描述於美國專利申請第20050102708中。神經變性病的其他模型，包括阿爾茨海默氏病的動物模型、亨廷頓病的動物模型、帕金森氏病的齧齒和靈長類動物模型，以及遺傳/非遺傳髓鞘形成障礙(dysmyelination)模型，己由Boulton，Baker&Butterworth(1992)在AnimalModelsofNeurologicalDisease,I:NeurodegenerativeDiseases(HumanPress,ISBN:0-89603-208-6)中做了描述。糖尿病、癌症、心血管疾病的適宜動物模型在本領域內是熟知的，包括化學誘導的糖尿病模型；癌症裸鼠SCID模型，其將小鼠或人癌症細胞注射入動物中；以及心血管疾病的心室壓力肥厚超負荷模型(ventricularhypertrophypressureoverloadmodels)。如本領域人員可理解的，所述方法可還包括將具有在細胞凋亡模型中特別是在體內模型中抑制Bax介導的細胞凋亡能力的化合物配製成藥學上可接受的組合物。同樣，所述方法還可包括將在疾病模型特別是體內模型中具有治療效用的化合物配製成藥學上可接受組合物的方法。將本文引用的所有文獻的全部內容以參考的方式併入本文。本說明書中所列和討論的以前公開的文獻，不必理解為承認該文獻是本領域狀態的一部分或公知常識。結合下列附圖和實施例，將對本發明進行更詳細的描述。圖1是構建體pBGALlMs的示意圖。圖2是構建體yIPLEUGl的示意圖。圖3是構建體yIPADEGl的示意圖。圖4是構建體yIPTRPGl的示意圖。圖5是構建體yIPHISGl的示意圖。圖6是構建體iLEUBAX的示意圖。圖7是構建體iADEBAX的示意圖。圖8是構建體汀RPBAX的示意圖。圖9是構建體iHISBAX的示意圖。圖10是構建體pcDNA3.1/Bax的示意圖。圖11是構建體pIRESEGFP/BAX的示意圖。圖12是構建體pSYI214的示意圖。圖13是構建體pRS426/GALlMS的示意圖。圖14是構建體pRS426/PGKMS的示意圖。圖15是構建體pRS416/GALlMS的示意圖。圖16是構建體pRS416/PGKMS的示意圖。圖17是構建體426/GALBcl2的示意圖。圖18是構建體426/GALBcl-xL的示意圖。圖19是構建體426/PGKBcl2的示意圖。圖20是構建體426/PGKBcl-xL的示意圖。圖21是構建體416GAL/Bc12的示意圖。圖22是構建體416GAL/Bcl-xL的示意圖。圖23是構建體416PGK/Bc12的示意圖。圖24是構建體416PGK/Bcl-xL的示意圖。圖25.對2-micron和著絲粒質粒上產生的Bcl-2和BcI-xL營救Bax介導的細胞生長抑制的比較(圖17-24)。通過轉化或經由雜交(mating)將Bcl-2和Bd-xL基因引入不同的Bax菌株(參閱表4)。製作不同Bax菌株、質粒和其組合的不同觀察結果。A板(PanelA):SD或SG上的斑點試驗。b板通過(背景時間一生長時間y生長時間，來獲得"生長"得分，其中"生長時間"是在SG培養基上觀察到全部陽性斑點的天數。"背景"意指用空質粒轉化的菌株(圖13-16)。"背景時間"通過觀察到第一個假陽性克隆的時間天數對"背景時間"進行評分。和其他的菌株相比，W303baxleu為低背景和高生長。兩種不同的啟動子和戶GW在所有菌株中都不產生任何顯著的差別，P>0.05。圖26是構建體BluKS/p21-HA的示意圖。圖27是構建體Blu/Bcl2Al-HA的示意圖。圖28是構建體Blu/FKBP2-HA的示意圖。圖29是構建體Blu/SNCA-HA的示意圖。圖30是構建體Blu/VAMP3-HA的示意圖。圖31是構建體Blu/EEFlAl-HA的示意圖。圖32是構建體Blu/Bclxl-HA的示意圖。圖33是構建體pcD/Bcl2Al-HA的示意圖。圖34是構建體pcD/FKBP2-HA的示意圖。圖35是構建體pcD/SNCA-HA的示意圖。圖36是構建體pcD/VAMP3-HA的示意圖。圖37是構建體pcD/EEFlAl-HA的示意圖。圖38是構建體pcD/BclxL-HA的示意圖。圖39(A)是構建體pSYE224的示意圖。圖39(B)是構建體pYES2(Invitrogen)的示意圖。圖40是構建體pSYE239的示意圖。圖41是構建體224/Bcl2Al-HA的示意圖。圖42是構建體224/FKBP2-HA的示意圖。圖43是構建體224/SNCA-HA的示意圖。圖44是構建體224/VAMP3-HA的示意圖。圖45是構建體224/EEF1A1-HA的示意圖。圖46是構建體224/BclxL-HA的示意圖。圖47是構建體239/Bcl2Al-HA的示意圖。圖48是構建體239/FKBP2-HA的示意圖。圖49是構建體239/SNCA-HA的示意圖。圖50是構建體239/VAMP3-HA的示意圖。圖51是構建體239/EEFlAl-HA的示意圖。圖52是構建體239/BckL-HA的示意圖。圖53.在轉化入Bax菌株W303baxleu後，檢驗這些基因的營救能力。通過將5pl等分試樣(即相同數目的細胞)點樣於SD和SG板上進行斑點試驗。共表達新基因和BAX的細胞在SG板上的成長程度不同。這與僅含BAX但不含空載體的細胞進行了對比。如預料的那樣，這些細胞並不會生長。相似的結果在正在04丄/和PG^/啟動子調控下表達的新基因中獲得。圖54是存在HA標記性蛋白的免疫細胞化學的代表性圖。圖55.A板示出Bax轉染後指示時間內的死亡細胞百分比。B板示出Bax或載體轉染後第三天的存活細胞的相對百分比。圖56.新蛋白對Bax介導的死亡的營救能力。在Bax轉染後，在光學顯微鏡下，用血球計數器對含有或不含有營救蛋白的存活細胞(胎盤藍(trypanblue)陰性細胞)進行計數。根據上述公式計算Bax介導的死亡。與僅含有載體的細胞系相比，表達新近發現的抗凋亡基因的細胞表現出Bax介導死亡的顯著降低(屍<0.01)。在該圖中，在缺少或存在新近發現的抗凋亡基因時，對每一個經歷了Bax介導的死亡的細胞系中的細胞百分比進行了注釋。圖57.Bax-轉染後在穩定表達人Bcl-2A1、FKBP2、SNCA、VAMP3、EEF1A1和BcI-xL的HEK293細胞中的細胞凋亡的定量TUNEL-FACS分析。如實施例中所述，培養和分析細胞，並通過流式細胞儀檢測DNA斷裂(其導致細胞凋亡)。在該圖中，對存在或缺少新近發現的抗凋亡蛋白的情況下經歷了細胞凋亡的細胞的百分比進行了注釋。將H202處理的細胞作為陽性對照，因為已知H202在所有的真核細胞中都會誘導完全的細胞凋亡。Y軸表示FITC-dUTP的螢光強度，而X軸表示DNA含量。圖58.新基因抑制Bax誘導的細胞色素c釋放。轉染後第三天，將細胞用抗細胞色素c單克隆抗體標記，隨後用Alexa488共軛的羊抗鼠IgG標記。通過螢光顯微鏡，利用FITC特異性過濾器，將標記的細胞可視化。點狀的細胞色素C標記模式代表細胞色素C的線粒體定位，而彌散的標記模式代筆了其胞質溶膠的定位。用Bax轉染後但不含Bax營救蛋白的細胞觀察到了胞質溶膠細胞色素C的強烈標記。另一方面，共表達Bcl-2A1、FKBP2、SNCA、VAMP3、EEF1A1或Bcl-xL以及Bax的細胞系顯示了胞質溶膠細胞色素C定位模式的降低。圖59.新Bax營救基因抑制Bax誘導的A甲m損失。在新基因表達或不表達的情況下，將Bax轉染至HEK293細胞系。如所述，將轉染體(transfectants)溫育72小時。通過流式細胞儀用DiOC6(3)染色，評估A屮m。用H202處理的HKE293觸發了陰性或陽性對照。在流式細胞儀特徵譜中，y軸表示分析的事件(10,000)，x軸表示螢光強度的對數；百分比表示ATm損失。圖60.新基因降低Bax誘導的細胞內ROS。與僅用空載體(Vector)表達Bax的細胞相比，Bcl-2A1、FKBP2、SNCA、VAMP3、EEF1A1禾卩Bcl-xL的表達導致螢光強度降低。用pcDNA3.1(+)轉染的親本HEK293細胞為陰性對照，表示為100%(CTL)，而H202處理的HEK293為陽性對照。圖61.GALlMS構建體的多核苷酸序列一^zo/-&c/片段(SEQIDNo:1);利用酵母偏愛密碼子合成的人83乂0(^^//￥^/片段(SEQIDNo:2);以及人Baxa片段編碼的多肽序列(SEQIDNo:3)。圖62.從Bax介導的細胞凋亡抑制劑酵母篩選中獲得的"命中(hits)"多核苷酸序列。列舉的序列為SCNA(SEQIDNo:5)、FKBP2(SEQIDNo:6)、SNAP25(SEQIDNo:9)、EEF1Al(SEQIDNo:7)、VAMP3(SEQIDNo:8)、RIMS3(SEQIDNO:10)、RAB40B(SEQIDNo:11)、HMGCSl(SEQIDNO:12)、SCD5(SEQIDNo:13)、ATP2A2(SEQIDNo:14)和HRMTILI(SEQIDNo:15)。對於ATP2A2而言，分離的片段為3200bp，其已部分測序。利用5，和3'引物獲得的序列與參照資料庫序列在顯示區域相互匹配。圖63.如SEQIDNO:16中所界定的來自之前功能未知的人染色體3p的多核苷酸序列。如箭頭所示，兩個可讀框存在於SEQIDNO:16中。也示出了限制酶位點。圖64.如SEQIDNO:17中所界定的來自之前功能未知的人染色體22qll.22-12.2的多核苷酸序列。如箭頭所示，4個可讀框存在於SEQIDNO:17中。也表示出了限制酶位點。圖65.如SEQIDNO:18中所界定的來自人線粒體分離物WH6967的多核苷酸序列。如箭頭所示，兩個可讀框存在於SEQIDNO:18中。也示出了限制酶位點。圖66.如SEQIDNO:19中所界定的來自人線粒體分離物S1216的多核苷酸序列。如箭頭所示，兩個可讀框存在於SEQIDNO:19中。也示出了限制酶位點。圖67.人EEF1A1(SEQIDNo:22)和人EEF1A2的胺基酸序列的比較，顯示92.6%的序列同一性(SEQIDNo:23)。具體實施例方式實施例l:產生DNA構建體產生允許促凋亡Bax表達的構建體DNAf遂導SflX玄,母^^^W遊燊經沐基賴座表這遊教達沐從ATCC(LGCPromochem，Middlesex,UK)購買酵母整合載體pRS305(具有作為選擇性標記的釀酒酵母基因)、pRS402(具有作為選擇性標記的釀酒酵母JZ)^2基因)和pRS404(具有作為選擇性標記的釀酒酵母7Ti5/基因)。A7wASbc/GALlp-MS片段，其含有釀酒酵母基因啟動子片段和c-w，標籤片段(M)居前的Sf/C2基因終止子片段(S)，分離自構建體pBGALlMS(—種pBlueScriptKS(+)衍生物；圖1;圖61中SEQIDNO:1所示的GAL1MS序列)，並且連接於^7zo/-&c/消化的pRS305、pRS402和pRS404載體，從而可以在LEt/2，」D￡2，7TP/和染色體基因座處整合。4種所得的質粒yIPLEUGl(圖2)，yIPADEGl(圖3)，yIPTRPGl(圖4)和yIPHISGl(圖5)在啟動子的3'端和連接於SUC終止子的c-myc標籤的5'端之間具有唯一的Baw/f/,^e/和/或J^fl/限制位點。用Bami7/和5^e/消化質粒ylPLEUGl(圖2)、ylPADEGl(圖3)、ylPTRPGl(圖4)和yIPHISGl(圖5)，並且將它們各自連接於Sox基因的5g///，￥Z)fl/片段，該片段分離自質粒pUC19A/Bax-MS(其中利用酵母偏愛密碼子已經合成了51基因，SEQIDNo:2(Bennetzen&Hall,1982))。將所得的含Bax質粒(BAX-harbouringplasmid)命名為iLEUBAX(圖6)，iADEBAX(圖7),iTRPBAX(圖8)和iHISBAX(圖9)。所有的4種質粒在它們的酵母選擇標記中具有唯一的限制位點，從而可以為了讓這些質粒整合入各自的染色體基因座而將這些質粒線性化。麟動激潘應頓成凝這紐麟辦在pcDNA3.1(+)中亞克隆從SHSY-5Y成神經細胞瘤細胞中分離的BAX基因基因的Eco77-la/片段是用反轉錄酶介導的(RT)PCR,從總mRNA克隆，從人成神經細胞瘤細胞系SHSY-5Y分離。分離的ALY基因一旦被翻譯，就會精確對應NCBI資料庫中報導的Baxa蛋白。該片段用於在用五coW和屈a/消化的pBluescriptKS(+)(Stratagene)中進一步亞克隆，以獲得質粒pKS(+)/EcoRI-Xbal/Bax。從構建體pKS(+)/EcoRI-Xbal/Bax中分離編碼包括起始和終止密碼子的全長SAY基因的Eco^/-A^a/^flx基因插入片段，並連接於五co^，YZ;a/消化的載體pcDNA3.l(+)(Invitrogen，Paisley,UK)，以獲得pcDNA3.1/Bax(圖10)。在pIRES2-GFP中亞克隆分離於SHSY-5Y成神經細胞瘤細胞的BAX基愚質粒pIRES2-EGFP(ClontechLaboratories,Inc.,Oxford,UK)是雙順反子載體(bicistronicvector),其允許快速且有效的選擇表達人Bax蛋白以及選擇標記、增強型綠色螢光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)的陽性克隆，以便讓所有表達EGFP的轉染細胞(螢光顯微鏡監控)也有效地表達Bax蛋白。pIRES2-EGFP載體含有腦心肌炎病毒(encephalomyocarditisvirus,EMCV)的核糖體內部進入位點(internalribosomeentrysite,RES),該位點允許一種信使RNA(ClontechLaboratories)開始兩個可讀框翻譯。核糖體可在5'端進入雙順反子mRNA而翻譯^R4X，或在ECMVIRES處進入而翻譯選擇標記從構建體pKS(+)/EcoRI-Xbal/Bax中分離五co77^Y&a/凡儀基因插入片段，其編碼分離於SHSY-5Y(參閱1丄2.1)的全長5I基因且包括起始密碼子(ATG)和終止密碼子(TAG)，並將其連接於EcoRI-Xbal消化的載體pSP73(Promega)，以獲得質粒pSP73/EcoRI-Xbal/Bax。從pSP73/EcoRI-Xbal/Bax(Sg///位點位於￡coR7的上遊，且o/位於pSP73中的下遊)中分離A4X基因片段，並將其連接於^^///-&7//消化的口1虹82-￡0載體。所得的質粒pIRES2-EGFP/Bax(圖11)可以同時表達Bax和EGFP。產生其他用於酵母細胞凋亡篩選(yeastapoptosisscreen,YAS)的允許表達抗凋亡蛋白的DNA構建體從構建體pBGALlMS(圖1)和pSYI214(圖12)中分離GALlp-MS片段(即啟動子以及c-myc標籤序列居先的SUC7終止片段，所述c-myc標籤序列以終止密碼子結束)和PGKp-MS片段(即PG^啟動子以及c-myc標籤序列居先的St/C7終止片段，所述c-myc標籤序列以終止密碼子結束)的^20/-5^/片段。將該片段連接於^70/-5^/消化的載體？1^416和？118426(兩種質粒都從ATCC獲得)，以獲得質粒pRSC6/GALlMS(圖13)、pRS426/PGKMS(圖14)、pRS416/GALlMS(圖15)和pRS416/PGKMS(圖16)。質粒pRS416是單拷貝著絲粒載體，而pRS426是多拷貝2-micron載體。將從質粒pSP73/BglII-Xbal/Bc12和pSP73/BglII-Xbal/Bc1-xL中分離的、編碼人和人5c/-xZ基因的Sg/^-^a/消化的片段連接於Baw///-*"-消化的pRS426/GALlpMS或pRS426/PGKpMS，以獲得質粒426GAL/Bc12(圖17)、426GAL/Bcl-xL(圖18)、426PGK/Bc12(圖19)、426PGK/Bcl-xL(圖20)。同樣，將編碼人和人Sc/-xL基因的消化的片段連接於"aw/ZZ-^e/消化的pRS416/GALlpMS或pRS416/PGKpMS，獲得質粒16GAL/Bcl2(圖21)、416GAL/Bcl-xL(圖22)、416PGK/Bcl2(圖23)、416PGK/Bcl-xL(圖24)。實施例2:優化用於從人海馬中選擇新抗凋亡基因的酵母篩選系統(YAS)酵母生長條件YPD(1%Bacto酵母膏、2%Bacto蛋白腖和2%葡萄糖)是豐富培養基。合成的最低培養基(SC)由0.67。/。酵母氮源(Difco)和2W葡萄糖(SD)或2%半乳糖(SG)組成。向依賴於菌株所攜帶的質粒而供具體菌株生長的SD或SG中加入適當的生長補充物(腺嘌呤、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、尿嘧啶或色氨酸)。將補充物保存為母液並加入到適當體積的培養基中。下文給出的母液濃度和母液體積是製備l升培養基所需的。腺嘌呤、尿嘧啶、色氨酸、組氨酸的終濃度是20mg/1，賴氨酸、酪氨酸是30mg/1，亮氨酸是100mg/1。建立酵母抗凋亡篩選系統為了選出適合酵母細胞凋亡篩選(YAS)的最佳酵母菌株，進行了大量平行試驗。to齢蘑樣用4種釀酒酵母菌株整合人BAX基因(SEQID:2)，該基因是在酵母基因組的不同染色體基因座中利用酵母偏愛的密碼子化學合成的。該酵母菌株是(1)HT444(MAT-a，leu2-3,leu2-2,112his4-519,ura3,lys2)，(2)W303a(MAT-aade2-l,trpl-1,leu2-3,leu2-112,his3-ll,his3-15,ura3-l)，tableseeoriginaldocumentpage97tableseeoriginaldocumentpage98,遂旁汰眾臘遊雜舒嚴遂理想地，所有的菌株應該在SD(即含有葡萄糖以及適當的生長補充物的最低生長培養基)上生長，但不在SG(含有半乳糖以及適當生長補充物的最低生長培養基)上生長，因為半乳糖會誘導Bax蛋白表達，從而中止細胞生長和殺死酵母細胞。當將106細胞接種於直徑10cm的平板上時，在半乳糖中在正常的生長調節下(30。C，72h)，列於表2中的所有菌株不能像對照菌株(其含有空載體而沒有^4^)一樣生長。然而，為了獲得用於從由任何選擇的人組織製備的cDNA文庫中篩選潛在的抗凋亡基因的嚴緊選擇系統，應該有這樣一種菌株，其當將相對大量的細胞接種於平板上(即將>108的細胞接種於直徑10cm的平板上)並在30°C下溫育72h時，不顯示任何生長，如在篩選方法中所做的。令人意想不到的是，發現菌株W303baxleu非常適宜篩選，如表3中的結果所示。它即使在30°(:將>108的細胞溫育7天後，在半乳糖中也不會生長。Table3:選擇YAS酵母菌株tableseeoriginaldocumentpage98tableseeoriginaldocumentpage99人Bel-xL和Bcl-2是已知的抗凋亡蛋白。在04ZJ(強誘導型)和PGi:7(強組成型)啟動子(圖17-24中所述的質粒)的調控下，已在著絲粒(單拷貝)和2-micron(多拷貝)載體中亞克隆了人和基因。所有的質粒都攜帶用於在酵母中選擇的基因。將質粒在含Bax菌株、W303baxleu以及W303alpha中轉化。出於雜交試驗的目的，單獨進行後者的轉化，其中將BAX基因引入Mat-a雜交型菌株內，而營救抗凋亡基因和Sd-x丄則由另一個相反的Mat-a雜交型菌株產生。為了將含抗凋亡基因的質粒直接轉化入含^4X的酵母菌株，收集W303baxleu菌株的5xl(^個細胞，並洗滌細胞團(cellpellet),除去用於過夜培養的YPD培養基。將100pg變性鮭魚精子DNA(Sigma)和0.5pg質粒DNA(含抗凋亡基因&/-2或JBc/-x丄；圖17-24)加入成團的細胞中，隨後加入500)nlPEG(聚乙二醇)-3500溶液(40%PEG;0.1M醋酸鋰pH7.5;10mMTris-HClpH7.5;lmMEDTApH7.5)，並加入DMSO直到5%(v/v)的終濃度。在Thermo攪拌器(Eppendorf)上溫育15分鐘後，400rpm、25°C離心，將細胞在42。C、10%乙醇(終濃度)中熱休克15分鐘。用500)il的TEpH7.5洗滌兩次後，將細胞重懸浮於相同體積的pH7.5TE中。將200pl重懸浮細胞直接塗布於含必需胺基酸和核苷補充物的SD和SG平板上。將所述平板在30°C溫育3天(SD)和約20天(SG)。將含人^c/-2和&/-x丄基因(圖17-24)的質粒轉化入W303a(Mat-a)酵母菌株中，以便轉化體可與W303baxleu細胞雜交，據此可測量雜交後它們營救凡4X的能力。首先將含和&"丄的質粒轉化體(WM3+)在SD培養基中30°C下培養3天，所述培養基含有亮氨酸、組氨酸、腺嘌呤和色氨酸。將來自每次轉化的6個單個菌落的一小勺細胞與100iilTE混合。將W303baxleu(Mat-a，SA^)中相似數量的細胞加入到Mat-a細胞混合物CBc/-2+01"&/^廣)中，並充分混合。將混合物接種於YPD平板，30。C溫育24h，隨後在僅含有組氨酸、腺嘌呤和色氨酸的SD平板上選擇。檢驗所有轉化體(直接或雜交後)中止Bax介導的細胞生長抑制的能力。比較菌株的(a)營救功效和(b)生長速度。結果顯示於表4和圖25中。表4:用於測定供篩選來自任何人組織、細胞或任何生物體基因組的cDNA文庫的最佳組合的Bax菌株100tableseeoriginaldocumentpage101*八=腺嘌呤，}1=組氨酸，&=賴氨酸，1^=亮氨酸，11=尿嘧啶，w-色氨酸實施例3:在人海馬中篩選抗凋亡基因教義廢與cZWJ，利用BioCatGmbH(Heidelberg,Germany),常規合成人海馬cDNA文庫。該cDNA文庫由全部的人成年人正常腦海馬mRNA製成。利用oligo(dT)-Mf/引物和M-MLV-RNaseH-反轉錄酶進行第一條鏈cDNA的合成。用隨機連接體引物和KlenowExo-DNA聚合酶進行第二條鏈的合成。對於定向克隆，粘末端cDNA首先用NotI消化，隨後在1.3%瓊脂糖凝膠上進行大小分級。在洗脫cDNA後，將大於0.6kb的cDNA連接入Wof/和^a8/消化的酵母表達載體pSYE224(圖39)中。獲得質粒cDNA文庫作為甘油保藏物(glycerolstock)。為了保持這個文庫的所有遺傳信息，採用利用半固體擴增的方法。將1000ml高壓滅菌的2xLB瓊脂糖(溶於雙蒸水中的0.27%SeaPrep瓊脂糖(FMC)，2%蛋白腖，1%酵母膏，1。/。NaCl)在37。C的水浴中冷卻2h。加入1.22xl(^個初級cDNA轉化體(其代表甘油保藏溶液)和0.2g氨苄青黴素，並在攪動板(strirrerplate)上完全混合2min。在冰上溫育lh後，將培養瓶輕輕地移入放置於30°C的重力流式孵化器(gravityflowincubator)中，並無擾動溫育45h。隨後用QIAGEN質粒Maxi-prep試劑盒收集細胞，並製備純化的DNA。在DNA純化前，保存甘油保藏物溶液。廢與cDA^文,遊,資存眾,廨遂&x拔絲存眾沐收集SD(含有組氨酸、腺嘌呤、尿嘧啶和色氨酸)液體培養基中處於對數生長中期的(mid-logarithmicphase)的酵母菌株W303baxleu的培養物，並用100mM醋酸鋰溶液洗滌。將轉化混合物加入含有"109個細胞的細胞團中。轉化混合物含有240piPEG-3500(50%w/v,Sigma)、36pi1.0M醋酸鋰、50pl單鏈DNA(新煮沸的，2.0mg/ml，Sigma)、33pl無菌雙蒸水和1pl(1pg/pl)cDNA文庫DNA。在使用前，充分混合該混合物。將細胞懸浮物在30。C振蕩溫育30min。收穫轉化體，並在含有半乳糖的合成缺陷型培養基上直接選擇，該培養基缺少亮氨酸和尿嘧啶但含有組氨酸、腺嘌呤和色氨酸(即SG+HAW)。將轉化混合物的等分試樣也塗布於SD+HAW平板上，以測定轉化效率。隨後通過複製平板，利用切成正方形碎片的無菌絨布(velvetcloth)，在SD+HAW上，篩選該SD+HAW平板上的轉化體。重複轉化幾次，直到獲得單個的轉化體，該轉化體是存在於最初cDNA文庫中的代表性克隆數量的3倍多。以此方式，可以確定在酵母細胞凋亡檢測(yeastapoptosisassay,YAS)中篩選出了存在於cDNA文庫中的所有cDNAs。單獨收集SG+HAW平板中的Bax抗性菌落。i(^/x貧絲存眾#^》庸/)^4從SG+HAW平板中挑選Bax抗性菌落，並在1mlYPD液體培養基中30°C下過夜培養。在離心機中離心，收穫細胞，並重懸浮於500^的1M山梨醇、0.1MNa2EDTA(pH7.5)中。在與20pl2.5mg/mlZymolyase100T(FisherScientific)37°C下一起溫育1h後，離心細胞，並重懸浮於500pl的50mMTris-Cl(pH7.5)、20mMNa2EDTA和50^10%SDS中。將混合物在65。C下300rpm振蕩溫育30min。在加入200jil5M醋酸鉀後，將細胞在冰上進一步溫育1h。隨後13,000rpm離心細胞5min，且將上清液在1體積100%異丙醇中沉澱。將空氣乾燥團重懸浮於300pi的TE(pH7.5)中，並與75嗎RNase—起溫育，隨後加入30(il3M醋酸鈉和200(il100%異丙醇。將成團的DNA重懸浮於30^的TE(pH7.5)中，並轉化入感受態的DH5a細菌細胞中。因此，來自所有酵母菌落的質粒DNA，該酵母菌落含有Bax營救基因，通過細菌細胞得以擴增並利用QIAGEN質粒Mini-prep試劑盒得以純化。這些質粒在理論上應該含有新Bax拮抗劑(即新抗凋亡基因)，該Bax拮抗劑存在於人海馬中。Ato營鄉遂糊潔殺微將分離於Bax抗性酵母細胞的所有質粒都轉化回W303baxleu細胞中，如上文實施例2中所述，並接種於SD+HAW平板上。通過將來自每一次轉化的10個單個菌落的100個細胞接種於SD+HAW平板上和SG+HAW平板上，來檢測轉化體真實的Bax營救能力。將平板於30°C溫育2-5天。認為在SD和SG平板上都生長的質粒轉化細胞是斑點試驗陽性的，因此含有能真正營救Bax介導的細胞生長抑制的質粒。斑點試驗陰性質粒視作假陽性。這些質粒含有的基因不能營救Bax，因此從試驗中排除。對在SG平板上存活的酵母細胞進行是否存在Bax基因的檢測，以完全確定斑點試驗陽性質粒確實含有抗凋亡基因。在含有100pmol每一種引物、0.8mMdNTPs、2mMMgCl2和2.5UTaq聚合酶(ABG)的100(il反應體積中進行PCR。在7min、99°C的最初變性期後，進行30次循環，其由95°C變性1min、60°C退火1min30sec和72°C延伸3min組成。將25pi反應物加樣於1%TAE瓊脂糖凝膠上，並通過溴化乙錠染色可視化。用於鑑定Bax的引物是5'引物5，-GGAAGATCTATGGACGGTTCCGGTGAACAA-3'(SEQIDNo:24)。3'引物5，-CTAGTCTAGAACCCATCTTCTTCCAGATGGTC-3,(SEQIDNo:25)。鄉源亡基鵬/f靜禾U用ABI的BigDye終止子領U序^[七學去(teraiinatorsequencingchemistry)(PNACLDNAsequencingservice,LeicesterUniversity),將顯'示Bax營救功倉g的23個質粒進行DNA測序。用於對插入片段進行測序的引物，其在pSYE224(圖39)克隆中得以鑑定，是5，引物5，-CCTCTATACTTTAACGTCAAGGAG-3，(SEQIDNo:26)。3'引物5，-CGTGAATGTAAGCGTGACATAAC-3，(SEQIDNo:27)。利用BLAST測定DNA序列的同源性，BLAST是一種由國家生物技術信息中心'(NationalCenterforBiotechnologyInformation,NCBI)在http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/中進行支持的軟體。翁菜在鑑定Bax抗性菌落的YAS篩選中，3.808><106個轉化體的106個菌落在SG平板上存活。再試驗鑑定假陽性後，保留的23個質粒(21.70%)仍然展示了Bax營救功能。基因列於上文的表1中。蛋白#1to#5的HA標記性DNA序列進一步在酵母和哺乳動物細胞中表達。Bcl-2A1是已知的Bax拮抗劑。我們不清楚有關任何列於表1中的其他基因具有抗凋亡功能的任何報導。實施例4:從人海馬cDNA文庫中鑑定的新抗凋亡基因的表達構建體含HA標記的基本質粒通過在XhoI-EcoRI消化的pBlueScriptKS(+)載體(Stratagene)中，亞克隆含有p2iWAF/，基因(下文稱為p21)的EcoRI-XhoI片段和編碼HA標籤的DNA序列，來製備基本質粒BluKS/p21-HA(圖26)。通過SalI限制位點，將p21WAF1/OT1基因連接於HA標籤序列。HA標籤序列後是終止密碼子。用Spel-Sall或Bamffl-Sall消化上述質粒BluKS/p21-HA,以便亞克隆感興趣的Spel-Sall或BamHI-SalI抗凋亡基因片段(即新基因或用作對照的已知基因)，從而可以讓它們在3，端被HADNA序列標記。該基因片段不含有3'終止密碼子。終止密碼子在HA序列的3'端。鄉動激/潔凝這辦銀從相同的人海馬cDNA文庫中，通過PCR擴增人Bcl-2A1、FKBP2、SNCA(a-突觸核蛋白)、VAMP3和EEF1A1的全長^;^/-^70/片段，根據所述cDNA文庫，所述片段最初被鑑定為抗凋亡基因序列。將擴增的片段克隆至Spe/Ja//消化的BluKS/p21-HA載體中，該載體缺失p21。用於PCR的有義引物含有與編碼序列5'末端互補的6個密碼子、限制位點和共有序列翻譯起始序列(即岡崎序列GCCACC)。用於PCR的反義引物含有與編碼序列3'末端互補的6個密碼子和^7w/限制位點。由Invitrogen(Paisley,UK)合成所有的引物，並列於表5中。在限制酶消化後，將SpeI-XhoIPCR片段克隆至BuKS/p21-HA載體，該載體首先用SpeI和SalI消化，隨後分離缺失p21的載體。將所得的質粒稱為Blu/Bcl2Al-HA(圖27),Blu/FKBP2-HA(圖28)，Blu/SNCA-HA(圖29),Blu/VAMP3-HA(圖30)禾卩Blu/EEF1A1-HA(圖31)。從構建體pSP73/Bg111-Xbal/Bcl-xL中分離編碼全長人Bcl-xL的BglII-Xhol消化的插入片段，並連接於BamHI-SalI消化的BluKS/p21-HA載體片段，以獲得質粒104Blu/BcxL-HA(圖32)。用消化上述pBlueScript衍生的質粒(圖27-32)，且分離HA-標記的全長Bcl-2A1、FKBP2、SNCA、VAMP3、EEF1A1禾QBcl匿xL基因片段。將它們亞克隆至Nhel-XhoI消化的哺乳動物細胞表達載體pcDNA3.1(+)(Invitrogen,Paisley,UK)中。將所得的質粒稱為pcD/Bcl2Al-HA(圖33)、pcD/FKBP2陽HA(圖34)、pcD/SNCA-HA(圖35)、pcD/VAMP3扁HA(圖36)、pcD/EEFlAl-HA(圖37)和pcD/BclxL-HA(圖38)。用^e/^T^/消化pBlueScript衍生的質粒(圖27-32)，且分離HA-標記的全長Bcl-2Al、FKBP2、SNCA、VAMP3、EEF1A1和Bcl-xL基因片段。也將它們亞克隆至^e/Y72o/消化的2-micron多拷貝酵母表達載體pSYE224(圖39)、pSYE239(圖40)。質粒pSYE224和pSYE239分別含有啟動子(GALlp)和啟動子(PGKlp)。兩個質粒都含有基因，作為營養缺陷型選擇標記。將衍生於pSYE224(圖39A)的質粒，其含有在啟動子調節下的HA標記性抗凋亡基因，稱命名為224/Bcl2Al-HA(圖41),224/FKBP2-HA(圖42)、224/SNCA-HA(圖43)、224/VAMP3-HA(圖44)、224/EEF1A1-HA(圖45)和224/BclxL-HA(圖46)。將衍生於pSYE239(圖40)的質粒，其含有在PGK7啟動子調控下的HA標記性抗凋亡基因，命名為239/Bcl2Al-HA(圖47)、239/FKBP2-HA(圖48)、239/SNCA-HA(圖49)、239/VAMP3-HA(圖50)、239/EEF1A1-HA(圖51)和239/BclxL-HA(圖52)。可以理解，可以用Invitrogen載體pYES2(圖39B)替代pSYE224。我們已用6^/-A^/位點將我們的cDNA文庫單向克隆入pSYE224中。Wof/是8bp的限制位點(包括5，突出端)，並且是少見的切割工具。我們傾向於將8bp的限制位點(包括3'突出端)引入pYES2，用於單向克隆，和7Vw/—樣8bp的Pflc/限制位點也是很少見的切割工具。這樣，位點就可以代替6bp的限制位點S/^/，用於單向克隆。表5:用於克隆從篩選人海馬cDNA文庫中獲得的5個新抗凋亡基因的引物(分別為SEQIDNOs:28-37)tableseeoriginaldocumentpage106實施例5:選擇的基因在酵母細胞中的抗凋亡功能從相同的人海馬cDNA文庫中，PCR擴增全長人Bcl-2A1、FKBP2、SNCA、VAMP3和EEF1A1，從而構建圖41-圖45和圖47-圖51中展示的質粒，該質粒含有受GAL1啟動子(圖41-圖45)調控，或受PG^啟動子調控(圖47-圖51)的作為HA標籤的所有基因。如上文實施例2中所述，將這些質粒轉化入W303baxleu，以分析它們在酵母中的抗凋亡功能。5種新基因的Bax營救能力敲微將一小勺單菌落細胞(即轉化體)，其含新基因，重懸浮於200)il的水中，且這些轉化體的5pl等分試樣點樣於含有適當補充物的SD和SG平板上。,新基娜遂拔to麟赫成虔力新抗凋亡基因允許酵母倖免於Bax介導的死亡從人腦海馬cDNA文庫中擴增全長基因，並插入酵母表達質粒pSYE224(圖39)和pSY239(圖40)中的和PG7W啟動子的下遊。所有的基因在其3'端具有HA標籤。受GL4ZJ驅動的基因典型結果顯示於圖53中(即pSYE224衍生物；圖41-圖46)。用pSYE239衍生物，獲得相似的結果(即圖47-52)。實施例6:選擇的基因在哺乳動物細胞中的抗凋亡功能哺乳動物細胞培養物分析-智應在5%溼潤的C02空氣中、37°下、25或75cm2組織培養瓶(Coming,NY14831，USA)內，將人胚胎腎細胞((HEK293，ATCCCRL-1573,LGCPromochem,Middlesex,UK)培養於Dulbecco改進的Eagle培養基(DMEM;GibcoBRL,GrandIsland,NY,USA)中，該DMEM補充了10%的胎牛血清(FBS;BioWhittaker,Walkersville，MD,USA)和2mML-穀氨酸。為了分析蛋白的穩定表達，將細胞培養於含有濃度為lmg/ml的G418(GIBCOBRL)的相同培養基中，以便選擇轉染的細胞。為了進行免疫細胞化學分析，將細胞在蓋玻片(cover-slips)上培養24-48h。嚴歪/^嚴將眾(^y戸'"a"—以70。/。-80。/。融合度(confluency)，在磷酸鹽緩衝液(PBS)中，用0.05%胰蛋白酶、0.04%EDTA，在37。下，分離細胞用於次培養或Nucleofector介導轉染(Amaxa,Cologne,Germany)。5min後，用雙倍量的生長培養基中止胰蛋白酶消化，並轉移至新的燒瓶或具有蓋玻片的6孔板上。瞬時轉染根據製造商的說明書，利用QIAGEN無內毒素質粒Maxi試劑盒(QIAGEN,C-12362,WestSussex,UK)，製備用於轉染的DNA。對於Nucleofector介導的轉染來說，洗滌親本HKK293細胞或其穩定地表達目的基因的轉染體都用PBS，並吸出以丟掉PBS。吸取生長培養基，用磷酸鹽緩衝液(PBS)將培養的粘附細胞洗滌一次，並直接用胰蛋白酶/EDTA分離，170xg，離心5min。將".106個細胞重懸浮於100filNucleofectorSolutionV(Amaxa,Cologne,Germany)中。此後，力口入5pcDNA3.1(+)(Invitrogen)或pIRES2-EGFP(Clontech,PaloAlto,CA,USA)載體DNA或含有Bax片段的載體(圖10,圖ll)，將混合物轉移至電穿孔玻璃管(electroporationcuvette)，並置於Nucleofector裝置(Amaxa)中。轉染使用Q-01程序。(進一步的詳細內容是AmaxaBiosystems，Cologne,Germany的私有禾又信息)。核轉染(Nucleofection)後，將懸浮物轉移至T-25(Coming)中，其含有4ml預熱的培養基。15-12h後，更換培養基。24h後，通過在螢光顯微鏡下對10個隨機挑選區域內的eGFP陽性細胞的數量進行計數，來測定轉染細胞的效率。建立穩、定表達人Bd-Z47，i^TAP2，AVC4，K4MPJ，五^^X4i#j5c/-xZ遊潘贏^GWS^絲透摔克虔將衍生於pcDNA3.1(+)且攜帶HA標記的全長Bcl-2A1、FKBP2、SNCA、VAMP3、EEF1A1和Bcl-xL基因片段的質粒DNA轉染至HEK293細胞(參閱實施例2)。將轉化體接種於含有8ml預熱培養基的100mm組織培養皿(Corning)上。在溫育2天後，在含有lmg/mlG418(Gibco/BRLLifeTechnologies)的培養基中選擇G418抗性的轉化細胞。10-15天後，用克隆環(cloningrings)挑選存活的單菌落(G418抗性菌落)，並轉移至24孔器皿上，用含有200mg/mlG418的培養基進行進一步的選擇。利用抗-HA-螢光素(Roche,Penzberg，Germany),利用免疫細胞化學，測定人Bd-2Al、FKBP2、SNCA、VAMP3、EEF1A1禾QBcl-xL的表達。通過重複亞克隆，確保轉染體的一致性。分離定遊凝通常，瞬時轉染的效率分別是90%。將穩定的轉化體設計為HEK293/Bcl2Al、HEK293/FKBP2、HEK293/SNCA、HEK293/VAMP3、HEK293/EEF1A1和HEK293/Bcl-xL，其分別表達HA標記的Bcl畫2Al、FKBP2、SNCA、VAMP3、EEF1A1禾卩Bcl-xL。作為模擬對照，將pcDNA3.1(+)引入HEK293並命名為HEK293pcO(表6)。表6:轉染體的特徵tableseeoriginaldocumentpage108免疫細胞化學免疫細胞化學(ICH)是鑑定細胞和組織中蛋白的重要方法。約24-28h後，將轉化的細胞接種於包含無菌蓋玻片的6孔板上，所述平板預先包被了0.001%聚賴氨酸(Sigma)，用預熱的PBS將細胞洗滌兩次，並用4%多聚甲醛(PFA)(Sigma)/PBS在37°C下固定5min。將細胞洗滌兩次，並用0.3%TritonX-100/10mM磷酸鈉/0.5MNaCl,pH7.4在室溫下滲透化5min。隨後，將細胞與抗HA標記性重組蛋白的螢光素-耦聯單克隆抗體(Roche，Penzberg,Germany(1:50稀釋))一起溫育1小時。室溫下在含有10pg/100mlDAPI的PBS中洗滌5分鐘後，用甘油中的抗螢光淬滅封片液(anti-fademountingmedium)(0.1%P-苯二胺(PPD)(Sigma)，將蓋玻片上的細胞封裝於玻璃載玻片上。隨後，用Analysis5.5B軟體，通過奧林巴斯IX-70螢光顯微鏡，分析載玻片，並用光電數碼成像相機(Optronicsdigitalimagingcamera)捕獲圖像。用DAPI將細胞復染色，以鑑定核DNA。代表性圖顯示於圖54中。表6概括了免疫細胞化學獲得的結果，該結果證實存在HA標記性蛋白。Western印跡用10%PAGE，將來自細胞裂解物的20嗎蛋白進行分級。識別HA標籤的單克隆抗體用於顯示HA標記的蛋白。表6概括了Western印跡獲得的結果，該結果證實存在HA標記性蛋白。在HEK293中Bax介導的細胞死亡利用質粒pcDNA3.1/Bax(圖10)和pIRESEGFP/Bax(圖1l)將Bax轉染入HEK293後，用臺盼藍拒染法(trypanblueexclusionassay)測定細胞存活力，以檢測Bax介導的細胞死亡。鄉用pcDNA3.1/Bax(圖10)、對照質粒cDNA3.1(Invitrogen)、pIRESEGFP/Bax(Figurell)和對照質粒pIRES2-EGFP(Clontech)轉染HEK293細胞。將每一次轉染都相等地接種於6孔板的6個孔中。每一次轉染採用完全相同量的細胞和質粒DNA。如上文實施例6中所述，溫育轉染體。15-20h後，更換培養基。轉染後的最初5天，每天都單獨收穫所有6個孔的相同轉染體。漂洗細胞、輕輕地掛擦、通過離心使之成團、重懸浮於500pl含有0.1%臺盼藍的培養基中、載入血球計數器內，並通過光學顯微鏡檢查。隨後計數可視或不可視的(藍細胞)細胞，所得的得分將死細胞表示為總細胞的百分比。也計算相對存活(即成活)率。重複此實驗3次。錯菜109Bax轉染後，在HEK293中發生細胞死亡.含有質粒pcDNA3.1/Bax(圖IO)和pIRESEGFP/Bax(圖1l)的Bax瞬時轉染後，在光學顯微鏡下，利用血球計數器，評估存活細胞的臺盼藍拒染。這些結果清晰地顯示細胞存活力降低。收集培養的細胞並計數，以測定Bax轉染後在指定的時間內死亡細胞的百分比(圖55，A版)。從第一至第五天，對細胞進行計數。將結果與用空載體(即pcDNA31和pIRES2-EGFP)轉染的細胞進行比較。用pcDNA3.1/Bax(圖10)和pIRESEGFP/Bax(圖11;在圖55中標記為pIRES2-EGFP/Bax)轉染的細胞顯示，死亡細胞的百分比增加(屍0.05)。板B(圖55)顯示Bax或載體轉染後第三天的存活細胞相對百分比。YAS選擇的新基因在人細胞中的抗凋亡功能箭基像表這遊歪/^/5ox^導遊死亡遊,敘利用相似的臺盼藍拒染法測定Bcl-2A1、FKBP2、SNCA、VAMP3、EEF1Al和Bcl-xL蛋白保護HEK293免遭Bax介導的死亡的能力。將pIRES2-EGFP/Bax轉染至Bcl陽2A1、FKBP2、SNCA、VAMP3、EEF1A1、Bcl-xL和載體轉染的穩定細胞系中。進行載體轉染作為陰性對照。對於每一次轉染，使用完全相同量的細胞和質粒DNA。如上文實施例6中所述，溫育轉染體。15-20h後，更換培養基，並評估轉染效率。溫育3天後，如上文所述，對存活細胞進行計數。獲得的得分可以獲得正經歷Bax介導的細胞百分比，並根據下列公式計算。將實驗重複6次，且結果示於圖56中。Bax介導的細胞死亡(0%)=[(^^)/CFtxKo)xl00%Fo代表無Bax的情況下即載體轉染後的存活細胞的數量；FB狀表示僅用Bax轉染後的存活細胞的數量；Ft表示平均轉染效率。柳7I/皿藩腦D損微通過TUNEL(末端脫氧核糖核酸轉移酶[TdT]介導的dUTP缺口末端標記)，利用FACS(螢光激活的細胞分選)分析，來定量Bax介導的細胞凋亡。將pIRES2-EGFP/Bax轉染至穩定表達人Bcl-2A1、FKBP2、SNCA、VAMP3、EEF1A1和Bcl-xL的HEK293細胞。溫育3天後，收穫轉染體並在PBS中洗滌。隨後，在15-25°C下將細胞固定在新鮮製備的PBS中的2%多聚甲醛中。再次用PBS洗滌後，在冰上，將細胞用]%TritonX-100在1%醋酸鈉中滲透化2min，隨後用PBS洗滌兩次。隨後根據製造商的說明書，在最終用PBS洗滌和重懸浮於PI/RNase溶液(PBS中的0.001%碘化丙啶，0.05%RNaseA)之前，將細胞與含末端脫氧核糖核酸轉移酶和FITC-dUTP的Apotag(Roche,EastSussex,UK)酶促反應混合物一起，在37°C、溼潤的空氣中避光溫育60min。隨後，利用裝備488nm氬雷射器作為光源的Beckmann-Coulter流式細胞儀(Epic-Altra)進行FACS分析。碘化丙啶(DNA)在623nm發螢光(其決定細胞的總量)，而FITC在520nm發螢光(其決定細胞凋亡的細胞)。總共分析了10,000次目的事件。結果示於圖57中。微泣被,微M定鄉色素cA微腫遊微已顯示，為了誘導細胞凋亡，促凋亡Bax會從線粒體中釋放細胞色素C。利用酵母篩選從人海馬中新近發現的抗凋亡蛋白，如果它們真的是抗凋亡的，應該防止人細胞中的細胞色素c釋放。將pcDNA3.1/Bax轉化至穩定表達人Bcl-2A1、FKBP2、SNCA、VAMP3、EEF1A1、Bcl-xL和空載體的HEK293細胞中(參閱上文)。將一定量的轉染細胞直接接種於包括無菌蓋玻片的6孔板上，該板預先包被了0.001%聚賴氨酸(Sigma)。溫育3天後，根據製造商的說明書，利用&/^屍1頂」^^/^^Qvtoc/2r0mec」/optow'sZ)etec"owXzY(MolecularProbes)禾示i己細胞色素C。簡單而言，讓細胞生長於蓋玻片上、用預熱的PBS洗滌兩次，並用新鮮製備的4。/。的多聚甲醛(PFA)(Sigma)/PBS在37°C下固定15min。在室溫下將細胞洗滌兩次，用0.3%TritonX-100/10mM磷酸鈉/0.5MNaCl，pH7.4，滲透化5min。用封閉溶液(blockingsolution)(用PBS洗滌兩次後，在PBS中的10%熱失活羊血清)封閉樣品。在該封閉溶液中，將初級抗細胞色素C小鼠IgG稀釋500倍，並與載玻片上的細胞在室溫下在溼氣箱子(wetbox)中一起溫育lh。用封閉溶液漂洗樣品兩次，並在室溫下與Alexa488羊抗小鼠第二抗體(MolecularProbes)—起避光溫育30min。將樣品在PBS中漂洗三次，用抗螢光淬滅封片液(甘油中的0.1%P-苯二胺(PPD)(Sigma))封裝於玻璃載玻片上。隨後通過奧林巴斯IX-70螢光顯微鏡分析載玻片，並通過光電數碼成像相機捕獲圖像。所得結果顯示於圖58中。用石典千t3，3'—二—己氧基幾花青(3,3，dihexyloxacarbocyanineiodide，[DiOC6(3)])染色的細胞，通過流式細胞計數分析來定量線粒體膜電勢(A甲m)。這項分析利用親脂性的陽離子螢光燃料DiOC6(3)，其通過線粒體膜負電勢轉運至線粒體，並且因而在線粒體基質內濃縮。線粒體膜電勢的降低導致細胞螢光的減少。將pcDNA3.1/Bax轉染至穩定表達人Bcl-2A1、FKBP2、SNCA、VAMP3、EEF1A1、Bcl-xL和空載體的HEK293細胞中。將一定量的轉染細胞直接接種於包括無菌蓋玻片的6孔板上，該板包被有0.001。/。聚賴氨酸(Sigma)。將細胞在37°C下用DiOC6(3)(PBS中40nM;MolecularProbes，Inc.)染色15min，並用PBS洗滌一次，隨後用流式細胞儀(Beckmann-CoulterEpic-Altra;488nm下激發，525nm下發射)分析。結果顯示於圖59中。欲應/^產全活絲賓分，認"VeOjc穿"一由，iOS」用螢光染料2',7'-二氯雙氫螢光素二乙酸酯(H2DCFDA;MolecularProbes,Paisley,UK)，監控Bax介導的ROS產生。該染料是穩定的非極性化合物，其易於擴散入細胞中並產生DCFH。在存在過氧化物酶時，細胞內的H202或其他的低分子量過氧化物將DCFH氧化為高螢光的化合物DCF。因此DCF發射的螢光直接反映了總的細胞氧化狀態(Wang&Joseph,1999)。將pcDNA3.1/Bax轉染至穩定表達人Bcl-2A1、FKBP2、SNCA、VAMP3、EEF1A1、Bcl-xL和空載體的HEK293細胞中。Bax轉染後的第四天，吸出培養基，並將培養的細胞用生理緩衝液(140mMNaCl,5mMKC1,1mMCaCl2,1.2mMNaHP04，5mM葡萄糖和20mMHepes,pH7.4)洗滌兩次，用胰蛋白酶/EDTA直接分離，隨後在5%032/95%空氣中、37。C下溫育於2ml不含FBS但含有5H2DCFDA的細胞培養基中30min。用PBS洗滌細胞兩次，以除去細胞外H2DCFDA。隨後，將口106個細胞重懸浮於1ml的PBS中。將100p來自每一次處理的細胞裝載至具有黑色載玻片的96孔板上。在波長492nm(激發)和520nm(發射)下，檢測細胞螢光。用SynergyHTMulti-Dete'etionMicroplateReader(Bio-TekInstruments,Winooski，Vermont,USA)，監控相對螢光強度。用Bio-Tel^KC4軟體，計算10次獨立測量的數值，求平均值。結果示於圖60中。在上文的實驗中，除非另有說明，數據表示為平均值士SD。對於所有的統計計數，我們採用SPSS12.0軟體。在所有的試驗中，相同的實驗至少重複3次(nS)，如果p值〈0.05，則認為差別是有統計意義的,參考文獻BaierW(2003)"Apoptosisinrheumatoidarthritis".CwrrOp/"15(3):274-9.B固etzen&Hall(1982)"Codonselectioninyeast".J飾/C/亂257(6):3026-31.Brandsa/(1986)Theprimarystructureofthealphasubunitofhumanelongationfactor1:structuralaspectsofguanine墨nudeotide-bindingsites,5foc/e附.155:167-171,1986.Budihardo"a/(1999)"Biochemicalpathwaysofcaspaseactivationduringapoptosis".7evCW/Z)ev5z'o/.15:269-90.Burtnick"(2004)"StructureoftheN-terminalhalfofgelsolinboundtoactin:rolesinsevering,apoptosisandFAF".￡M5<9,23(14):2713-22.ByrneandRuddle(1989)/Voc.Ato/。Jc^/.86:5473-5477Cardoso&Oliveira(2003)"InhibitionofNF-kBrenderscellsmorevulnerabletoapoptosisinducedbyamyloidbetapeptides".Free及"J/c37(9):967-73.Chongera/(2005)"ActivatingAktandthebrain'sresourcestodrivecellularsurvivalandpreventinflammatoryinjury",/fe/o/M加戸^^/.20(1):299-315.Cnop"a/(2005)"MechanismsofPancreatic{beta}-CellDeathinType1andType2Diabetes:ManyDifferences,FewSimilarities".Z)/"6e虹54Suppl2:S97-S107.Cooper&Burge(2003)"Darier'sdisease:epidemiology,pathophysiology,andmanagement."J"C7/w4(2):97-105Coryetal(2003)"TheBcl-2family:rolesincellsurvivalandoncogenesis.22(53):8590-607.Davies(2000)"Neurotrophins:moretoNGFthanjustsurvival."Cw/r10(10):R374-6Dhitavat""/(2004)Calciumpumpsandkeratinocytes:lessonsfromDarier,sdiseaseandHailey—Haileydisease.5n7^/7J^wrwa/o/￡>evw"/o/ogy150:821—828.DiLella(1992)"ChromosomalbandassignmentsofthegenesencodinghumanFKBP12andFKBP13",別oc&m'別o;/zj^.189(2):819-23.Distelhorst&Shore(2004)"Bcl-2andcalcium:controversybeneaththesurface".O膽g匿.23(16):2875-80.DitzelW(2000)Cloningandexpressionofanovelhumanantibody—antigenpairassociatedwithFelty'ssyndrome.M//.Jo^.&z'.97:9234-9239.Fan〃/(1996)MutationsintheRNApolymeraseIItranscriptionmachinerysuppressthehyperrecombinationmutanthprldeltaofSaccharomycescerevisiae.G麼,b.142(3):749-59.Foggia&Hovnanian(2004)Calciumpumpdisordersoftheskin.爿附.她t/G^""C(Sew//.Gcm^)131G:20-31.114Greenhalf"/(1996)RoleofmitochondriaandC-terminalmembraneanchorofBel-2inBaxinducedgrowtharrestandmortalityinSaccharomycescerevisiae.丄e〃.380(1-2):169-75.Hajra&Liu(2004)"Apoptosomedysfunctioninhumancancer",」jw//a/s.9(6》691-704.Halliwell&Whiteman(2004)"Measuringreactivespeciesandoxidativedamageinvivoandincellculture:howshouldyoudoitandwhatdotheresultsmean"5rJP/7"r附"c0/.142(2):231-55.Harms"a/(2004)"Neuronalgelsolinpreventsapoptosisbyenhancingactindepolymerization".脅/CW/臉wmsc/.25(1》69-82.Heaton"〃/(2003)"Effectsofethanolonneurotrophicfactors,apoptosis-relatedproteins,endogenousantioxidants,andreactiveoxygenspeciesinneonatalstriatum:relationshiptoperiodsofvulnerability".J5簡'w5縮.w140(2):237-52.Jackisch"a/(2000)Delayedmicromolarelevationinintracellularcalciumprecedesinductionofapoptosisinthapsigargin陽treatedbreastcancercells.C7/wCawcer7"6:2844-50.Johnston(1987)"Amodelfungalgeneregulatorymechanism:theGALgenesofSaccharomycescerevisiae".M/cro^Wiev.51(4》458-76.Johnston(2005)"Excitotoxicityinperinatalbraininjury".Bra/w屍a/7o/.15(3):234-40.Kalivendi"a/(2004)Alpha陽synucleinup-regulationandaggregationduringMPP+inducedapoptosisinneuroblastomacells:intermediacyoftransferrinreceptorironandh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-7M，且含有酵母整合質粒，所述質粒含有在半乳糖誘導性啟動子的調控下編碼功能性Bax多肽的多核苷酸，且適宜在染色體基因座中整合。3.根據權利要求1或2所述的酵母細胞，其中所述酵母細胞是菌株W303-1A。4.根據權利要求1-3中任一項所述的酵母細胞，其中所述功能性Bax多肽含有人Bax多肽或其促凋亡片段或其變體。5.根據權利要求1-4中任一項所述的酵母細胞，其中編碼所述功能性Bax多肽的所述多核苷酸的密碼子已經優化用於酵母中。6.根據權利要求1-5中任一項所述的酵母細胞，其中編碼所述功能性Bax多肽的所述多核苷酸含有序列SEQIDNo:2。7.根據權利要求1-6中任一項所述的酵母細胞，其中所述半乳糖誘導性啟動子是GAL1或GALIO。8.根據權利要求1-7中任一項所述的酵母細胞，其中編碼所述功能性Bax多肽的所述多核苷酸由SUC2轉錄終止序列終止。9.根據權利要求1-8中任一項所述的酵母細胞，其中在存在半乳糖時，所述功能性Bax多肽的表達導致細胞死亡。10.根據權利要求1-9中任一項所述的酵母細胞，其是菌株W303baxleu。11.試劑盒，其含有權利要求1-10中任一項所述的酵母細胞和適宜將多核苷酸文庫轉化至所述酵母細胞的酵母質粒載體。12.根據權利要求11所述的試劑盒，其中所述酵母質粒載體在可誘導啟動子的調控下適宜表達多核苷酸文庫中的多核苷酸。13.根據權利要求11或12所述的試劑盒，其中所述酵母質粒載體是pYES2(Stratagene)。14.根據權利要求11-13中任一項所述的試劑盒，其還含有在所述酵母細胞中在所述誘導性啟動子的調控下誘導多核苷酸表達的試劑。15.根據權利要求14所述的試劑盒，其中在酵母細胞中誘導所述多核苷酸表達的所述試劑是半乳糖。16.根據權利要求11-14中任一項所述的試劑盒，其還含有半乳糖。17.根據權利要求11-16中任一項所述的試劑盒，其中所述多核苷酸文庫是cDNA文庫。18.根據權利要求11-17中任一項所述的試劑盒，其還含有用於篩選Bax介導的細胞凋亡的抑制劑的多核苷酸文庫的方法的說明書。19.篩選Bax介導的細胞凋亡的抑制劑的多核苷酸或篩選編碼Bax介導的細胞凋亡的抑制劑的多核苷酸的方法，所述方法包括(a)在酵母質粒載體中提供多核苷酸文庫；(b)將多核苷酸文庫轉化至權利要求1-10中任一項所定義的酵母細胞中；(c)將轉化的酵母在允許酵母質粒載體中的功能性Bax多肽和多核苷酸表達的條件下平板接種；以及(d)鑑定生長的酵母菌落；其中酵母菌落的生長表示，酵母質粒載體中的多核苷酸是Bax介導的細胞凋亡的抑制劑或是編碼Bax介導的細胞凋亡的抑制劑。20.根據權利要求19所述的方法，其中所述多核苷酸文庫是由人腦組織、與糖尿病有關的組織、癌組織、心臟組織、與風溼性關節炎有關的組織、細胞系或細菌基因組或病毒基因組產生的cDNA文庫。21.根據權利要求19或20所述的方法，其中所述酵母質粒載體中的所述多核苷酸文庫受誘導性啟動子的調控。22.根據權利要求21所述的方法，其中所述誘導性啟動子是四環素誘導性啟動子、甲硫氨酸誘導性啟動子、半乳糖誘導性啟動子、ADH2啟動子或金屬硫蛋白啟動子。23.根據權利要求22所述的方法，其中所述半乳糖誘導性啟動子是GAL1或GALIO。24.根據權利要求19-23中任一項所述的方法，其中所述酵母質粒載體是pYES2。25.根據權利要求19-25中任一項所述的方法，其中所述轉化步驟(b)為高效轉化。26.根據權利要求19-25中任一項所述的方法，其中平板接種步驟(c)包括在存在半乳糖的情況下將接種的酵母細胞於3(TC溫育至少72小時。27.根據權利要求19-26中任一項所述的方法，還包括獲得步驟(d)所鑑定的酵母菌落中的酵母質粒載體內的多核苷酸序列。28.根據權利要求19-27中任一項所述的方法，還包括再次檢測步驟(d)所鑑定的酵母菌落中的質粒載體內的多核苷酸或所述多核苷酸編碼的多肽，檢測其在細胞凋亡模型中抑制Bax介導的細胞凋亡的能力。29.根據權利要求19-28中任一項所述的方法，還包括修飾步驟(d)所鑑定的酵母菌落中的質粒載體內的多核苷酸，並檢測修飾的多核苷酸或所述修飾的多核苷酸編碼的多肽在細胞凋亡模型中抑制Bax介導的細胞凋亡的能力。30.根據權利要求27所述的方法，還包括基於獲得的序列數據鑑定多核苷酸，並檢測對應於鑑定的多核苷酸的多核苷酸或所述對應多核苷酸編碼的多肽在細胞凋亡模型中抑制Bax介導的細胞凋亡的能力。31.根據權利要求28-30中任一項所述的方法，其中細胞凋亡模型選自細胞凋亡的酵母細胞模型、哺乳動物細胞模型和體內模型。32.根據權利要求31所述的方法，還包括將具有抑制Bax介導的細胞凋亡能力的多核苷酸或多肽配製成藥學上可接受組合物的步驟。33.抵抗細胞中Bax介導的細胞凋亡的方法，所述方法包括將細胞與多肽接觸，所述多肽選自FKBP2(FKBP-13);a-突觸核蛋白(SNCA)，真核生物翻譯延伸因子1al(EEF1A1);囊泡相關膜蛋白3(VAMP3);突觸小體相關蛋白(SNAP25);RIMS3;RAB40B;3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A合成酶1(固GCS1);硬脂醯輔酶A去飽和酶5(SCD5);ATPaseAtp2a2(ATP2A2);hnRNP甲基轉移酶-樣蛋白1(HRMT1L1);和含有SEQIDNo:16，SEQIDNo:17,SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽，或任意一種所述多肽的抗凋亡衍生物，或與編碼任意一種所述多肽或衍生物的多核苷酸接觸。34.根據權利要求33所述的方法，其是體外進行的。35.多肽或任意一種所述多肽的抗凋亡衍生物或編碼任意一種所述多肽或衍生物的多核苷酸在製備抵抗細胞中Bax介導的細胞凋亡的藥物中的用途，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RJMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16,SEQIDNo:17，SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽。36.多肽或任意一種所述多肽的抗凋亡衍生物或編碼任意一種所述多肽或衍生物的多核苷酸在醫學中的用途，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16,SEQIDNo:17,SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽。37.藥用組合物，其含有多肽，其選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、固GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽；或任意一種所述多肽的抗凋亡衍生物；或編碼任意一種所述多肽或衍生物的多核^^酸；和藥學上可接受載體或賦形劑。38.抵抗選自神經變性疾病或病症、心血管疾病、風溼性關節炎和糖尿病的疾病或病症的方法，所述方法包括向患者施用多肽，其選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB德、畫GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMTlLl和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽；或任意一種所述多肽的抗凋亡衍生物；或編碼任意一種所述多肽或衍生物的多核苷酸。39.多肽或任意一種所述多肽的抗凋亡衍生物，或編碼任意一種所述多肽或衍生物的多核苷酸，在製備抵抗選自神經變性疾病或病症、心血管疾病、風溼性關節炎和糖尿病的疾病或病症的藥物中的用途，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、腹GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽。40.根據權利要求38或39所述的方法或用途，其中所述的神經變性疾病或病症選自中風、脊髓損傷、頭部損傷、脊髓性肌萎縮症(SMA)、包括肌萎縮側索硬化(ALS)的運動神經元病、阿爾茨海默氏病(AD)、帕金森氏病(PD)和亨廷頓病(HD)。41.增強細胞中Bax介導的細胞凋亡的方法，所述方法包括將細胞與多肽的抑制劑或拮抗劑接觸，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RJMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽。42.根據權利要求41所述的方法，其在體外進行。43.多肽的抑制劑或拮抗劑在製備增強患者細胞的Bax介導的細胞凋亡的藥物中的用途，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽。44.多肽的抑制劑或拮抗劑或編碼任意一種所述抑制劑或拮抗劑的多核苷酸在醫學中的用途，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽。45.藥用組合物，其含有多肽的抑制劑或拮抗劑或編碼任意一種所述抑制劑或拮抗劑的多核苷酸和藥學上可接受載體或賦形劑，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB備、麗GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽。46.抵抗患者癌症的方法，所述方法包括向所述患者施用多肽的抑制劑或拮抗劑或編碼任意一種所述抑制劑或拮抗劑的多核苷酸，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、固GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽。47.多肽的抑制劑或拮抗劑或編碼任意一種所述抑制劑或拮抗劑的多核苷酸在製備抵抗患者癌症的藥物中的用途，所述多肽選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCSl、SCD5、ATP2A2、HRMTlLl和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽。48.根據權利要求41-47中任一項所述的方法或用途，其中所述抑制劑或拮抗劑是與所述多肽選擇性結合的抗體。49.根據權利要求41-47中任一項所述的方法或用途，其中所述抑制劑或拮抗劑是核酶、反義多核苷酸或siRNA分子。50.根據權利要求41-47中任一項所述的方法或用途，其中所述抑制劑或拮抗劑是權利要求51-71任意一種方法可鑑定的或由權利要求51-71任意一種方法鑑定的。51.鑑定調節基因表達的化合物的方法，所述基因選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1，和轉錄信息具有含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的cDNA序列的基因，所述方法包括提供含有報導基因的細胞，所述報導基因可操作地連接於以下基因的啟動子和/或調節部分，所述基因選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1，和轉錄信息具有含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的cDNA序列的基因，將細胞與候選化合物接觸；以及檢測報導基因的表達，其中報導基因應答候選化合物的表達變化鑑定出能調節以下基因表達的化合物，所述基因選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCSl、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1，和轉錄信息具有含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的cDNA序列的基因。52.根據權利要求51所述的方法，其中增強所述報導基因表達的鑑定出的化合物能增強由其天然存在的啟動子引起的各自基因編碼的多肽的體內表達。53.根據權利要求51所述的方法，其中降低所述報導基因表達的鑑定出的化合物能降低由其天然存在的啟動子引起的各自基因編碼的多肽的體內表達。54.根據權利要求51所述的方法，其中所述報導分子選自(3-GAL、GFP和水母發光蛋白。55.根據權利要求51-54中任一項所述的方法，其中基因的所述啟動子部分含有該基因轉錄起始位點上遊(5')5kb的區域，所述基因選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB備、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1，和轉錄信息具有含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的cDNA序列的基因。56.根據權利要求55所述的方法，其中所述啟動子位於所述基因轉錄起始位點上遊(5，)3kb或2kb或lkb或500bp的區域中。57.根據權利要求51-56中任一項所述的方法，其中所述基因的調節部分含有所述基因轉錄起始位點上遊(5，)20kb的區域，所述基因選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、服GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1，和轉錄信息具有含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的cDNA序列的基因。58.根據權利要求57所述的方法，其中所述調節區域位於所述基因轉錄起始位點5'上遊10kb或7kb或5kb或3kb，或更優選lkb的區域中。59.鑑定調節細胞中Bax介導的細胞凋亡的化合物的方法，所述方法包括根據權利要求51-58任一項所述的方法，鑑定調節以下基因表達的化合物，所述基因選自FKBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、HMGCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1，和轉錄信息具有含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的cDNA序列的基因，以及在Bax介導的細胞凋亡分析中檢驗所述鑑定的化合物。60.根據權利要求59所述的方法，其中細胞凋亡模型選自細胞凋亡的酵母細胞模型、哺乳動物細胞模型和體內模型。61.根據權利要求59或60所述的方法，其中增強所述報導基因表達的化合物是Bax介導的細胞凋亡的抑制劑。62.根據權利要求59或60所述的方法，其中降低所述報導基因表達的化合物是Bax介導的細胞凋亡的啟動子。63.鑑定調節Bax介導的細胞凋亡的化合物的方法，所述方法包括提供在誘導性啟動子的調控下表達功能性Bax多肽，且在其天然存在的啟動子和/或調節序列的調控下表達下述多肽的細胞KBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB權、固GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽；將所述細胞與候選化合物在誘導功能性Bax多肽表達的條件下接觸；以及進行細胞凋亡分析，其中與未接觸候選化合物的細胞相比，細胞凋亡水平發生變化表示該化合物能調節Bax介導的細胞凋亡。64.根據權利要求63所述的方法，其中所述細胞是哺乳動物細胞，優選人細胞。65.根據權利要求63或64所述的方法，其中所述細胞來自腦細胞優選海馬細胞的初級培養物或是衍生自腦細胞優選海馬細胞的細胞系。66.根據權利要求63-65中任一項所述的方法，其中所述細胞來自已經轉染了含有在誘導性啟動子的調控下編碼功能性Bax多肽的多核苷酸的構建體的人細胞系。67.根據權利要求63-66中任一項所述的方法，其中所述細胞在缺少候選化合物時，在其天然存在的啟動子和/或調節序列的調控下表達下述多肽KBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、固GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMT1L1和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽。68.根據權利要求63-67中任一項所述的方法，其中所述細胞凋亡模型選自細胞凋亡的酵母細胞模型、哺乳動物細胞模型和體內模型。69.篩選與多肽結合的化合物的方法，所述多肽選自KBP2、SNCA、EEF1A1、VAMP3、SNAP25、RIMS3、RAB40B、固GCS1、SCD5、ATP2A2、HRMTlLl和含有SEQIDNo:16、SEQIDNo:17、SEQIDNo:18或SEQIDNo:19的多核苷酸編碼的多肽，或其適宜的抗凋亡衍生物，所述方法包括將所述多肽與候選化合物接觸；檢測含有所述多肽和候選化合物的複合物的存在；以及任選地，鑑定與所述多肽結合的任何化合物。70.根據權利要求69所述的方法，其中所述候選化合物是肽或多肽。71.根據權利要求69或70所述的方法，其是高通量篩選分析。72.根據權利要求51-71中任一項所述的方法，其中所述鑑定的化合物是類藥化合物或用於研發類藥化合物的先導化合物。73.根據權利要求51-72中任一項所述的方法，其中在細胞凋亡模型和/或適宜的疾病模型中檢驗所述鑑定的化合物。74.根據權利要求51-73中任一項所述的方法，其中修飾所述鑑定的化合物，且在細胞凋亡模型和/或適宜的疾病模型中檢驗所述修飾的化合物。75.根據權利要求51-74中任一項所述的方法，還包括將所述鑑定的化合物配製成藥學上可接受的組合物。全文摘要W303a釀酒酵母細胞，其含有在整合於LEU2染色體基因座的半乳糖誘導性啟動子的調控下編碼功能性Bax多肽的多核苷酸。試劑盒，包含所述酵母細胞和適宜將cDNA文庫轉化至所述酵母細胞的酵母質粒載體。所述酵母細胞在篩選多核苷酸的cDNA文庫中的用途，所述多核苷酸是Bax介導的細胞凋亡的抑制劑或者編碼Bax介導的細胞凋亡的抑制劑。基因和多肽，其抑制Bax介導的細胞凋亡，且其根據在所述酵母細胞中篩選的人海馬cDNA文庫進行鑑定。一種利用Bax介導的細胞凋亡的抑制劑在細胞中防止Bax介導的細胞凋亡的方法，所述的Bax介導的細胞凋亡的抑制劑根據在所述酵母細胞中篩選的人海馬cDNA文庫進行鑑定。利用根據在所述酵母細胞中篩選的人海馬cDNA文庫鑑定出的抗細胞凋亡多肽的抑制劑或拮抗劑在細胞中促進Bax介導的細胞凋亡的方法。文檔編號C12N15/81GK101437845SQ200780013489公開日2009年5月20日申請日期2007年2月15日優先權日2006年2月15日發明者巴巴託什·喬杜裡申請人:莫沃斯技術有限公司