治療和預防壞死的組合物和方法

2023-12-01 10:41:51

專利名稱：治療和預防壞死的組合物和方法
技術領域：
本發明涉及一種預防和治療細胞壞死的方法和組合物。更具體的說，本發明的方法和組合物通過抑制正在壞死的細胞中的彈性蛋白酶的活性，來預防和治療壞死。
背景技術：
彈性蛋白酶是一種絲氨酸蛋白酶，可以促進包括彈性蛋白在內的蛋白質的降解，而彈性蛋白是構成哺乳動物結締組織的主要蛋白。現有技術已經暗示了抑制彈性蛋白酶可能有效治療多種疾病。
例如，US4683241公開了彈性蛋白酶據信在結締組織炎症的病因學中起很重要的作用。該專利公開了一類對彈性蛋白酶起抑制作用的酚酯。
US5216022公開了亞苯基二鏈烷酸的芳族酯作為人中性粒細胞彈性蛋白酶(即白細胞彈性蛋白酶)的抑制劑在治療許多由中性粒細胞彈性蛋白酶介導的病症中的用途。
US6159938公開了對內源性血管彈性蛋白酶的抑制作用可能在治療肺部血管疾病以及其他相關疾病中起作用。
壞死，是當細胞環境受到幹擾而引起細胞死亡中相對不可控制的步驟，並且最終將導致細胞破裂。壞死可以用高壓氧來進行治療。
發明簡述發明人意外地發現細胞內的彈性蛋白酶與壞死細胞的死亡有關，並且，對受到侵襲的細胞中上述酶的抑制可以作為一個有效的方法用於治療和/或預防細胞壞死以及與細胞壞死有關的疾病。
本發明提供一種用於治療和預防細胞壞死以及與細胞壞死有關的疾病的方法，該方法包括抑制所述細胞中一種或多種彈性蛋白酶的活性。
一方面，上述方法包括給患者施用治療有效量的一種或多種彈性蛋白酶抑制劑，其中所述抑制劑可以抑制被治療細胞的細胞內彈性蛋白酶的活性。
本發明還包括一種在體外抑制和預防細胞壞死的方法，包括使有效量的一種或多種彈性蛋白酶抑制劑進入被處理細胞。
發明人還意外地發現對受到侵襲細胞中的彈性蛋白酶的抑制，可以使細胞壞死發生轉化，至少是部分轉化為凋亡性細胞死亡。所以，在優選的實施方案中，本發明提供了一種治療和預防細胞壞死以及與細胞壞死有關的疾病的方法，該方法包括抑制所述細胞中彈性蛋白酶的活性；以及抑制凋亡性細胞死亡。
本發明還涉及用於治療和/或預防細胞壞死以及相關疾病的藥物組合物，其中所述組合物包含治療有效量的一種或多種物質，該物質可以抑制被治療細胞中一種或多種彈性蛋白酶的活性。所以，上述藥物組合物中包含可以進入被治療細胞的一種或多種彈性蛋白酶抑制劑，以及一種或多種藥學上可接受的輔料。
根據本發明的一個優選實施方案，上述藥物組合物還進一步包含一種或多種細胞凋亡的抑制劑。
本發明另一方面還提供一種或多種彈性蛋白酶抑制劑在製備治療和/或預防細胞壞死以及相關疾病的藥物中的用途，其中所述彈性蛋白酶抑制劑能夠進入所述細胞。
在一個優選的實施方案中，本發明還要求一種或多種彈性蛋白酶抑制劑和一種或多種細胞凋亡抑制劑聯合用於製備治療和/或預防細胞壞死以及相關疾病的藥物中的用途，其中所述彈性蛋白酶抑制劑能夠進入所述細胞。
本發明所應用的彈性蛋白酶活性的抑制劑，用於治療和預防細胞壞死以及相關疾病，都能夠進入靶細胞，以便於所述抑制劑在所述細胞中發揮其抑制作用。
優選地，細胞中的壞死可以根據本發明進行治療或預防，其中的細胞選自神經細胞，浦肯耶細胞，海馬錐體細胞，神經膠質細胞，造血原細胞(例如淋巴細胞和巨噬細胞)，肝細胞，胸腺細胞，成纖維細胞，心肌細胞，上皮細胞，支氣管上皮細胞，腎小球，肺上皮細胞，角質細胞，胃腸道細胞，表皮細胞，骨和軟骨細胞。
優選地，細胞壞死以及與之相關的疾病可以根據本發明進行治療或預防，其中的疾病選自神經變性疾病(neurodegenerative disorders)，白血球過多症，淋巴瘤，新生兒呼吸窘迫，窒息，嵌頓性疝，糖尿病，結核病，子宮內膜異位症，血管營養不良，牛皮癬，凍傷，鐵負荷併發症(iron-loadcomplications)，類固醇治療的併發症，缺血性心臟病，再灌注損傷，腦血管病或損傷，壞疽，褥瘡(pressure sore)，胰腺炎，肝炎，血紅蛋白尿，細菌性敗血症，病毒性敗血症，燒傷(burns)，體溫過高(hyperthermia)，克羅恩氏病，腹腔疾病(celiac disease)，間隔綜合症(compartment syndrome)，壞死性直結腸炎(necrotizing procolitis)，囊性纖維化，類風溼性關節炎，中毒性腎損害(nephrotoxicity)，多重硬化症，脊髓損傷，腎小球腎炎，肌營養不良，退行性關節炎，高酪氨酸血症，遺傳性代謝疾病，支原體疾病，炭疽感染(anthraxinfection)，其他細菌感染，病毒感染，安德森病(Anderson disease)，先天性線粒體病，苯丙酮尿症，胎盤梗塞，梅毒，無菌性壞死，無血管性壞死，酒精中毒以及伴隨由於被給予和/或自行服用和/或暴露於，古柯鹼，藥物(例如，對乙醯氨基酚，抗生素，阿黴素，非類固醇抗炎藥，環孢黴素)，化學毒素比如四氯化碳、氰化物、甲醇、乙二醇和芥子氣，農業化學藥品例如有機磷酸化合物和百草枯(paraquate)，重金屬(鉛，汞)，其他戰爭用有機磷酸化合物所導致的壞死。
在另一個實施方式中，本發明中的組合物和方法通過抑制一種或多種彈性蛋白酶的活性，尤其是其細胞內的活性，用於治療和/或預防老化，並且可以任選地與細胞凋亡抑制劑和抗老化劑合用。
附圖簡述

圖1顯示分別經和不經寡黴素以及抗Fas抗體處理後，觀察到的壞死及凋亡的細胞比例。
圖2顯示U-937細胞分別經和不經3小時的寡黴素以及抗Fas抗體處理後，細胞裂解產物經含明膠基質的凝膠電泳(gelatin substrate gelelectrophoresis)後的結果。
圖3顯示U-937細胞分別經和不經3小時的0.5mM KCN處理後，細胞裂解產物經含明膠基質的凝膠電泳後的結果。
圖4顯示含明膠基質的凝膠電泳的結果，該試驗表明用KCN處理細胞裂解產物後，代表蛋白酶活性的譜帶(B泳道)出現。而當有200μm彈性蛋白酶抑制劑(C泳道)存在時，再用KCN處理後，上述譜帶消失。
圖5的結果顯示彈性蛋白酶抑制劑III作用於由KCN誘導發生壞死的PC-12細胞，所達到的效果。A部分圖表化地表現經處理後的細胞中存活、壞死和凋亡的比例。上述比例的具體數值記載在隨圖後的表格裡。B部分顯示當彈性蛋白酶抑制劑III存在或不存在時，PC-12細胞經過KCN處理後的存活率。
圖6顯示當彈性蛋白酶抑制劑III存在或不存在時，經過KCN處理後，存活、壞死和凋亡的U-937細胞的比例。上述比例的具體數值記載在隨圖後的表格裡。
圖7註解彈性蛋白酶抑制劑III(B部分)和elastinal(C部分)作用於由Fas誘導發生凋亡/壞死的U-397細胞所達到的效果。
圖8註解PC-12細胞經/不經寡黴素和/或STS處理，檢測出的壞死和凋亡細胞的百分數。
圖9表示彈性蛋白酶抑制劑作用於經STS誘導發生凋亡的PC-12細胞所達到的效果。
圖10註解彈性蛋白酶抑制劑作用於經STS誘導發生壞死的PC-12細胞所達到的效果。
圖11表示彈性蛋白酶抑制劑作用於經KCN誘導發生壞死的PC-12細胞所達到的效果。
圖12註解彈性蛋白酶抑制劑作用於經STS誘導發生壞死的U-937細胞所達到的效果。
優選實施方案詳述本文中術語「壞死」，包括細胞壞死的狀態，以及表現出壞死和凋亡特徵的中間過渡狀態。本文中是術語「彈性蛋白酶」，涉及所述酶的一種或多種形式。
具有抑制彈性蛋白酶特性的化合物，在本文中稱作彈性蛋白酶抑制劑，是本領域所公知的，並且被如下述文獻所公開Stein等[Biochemistry25，p.5414(1986)]，Powers等[Biochim.Biophys.Acta.485，p.15(1977)]，US4,683,241，US 5,216,022和US 6,159,938.彈性蛋白酶抑制劑可以從例如，Sigma-Aldrich或者Calbiochem-Novabiochem Corpotation購買。
如本發明所述，所用的彈性蛋白酶抑制劑可與一種或多種藥學上可接受的載體配製，這些載體是無毒的、惰性的固體、半固體或者液體的充填劑、稀釋劑、包封材料或者任何類型的輔助成分。藥物組合物可以以任何可接受的方式，優選口服、非腸胃道或者局部地施用於人類和其他哺乳動物。
口服固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、粉劑和顆粒劑。這些固體製劑中，活性成分與至少一種惰性的、藥學上可接受的輔料或者載體混合，上述輔料或載體例如枸櫞酸鈉或磷酸二鈣，和/或填充劑或增容劑例如澱粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖和甘露醇，粘合劑例如羧甲基纖維素和明膠，溼潤劑如丙三醇，崩解劑如瓊脂、碳酸鈣和馬鈴薯澱粉，吸收劑和潤滑劑。該固體製劑可以用本領域公知的方法製備包衣和外殼。
口服液體劑型包括藥學上可接受的溶液、乳劑、混懸液和糖漿。該液體製劑中除活性成分外，還含有惰性的稀釋劑例如本領域常用的水或者其它溶劑，增溶劑和乳化劑例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇和油類。除了惰性稀釋劑外，該口服組合物還可以包含輔劑如溼潤劑，乳化劑和助懸劑，甜味劑，調味劑和香料。
適合非腸胃道給藥的注射製劑可由下列形式提供藥學上可接受的無菌水或者無水溶液劑，分散劑，混懸劑，或者乳劑以及在使用前重新溶解於無菌可注射溶液或分散相的無菌粉末。適合的水的或者非水的載體或者賦形物的例子有水，Ringer’s溶液和等滲的氯化鈉溶液。無菌的油類也可以作為合適的分散媒介。注射用配方可以是經滅菌的，例如，經過可以過濾細菌的過濾器，或者在製劑中加入滅菌劑。
如本發明所述，彈性蛋白酶抑制劑的局部或透黏膜劑型可以包括糊劑、乳膏劑、洗劑、凝膠劑、粉劑、溶液和噴霧劑。糊劑、乳膏劑和凝膠劑中除活性成分以外，還可以包含輔料如脂肪、油類、蠟、石蠟、澱粉、纖維素衍生物、聚乙二醇、滑石粉、氧化鋅、或者其混合物。粉劑和噴霧劑可以包含輔料如乳糖、滑石粉、矽酸、氫氧化鋁、矽酸鈣以及其混合物。
值得注意的是，彈性蛋白酶抑制劑(並且可選地，抗凋亡劑)局部或透黏膜劑型除了具有醫學或藥學的作用外，本發明還提供所述組合物作為化妝品試劑的用途。
其他合適的配方可由下列方法製備將活性成分用脂質體或者生物可降解的聚合基質包裹，或者將活性成分附著在單克隆抗體上。製備脂質體的方法是本領域公知的。
本申請中藥物組合物中活性成分的劑量可以變化，只要能為特定的患者提供能足以達到預期治療目的的量(也就是治療有效量)的彈性蛋白酶抑制劑。劑型的選擇依賴於特定蛋白酶抑制劑的活性、給藥的方式、被治療症狀的嚴重性和患者治療過程中出現的其他因素。典型的劑量方案為0.1-200mg/kg。
另一方面，本發明還涉及通過抑制細胞內彈性蛋白酶的活性，以及，抑制凋亡細胞死亡的方法來治療或預防細胞壞死。在本發明這一方面的一個優選實施方案中，對凋亡細胞的死亡的抑制是通過對患者給予治療有效量的抗凋亡劑來實現的。該抗凋亡劑優選自下列物質[R]-N-[2-庚基]-甲基炔丙基胺(R-2HMP)、維生素E、維生素D、半胱天冬酶抑制劑和親水的膽汁鹽熊脫氧膽酸。其他本領域公知的抑制凋亡的方法，例如，調節促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的表達，也可以運用於本發明中。這些方法在例如Li等[Acta.Anaesthesiol Sin，38(4)，p.207-215(2000)]中描述。
實施例實驗方案1.體外的壞死模型十字孢鹼和抗Fas抗體誘導的壞死處於對數生長期的人類前單核細胞U-937細胞在4×105/ml的濃度下接種。之後，細胞被清洗兩次，再次接種於不含葡萄糖的RPMI-1640培養基(BeitHaemek，Israel)中經一小時，該培養基已補充2mM丙酮酸鹽(Beit Haemek，Israel)和10％經透析的FCS(Gibco，BRL)。
大鼠嗜鉻細胞瘤PC-12細胞系持續培養於DMEM培養基(Gibco，BRL)，該培養基已補充5％經熱滅活的小牛血清，10％經熱滅活的馬血清和2mML-穀氨醯胺。處於對數生長期的PC-12細胞在24孔板(Cellstar)上，以每個孔中含有1.2×105個細胞的濃度接種。然後，這些細胞被清洗兩次，保持於不含葡萄糖的RPMI-1640培養基(Beit Haemek，Israel)中一小時，該培養基已補充2mM丙酮酸鹽(Beit Haemek，Israel)和10％經透析的FCS。U-937細胞和PC-12細胞加入寡黴素(Sigma)或不加入寡黴素培養45分鐘，之後，細胞用或不用1.25μM十字孢鹼(STS)(Sigma)處理，U-937細胞需要另外的7小時，PC-125小時。可選擇地，細胞可以經相同的時間用或不用100ng/ml抗Fas抗體(Upstate biotechnology，USA)進行處理。
KCN誘導的壞死在完全RPMI-1640培養基中培養的U-937細胞和PC-12細胞經過清洗，並被接種於不含葡萄糖的RPMI-1640培養基，如前面所述，細胞用或者不用0.5mM的KCN(Merck，Germany)處理，U-937細胞需要7小時，PC-12細胞需要5小時。
2.彈性蛋白酶抑制劑的測試200μM彈性蛋白酶抑制劑III(MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-CMK得自Calbiochem)在加入誘導劑30分鐘前加入。抑制劑溶解於DMSO中，濃度為100mM。系統中DMSO最終的濃度為0.2％，並且加入到所有的處理過程中。在另一個試驗中，200μM彈性蛋白酶抑制劑(CE1037，Cortech Inc.製造)在誘導劑加入前30分鐘給藥。該抑制劑溶解於PBS。
3.細胞死亡測定臺盼藍排除在每個時間點，細胞活性由臺盼藍排除法(Daniel CP，Parreira A.，et al.Leukemia Res.11191-196(1987)測定。試驗一式兩份進行。
凋亡和壞死的形態學上的量化伴隨凋亡或者壞死細胞的死亡，細胞經歷形態學上的改變，該變化被檢測，如McGahon等[Methods Cell Biol，46p.153-85(1995)]所述。簡要地說，1ml細胞被收集並離心。顆粒在稀釋20倍的染料混合物(由100μg/ml吖啶橙和100μg/ml溴化乙錠溶於PBS組成)中重新懸浮，放置在載玻片上，用倒置螢光顯微鏡觀察。每份樣品最少計數200個細胞。
細胞裂解產物的製備4×107個U-937細胞，經過各種誘導劑處理，或者不經過處理，培育三小時後被收集起來，用冰冷PBS清洗兩次，以108/ml的濃度在冰冷裂解緩衝液(由50nM pH為7.5的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸，0.1％NP-40，1mMDTT，100μM亮抑酶肽和100μM甲苯磺醯賴氨酸氯甲酮組成)中重新懸浮。細胞通過使用置於冰上的polytron裝置進行破碎，碎片在4℃下用超速離心機離心30分鐘，轉速為120,000xg。上清液用於進一步研究或者在-70℃下儲存。每份樣品的蛋白質含量用蛋白質測定法(BioRad)進行測定。
5.電泳以明膠為基質的電泳根據以往的記載(Distefano J.F.，Cotto C.A.，等Cancer invest.6，487-498，(1988))來進行操作。將100μl等份內含200μg蛋白質的細胞裂解物，加入50μl的0.625M，pH為6.8的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩衝液後，蛋白酶發生可逆性失活，其中該緩衝液還含有2.5％SDS，10％蔗糖和0.03％酚磺酞。然後樣品在11％聚丙烯醯胺凝膠中用0.1％共聚明膠進行電泳。電泳後，將凝膠重複三次浸入pH為7.0的、包含2.5％(V/V)Triton X-100的0.1M三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩衝液，去除SDS，並使蛋白酶再活化。凝膠被切片，在37℃下在0.1M甘氨酸-氫氧化鈉緩衝液中培養過夜，該緩衝液的pH為7.0，其中含有或者不含有100μM TPCK(糜蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶抑制劑)和100μM elastinal(彈性蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶抑制劑)。蛋白酶的活性的譜帶用品紅染色後顯影。
結果1.抗Fas抗體誘導的U-937細胞的凋亡/壞死圖1顯示與對照組相比，用抗Fas抗體處理誘導大約60％的凋亡。寡黴素本身是非活性的(inactive)，但是加入100ng/ml抗Fas抗體到寡黴素，使凋亡細胞死亡轉化為壞死細胞死亡。在這些狀況下，大約70％的壞死發生，並且凋亡轉回到對照水平。細胞核用吖啶橙和溴化乙錠雙重染色後，用螢光顯微鏡測定分析其形態學。
2.寡黴素存在下由抗Fas抗體誘導的壞死細胞死亡過程中蛋白酶樣活性的誘導作用U-937細胞保存於不含葡萄糖的基質中，用或不用1μM寡黴素預培養45分鐘，經過或不經過100ng/ml抗Fas抗體處理三小時。之後，細胞裂解產物用「試驗方案」中描述的方法製備，並且用於以明膠為基質的電泳。圖2顯示的結果表明，經過抗Fas抗體和寡黴素的處理，導致一條蛋白酶活性譜帶(泳道D)的出現。該譜帶在未被處理的對照組細胞(泳道A)、用抗Fas抗體處理的細胞(泳道B)或者用寡黴素處理的細胞(泳道C)中都沒有發現。當有100μM elastinal(泳道D)存在時該譜帶消失，當有100μM TPCK時(泳道D)該譜帶不消失。上述現象表明用抗Fas抗體和寡黴素處理時，可誘飛彈性蛋白酶樣活性，而不誘導糜蛋白酶樣活性。
3.由KCN誘導的壞死細胞死亡過程中彈性蛋白酶樣活性的誘導U-937細胞經過0.5mM KCN處理三小時或不經處理後，細胞裂解產物用「試驗方案」中描述的方法製備，並且用於以明膠為基質的電泳。圖3顯示的結果表明，用KCN處理後，導致一條蛋白酶活性譜帶(泳道B)出現，該譜帶在未經過處理的對照組細胞(泳道A)中未發現。當有100μM的elastinal(泳道B)存在時，該譜帶消失，而當有100μM的TPCK(泳道B)時則不消失。上述現象表明用KCN處理時，可誘飛彈性蛋白酶樣活性，而不誘導糜蛋白酶樣活性。
4.彈性蛋白酶抑制劑在壞死細胞死亡過程中對彈性蛋白酶樣活性的誘導所起的作用U-937細胞經過5mM的KCN處理，或不經過處理。加入200μM的彈性蛋白酶抑制劑(Cortech)並保持3小時，之後，細胞裂解產物用「試驗方案」中描述的方法製備，並且用於以明膠為基質的電泳。圖4顯示的結果表明用KCN處理後，導致一條蛋白酶活性譜帶(泳道B)出現，該譜帶在未經處理的對照組細胞(泳道A)中未發現。當有200μM的彈性蛋白酶抑制劑存在下給予KCN時(泳道C)，該譜帶消失。
5.彈性蛋白酶抑制劑III對由KCN誘導的PC-12細胞壞死的預防作用PC-12細胞暴露於0.5mM的KCN中，與對照組相比，誘導大量壞死細胞死亡。雖然彈性蛋白酶抑制劑III本身是非活性的(inactive)，然而加入後，可以顯著抑制由KCN誘導的壞死(圖5，B)。用臺盼藍排除法測定出相同狀況下存活的細胞，可以看出彈性蛋白酶抑制劑III對細胞的保護作用(圖5，A)。
6.彈性蛋白酶抑制劑III對KCN誘導的U-937細胞壞死的抑制作用經KCN處理後的壞死率達到95％，而與之相比，對照組僅為10％。在KCN中加入彈性蛋白酶抑制劑III，顯著將壞死率降低至21％，並且使壞死細胞死亡中的22％轉化為細胞凋亡。52％的細胞由於該抑制劑的保護而避免了壞死細胞死亡。彈性蛋白酶抑制劑III不會導致任何細胞損傷(圖6)。
7.可滲透的與不可滲透的彈性蛋白酶抑制劑對由抗Fas抗體誘導的壞死的抑制作用的比較圖7A顯示的是由抗Fas抗體誘導的凋亡/壞死。在這些狀況下，細胞暴露於一種可滲透的彈性蛋白酶抑制劑(Cortech Inc.)。該暴露過程使凋亡和壞死細胞死亡完全消除(圖7B)。而不可滲透彈性蛋白酶抑制劑-elastinal則在該系統中沒有這樣的作用(圖7，C)。
8.PC-12細胞中由STS誘導的凋亡/壞死圖8顯示與對照組相比，用1.25μM的STS處理誘導約73％的凋亡。寡黴素本身是非活性的(inactive)，但是將STS加入寡黴素，使凋亡細胞死亡轉化為壞死細胞死亡。在這些狀況下，大約70％的壞死發生，而凋亡則回到對照水平。細胞核用吖啶橙和溴化乙錠雙重染色後，用螢光顯微鏡測定分析其形態學。
9.PC-12細胞中彈性蛋白酶抑制劑對STS誘導的凋亡的抑制作用PC-12細胞暴露於1.25μM的STS中，與對照組相比，誘導大量的凋亡細胞死亡。加入200μM本身是非活性的彈性蛋白酶抑制劑(Cortech，Inc.)後，可以顯著地抑制由STS誘導的凋亡(圖9)。
10.PC-12細胞中彈性蛋白酶抑制劑對STS誘導的壞死的預防作用如圖10A所示，1.25μM的STS和1μM的寡黴素共同誘導大約70％的壞死。200μM彈性蛋白酶抑制劑本身是非活性的(inactive)，然而能完全消除由STS誘導的壞死。在同樣的狀況下，100μM的彈性蛋白酶抑制劑能顯著地將壞死細胞死亡降低至9％並且使壞死細胞死亡的39％轉化為凋亡細胞死亡(圖10B)。
11.PC-12細胞中彈性蛋白酶抑制劑對KCN誘導的壞死的抑制作用PC-12細胞暴露於0.5mM的KCN中，與對照組相比，誘導大量的壞死細胞死亡。加入200μM的本身無活性的彈性蛋白酶抑制劑，可以顯著的抑制由KCN誘導的壞死(圖11)。
12.U-937細胞中彈性蛋白酶抑制劑對STS誘導的壞死的作用如圖12所示，在寡黴素存在下，用STS處理後，與對照組相比，細胞的存活顯著地降低。彈性蛋白酶抑制劑自身有輕微的效果，但是能顯著抑制由STS和寡黴素誘導的細胞殺傷。該抑制效果在延長培養的48小時中可以被測定。細胞的生存能力可以用臺盼藍排除法來測定。同樣的結果也可以從細胞凋亡中得到(數據未顯示)。
權利要求
1.一種治療和/或預防細胞壞死以及與其相關的疾病的方法，包括抑制所述細胞中的一種或多種彈性蛋白酶。
2.一種如權利要求1所述的方法，包括對患者給予治療有效量的一種或多種彈性蛋白酶抑制劑，其中所述抑制劑能抑制被治療細胞的細胞內彈性蛋白酶的活性。
3.一種如權利要求1所述的方法，其中被給予的一種或多種抑制劑導致壞死不完全地轉化為細胞凋亡，並且其中所述方法進一步包含抑制所述凋亡。
4.一種如權利要求1所述的方法，其中所述被治療的細胞選自下列神經細胞，浦肯耶細胞，海馬錐體細胞，神經膠質細胞，造血細胞，淋巴細胞，巨噬細胞，肝細胞，胸腺細胞，肌肉細胞，成纖維細胞，心肌細胞，上皮細胞，支氣管上皮細胞，腎小球，肺上皮細胞，角質細胞，胃腸道細胞，表皮細胞，骨和軟骨細胞。
5.一種如權利要求1所述的方法，其中與細胞壞死相關的疾病選自下列神經變性疾病(例如，痴呆)，白血球過多症，淋巴瘤，新生兒呼吸窘迫，窒息，嵌頓性疝，糖尿病，結核病，子宮內膜異位症，血管營養不良，牛皮癬，凍傷，鐵負荷併發症，類固醇治療的併發症，缺血性心臟病，再灌注損傷，腦血管病或損傷，壞疽，褥瘡，胰腺炎，肝炎，血紅蛋白尿，細菌性敗血症，病毒性敗血症，燒傷，體溫過高，克羅恩氏病，腹腔疾病，間隔綜合症，壞死性直結腸炎，囊性纖維化，類風溼性關節炎，中毒性腎損害，多重硬化症，脊髓損傷，腎小球腎炎，肌營養不良，退行性關節炎，高酪氨酸血症，遺傳性代謝疾病，支原體疾病，炭疽感染，其他細菌感染，病毒感染，安德森病，先天性線粒體病，苯丙酮尿症，胎盤梗塞，梅毒，無菌性壞死，無血管性壞死，酒精中毒以及伴隨由於被給予和/或自行服用和/或暴露於，古柯鹼，藥物，化學毒素，農業化學藥品和重金屬而致的壞死。
6.一種在體外抑制和預防細胞壞死的方法，包括使有效量的一種或多種彈性蛋白酶抑制劑進入被治療細胞。
7.一種用於治療和/或預防細胞壞死以及相關疾病的藥物組合物，其中所述組合物包含治療有效量的一種或多種能抑制被治療細胞中一種或多種彈性蛋白酶的活性的製劑，以及一種或多種藥學上可接受的載體。
8.一種如權利要求7所述的藥物組合物，用於治療和/或預防如下細胞中的細胞壞死，所述細胞選自神經細胞，浦肯耶細胞，海馬錐體細胞，神經膠質細胞， 造血細胞，淋巴細胞，巨噬細胞，肝細胞，胸腺細胞，肌肉細胞，成纖維細胞，心肌細胞，上皮細胞，支氣管上皮細胞，腎小球，肺上皮細胞，角質細胞，胃腸道細胞，表皮細胞，骨和軟骨細胞。
9.一種如權利要求7所述的藥物組合物，其中與細胞壞死相關的疾病選自下列神經變性疾病，白血球過多症，淋巴瘤，新生兒呼吸窘迫，窒息，嵌頓性疝，糖尿病，結核病，子宮內膜異位症，血管營養不良，牛皮癬，凍傷，鐵負荷併發症，類固醇治療的併發症，缺血性心臟病，再灌注損傷，腦血管病或損傷，壞疽，褥瘡，胰腺炎，肝炎，血紅蛋白尿，細菌性敗血症，病毒性敗血症，燒傷，體溫過高，克羅恩氏病，腹腔疾病，間隔綜合症，壞死性直結腸炎，囊性纖維化，類風溼性關節炎，中毒性腎損害，多重硬化症，脊髓損傷，腎小球腎炎，肌營養不良，退行性關節炎，高酪氨酸血症，遺傳性代謝疾病，支原體疾病，炭疽感染，其他細菌感染，病毒感染，安德森病，先天性線粒體病，苯丙酮尿症，胎盤梗塞，梅毒，無菌性壞死，無血管性壞死，酒精中毒以及伴隨由於被給予和/或自行服用和/或暴露於，古柯鹼，藥物，化學毒素，農業化學藥品和重金屬而致的壞死。
10.如權利要求7所述的藥物組合物，進一步包含一種或多種細胞凋亡抑制劑。
11.一種或多種彈性蛋白酶抑制劑在製備治療和/或預防細胞壞死以及相關疾病的藥物中的用途，其中所述彈性蛋白酶抑制劑能夠進入所述細胞。
12.一種或多種彈性蛋白酶抑制劑聯合一種或多種凋亡抑制劑在製備治療和/或預防細胞壞死以及相關疾病的藥物中的用途，其中所述彈性蛋白酶抑制劑能夠進入所述細胞。
13.一種治療和/或預防老化的方法，包含抑制一種或多種彈性蛋白酶，任選地進一步包含抑制細胞凋亡，任選地進一步包含給予有需要的患者一種或多種抗老化劑。
14.一種用於治療和/或預防老化的藥物組合物，其中所述組合物包含治療有效量的一種或多種可以抑制一種或多種彈性蛋白酶活性的製劑，和藥學上可接受的輔料，以及任選地包括聯合應用的細胞凋亡抑制劑和抗老化劑。
全文摘要
一種治療和/或預防細胞壞死以及相關疾病的方法，包括抑制所述細胞中一種或多種彈性蛋白酶。
文檔編號A61P25/32GK1655809SQ03811997
公開日2005年8月17日 申請日期2003年3月26日 優先權日2002年3月26日
發明者艾萊娜·內森, 亞歷山德拉·利希滕斯坦 申請人:艾萊娜·內森