一種花葉玉簪快速繁殖的方法

2023-05-19 16:24:11 1

一種花葉玉簪快速繁殖的方法
【專利摘要】本發明涉及一種花葉玉簪快速繁殖的方法，主要通過外植體的選擇及消毒、繼代增殖培養、生根培養以及煉苗移栽的步驟，特別是在繼代過程中，提高了光強，培養基中減少了無機鹽含量，增加了磷酸二氫鉀和水解乳蛋白，同時採用了轉換繼代培養基的技術手段，達到了增殖速度快、遺傳性狀穩定、繁殖係數高的優良效果。
【專利說明】一種花葉玉簪快速繁殖的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及玉簪的繁殖方法，特別是一種花葉玉簪的快速繁殖方法。
【背景技術】
[0002]花葉玉簪(Hosta plantaRineu)為百合科玉簪屬植物，多年生宿根花卉,是著名觀葉植物玉簪的變種，對喜光花卉有極強的互補性，是園林綠化的優良品種。花葉玉簪的引進與推廣，極大地提高了其觀賞效果，豐富了園林綠化的景觀色彩。該品種株矮喜蔭，複色葉面，帶褶皺，金邊銀心相互交織，絢麗多彩的葉片呈現出魔幻般的花團錦簇。在城市高大樓群的背側、立交橋下、庭院大樹遮蔭處、樹籬邊等喜陽花卉生長不利的地方均可種植。裝盆後，可登堂入室，客廳、書房、大廳、會議室、窗臺上均可用它來點綴、裝飾，花葉玉簪的花還可散發出淡淡幽香，高雅不凡。
[0003]花葉玉簪常規的繁殖方法主要是通過分株，增殖率低，僅為3~5倍左右，短期內要形成大規模的生產困難較大，如果引進種苗，價格又很高。採用組織培養的繁殖方法，可以很好地解決上述難題，但通過花蕾誘導愈傷組織後形成的芽有變異現象發生，有些失去了原來的花葉特徵，現有技術中有以下對花葉玉簪組織培養的研究:「花葉玉簪工廠化組培育苗技術研究」，吳國智等，《天津農業科學》，第15卷第5期；「花葉玉簪的組織培養與快速繁殖技術研究」，郝硯英等，《天津農業科學》，第12卷第2期等。上述現有技術雖然公開了不同階段的培養基配方，然而其並沒有公開具體操作條件，並且發明人在按照上述配方進行操作，用於工廠化育苗進行大量繁殖時，特別是在多次繼代增殖過程中，發現隨著繼代次數的增加，變異率迅速提高，嚴重影響了工廠化生產，為此，發明人進行了有針對性的改進。

【發明內容】

[0004]本發明主要解決的技術問題是提供一種花葉玉簪快速繁殖的方法。
[0005]為解決上述技術問題，本發明採用的一個技術方案是:
[0006]一種花葉玉簪快速繁殖的方法，包括:
[0007](1)外植體的選擇及消毒:於3-4月選晴朗天氣直接在大田中取塊莖上的萌發芽做為外植體，或者在其它月份提前30天左右在地裡挖出玉簪洗淨後種植在以乾淨的珍珠巖為基質的盆中，後放在乾淨溫室中只澆清水；用小刀削下塊莖上的芽子，後浸於盛有飽和肥皂水的燒杯中5-10分鐘，再用自來水衝洗到基本無泡沫，然後再重複上述浸泡衝洗的步驟一次，浸泡時間縮短至2-4分鐘，自來水衝洗時間不易過長以免造成外植體二次汙染，轉入超淨工作檯，在超淨臺中先用70%的酒精浸泡I分鐘，無菌水衝洗2次，用含有兩滴吐溫80的5%次氯酸鈉溶液消毒10-15分鐘，無菌水衝洗5次；再加入含有兩滴吐溫80的0.1 %的升汞消毒10-15分鐘，用無菌水衝洗6次；
[0008](2)接種培養:取將步驟⑴所述的外植體，首先剝去芽的苞葉，儘量多剝幾層，切取帶有潛伏芽的外植體接種到接種培養基中，每瓶只接一塊，培養基的PH6.2，培養溫度為23土 1°C，12h/d的光周期，光照強度600Lx左右，培養3-7天開始生長，所述接種培養基為1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30g/L ；
[0009](3)繼代培養:將不汙染的帶有新營養芽的外植體轉入第一繼代培養基中使芽增殖，所述第一繼代培養基是 1/2MS+6-BA0.5-2mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+磷酸二氫鉀 150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，繼代5次左右，轉入第二繼代培養基或不添加任何激素的空白培養基中繼代一次，所述第二繼代培養基為1/2MS+IBA0.8mg/L+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，所述空白培養基為1/2MS+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，然後再轉入第一繼代培養基中繼續增殖，根據需苗量重複上述步驟；繼代培養過程中，培養基的PH6.2，培養溫度為23土 1°C，14-18h/d的光周期，光照強度2000Lx左右；
[0010](4)生根培養:將繼代培養得到的小芽直接轉入生根培養基中，較大的苗從中間豎著劈開一分為二再轉入生根培養基中，培養基的PH6.2,培養溫度為23±1°C, 12h/d的光周期，光照強度600Lx左右，所述生根培養基為1/2MS+NAA0.3mg\L+蔗糖20g/L，20天左右生根，當根生長到3cm左右出瓶，根生長過長或生根時間過長都會影響移栽成活；
[0011](5)煉苗移栽:先將培養瓶移至溫室，自然條件下煉苗4d，然後解開封口膜，煉苗6d，煉苗完成後取出小苗洗淨根部附著的培養基，移栽到經消毒的基質中，溫度控制在24-26°C，前7d溼度控制在70%左右，以後逐漸降低溼度，直至將移栽苗置於自然條件下，煉苗移栽期間適當遮光，使光照強度為自然光的50%。
[0012]步驟⑷中所述小芽直徑小於0.5mm ;所述較大的芽直徑0.5mm以上。
[0013]步驟(5)所述的基質為蛭石。
[0014]本發明的有益效果是:
[0015](I)本申請以芽作為外植體，發明人經過大量長期實踐操作，發現只有芽作為外植體才能保持花葉的特性；在除春季以外的其它月份，由於玉簪的芽都埋在土中，極易汙染，如何防止外植體汙染是以後繁殖的關鍵步驟，因此，發明人利用乾淨的珍珠巖作為基質培養花葉玉簪的母株，接種時每瓶接種一塊，大大降低了外植體汙染的概率，因為，發明人在具體操作期間，發現若每瓶接種3-4塊外植體，只要有一塊外植體汙染，即便其它外植體沒有汙染，整瓶都不能用於後續的繼代繁殖；
[0016](2)發明人發現，在工廠化育苗過程中，繼代超過5代左右，開始出現變異，發明人經研究發現，上述原因是激素累積導致，因此，在繼代過程中，採用了轉換培養基的方法，這也是本發明的重點之一；
[0017](3)花葉玉簪在自然條件下，光照強、光周期長會抑制玉簪的生長，出現焦葉、休眠等現象，因此，玉簪喜歡弱光的條件，而在組培過程中，發明人發現弱光條件反而會導致組培苗徒長，而影響芽分化；另外，繼代培養基中，發明人採用了 1/2MS大量元素，以代替現有技術中廣泛採用的MS，因為發明人經過大量的試驗發現，MS大量元素同樣容易導致組培苗徒長，而影響芽分化，因此，發明人創造性的以1/2MS代替MS，同時在培養基中增加了能夠促進芽分化的磷酸二氫鉀和水解乳蛋白，因此，在繼代過程中，提高了光強，培養基中減少了無機鹽含量，增加了磷酸二氫鉀和水解乳蛋白，從而抑制了組培苗徒長，促進了芽分化，取得了意料不到的效果；
[0018](4)生根時，將較大的苗豎著一分為二，每半都能形成完整的植株，因此，在最後階段，使組培苗數量得到了成倍的增長，達到了大量繁殖的目的。[0019]本發明培養過程速度快，再生頻率較高，變異率較低，周期相對較短，能較好地保持花葉玉簪的遺傳穩定性。
【具體實施方式】
[0020]下面對本發明的較佳實施例進行詳細闡述，以使本發明的優點和特徵能更易於被本領域技術人員理解，從而對本發明的保護範圍做出更為清楚明確的界定。
[0021]實施例一:
[0022]花葉玉簪快速繁殖的方法，包括:
[0023](I)外植體的選擇及消毒:於3月選晴朗天氣直接在大田中取塊莖上的萌發芽做為外植體，用小刀削下塊莖上的芽子，後浸於盛有飽和肥皂水的燒杯中5分鐘，再用自來水衝洗到基本無泡沫，然後再重複上述浸泡衝洗的步驟一次，浸泡時間縮短至2分鐘，自來水衝洗時間不易過長以免造成外植體二次汙染，轉入超淨工作檯，在超淨臺中先用70%的酒精浸泡I分鐘，無菌水中洗2次，用含有兩滴吐溫80的5%次氯酸鈉溶液消毒10分鐘，無菌水中洗5次；再用含有兩滴吐溫80的0.1 %的升汞消毒10分鐘,用無菌水衝洗6次；
[0024](2)接種培養:取將步驟(1)所述的外植體，首先剝去芽的苞葉，儘量多剝幾層，切取帶有潛伏芽的外植體接種到接種培養基中，每瓶只接一塊，培養基的PH6.2，培養溫度為22°C，12h/d的光周期，光照強度1500Lx左右，培養5天開始生長，所述接種培養基為1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30g/L ；
[0025](3)繼代培養:將不汙染的帶有新營養芽的外植體轉入第一繼代培養基中使芽增殖，所述第一繼代培養基是1/2MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，繼代5次，轉入第二繼代培養基或不添加任何激素的空白培養基中繼代一次，所述第二繼`代培養基為1/2MS+IBA0.8mg/L+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，所述空白培養基為1/2MS+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，然後再轉入第一繼代培養基中繼續增殖5代；繼代培養過程中，培養基的PH6.2，培養溫度為22°C，14h/d的光周期，光照強度2000Lx左右；
[0026](4)生根培養:將繼代培養得到的直徑小於0.5cm的小芽轉入生根培養基中,將直徑0.5cm以上較大的芽豎向劈開一分為二再轉入生根培養基中，培養基的PH6.2，培養溫度為22°C，12h/d的光周期，光照強度1500Lx左右，所述生根培養基為1/2MS+NAA0.3mg\L+蔗糖20g/L，20天左右生根，當根生長到3cm左右出瓶，根生長過長或生根時間過長都會影響移栽成活；
[0027](5)煉苗移栽:先將培養瓶移至溫室，自然條件下煉苗4d，然後解開封口膜，煉苗6d，煉苗完成後取出小苗洗淨根部附著的培養基，移栽到經消毒的蛭石中，溫度控制在24-26°C，前7d溼度控制在70%左右，以後逐漸降低溼度，直至將移栽苗置於自然條件下，煉苗移栽期間適當遮光，使光照強度為自然光的50%。
[0028]實施例二:
[0029]花葉玉簪快速繁殖的方法，包括:
[0030](I)外植體的選擇及消毒:於4月選晴朗天氣直接在大田中取塊莖上的萌發芽做為外植體，用小刀削下塊莖上的芽子，後浸於盛有飽和肥皂水的燒杯中7分鐘，再用自來水衝洗到基本無泡沫，然後再重複上述浸泡衝洗的步驟一次，浸泡時間縮短至3分鐘，自來水衝洗時間不易過長以免造成外植體二次汙染，轉入超淨工作檯，在超淨臺中先用70%的酒精浸泡I分鐘，無菌水衝洗2次，用含有兩滴吐溫80的5%次氯酸鈉溶液消毒12分鐘，無菌水衝洗5次；再加入含有兩滴吐溫80的0.1 %的升汞消毒12分鐘,用無菌水衝洗6次；
[0031](2)接種培養:取將步驟(1)所述的外植體，首先剝去芽的苞葉，儘量多剝幾層，切取帶有潛伏芽的外植體接種到接種培養基中，每瓶只接一塊，培養基的PH6.2，培養溫度為23°C，12h/d的光周期，光照強度1500Lx左右，培養3天開始生長，所述接種培養基為1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30g/L ；
[0032](3)繼代培養:將不汙染的帶有新營養芽的外植體轉入第一繼代培養基中使芽增殖，所述第一繼代培養基是1/2MS+6-BA1.2mg/L+NAA0.3mg/L+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，繼代5次，轉入第二繼代培養基或不添加任何激素的空白培養基中繼代一次，所述第二繼代培養基為1/2MS+IBA0.8mg/L+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，所述空白培養基為1/2MS+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，然後再轉入第一繼代培養基中繼續增殖3代；繼代培養過程中，培養基的PH6.2，培養溫度為23°C，18h/d的光周期，光照強度2000Lx左右；
[0033](4)生根培養:將繼代培養得到的直徑小於0.5cm的小芽轉入生根培養基中,將直徑0.5cm以上較大的芽豎向劈開一分為二再轉入生根培養基中，培養基的PH6.2，培養溫度為23°C，12h/d的光周期，光照強度1500Lx左右，所述生根培養基為1/2MS+NAA0.3mg\L+蔗糖20g/L，20天左右生根，當根生長到3cm左右出瓶，根生長過長或生根時間過長都會影響移栽成活；
[0034](5)煉苗移栽:先將培養瓶移至溫室，自然條件下煉苗4d，然後解開封口膜，煉苗6d，煉苗完成後取出 小苗洗淨根部附著的培養基，移栽到經消毒的蛭石中，溫度控制在24-26°C，前7d溼度控制在70%左右，以後逐漸降低溼度，直至將移栽苗置於自然條件下，煉苗移栽期間適當遮光，使光照強度為自然光的50%。
[0035]實施例三:
[0036]一種花葉玉簪快速繁殖的方法，
[0037](I)外植體的選擇及消毒:若在8月初開始取外植體，則在7月初在地裡挖出玉簪洗淨後種植在以乾淨的珍珠巖為基質的盆中，後放在乾淨溫室中只澆清水；用小刀削下塊莖上的芽子，後浸於盛有飽和肥皂水的燒杯中10分鐘，再用自來水中洗到基本無泡沫，然後再重複上述浸泡中洗的步驟一次，浸泡時間縮短至4分鐘，自來水衝洗時間不易過長以免造成外植體二次汙染，轉入超淨工作檯，在超淨臺中先用70%的酒精浸泡I分鐘，無菌水中洗2次，用含有兩滴吐溫80的5%次氯酸鈉溶液消毒15分鐘，無菌水衝洗5次；再加入含有兩滴吐溫80的0.1 %的升汞消毒15分鐘,用無菌水中洗6次；
[0038](2)接種培養:取將步驟(1)所述的外植體，首先剝去芽的苞葉，儘量多剝幾層，切取帶有潛伏芽的外植體接種到接種培養基中，每瓶只接一塊，培養基的PH6.2，培養溫度為24°C，12h/d的光周期，光照強度1500Lx左右，培養7天開始生長，所述接種培養基為1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30g/L ；
[0039](3)繼代培養:將不汙染的帶有新營養芽的外植體轉入第一繼代培養基中使芽增殖，所述第一繼代培養基是l/2MS+6-BA2mg/L+NAA0.5mg/L+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，繼代5次，轉入第二繼代培養基或不添加任何激素的空白培養基中繼代I次，所述第二繼代培養基為1/2MS+IBA0.8mg/L+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，所述空白培養基為1/2MS+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，然後再轉入第一繼代培養基中繼續增殖5代，後轉入第二繼代培養基中繼代
I代，然後再轉入第一繼代培養基中繼續增殖2代；繼代培養過程中，培養基的PH6.2，培養溫度為24°C，16h/d的光周期，光照強度2000Lx左右；
[0040](4)生根培養:將繼代培養得到的直徑小於0.5cm的小芽轉入生根培養基中,將直徑0.5cm以上較大的芽豎向劈開一分為二再轉入生根培養基中，培養基的PH6.2，培養溫度為24°C，12h/d的光周期，光照強度1500Lx左右，所述生根培養基為1/2MS+NAA0.3mg\L+蔗糖20g/L，20天左右生根，當根生長到3cm左右出瓶，根生長過長或生根時間過長都會影響移栽成活；
[0041](5)煉苗移栽:先將培養瓶移至溫室，自然條件下煉苗4d，然後解開封口膜，煉苗6d，煉苗完成後取出小苗洗淨根部附著的培養基，移栽到經消毒的蛭石中，溫度控制在24-26°C，前7d溼度控制在70%左右，以後逐漸降低溼度，直至將移栽苗置於自然條件下，煉苗移栽期間適當遮光，使光照強度為自然光的50%。
[0042]對比例:
[0043]對比例的條件、步驟和實施例三相同，並且都是繼代14代，唯一的區別是不轉換
培養基，只是在第一繼代培養基中繼代增殖。
[0044]上述三個實施例中，花葉玉簪的變異率分別為1.5 %，1.2 %，1.3 %，增值倍數平均達到了 4倍左右，生根 率達到了 96%，最終的成活率達到了 100%，並且質量得到了較好的保證，而對比例中，由於在繼代培養中沒有轉換培養基，繼代到第8代時，變異率達到了22%，繼代到第11代時，變異率達到了 48%，繼代到第14代時，變異率達到了 76%左右，嚴
重影響了花葉玉簪的工廠化育苗。
[0045]除上述實施例外，本發明還可以有其他實施方式。凡採用等同替換或等效變換形成的技術方案，均落在本發明要求的保護範圍。
【權利要求】
1.一種花葉玉簪快速繁殖的方法，其特徵在於，包括: (1)外植體的選擇及消毒:於3-4月選晴朗天氣直接在大田中取塊莖上的萌發芽做為外植體，或者在其它月份提前30天左右在地裡挖出玉簪洗淨後種植在以乾淨的珍珠巖為基質的盆中，後放在乾淨溫室中只澆清水；用小刀削下塊莖上的芽子，後浸於盛有飽和肥皂水的燒杯中5-10分鐘，再用自來水衝洗到基本無泡沫，然後再重複上述浸泡衝洗的步驟一次，浸泡時間縮短至2-4分鐘，自來水衝洗時間不易過長以免造成外植體二次汙染，轉入超淨工作檯，在超淨臺中先用70 %的酒精浸泡I分鐘，無菌水衝洗2次，用含有兩滴吐溫80的5%次氯酸鈉溶液消毒10-15分鐘，無菌水衝洗5次；再用含有兩滴吐溫80的0.1%的升汞消毒10-15分鐘，用無菌水衝洗6次； (2)接種培養:取將步驟(1)所述的外植體，首先剝去芽的苞葉，儘量多剝幾層，切取帶有潛伏芽的外植體接種到接種培養基中，每瓶只接一塊，培養基的PH6.2，培養溫度為23土 1°C，12h/d的光周期，光照強度600Lx左右，培養3-7天開始生長，所述接種培養基為1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30g/L ； (3)繼代培養:將不汙染的帶有新營養芽的外植體轉入第一繼代培養基中使芽增殖，所述第一繼代培養基是 1/2MS+6-BA0.5-2mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+ 磷酸二氫鉀 150mg/L+ 水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，繼代5次左右，轉入第二繼代培養基或不添加任何激素的空白培養基中繼代一次，所述第二繼代培養基為1/2MS+IBA0.8mg/L+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，所述空白培養基為1/2MS+磷酸二氫鉀150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，然後再轉入第一繼代培養基中繼續增殖，根據需苗量重複上述步驟；繼代培養過程中，培養基的PH6.2，培養溫度為23±1°C，14-18h/d的光周期，光照強度1000Lx 左右； (4)生根培養:將繼代培 養得到的小芽直接轉入生根培養基中，較大的苗從中間豎著劈開一分為二再轉入生根培養基中，培養基的PH6.2,培養溫度為23土TC, 12h/d的光周期，光照強度600Lx左右，所述生根培養基為1/2MS+NAA0.3mg\L+蔗糖20g/L，20天左右生根，當根生長到3cm左右出瓶，根生長過長或生根時間過長都會影響移栽成活； (5)煉苗移栽:先將培養瓶移至溫室，自然條件下煉苗4d，然後解開封口膜，煉苗6d，煉苗完成後取出小苗洗淨根部附著的培養基，移栽到經消毒的基質中，溫度控制在24-26°C，前7d溼度控制在70%左右，以後逐漸降低溼度，直至將移栽苗置於自然條件下，煉苗移栽期間適當遮光，使光照強度為自然光的50%。
2.根據權利要求1所述的花葉玉簪快速繁殖的方法，其特徵在於，步驟(4)中所述小芽直徑小於0.5mm ;所述較大的芽直徑0.5mm以上。
3.根據權利要求1或2所述的花葉玉簪快速繁殖的方法，其特徵在於，步驟(5)所述的基質為蛭石。
【文檔編號】A01H4/00GK103858770SQ201410130846
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年4月3日 優先權日:2014年4月3日
【發明者】張金政, 孫國峰, 李曉東, 吳東啟, 林秦文 申請人:中國科學院植物研究所