一種用於棉花採摘前促脫葉的生物菌劑的製備方法

2023-12-12 09:04:57

專利名稱：一種用於棉花採摘前促脫葉的生物菌劑的製備方法
技術領域：
本發明涉及一種生物菌劑，特別是涉及一種用於棉花採摘前促脫葉的生物菌劑的製備方法。
背景技術：
新疆地區棉花在採摘前，需要噴施大量的脫葉劑，但現有的脫葉劑均為化學產品，對環境汙染很大，因此新疆農六師農科所領導與科研人員多年來一直在研究和探索一種生物促脫落的技術與產品來解決這個難題。本發明以3 個菌株 ACCC30387 :灰葡萄抱 Botrytis cinerea Pers. ex Fr.、ACCC30384 :葡萄抱Botrytissp.和ACCC31183 :禾穀絲核菌Rhizoctonia cerealis vander
Hoven (這3個菌種均購自於中國農業微生物菌種保藏管理中心)的發酵液為棉花促脫葉的生物菌劑的活性成分，輔以天然載體物質(腐植酸鉀)、保護劑(海藻酸鉀)和PH值調節劑(檸檬酸、碳酸氫鈉)配製成專用於棉花採摘前促進葉片脫落的生物菌劑。本發明的生物菌劑，產生的次生物質可以促進棉花在採摘前葉片脫落，提高機械化作業的效率，目的是替代目前施用量巨大的化學藥劑，而且是進口的產品成本很高，重點解決化學脫葉劑施用後造成的土壤、水源、大氣的等環境汙染問題，以及人畜的生存安全問題，本發明的生物菌劑為生物製劑，能夠滿足國家對安全環保的戰略要求，以實現經濟效益、生態效益、社會效益的高度統一。

發明內容
本發明的生物菌劑是採用如下方法製備的步驟一、製備發酵液(I)製備菌株ACCC30387的發酵液液體發酵培養基配方20 %馬鈴薯汁-1000ml，葡萄糖-20g, KH2P04-3g, MgSO4 7H20_1. 5g，硫胺素-0. 05g，羥烯腺嘌呤-0. 3g，烯醯腺嘌呤-0. 3g，黃原膠-3g，瓊脂-5g，pH值調至6. 0 ;按上述比例配置好所需發酵培養基的量，然後將菌株於無菌條件下接入液體發酵培養基中，在28°C條件下於搖床上振蕩培養72小時後，至有效活菌數均達到2. OX IO9個/ml製得一級種子；然後將培養好的一級種子按3%的比例，接入裝有按上述比例配好的已經滅菌並冷卻後的發酵罐中進行發酵生產，發酵培養溫度28°C，通氣量開始在I : 1.2(v. v.m)，培養24小時後增至I : 1.5(v. v.m)，48小時後降至I : 1&.^111)，發酵至72小時發酵完畢，經過鏡檢發酵液中40030387:灰葡萄孢的菌量達到20-30億個/ml時為合格菌液；(2)製備菌株ACCC30384的發酵液液體發酵培養基配方蔗糖_30g，MgSO4 WH2O-O. 5g，FeSO4 *4H20-0. Olg，NaN03_3g，KC1-0. 5g，K2HPO4-Ig,黃原膠 _3g，瓊脂_5g，清水補齊至IOOOg ;按上述比例配置好所需發酵培養基的量，然後將菌株於無菌條件下接入液體發酵培養基中，在28°C條件下於搖床上振蕩培養72小時後，至有效活菌數均達到2. OX IO9個/ml製得一級種子；然後將培養好的一級種子按3%的比例，接入裝有按上述比例配好的已經滅菌並冷卻後的發酵罐中進行發酵生產，發酵培養溫度28°C，通氣量開始在I : I (v. V. m),培養24小時後增至I : I. 2 (v. V. m), 48小時後繼續增至I : I. 5 (v. v.m)。發酵至72小時發酵完畢，經過鏡檢發酵液中ACCC30384 :葡萄孢的菌量達到20-30億個/ml時為合格菌液。(3)製備菌株ACCC31183 :的發酵液液體發酵培養基配方20 %馬鈴薯汁-1000ml，葡萄糖-20g, KH2P04-3g, MgSO4 7H20_1. 5g，硫胺素-0. 05g，羥烯腺嘌呤-0. 3g，烯醯腺嘌呤-0. 3g，黃原膠-3g，瓊脂-5g，pH值調至6. 0 ;按上述比例配置好所需發酵培養基的量，然後將菌株於無菌條件下接入液體發酵培養基中，在25°C條件下於搖床上振蕩培養72小時後，至有效活菌數均達到2. OX IO9個/ml製得一級種子；然後將培養好的一級種子按3%的比例，接入裝有按上述比例配好的已經滅菌並冷卻後的發酵罐中進行發酵生產，發酵培養溫度25 0C，通氣量開始在I l(v. V. m)，培養24小時後增至1:1.2 (v. v. m)，48小時後繼續增至I : I. 5(v. v.m)。發酵至72小時發酵完畢，經過鏡檢發酵液中ACCC31183 禾穀絲核菌的菌量達到20-30億個/ml時為合格菌液；菌株ACCC30387 為灰葡萄抱 Botrytis cinerea Pers. ex Fr.；菌株ACCC30384 為葡萄抱 Botrytis sp.；菌株ACCC31183 為禾穀絲核菌 Rhizoctonia cerealis vander Hoven ；上述3種菌株均購自於中國農業微生物菌種保藏管理中心；步驟二 生物菌劑的製備將按重量計的菌株ACCC30387的發酵液20%，菌株ACCC30384的發酵液20%，菌株ACCC31183的發酵液20%，腐植酸鉀10%，海藻酸鉀10 %，用少量檸檬酸或碳酸氫鈉將PH值調節至6. 0，餘量用清水補齊後混合攪拌溶解均勻，製得本發明所述生物菌劑。上述百分比均為重量百分比。本發明的生物菌劑可以促進棉花在採摘前葉片脫落，提高機械化作業的效率，解決化學脫葉劑對環境的汙染問題。本發明的生物菌劑應該在棉花採摘前20天開始整株噴施，每隔5-7天施用一次，連續使用3次以上效果顯著。但在實際的生產應用中，本發明的生物菌劑促棉葉脫落的效果比化學藥劑略低，所需要噴施的次數比化學藥劑多，發揮作用所需要的時間比化學試劑要長，這是本發明與目前大量應用的化學藥劑(乙烯利與脫落酸的復配產品)比起來存在的不足之處，仍需要我們科研工作者繼續努力研究，開發出促脫落效率更高、施用一次就見效、發揮效果所需時間短的更好的產品。但是本發明為生物製劑，使用成本低廉，安全環保無汙染，在面對國家對環境保護與生活安全的戰略要求時，本發明的生物菌劑便成為值得推廣和應用的有經濟效益、生態效益和社會效益的好產品了。具體的實施方式為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，本發明用以下具體實例進行說明，但本發明不局限於這些具體實施例。實施例I :製備本發明的生物菌劑所使用的菌株菌株ACCC30387 為灰葡萄抱 Botrytis cinerea Pers. ex Fr.；菌株ACCC30384為葡萄抱Botrytis sp.;菌株ACCC31183為禾穀絲核菌Rhizoctoniacerealis vander Hoven ;這3種菌株均購自於中國農業微生物菌種保藏管理中心。首先，製備菌株ACCC30387的發酵液液體發酵培養基配方20 %馬鈴薯汁-1000ml，葡萄糖-20g, KH2P04-3g, MgSO4 7H20_1. 5g，硫胺素-0. 05g，羥烯腺嘌呤-0. 3g，烯醯腺嘌呤-0. 3g，黃原膠-3g，瓊脂-5g，pH值調至6. 0 ;按上述比例配置好所需發酵培養基的量，然後將菌株於無菌條件下接入液體發酵培養基中，在28°C條件下於搖床上振蕩培養72小時後，至有效活菌數均達到2. OX IO9個/ml製得一級種子；然後將培養好的一級種子按3%的比例，接入裝有按上述比例配好的已經滅菌並冷卻後的發酵罐中進行發酵生產，發酵培養溫度28 °C，通氣量開始在I : I. 2 (v. v.m)，培養24小時後增至I : 1.5(v. v.m)，48小時後降至I : 1&.^111)，發酵至72小時發酵完畢，經過鏡檢發酵液中40030387:灰葡萄孢的菌量達到20-30億個/ml時為合格菌液；其次，製備菌株ACCC30384的發酵液液體發酵培養基配方蔗糖_30g，MgSO4 WH2O-O. 5g，FeSO4 *4H20-0. Olg，NaN03_3g，KC1-0. 5g，K2HPO4-Ig,黃原膠 _3g，瓊脂_5g，清水補齊至IOOOg ;按上述比例配置好所需發酵培養基的量，然後將菌株於無菌條件下接 入液體發酵培養基中，在28°C條件下於搖床上振蕩培養72小時後，至有效活菌數均達到2. OX IO9個/ml製得一級種子；然後將培養好的一級種子按3%的比例，接入裝有按上述比例配好的已經滅菌並冷卻後的發酵罐中進行發酵生產，發酵培養溫度28°C，通氣量開始在I : I (v. V. m),培養24小時後增至I : I. 2 (v. V. m), 48小時後繼續增至I : I. 5 (v. v.m)。發酵至72小時發酵完畢，經過鏡檢發酵液中ACCC30384 :葡萄孢的菌量達到20-30億個/ml時為合格菌液。再次，製備菌株ACCC31183 :的發酵液液體發酵培養基配方20%馬鈴薯汁-1000ml，葡萄糖-20g, KH2P04-3g, MgSO4 7H20_1. 5g，硫胺素-0. 05g，羥烯腺嘌呤-0. 3g，烯醯腺嘌呤-0. 3g，黃原膠-3g，瓊脂-5g，pH值調至6. 0 ;按上述比例配置好所需發酵培養基的量，然後將菌株於無菌條件下接入液體發酵培養基中，在25°C條件下於搖床上振蕩培養72小時後，至有效活菌數均達到2. OX IO9個/ml製得一級種子；然後將培養好的一級種子按3%的比例，接入裝有按上述比例配好的已經滅菌並冷卻後的發酵罐中進行發酵生產，發酵培養溫度25 0C，通氣量開始在I l(v. V. m)，培養24小時後增至1:1.2 (v. v. m)，48小時後繼續增至I : I. 5(v. v.m)。發酵至72小時發酵完畢，經過鏡檢發酵液中ACCC31183 禾穀絲核菌的菌量達到20-30億個/ml時為合格菌液；最後將菌株ACCC30387的發酵液200g，菌株ACCC30384的發酵液200g，以及菌株ACCC31183的發酵液200g，腐植酸鉀100g，海藻酸鉀100g，用少量檸檬酸或碳酸氫鈉將pH值調節至6. 0，餘量用清水補齊至IOOOg後混合攪拌溶解均勻，製得本發明所述生物菌劑。拮抗試驗將菌株ACCC30387、ACCC30384、ACCC31183在PDA培養基上，三點放置相互間距3cm，每個組合重複三次，進行交叉拮抗試驗，結果表明三者相互之間不存在拮抗，能夠共同生長。實施例2 :測定本發明生物菌劑的生物活性表I.菌劑ACCC30387、ACCC30384、ACCC31183、本發明生物菌劑的促脫葉效果名稱 ACCC30387 ACCC30384 ACCC31183 本發明生物菌劑 _72.4%_56. 9%_38. 5%_93. 6%_從表I.數據可以看出單一菌劑促進脫落的效果明顯不如混配在一起的複合菌劑的效果好，說明三種菌劑按一定比例混配在一起可以發揮微生物之間優勢互補與協同增效的作用。在田間將上述製得生物菌劑稀釋1000倍後，採用噴施的辦法於棉花採摘前20內天連續噴施3次，第一次噴施後，每間隔5-7天噴施一次，可使90%以上的棉葉在20天內迅 速衰老脫落。本發明的一種用於棉花採摘前促脫葉的生物菌劑的製備方法已經通過具體的實施例進行了描述。本領域技術人員可以借鑑本發明的內容適當改變原料、工藝條件等環節來實現相應的其它目的，其相關改變都沒有脫離本發明的內容，所有類似的替換和改動對於本領域技術人員來說是顯而易見的，都被視為包括在本發明的範圍之內。
權利要求
1.一種用於棉花採摘前促脫葉的生物菌劑，所述生物菌劑是採用如下方法製得的 步驟一、製備發酵液 (1)製備菌株ACCC30387的發酵液液體發酵培養基配方20%馬鈴薯汁-1000ml，葡萄糖-20g，KH2P04-3g, MgSO1 · 7H20_1. 5g，硫胺素_0. 05g,羥烯腺嘌呤_0. 3g，烯醯腺嘌呤-O. 3g，黃原膠-3g，瓊脂-5g，pH值調至6. 0 ;按上述比例配置好所需發酵培養基的量，然後將菌株於無菌條件下接入液體發酵培養基中，在28°C條件下於搖床上振蕩培養72小時後，至有效活菌數均達到2. O X IO9個/ml製得一級種子；然後將培養好的一級種子按3 %的比例，接入裝有按上述比例配好的已經滅菌並冷卻後的發酵罐中進行發酵生產，發酵培養溫度28°C，通氣量開始在I I. 2 (V. V. m)，培養24小時後增至I I. 5 (v. v. m)，48小時後降至I : I (V. V. m)，發酵至72小時發酵完畢，經過鏡檢發酵液中ACCC30387 :灰葡萄孢的菌量達到20-30億個/ml時為合格菌液； (2)製備菌株ACCC30384的發酵液液體發酵培養基配方蔗糖_30g，MgSO4 ·7Η20-0· 5g，FeSO4 ·4Η20_0. Olg，NaN03_3g，KC1-0. 5g，K2HPO4-Ig,黃原膠 _3g，瓊脂_5g，清水補齊至IOOOg ;按上述比例配置好所需發酵培養基的量，然後將菌株於無菌條件下接入液體發酵培養基中，在28°C條件下於搖床上振蕩培養72小時後，至有效活菌數均達到2.OX IO9個/ml製得一級種子；然後將培養好的一級種子按3%的比例，接入裝有按上述比例配好的已經滅菌並冷卻後的發酵罐中進行發酵生產，發酵培養溫度28°C，通氣量開始在I : I (V. V. m),培養24小時後增至I : I. 2 (v. v. m), 48小時後繼續增至I : 1.5(v. v. m)。發酵至72小時發酵完畢，經過鏡檢發酵液中ACCC30384 :葡萄孢的菌量達到20-30億個/ml時為合格菌液。
(3)製備菌株ACCC31183:的發酵液液體發酵培養基配方20 %馬鈴薯汁-1000ml，葡萄糖-20g，KH2P04-3g, MgSO4 · 7H20_1. 5g，硫胺素_0. 05g,羥烯腺嘌呤_0. 3g，烯醯腺嘌呤-O. 3g，黃原膠-3g，瓊脂-5g，pH值調至6. 0 ;按上述比例配置好所需發酵培養基的量，然後將菌株於無菌條件下接入液體發酵培養基中，在25°C條件下於搖床上振蕩培養72小時後，至有效活菌數均達到2. O X IO9個/ml製得一級種子；然後將培養好的一級種子按3 %的比例，接入裝有按上述比例配好的已經滅菌並冷卻後的發酵罐中進行發酵生產，發酵培養溫度25°C，通氣量開始在I I (V. V. m)，培養24小時後增至I I. 2 (v. v. m)，48小時後繼續增至I : 1.5(v.v.m)。發酵至72小時發酵完畢，經過鏡檢發酵液中ACCC31183:禾穀絲核菌的菌量達到20-30億個/ml時為合格菌液； 步驟二 生物菌劑的製備 將按重量計的菌株ACCC30387的發酵液20 %，菌株ACCC30384的發酵液20%，菌株ACCC31183的發酵液20%，腐植酸鉀10%，海藻酸鉀10 %，用少量檸檬酸或碳酸氫鈉將pH值調節至6.0，餘量用清水補齊後混合攪拌溶解均勻，製得本發明所述生物菌劑，所述％均為重量百分比。
2.權利要求I的生物菌劑用於棉花採摘前促脫葉的用途。
全文摘要
本發明涉及一種棉花採摘前促脫葉的生物菌劑，所述生物菌劑採用3種菌株ACCC30387灰葡萄孢Botrytis cinerea Pers.ex Fr.、ACCC30384葡萄孢Botrytis sp.和ACCC31183禾穀絲核菌Rhizoctonia cerealis vander Hoven，經發酵後與其它輔料混合製得，該生物菌劑可以促進棉花在採摘前葉片脫落，提高機械化作業的效率，解決化學脫葉劑對環境的汙染問題。
文檔編號A01N63/02GK102972444SQ20121046677
公開日2013年3月20日 申請日期2012年11月19日 優先權日2012年11月19日
發明者趙戰勝 申請人:新疆生產建設兵團農六師農業科學研究所