一種鱖魚耳石橫截面磨片的製作方法及其應用的製作方法

2023-11-10 11:12:52

專利名稱：一種鱖魚耳石橫截面磨片的製作方法及其應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於魚類生態學領域，具體涉及一種鱖魚耳石橫截面磨片的製作方法，還涉及一種鱖魚耳石橫截面磨片在年齡鑑定中的應用。
背景技術：
鱖是我國重要的淡水經濟魚類，由於其肉質鮮嫩，營養豐富，又無肌間刺而深受消費者歡迎。同時，鱖屬於我國淡水水體中典型的食魚性魚類，是水生生態系統中的頂級消費者，對調節和維持生態系統平衡發揮著重要作用。但近些年來由於過度捕撈、生存環境惡化以及棲息地生境喪失等原因，鱖天然資源普遍呈下降趨勢。魚類的年齡鑑定是魚類資源科學評估的基礎，也是分析和評價魚類種群數量變動趨勢的基本依據之一，魚類個體的生長、繁殖、種群補充和死亡率的計算，都需要具有精確的年齡數據。因此，對鱖魚年齡的準確鑑定是一項尤為重要的基礎性工作。魚類年齡鑑定具有較長的研究歷史，早在18世紀科學家就開始利用魚類的骨質結構鑑定魚類年齡。利用魚體硬組織上的輪紋鑑定魚類年齡是最為傳統和常用的方法。目前，常用於年齡鑑定的硬組織材料有鱗片、耳石、脊椎骨、鰓蓋骨、鰭條和匙骨等，其中，最常用是鱗片和耳石。鱗片長期以來被認為是可靠的年齡鑑定材料，具有取材簡單、數量較多、對魚體損傷小等優點，但由於魚體對鱗片有重吸收現象，且鱗片被在身體表面，在生長過程中會收到一定程度的磨損，因此對於高齡魚來說，鑑定結果往往比實際年齡偏低。除了年輪標誌外，魚類的鱗片上還會出現其他輪紋，如副輪、幼輪等，會對年齡的鑑定工作造成幹擾。耳石是存在於真骨魚類內耳膜迷路內，起平衡定向和聽覺作用的硬組織，主要由碳酸鈣構成。耳石的獲取一般較鱗片複雜，但由於耳石沉積的持續性，加之存在於魚的內耳，受到頭部外骨骼的保護，其生長的一致性與形態的完整性能得到很好的保護。因此耳石的年輪和日輪能準確地記錄了魚類生活史歷程。目前，耳石是應用最廣泛的年齡鑑定材料，也是最為精確的年齡鑑定材料。目前，鱖魚年齡鑑定採用的材料主要是鰓蓋骨。鱖魚鱗片細小，密帶和疏帶不明顯，常出現副輪和生殖輪，冬輪和假輪難以區分，給年齡鑑定帶來困難，因此，鱗片很少用於鱖魚的年齡鑑定。雖說鱖魚鰓蓋骨上年輪比較明顯，但相當一部分個體在寬帶內出現暗黑色的狹帶，由此狹帶產生的假年層常會高估鱖的真實年齡。鱖魚矢耳石呈乳白色，半透明。整個耳石呈扁平盾形，內外側面凹凸不平，內側面向外凸出，外側面向內凹陷；核心靠近外側面，處於背葉和腹葉的中間位置，在內側面背葉和腹葉之間有一道較為明顯的凹槽，上述外形結構對年齡鑑定造成極大困難，耳石的核心和四周的輪紋往往不能完整地呈現在同一磨片上，無法準確進行年齡鑑定。因此，本方法通過選取鱖矢耳石作為年齡鑑定材料，對其橫截面進行磨片，保證耳石核心和四周輪紋在同一磨片上呈現，通過判讀耳石磨片上黑白相間的輪紋分布特徵，克服了假年層對年輪的幹擾，提高了年輪的清晰度和 可識別度，從而達到準確鑑定鱖魚年齡的目的。

發明內容
本發明的目的在於提供了一種鱖魚耳石橫截面磨片的製作方法，該方法解決了內外側面凹凸不平耳石的磨片製作難點，保證耳石核心和輪紋完整地出現在磨片上，有效提高了鱖魚年輪的清晰度和可識別度，從而達到準確鑑定鱖魚年齡的目的。本發明還有一個目的在於提供了一種鱖魚耳石橫截面磨片在年齡鑑定中的應用。為了達到上述目的，本發明採取以下技術措施:一種鱖魚耳石橫截面磨片的製作方法:其步驟是:1.耳石清洗:取出耳石後，先用蒸餾水衝洗，然後放入體積百分比為75%的酒精中清洗乾淨，晾乾後放在二甲苯中浸泡24小時，使其透明。2.確定中心線:耳石清洗乾淨後，放在顯微鏡透射光下找到鱖魚耳石中心核，然後用鉛筆經過中心核畫一條平行於耳石短軸的線，作為中心線，便於磨製時觀察進度。3.修剪:用小剪刀小心地將耳石兩端修剪平整，使其與中心線平行，以保證耳石固定時的牢固性。4.粗磨:用耳石夾具(專利號ZL201220386074.X)夾住耳石，在600#砂紙上打磨耳石兩端，使磨麵與中心線平行，兩端磨麵各自距離中心線1.0-1.5mm時，粗磨完成。5.首次固定:取一小塊熱熔膠(705A)，放在載玻片一端的中央，用酒精燈緩緩加熱使其融化，用鑷子夾住耳石將其垂直於載玻片插入熱熔膠中。熱熔膠凝固後耳石即可被固定在載玻片上。6.細磨:握住載玻片，粘有耳石的一面朝下，食指在載玻片另一面頂住耳石固定的位置，先用600#的水磨砂紙打磨，打磨的時候砂紙要用水潤溼，變磨製邊觀察。待磨製到距離中心線大概只有0.5mm時逐漸選用1000#、2000#和3000#砂紙打磨，待打磨至0.2-0.3mm時用拋光紙拋光,一端磨製完畢。7.卸載:第一端磨製完畢以後，把載玻片清理乾淨，用酒精燈緩緩加熱凝固的熱熔膠，用鑷子取出耳石，清洗掉未磨製一端附著的熱熔膠。8.二次固定:再次加熱(180 200°C)載玻片使熱熔膠融化，用鑷子夾住耳石未磨製的一端，將磨製好的一端用熱熔膠垂直黏著在載玻片上。9.二次打磨:按照步驟(6)的方法打磨，邊打磨便放在顯微鏡下觀察，待耳石核心和輪紋清晰後，用拋光紙拋光，打磨麵清理乾淨後用中性樹膠封片，得到鱖魚耳石橫截面磨片。10.觀察鑑定:將製作好的耳石磨片放在顯微鏡下，在入射光照射下通過與顯微鏡連接的萬能視頻成像裝置(LY-WN-HP SUPER (XD)觀察輪紋特徵並鑑定年齡。一種鱖魚耳石橫截面磨片在年齡鑑定中的應用，其步驟是:將製作好的耳石磨片放在顯微鏡下，在入射光照射下通過與顯微鏡連接的CXD觀察輪紋特徵、記錄輪紋距離、拍照並判讀年齡。根據耳石橫截面的實際大小，將耳石磨片放大10-40倍。在入射光照射下，耳石核心呈黑色，處於耳石磨片一側(外側面)的中心位置，構成線狀核區。從耳石核出發，朝耳石的內側面、背葉和腹葉側形成亮帶與暗帶交錯的帶區，亮帶較寬，呈半透明的棕黃色，形成時間為春季到秋季，統稱為夏輪8 ;暗帶較窄，呈不透明的黑色，形成於冬季，稱之為冬輪7。夏輪8和冬輪7交替出現，構成一個完整的年輪，對冬輪7進行計數，磨片上冬輪7數即為年齡大小。與現有技術相比，本發明 具有以下優點:
鱖魚耳石外形與其他大多數魚類明顯不同，其主要特點是內外側面凹凸不平，內側面向外凸出，外側面向內凹陷；核心靠近外側面，處於背葉和腹葉的中間位置，在內側面背葉和腹葉之間有一道較為明顯的凹槽。上述外形結構對年齡鑑定造成極大困難，耳石的核心和四周的輪紋往往不能完整地呈現在同一磨片上，因此無法準確進行年齡鑑定。本發明解決了內外側面凹凸不平耳石的磨片製作難點，保證耳石核心和輪紋完整地出現在磨片上，為耳石呈現內外側面凹凸不平的魚類年齡鑑定提供了一種新方法。該方法與傳統方法相比具有輪紋更清晰、年輪更易讀的優勢；其次，耳石磨片製作簡單，每4-6分鐘可以製作完成一個磨片，採取橫截面磨片的製作方式可以保證耳石核心和四周輪紋在同一磨片上呈現，便於判讀年輪；再次，在橫截面磨片上，耳石核偏向磨片的一側，從耳石核出發呈現明暗交替的輪紋，夏輪和冬輪清晰可見，可以克服假年層對年輪的幹擾，保證了年輪鑑定的準確性。


圖1為一種鱖魚矢耳石的內、外側面輪廓示意圖。其中，I為耳石背葉，2為耳石腹葉，3為耳石內側面上的凹槽，4為耳石核心，5為耳石中心線，6為耳石磨片的厚度。圖2為以後總鱖魚矢耳石橫截面磨片。其中，7為冬輪(窄帶)，代表年輪，8為夏輪(寬帶)。
具體實施例方式下面結合具體圖示對本發明的進行詳細說明:實施例1:一種鱖魚耳石橫截面磨片的製作方法:其步驟是:1.耳石清洗:打開鱖魚的腦`顱，用尖頭鑷子從球囊中取出矢耳石，放在盛有清水的培養皿中，用解剖針輕輕剝掉耳石表層的黏膜，清洗乾淨後放在體積百分比為75%的酒精中清洗以去掉耳石表層的油脂，晾乾後放在二甲苯中浸泡24小時，使其透明。2.確定中心線:24小時後，將浸泡過的耳石從二甲苯溶液中取出，用清水衝洗掉耳石表明殘留的二甲苯後晾乾備用。然後將耳石放在顯微鏡載物臺上，外側面朝上，在透射光下找到鱖魚耳石中心核4，然後用鉛筆經過中心核畫一條平行於耳石短軸的中心線5，以便磨製時觀察進度。3.修剪:用小剪刀小心地將耳石兩端修剪平整，使其與中心線5平行，以保證耳石固定時的牢固性。4.粗磨:用耳石夾具夾住耳石，在600#砂紙上打磨耳石兩端，使磨麵與中心線平行，兩端磨麵各自距離中心線1.0-1.5mm時，粗磨完成。5.首次固定:取一小塊熱熔膠，放在載玻片一端的中央，用酒精燈緩緩加熱使其融化，用鑷子夾住修剪好的耳石，將其垂直於載玻片插入熱熔膠中。熱熔膠凝固後耳石即可被固定在載玻片上。6.打磨:握住載玻片，粘有耳石的一面朝下，食指在載玻片另一面頂住耳石固定的位置，先用600#的水磨砂紙打磨，打磨的時候砂紙要用水潤溼，變磨製邊觀察。待磨製到距離中心線大概只有0.5mm時依次選用1000#、2000#和3000#砂紙打磨，待打磨至0.2-0.3mm時6用拋光紙拋光,一端磨製完畢。7.卸載:第一端磨製完畢以後，把載玻片清理乾淨，用酒精燈緩緩加熱凝固的熱熔膠，用鑷子取出耳石，清理未磨製一端附著的熱熔膠。8.二次固定:再次加熱載玻片使熱熔膠融化，用鑷子夾住耳石未磨製的一端，將磨製好的一端用熱熔膠垂直黏著在載玻片上。9.二次打磨:按照步驟(6)的方法打磨，邊打磨便放在顯微鏡下觀察，待耳石核心和輪紋清晰後，用拋光紙拋光，打磨麵清理乾淨後用中性樹膠封片，即得一種鱖魚耳石橫截面磨片。實施例2:—種鱖魚耳石橫截面磨片在年齡鑑定中的應用，其步驟是:將製作好的耳石磨片放在顯微鏡下，在入射光照射下通過與顯微鏡連接的CXD觀察輪紋特徵、記錄輪紋距離、拍照並判讀年齡。根據耳石橫截面的實際大小，將耳石磨片放大10-40倍。在入射光照射下，耳石核心呈黑色，處於耳石磨片一側(外側面)的中心位置，構成線狀核區。從耳石核出發，朝耳石的內側面、背葉和腹葉側形成亮帶與暗帶交錯的帶區，亮帶較寬，呈半透明的棕黃色，形成時間為春季到秋季，統稱為夏輪8 ;暗帶較窄，呈不透明的黑色，形成於冬季，稱之為冬輪7。夏輪8和冬輪7交替出現，構成一個完整的年輪，對冬輪7進行計數，磨片上冬輪7數即為年齡大小。耳石橫截面磨片輪紋十分清晰，很容易判讀年齡，且判讀結果準確可靠。通過上述方法對標記放流的56尾鱖魚(知道準確的年齡大小)進行年齡鑑定，吻合率達100%，進一步證實了本發明方法鑑定 鱖魚年齡的準確性。
權利要求
1.一種鱖魚耳石橫截面磨片的製作方法，其步驟是: 0.耳石清洗:取出耳石後，先用蒸餾水衝洗，然後放入體積百分比為75%的酒精中清洗乾淨，晾乾後放在二甲苯中浸泡24小時； 2).確定中心線:耳石清洗乾淨後，放在顯微鏡透射光下找到鱖魚耳石中心核，然後用鉛筆經過中心核畫一條平行於耳石短軸的線，作為中心線； 3).修剪:將耳石兩端修剪平整，使其與中心線平行； 4).粗磨:夾住耳石，在砂紙上打磨耳石兩端，使磨麵與中心線平行，兩端磨麵各自距離中心線1.0-1.5mm時,粗磨完成； 5).首次固定:將熱熔膠棒切割少許，放在載玻片一端的中央，用酒精燈加熱使其融化，用鑷子夾住耳石將其垂直於載玻片插入熱熔膠中，熱熔膠凝固後耳石固定在載玻片上； 6).細磨:握住載玻片，粘有耳石的一面朝下，食指在載玻片另一面頂住耳石固定的位置，先用水磨砂紙打磨，待磨製到距離中心線0.5mm時逐漸選用砂紙打磨，待打磨至0.2-0.3mm時用拋光紙拋光,一端磨製完畢； 7).卸載:第一端磨製完畢以後，把載玻片清理乾淨，用酒精燈加熱凝固的熱熔膠，用鑷子取出耳石，清洗掉未磨製一端附著的熱熔膠； 8).二次固定:再次加熱載玻片使熱熔膠融化，用鑷子夾住耳石未磨製的一端，將磨製好的一端用熱熔膠垂直黏著在載玻片上； 9).二次打磨:按照步驟(6)的方法打磨，用拋光紙拋光，打磨麵清理乾淨後用中性樹膠封片。·
2.權利要求1所述的一種耳石的製作方法所製得的耳石在鱖魚年齡鑑定中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種鱖魚耳石橫截面磨片的製作方法及應用，屬於魚類生態學領域。本發明選取矢耳石作為研究材料，對其橫截面進行磨片，將製作好的耳石磨片放在顯微鏡下，在入射光照射下通過CCD軟體鑑定年齡並測定輪紋之間的寬度，觀察耳石磨片的輪紋分布特徵，鑑定鱖的年齡。與傳統鑑定方法相比，此方法實現了對鱖魚耳石輪紋的清晰可視，耳石核偏向耳石磨片的一側，構成線狀核區；從耳石核出發，朝耳石的另一側形成亮帶與暗帶交錯的帶區，亮帶較寬，形成時間為春季到秋季，暗帶較窄，形成於冬季，即為年輪。這種明暗交替的輪紋，使年齡更容易辨別和判讀，從而大大提高了鱖魚年齡鑑定的準確性。
文檔編號B24B1/00GK103231285SQ20131014789
公開日2013年8月7日 申請日期2013年4月26日 優先權日2013年4月26日
發明者李為, 丁城志, 連玉喜, 李鍾傑, 張堂林, 劉家壽, 葉少文, 苑晶 申請人:中國科學院水生生物研究所