替加氟的環甘油硒代磷脂綴合物及其合成的製作方法

2023-12-08 08:09:11 1

專利名稱：替加氟的環甘油硒代磷脂綴合物及其合成的製作方法
技術領域：
一種含替加氟的硒代環甘油硒代磷脂綴合物及其合成，涉及一種核苷類物質，具體是替加氟的硒代磷脂衍生物。
背景提要磷脂具有廣泛的生理活性，大量的磷脂已被合成並證明具有良好的抗癌活性，同時它又是藥物的有效載體，對腫瘤組織具有一定的靶向作用；核苷及其類似物在臨床上廣泛用作抗腫瘤和抗病毒藥物；硒是人體必須微量元素，它具有非常明顯的防癌、抗癌作用，臨床結果表明，有機態硒能極為有效地提高硒的生物利用度及其作為生命必須微量元素的生理功能，且其毒性比無機硒大大降低。其化合物在治療癌症方面發揮了重大的作用，近幾年，將Se引入到藥物分子中或合成新的含Se藥物是一個研究的熱點。但是將硒引人到磷脂核苷綴合物中，還未見文獻報導。因此，合成這類化合物並研究它們的生物活性，對磷脂類新藥的創製將會具有一定的指導意義。我們首先研究核苷環甘油硒代磷脂綴合物的合成及其活性。

發明內容
本發明的目的在於合成核苷的硒代環甘油磷脂綴合物，以期解決核苷類藥物療效低，毒性大等不足。
實現本發明的技術方案是本發明的化合物是一種如通式所示的替加氟的環甘油硒代磷脂綴合物
n＝2，3，6其合成方法為 下面進一詳述本發明合成的替加氟的硒代環甘油磷脂綴合物的元素分析用Yanaco CHN CORDER MT-3型自動元素分析儀測定。元素分析結果及理化數據見表1。
表1.2a～3c的31P NMR，元素分析及理化數據Entry n分子式 Rf狀態Yield(％)元素分析分析值(計算值)碳 氫 氮2a 2C29H50FN2O7PSe 0.53 Syrup68 52.3(52.1) 7.51(7.48) 4.21(4.19)2b 3C30H52FN2O7PSe 0.58 Syrup72 53.5(53.8) 7.79(7.77) 4.18(4.19)2c 6C33H58FN2O7PSe 0.62 Syrup56 54.9(54.6) 8.05(8.01) 3.33(3.32)說明測定比移值Rf所用的流動相是石油醚/乙酸乙酯(5∶1)；收率是柱層析後的產率。
用BRUKERAC-P400HE型儀測定測定1H NMR(以TMS為內標)和31P NMR(85％H3PO4為外標)，結果見表2。
表2.2a～3c核磁共振氫及31P NMR如下2a1H NMR(CDCl3，δppm)0.879(t，J＝6.4Hz，3H，C15H30CH3)；1.210～1.290(m，26H，(CH2)13)，1.511～1.560(m，2H，OCH2C15H31)，1.888～1.892(m，1H，1/2CH2CHN)，2.007～2.097(m，1H，1/2CH2CHN)，2.184～2.229(m，1H，1/2CH2CH2OCHN)，2.329～2.440(m，1H，1/2CH2CH2OCHN)，3.473(t，J＝6.8Hz，2H，OCH2CH2N，)，3.559(dd，J＝11.2Hz，J＝6.4Hz，1H，1/2CH2OP)，3.649(dd，J＝11.2Hz，J＝4.8Hz，1H，1/2CH2OP)，3.993(dd，J＝15.6Hz，J＝8.41Hz，1/2CH2OCHN)，4.180～4.264(m，3H，OCH2CH2N，1/2CH2OCHN)，4.310～4.525(m，4H，OCH2C15H31，OCH2CHOP)，4.668～4.747(m，1H，CHOP)，5.968～5.980(m，1H，CH(O)N)，7.419(d，J＝6Hz，1H，CHCF).31P NMR87.328，87.635ppm.
2b1H NMR(CDCl3，δppm)0.889(t，J＝6.4Hz，3H，C15H30CH3)；1.213～1.345(m，28H，(CH2)13，OCH2CH2CH2N)，1.521～1.567(m，2H，OCH2C15H31)，1.891～1.895(m，1H，1/2CH2CHN)，2.007～2.097(m，1H，1/2CH2CHN)，2.188～2.232(m，1H，1/2CH2CH2OCHN)，2.332～2.445(m，1H，1/2CH2CH2OCHN)，3.475(t，J＝6.8Hz，2H，OCH2CH2N，)，3.562(dd，J＝11.2Hz，J＝6.4Hz，1H，1/2CH2OP)，3.655(dd，J＝11.2Hz，J＝4.8Hz，1H，1/2CH2OP)，3.998(dd，J＝15.6Hz，J＝8.41Hz，1/2CH2OCHN)，4.185～4.269(m，3H，OCH2CH2N，1/2CH2OCHN)，4.313～4.528(m，4H，OCH2C15H31，OCH2CHOP)，4.671～4.751(m，1H，CHOP)，5.969～5.982(m，1H，CH(O)N)，7.421(d，J＝6Hz，1H，CHCF).31P NMR87.528，87.815ppm.
2c1H NMR(CDCl3，δppm)0.883(t，J＝6.4Hz，3H，C15H30CH3)；1.215～1.367(m，34H，(CH2)13，OCH2(CH2)4CH2N)，1.535～1.578(m，2H，OCH2C15H31)，1.895～1.898(m，1H，1/2CH2CHN)，2.012～2.223(m，1H，1/2CH2CHN)，2.191～2.237(m，1H，1/2CH2CH2OCHN)，2.362～2.485(m，1H，1/2CH2CH2OCHN)，3.485(t，J＝6.8Hz，2H，OCH2CH2N，)，3.575(dd，J＝11.2Hz，J＝6.4Hz，1H，1/2CH2OP)，3.667(dd，J＝11.2Hz，J＝4.8Hz，1H，1/2CH2OP)，4.002(dd，J＝15.6Hz，J＝8.41Hz，1/2CH2OCHN)，4.196～4.273(m，3H，OCH2CH2N，1/2CH2OCHN)，4.333～4.558(m，4H，OCH2C15H31，OCH2CHOP)，4.677～4.758(m，1H，CHOP)，5.968～5.981(m，1H，CH(O)N)，7.423(d，J＝6Hz，1H，CHCF).31P NMR87.435，87.725ppm.
我們研究了化合物(2a～c)對人體對膀胱癌細胞T-24抑制作用的體外試驗，本試驗選用體外連續培養的膀胱癌細胞株。細胞培養於含10％胎牛血清的DMEM高糖培養基，37℃、5％CO2條件下；細胞倍增時間為24～30h.以替加氟作為參照。其結果見表3。
表3化合物2a～c對膀胱癌細胞T-24抑制作用(半數置死量IC50，μg/ml)Entry Tegafur 2a 2b 2cT-24 127 28 37 41從表3可知，化合物2a～c對膀胱癌細胞T-24生長抑制效果優於原藥替加氟，說明引入硒元素，增強了抗癌活性。
替加氟的環甘油硒代磷脂綴合物是一類未見文獻報導新化合物。我們設計經「一鍋法」使六乙基亞磷醯三胺依次與羥烷基替加氟、甘油醚及硒反應製得。實驗表明上述方案是完全可行的。所以通過本方法可以成功地實現核苷的硒代磷脂綴合物的合成。
化合物(2a～c)的31P NMR表現為強度相等的雙峰，這是因為反應產物是由兩組非對映構體組成。
環甘油硒代磷脂綴合物是一類新型的化合物，其光譜性質未見報導。它們的31P NMR值為87ppm左右，而相應的硫代磷脂綴合物的31P NMR值為82ppm左右。它們31P NMR這些差異可以從四配位鱗的分子結構得到解釋。
對於四配位磷分子中的P＝X(X＝O，S，Se)鍵，除一個σ鍵和一個pπ-dπ鍵外，還有一個反饋鍵，即由X原子提供外層孤對電子，與磷原子的3d空軌道形成的π鍵。由於磷原子的3d軌道參與成鍵，從而使磷原子的核屏蔽效應增大，所以，它與三配位磷化合物相比，其31P NMR出現在較高場。而對於P＝O、P＝S、P＝Se鍵，O，S，Se的原子半徑是依次增大，因此，反饋鍵的強度是P＝O＞P＝S＞糧食P＝Se，即P＝Se型化合物磷原子上的屏蔽不如P＝S型化合物，P＝S型化合物不如P＝O型化合物。所以，在其他基團相同時，P＝Se型化合物的31P NMR比相應的P＝S型化合物出現在低場。
具體實施例方式
1.替加氟的硒代環甘油磷脂綴合物的合成將0.742ml(3.0mmol)六乙基亞磷醯三胺溶於75ml無水苯中，加入碘粉38mg(0.15mmol)，加熱回流直到生成的白色沉澱消失，加入0.732g(3.0mmol)羥烷基替加氟，在65℃下攪拌8h，加入0.948g(3.0mmol)1-十六烷氧基-2，3-丙二醇，攪拌5h，加入硒237mg(3.0mmol)，攪拌0.5h，減壓去掉溶劑，將殘餘物進行柱層析分離(石油醚/乙酸乙酯＝5∶1)，按表1中比移值收集。
2.抗腫瘤活性測定首先以DMSO為溶劑將樣品和對照物分別稀釋為10，0.1mg.ml-1，再分別取10ul加入到完全培養基1ml中，使之在實驗中的終濃度為100ug.ml-1、1mg.ml-1。同時以不加樣品的DMSO為實驗陽性對照。
以完全培養基為溶劑，分別配製成100，10和1ug.ml-1，作為實驗使用。同時以完全培養基作為陰性對照。
細胞鋪板與觀察計數取正常生長處於對數期的T-24和BGC-823細胞，用0.02％EDTA消化液將細胞從種子瓶中消化下來，製備成細胞濃度為1.5×104個/ml的細胞懸液，將細胞懸液接種於24孔板，1ml/孔，正常培養24h後，吸取培養基，換入各組含有測試樣品的培養基繼續培養。
給藥後，並分別於給藥後24、48、72、96、120h觀察細胞生長狀態，同時消化各組仍處於生長狀態的活細胞，進行細胞計數。得出樣品對癌細胞的抑制作用結果。在不同時段，在倒置顯微鏡下，可清晰的觀察到對照組細胞生長正常。細胞排列緊密，呈對數生長狀態。細胞分裂指數相為惡性腫瘤細胞分裂指數狀態。以DMSO為溶劑組由於DMSO對細胞有一定的毒副作用，因此在實驗中設置空白組。在給藥組，細胞分裂指數相下降。隨藥物農度的增加，其下降趨勢增大，細胞死亡增加，存活細胞出現縮圓、胞質濃縮、精糙、顆粒性內涵物增加。
權利要求
1.一種含替加氟的硒代環甘油磷脂類化合物，其特徵在於該化合物的通式為
2.一種如權利要求1所述的替加氟的硒代環甘油磷脂類化合物合成方法，其特徵在於通過「一鍋法」，使六乙基亞磷醯三胺依次與羥烷基替加氟、甘油醚及硒反應，生成替加氟的環甘油硒代磷脂綴合物(2)。反應式為
全文摘要
含替加氟的硒代環甘油磷脂類化合物及其合成涉有機硒及一種核苷類物質。該化合物的結構式如通式所示如上式化合物的合成，是使六乙基亞磷醯三胺依次與羥烷基替加氟、甘油醚及硒反應。經抗腫瘤活性測定，本發明化合物對人體膀胱癌抑制效果比原藥替加氟好。因此，硒的引入是提高替加氟的磷脂綴合物活性的有效途徑之一。
文檔編號C07H19/06GK1634958SQ20041004692
公開日2005年7月6日 申請日期2004年11月12日 優先權日2004年11月12日
發明者許新華, 周冰, 陳雄 申請人:湖南大學