紫菜種質鑑定試劑及使用方法
2023-12-01 03:17:51 1
專利名稱：紫菜種質鑑定試劑及使用方法
技術領域：
本發明涉及海洋生物技術，具體地說是一種紫菜種質鑑定試劑及使用方法。
紫菜是中國重要的經濟海藻，目前，紫菜採苗主要以絲狀體做為種苗進行採苗，但單憑絲狀體的顏色等感觀特徵不能有效地鑑別種間、種內的差異，生產中會引起混亂使用，因此，建立一套快速、有效的紫菜種質檢測技術十分必要。紫菜種質檢測方法有形態學水平即形態外表特徵的鑑定，染色體水平即細胞中染色體鑑定，同工酶水平即生化蛋白質大分子的鑑定，和近年來脫氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)水平的研究鑑定技術。
從分子標記方法角度看，隨機擴增多態脫氧核糖核酸(RAPD)、限制性片斷長度多態性(RFLP)、擴增片斷長度多態性(AFLP)、間隔簡單重複序列(ISSR)等技術不斷出現，這些高技術在藻類方面的應用剛剛開始。國外已對海帶、紫菜、單細胞藻、馬尾藻、江籬屬的一些種，開展了分子遺傳標記的研究，主要目的是闡述海藻的分子、生化水平的進化關係。
海洋生物領域中的分子標記技術，目前僅局限在RAPD、RFLP水平。RAPD方法雖然成本低，相對技術簡單，但實驗室的可交流性差；RFLP方法要求的DNA質量高，但要使用放射性同位素，具有一定危險性。目前，國內一些研究單位在DNA提取、擴增反應條件等方面，一般實驗室主要採用RAPD技術作了探索，但隨引物、模板的差異其結果有較大的不同，可重複性差，難以形成統一的標準，因此，受到許多限制，如果發明具有分子標記作用的鑑定試劑，對經濟海藻種質檢測、雜交鑑定、病害診斷等可以進行應用。
本發明的目的是提供一種能提高紫菜種質鑑定的特異性和標準性的紫菜種質鑑定試劑及使用方法，具有可重複性、有效性，能在原有的RAPD擴增基礎上，再進一步對紫菜的細胞系作更嚴格的鑑定。
為了實現上述目的，本發明的技術方案是紫菜種質鑑定試劑，按濃度計，取三羥甲基氨基甲烷鹽酸(Tris.HCl)7～15mM，乙二胺四乙酸(Ethlenediaminetetra-acetic acid縮寫EDTA)18～22mM，氯化鈉(NaCl2)1.2～1.4M；按體積百分比計，取1.5～2.5％十六烷基三甲基溴化銨(Cetyl trimethylammonium bromide)，1.5～2.5％十二烷基硫酸鈉(Sodium dodecyl sulfate縮寫SDS)；所述三羥甲基胺基甲烷鹽酸pH值為8.0～8.3；其使用方法，按如下步驟操作a.紫菜絲狀體DNA的提取，紫菜絲狀體研磨，離心，用所述試劑溶解液，在35～70分鐘時間範圍內裂解；用氯仿∶異戊醇抽提，上清液加入0.2～0.25倍於上清液體積的10％SDS水溶液和0.3～0.36倍於上清液體積的3.5～4.5M乙酸鉀(KAc)水溶液，置於冰中10～15分鐘，用氯仿∶異戊醇再抽提，上清液加入0.6～0.8倍於上清液體積的異丙醇水溶液，冰中置30～50分鐘，離心10～15分鐘；離心後試管裡的沉澱物用70％乙醇洗1～3次，抽乾，用0.8～1.2mL三羥甲基氨基甲烷乙二胺四乙酸(Tris.EDTA)緩衝液溶解沉澱；加RNA酶10～13mg/ml，35～38℃保溫1～1.5小時，用等體積的氯仿∶異戊醇抽提1～3次，加0.1～0.3倍上清液體積的醋酸鈉水溶液，1.5～2.5倍上清液體積的無水乙醇，-18～-22℃沉澱，離心10～20分鐘；用70～80％乙醇洗，抽乾，用1～2倍於上清液體積的Tris.EDTA緩衝液溶解沉澱，取2～4μl DNA樣品在0.7～0.9％的瓊脂糖(Agarose)膠電泳，溴化乙錠(EtBr)染色，與標準Lamda DNA對照，估算DNA濃度。
b.所述紫菜絲狀體DNA的純化
DNA粗提物，與300～500μl溶膠液、8～12μl玻璃奶(Glassmilk)混勻，冰上放置10～20分鐘，中間輕搖2～3次；離心30～50秒，去上清液，其沉澱用300～500μl漂洗液漂洗，吹乾；用500～1000μl H2O或1～3倍於上清液體積的500～1000μl Tris.EDTA緩衝液在50～70℃範圍內保溫5～10分鐘，離心1～3分鐘，上清液保存備用。
c.RAPD反應10μl反應體積中含有50～60mM Tris.HCl，2～5mM氯化鎂(MgCl2)，0.2～0.5mM二磷酸多苷(DNTP)，0.8～1.0％富可400(Ficoll400)，1～3mM酒石磺(Tartarzine)，4～6μm牛肉血壓清蛋白(BSA)，30～50ng引物，5～10ng模板DNA，0.5～0.7單位Taq聚合酶。
多聚循環反應(PCR)參數條件94℃ 60秒，38℃ 10秒，72℃ 20秒，2～5個循環；94℃ 2秒，38℃ 10秒，72℃ 70秒，38～45個循環；70～75℃保溫4～6分鐘。
PCR反應後，產物直接在1.5％Agarose膠上進行電泳分離，EtBr染色，紫外照相記錄結果。
d.ISSR反應10～15mM Tris.HCl，2～6mM MgCl2，0.2～0.6mM DNTP，0.8～1.0％Ficoll400，1～3mM Tartarzine，4～6μm BSA，30～60ng引物，5～10ng模板DNA，0.6～0.8單位Taq聚合酶。
ISSR反應參數條件96℃ 1分鐘；94℃ 30秒，退火溫度+4℃10秒，72℃ 60秒，2～4個循環；
94℃ 30秒，退火溫度+2℃10秒，72℃ 60秒，2～5個循環；94℃ 2秒，退火溫度℃10秒，72℃ 70秒，35～45個循環；70～75℃保溫4～6分鐘。
擴增產物用6％的非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳分離，其電泳結果處理與PCR反應相同。
所述氯仿∶異戊醇比例為24∶1；步驟a中所述醋酸鈉pH值在5.0～5.4範圍內；所述Tris.HCl pH值在8.0～8.5範圍內；所述DNTP為二磷酸腺苷(DATP)、二磷酸胞苷(DCTP)、二磷酸胸苷(DTTP)和二磷酸鳥苷(DGTP)；優化反應條件所述引物為ISSR25、ISSR28或ISSR30；所述退火溫度根據不同的引物在46～50℃之間；所述EDTA的pH值在8.0～8.5範圍內。
本發明具有如下優點由於本發明簡化了紫菜絲狀體DNA的提取步驟，採用Glassmilk進行純化，用PCR擴增條件優化了反應條件，具有可重複性、穩定性，鑑定效率高特點。本發明屬分子標記的商品試劑，可以應用於紫菜的種質鑑定，有效地區分紫菜或非紫菜材料、紫菜不同細胞系，還可以對紫菜生產單位選擇育種有重要作用。另外，在區別具有同一感官特徵的紫菜細胞系時，也可以進行分子標記鑑定，區別出具有不同遺傳背景的紫菜細胞系，為紫菜混雜的區分提供一種有效的方法。
下面結合實施例對本發明作進一步詳細說明。
實施例1紫菜種質鑑定試劑按濃度計，取10mmolL-1Tris.HCl，pH值為8.0，20mmolL-1EDTA，1.4M NaCl2；按體積百分比計，取2％Cetyl trimethyl ammoniumbromide，1.5％SDS。
所述試劑的使用具體操作如下1.紫菜絲狀體DNA的提取
紫菜絲狀體及矽膠及液氮研磨，研磨的粉末轉移到50mL離心管，通過含有15mL所述試劑溶解液，65℃保溫35min，將細胞充分裂解。用等體積的氯仿∶異戊醇(24∶1)抽提1次，上清液加入0.2倍於上清液體積的10％SDS水溶液和1/3倍於上清液體積的4M KAc水溶液，置於冰中10分鐘，用等體積的氯仿∶異戊醇(24∶1)抽提2次，上清液加入0.6倍於上清液體積的異丙醇水溶液，冰中30分鐘，12000rmp離心10分鐘；離心後試管裡的沉澱物用70％乙醇洗一次，抽乾乙醇，用1mL Tris.EDTA緩衝液(10mM Tris HCl，pH8.0，1mM EDTA，pH8.0)溶解沉澱；加2μl無DNA酶的RNA酶10mg，在37℃情況下保溫1小時，用等體積的氯仿∶異戊醇(24∶1)抽提1次，加0.1倍上清液體積的醋酸鈉水溶液(pH5.2)，2倍上清液體積的無水乙醇，-18℃沉澱2小時以上，12000rmp離心10分鐘；用70％乙醇洗一次，抽乾除去多餘的乙醇，用200μl 1倍於上清液體積的Tris.EDTA溶解沉澱，取2μl DNA樣品在0.8％的Agarose膠電泳，EtBr染色，與標準Lamda DNA對照，估算DNA濃度。
2.用提純DNA試劑Glassmilk純化DNA在1.5ml Eppendorf管中加入100μl DNA粗提物，與300μl溶膠液、10μl Glassmilk混勻，冰上放置10分鐘，中間輕搖3次；1000rpm離心30秒，去上清液，其沉澱用300μl漂洗液漂洗3次，吹乾；用500ul H2O漂洗，於60℃溫度下保溫5分鐘，12000rpm離心1分鐘，上清保存備用。
3.RAPD反應10μl反應體積中含有50mM Tris HCl(pH8.3)，2mM MgCl2，0.2mM DATP、0.2mM DCTP、0.2mM DTTP和0.2mM DGTP，0.8％Ficoll400，1mM Tartarzine，5μm BSA，30ng引物ISSR25，5ng模板DNA，0.5單位TaqDNA聚合酶。
多聚循環反應(PCR)參數條件
94℃ 60秒，38℃ 10秒，72℃ 20秒，2個循環；94℃ 2秒，38℃ 10秒，72℃ 70秒，38個循環；72℃保溫5分鐘。
PCR反應後，產物直接在1.5％Agarose膠上進行電泳分離，EtBr染色，紫外照相記錄結果。
4.ISSR反應10mM Tris HCl(pH8.3)、2mM MgCl2、0.2mM DATP、0.2mM DCTP、0.2mM DTTP和0.2mM DGTP，0.8％Ficoll400，1mM Tartarzine，5μm BSA，30ng引物ISSR25，5ng模板DNA，0.6單位Taq DNA聚合酶。
反應參數條件96℃ 1分鐘；94℃ 30秒，退火溫度46℃+4℃ 10秒，72℃ 60秒，2個循環；94℃ 30秒，退火溫度46℃+2℃ 10秒，72℃ 60秒，2個循環；94℃ 2秒，退火溫度46℃ 10秒，72℃ 70秒，36個循環；72℃保溫4分鐘。
擴增產物用6％聚丙烯醯胺凝膠電泳分離，其電泳結果處理與RAPD相同。
實施例2紫菜種質鑑定試劑按濃度計，取15mmolL-1Tris.HCl，pH值為8.1，18mmolL-1EDTA，1.3M NaCl2；按體積百分比計，取1.5％Cetyl trimethyl ammoniumbromide，1.2％SDS。
所述試劑的使用具體操作如下1.紫菜絲狀體DNA的提取紫菜絲狀體及矽膠及液氮研磨，研磨的粉末轉移到50mL離心管，通過含有15mL所述試劑溶解液，50℃保溫45min，將細胞充分裂解。用等體積的氯仿∶異戊醇(24∶1)抽提1次，上清液加入0.23倍於上清液體積的10％SDS水溶液和0.36倍於上清液體積的3.5M KAc水溶液，置於冰中13分鐘，用等體積的氯仿∶異戊醇(24∶1)抽提2次，加入0.7倍於上清液體積的異丙醇水溶液，冰中40分鐘，12000rmp離心15分鐘；離心後試管裡的沉澱物用70％乙醇洗2次，抽乾乙醇，用0.8mL Tris.EDTA緩衝液(10mM Tris HCl，pH8.5，1mMEDTA，pH8.2)溶解沉澱；加2μl無DNA酶的RNA酶15mg，在38℃情況下保溫1.5小時，用等體積的氯仿∶異戊醇(24∶1)抽提2次，加0.2倍於上清液體積的醋酸鈉水溶液(pH5.0)，1.5倍於上清液體積的無水乙醇，-20℃沉澱2小時以上，12000rmp離心15分鐘；用75％乙醇洗一次，抽乾乙醇，用200μl 1倍於上清液體積的Tris.EDTA溶解沉澱，取3μl DNA樣品在0.7％的Agarose膠電泳，EtBr染色，與標準Lamda DNA對照，估算DNA濃度。
2.用提純DNA試劑Glassmilk純化DNA在1.5ml Eppendorf管中加入100μl DNA粗提物，與400μl溶膠液、18μl Glassmilk混勻，冰上放置15分鐘，中間輕搖2次；1000rpm離心40秒，去上清液，其沉澱用400μl漂洗液漂洗3次，吹乾；用2倍於上清液體積的1000μl Tris.EDTA漂洗，或於50℃溫度下保溫8分鐘，12000rpm離心2分鐘，上清液保存備用。
3.RAPD反應10μl反應體積中含有55mM Tris HCl(pH8.5)，4mM MgCl2，0.5mM DATP、0.5mM DCTP、0.5mM DTTP和0.5mM DGTP，1％Ficoll400，2mM Tartarzine，4μm BSA，40ng引物ISSR28，8ng模板DNA，0.6單位Taq DNA聚合酶。
多聚循環反應(PCR)參數條件94℃ 60秒，38℃ 10秒，72℃ 20秒，4個循環；
94℃ 2秒，38℃ 10秒，72℃ 70秒，40個循環；72℃3保溫5分鐘。
PCR反應後，產物直接在1.5％Agarose膠上進行電泳分離，EtBr染色，紫外照相記錄結果。
4.ISSR反應13mM Tris HCl(pH8.1)、3mM MgCl2、0.4mM DATP、0.4mM DCTP、0.4mM DTTP和0.4mM DGTP，1％Ficoll400，3mM Tartarzine，4μm BSA，60ng引物ISSR28，10ng模板DNA，0.7單位Taq DNA聚合酶。
反應參數條件96℃ 1分鐘；94℃ 30秒，退火溫度50℃+4℃ 10秒，72℃ 60秒，4個循環；94℃ 30秒，退火溫度50℃+2℃ 10秒，72℃ 60秒，4個循環；94℃ 2秒，退火溫度50℃ 10秒，72℃ 70秒，35個循環；70℃保溫6分鐘。
擴增產物用6％聚丙烯醯胺凝膠電泳分離，其電泳結果處理與RAPD相同。
實施例3紫菜種質鑑定試劑按濃度計，取7mmol L-1Tris.HCl，pH值為8.3，22mmolL-1EDTA，1.2M NaCl2；按體積百分比計，取2.5％Cetyl trimethyl ammoniumbromide，2.5％SDS。
所述試劑的使用具體操作如下1.紫菜絲狀體DNA的提取紫菜絲狀體及矽膠及液氮研磨，研磨的粉末轉移到50mL離心管，通過含有15mL所述試劑溶解液，35℃保溫70min，將細胞充分裂解。用等體積的氯仿∶異戊醇(24∶1)抽提1次，上清液加入0.25倍於上清液體積的10％SDS水溶液和0.3倍於上清液體積的4.5M KAc水溶液，置於冰中15分鐘，用等體積的氯仿∶異戊醇(24∶1)抽提2次，上清加入0.8倍於上清液體積的異丙醇水溶液，冰中50分鐘，12000rmp離心13分鐘；離心後試管裡的沉澱物用70％乙醇洗3次，抽乾乙醇，用1.2mL Tris.EDTA緩衝液(10mM Tris HCl，pH8.2，1mM EDTA，pH8.5)溶解沉澱；加2μl無DNA酶的RNA酶12mg，在35℃情況下保溫1.3小時，用等體積的氯仿∶異戊醇(24∶1)抽提3次，加0.3倍於上清液體積的醋酸鈉水溶液(pH5.4)，2.5倍於上清液體積的無水乙醇，-22℃沉澱2小時以上，12000rmp離心20分鐘；用80％乙醇洗一次，抽乾乙醇，用200μl 1倍於上清液體積的Tris.EDTA溶解沉澱，取4μl DNA樣品在0.9％的Agarose膠電泳，EtBr染色，與標準Lamda DNA對照，估算DNA濃度。
2.用提純DNA試劑Glassmilk純化DNA在1.5ml Eppendorf管中加入100μl DNA粗提物，與500μl溶膠液、12μl Glassmilk混勻，冰上放置20分鐘，中間輕搖3次；1000rpm離心50秒，去上清液，其沉澱用500μl漂洗液漂洗3次，吹乾；800ul的H2O漂洗，或於70℃溫度下保溫10分鐘，12000rpm離心3分鐘，上清液保存備用。
3.RAPD反應10μl反應體積中含有60mM Tris HCl(pH8.0)，5mM MgCl2，0.4mM DATP、0.4mM DCTP、0.4mM DTTP和0.4mM DGTP，0.9％Ficoll400，3mM Tartarzine，6μm BSA，50ng引物ISSR30，10ng模板DNA，0.7單位Taq DNA聚合酶。
多聚循環反應(PCR)參數條件94℃ 60秒，38℃ 10秒，72℃ 20秒，5個循環；94℃ 2秒，38℃ 10秒，72℃ 70秒，45個循環；72℃保溫5分鐘。
PCR反應後，產物在1.5％Agarose膠上進行電泳分離，EtBr染色，紫外照相記錄結果。
4.ISSR反應15mM Tris HCl(pH8.4)、5mM MgCl2、0.6mM DATP、0.6mM DCTP、0.6mM DTTP和0.6mM DGTP，0.9％Ficoll400，2mM Tartarzine，6μm BSA，40ng引物ISSR25，5ng模板DNA，0.8單位Taq DNA聚合酶。
反應參數條件96℃ 1分鐘；94℃ 30秒，退火溫度48℃+4℃ 10秒，72℃ 60秒，3個循環；94℃ 30秒，退火溫度48℃+2℃ 10秒，72℃ 60秒，3個循環；94℃ 2秒，退火溫度48℃ 10秒，72℃ 70秒，40個循環；75℃保溫5分鐘。
擴增產物用6％聚丙烯醯胺凝膠電泳分離，其電泳結果處理與RAPD相同。
權利要求
1.一種紫菜種質鑑定試劑，其特徵在於按濃度計，由三羥甲基氨基甲烷鹽酸7～15mM，乙二胺四乙酸18～22mM，氯化鈉1.2～1.4M；按體積百分計算，取1.5～2.5％十六烷基三甲基溴化銨，1～2％十二烷基硫酸鈉。
2.按照權利要求1所述紫菜種質鑑定試劑，其特徵在於所述三羥甲基胺基甲烷鹽酸pH值為8.0～8.3。
3.一種按照權利要求1所述紫菜種質鑑定試劑的使用方法，其特徵在於按如下步驟操作a.紫菜絲狀體脫氧核糖核酸的提取，紫菜絲狀體研磨，離心，用所述試劑溶解液，在35～70分鐘時間範圍內裂解；用氯仿∶異戊醇抽提，上清液加入0.20～0.25倍於上清液體積的10％十二烷基硫酸鈉水溶液和上清液體積的3.5～4.5M乙酸鉀水溶液，置於冰中10～15分鐘，用氯仿∶異戊醇再抽提，上清液加入0.6～0.8倍於上清液體積的異丙醇水溶液，冰中置30～50分鐘，離心10～15分鐘；離心後試管裡的沉澱物用70％乙醇洗1～3次，抽乾，用0.8～1.2mL三羥甲基氨基甲烷乙二胺四乙酸緩衝液溶解沉澱；加核糖核酸酶10～13mg/ml，35～38℃保溫1～1.5小時，用等體積的氯仿∶異戊醇抽提1～3次，加0.1～0.3倍於上清液體積的醋酸鈉水溶液，1.5～2.5倍於上清液體積的無水乙醇，-18～-22℃沉澱，離心10～20分鐘；用70～80％乙醇洗，抽乾，用1～2倍於上清液體積的三羥甲基氨基甲烷乙二胺四乙酸緩衝液溶解沉澱，取2～4μl脫氧核糖核酸樣品在0.7～0.9％的瓊脂糖膠電泳，溴化乙錠染色，與標準Lamda脫氧核糖核酸對照，估算脫氧核糖核酸濃度。b.所述紫菜絲狀體脫氧核糖核酸的純化脫氧核糖核酸粗提物，與300～500μl溶膠液、8～12μl玻璃奶混勻，冰上放置10～20分鐘，中間輕搖2～3次；離心30～50秒，去掉上清液，其沉澱用300～500μl漂洗液漂洗，吹乾；用500～1000μl H2O或1～3倍於上清液體積的500～1000μl三羥甲基氨基甲烷乙二胺四乙酸緩衝液在50～70℃範圍內保溫5～10分鐘，離心1～3分鐘，上清液保存備用。c.隨機擴增多態脫氧核糖核酸反應10μl反應體積中含有50～60mM三羥甲基氨基甲烷鹽酸，2～5mM氯化鎂，0.2～0.5mM二磷酸多苷，0.8～1％富可400，1～3mM酒石磺，4～6μm牛肉血壓清蛋白，30～50ng引物，5～10ng模板脫氧核糖核酸，0.5～0.7單位Taq聚合酶。多聚循環反應參數條件94℃ 60秒，38℃ 10秒，72℃ 20秒，2～5個循環；94℃ 2秒，38℃ 10秒，72℃ 70秒，38～45個循環；70～75℃保溫4～6分鐘。多聚循環反應反應後，產物直接在1.5％瓊脂糖膠上進行電泳分離，澳化乙錠染色，紫外照相記錄結果。d.間隔簡單重複序列反應10～15mM三羥甲基氨基甲烷鹽酸，2～6mM氯化鎂，0.2～0.6mM二磷酸多苷，0.8～1％富可400，1～3mM灑石磺，4～6μm牛肉血壓清蛋白，30～60ng引物，5～10ng模板脫氧核糖核酸，0.6～0.8單位Taq聚合酶。間隔簡單重複序列反應參數條件96℃ 1分鐘；94℃ 30秒，退火溫度+4℃10秒，72℃ 60秒，2～4個循環；94℃ 30秒，退火溫度+2℃10秒，72℃ 60秒，2～5個循環；94℃ 2秒，退火溫度℃10秒，72℃ 70秒，36～45個循環；70～75℃保溫4～6分鐘。擴增產物用6％的非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳分離，其電泳結果處理與多聚循環反應相同。
4.按照權利要求3所述紫菜種質鑑定試劑的使用方法，其特徵在於所述氯仿∶異戊醇比例為24∶1。
5.按照權利要求3所述紫菜種質鑑定試劑的使用方法，其特徵在於步驟a中所述醋酸鈉pH值在5.0～5.4範圍內。
6.按照權利要求3所述紫菜種質鑑定試劑的使用方法，其特徵在於所述三羥甲基氨基甲烷鹽酸pH值在8.0～8.5範圍內。
7.按照權利要求3所述紫菜種質鑑定試劑的使用方法，其特徵在於所述二磷酸多苷為二磷酸腺苷、二磷酸胞苷、二磷酸胸苷和二磷酸鳥苷。
8.按照權利要求3所述紫菜種質鑑定試劑的使用方法，其特徵在於優化反應條件所述引物為ISSR25、ISSR28或ISSR30。
9.按照權利要求3所述紫菜種質鑑定試劑的使用方法，其特徵在於所述退火溫度根據不同的引物在46℃到50℃之間。
10.按照權利要求3所述紫菜種質鑑定試劑的使用方法，其特徵在於所述乙二胺四乙酸pH值在8.0～8.5範圍內。
全文摘要
一種紫菜種質鑑定試劑及使用方法。按濃度計,由三羥甲基氨基甲烷鹽酸7～15mM,乙二胺四乙酸18～22mM,氯化鈉1.2～1.4M;按體積百分計算,取1.5～2.5%十六烷基三甲基溴化銨,1～2%十二烷基硫酸鈉;其使用方法是通過紫菜絲狀體DNA的提取,及玻璃奶技術路線純化DNA,得高純度紫菜DNA;PCR擴增、RAPD檢測,得初級鑑定圖譜;使用通用引物和ISSR鑑定技術,可以得到紫菜不同細胞系間清晰和可重複的多態圖譜。純化後擴增產物的反應重複性高,區分不同細胞系的差異,可有效有鑑定紫菜種質。
文檔編號C12Q1/68GK1366068SQ01106080
公開日2002年8月28日 申請日期2001年1月16日 優先權日2001年1月16日
發明者段德麟, 赫英俊, 李笑紅, 連紹興, 於義德 申請人:中國科學院海洋研究所