利用胎盤幹細胞治療疼痛的製作方法

2023-11-04 00:34:22 2

利用胎盤幹細胞治療疼痛的製作方法
【專利摘要】本文提供了患有疼痛(例如，神經性疼痛）的個體的治療方法，包括向所述個體施用治療有效量的組織培養塑料製品貼壁胎盤幹細胞(PDAC?)。
【專利說明】利用胎盤幹細胞治療疼痛
[0001] 本申請主張2011年6月1日提交的美國臨時專利申請No. 61/492, 314、2011年10 月18日提交的美國臨時專利申請No. 61/548,663和2012年2月3日提交的美國臨時專利 申請No. 61/594, 985的優先權，以上每一篇專利的公開內容以其全部併入本文作為參考。 1.

【技術領域】
[0002] 本文提供了利用分離的胎盤幹細胞緩解疼痛的方法，以及治療患有疼痛的個體的 方法。 2.

【背景技術】
[0003] 由於哺乳動物胎盤豐富並且通常作為醫學廢物被丟棄，因此它們是醫學上有用的 幹細胞的獨特來源。在醫學領域需要用於抑制疼痛的改進組合物和方法。因此，本文提供 了在疼痛治療中有用的胎盤幹細胞和包含胎盤幹細胞的組合物，以及利用它們治療疼痛的 方法。 3.


【發明內容】

[0004] 在一個方面，本文提供了治療個體中疼痛或異常感覺情況，如感覺不良 (dysaesthesia)、異常性疼痛（allodynia)和痛覺過敏的方法，包括向所述個體施用治療有 效量的胎盤幹細胞，或以胎盤幹細胞為條件的培養基，其中所述治療有效量是足以引起所 述疼痛的可檢測改善的量。在一種具體的實施方式中，所述方法包括鑑別需要疼痛減輕的 個體，或遭受疼痛折磨的個體。在另一種具體的實施方式中，所述方法還包括在施用所述 胎盤幹細胞之前確定所述個體中疼痛的一個或多個第一水平，以及在施用所述胎盤幹細胞 之後確定所述個體中疼痛的一個或多個第二水平，其中與所述疼痛的一個或多個第一水平 相比，所述治療有效量的胎盤幹細胞降低了所述疼痛的一個或多個第二水平。在一種更具 體的實施方式中，所述治療有效量的胎盤幹細胞引起比由於施用安慰劑所引起的改善更好 的或更持久的疼痛的可檢測改善。在一種更具體的實施方式中，所述疼痛的一個或多個第 一水平和所述疼痛的一個或多個第二水平是通過疼痛評估量表來確定的。在一種更具體 的實施方式中，該疼痛評估量表為數字疼痛強度量表（Numeric Pain Intensity Scale); 疼痛性質評估量表（Pain Quliaty Assessment Scale);簡單描述性疼痛強度量表（Simple Descriptive Pain Intensity Scale);視覺模擬量表（Visual Analog Scale)；ffong-Baker 臉譜疼痛分級量表（Wong-Baker FACES Pain Rating Scale) ;FLACC 量表；CRIES 量表；或 COMFORT 量表。
[0005] 在另一種具體的實施方式中，所述方法還包括在施用所述胎盤幹細胞之前確定個 體中疼痛的一種或多種生理學指標的第一水平，以及在施用所述胎盤幹細胞之後確定該個 體中疼痛的一種或多種生理學指標的第二水平，其中與第一水平相比，該治療有效量的胎 盤幹細胞降低了第二水平。在一種更具體的實施方式中，所述疼痛的生理學指標是個體的 心率。在一種更具體的實施方式中，在施用後個體中的心率比施用前該個體中的心率更低。 在另一種更具體的實施方式中，所述疼痛的生理學指標是所述個體的心臟收縮。在一種更 具體的實施方式中，在施用後個體的心臟收縮比施用前該個體中的心臟收縮更低。在另一 種更具體的實施方式中，所述疼痛的生理學指標是個體的心臟舒張。在一種更具體的實施 方式中，在施用後個體的心臟舒張比施用前該個體中的心臟舒張更低。
[0006] 在治療疼痛的方法的另一種實施方式中，所述疼痛為神經性疼痛。在一種具體的 實施方式中，所述神經性疼痛是由糖尿病性神經病變引起的。在另一種具體的實施方式中， 所述神經性疼痛是由所述個體中的神經損傷造成的。在另一種具體的實施方式中，所述神 經性疼痛是由藥物引起的。在某些具體的實施方式中，所述藥物是含鉬抗癌藥物或另一種 化學治療藥物或者包含含鉬抗癌藥物或另一種化學治療藥物，其中該含鉬抗癌藥物例如奧 沙利鉬、卡鉬或順鉬，該另一種化學治療藥物例如紫杉醇或長春新鹼。在另一種實施方式 中，所述神經性疼痛是由病毒引起的，例如，病毒性疾病，如水痘帶狀皰疹、皰疹(例如，單純 性皰疹）或人類免疫缺陷性病毒（HIV)。在另一種實施方式中，所述疼痛是由放射性損傷引 起的，例如，作為癌症治療的一部分的放射性損傷。在另一種具體的實施方式中，所述神經 性疼痛是由炎症引起的，例如，神經性炎症、神經炎。
[0007] 在治療疼痛的方法的另一種實施方式中，所述疼痛為炎症性疼痛。在另一種實施 方式中，所述疼痛為骨痛。在一種具體的實施方式中，所述骨痛與癌症有關或者由癌症引 起。在另一種實施方式中，所述疼痛是由癌症引起的。在另一種實施方式中，所述疼痛是由 外陰痛引起的或者與外陰痛有關。在另一種實施方式中，所述疼痛是由間質性膀胱炎引起 的或者與間質性膀胱炎有關。在另一種實施方式中，所述疼痛對類固醇治療無反應。在另 一種實施方式中，所述疼痛對非類固醇抗炎治療無反應。在另一種實施方式中，所述疼痛對 阿片樣藥物治療無反應。在另一種實施方式中，所述疼痛對鴉片製劑治療無反應。
[0008] 在另一個方面，本文提供了用於在治療個體中疼痛中有用的治療有效量的胎盤幹 細胞或以胎盤幹細胞為條件的培養基，其中所述治療有效量是足以引起所述疼痛中的可檢 測改善的量。在一種實施方式中，在所述使用前所述個體中疼痛的水平和所述使用後個體 中所述疼痛的水平是通過疼痛評估量表來確定的，例如，數字疼痛強度量表；疼痛性質評估 量表；簡單描述性疼痛強度量表；視覺模擬量表；Wong-Baker臉譜疼痛分級量表；FLACC量 表；CRIES量表；或COMFORT量表。在另一種實施方式中，在所述使用前個體中所述疼痛的 水平和所述使用後個體中所述疼痛的水平是通過疼痛的一個或多個身體指標來確定的。在 一種具體的實施方式中，疼痛的所述生理學指標是個體的心率，例如，所述使用後比所述使 用前所述個體中的所述心率更低。在另一種具體的實施方式中，疼痛的所述生理學指標是 所述個體的心臟收縮，例如，所述使用後比所述使用前所述個體中的所述心臟收縮更低。在 另一種具體的實施方式中，疼痛的所述生理學指標是所述個體中的心臟舒張，例如，所述使 用後比所述使用前所述個體中的所述心臟舒張更低。在某些實施方式中，所述疼痛是神經 性疼痛。在一種更具體的實施方式中，所述神經性疼痛是由糖尿病性神經病變引起的。在 一種更具體的實施方式中，所述神經性疼痛是由所述個體中的神經損傷引起的。在另一種 更具體的實施方式中，所述神經性疼痛是由炎症引起的。在另一種更具體的實施方式中，所 述神經性疼痛是由藥物引起的。在一種更具體的實施方式中，所述藥物是含鉬抗癌藥物或 者包含含鉬抗癌藥物，例如，該含鉬抗癌藥物是奧沙利鉬、卡鉬或順鉬，或者該含鉬抗癌藥 物包含奧沙利鉬、卡鉬或順鉬。在另一種具體的實施方式中，所述藥物是紫杉醇或者包含紫 杉醇。在其他具體的實施方式中，所述疼痛是炎症性疼痛、骨痛(例如，骨痛與癌症有關或由 癌症引起的)、由癌症引起的疼痛、由外陰痛引起的疼痛或者與外陰痛有關的疼痛、由間質 性膀胱炎引起的疼痛或者與間質性膀胱炎有關的疼痛或者由退行性關節病(如骨關節炎） 引起的疼痛。在某些實施方式中，所述疼痛對類固醇治療無反應。在某些其他實施方式中， 所述疼痛對非類固醇抗炎治療無反應。在某些其他實施方式中，所述疼痛對阿片樣藥物治 療無反應。在某些其他實施方式中，所述疼痛對非特異性或者混合的y/s阿片樣藥物治 療無反應。
[0009] 在上述實施方式中任一種的一種【具體實施方式】中，所述胎盤幹細胞是CD10+、 ⑶和⑶105+。在一種更具體的實施方式中，所述胎盤幹細胞另外是⑶200+，例如，所述 胎盤幹細胞是⑶1〇+、⑶34_、⑶105+和⑶200+。在一種更具體的實施方式中，所述胎盤幹細 胞另外是⑶45^和⑶90+。在一種更具體的實施方式中，所述胎盤幹細胞另外是⑶8(Γ和 ⑶86 _。在其他的【具體實施方式】中，所述胎盤幹細胞表達⑶200而不表達HLA-G ;或者表達 CD73、CD105和CD200 ;或者表達CD200和0CT-4 ;或者表達CD73和CD105而不表達HLA-G。 在本文所述胎盤幹細胞中任一種的一種【具體實施方式】中，所述胎盤幹細胞是HLA-A，B，C+。 在本文所述實施方式中任一種的【具體實施方式】中，所述胎盤幹細胞另外是0CT-4+。在某些 實施方式中，將所述胎盤幹細胞配製以局部施用。在某些其他實施方式中，將所述胎盤幹細 胞配製以全身施用，例如，靜脈內或動脈內施用。
[0010] 3. 1 定義
[0011] 如本文所使用的，當涉及說明的數值時，術語"約"表示所說明的數值正或負10% 內的值。
[0012] 如本文所使用的，術語"來源/來源於"表示分離自或表示純化自。例如，胎盤來 源貼壁細胞分離自胎盤。術語"來源/來源於"涵蓋了由直接分離自組織(例如胎盤）的細 胞培養的細胞以及由原代分離物培養或擴增的細胞。
[0013] 如本文所使用的，"免疫定位"表示在(例如）流式細胞術、螢光活化細胞分選、磁性 細胞分選、原位雜交、免疫組織化學等中使用免疫蛋白（例如，抗體或其片段）的化合物(例 如，細胞標誌物）的檢測。
[0014] 如本文所使用的，術語"SH2"是指結合標誌物⑶105上的表位的抗體。因此，被稱 為SH2+的細胞是CD105+。
[0015] 如本文所使用的，術語"SH3"和"SH4"是指結合標誌物⑶73上所存在的表位的抗 體。因此，被稱為SH3+和/或SH4+的細胞是⑶73+。
[0016] 如本文所使用的，如果在(例如）幹細胞的收集和/或培養期間從幹細胞中除去了 至少50%、60%、70%、80%、90%、95%或至少99%的幹細胞與之天然相聯繫的其他細胞，那麼幹 細胞就被"分離"。"分離的"細胞群體表示與所述細胞群體來源的組織(例如，胎盤）的其他 細胞基本分離的細胞群體。如果在(例如)幹細胞群體的收集和/或培養期間從所述幹細胞 群體中除去了至少50%、60%、70%、80%、90%、95%或至少99%的所述幹細胞群體與之天然相聯 系的細胞，則(例如）幹細胞的群體是"分離的"。
[0017] 如本文所使用的，術語"胎盤幹細胞"是指不考慮原代培養後的傳代次數，來源於 (例如，分離自）哺乳動物胎盤的幹細胞或祖細胞，其貼壁至組織培養基底(例如，組織培養 塑料板或者纖連蛋白塗覆的組織培養板)。然而，如本文所使用的術語"胎盤幹細胞"不表 示滋養層細胞（trophoblast)、細胞滋養細胞（cytrophoblast)、胚胎生殖細胞或胚胎幹細 胞，如本領域技術人員知道的這些細胞。如果細胞保留了幹細胞的至少一種性質，例如，與 一種或多種類型幹細胞有關的標誌物或基因表達譜；在培養中複製至少10-40次的能力； 多潛能性，例如，體外、體內或體外和體內分化為三種胚層中的一種或多種的細胞的能力； 缺乏成熟（即分化的）細胞特性等，則認為該細胞是"幹細胞"。術語"胎盤幹細胞"和"胎盤 來源的幹細胞"可以互換使用。除非在本文中另作說明，否則術語"胎盤"包括臍帶。在某 些實施方式中，本文所公開的胎盤幹細胞是體外多能的（即所述細胞在分化條件下能夠體 外分化)、體內多能的（即所述細胞能夠體內分化）或兩者。
[0018] 如本文所使用的，當特定標誌物是可檢測的時，則幹細胞對該標誌物是"陽性的"。 例如，由於CD73在胎盤幹細胞上是以比背景（與（例如）任何給定測定的同型對照或實驗陰 性對照相比）可檢測地更大的量可檢測的，因此胎盤幹細胞對於(例如）⑶73是陽性的。在 由細胞所提供或表達情況下標誌物可用於將該細胞與至少一種其他細胞類型進行區分或 可用於選擇或分離該細胞時，該細胞對於標誌物也是陽性的。
[0019] 如本文所使用的，"免疫調節"和"免疫調節的"表示引起免疫應答的可檢測變化或 具有引起所述變化的能力，和引起免疫應答的可檢測變化的能力。 4.【專利附圖】

【附圖說明】
[0020] 圖1示出了 CD10+、CD34、CD105+、CD200+胎盤幹細胞、載體或加巴噴丁（GBP)降 低神經性疼痛模型中疼痛的效力。X軸：條件；Y軸：根據Von Frey細絲分類測定的敏感性 (異常性疼痛）改善。"D":天數。GBP:加巴噴丁。MPK:毫克每千克。BL:基線。
[0021] 圖2示出了在神經性疼痛動物模型中由⑶10+、⑶34_、⑶105+、⑶200+胎盤幹細胞 (1父10 6、3\106或10父106個細胞/次施用）、載體或加巴噴丁（68?)的施用所產生的總疼 痛減輕（T0PAR)程度。星號表示與單獨的載體施用相比的顯著結果。
[0022] 圖 3A-圖 3D 示出了 CD10+、CD34' CD105+、CD200+ 胎盤幹細胞對通過 26g 力 Von Frey纖維所測量的機械性異常性疼痛的影響（A):施用4X 106個胎盤幹細胞(正方形）和載 體(菱形)後，同側四肢的後爪回縮頻率。（B):施用4X106個胎盤幹細胞(正方形)和載體(直 線)後，對側四肢的後爪回縮頻率。（C):胎盤幹細胞對同側四肢的機械性異常性疼痛降低的 劑量依賴性作用。（D):胎盤幹細胞對疼痛降低反應者百分比的劑量依賴性作用。*P〈0. 05 ; **p〈0. 01相對於載體。對於圖3C和圖3D，第一柱(最左側）代表載體；第二柱代表4X 106 個胎盤幹細胞；第三柱代表1X 1〇6個胎盤幹細胞；和第四柱(最右側)代表4 X 105個胎盤幹 細胞。
[0023] 圖4A-圖4B表明在第4天，在引流淋巴結處，0)10+、0)34-、0)105+、0)200 +胎盤幹 細胞抑制樹突狀細胞的募集、活化和分化。（A):胎盤幹細胞處理組具有較低的⑶11c、⑶86 和CD80基因表達。（B):胎盤幹細胞處理組具有較低的IL-12基因表達。*P〈0. 05 ;林p〈0. 01 相對於載體。對於圖4A和圖4B，第一柱(最左側)代表載體；第二柱(最右側)代表胎盤幹細 胞。
[0024] 圖5A-圖5C表明0)10+、0)34-、0)105+、0)200+胎盤幹細胞抑制1'細胞活化，調節 T細胞分化和細胞因子譜。（A):在第4天，在引流淋巴結處，胎盤幹細胞處理組具有較低的 ⑶3和⑶69基因表達。（B)在第4天，在引流淋巴結處，胎盤幹細胞處理組具有顯著較低的 IFNy基因表達。（C):在第4天，在引流淋巴結處，胎盤幹細胞處理組具有較高的IL-10,但 是具有較低的IL-17基因表達。*P〈0. 05 ;林p〈0. 01相對於載體。對於圖5A、圖5B和圖5C， 第一柱(最左邊）代表載體；第二柱(最右邊）代表胎盤幹細胞。
[0025] 圖6A-圖6B表明在第8天，在同側坐骨神經中，CD10+、CD34、CD105+、CD200+胎盤 幹細胞（PSC)抑制IL-17mRNA (A)和蛋白質（B)的表達。*P〈0. 05相對於載體。
[0026] 圖7A-圖7D表明在第8天，CD10+、CD34-、CD105+、CD200+胎盤幹細胞抑制免疫細 胞向同側坐骨神經的浸潤。（A):胎盤幹細胞抑制巨噬細胞浸潤（Emrl)和活化（⑶68)。（B): 胎盤幹細胞抑制樹突狀細胞浸潤（⑶11c)和活化（⑶80、IL-12b)。（C):胎盤幹細胞抑制T 細胞浸潤（⑶3d)和活化（⑶69)。（D):坐骨神經單細胞懸液的流式細胞術分析顯示胎盤幹 細胞抑制T細胞（⑶3)和巨噬細胞（ED2)浸潤。*P〈0. 05相對於載體。對於圖7A、圖7B和 圖7C，第一柱(最左邊)代表載體；第二柱(最右邊)代表胎盤幹細胞。對於圖7D，第一柱(最 左邊）代表初始細胞；中間的棒代表載體；和第三柱(最右邊）代表胎盤幹細胞。
[0027] 圖8A-圖8L表明在第8天，CD10+、CD34、CD105+、CD200+胎盤幹細胞抑制向同 側坐骨神經的炎症性浸潤。正常、載體和胎盤幹細胞處理的動物中H&E染色（A-C)、⑶68 (D-F)、⑶8 (G-I)和⑶4 (J-L)。箭頭表示A、B和C中的神經束膜；星號表示神經外膜。放 大100X，比例尺200mM。
[0028] 圖9表示在第8天，同側坐骨神經中⑶10+、⑶34'⑶105+、⑶200+胎盤幹細胞抑制 CCL2、CCL12和CXCL1的mRNA表達。第一柱(最左邊）代表載體；第二柱(最右邊）代表胎盤 幹細胞。
[0029] 圖10A-圖10D示出了神經損傷程序（D6)後並且在處理（D10、D16、D25和D30)後， 基線處大鼠爪子對26g刺激的反應次數。（A)⑶10+、⑶34_、⑶105+、⑶200+胎盤幹細胞施 用後，對CCI誘發的疼痛所觀察到的顯著疼痛降低。（C)⑶10+、⑶34_、⑶105+、⑶200+胎盤 幹細胞施用後，對CCI誘發的疼痛所觀察到的顯著疼痛降低。（B，D)顯示了對對側爪子的 作用。
[0030] 圖11A-圖11B示出了在神經損傷程序（D7)後和治療（D11、D21、D26和D34)後，在 基線（BL)處，大鼠能夠在旋轉杆上保持的持續時間（至多180秒)。（A)⑶10+、⑶34_、⑶105+、 CD200+胎盤幹細胞靜脈內（IV)處理和對照組。（B) CD10+、CD34-、CD105+、CD200+胎盤幹細 胞肌內（頂）處理和對照組。
[0031] 5.【具體實施方式】
[0032] 5.1治療疼痛的方法
[0033] 本文描述了治療疼痛的方法，包括施用胎盤來源的細胞，例如，胎盤幹細胞，例如， 下文5. 4節中所述的或如下文實施例7中所述製備的胎盤幹細胞。在具體的實施方式中，在 本文所述的用於治療疼痛的方法中使用的胎盤幹細胞是⑶1〇+、⑶34_、⑶105+和⑶200+。在 其他的【具體實施方式】中，在本文所述的治療疼痛的方法中使用的胎盤幹細胞以比通過相同 數目的BM-MSC的所述基因的表達可檢測地更高的水平表達EL0VL2、ST3GAL6、ST6GALNAC5 和/或SLC12A8基因。在某些實施方式中，在本文所述的方法中使用的胎盤幹細胞以比 通過相同數目的BM-MSC的所述基因的表達可檢測地更高的水平表達CPA4、TCF21和/或 VTN基因。在某些實施方式中，在本文所述的方法中使用的胎盤幹細胞以比通過相同數目 的BM-MSC的所述基因的表達可檢測地更高的水平表達B4GALT6、FLJ10781和/或NUAK1基 因。在一種【具體實施方式】中，所述胎盤幹細胞還以比通過相同數目的BM-MSC的所述基因的 表達可檢測地更高的水平表達Cllorf9基因。
[0034] 5. 1. 1治療疼痛的方法
[0035] 通常將疼痛定義為與真實或可能的組織損傷有關或由這些損傷引起的不 愉快的感覺和情緒體驗。Merskey H, Bogduk N 主編，Classification of Chronic Pain, International Association for the Study of Pain(IASP)Task Force on Taxonomy, IASP Press:Seattle, 209-214, 1994。由於疼痛的感知是非常主觀的，因此它是 最難以有效診斷和治療的病理之一。
[0036] 在一個方面，本文提供了治療患有疼痛的個體的方法，包括向所述個體施用治療 有效量的胎盤幹細胞，或以胎盤幹細胞為條件的培養基，其中所述治療有效量是足以引起 所述疼痛或與所述疼痛有關的症狀中的可檢測改善的量。在一種實施方式中，所述方法還 包括在施用所述胎盤幹細胞之前確定個體中疼痛的第一水平，以及在施用所述胎盤幹細胞 之後確定所述個體中疼痛的第二水平，其中與所述疼痛的第一水平相比，所述治療有效量 的胎盤幹細胞降低了所述疼痛的所述第二水平。
[0037] 在某些實施方式中，當施用時，所述治療有效量的胎盤幹細胞與安慰劑的施用相 比引起所述個體中疼痛更好的或更持久的改善。
[0038] 在某些實施方式中，所述疼痛是傷害性疼痛。通常當組織損傷、疾病或炎症後 釋放有害刺激物(如炎症性化學介質）時引起傷害性疼痛，並且通過損傷位點處的功能正 常的感覺感受器(傷害感受器）檢測傷害性疼痛。參見，例如，K 〇ltzenburg，M. Clin. J. of Painl6:S131-S138(2000)。傷害性疼痛的原因的實例包括，但不限於，化學灼傷或熱灼傷、 皮膚切口和挫傷、骨關節炎、類風溼性關節炎、肌腱炎和肌盤膜痛。在某些實施方式中，通過 炎症刺激傷害性疼痛。
[0039] 在某些其他實施方式中，所述疼痛是神經性疼痛。神經性疼痛反映神經系統 的損傷或損害，並且已被定義為"由神經系統中原發性損害或功能障礙引起或造成的 疼痛。Merskey H, Bogduk N 主編，Classification of Chronic Pain, International Association for the Study of Pain (IASP)Task Force on Taxonomy, IASP Press:Seattle, 209-214, 1994。在一種【具體實施方式】中，所述神經性疼痛的特徵在於周圍 神經元興奮性的改變。在其他具體的實施方式中，所述神經性疼痛包括，但不限於，與糖尿 病性神經病變有關的疼痛、帶狀皰疹神經痛、三叉神經痛、炎症(例如，神經性炎症、神經炎） 和中風後疼痛。在某些實施方式中，神經性疼痛是持續的、偶發的，並且被描述為灼痛、麻 刺、刺痛、急痛、電極狀、戳痛、擠壓、深部疼痛或痙攣。在某些其他實施方式中，患有神經性 疼痛的個體還另外經歷了部分或完全感覺缺陷、異常或不熟悉的不愉快感覺(感覺不良)、 由非有害刺激物產生的疼痛或對超閾刺激反應的不成比例的疼痛感知(痛覺過敏)。
[0040] 在另一種【具體實施方式】中，所述神經性疼痛是複雜性局部疼痛症候群（CRPS)。在 一種【具體實施方式】中，CRPS影響不存在神經損傷的四肢（I型CRPS)。在一種更具體的實施 方式中，所述I型CRPS包括反射交感性營養不良（RSD)。在一種更具體的實施方式中，所述 RSD是I期RSD或"早期RSD"。在早期RSD中，疼痛比對損傷所期望的要更嚴重，並且它具 有灼燒或疼痛性質。它可能依賴於四肢、身體接觸或情緒低落而提高。受影響的區域通常 會水腫，並且可能會是高溫或低溫的，並且可能會顯示出指甲和毛髮生長的提高。放射照片 可以顯示出早期骨變化。在另一種更具體的實施方式中，所述RSD是II期RSD或"確定的 RSD"。在一種更具體的實施方式中，除疼痛之外，確定的RSD包括水腫組織的硬化；具有網 狀青斑或青紫症的皮膚的多汗；脫髮；指甲脊起、破裂或易斷；乾燥的手的發展；和/或皮 膚和皮下組織的顯著萎縮。疼痛仍是主要特徵。在另一種更具體的實施方式中，所述RSD 是III期RSD或"晚期RSD"。在一種更具體的實施方式中，所述晚期RSD包括向鄰近擴散 的疼痛；不可逆的組織損傷；皮膚薄且光亮；和在放射照片上可見的骨脫礦物質化。
[0041] 在另一種具體的實施方式中，所述神經性疼痛是由藥物引起的疼痛，例如，化學 治療藥物或抗癌藥物。在一種【具體實施方式】中，所述藥物是含鉬藥物、紫杉烷、埃博黴素、 植物鹼或沙利度胺，或者包含含鉬藥物、紫杉烷、埃博黴素、植物鹼或沙利度胺。在一種 更具體的實施方式中，所述藥物是或者包含硼替佐米、卡鉬(例如，PARAPLATIXK.)、 順鉬(例如，PLATINOL?)、阿糖胞苷(例如，CYTOSAR?、Ara-C)、多西他賽(例如， TAXOTERE?)、依託泊苷 /VP-16 (VEPESID?)、吉西他濱(例如，GEMZAR?)、 HALAVEN? (甲磺酸艾日布林)、六甲三聚氰胺(例如，冊XALIN?)、紫杉醇(例如， TAXOL?; ABRAXANE?)、奧沙利鉬（例如，ELOXATiN?)、蘇拉明、沙利度胺(例如， THALOMID? )、長春鹼(例如，VELBAN? ; ALKABAN-AQ?)、長春新鹼(例如， ONCOVIN?、VINCASAR PFS?、Vincrex)或長春瑞濱(NAVELBINE?)。
[0042] 在某些其他【具體實施方式】中，所述藥物是抗生素。在某些其他實施方式中，所述藥 物是他汀類藥物(抑制素，statin)。
[0043] 在某些其他【具體實施方式】中，所述藥物是或者包括氨氯地平(例如， NORVASC?、Lotril或Lotrel)、阿託伐他汀（例如，LIPITOR?)、度洛西汀 (例如，CYMBALTA⑧）、普瑞巴林(LYRICA?)、別嘌醇(例如，LOPURIM?、 ZYLOPRIM?)、AMIN0DIPINBERGLATE、胺碘酮（例如，CORDERONE?, PACERONE? )、阿洛地平，阿米替林(例如，ELAVIL?、ENDEP?、VANATRIP?)、甲硝唑(例 如，FLAGYL?、METR0GEL?)、呋喃妥因（例如，FURADANTIN?、MACROBID?、 MACRODANTIN?、NITR0MACR0)、哌克昔林，VYTORIN?、環丙沙星(例如， aPROK、Ρ?ΚΧΗ.?ΜΑ.Ο、雙硫侖(例如，ANTABUSE)、唑吡坦(例如，AMBIEN? )、丁螺環酮（例如，BUSPAR)、氯硝西泮（例如，KL0N0PM、CEBERKL0N、VALPAX)、阿普唑 侖(例如，XANAX?)、苯妥英（DILANTIN?)、西酞普蘭(例如，CELEXA)、度洛西汀 (例如，CYMBALTA? )、文拉法辛(例如，EFFEX0R，EFFEXOR XR? )、去甲替林 (例如，AVENTYL HCL, PAMEL0R)、舍曲林(例如，ZOLOFT?)、帕羅西汀（例如，PAXIL, PAXILCRJU、阿替洛爾（例如，TENORMIN、SEN0RMIN)、培哚普利（例如，ACE0N)、雷米普 利(例如，RAMIPRIL?)、氯沙坦(例如，COZAAR?、HYZAAR?)、肼屈嗪(例如， APRESOLINE?)、氫氯噻嗪(例如，HYDRODIURIL?、EZIDE?、HYDRO-PAR?、MICR0ZIDE?)、 賴諾普利(例如，PRINOVILd)、ZESTRIL? )、替米沙坦(例如，micardis?)、哌克 昔林，哌唑嗪(例如，MINIPRESS?)、賴諾普利（例如，PRINIVIL?、ZESTRIL?. )、洛伐他汀(例如，ALTOCOR?、MEVACOR?)、CADUET?、羅素伐他汀(例 如，CRESTOR?)、氟伐他汀(例如，LESCOL⑧、LESCOL?XL)、辛伐他汀(例如， ZOCOR?)、西立伐他汀(例如，lipobay?)、吉非貝齊(例如，LOPID?)、普伐他汀(例如， PRAVACHOL⑧、PRAVIGARD PAC?)、d4T (司他夫定，例如，ZERITC?)、ddC (扎西他濱； 例如，HIVID? )、ddl (去羥肌苷，例如，VIDEX?EC)、異煙肼(例如，TUBIZ[D?)、二 氨苯碸（DDS、氨苯碸)。
[0044] 在某些實施方式中，所述神經性疼痛不是由藥物引起的疼痛，例如，化學治 療藥物或抗癌藥物。在一種【具體實施方式】中，所述神經性疼痛不是由含鉬藥物、紫杉 烷、埃博黴素、植物鹼或沙利度胺所引起的疼痛。在一種更具體的實施方式中，所述神 經性疼痛不是由以下藥物引起的疼痛：硼替佐米、卡鉬(例如，PARAPLATINS)、順 鉬(例如，PLATINOLi))、阿糖胞苷(例如，CYTOSAR_、Ara-c)、多西他賽(例如， TAXOTERE?)、依託泊苷 /VP-16 (VEPESID?)、吉西他濱(例如，GEMZAR? )、 HMJWEN? (甲磺酸艾日布林)、六甲三聚氰胺（例如，liEXMJN?)、紫杉醇(例如， TAXOL?; ABRAXANE?)、奧沙利鉬（例如，ELOXATIN?)、蘇拉明、沙利度胺(例如， THALOMID?)、長春鹼(例如，VELBAN?; ALKABAN-AQ?)、長春新鹼(例如， ONCOVIN?、VINCASAR PFS?、Vincrex)或長春瑞濱（NAVELBTNBI)) 0
[0045] 在另一種具體的實施方式中，所述CRPS影響存在神經損傷的四肢（II型CRPS)。在 一種更具體的實施方式中，所述CRPS II包括灼痛。在另一種具體的實施方式中，所述CRPS 包括交感神經維持的疼痛症候群。在某些實施方式中，CRPS的症狀包括，但不限於，疼痛、自 主神經功能障礙、浮腫、運動障礙、營養不良、萎縮、灼痛、異常性疼痛(輕觸疼痛)。在某些實 施方式中，CRPS相關疼痛伴隨著腫脹和關節壓痛、出汗增多、對溫度敏感和/或皮膚變色。
[0046] 在某些其他【具體實施方式】中，所述神經性疼痛是由營養不良所引起的或與營養不 良有關的神經性疼痛。在更具體的實施方式中，所述營養不良是維生素 B12 (鈷胺素、氰鈷 胺素）缺乏。在另一種更具體的實施方式中，所述營養不良是維生素 B6 (吡哆醇、磷酸吡哆 醛）缺乏。在另一種更具體的實施方式中，所述營養不良是維生素 B1 (硫胺素）缺乏。在 另一種具體的實施方式中，患有由營養不良引起的神經性疼痛的個體進行了肥胖症治療手 術。在另一種具體的實施方式中，所述神經性疼痛是由酒精中毒或患有疼痛的個體飲酒所 造成的或是與之相關的。
[0047] 在某些實施方式中，所述疼痛是由外陰痛所造成的或者與外陰痛有關。外陰痛是 外陰疼痛，例如，不明確地由外陰或陰道炎或者皮膚病引起的疼痛。在一種實施方式中，夕卜 陰痛中的疼痛定位在外陰區域，例如，在前庭區，如外陰前庭炎或前庭痛。在另一種實施方 式中，外陰痛中的疼痛可以延伸至陰蒂，例如，陰蒂痛（clitorodynia)。造成外陰痛的原因 的實例包括，但不限於，性交疼痛、刺激外陰的神經的損傷或刺激，炎症的遺傳傾向性、過敏 症、自身免疫病症(例如，紅斑狼瘡或乾燥症候群)、感染(例如，酵母感染、HPV或細菌性陰道 病）和神經病。外陰痛的示例性症狀非限制地包括外陰、大陰唇、小陰唇或前庭處或周圍的 彌散性疼痛或燒灼感。
[0048] 在某些實施方式中，所述疼痛是由間質性膀胱炎所造成的或者與間質性膀胱炎有 關。間質性膀胱炎（也稱為膀胱疼痛症候群）是慢性病況，其特徵通常為(例如）與膀胱有 關的疼痛或壓迫，與排尿有關的疼痛、刺激性排尿、排尿頻率、緊急程度，或者骨盆疼痛或壓 迫。間質性膀胱炎的病理和發病原因尚不清楚。然而，已提出了幾種可能的原因，例如，血管 阻塞、自身免疫、炎症、膀胱內膜滲漏、肥大細胞、壓力，以及遺傳、神經原和內分泌原因。在 一種實施方式中，可以通過(例如)骨盆疼痛緊急性/頻率（PUF)患者調查或KC1測試(也稱 為鉀敏感性測試）來做出間質性膀胱炎的診斷。
[0049] 在某些其他實施方式中，所述疼痛是內臟痛。
[0050] 在某些其他實施方式中，所述疼痛是術後疼痛，如由手術期間對組織所造成的創 傷所引起的疼痛。
[0051] 在某些其他實施方式中，所述疼痛是混合性疼痛，例如，是具有傷害性和神經性成 分的慢性疼痛。在具體的實施方式中，所述混合性疼痛是癌症痛或下腰痛。
[0052] 在某些其他實施方式中，所述疼痛是偏頭痛或頭痛，例如，血管性頭痛、集束性頭 痛或中毒性頭痛。
[0053] 在具體的實施方式中，與疼痛有關的所述症狀包括(但不限於）自主神經功能障 礙、運動不能、虛弱、顫動、肌肉痙攣、張力障礙、營養不良、萎縮、強直、關節壓痛、出汗增多、 對溫度敏感、輕觸(異常性疼痛)、皮膚變色、高溫或低溫、指甲和毛髮生長的提高、早期骨變 化、具有網狀青斑或青紫症的多汗；脫髮；指甲脊起、破裂或易斷；手幹；彌散性骨質疏鬆、 不可逆性組織損傷、皮膚薄且光亮、關節攣縮和顯著的骨脫礦物質化。
[0054] 在某些實施方式中，根據本文所述的方法向個體施用胎盤幹細胞導致所述個體中 疼痛降低，同時沒有與指示/用於疼痛治療的一種或多種藥物(例如，加巴噴丁)有關的伴隨 的副作用。在具體的實施方式中，根據本文所述的方法的胎盤幹細胞的使用導致施用了胎 盤幹細胞的個體中疼痛的降低，但是不導致所述個體的感覺和/或運動協調的缺乏。
[0055] 5. 1. 2疼痛評估量表
[0056] 在一種實施方式中，向患有疼痛的個體施用的胎盤幹細胞的治療有效量是導致所 述個體中疼痛可檢測降低的量。所述降低可以是對個體可檢測的，對觀察者可檢測的，或兩 者。在本文所提供的治療方法的某些實施方式中，個體中的疼痛水平是根據一種或多種個 體疼痛量表，例如，由醫生指導或作為治療前檢查的一部分由所述個體評價的。在某些其他 實施方式中，個體中的疼痛水平是由觀察者使用一種或多種觀察者疼痛量表評價的。當根 據胎盤幹細胞施用前後的方法評價疼痛水平時，優選地將相同量表用於每次評價。可以在 胎盤幹細胞施用前對個體中的疼痛評價一次或一次以上，例如，2、3、4或5次，並且在胎盤 幹細胞施用後評價一次或一次以上，例如，2、3、4或5次。
[0057] 在一種實施方式中，通過0-10數字疼痛強度量表評價個體中的疼痛。在該量表 中，零等於無疼痛，而10等於最疼痛。在某些實施方式中，例如，在疼痛性質評估量表中，將 疼痛分為不止一種數字描述，例如，0-10表示感受到的疼痛的"熱痛"程度，0-10表示感受 到的疼痛的"劇痛"程度，0-10表示感受到的疼痛的"銳痛"程度，0-10表示感受到的疼痛的 "鈍痛"程度，0-10表示感受到的疼痛的"冷痛"程度，0-10表示感受到的疼痛的"敏感痛" 程度，0-10表示感受到的疼痛的"觸痛"程度，0-10表示感受到的疼痛的"癢痛"程度，0-10 表示感受到的疼痛的"射痛"程度，0-10表示感受到的疼痛的"麻痛"程度，0-10表示感受 到的疼痛的"刺痛"程度，0-10表示感受到的疼痛的"電擊疼"程度，0-10表示感受到的疼 痛的"絞痛"程度，0-10表示感受到的疼痛的"搏動痛"程度，0-10表示感受到的疼痛的"放 射性痛"程度，0-10表示感受到的疼痛的"酸痛"程度，0-10表示感受到的疼痛的"重痛"程 度和/或0-10表示感受到的疼痛的"不愉快的疼痛"程度。
[0058] 在另一種實施方式中，通過簡單描述性疼痛強度量表評價個體中的疼痛。在該量 表中，將疼痛描述為，例如，"無疼痛"、"輕微疼痛"、"中度疼痛"、"嚴重疼痛"、"極嚴重疼痛" 或"有可能的最疼痛"。
[0059] 在另一種實施方式中，通過視覺模擬量表評價個體中的疼痛。在視覺模擬量表中， 向個體提供由垂直線組成的圖；線的一端標記為"無疼痛"，而另一端標記為"有可能的最疼 痛"。要求個體在線的兩端之間標記點，從而表明由所述個體察覺的疼痛水平。
[0060] 在另一種實施方式中，通過Wong-Baker臉譜疼痛分級量表評價個體中的疼痛。在 面部表情量表中，由一系列卡通面部表情表示疼痛水平，所述卡通面部表情通常有六個面 部表情，顯示高興並逐漸變為更不高興。在具體的實施方式中，面部表情的潛臺詞為短語， 如"無疼痛"、"有點疼痛"、"疼痛較嚴重"、"疼痛更嚴重"、"疼痛非常嚴重"和"疼痛最嚴重"。 在另一種具體的實施方式中，面部表情的潛臺詞單獨為短語，如"無疼痛"、"輕微、煩惱的疼 痛"、"使人不安、不舒服、討厭的疼痛"、"使人痛苦、耐受的疼痛"、"劇烈、厭惡、可怕的疼痛" 和"有可能最嚴重的、難忍的、折磨人的疼痛"，或者與數字〇至10等級結合。
[0061] 在某些實施方式中，通過FLACC (面部表情、肢體動作、活動、哭喊和可安慰性）量 表評價個體中的疼痛。在具體的實施方式中，從(例如)〇至2對五種特徵中的每一種打分， 其中2表示疼痛，0表示無疼痛。得分可以單獨使用或總計使用。
[0062] 在某些其他實施方式中，通過CRIES (哭鬧、Sa02 (血紅蛋白飽和）所需的02、生命 體徵升高(血壓和心率)、面部表情和失眠）量表評價個體中的疼痛。在具體的實施方式中， 從(例如）0至2對五種特徵中的每一種打分，其中2表示疼痛，0表示無疼痛。得分可以單 獨使用或總計使用。
[0063] 在某些實施方式中，通過COMFORT量表評價個體中的疼痛，所述量表評價了 9種不 同的特徵(警覺度、安靜、呼吸困難、哭鬧、身體運動度、肌張力、面部緊張度、血壓和心率)、 每個特徵按照1-5級打分，其中1表示無疼痛或疼痛最小，而5表示最疼痛。得分可以單獨 使用或總計使用。
[0064] 5. 1. 3疼痛的牛理學指標
[0065] 如本文所使用的，"疼痛的治療"等可以包括完全消除疼痛；通過遭受疼痛的個體 的疼痛顯著降低；通過客觀標準(例如，心率、血壓、肌張力等）的疼痛或疼痛指徵的可檢測 降低；或任意兩種或全部三種的組合。在某些其他實施方式中，可以在胎盤幹細胞施用之前 或之後或者之前和之後，通過生理學標準(例如，壓力的生理學標準）來評價個體中的疼痛。 這些生理學標準可以包括客觀可測量的標準，如心率或血壓，例如，與個體中非疼痛狀態相 比或者與預期規範(例如，心臟收縮壓120和心臟舒張壓80 ;每分鐘搏動60次）相比，心率 或血液升高。這些生理學標準還可以，或者作為替代，包括主觀可測量的標準，如面部表情、 肌肉緊張(肌張力)、出汗、發抖等。
[0066] 因此，在某些實施方式中，施用於患有疼痛的個體的治療有效量的胎盤幹細胞引 起所述個體的心率可檢測的降低，例如，降低5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%或 50% ;心率從每分鐘搏動120次（bpm)或以上降低至低於llObpm ;從llObpm或以上降低至 低於lOObpm ;從lOObpm或以上降低至低於90bpm ;從90bpm或以上降低至低於80bpm ;從 120bpm或以上降低至低於lOObprn ;從llObpm以上降低至低於90bpm ;從lOObprn或以上降低 至低於80bpm ;從130bpm或以上降低至低於lOObpm ;從120bpm或以上降低至低於90bpm ; 從llObpm或以上降低至低於80bpm ;或者從120bpm或以上降低至低於80bpm。
[0067] 在某些其他實施方式中，當施用於患有疼痛的個體時，治療有效量的胎盤幹細胞 引起所述個體的血壓可檢測的降低，例如，個體的心臟收縮壓、心臟舒張壓，或兩者降低5%、 10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%或50% ;個體心臟收縮壓從200或以上降低至低於 190 ;心臟收縮壓從190或以上降低至低於180 ;心臟收縮壓從180或以上降低至低於170 ; 心臟收縮壓從170或以上降低至低於160 ;心臟收縮壓從160或以上降低至低於150 ;心臟 收縮壓從150或以上降低至低於140 ;心臟收縮壓從140或以上降低至低於130 ;心臟收縮 壓從200或以上降低至低於180 ;心臟收縮壓從190或以上降低至低於170 ;心臟收縮壓從 180或以上降低至低於160 ;心臟收縮壓從170或以上降低至低於150 ;心臟收縮壓從160 或以上降低至低於140 ;心臟收縮壓從150或以上降低至低於130 ;心臟收縮壓從200或以 上降低至低於170 ;心臟收縮壓從190或以上降低至低於160 ;心臟收縮壓從180或以上降 低至低於150 ;心臟收縮壓從170或以上降低至低於140 ;心臟收縮壓從160或以上降低至 低於130 ;心臟收縮壓從200或以上降低至低於160 ;心臟收縮壓從190或以上降低至低於 150 ;心臟收縮壓從180或以上降低至低於140 ;心臟收縮壓從200或以上降低至低於130 ; 心臟收縮壓從200或以上降低至低於150 ;心臟收縮壓從190或以上降低至低於140 ;心臟 收縮壓從180或以上降低至低於130 ;心臟收縮壓從200或以上降低至低於140 ;心臟收縮 壓從190或以上降低至低於130 ;或者心臟收縮壓從200或以上降低至低於130 ;個體心臟 舒張壓從140或以上降低至低於130 ;心臟舒張壓從130或以上降低至低於120 ;心臟舒張 壓從120或以上降低至低於110 ;心臟舒張壓從110或以上降低至低於100 ;心臟舒張壓從 100或以上降低至低於90 ;心臟舒張壓從140或以上降低至低於120 ;心臟舒張壓從110或 以上降低至低於90 ;心臟舒張壓從140或以上降低至低於110 ;心臟舒張壓從130或以上降 低至低於100 ;心臟舒張壓從120或以上降低至低於90 ;心臟舒張壓從140或以上降低至 低於100 ;心臟舒張壓從130或以上降低至低於90 ;或者心臟舒張壓從140以上降低至低於 90 〇
[0068] 在某些實施方式中，當施用於患有疼痛的個體時，治療有效量的胎盤幹細胞一起 所述個體中一種或多種細胞因子(例如，促炎細胞因子）的量可檢測的降低。在一種具體實 施方式中，根據本文所述的方法向患有疼痛的個體施用胎盤幹細胞使得所述個體中IL-2、 IL-6、IL-12、IL-17和/或幹擾素-γ或其任意組合的量減少。可以使用本領域中已知的 任何方法完成對個體中細胞因子降低的評價，例如，可以使用(例如)ELISA來測量個體血漿 中的細胞因子水平。
[0069] 在某些實施方式中，當施用於患有疼痛的個體時，治療有效量的胎盤幹細胞引起 所述個體中一種或多種細胞因子可檢測的增加。在一種【具體實施方式】中，根據本文所述的 方法向患有疼痛的個體施用胎盤幹細胞使得所述個體中IL-10的量的增加。可以使用本領 域中已知的任何方法完成對個體中細胞因子水平提高的評價，例如，可以使用（例如）ELISA 來測量個體血漿中的細胞因子水平。
[0070] 在某些實施方式中，當施用於患有疼痛的個體時，治療有效量的胎盤幹細胞引起 所述個體中一種或多種趨化因子的量可檢測的降低。在一種【具體實施方式】中，根據本文所 述的方法向患有疼痛的個體施用胎盤幹細胞使得所述個體中CCL2、CCL12和/或CXCL1或 其任意組合的量降低。可以使用本領域中已知的任何方法完成對個體中趨化因子的評價， 例如，可以使用(例如）ELISA來測量個體血漿中的趨化因子水平。
[0071] 在某些實施方式中，當施用於患有疼痛的個體時，治療有效量的胎盤幹細胞引起 所述個體中一種或多種細胞類型中活化和/或分化的可檢測降低。在一種【具體實施方式】 中，根據本文所述的方法向患有疼痛的個體施用胎盤幹細胞使得所述個體中樹突狀細胞、T 細胞和/或巨噬細胞或其任意組合的活化和/或分化的降低。可以使用本領域中已知的任 何方法完成對個體中特異性細胞類型的活化和/或分化的評價，例如，所述個體的特定區 域中存在的特異性細胞標誌物的測量，例如，與血液細胞有關的或與特異性組織/器官中 發現的細胞有關的特異性細胞標誌物的測量/評價。
[0072] 5. 2與疼痛有關或者成為疼痛原因的炎症反應的抑制
[0073] 炎症不是疼痛的單一來源。然而，在某些實施方式中，胎盤幹細胞可用於改善與炎 症有關或由炎症引起的疼痛。在一種實施方式中，本文提供了個體中疼痛改善的方法，包括 使個體中的免疫細胞與有效量的胎盤幹細胞接觸，其中所述有效量是（1)可檢測地抑制所 述個體中免疫應答和（2)可檢測地降低所述個體中疼痛的量。在具體的實施方式中，所述 胎盤幹細胞可檢測地抑制混合淋巴細胞反應（MLR)測定或回歸測定中T細胞的增殖。可以 通過(例如）向所述個體(例如）局部、全身或區域性(或者通過這些的組合）施用胎盤幹細胞 來完成接觸。因此，本文提供了個體中疼痛改善的方法，包括使個體中的免疫細胞與有效量 的胎盤幹細胞接觸，其中所述有效量是（1)可檢測地調節(例如，抑制）所述個體中免疫和/ 或炎症反應和（2)可檢測地降低所述個體中疼痛的量。在一種【具體實施方式】中，用有效量 的胎盤幹細胞接觸個體中免疫細胞使得所述個體中IL-2、IL-6、IL-12、IL-17和/或幹擾 素或其任意組合的量的減少。在另一種【具體實施方式】中，用有效量的胎盤幹細胞接觸 所述個體中的免疫細胞使得所述個體中CCL2、CCL12和/或CXCL1或其任意組合的量的減 少。在另一種【具體實施方式】中，用有效量的胎盤幹細胞接觸個體中的免疫細胞使得所述個 體中IL-10的量增加。
[0074] 在另一種實施方式中，本文提供了個體中疼痛改善的方法，包括將有效量的胎盤 幹細胞施用於所述個體，其中所述有效量是（1)可檢測地調節(例如，抑制)所述個體中免疫 和/或炎症反應和（2)可檢測地降低所述個體中疼痛的量。在一種【具體實施方式】中，所述 胎盤幹細胞可檢測地抑制混合淋巴細胞反應（MLR)測定或回歸測定中T細胞的增殖。所述 施用可以局部、全身或區域性(或通過這些的組合)進行。在一種【具體實施方式】中，向個體施 用有效量的胎盤幹細胞使得所述個體中IL-2、IL-6、IL-12、IL-17和/或幹擾素-γ或其 任意組合的量減少。在另一種【具體實施方式】中，向個體施用有效量的胎盤幹細胞使得所述 個體中CCL2、CCL12和/或CXCL1或其任意組合的量減少。在另一種【具體實施方式】中，向個 體施用有效量的胎盤幹細胞使得所述個體中IL-10的量增加。
[0075] 在該方法的背景中，"免疫細胞"表示(適應性或天然）免疫系統的任何細胞，具體 地為T細胞和NK (自然殺傷）細胞、樹突狀細胞和巨噬細胞。因此，在所述方法的多種實施 方式中，胎盤幹細胞與多個免疫細胞接觸，其中所述多種免疫細胞是或包括多種T細胞(例 如，多種CD3+T細胞、CD4+T細胞和/或CD8+T細胞）和/或自然殺傷細胞。在該方法的背景 中，"免疫應答"可以是免疫細胞對通常由免疫細胞所感知的刺激物的任何應答，例如，對抗 原存在性的應答。在多種實施方式中，免疫應答可以是對非己抗原（如輸注或移植物中存 在的抗原）或對自身抗原(如在自身免疫病中）應答的T細胞(例如，CD3+T細胞、CD4+T細胞 和/或CD8+T細胞）的增殖。免疫應答還可以是移植物內所含的T細胞的增殖。免疫應答 還可以是自然殺傷（NK)細胞的任何活性、樹突狀細胞的成熟、T細胞的分化、巨噬細胞偏向 (skewing) Ml 或 M2 系等。
[0076] 用於降低或改善疼痛(例如，通過降低炎症）的胎盤幹細胞還可以來源於單個物 種，例如，預期受體的物種或將降低或抑制其功能的免疫細胞的物種，或者可以來源於多個 物種。
[0077] 在多種實施方式中，與不存在胎盤幹細胞的免疫功能相比，所述接觸足以將受疼 痛困擾的個體中的免疫功能(例如，對抗原應答的T細胞增殖）或炎症抑制至少50%、60%、 70%、80%、90%或95%。可以使用（例如）來自所述個體的T細胞樣品在體外測定(參見下文） 中確定體內背景中的這種抑制；即，可以對於受體個體中胎盤幹細胞的具體數目和免疫細 胞的數目將體外測定中的抑制程度外推至個體中的抑制程度。
[0078] 可以在(例如）包含以約10:1:2的比值混合的⑶4+或⑶8+T細胞、樹突狀細胞 (DC)和胎盤幹細胞的MLR中測試胎盤幹細胞，其中用染料(例如，區分為子代細胞的CFSE) 對T細胞染色，並且其中允許T細胞增殖約6天。T細胞和/或DC細胞可以獲自待治療個 體，例如，可以對所述個體是自體同源（autologous)的，或者可以對所述個體是同種異體 (allogeneic)的。如果與在存在DC但不存在胎盤幹細胞的情況下的T細胞增殖相比，在存 在胎盤幹細胞的情況下6天時T細胞增殖可檢測地降低，則所述胎盤幹細胞是免疫抑制性 的。在MLR的一種實施方式中，例如，胎盤幹細胞可以融化或從培養物中收穫。將約20, 000 個胎盤幹細胞重懸浮於100 μ 1培養基（RPMI1640、ImM HEPES緩衝液、抗生素和5%混合的人 血清)中，並允許在孔底部附著2小時。從整個周圍血單核細胞Miltenyi磁珠分離⑶4+和 /或⑶8+T細胞。所述細胞是CFSE染色的，並且每孔加入總計100, 000個T細胞(僅⑶4+T 細胞、僅⑶8+T細胞或相等量的⑶4+和⑶8+T細胞)。將孔中體積恢復至200 μ 1，並且允許 進行MLR。
[0079] 在某些實施方式中，在施用至遭受疼痛的個體之前確定了胎盤幹細胞的抗炎活性 (即，免疫抑制活性)。這可以通過(例如）確定用於改善疼痛所施用的胎盤幹細胞樣品的免 疫抑制活性來完成。這種活性可以通過(例如)在(例如)MLR或回歸測定中測試胎盤幹細胞 樣品或胎盤幹細胞來確定。在一種實施方式中，用樣品進行MLR，並且在所述測定中確定了 由樣品胎盤幹細胞所顯示的免疫抑制程度。疼痛改善程度預期與樣品胎盤幹細胞的免疫抑 制活性相關。因此，MLR可以用作確定特定胎盤幹細胞群體或胎盤幹細胞改善由炎症所引 起的疼痛的絕對和相對能力的方法。
[0080] 可以改變MLR的參數以提供更多的數據或更好地確定胎盤幹細胞樣品或胎盤幹 細胞免疫抑制，並因此改善疼痛的能力。例如，由於胎盤幹細胞的免疫抑制似乎大致與測定 中存在的胎盤幹細胞數目成比例地增加，因此，在一種實施方式中，可以使用兩種或更多種 數目的胎盤幹細胞進行MLR，例如，每次反應1 X 103、3 X 103、1 X 104和/或3 X 104個胎盤幹 細胞。在測定中，還可以改變相對於T細胞數目的胎盤幹細胞的數目。例如，所述測定中胎 盤幹細胞和T細胞可以以(例如)約10:1至約1:10,優選地約1:5的任何比例存在，但也可 以使用相對更大數目的胎盤幹細胞或T細胞。
[0081] 可以以類似的方式使用回歸測定或BTR測定。
[0082] 相對於個體中已知或預期的免疫細胞(例如，T細胞）數目，可以以約10:1至約 1:10,優選地約1:5的比值向個體施用胎盤幹細胞。然而，在非限制性實例中，胎盤幹細胞 可以以約 10, 000:1、約 1,000:1、約 100:1、約 10:1、約 1:1、約 1:10、約 1:100、約 1:1，000 或 約1:10,000的比值施用於個體。一般地，可以施用約IX 105至約IX 108個胎盤幹細胞/ 千克受體，優選地約1X 1〇6至約1X 1〇7個胎盤幹細胞/千克受體以使免疫抑制起效。在多 種實施方式中，施用於個體或受試者的胎盤幹細胞包含至少、大約或不超過IX 105、3X105、 IX l〇6、3X 106、1X 107、3X 107、1X 108、3X 108、1X 109、3X 109 個胎盤幹細胞或更多個胎盤 幹細胞。
[0083] 胎盤幹細胞還可以與一種或多種第二類型的幹細胞(例如，來自骨髓的間質幹細 胞）一起施用。可以將這些第二幹細胞與所述胎盤幹細胞以(例如）約1:10至約10:1之間 的比值施用於個體。
[0084] 為了有利於胎盤幹細胞和免疫細胞體內接觸或接近，可以通過足以使胎盤幹細胞 和免疫細胞彼此接觸的任何途徑將胎盤幹細胞施用於個體。例如，可以將胎盤幹細胞(例 如）靜脈內、肌內、腹膜內、眼內、腸胃外、鞘內、皮下或直接至器官(如胰腺）施用於個體。可 以在疼痛位點或在導致疼痛的神經損傷位點，將胎盤幹細胞施用至遭受疼痛的個體的區 域。對於體內施用，可以將胎盤幹細胞配製為藥物組合物，如下文5. 8. 1. 2節中所述。
[0085] 在另一個方面，施用於遭受疼痛的個體的胎盤幹細胞已通過基因工程表達一種或 多種抗炎細胞因子。在具體的實施方式中，所述抗炎細胞因子包括IL-10。
[0086] 5. 3第二治療性組合物和第二療法
[0087] 在任何上述治療個體中疼痛的方法中，所述方法可以包括第二治療性組合物或第 二療法的施用，例如，抗疼痛藥物或療法。在一種優選的實施方式中，第二活性劑能夠緩解 疼痛，抑制或調節炎症反應，提供鎮靜效果或抗神經痛效果，或確保患者舒適。
[0088] 在某些實施方式中，第二治療性組合物包括，但不限於，阿片類止痛劑、非麻醉性 止痛劑、抗炎劑、cox-2抑制劑、α -腎上腺素能受體激動劑或拮抗劑、氯胺酮、麻醉劑、NMDA 拮抗劑、免疫調節劑、免疫抑制劑、抗抑鬱藥、抗驚厥藥、抗高血壓藥、抗焦慮藥、鈣通道阻斷 齊U、肌肉鬆弛劑、皮質類固醇、高壓氧、JNK抑制劑、已知可緩解疼痛的其他治療劑，及其可藥 用鹽、溶劑化物、水合物、立體異構體、籠形物、前體藥物和藥理學活性代謝產物。
[0089] 在某些實施方式中，第二治療性組合物是阿片樣藥物。阿片樣藥物可用於(例如） 治療嚴重疼痛。阿片類止痛劑的實例包括，但不限於,羥考酮（例如，OXYCONTTNt?)、 硫酸嗎啡(例如，MS CONTIN?、DURAMORPH? 和 / 或 ASTRAMORPHCg))、哌替 啶(例如，DEMEROL?)和芬太尼透皮貼(例如，DURAGESIC?)和其他已知的常規藥 物。羥考酮(例如,OXYCONTIN?)是阿片樣藥物的長效形式並且可以在(例如）早期和 晚期CRPS中使用。
[0090] 可以將非麻醉止痛劑和抗炎劑用於(例如）懷孕和哺乳期間的疼痛治療。可以 在(例如）早期疼痛症候群中使用非留體抗炎藥物（NSAID)。抗炎劑的實例包括，但不限 於，乙醯水楊酸(例如，阿司匹林)、布洛芬(例如，MOTRIN?、ADVIL?等)、酮洛芬 (例如，ORUVAIL?)、羅非考昔(例如，VIOXX?)、萘普生鈉(例如，ANAPROX?、 NAPRELAN?、NAPROSYN⑩等)、酮咯酸(例如，ACULAR?)或其他已知的常規 藥物。特異性cox-2抑制劑是塞來考昔(例如，CELEBREX)。
[0091] 抗抑鬱劑的第二治療性化合物的實例包括，但不限於，去甲替林 (PAMELOR?)、阿米替林（ELAVIL?)、丙米嗪（TOFRANIL?)、多塞平 CSiNEQUAN?)、氯米帕明（ANAF.RAN.IL?)、氟西汀（+PROZAC?)、舍曲 林（ZOLOFT?)、奈法唑酮（SERZONE?)、文拉法辛（EFFEXOR?)、曲唑酮 (DESYREL?)、安非他酮（WELLBUTRIN⑩）和其他已知的常規藥物。參見，例如， Physicians，Desk Reference, 329, 1417, 1831 和 3270 頁（第 57 版，2003)。
[0092] 抗驚厥劑的第二治療性化合物的實例包括，但不限於，卡馬西平、奧卡西平、加巴 噴丁 (NEUEONTIN?)、苯妥英、丙戊酸鈉、氯硝西泮、託吡酯、拉莫三嗪、唑尼沙胺和噻 加賓。參見，例如，Physicians'Desk Reference, 2563 (第 57 版，2003)。
[0093] 其他的第二治療性化合物包括，但不限於，皮質類固醇(例如，潑尼松、地塞米松 或氫化可的松)、口服活性lb類抗心律不齊劑(例如，美西律)、鈣通道阻斷劑(例如，硝苯 地平)、β_阻斷劑(例如，普萘洛爾)、α-阻斷劑(例如，酚苄明）和α2-腎上腺素能激動 齊LI(例如，可樂定)，其還可以結合免疫調節化合物使用。參見，例如，Physicians' Desk Reference, 1979, 2006 和 2190 (第 57 版，2003)。
[0094] 在另一種【具體實施方式】中，所述第二療法包括免疫調節化合物，其中所述免疫調 節化合物是3-(4-氨基-1-氧-1，3-二氫異吲哚-2-基）-哌啶-2, 6-二酮；3-(4' -氨基 異吲哚啉-1' -酮）-1-哌啶-2, 6-二酮；4-(氨基）-2- (2, 6-二氧（3-哌啶基））-異吲哚 啉-1,3-二酮；或者α-(3-氨基鄰苯二甲醯亞氨基）戊二醯亞胺。在一種更具體的實施方 式中，所述免疫調節化合物是具有以下結構的化合物
[0095]

【權利要求】
1. 一種治療個體中疼痛的方法，包括向所述個體施用治療有效量的胎盤幹細胞，其中 所述治療有效量是足以引起所述疼痛中的可檢測改善的量。
2. 根據權利要求1所述的方法，其中，所述方法還包括在所述胎盤幹細胞施用之前確 定所述個體中疼痛的一個或多個第一水平，以及在所述胎盤幹細胞施用後確定所述個體中 疼痛的一個或多個第二水平，其中與所述疼痛的一個或多個第一水平相比，所述治療有效 量的胎盤幹細胞降低了所述疼痛的所述一個或多個第二水平。
3. 根據權利要求2所述的方法，其中，所述疼痛的一個或多個第一水平和所述疼痛的 一個或多個第二水平是通過疼痛評估量表來確定的。
4. 根據權利要求4所述的方法，其中，所述疼痛評估量表為數字疼痛強度量表；疼痛 性質評估量表；簡單描述性疼痛強度量表；視覺模擬量表;Wong-Baker臉譜疼痛分級量表； FLACC量表；CRIES量表；COMFORT量表；或通過使患者經歷冷、熱或機械刺激所引起的誘發 疼痛測量。
5. 根據權利要求1所述的方法，其中，所述方法還包括在所述胎盤幹細胞施用之前確 定所述個體中疼痛的一種或多種生理學指標的第一水平，以及在所述胎盤幹細胞施用後確 定所述個體中疼痛的一種或多種生理學指標的第二水平，其中與所述第一水平相比，所述 治療有效量的胎盤幹細胞降低了所述第二水平。
6. 根據權利要求5所述的方法，其中，所述疼痛的生理學指標是所述個體的心率。
7. 根據權利要求6所述的方法，其中，在所述施用後，所述個體的心率比所述施用前所 述個體的心率更低。
8. 根據權利要求5所述的方法，其中，所述疼痛的生理學指標是所述個體的心臟收縮。
9. 根據權利要求8所述的方法，其中，在所述施用後，所述個體的心臟收縮比所述施用 前所述個體的心臟收縮更低。
10. 根據權利要求5所述的方法，其中，所述疼痛的生理學指標是所述個體的心臟舒 張。
11. 根據權利要求10所述的方法，其中，在所述施用後，所述個體的心臟舒張比所述施 用前所述個體的所述心臟舒張更低。
12. 根據權利要求1所述的方法，其中，所述胎盤幹細胞是⑶10+、⑶34'⑶105+胎盤幹 細胞。
13. 根據權利要求12所述的方法，其中，所述胎盤幹細胞另外是CD200+。
14. 根據權利要求12或權利要求13所述的方法，其中，所述胎盤幹細胞另外是CD45-和 CD90+。
15. 根據權利要求12-14中任一項所述的方法，其中，所述胎盤幹細胞另外是⑶8(Γ和 CD86 '
16. 根據權利要求1所述的方法，其中，所述胎盤幹細胞表達CD200而不表達HLA-G ;或 者表達⑶73、⑶105和⑶200 ;或者表達⑶200和0CT-4 ;或者表達⑶73和⑶105而不表達 HLA-G。
17. 根據權利要求1或12-14中任一項所述的方法，其中，所述胎盤幹細胞是 HLA-A，Β，C+。
18. 根據權利要求1或12所述的方法，其中，所述胎盤幹細胞以比相同數目的骨髓來源 間質幹細胞（BM-MSC)可檢測地更高的水平表達EL0VL2、ST3GAL6、ST6GALNAC5或SLC12A8 基因。
19. 根據權利要求18所述的方法，其中，所述胎盤幹細胞以比相同數目的BM-MSC可檢 測地更高的水平表達 ARTS-1、IER3、IL6、KRT18、LRAP、MEST、NFE2L3 或 TGFB2 基因。
20. 根據權利要求1所述的方法，其中，所述疼痛是神經性疼痛。
21. 根據權利要求20所述的方法，其中，所述神經性疼痛是由糖尿病性神經病變引起 的。
22. 根據權利要求20所述的方法，其中，所述神經性疼痛是由所述個體中的神經損傷 引起的。
23. 根據權利要求20所述的方法，其中，所述神經性疼痛是由藥物引起的。
24. 根據權利要求23所述的方法，其中，所述藥物是含鉬抗癌藥物或者包含含鉬抗癌 藥物。
25. 根據權利要求24所述的方法，其中，所述含鉬抗癌藥物是奧沙利鉬、卡鉬或順鉬或 者包含奧沙利鉬、卡鉬或順鉬。
26. 根據權利要求23所述的方法，其中，所述藥物是紫杉醇或者包含紫杉醇。
27. 根據權利要求20所述的方法，其中，所述神經性疼痛是由炎症引起的。
28. 根據權利要求27所述的方法，其中，所述炎症是神經炎。
29. 根據權利要求1所述的方法，其中，所述疼痛是炎症性疼痛。
30. 根據權利要求1所述的方法，其中，所述疼痛是骨痛。
31. 根據權利要求30所述的方法，其中，所述骨痛與癌症有關或者由癌症引起。
32. 根據權利要求1所述的方法，其中，所述疼痛是由癌症引起的。
33. 根據權利要求1-32中任一項所述的方法，其中，所述疼痛對類固醇治療無反應。
34. 根據權利要求1-32中任一項所述的方法，其中，所述疼痛對非類固醇抗炎治療無 反應。
35. 根據權利要求1-32中任一項所述的方法，其中，所述疼痛對阿片樣藥物治療無反 應。
36. 根據權利要求1-32中任一項所述的方法，其中，所述疼痛對鴉片製劑治療無反應。
37. 根據權利要求1-36中任一項所述的方法，其中，將所述胎盤幹細胞配製用於局部 施用。
38. 根據權利要求1-36中任一項所述的方法，其中，將所述胎盤幹細胞配製用於全身、 靜脈內或動脈內施用。
39. 用於在治療個體疼痛中使用的治療有效量的胎盤幹細胞，其中，所述治療有效量是 足以引起所述疼痛中的可檢測改善的量。
40. 根據權利要求39所述的胎盤幹細胞，其中，在所述使用前所述個體中所述疼痛的 水平和在所述使用後所述個體中所述疼痛的水平是通過疼痛評估量表來確定的。
41. 根據權利要求40所述的胎盤幹細胞，其中，所述疼痛評估量表為數字疼痛強度量 表；疼痛性質評估量表；簡單描述性疼痛強度量表；視覺模擬量表;Wong-Baker臉譜疼痛分 級量表；FLACC量表；CRIES量表；或COMFORT量表。
42. 根據權利要求39所述的胎盤幹細胞，其中，在所述使用前所述個體中所述疼痛的 水平和在所述使用後所述個體中所述疼痛的水平是通過疼痛的一個或多個身體指標確定 的。
43. 根據權利要求42所述的胎盤幹細胞，其中，所述疼痛的生理學指標是所述個體的 心率。
44. 根據權利要求43所述的胎盤幹細胞，其中，所述使用後所述個體的所述心率比所 述使用前的更低。
45. 根據權利要求39所述的胎盤幹細胞，其中，所述疼痛的生理學指標是所述個體的 心臟收縮。
46. 根據權利要求45所述的胎盤幹細胞，其中，所述使用後所述個體中的所述心臟收 縮比所述使用前的更低。
47. 根據權利要求39所述的胎盤幹細胞，其中，所述疼痛的生理學指標是所述個體的 心臟舒張。
48. 根據權利要求47所述的胎盤幹細胞，其中，所述使用後所述個體中的所述心臟舒 張比所述使用前的更低。
49. 根據權利要求39-48中任一項所述的胎盤幹細胞，其中，所述胎盤幹細胞是CD10+、 CD34_、CD105+胎盤幹細胞。
50. 根據權利要求49所述的胎盤幹細胞，其中，所述胎盤幹細胞另外是CD200+。
51. 根據權利要求49或權利要求50所述的胎盤幹細胞，其中，所述胎盤幹細胞另外是 CD45-和 CD90+。
52. 根據權利要求49-51中任一項所述的胎盤幹細胞，其中，所述胎盤幹細胞另外是 CD8(T 和 CD86 '
53. 根據權利要求39-52中任一項所述的胎盤幹細胞，其中，所述胎盤幹細胞表達 CD200而不表達HLA-G ;或者表達CD73、CD105和CD200 ;或者表達CD200和0CT-4 ;或者表 達⑶73和⑶105而不表達HLA-G。
54. 根據權利要求39-53中任一項所述的胎盤幹細胞，其中，所述胎盤幹細胞是 HLA-A，B，C+。
55. 根據權利要求39-55中任一項所述的胎盤幹細胞，其中，所述胎盤幹細胞以比 相同數目的骨髓來源間質幹細胞（BM-MSC)可檢測地更高的水平表達ELOVL2、ST3GAL6、 ST6GALNAC5 或 SLC12A8 基因。
56. 根據權利要求39-56中任一項所述的胎盤幹細胞，其中，所述胎盤幹細胞以比相同 數目的BM-MSC可檢測地更高的水平表達ARTS-1、IER3、IL6、KRT18、LRAP、MEST、NFE2L3或 TGFB2基因。
57. 根據權利要求39所述的胎盤幹細胞，其中，所述疼痛是神經性疼痛。
58. 根據權利要求57所述的胎盤幹細胞，其中，所述神經性疼痛是由糖尿病性神經病 變引起的。
59. 根據權利要求57所述的胎盤幹細胞，其中，所述神經性疼痛是由所述個體中的神 經損傷引起的。
60. 根據權利要求57所述的胎盤幹細胞，其中，所述神經性疼痛是由藥物引起的。
61. 根據權利要求60所述的胎盤幹細胞，其中，所述藥物是含鉬抗癌藥物或者包含含 鉬抗癌藥物。
62. 根據權利要求61所述的胎盤幹細胞，其中，所述含鉬抗癌藥物是奧沙利鉬、卡鉬或 順鉬或者包含奧沙利鉬、卡鉬或順鉬。
63. 根據權利要求61所述的胎盤幹細胞，其中，所述藥物是紫杉醇或者包含紫杉醇。
64. 根據權利要求57所述的胎盤幹細胞，其中，所述神經性疼痛是由炎症引起的。
65. 根據權利要求64所述的胎盤幹細胞，其中，所述炎症是神經炎。
66. 根據權利要求39所述的胎盤幹細胞，其中，所述疼痛是炎症性疼痛。
67. 根據權利要求39所述的胎盤幹細胞，其中，所述疼痛是骨痛。
68. 根據權利要求67所述的胎盤幹細胞，其中，所述骨痛與癌症有關或者由癌症引起。
69. 根據權利要求39所述的胎盤幹細胞，其中，所述疼痛是由癌症引起的。
70. 根據權利要求39-69中任一項所述的胎盤幹細胞，其中，所述疼痛對類固醇治療無 反應。
71. 根據權利要求39-69中任一項所述的胎盤幹細胞，其中，所述疼痛對非類固醇抗炎 治療無反應。
72. 根據權利要求39-69中任一項所述的胎盤幹細胞，其中，所述疼痛對阿片樣藥物治 療無反應。
73. 根據權利要求39-69中任一項所述的胎盤幹細胞，其中，所述疼痛對鴉片製劑治療 無反應。
74. 根據權利要求39-73中任一項所述的胎盤幹細胞，其中，將所述胎盤幹細胞配製用 於局部施用。
75. 根據權利要求39-73中任一項所述的胎盤幹細胞，其中，將所述胎盤幹細胞配製用 於全身、靜脈內或動脈內施用。
【文檔編號】A61K35/50GK104220081SQ201280037087
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2012年5月31日 優先權日:2011年6月1日
【發明者】尤裡·赫茨伯格, 喬迪·格尼 申請人:人類起源公司