異硒唑酮類化合物和其配合物及其應用的製作方法
2023-12-08 06:09:46
專利名稱：異硒唑酮類化合物和其配合物及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及唑酮類化合物及其合成方法，尤其涉及雙苯並異硒唑酮類化合物和其配合物及其在製備抗腫瘤藥物中的應用，以及製備該類化合物的方法。
背景技術：
近二十多年來，硒的生物學功能已廣泛被人們所認識，隨著對硒認識的不斷深入，不同結構形式的硒化合物的藥用吸收、分布以及藥效和毒理表現特點已被揭示較為清楚。許多活性的硒化合物研究取得了一系列重要突破和進展，其中有機硒化合物在生命科學方面的特徵及其廣泛的藥理作用日益受到重視。研究表明，有機硒化合物在抗炎、抗氧化、抗腫瘤和治療心腦血管疾病方面有明顯的作用，並能對免疫系統進行調節。代表性的藥物有依布硒啉(Ebselen)，該藥物作為治療藥物目前已進入臨床研究階段。
依布硒啉，即2-苯基-1，2-苯並異硒唑-3(2H)-酮(INNEbselen)，是國外開發中的抗炎新藥，其特點是低毒並具有廣泛的藥理活性，為活性氧相關疾病的治療提供了一個很有前途的手段，並為有機硒藥物的發展展示了廣闊的前景。隨著針對Ebselen藥物的深入研究，以苯並異硒唑酮為核心結構的多種化合物陸續被合成出來，且其藥理活性也得到廣泛研究。但迄今為止，有關苯並異硒唑酮用於製備抗腫瘤藥物中的應用尚鮮有涉足。
發明內容
本發明目的一是提供一類具有抗腫瘤活性的雙苯並異硒唑酮類化合物。所述的雙苯並異硒唑酮類化合物具有下述通式(I)或通式(II)的結構 其中，M＝Se或Te，R＝H、Na或C1-6烷基。
其中Y＝Pt或Pd，X＝Se或Te。
本發明的另一目的在於提供製備上述通式(I)和通式(II)所示化合物的方法。
製備通式(I)所示化合物的方法，主要包括以下步驟1)鄰氨基苯甲酸和鹽酸在冰鹽浴下攪拌混合後，向其中加入亞硝酸鈉溶液，反應完成後將所得產物備用；2)硒粉和氫氧化鈉溶於水後，向其加入連二亞硫酸鈉，反應完成後將所得產物備用；3)將步驟1)所得的產物滴加到步驟2)所得的產物中，將混合物攪拌直至產生的氮氣排完，再將反應混合物用鹽酸酸化，過濾，並將過濾所得的沉澱水洗後置乾燥器中乾燥，所得的產物備用；4)將步驟3)所得的產物混懸於氯化亞碸、四氫呋喃或乙醇中，加入催化量的二甲基甲醯胺，攪拌回流，旋轉蒸發除去多餘的二氯亞碸，殘渣用正己烷、石油醚或乙醚重結晶，所得的晶體備用；5) 將步驟4)所得的晶體溶於乙腈中，冰浴冷卻至5℃以下，滴加25％氨水，調節pH值後升溫至10-25℃，並繼續反應，過濾，水洗沉澱，將不溶於水的部分置於烘箱中乾燥後備用；6) 將步驟5)所得的產物與水按3g∶50ml的比例混合，攪拌下按1∶1的摩爾比滴加0.1mol/L NaOH溶液，將產品逐漸溶解後，把不溶的部分過濾掉後，在45℃下蒸乾水，得到產物。
製備上述通式(I)化合物的另一種方法，主要包括以下步驟1)在氮氣保護和冰浴條件下，將苯甲醯胺溶於無水四氫呋喃中後，滴入正丁基鋰溶液；2)向步驟1)所得的反應液中加入碲粉，繼續攪拌0.5-1小時，將反應液降溫至0℃以下並加入CuBr2，在-40℃低溫條件下攪拌一段時間後在室溫下繼續攪拌，最後將反應液倒入醋酸溶液中，過濾，所得濾餅保存備用；3)將步驟2)所得的濾餅與水按3g∶50ml的比例混合，攪拌下按1∶1的摩爾比滴加0.1mol/L NaOH溶液，產品逐漸溶解，把不溶的部分過濾掉後，在45℃下蒸乾水，得到產物。
製備上述通式(II)化合物的方法，主要包括以下步驟1)將1，2-苯並異硒唑酮鈉或1，2-苯並異碲唑酮鈉與(DACH)PtCl2或(DACH)PdCl2混懸於甲醇中，回流1-3小時；2)向步驟1)所述的反應液中加入水，待沉澱生成後，過濾，用水、乙醚各洗滌濾餅數次，乾燥濾餅即得。
本發明的另一目的在於提供一種具有抗腫瘤活性的藥物組合物。該藥物組合物由通式(I)或通式(II)所示結構的化合物和藥學上可接受的載體配合而成，即將藥學上可接受用量的通式(I)和通式(II)所示結構的化合物與藥學上可接受的載體配合後，按本領域常規的製劑方法將其製備成任意一種適宜的藥物組合物。
通常該組合物適合於口服給藥和注射給藥，也適合其他的給藥方法，例如經皮給藥。
該組合物可以是片劑、膠囊、粉劑、顆粒、錠劑、栓劑，或口服液或無菌胃腸外懸液等液體製劑形式。
該組合物可以是大或小容量注射劑、凍乾粉針、無菌粉分裝等製劑形式。
為了達到給藥的一致性，本發明組合物優選為單劑形式。
用於口服給藥的單劑形式可以是片劑和膠囊，並可含有常規賦形劑諸如粘合劑，例如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃芪膠或聚乙烯吡咯烷酮；填充劑，例如乳糖、糖、玉米澱粉、磷酸鈣、山梨醇或甘氨酸；壓片潤滑劑，例如硬脂酸鎂；崩解劑，例如澱粉、聚乙烯吡咯烷酮、澱粉乙醇酸鈉或微晶纖維素；或藥學上可接受的溼潤劑，諸如十二烷基硫酸鈉。
固體口服組合物可以用常規的混合、填充或壓片法製備。重複混合操作可以用於將活性劑充分分布到使用大量填充劑量的組合物中。這樣的操作當然是本領域中常規的。片劑可以按照常規製備方法製得包衣片或素片。
口服液體製劑可以是例如乳劑、糖漿或酏劑的形式，或者可以作為乾燥產品存在，使用前再用水或其他合適的載體重新構成。這種液體製劑可以含有常規添加劑，諸如懸浮劑，例如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用脂；乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨醇-油酸酯或阿拉伯膠；無水載體(可包括食用油)，例如杏仁油、餾化椰子油或油性酯，所述的油性酯包括甘油酯、丙二醇或乙醇；防腐劑，例如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸；如果需要，還可加入常規調味劑或著色劑。
對於胃腸外給藥，特別是注射劑，可利用兩種活性組分分別與無菌載體製備單位液體劑型，並且根據所用的濃度將其懸浮於載體中。可以將輔助劑諸如局部麻醉劑、防腐劑和緩衝劑溶解於該載體中。為了增強穩定性，可以將該組合物冷凍後再填充到小瓶中，並在真空下除去水分。胃腸外懸液是用實質上相同的方式製備而得，活性組分可以通過與環氧乙烷接觸後，再懸浮於無菌載體中而進行滅菌。有利的是，在該組合物中包含表面活性劑或溼潤劑以促進該化合物均勻分布。
另外，還可按照常規方法將藥物組合物製成緩控釋製劑，如緩釋微丸或控釋微丸。
根據不同的給藥方法，組合物可以含有0.1％-99％重量，優選10-60％重量的活性物質。
本發明製備所得的系列化合物經藥理學試驗證明具有顯著的抗腫瘤功效，預示此類化合物在製備預防、治療各類腫瘤的藥物方面有著廣泛的應用前景。
具體實施例方式
以下將結合實施例具體說明本發明，本發明的實施例僅用於說明本發明的技術方案，並非限定本發明的實質。1，2-苯並異硒唑-3(2H)-酮(以下簡稱Eb-N)的製備1、氯化2-苯甲酸重氮鹽的製備精密稱取14.0g鄰氨基苯甲酸，將其與40ml濃度為1∶1鹽酸在冰浴條件下攪拌混合，然後，在其中慢慢滴入9.0g亞硝酸鈉溶於20ml水的溶液，滴完後繼續反應2小時，得到氯化2-苯甲酸重氮鹽備用。
2、二硒化鈉的製備在60ml的去離子水中加入8.8g硒粉和4.4g氫氧化鈉，在攪拌條件下慢慢加入8.8g連二亞硫酸鈉，繼續反應2-4小時，得到二硒化鈉溶液備用。
3、2，2』-二硒化雙苯甲酸的製備在攪拌條件下，將步驟1所得的氯化2-苯甲酸重氮鹽溶液滴加到步驟2所得的二硒化鈉溶液中，繼續攪拌反應2小時，直到產生的氮氣排完，並經石蕊試紙證明溶液呈鹼性。再將所得的反應混合物用鹽酸酸化，過濾，將所得的沉澱水洗後置乾燥器中乾燥即得。其產率為90％。所得產物的重結晶體的熔點(m.p.)為294℃。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.33-8.04(m，4H，ph-H)13.6(br，COOH)IR(KBr)cm-1M(O-H)3005，M(CO2)1672，M(C-N)1264，MC＝C(苯環)1560，1460，1417；MS-FAB(m/z)201[1/2M+](Se-Se鍵斷裂)。
4、2-硒氯苯甲醯氯的製備將40.0g的2，2』-二硒化雙苯甲酸與200ml氯化亞碸、0.15ml濃度為1.8mmol的DMF混合後，攪拌回流3小時，旋轉蒸發除去多餘的二氯亞碸，殘渣用正己烷重結晶，即得2-硒氯苯甲醯氯純品。其產率為90％。熔點(m.p.)為66℃。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.33-8.16(m，4H，ph-H)IR(KBr)cm-1M(COCl)1641，MC＝C(苯環)1581，1545，1432MS-FAB(m/z)253。
5、1，2-苯並異硒唑-3(2H)-酮的製備將0.84g的2-硒氯苯甲醯氯溶於20ml乙腈中，在冰浴條件下進行反應，並在攪拌條件下滴加25％的氨水，可見大量沉澱生成，直至反應溶液的pH值為8左右。將反應溶液升至室溫，繼續反應2小時，過濾，水洗沉澱後將其乾燥，即得產物。其產率為44％，m.p.200-201℃。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.32-8.09(m，Ph-H)，3.99(s，2H，CH2)；IR(KBr)cm-1M(N-H)3054，MC＝C(苯環)1595，1558，1441；元素分析C7H5NOSe計算值(％)C42.44，H2.54 N7.07，實測值(％)C42.57 H2.74 N7.20；MS-FAB(m/z)200[M+1]。
1，2-苯並異硒唑酮鈉的製備將實施例1製備所得的1，2-苯並異硒唑-3(2H)-酮重結晶，再在所得的重結晶物中加入50ml水，並在攪拌條件下滴加0.1mol/L的NaOH溶液，使產品逐漸溶解，過濾除去不溶部分，所得濾液在45℃下蒸乾水分即得。
1，2-苯並異硒唑酮鉑配合物的製備將(DACH)PtCl2和過量的1，2-苯並異硒唑-3(2H)-酮混懸於甲醇中，回流1-3小時後，向其中加入水，待有白色沉澱生成後，過濾，用水、乙醚各洗滌濾餅數次，乾燥後即得。
1，2-苯並異硒唑酮鈀配合物的製備將(DACH)PdCl2和過量的1，2-苯並異硒唑-3(2H)-酮混懸於甲醇中，回流1-3小時後，再向其中加入水，等有白色沉澱生成後，過濾，用水、乙醚各洗滌濾餅數次，乾燥後即得。
1，2-苯並異碲唑酮(以下簡稱ET-N)的製備 在氮氣保護和冰浴條件下，苯甲醯胺溶於無水四氫呋喃中，並在攪拌條件下，向混合溶液中滴入正丁基鋰溶液，繼續反應0.5小時後，再加入碲粉，溶液呈棕黑色，繼續攪拌0.5-1小時，降溫至-40℃左右，加入CuBr2，在此溫度下攪拌0.5小時後再在室溫下繼續攪拌2小時。將反應液倒入2％的醋酸溶液中，過濾取沉澱，乾燥後得產品。
1，2-苯並異碲唑酮鈉的製備將實施例5製備1，2-苯並異碲唑酮重結晶，再在所得的重結晶物中加入50ml水，並在攪拌條件下滴加0.1mol/L NaOH溶液，使產品逐漸溶解，過濾除去不溶部分，將所得濾液在45℃下蒸乾水分即得所需的化合物。
1，2-苯並異碲唑酮鉑配合物的製備將(DACH)PtCl2和過量1，2-苯並異碲唑酮的混懸於甲醇中，回流1小時，再在其中加入水，等有白色沉澱生成後，過濾，用水，乙醚各洗滌濾餅數次，乾燥即得。
1，2-苯並異碲唑酮鈀配合物的製備(DACH)PdCl2和過量1，2-苯並異碲唑酮的混懸於甲醇中，回流1小時，再在其中加入水，等有白色沉澱生成後，過濾，用水，乙醚各洗滌濾餅數次，乾燥即得。
體外研究本發明化合物的抗腫瘤活性一、試驗材料1、供試藥物因實施例1、5製備所得的Eb-N和ET-N為淡黃色粉末，難溶於水，用含15％小牛血清的RPMI-1640培養液將起始濃度為100μmol/L的待測藥物(Eb-N或ET-N)，然後再將上述濃度的待測藥液稀釋到所需濃度，即得到終濃度分別為50、20、10、5、1μmol/L的待測藥液。
2、陽性對照藥順鉑(DDP)，從普通藥店購買得到。用生理鹽水溶解，並用生理鹽水將其稀釋為濃度分別為5、2.5、1.25和0.625μg/ml的對照藥液。
3、體外實驗瘤株Bel-7742由北京大學醫學部國家重點實驗室提供，用含10％小牛血清的RPMI-1640培養液培養。
二、試驗方法腫瘤株Bel-7742用含10％小牛血清的RPMI-1640培養液培養24h貼壁後，然後在各細胞孔中加入待測藥液或對照藥液，每種濃度的藥物加藥6孔，另設空白對照孔6孔。
細胞加藥後分別培養24、48和72小時，在各個孔中加入噻唑藍(MTT)液，1小時後，加二甲基亞碸(DMSO)顯色，在BIO-RED 550型酶標儀上測其OD490值，計算各濃度藥物的殺傷率，並用Bliss法求其IC50值。
三、實驗結果，參見表1和表2。
表1 Eb-N對肝癌細胞(Bel-7742)的生長抑制作用 表2 ET-N對肝癌細胞(Bel-7742)細胞的生長抑制作用 結論體外試驗結果表明，Eb-N和ET-N能顯著抑制腫瘤細胞Bel-7742的生長，且其生長抑制作用存在明顯的量效和時效關係，表明本發明化合物具有顯著的抗腫瘤活性。
體內研究本發明化合物的抗腫瘤活性一、試驗材料1、供試藥物因實施例1、5製備所得的Eb-N和ET-N用1％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液懸浮配製成所需濃度的待測溶液，然後置於4℃冰箱保存備用。
2、陽性對照藥環磷醯胺(CTX)粉針劑，上海華聯製藥有限公司生產，臨用前製成生理鹽水溶液。
3、實驗動物ICR種小鼠、C57BL/6小鼠(SPF級，)，體重18-22g，雌、雄兼有，均購自北京維通利華實驗動物有限公司，動物生產許可證編號SCXK(京)2002-0003。飼養於北京大學人民醫院SPF級動物實驗室內，許可證號SYXK11-00-0001。小鼠10隻/籠，自由進食飲水。
4、瘤株小鼠肝癌(H22)為本實驗室在昆明種小鼠傳代保種的腹水型瘤株，實驗時抽取第7天的癌性腹水，經生理鹽水按1∶3稀釋成瘤細胞懸液，供接種小鼠使用。
二、實驗方法實驗選取ICR小鼠50隻，雌雄各半，體重為18-22g。於右腋部皮下接種H22瘤細胞懸液0.2ml/只。接種後將小鼠隨機分為5組，每組10隻。次日，根據預試驗結果給藥，設定供試藥物Eb-N、ET-N的中劑量組為120mg/kg體重，每日灌胃給藥1次，連續7天，每次給藥容量為0.2ml/10g體重。陰性對照組給予等容量生理鹽水。陽性對照組1次皮下注射給予環磷醯胺60mg/kg體重。於末次給藥後次日，斷頸處死動物，稱體重，剖出實體瘤，稱瘤重，按下述公式求抑瘤率。
以上實驗均重複三次，各組實驗結果進行統計學處理(t檢驗)。
三、試驗結果，參見表3。
表3 Eb-N和ET-N在小鼠體內對H22腫瘤的生長抑制作用
結論體內試驗結果表明，Eb-N和ET-N對小鼠體內H22腫瘤的生長具有顯著抑制作用，表明本發明化合物具有顯著的體內抗腫瘤活性。
權利要求
1.一種具有抗腫瘤活性的化合物，具有下述通式(I)的結構 其中M＝Se或Te，R＝H、Na或C1-6烷基。
2.一種製備通式(I)化合物的方法，主要包括以下步驟1)鄰氨基苯甲酸和鹽酸在冰鹽浴下攪拌混合後，向其中加入亞硝酸鈉溶液，反應完成後將所得產物備用；2)硒粉和氫氧化鈉溶於水後，向其中加入連二亞硫酸鈉，反應完成後將所得產物備用；3)將步驟1)所得的產物滴加到步驟2)所得的產物中，將混合物攪拌直至產生的氮氣排完，再將反應混合物用鹽酸酸化，過濾，並將過濾所得的沉澱水洗後置乾燥器中乾燥，所得的產物備用；4)將步驟3)所得的產物混懸於氯化亞碸、四氫呋喃或乙醇中，加入催化量的二甲基甲醯胺，攪拌回流，旋轉蒸發除去多餘的二氯亞碸，殘渣用正己烷、石油醚或乙醚重結晶，所得的晶體備用；5)將步驟4)所得的晶體溶於乙腈中，冰浴冷卻後，滴加25％氨水，調節pH值後升溫至10-25℃，並繼續反應，過濾，水洗沉澱，將不溶於水的部分置於烘箱中乾燥後備用；6)將步驟5)所得的產物與水按3g∶50ml的比例混合，攪拌下按1∶1的摩爾比滴加0.1mol/L NaOH溶液，將產品逐漸溶解後，把不溶的部分過濾掉後，在45℃下蒸乾水，得到產物。
3.一種製備通式(I)化合物的方法，主要包括以下步驟1)在氮氣保護和冰浴條件下，將苯甲醯胺溶於無水四氫呋喃中後，滴入正丁基鋰溶液；2)向步驟1)所得的反應液中加入碲粉，繼續攪拌0.5-1小時，將反應液降溫至0℃以下並加入CuBr2，在-40℃的低溫條件下攪拌一段時間後在室溫下繼續攪拌，最後將反應液倒入醋酸溶液中，過濾，所得濾餅保存備用；3)將步驟2)所得的濾餅重結晶，然後將結晶物加入水中，隨後滴加的NaOH溶液使結晶物逐漸溶解，把不溶的部分過濾除去，將濾液蒸乾水分，即得。
4.根據權利要求3所述的方法，其特徵在於將步驟2)中的反應液溫度降至-50℃～-30℃時再加入CuBr2。
5.一種具有抗腫瘤活性的化合物，具有下述通式(II)的結構 其中Y＝Pt或Pd，X＝Se或Te。
6.一種製備通式(II)化合物的方法，主要包括以下步驟1)將1，2-苯並異硒唑酮鈉或1，2-苯並異碲唑酮鈉與(DACH)PtCl2或(DACH)PdCl2混懸於醇試劑中，回流1-3小時；2)向步驟1)所述的反應液中加入水，待沉澱生成後，過濾，用水、乙醚各洗滌濾餅數次，乾燥濾餅即得。
7.一種具有抗腫瘤活性的藥物組合物，由權利要求1或6所述結構的通式(I)或通式(II)化合物和藥學上可接受的載體配合而成。
8.根據權利要求7所述的藥物組合物，其製劑形式為片劑、膠囊、粉劑、顆粒、錠劑、栓劑、口服液、無菌胃腸外懸液液體製劑、大或小容量注射劑、凍乾粉針或無菌粉分裝劑。
9.通式(I)或(II)化合物在製備抗腫瘤藥物中的應用。
10.根據權利要求9所述的應用，所述的腫瘤為實體瘤。
全文摘要
本發明公開了以苯並異硒唑酮為核心結構的一類新化合物和其配合物衍生物及其在抗腫瘤藥物中的應用，以及合成該類化合物的方法。本發明的系列化合物經動物體內外試驗證明具有抗腫瘤的藥理作用，預示該類化合物具有用於製備抗腫瘤藥物的應用。
文檔編號C07D293/10GK1704408SQ200410042618
公開日2005年12月7日 申請日期2004年5月27日 優先權日2004年5月27日
發明者曾慧慧 申請人:武漢科艾硒醫藥科技發展有限公司