黃麴黴毒素的固相萃取的製作方法

2023-12-10 00:31:36

專利名稱：：黃麴黴毒素的固相萃取的製作方法
技術領域：
：本發明涉及適用於結合黃麴黴毒素(Bi、B2,G1和G2)的聚合物。該聚合物可用於黃麴黴毒素的固相萃取和將黃麴黴毒素固定在固相萃取(SPE)盒中以對從食品或飼料提取的溶液中的黃麴黴毒素進行定性或定量分析。
背景技術：
：各種各樣的人類食品和動物飼料，其中包括食用堅果、油籽、穀物、草料和用它們生產的產品，很容易受到黴菌毒素的汙染，這是黴菌的有毒代謝副產物，它們可能會在收穫前和後在糧食和飼料作物中存在。其中最重要的是黃麴黴毒素，由黴菌黃麴黴和寄生麴黴產生的一組密切相關的黴菌毒素。並非所有的黴菌隔離群都產生黃麴黴毒素，因此僅僅存在黃麴黴或寄生麴黴並不意味著黃麴黴毒素將在基體上存在。因此直接測量黃麴黴毒素水平是食品和飼料的質量控制的一個重要方面。這種測量通常使用高效液相色譜法(HPLC)進行。然而，在高效液相色譜設備無法使用或不適於使用的情況下，通過薄層色譜法(TLC)來測定也是可行的。在TLC分離後，用發射波長366納米的汞燈作為光源以激發螢光，可以使用商用掃描儀進行黴菌毒素測量，該螢光用光電倍增管檢測和量化。對於定量檢測，還有放射免疫檢定技術和以免疫化學為基礎的技術，如酶聯免疫吸附測定(ELISA)方法。在從食品樣品中儀萃取法得到的溶液例如使用HPLC定量測定之前，可使用固相萃取對該溶液進行「清理」工序，以去除可能會干擾黴菌毒素的評估的化合物。可以使用小型色譜柱(稱為「微型柱」，mini-column)進行黴菌毒素的定量檢測，其中在微型柱的礦物吸附劑內黴菌毒素被固定為一層。在紫外線光下觀察微型柱，被固定的黴菌毒素會產生螢光。多種微型柱方法已經被採納成為AOAC國際(官方分析化學家協會AssociationofOfficialAnalyticalCommunities)的正式測試。WO2006/123189描述了一種對固定在微型柱的層中的黴菌毒素進行定量螢光測定的裝置，並且還提到了分子印跡聚合物和非分子印跡(空白)聚合物作為SPE盒中黴菌毒素吸附劑的用途。WO2003/101580公開了一種用於將黴菌毒素與固體載體結合的方法，其中包括利用黴菌毒素作為模板來準備分子印跡聚合物(MIP)。從所提到的黴菌毒素和功能單體的大批清單中，實際製備的一些MIP僅使用黴菌毒素脫氧萎鐮菌醇(mycotoxinsDON)和玉米赤黴烯酮(ZON)作為模板。對於DON的MIP以二乙氨乙基-甲基丙烯酸甲酯(DEAMA)、4_乙烯基吡啶(4-VP)或甲基丙烯酸(MAA)與作為交聯劑的乙二醇-甲基丙烯酸酯(EDMA)或二乙烯基苯(DVP)聚合而成。對於ZON的MIP是用EDMA作為交聯劑以三氟甲基丙烯酸(TFM)或4-VP聚合得到的。
發明內容本發明的目的是提供一種可用作對於黃麴黴毒素有選擇性的SPE吸附劑的聚合物。本發明是基於以下發現含有醯胺、胺、吡啶、磷酸鹽或磺酸鹽部分的聚合物在用作SPE吸附劑時能夠固定黃麴黴毒素。因此從廣義上看，本發明提供了含有醯胺、胺、吡啶、磷酸鹽或磺酸基的聚合物作為SPE吸附劑以固定黃麴黴毒素的用途。如果這種聚合物本身是新穎的，它們也形成本發明的另一個方面。所述聚合物最好含有由丙烯醯胺基單體而來的部分，例如一種或多種亞甲雙丙烯醯胺(MBBA)、丙烯醯胺或丙烯醯胺-2-甲基丙烷磺酸(AMPSA)，或它們的衍生物。用於本發明的聚合物可通過常規聚合技術製備，不使用黃麴黴毒素或結構類似物作為模板(template)。所述聚合物優選被製備為大孔性的(macroporous)，例如通過在聚合過程中使用致孔劑形成。本發明的另一個方面是一種SPE吸附劑單元，包括裝有或塗有上述聚合物的吸附劑層的柱、試管、棒、針、膜或平整表面。本發明的另一個方面是一種黃麴黴毒素的螢光分析方法，包括以下步驟將黃麴黴毒素吸附在裝入或裝在試管、盒、棒或平整表面中的所述聚合物上，使所固定的黃麴黴毒素曝露在紫外線光中，以及檢測由所述固定的黃麴黴毒素髮出的螢光。可用於聚合物的製備並在聚合物中佔有適當的部分的單體包括丙烯胺；亞甲雙丙烯醯胺(MBAA)；丙烯醯胺，甲基丙烯酸磷酸乙二醇酯(EGMP)；4-乙烯基吡啶和2-丙烯醯胺-2-甲基丙烷磺酸(AMPSA)。優選實施例是含有丙烯醯胺部分的聚合物，如丙烯醯胺和MBAA，它們特別有效。優選地，所述功能單體與交聯劑有效交聯，所述交聯劑不幹擾與黃麴黴毒素的相互作用。合適的交聯劑包括多元醇二丙烯酸酯，如乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)以及乙烯基苯(DVB)及其類似物。圖1是根據本發明的SPE吸附劑盒的剖視圖；圖2是圖1的SPE吸附劑盒的一種變型的剖視圖。具體實施例方式包括含有醯胺、胺、吡啶、磷酸鹽或磺酸鹽部分的聚合物單元的聚合物是本發明的主要組成部分，它可以通過將含有醯胺、胺、吡啶、磷酸鹽或磺酸鹽部分(功能單體)的適當單體聚合而製備。聚合物最好是作成多孔的，以增加可與黃麴黴毒素相互作用的表面積。多孔聚合物可在致孔劑存在下通過聚合功能單體和交聯劑而製備，致孔劑即是可分散在單體中的物質，並在單體的反應後仍然分散在聚合物中，但可以在聚合物形成後被去除以在聚合物中形成孔。通常孔隙度的增加會導致表面積增大，這可用於使結合力達到最大。通常情況下，一種合適的致孔劑在聚合反應過程中是惰性的。致孔劑可以是固體、液體或氣體。固體或液體可以通過分解或溶解在一個合適的溶劑中而去除。通常情況下液體致孔劑可通過攪拌而在聚合物混合物中彌散，並可通過用合適的溶劑清洗聚合物而被去除。當以上列出的功能單體與常用的交聯劑乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)和二乙烯基苯(DVB)交聯時，合適的致孔劑為N，N-二甲基甲醯胺(DMF)。也可以使用在實踐中用於自由基引發聚合反應的乙腈、甲醇、甲苯、乙醇、甘油或其它溶劑。功能單體與選定的交聯劑之間的反應在適合反應的常規條件下進行。例如，列出的功能單體與交聯劑乙二醇二甲基和二乙烯基苯的反應可在高溫(即高於環境溫度)下進行，或在低溫條件下(即低於環境溫度)在UV光照射下進行，或在合適的引發劑如1，1_偶氮(環己烷腈)存在時沉澱聚合。許多不同的自由基、原子轉移、離子聚合的引發劑，也可用於製備適當的聚合物。使用本領域技術人員已知的化學、UV或等離子體工藝，所述單體也可用於在珠子、膜或其它物品的表面上形成接枝聚合物。在SPE聚合物中，源自功能單體的單位與來自交聯劑的單位的比例可以從約51到約1100。已發現在約13至120範圍中的比例是特別有效的。例如，14的比例在熱聚合產生的聚合物中提供了有效的吸附劑，且119的比例在低溫UV聚合產生的聚合物中提供了有效的吸附劑。雖然EGDMA和二乙烯基苯(DVB)是優選的交聯劑，也可以使用其它的能夠交聯功能雙丙烯醯胺聚合物的單體。該交聯劑的反應活性最好與功能單體類似。適當的交聯劑包括，但不僅限於，乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)，甘油二甲基丙烯酸酯(GDMA)，三甲基丙烯酸酯(TRIM)，二乙烯基苯(DVB)和三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯。本領域的技術人員能夠選擇一些適用於某一特定系統的其它單體和交聯劑。為在固定的黃麴黴毒素中供分析使用，最終的聚合物可裝入或裝在合適的用作SPE吸附劑單元的柱、試管、針、膜、棒或平整表面中，或與這些部件集成為一體。SPE吸附劑載體最好選擇為不發螢光的材料，在這一點上看，其將不會對吸附的黃麴黴毒素的螢光檢測造成幹擾，或者其以可控的背景值發螢光。聚合物最好是粉末或預製的整塊材料裝入，如在市售的空SPE盒中所見的一樣，其以一層靠在預製熔合物上，或作為一均勻層施加在棒、試管、針、膜或平整表面上。圖1所示為一個典型的單元。一個空的圓柱形SPE盒1(可從例如英國Poole的Supelco公司買到)具有一個噴出口2和在其入口的支持法蘭3。該盒由塑料材料製造，具有合適的低螢光，且在黃麴黴毒素的受激發螢光的條件下理想地不發螢光。多孔熔合物4，最好是非螢光材料如聚四氟乙烯(PTFE)，並且橫過可以接近噴出口2的孔徑。粉末形式的聚合物吸附劑裝入盒中，形成聚合物層5。另一個保持熔合物6放在聚合物層5的上表面上。替代地，適當形狀的多孔聚合物單體放在熔合物4的頂上。在使用SPE單元時，從可能含有黃麴黴毒素的物質中提取的液體注入盒中，(自然地或通過抽吸)使其流過吸收層5，通過噴出口3流出該盒。樣品中的任何黃麴黴毒素(如果有的話)被聚合物吸收，在熔合物6下面、在聚合物的上部區域中形成了一層或帶。通過將該單元插入到例如在WO2006/123189中所述的分析螢光計中，這樣形成的SPE吸附劑單元可用於定量分析所吸附的黃麴黴毒素，上述專利的全文在此引入作為參考。在分析過程中為了降低背景螢光，在盒的表面上提供一個不透明的區或條是有用的，以覆蓋正好在將出現所吸附的黃麴黴毒素的螢光帶的區域之下的聚合物。該效果可由該盒的另一個不透明區或條得益增補，所述另一個不透明區或條正好在熔合物6或將出現螢光帶的區域之上。所述不透明區可以通過在裝入聚合物後在盒上貼上膠紙而形成，如紙膠帶或電氣絕緣膠帶，最好是黑色膠帶。另外，膠帶可在裝入聚合物前施加，如果聚合物的上層高度可以準確地預測的話。在以準確控制的條件裝入聚合物的一個商業化工藝中，可以使用在製造過程中例如通過塗覆或噴灑不透明材料而形成不透明區的盒。這種減少背景螢光的技術也適用於其它SPE盒，或前面提到的含有礦物吸附劑的微型柱，其中以吸附劑材料形成吸附化合物的螢光帶。因此，它形成了本發明的另一個方面，與上述的本發明聚合物吸附劑的用途無關。SPE吸附劑單元也可用於在HPLC或ELISA的定量分析之前清理樣品。任選地，該聚合物可用礦物油處理，以改善在聚合物上固定的黃麴黴毒素帶的結合禾口焚光輸出(見PiletskaΕ.V.,Romero-GuerraM.,GuerreiroA.R.,KarimK.,TurnerA.P.R,PiletskyS.Α.(2005)Adaptationofthemolecularimprintedpolymerstowardspolarenvironment.(分子印跡聚合物對極地環境的適應)Anal.Chim.Acta，δ42，47_δ1。)已發現以乙二醇二甲基丙烯酸酯或二乙烯基苯作為優選的交聯劑、由亞甲基雙丙烯醯胺的多孔聚合物製備的SPE吸附劑對固定黃麴黴素B1,B2,G1和G2是特別有效的。在本發明的另一實施例中，如圖2所示，另一聚合物層7可加到盒中SPE吸附劑上的熔合物6上。在需要時這可以用來向加入盒中的樣品溶液提供額外的清理。對於黃麴黴毒素，由二乙基氨乙基甲基丙烯酸酯(DEAEM)為基的聚合物作為一個合適的額外清理層，已發現它可以成功去除取自落花生(花生)的樣品中可能干擾的化合物。其它合適的清理材料和程序對於那些熟悉分析黃麴黴毒素的存在的人來說將是眾所周知的。必須要小心以避免在清理樣本時減少黃麴黴毒素的數量。與上述用於定量分析的用途一樣，本發明的SPE聚合物還可用作結合黃麴黴毒素的片或膜的用途，或用在如W02006/120381所公開的傳感器中。此外已經發現，通過先用甲醇洗然後用水洗，可輕易地從聚合物中去除黃麴黴毒素。這可用來「再生」聚合物以供進一步使用，但在進行重要的定性或定量檢測時不建議重複使用聚合物。然而這意味著聚合物可作為將在螢光分析以外方法如色譜法中受到定量測定的樣本的清理步驟。使從可能含有黃麴黴毒素的食品中提取的液體樣品與聚合物接觸，以吸附存在的任何黃麴黴毒素，而樣品中存在的其它材料通過用合適的溶劑清洗而從聚合物中去除。然後黃麴黴毒素從聚合物中洗脫出，且用作對任何存在的黃麴黴毒素進行定量測定例如HPLC的清潔溶液。本發明的實施方式從下面的實施例將得到進一步的理解。(所述聚合物的背景螢光的強度和所固定的黃麴黴毒素的螢光強度可由W02006/120381中公開的傳感器裝置確定。)例1聚合物的製備通過攪拌功能單體亞甲雙丙烯醯胺(MBAA)，5g；交聯劑乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)，20g;致孔劑N，N-二甲基甲醯胺(DMF)，25克；和引發劑，1，1-偶氮(環己烷腈)，500mg,來製備聚合混合物。使用Honle100UV燈(強度0.157瓦/釐米2)(HonleUV公司，UK)照射該聚合混合物20分鐘，然後在80°C的油浴中熱退火12小時。用甲醇清洗以除去溶劑(DMF)，由此產生的聚合物是一種大孔材料。由此產生的本體聚合物經研磨和在甲醇中溼篩。粒徑範圍為25至63μm的部分被收集和乾燥。製備之後，將75mg的聚合物加入到空的Iml無螢光塑料盒(Supelco公司，英國)中，該盒中裝有無螢光的特氟隆(聚四氟乙烯PTFE)熔合物(Supelco公司，英國)。例2在MBAA基聚合物上固定AFB1通過加入2毫升水(例如HPLC級的水)預處理例1中製備的盒。將在4毫升甲醇中的黃麴黴毒素B1(AFBl)溶液(甲醇的濃度為從80%至20%，AFBl的濃度為從10至200ng)加入到盒中，以將黃麴黴毒素加到MBAA聚合物的層上。然後使用1毫升的20%甲醇(8020，水甲醇)清洗該盒，以去除幹擾化合物。在MBAA聚合物層中固定的黃麴黴毒素層的存在，則通過利用W02006/120381中公開的傳感器裝置觀測到對UV光曝光所產生的螢光而顯示。在SPE盒頂部熔合物的正下方觀察到一尖銳的螢光帶。對MBAA基聚合物上AFBl的檢測靈敏度是非常好的，特別是在被20%甲醇吸附時。例3黃麴黴毒素B!、ByG^G2的固定隨後，在20%甲醇溶液中攙入IOOng的AFBl、AFB2、AFGl和AFG2毒素且加到例1中製備的各個盒中，隨後用1毫升20%甲醇進行清洗。結果發現，所有毒素被吸附在非常相似的地方，接近頂部熔合物。例4對玉米和花生基質中的MBAA聚合物的測試將攙入20ngAFBl的花生基質裝在按照例1製備的盒上。用1毫升20%的甲醇清洗所述裝有樣品的盒。通過利用W02006/120381中公開的傳感器裝置觀測到對UV光曝光所產生的螢光，表明在MBAA聚合物層中固定的AFBl層的存在。例5用於去除幹擾化合物的合併聚合物的盒在按照例1製備的盒中加入一個二乙基氨基甲基丙烯酸酯(DEAEM)基聚合物的上聚合物層，以提供用於固定任何幹擾化合物的清理層，同時使黃麴黴毒素能夠到達MBAA基聚合物層。該DEAEM基聚合物層，有效地去除了很大一部分存在於落花生(花生)中的幹擾成分。例6對AMPSA基聚合物結合AFBl的測試使用例1的方法，其中用AMPSA替換MBAA作為功能單體，製備聚合物盒。用2ml水清洗聚合物盒，且將4ml攙入200ngAFBl的80%甲醇裝入盒中。接下來用2ml水清洗新的聚合物盒，且將4ml攙入200ngAFBl的20%甲醇裝入盒中。可以看到吸附在AMPSA基聚合物上的AFBl帶。例7對4-乙烯基吡啶基聚合物結合AFBl的測試使用例1的方法製備聚合物盒，其中作為功能單體的MBAA更換為4_VP。用2ml水清洗聚合物盒，且將4ml攙有200ngAFBl的80%甲醇裝入聚合物盒中。接下來用2ml水清洗聚合物盒，且將4ml攙有200ngAFBl的20%甲醇裝入盒中。4-VP基聚合物證明結合20%甲醇溶液中的AFB1。例8對丙烯胺基聚合物結合AFBl的測試使用例1的方法製備聚合物盒，其中作為功能單體的MBAA更換為丙烯胺。用2ml水清洗聚合物盒，且將4ml攙有200ngAFBl的80%甲醇裝入聚合物盒中。接下來用2ml水清洗聚合物盒，且將4ml攙有200ngAFBl的20%甲醇裝入盒中。該丙烯胺基聚合物對80%和20%甲醇溶液都表現出一些結合。例9對EGMP基聚合物結合AFBl的測試使用例1的方法製備聚合物盒，其中作為功能單體的MBAA更換為EGMP。用2ml水清洗聚合物盒，將4ml攙入200ngAFBl的80%甲醇裝入聚合物盒中。接下來用2ml水清洗聚合物盒，將4ml攙入200ngAFBl的20%甲醇裝入盒中。EGMP基聚合物表現出從20%甲醇對AFBl的結合。例10對丙烯醯胺基聚合物結合AFBl的測試丙烯醯胺聚合物表現出對AFBl的結合，但該結合弱於MBAA。帶較小且位於層的中間。例11礦物油處理按照例1準備MBAA基聚合物盒。按以下步驟用礦物油處理聚合物-1毫升乙腈-1毫升氯仿-2毫升含有礦物油的氯仿-1毫升氯仿-1毫升乙腈-2毫升水在礦物油處理後，MBAA盒顯示結合到被處理的聚合物上的AFBl的螢光增強了。例12MBAA基盒的再生按照例1準備的MBAA基聚合物盒在經過例2的測試後，按照以下步驟進行清洗，以供重新使用_4毫升純甲醇-4毫升水該處理是足夠的，以便徹底去除吸附在MBAA基聚合物上的AFBl和為下一次使用而準備盒。例13用DVB作為交聯劑製備的聚合物按照例1準備MBAA基聚合物盒，但使用二乙烯基苯(DVB)作為交聯劑，而不是EGDMA。將加有IOOngAFBl的20%甲醇裝在聚合物上。結果發現，用DVB替換EGDMA對吸附在盒上的毒素沒有造成任何明顯變化。例14MBAA聚合物在定量測定AFBl中的用途按照例1準備五個盒，且增大被裝在聚合物上的20%甲醇中的AFBl的含量，以便讓盒裝有分別包含0、10、20、50和IOOngAFBl的螢光帶。使用W02006/120381中公開的傳感器裝置測量每個盒上固定的毒素的含量，在每個含量執行六個測量。在各個增大含量的平均讀數為0.73,9.04,20.24,56.56和99.76ng，分別與4.41,3.38,2.64,2.47和1.63%的變化的係數相對應。例15冰上的UV聚合(聚合物1)為了調查聚合物形態的可能變化，採用弱紫外燈(光強度為0.015千瓦)進行聚合。聚合溶液保持在4°C(在冰上)。聚合進行了4小時。由於MBAA在DMF中的溶解度在較低的溫度下較低，聚合物中的MBAA濃度由例1中熱聚合製備的聚合物中的20%減至UV聚合中的5%。聚合混合物是1克MBAA，19克E⑶MA(95%交聯)，20克DMF，200mg引發劑1，1_偶氮(環己烷腈)。使用甲醇(使用約100個周期)通過Soxhlet(索氏)提取從聚合物中去除DMF；和然後在真空中徹底乾燥聚合物。由此產生的聚合物使用超離心磨機(UltracentrifiugeMill)(Retsch公司，英國)研磨，以獲得尺寸更規則均勻的顆粒。一些粒度的部分被收集，其背景螢光的強度和對黃麴黴毒素B1的結合能力被評估。其中包括粒度為25-63μπι，63-125μm和125-212μm的部分。結果發現，所有的部分具有不同的背景螢光，其中最低的背景螢光由粒度為63-125μπι和125-212μm的部分所提供(表1)。粒度為63-125μm的部分從所固定的黃麴黴毒素產生最強烈的螢光。表1聚合物1的不同部分的性質和性能。tableseeoriginaldocumentpage9將上述聚合物的性能與例1製備的其中包含20%MBAA的熱聚合的聚合物進行比較。結果發現，UV聚合的聚合物產生了顯著降低的背景螢光。雖然它減少了功能單體的數量(5%，與熱聚合物情況下的20%相比)，在盒頂部它在數量上將黃麴黴毒素結合成尖銳的帶。還與市售的SPE結合相吸附劑(Phenomenex公司的「Phenyl」(苯基))進行了背景螢光和對黃麴黴毒素的結合的比較。雖然「Phenyl」吸附劑的背景螢光明顯小於UV聚合產生的MBAA聚合物，但MBAA聚合物強烈吸附黃麴黴毒素，成為聚合物盒頂部的一個高螢光市ο例16製備具有少量的溶劑(DMF)和5%MBAA的MBAA基聚合物(聚合物2)為了進一步改變聚合物形態，聚合物被製備為只含有一半數量的溶劑(DMF)。所有其它條件仍然與例15相同。該聚合物被脫氣、冷卻並保持在冰上，並且用紫外(UV)光照射4小時以進行聚合。為了將5%MBAA溶解在減少溶劑的混合物中，有必要對混合物進行超超聲處理30分鐘。表2.聚合物2的不同粒度的性質和性能。tableseeoriginaldocumentpage10粒度為63-125μm的部分再次具有背景螢光和被固定的黃麴黴毒素的螢光強度的最佳組合；和表現出與聚合物1的相應部分類似的特點。例17製備具有加倍數量的溶劑(DMF)和5%MBAA的MBAA基聚合物(聚合物3)為了進一步改變聚合物形態，使用與例15相比加倍數量的溶劑(DMF)製備聚合物。所有其它條件仍然與例15相同。該聚合物被脫氣、冷卻並保持在冰上，並且用UV光照射4小時以進行聚合。由此產生的聚合物具有與聚合物1和2類似的背景強度，但只有不到一半的從固定的黃麴黴毒素髮出的螢光。例18在_20°C，1%MBAA條件下的UV聚合(聚合物4)對進一步降低UV聚合時的溫度的影響進行了測試。由於MBAA的溶解度在-20°C降低，其濃度降低到1%。所有其它參數保持不變。如前所述，對聚合物進行聚合和處理。雖然背景螢光略低於在+4°C製備的聚合物1-3，聚合物4提供了從固定的黃麴黴毒素髮出的很小的螢光信號。例19用三(乙二醇)二甲基丙烯酸酯交聯劑和5%MBAA製備的MBAA基聚合物(聚合物5)為了再次改變聚合物形態，採用不同的交聯劑(三(乙二醇)二甲基丙烯酸酯，95%)製備聚合物5，其性能與採用乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)作為交聯劑製備的聚合物1相比較。背景螢光很低，而且所固定的黃麴黴毒素的螢光是相當高的。然而，聚合物5是柔性的，且可顯著改變其體積，這取決於所吸附溶劑的數量。例20使用不同的溶劑-DMSO(聚合物6)和甲苯(聚合物7)使用不同的溶劑(分別是DMSO(二甲基亞碸)和甲苯)在冰上紫外光聚合4小時製作了兩個聚合物(聚合物6和7)。MBAA在這些溶劑中的有限溶解度得到了只有的MBAA濃度。所有其它參數保持不變。聚合物6和7的背景螢光高且所固定的黃麴黴毒素產生了低的螢光。例21經索氏(Soxhlet)清洗的聚合物15g聚合物1(5%MBAA；粒度為63-125μm的部分)在索氏提取器中用甲醇洗滌過夜(約100個周期的清洗)。上述清洗進一步通過減少聚合物的背景螢光而提高了聚合物的性能；且所固定的黃麴黴毒素的螢光強度與所吸附的毒素數量成比例。例22將4ml20%甲醇中的IngAFBl與清洗後的聚合物1結合對4毫升的20%甲醇中的低水平AFBl的結合進行了評價。當在4毫升20%甲醇中攙入Ing的AFBl和裝在清洗後的聚合物1(粒度63-125μm的部分)上時，Ing的AFBl很容易被檢測。所有這些盒也使用W02006/123189中的設備進行定量掃描。結果表明，UV聚合物的背景螢光是熱聚合物的幾乎一半，是「Phenyl」聚合物的大約兩倍。也可以在UV下得到SPE管的一個圖象，該管包含吸附了IOOng的黃麴黴毒素B1的UV聚合物的。可以看到，該聚合物對黃麴黴毒素具有較高的親和力且黃麴黴毒素帶位於緊接頂部熔合物的下方。例23沉澱(precipitation)聚合聚合混合物是150mgMBAA,600mgE⑶MA(95%交聯)，2g乙腈和30mg引發劑(偶氮二異丁腈(AIBN))。反應在被氮氣流清洗的20ml礦物油中進行了15分鐘。聚合物混合物還被氮氣清洗5分鐘和然後轉送到礦物油中。使用勻漿器分散混合物15分鐘，然後用光纖UV燈(Cermax公司，英國)照射2小時，之後用更強的UV燈(Honle公司，英國)照射20分鐘。過濾珠子及用氯仿和丙酮洗滌以去除礦物油。雖然聚合物的背景螢光較低，且所固定的黃麴黴毒素髮出較高的螢光，但聚合物的產量低。這一工藝還產生大量的廢礦物油。例24測量食品中的黃麴黴毒素對使用選定的聚合物從食品基質(玉米和花生)中提取黃麴黴毒素進行了評價。在SPE管中裝入75mg例15的MBAA基聚合物，且加入Iml的20%甲醇。在80%甲醇中的食品提取物被水稀釋4倍，且攙入IOng的黃麴黴毒素Bp作為對照樣本，用水稀釋食品提取物4倍，不加入毒素。當被固定在玉米或花生提取物的MBAA基聚合物上時，IOng的黃麴黴毒素容易被檢測到。例25聚合物盒的光學特性的改進當使用W02006/120381中公開的一種傳感器測量裝置測量時，由熱聚合(例1)產生的MBAA基聚合物的背景螢光通過使用黑色薄膠帶直接在被固定的毒素的上面或下面來掩蓋背景螢光的發射，而顯著地減少了。使用光學改進的盒容易檢測和測量IOng的黃麴黴毒素Bp權利要求含有由丙烯醯胺基單體而來的部分的聚合物作為黃麴黴毒素的固相萃取(SPE)吸附劑的用途。2.根據權利要求1的用途，其中所述單體是一種或多種亞甲雙丙烯醯胺(MBBA)、丙烯醯胺或丙烯醯胺-2-甲基丙烷磺酸(AMPSA)或它們的衍生物。3.根據要求1或2的用途，其中所述丙烯醯胺基單體已通過共聚和反應與交聯單體交聯。4.根據權利要求3的用途，其中交聯劑是乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)或二乙烯基苯(DVB)。5.根據權利要求3或4的用途，其中所述丙烯醯胺單體與交聯劑單體的單位比例是從13至Ij120。6.根據權利要求1至5中任何一項所述的用途，其中黃麴黴毒素包括一種或一種以上的黃麴黴毒素BpByG1和G2。7.根據權利要求1至6中任何一項所述的用途，其中聚合物及其上所吸收的黃麴黴毒素用作螢光分析方法的樣品。8.根據權利要求1至6中任何一項所述的用途，其中從聚合物洗脫出所吸收的黃麴黴毒素，和用作定量測定方法的樣品。9.根據權利要求1至8中任何一項所述的用途，其中所述聚合物在低於環境的溫度下通過紫外線聚合反應獲得。10.根據權利要求1至9中任何一項所述的用途，其中通過去除在聚合時出現的致孔劑而使所述聚合物變成大孔性的。11.由亞甲雙丙烯醯胺(MBAA)、丙烯胺、甲基丙烯酸磷酸乙二醇酯(EGMP)、4_乙烯基吡啶或2-丙烯醯胺-2-甲基丙烷磺酸(AMPSA)的交聯聚合物作為黃麴黴毒素的SPE吸附劑的用途。12.—種SPE吸附劑單元，包括裝有或塗有一層由丙烯醯胺基單體而來的聚合物吸附劑的試管、盒、針、膜、棒或平整表面。13.根據要求12的單元，其中所述單元是一個具有聚合物吸附劑內層的盒或試管，且在該單元的外表面上、在聚合物層的上表面以上和以下的一個區域是不透明的。14.一種黃麴黴毒素的螢光分析方法，所述方法包括以下步驟將黃麴黴毒素吸附在裝入或裝在試管、盒、針、膜、棒或平整表面上的由丙烯醯胺基單體而來的聚合物上，使所固定的黃麴黴毒素曝露在紫外光中，以及檢測由固定的黃麴黴毒素髮出的螢光。15.根據權利要求14的方法，其中所述黃麴黴毒素包括一種或一種以上的黃麴黴毒素B」B2λG1禾口G2016.一種在定量測定黃麴黴毒素之前的清理方法，其中使樣本液體與由裝入或裝在試管、盒、棒、針、膜或平表面上的丙烯醯胺基單體而來的聚合物接觸，以吸附存在的任何黃麴黴毒素，並從所述聚合物洗脫出黃麴黴毒素以對存在的任何黃麴黴毒素進行定量測定。全文摘要從丙烯胺、亞甲雙丙烯醯胺(MBAA)、丙烯醯胺、乙二醇甲基磷酸酯(EGMP)、4-乙烯基吡啶或2-丙烯醯胺-2-甲基丙烷磺酸(AMPSA)單體製備聚合物，該聚合物適合用於在黃麴黴毒素的固相萃取中結合黃麴黴毒素，和將黃麴黴毒素固定在固相萃取(SPE)盒中以對從食品或飼料提取的溶液中的黃麴黴毒素進行定性或定量分析。優選的實施例是含有丙烯醯胺基的聚合物，如丙烯醯胺和MBAA。聚合物最好是例如使用乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)或二乙烯基苯(DVB)交聯的和大孔性的(macroporous)。文檔編號G01N33/50GK101809048SQ200880004635公開日2010年8月18日申請日期2008年2月8日優先權日2007年2月9日發明者O·皮萊斯卡,R·科克,S·皮萊斯基申請人:拓克西密特有限公司