家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存方法
2023-12-10 04:05:11 2
專利名稱：家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存方法
技術領域：
本發明涉及禽類、魚類、昆蟲的管理，具體是指一種採用人工注射滯育激素方法， 使家蠶無滯育期多化性品種能夠產下滯育卵，從而達到高效、安全保存的家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存方法。
背景技術：
家蠶為卵態滯育，在自然條件下，按照一年中發生世代不同分為一化、二化和多化性品種。多化性蠶品種又分為有滯育期多化性品種和無滯育期多化性品種。有滯育期多化性品種在各個世代均有部分卵滯育，而無滯育期多化性蠶品種發育快，生活周期短，各世代均產無滯育卵，全年需要不間斷地飼養7 8代才能繼代保存。由於地理氣候原因，全國大部分地區每年只能用桑葉養蠶4 5次，在當年的11月至次年3月沒有桑葉生產期，只能利用家蠶人工飼料進行飼養繼代保存，給無滯育期多化性蠶品種的保存帶來很大困難。而且利用人工飼料養蠶技術要求高、成本高，以及不同蠶品種對人工飼料適應性不同，用人工飼料飼養保存無滯育期多化性蠶品種存在很大風險。因此，有必要在不影響保存品種的化性、主要特徵特性和經濟性狀的條件下，對無滯育期多化性蠶品種冬季的保存技術進行創新，以保證無滯育期多化性品種冬季能夠得到安全、高效的保存；且能減少2-3次的養蠶次數，節約大量的人力、物力和財力，大大提高保存工效。
發明內容
本發明所要解決的技術問題在於針對無滯育期多化性蠶品種冬季保存存在的問題，提供一種在蠶蛹期採用注射人工合成的昆蟲滯育激素(diapause hormone，DH)，使無滯育期多化性蠶品種產下非遺傳性的滯育卵，在冬季能夠得到安全、高效保存的家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存方法。本發明的家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存方法以微量注射器為注射工具，以人工合成的昆蟲滯育激素的稀釋液為注射液，採用在蠶蛹期注射人工合成的昆蟲滯育激素，使無滯育期多化性蠶品種產下非遺傳性的滯育卵，在冬季得到保存；保存方法的具體實施步驟和控制條件如下1、選擇注射時期在家蠶無滯育期多化性品種進行桑葉飼養至最後一個蠶期的蛹期進行；2、蛹期經過時間的確定家蠶無滯育期多化性品種在環境溫度為25. 5°C的條件下，蛹期經過9天左右，蜇中經過11天左右；待熟蠶吐絲完畢結成繭後，削開尚未化蛹的蠶繭，平鋪於恆溫箱中，溫度控制在25°C -26°C，相對溼度70%-75%,觀察並記載每頭蠶的實際化蛹時間，以備註射所用，雄性蠶蛹正常保護，供化蛾交配用，以小時計算雌蛹在化蛹後所經過的時間；3、配製注射液在注射前採用無菌水稀釋人工合成的昆蟲滯育激素(diapause hormone, DH)，配製成有效成分含量為0. 5 μ g/ μ 1的注射液；昆蟲滯育激素原劑需在_70°C的條件下保存，配製稀釋液時要將原劑緩慢解凍後，再現配現用；4、注射將已選出的在有效注射期內的雌蠶蛹，用經體積百分含量濃度為75%的酒精浸漬的酒精藥棉，將整個蠶蛹體擦拭消毒，同時消毒實驗用具和雙手，然後選用10 μ 1 的微量注射器進行注射，注射有效期為從化蛹後經過18h至120h，個體注射有效劑量在 0. 5 μ g/蛹至2 μ g/蛹之間，用微量注射器抽取滯育激素稀釋液，注射器針頭對準蠶蛹腹部的第四和第五腹節間平行刺入蠶蛹體內，刺入深度約1cm，定量注入注射液後緩慢拔出針頭，然後再對蠶蛹體的注射傷口用經體積百分含量濃度為75%的酒精浸漬的酒精藥棉進行消毒；5、注射滯育激素液後的蠶蛹及蠶卵的保護將已注射滯育激素液後的蠶蛹分攤於消過毒的透氣容器盒內，在25°C _26°C的溫度和70-75%的相對溼度條件下保護至羽化，與正常雄蛾交配，產下的非遺傳性滯育蠶卵，按常規方法進行保護。人工合成的昆蟲滯育激素(diapause hormone, DH)，是一種多肽激素，由24個胺基酸殘基組成，C末端醯胺化，胺基酸序列為H-Thr-Asp-Met-Lys-Asp-Glu-Ser-Asp-Arg-G ly-Ala-His-Ser-Glu-Arg-Gly-Ala-Leu-Cys-Phe-Gly-Pro-Arg-LeuNH2,分子量為 2645。稀釋人工合成昆蟲滯育激素的無菌水採用三角瓶裝蒸餾水，並用高壓蒸汽滅菌法滅菌，滅菌控制條件壓力103. 4KPa，溫度121°C，時間20分鐘。注射消毒藥棉為經體積百分含量濃度為75%的酒精浸漬的酒精藥棉。注射器為10μ 1的微量注射器。注射的最佳時期為化蛹後經過24h至86h。根據實驗結果，0. 5μ g/蛹為注射滯育激素的個體有效劑量的最低值，0. 5 μ g/蛹劑量和1 μ g/蛹劑量的滯育卵率，分別平均為 57. 61%和69. 52% ；2μ g/蛹劑量的滯育率基本可以達到94%以上。經注射滯育激素後對所產卵的滯育性和滯育卵後代的性狀的調查，滯育激素注射對無滯育期多化性品種後代的化性不會產生任何影響，仍然保持著其固有的無滯育期多化性的特性。當進行家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存時，選擇在家蠶無滯育期多化性品種進行桑葉飼養至最後一個蠶期的蛹期為注射時期。在注射期內，家蠶無滯育期多化性品種在環境溫度為25. 5°C的條件下，蛹期經過9天左右，蜇中經過11天左右；待熟蠶吐絲完畢結成繭後，削開尚未化蛹的蠶繭，平鋪於恆溫箱中，溫度控制在25V _26°C，相對溼度 70% -75% ；觀察並記載每頭蠶的實際化蛹時間，以備註射所用，雄性蠶蛹正常保護，供化蛾交配用；以小時計算雌蛹在化蛹後所經過的時間。在注射前，採用無菌水稀釋人工合成的昆蟲滯育激素(diapause hormone, DH)，配製成有效成分含量為0. 5 μ g/μ 1的注射液； 昆蟲滯育激素原劑需在_70°C的條件下保存，配製稀釋液時要將原劑緩慢解凍後，再現配現用。配製好注射液後，將已選出的在有效注射期內的雌蠶蛹，用經體積百分比含量濃度為 75%的酒精浸漬的酒精藥棉，將整個蠶蛹體擦拭消毒，同時消毒實驗用具和雙手，然後選用 10 μ 1的微量注射器進行注射，注射有效期為從化蛹後經過18h至120h，個體注射有效劑量在0. 5 μ g/蛹至2 μ g/蛹之間，用微量注射器抽取滯育激素稀釋液，注射器針頭對準蠶蛹腹部的第四和第五腹節間平行刺入蠶蛹體內，刺入深度約lcm，定量注入注射液後緩慢拔出針頭，然後再對蠶蛹體的注射傷口用經體積百分比含量濃度為75%的酒精浸漬的酒精藥棉進行消毒。注射滯育激素液完畢後，將已注射滯育激素液後的蠶蛹分攤於消過毒的透氣容器盒內，在溫度為25°C _26°C和相對溼度為70-75%的條件下保護至羽化，與正常雄蛾交配， 產下的非遺傳性滯育蠶卵，按常規方法進行保護。完成家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存工作。本發明的優點就在於採用人工注射滯育激素的方法，使無滯育期多化性蠶品種在冬季能夠得到高效、安全的保存。克服了傳統的無滯育期多化性蠶品種需要全年不間斷地進行飼養才可以繼代保存，特別是每年冬季沒有桑葉生產給無滯育期多化性蠶品種的保存帶來的很大困難。不僅降低了品種保存成本，而且避免了不同蠶品種對人工飼料適應性的不同而給無滯育期多化性蠶品種冬季保種帶來的風險。本發明利用蠶卵的滯育性是在蛹體卵巢成熟過程中決定的特性，給雌蠶蛹注射昆蟲滯育激素(diapausehormone，DH)，得到非遺傳性的滯育卵，有利於無滯育期多化性蠶品種的繼代保存。同時，在不影響品種的化性及特徵特性和經濟性狀的條件下，既能夠降低家蠶無滯育期多化性品種的保存風險，而且還減少了 2-3次的養蠶次數，大幅度地提高了工效，節約了人力、物力和財力。因此本發明方法是一種安全、有效的冬季保存無滯育期多化性蠶品種的方法，具有廣闊的推廣應用前景。
具體實施例方式實施例1，家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存方法採用本發明家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存方法。保存方法以微量注射器為注射工具，以人工合成的昆蟲滯育激素的稀釋液為注射液，採用在蠶蛹期注射人工合成的昆蟲滯育激素，使無滯育期多化性蠶品種產下非遺傳性的滯育卵，在冬季得到保存。保存方法的具體實施步驟和控制條件如下1、選擇注射時期在家蠶無滯育期多化性品種進行桑葉飼養至最後一個蠶期的蛹期進行；2、蛹期經過時間的確定家蠶無滯育期多化性品種在環境溫度為25. 5°C的條件下，蛹期經過9天左右，蜇中經過11天左右；待熟蠶吐絲完畢結成繭後，削開尚未化蛹的蠶繭，平鋪於恆溫箱中，溫度控制在25°C -26°C，相對溼度70%-75%,觀察並記載每頭蠶的實際化蛹時間，以備註射所用，雄性蠶蛹正常保護，供化蛾交配用，以小時計算雌蛹在化蛹後所經過的時間；3、配製注射液在注射前採用無菌水稀釋人工合成的昆蟲滯育激素(diapause hormone, DH)，配製成有效成分含量為0. 5 μ g/ μ 1的注射液；昆蟲滯育激素原劑需在_70°C 的條件下保存，配製稀釋液時要將原劑緩慢解凍後，再現配現用；4、注射將已選出的在有效注射期內的雌蠶蛹，用經體積百分含量濃度為75%的酒精浸漬的酒精藥棉，將整個蠶蛹體擦拭消毒，同時消毒實驗用具和雙手，然後選用10 μ 1 的微量注射器進行注射，注射有效期為從化蛹後經過18h至120h，個體注射有效劑量在 0. 5 μ g/蛹至2 μ g/蛹之間，用微量注射器抽取滯育激素稀釋液，注射器針頭對準蠶蛹腹部的第四和第五腹節間平行刺入蠶蛹體內，刺入深度約1cm，定量注入注射液後緩慢拔出針頭，然後再對蠶蛹體的注射傷口用經體積百分比含量濃度為75%的酒精浸漬的酒精藥棉進行消毒；5、注射滯育激素液後的蠶蛹及蠶卵的保護將已注射滯育激素液後的蠶蛹分攤於消過毒的透氣容器盒內，在25°C _26°C的溫度和70-75%的相對溼度條件下保護至羽化，與正常雄蛾交配，產下的非遺傳性滯育蠶卵，按常規方法進行保護。對採用材料的說明
1、蠶品種來源及特性由中國農業科學院蠶業研究所近幾年從國外引進保存的家蠶無滯育期多化性品種共13份(見表1)，具有耐高溫高溼、體質強健、發育經過短等特點。表1、中國農業科學院蠶業研究所保存的無滯育多化性蠶品種
權利要求
1.一種家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存方法，其特徵在於以微量注射器為注射工具，以人工合成的昆蟲滯育激素的稀釋液為注射液，採用在蠶蛹期注射人工合成的昆蟲滯育激素，使無滯育期多化性蠶品種產下非遺傳性的滯育卵，在冬季得到保存；保存方法的具體實施步驟和控制條件如下(1)、選擇注射時期在家蠶無滯育期多化性品種進行桑葉飼養至最後一個蠶期的蛹期進行；⑵、蛹期經過時間的確定家蠶無滯育期多化性品種在環境溫度為25. 5°C的條件下， 蛹期經過9天，蜇中經過11天；待熟蠶吐絲完畢結成繭後，削開尚未化蛹的蠶繭，平鋪於恆溫箱中，溫度控制在25°C — 26°C，相對溼度70% — 75%，觀察並記載每頭蠶的實際化蛹時間，以備註射所用，雄性蠶蛹正常保護，供化蛾交配用，以小時計算雌蛹在化蛹後所經過的時間；⑶、配製注射液在注射前採用無菌水稀釋人工合成的昆蟲滯育激素，配製成有效成分含量為0. 5μδ/μ1的注射液；昆蟲滯育激素原劑需在-70°C的條件下保存，配製稀釋液時要將原劑緩慢解凍後，再現配現用；⑷、注射將已選出的在有效注射期內的雌蠶蛹，用經體積百分含量濃度為75%的酒精浸漬的酒精藥棉，將整個蠶蛹體擦拭消毒，同時消毒實驗用具和雙手，然後選用10μ1的微量注射器進行注射，注射有效期為從化蛹後經過18h至120h，個體注射有效劑量在0. 5μδ/ 蛹至蛹之間，用微量注射器抽取滯育激素稀釋液，注射器針頭對準蠶蛹腹部的第四和第五腹節間平行刺入蠶蛹體內，刺入深度約1cm，定量注入注射液後緩慢拔出針頭，然後再對蠶蛹體的注射傷口用經體積百分含量濃度為75%的酒精浸漬的酒精藥棉進行消毒；(5)、注射滯育激素液後的蠶蛹及蠶卵的保護將已注射滯育激素液後的蠶蛹分攤於消過毒的透氣容器盒內，在25°C — 260C的溫度和70-75%的相對溼度條件下保護至羽化，與正常雄蛾交配，產下的非遺傳性滯育蠶卵，按常規方法進行保護。
2.根據權利要求1所述的家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存方法，其特徵在於所使用的人工合成的昆蟲滯育激素為一種多肽激素，由24個胺基酸殘基組成，C末端醯胺化，胺基酸序列為 H-Thr-Asp-Met-Lys-Asp-Glu-Ser-Asp-Arg-Gly-Ala-His-Ser-Glu-Arg-Gly-Ala-Leu-Cys-Phe-Gly-Pro-Arg-Leu-NH2,分子量為 2645。
3.根據權利要求1所述的家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存方法，其特徵在於稀釋人工合成昆蟲滯育激素的無菌水採用三角瓶裝蒸餾水，並用高壓蒸汽滅菌法滅菌，滅菌控制條件壓力=103. 4KPa，溫度121°C，時間20分鐘。
4.根據權利要求1所述的家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存方法，其特徵在於注射時期選擇化蛹後經過24h至86h。
5.根據權利要求1所述的家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存方法，其特徵在於蠶蛹個體注射劑量為0. 5μδ/蛹。
6.根據權利要求1所述的家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存方法，其特徵在於蠶蛹個體注射劑量為蛹。
7.根據權利要求1所述的家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存方法，其特徵在於蠶蛹個體注射劑量為Wg/蛹。
8.根據權利要求1所述的家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存方法，其特徵在於注射時期選擇化蛹後經過24h，蠶蛹個體注射劑量為蛹。
9.根據權利要求1所述的家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存方法，其特徵在於注射時期選擇化蛹後經過55h，蠶蛹個體注射劑量為蛹。
10.根據權利要求1所述的家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存方法，其特徵在於注射時期選擇化蛹後經過86h，蠶蛹個體注射劑量為蛹。
全文摘要
本發明提供了一種家蠶無滯育期多化性品種的冬季安全保存方法，保存方法以微量注射器為注射工具，以人工合成的昆蟲滯育激素的稀釋液為注射液，採用在蠶蛹期注射人工合成的昆蟲滯育激素，使無滯育期多化性蠶品種產下非遺傳性的滯育卵，在冬季得到保存。本發明的保存方法克服了傳統的無滯育期多化性蠶品種需要全年不間斷地進行飼養才可以繼代保存，特別是每年冬季沒有桑葉生產給無滯育期多化性蠶品種的保存帶來的困難。不僅降低了品種保存成本，而且避免了不同蠶品種對人工飼料適應性的不同而給無滯育期多化性蠶品種冬季保種帶來的風險。
文檔編號A01K67/04GK102217571SQ201110100668
公開日2011年10月19日 申請日期2011年4月21日 優先權日2011年4月21日
發明者孫平江, 宋紅生, 張月華, 徐安英, 李木旺, 李龍, 錢荷英 申請人:江蘇科技大學