胡黃連苷ii單體的製備方法及其治療B型肝炎的藥物劑型的製作方法

2023-12-06 09:47:36

專利名稱：胡黃連苷ii單體的製備方法及其治療B型肝炎的藥物劑型的製作方法
技術領域：
本發明屬於中藥新藥研究開發領域，具體而言，涉及一種治療B型肝炎的單體化合物胡黃連苷II的製備方法，並提供胡黃連苷II用於治療B型肝炎的藥物劑型。
背景技術：
胡黃連是玄參科植物胡黃連Picrorhiza scrophulariifloraPennell乾燥根莖，是多年生草本植物，生長於高寒地區的巖石上及土堆中，或者淺土層的向陽處，分布於四川西部，雲南西北部、西藏南部。據文獻記載，胡黃連中含有環烯醚萜苷類、葫蘆素類、酚苷類，另外還含有少量的芳香酸和D-甘露醇，其中胡黃連苷II(Picroside II，Amphicoside)是屬於環烯醚萜苷類化合物。
胡黃連苷II具有多種醫療用途，包括可用於治療、預防過敏性炎性疾病，可用於治療B型肝炎疾病，對神經細胞有保護作用等。
關於胡黃連苷II的製備方法也有報導。1971年S.K.Kapoor等首次從植物Amphicome emodi Lindl中分離得到胡黃連苷II，以後相繼從印度胡黃連(Picrorhiza kukrroa Royle ex Benth)的根莖和西藏胡黃連(Picrorhiza scrophulariifolra Pennell)的根莖中分離得到胡黃連苷II。所用的方法有醋酸鉛沉澱法、矽膠柱層析法和反相矽膠柱層析法等。

發明內容
本發明人經過多年不懈努力，終於研製出治療B型肝炎的純中藥藥物，該藥物的主要成分是從胡黃連中提取的有效單體成分胡黃連苷II。胡黃連苷II藥理作用清楚，具有明顯的抑制B型肝炎病毒複製、保肝、調節免疫功能的效果，且該藥物毒副作用極低，可長期服用，使用安全性較高，克服了西藥毒副作用較強，易產生耐藥性等缺點，充分體現了中藥的優勢。該藥物所治疾病B型肝炎是我國常見病，多發病，其病程長，反覆難愈易傳染，需長期服藥。其研究成果必將為胡黃連及其製劑走向國際市場提供重要的科學理論依據。對胡黃連苷II化合物的研製開發為我國眾多的B型肝炎疾病患者提供了新型高效低毒的治療B肝中藥，其意義重大，市場前景非常廣闊。
本發明的目的在於提供一種能治療B型肝炎的單體化合物胡黃連苷II的製備方法。
本發明的另一個目的在於提供該B型肝炎治療藥物的製劑及其相應的藥物劑型，其中以胡黃連苷II為主要活性成分，含量在90％以上。
本發明的特點在於提供了一種成本低廉、操作簡便、極有利於工業化大生產的胡黃連苷II的製備方法。
胡黃連苷II是一種植物成分，主要存在於玄參科植物胡黃連屬植物中，其化學結構式如下
分子式C23H28O13分子量512熔 點214℃-215℃溶解性水、甲醇、乙醇易溶，丙酮溶解，乙酸乙酯稍溶。
胡黃連苷II具體製備方法取胡黃連藥材的根莖，粉碎後用乙醇浸泡，用50％-70％乙醇提取，提取液低溫減壓濃縮成浸膏A後，加水至合適的體積，除沉澱，濾液上樹脂柱吸附，水除雜後用10％-30％乙醇洗脫，洗脫液低溫減壓濃縮成浸膏B後備用。將上述浸膏B用無水乙醇溶解後，除沉澱，濾液中拌入矽膠，水浴揮幹溶劑，幹法上矽膠柱吸附，用乙酸乙酯洗脫，洗脫液低溫減壓濃縮成浸膏C，乾燥粉碎成細粉即得胡黃連苷II，其含量在90％以上。
其中1.藥材粉碎粒度可以是10-30目；2.上述從原藥材到得到浸膏A的提取過程中採用方法可以是回流、滲漉或其它可行的操作方法；3.上述所用的樹脂柱可以是非極性或弱極性的樹脂，如苯乙烯型或者丙烯腈型樹脂，樹脂型號可為D101型。
4.上述所述的方法中所提到的低溫減壓是指溫度在40℃-60℃範圍，壓力在0.05Mpa-0.15Mpa範圍；5.樹脂柱中樣品洗脫速度為0.8-1.6L/kg·h，其中1.2L/kg·h的洗脫速度較好，得到的胡黃連苷II含量較高，轉移率較高。
6.上述所述的幹法上矽膠柱中，所用的矽膠重量為藥材重量的0.25倍-4倍；7.上述所述的浸膏B粉碎成細粉的粒度在80-100目之間。
本發明得到的胡黃連苷II樣品，含量在90％以上，可以在製備治療肝炎藥物中的應用。經動物實驗結果證明，該藥物具有明顯的抑制B型肝炎病毒複製、保護肝功、調節免疫系統等功效。
為保證化合物的純度，在製備過程中需要對最終提取物中的有效成分含量隨時進行檢測。用於檢測所述該苷類化合物的方法可以藉助任何可行的檢測手段和公知的方法，本發明在此提出了一套可行的鑑別檢測方法。具體如下[名稱] 胡黃連苷II[製法] 同前所述[性狀] 本品為白色粉末，氣微，味極苦。(1)取本品粉末20mg，加甲醇10mL，超聲處理使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。取胡黃連對照藥材1g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇40mL，密塞，超聲提取30分鐘，濾過，濾液置50mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照藥材溶液。取胡黃連苷II對照品，分別加甲醇製成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述三種溶液各10μL，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以水飽和乙酸乙酯(7∶3∶5)為展開劑，展於，取出，晾乾，置紫外燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
(2)分別吸取[含量測定]項下的供試品溶液與胡黃連苷II對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，供試品應呈現與對照品保留時間相同的。
(3)儀器JASCO 1580型 高效液相色譜儀島津 UV-2501PC紫外/可見分光光度儀METTLERAE100電子分析天平SARTARIUS BP211D 電子分析天平(4)試劑甲醇 分析純 北京化工廠36％乙醇 分析純 北京化工廠(5)對照品純度檢查 由發明者提供胡黃連苷II對照品，經高效液相色譜儀(歸一化法)測定純度為99.60％。
(6)方法與結果①色譜分析條件固定相十八烷基矽烷鍵合矽膠柱 250mm×4.6mm 5μm流動相甲醇-水-36％乙酸(40∶60∶1)流速1mL/min柱溫室溫進樣量10μL檢測波長265nm
②系統適用性試驗根據上述儀器條件得到胡黃連苷II對照品、樣品色譜圖，其理論板數n大於1500。樣品中胡黃連苷II峰與相近峰分離清晰完全，分離度均大於1.5，陰性無幹擾。
②測定波長的選擇經紫外掃描，胡黃連苷II在265nm波長處為其最大吸收，雜質幹擾少，故選定265nm為檢測波長，陰性無幹擾。
③線性關係的考察精密稱取胡黃連苷II對照品11.90mg，置10mL量瓶中，加甲醇適量使溶解並定容至刻度，搖勻，精密量取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL，分別置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，分別精密吸取10μL，注入液相色譜儀，近上述色譜條件測定。以峰面積為縱坐標，胡黃連苷II量(ug)為橫坐標作圖，繪製標準曲線。
回歸方程Y＝1301847.27X-71228.10r＝0.9999胡黃連苷II在0.472～2.380ug範圍內線性良好。
本發明研究出了治療B型肝炎的純中藥藥物製劑，該中藥藥物以胡黃連苷II為有效活性成分，並包括了藥劑學上可接受的輔料組分。
本發明的藥物製劑包括口服製劑和注射劑，其中口服劑包括片劑、膠囊劑、口服液、軟膠囊、顆粒劑、滴丸等，注射劑包括注射液和凍乾粉針等。在製備口服製劑時，選用的輔型劑可以是澱粉、糊精或環糊精、蔗糖、硬脂酸鹽等常規充填劑，注射劑製劑選用的輔型劑也為常規用注射劑賦形劑。製劑後期製備工藝及設備均屬製藥領域的常規技術，本發明對此不作限定，故在此不予詳述。
本發明的優選劑型為片劑和注射用凍乾粉針劑。這兩種劑型在治療B型肝炎包括急慢性B型肝炎均有較好的治療效果。
具體實施例方式
用以下的實施例對本發明作進一步闡述，包括治療B型肝炎的胡黃連苷II的製備方法及其相應的藥物製劑的製備方法，但本發明並不限於下列 胡黃連苷II的優選製備方法取胡黃連(Picrorhiza scrophulariifolra Pennell)藥材500g，粉碎成過10目篩的藥粉。用10倍體積的70％乙醇滲漉提取，得滲漉液5000mL，減壓濃縮至60℃時相對密度為1.18～1.20的濃縮液500mL，加2倍藥材重量的去離子水溶解，濾過，濾液通過D-101大孔吸附樹脂柱(柱直徑∶柱高＝1∶10，樹脂用量為藥材重量的4.5倍)，待藥液完全流入樹脂後，用18倍藥材重量的去離子水洗脫未吸附的雜質，再用30倍藥材重量的15％乙醇洗脫苷II收集洗脫液，洗脫速度為1.2L/kg·h，減壓濃縮收集的洗脫液乾燥(60℃，-0.09MPa)，粉碎，再用1.67倍藥材重量的無水乙醇將藥粉溶解，濾過，濾液拌入0.25倍藥材重量的矽膠，水浴(60℃)揮幹溶劑，均勻裝入矽膠柱頂端(柱直徑∶柱高＝1∶10，矽膠用量為藥材重量的2倍)，用30倍藥材重量的醋酸乙酯以3L/kg·h的速度洗脫，收集流出液，減壓乾燥(60℃，-0.09Mpa)，粉碎得胡黃連苷II，含量為96.52％。
胡黃連苷II的優選製備方法取胡黃連(Picrorhiza scrophulariifolra Pennell)藥材3000g，藥材中胡黃連苷II含量為6.46％，將其粉碎成過30目篩的藥粉。用10倍體積的50％乙醇滲漉提取，減壓濃縮至60℃時相對密度為1.18～1.20的濃縮液，加2倍藥材重量的去離子水溶解，濾過，濾液通過D-101大孔吸附樹脂柱(柱直徑∶柱高＝1∶10，樹脂用量為藥材重量的4.5倍)，待藥液完全流入樹脂後，用18倍藥材重量的去離子水洗脫未吸附的雜質，再用30倍藥材重量的20％乙醇洗脫苷II收集洗脫液，洗脫速度為1.6L/kg·h，減壓濃縮收集的洗脫液乾燥(60℃，-0.09MPa)，粉碎，再用1.67倍藥材重量的無水乙醇將藥粉溶解，濾過，濾液拌入0.4倍藥材重量的矽膠，水浴(60℃)揮幹溶劑，均勻裝入矽膠柱頂端(柱直徑∶柱高＝1∶10，矽膠用量為藥材重量的2倍)，用30倍藥材重量的醋酸乙酯以3L/kg·h的速度洗脫，收集流出液，減壓乾燥(60℃，-0.09Mpa)，粉碎得胡黃連苷II樣品，重量為107.91g，其中胡黃連苷II含量為97.34％，胡黃連苷II的收率為54.20％。
胡黃連苷II片劑即胡苷片的優選製備方法處方共製成1000片，各組分及含量如下黃連苷II 30g澱粉 180g微晶纖維素60g乳糖 30g硬脂酸鎂 1.5g製法取胡黃連苷II樣品，其中胡黃連苷II含量超過90％，將其粉碎過80目篩，與澱粉、微晶纖維素、乳糖等混合均勻，用8％澱粉漿制軟材，乾燥，整粒，加入硬脂酸鎂，混勻，壓片，質檢，包裝，即得。
注射用胡黃連苷II粉針劑的優選製備方法處方共製成1000支，胡黃連苷II為60.0g。
製法取胡黃連苷II樣品60.0g，其中胡黃連苷II含量超過90％，加入注射用水約2800mL，65℃水浴使溶解，加入總配製量2.0‰活性炭(6.0g)，攪拌半小時，過濾，於濾器上加水至3000mL，繼以0.45μm、0.22μm微孔濾膜分級過濾，濾液以每瓶3mL定量分裝於10mL西林瓶中，冷凍乾燥，回充高純度氮氣，加塞，軋蓋，包裝，即得。
權利要求
1.一種治療B型肝炎的有效單體胡黃連苷II，其特徵在於可通過下列製備方法得到(1)胡黃連藥材的根莖粉碎後用50％-70％乙醇提取，提取液低溫減壓濃縮成浸膏A後，加水至合適的體積，除沉澱，濾液上樹脂柱吸附，用10％-30％乙醇洗脫，洗脫液低溫減壓濃縮成浸膏B後備用；(2)將上述浸膏B用無水乙醇溶解後，除沉澱，濾液中拌入矽膠，水浴揮幹溶劑，幹法上矽膠柱吸附，用乙酸乙酯洗脫，洗脫液低溫減壓濃縮成浸膏C，乾燥粉碎成細粉即得胡黃連苷II。
2.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於得到的胡黃連苷II單體含量在90％以上。
3.根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於得到浸膏A的提取方法為回流提取法或滲漉提取法。
4.根據權利要求3所述的製備方法，其特徵在於提取方法為滲漉提取法。
5.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所用的樹脂可以是非極性或弱極性樹脂，可以為苯乙烯型或者丙烯腈型樹脂。
6.根據權利要求5所述的製備方法，其特徵在於所用的樹脂為D-101型大孔樹脂。
7.根據權利要求6所述的製備方法，其特徵在於樹脂的洗脫速度為0.8-1.6L/kg·h。
8.根據權利要求7所述的製備方法，其特徵在於樹脂的洗脫速度為1.2L/kg·h。
9.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述的幹法上矽膠柱中，所用的矽膠重量為藥材重量的0.25倍-4倍。
10.一種治療B型肝炎的純中藥藥物製劑，主要成分為採用上述製備方法製得的胡黃連苷II，其特徵在於胡黃連苷II可以和藥用輔料組合成口服製劑和注射劑。
11.根據權利要求10所述的藥物製劑，其特徵在於口服製劑為片劑、膠囊、口服液、顆粒、軟膠囊、滴丸。
12.根據權利要求10所述的藥物製劑，其特徵在於注射劑為注射液劑型和注射用凍乾粉針劑型。
全文摘要
本發明屬於中藥新藥研究開發領域，具體而言，涉及一種治療B型肝炎的單體化合物胡黃連苷Ⅱ的製備方法，並提供胡黃連苷Ⅱ用於治療B型肝炎的藥物劑型。本發明提供的胡黃連苷Ⅱ的製備方法成本低廉、操作簡便、極有利於工業化大生產。
文檔編號A61K9/19GK1778807SQ20041009600
公開日2006年5月31日 申請日期2004年11月26日 優先權日2004年11月26日
發明者周亞偉 申請人:周亞偉