低密度脂蛋白中的膽固醇的測定方法、測定用試劑及測定用試劑盒的製作方法

2024-01-21 18:43:15 2

專利名稱：低密度脂蛋白中的膽固醇的測定方法、測定用試劑及測定用試劑盒的製作方法
技術領域：
本發明涉及樣品中所含的低密度脂蛋白(以下稱為LDL)中的膽固醇(以下簡稱為LDL-C)的測定方法及測定用試劑盒。
背景技術：
LDL具有向外周細胞供給膽固醇的作用，是以冠狀動脈硬化為代表的各種動脈硬化的直接因子。LDL-C的增加是動脈硬化疾病的主要危險因子之一，對其進行分類定量在臨床上是有用的。現有的LDL-C的定量方法可以舉出超速離心法、電泳法、利用Friedewald公式的計算方法等。超速離心法是利用脂蛋白的比重差，使用超速離心分離機分離LDL後，測定其膽固醇量的方法(非專利文獻1)。但是，利用超速離心法的分離操作繁雜，而且在快速性、簡便性等方面存在缺點。電泳法有利用脂蛋白的電荷差、以瓊脂糖凝膠等作為支撐體進行分離的方法和利用脂蛋白的粒子尺寸差、以聚丙烯醯胺凝膠作為支撐體進行分離的方法等。但是，電泳法缺乏定量性，在簡便性、經濟性等方面存在問題。在利用Friedewald公式的計算方法中，由總膽固醇(以下簡稱為T_C)、高密度脂蛋白(以下稱為HDL)中的膽固醇(以下簡稱為HDL-C)和總甘油三酯(以下簡稱為T-TG) 的測定值，按照以下的計算式算出LDL-C量(非專利文獻2)。(LDL-C) = (T-C) - (HDL-C) - (T-TG)/5但是，該方法受到血清中的T-TG含量和飲食的影響，因此準確性存在問題。另外，近年來，還報導了不需要超速離心法等分離操作、可搭載於通用的自動分析儀裝置上的LDL-C的定量方法。其中，作為定量LDL-C的方法，已知以下方法。一種被測試樣中的LDL-C的定量方法，其中，包括在作用於LDL以外的脂蛋白的表面活性劑的存在下，使膽固醇酯酶和膽固醇氧化酶發生作用，除去生成的過氧化氫，由此除去被測試樣中的HDL、超低密度脂蛋白(以下稱為VLDL)和乳糜微粒中的膽固醇的第一步驟；和接著定量被測試樣中的殘存膽固醇的第二步驟(專利文獻1)。一種LDL-C的定量方法，其中，在血清中添加選自聚氧乙烯亞烷基苯基醚和聚氧乙烯亞烷基三苄基苯基醚的表面活性劑、以及膽固醇測定用酶試劑，使脂蛋白中的HDL中和VLDL中的膽固醇優先反應後，測定殘留的膽固醇的反應量(專利文獻2)。一種選擇性地測定LDL-C的方法，其中，在生物試樣中添加聚氧乙烯衍生物和聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、以及膽固醇測定用酶，選擇性地測定脂蛋白中的LDL-C (專利文獻3) ο一種LDL-C的測定方法，其特徵在於，在二甲基-α -環糊精和/或聚-β -環糊精的存在下對生物試樣進行測定(專利文獻4)。一種試樣中的LDL-C的定量方法，用於直接地、選擇性地測定含有乳糜微粒、HDL、 LDL、VLDL中的任意1種以上的試樣中的膽固醇，其中，在磷脂、含有類磷脂基的化合物的存在下定量試樣中的LDL-C(專利文獻5)。但是，還在尋求更簡便且準確地測定樣品中的LDL-C的方法和試劑盒。現有技術文獻專利文獻專利文獻1 日本特開平10-38888號公報專利文獻2 日本特開平9-313200號公報專利文獻3 :W000/17388小冊子專利文獻4 日本特開平11-30617號公報專利文獻5 日本特開2002-202314號公報非專利文獻非專利文獻1:7 F A > ^ F . 'J , F .丨J 寸一 f (Adv. Lipid Res.)、第 6 卷、 第1頁、1968年非專利文獻2 々丨J 二力卟S 7卜丨J 一(Clin. Chem.)、第18卷、第499頁、1972
年

發明內容
本發明的目的在於，提供用於簡便且準確地測定樣品中的LDL-C的方法、試劑及
試齊U盒。本發明人對LDL-C的測定方法進行了專心研究，結果發現，通過在特定的表面活性劑和聚陰離子的存在下使樣品與膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶的組合、或膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶的組合反應，能夠在不除去LDL以外的脂蛋白中的膽固醇、並且不進行脂蛋白的物理的級分分離操作的情況下簡便且準確地測定樣品中的LDL-C， 從而完成了本發明。即，本發明涉及以下(1) (31)。(1) 一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇的測定方法，其特徵在於，使樣品與 (i)膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶的組合、或(ii)膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶的組合在 [a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[b]選自由聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物、聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；和[d]聚陰離子的存在下反應，並測定該反應生成的物質或消耗的物質。(2) 一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇的測定方法，其特徵在於，使樣品與 (i)膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶的組合、或(ii)膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶的組合在[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；
[bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；和[d]聚陰離子的存在下反應，並測定該反應生成的物質或消耗的物質。(3) 一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇的測定方法，其特徵在於，使樣品與 (i)膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶的組合、或(ii)膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶的組合在[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[b2]選自由聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；和[d]聚陰離子的存在下反應，並測定該反應生成的物質或消耗的物質。(4)如(1) (3)中任一項所述的測定方法，其中，季銨鹽為三甲基烷基銨鹽或苄
基二甲基烷基銨鹽。(5)如(1) (3)中任一項所述的測定方法，其中，叔胺為二甲基烷基胺。(6)如(1) (5)中任一項所述的測定方法，其中，生成的物質為過氧化氫。(7)如(6)所述的測定方法，其中，過氧化氫的測定使用過氧化氫測定用試劑進行。(8)如(1) (5)中任一項所述的測定方法，其中，生成的物質為還原型輔酶。(9)如(8)所述的測定方法，其中，還原型輔酶的測定使用還原型輔酶測定用試劑進行。(10) 一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑，其特徵在於，含有[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[b]選自由聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物、聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子；及膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶。(11) 一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑，其特徵在於，含有[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子；及膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶。(12) 一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑，其特徵在於，含有[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；
[b2]選自由聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子；及膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶。(13)如(10) (12)中任一項所述的測定用試劑，其中，還含有用於測定膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶與樣品的反應生成的物質的試劑。(14)如(1 所述的測定用試劑，其中，膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶與樣品的反應生成的物質為過氧化氫。(15) 一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑，其特徵在於，含有[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[b]選自由聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物、聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子；及膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶。(16) 一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑，其特徵在於，含有[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子；及膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶。(17) 一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑，其特徵在於，含有[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物； [b2]選自由聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子；及膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶。(18)如(15) (17)中任一項所述的測定用試劑，其中，還含有用於測定膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶與樣品的反應生成的物質的試劑。(19)如(18)所述的測定用試劑，其中，膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶與樣品的反應生成的物質為還原型輔酶。(20)如(10) (19)中任一項所述的測定用試劑，其中，季銨鹽為三甲基烷基銨鹽
或苄基二甲基烷基銨鹽。(21)如(10) (19)中任一項所述的測定用試劑，其中，叔胺為二甲基烷基胺。(22) 一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑盒，其特徵在於，包含第一試劑和含有膽固醇氧化酶的第二試劑，所述第一試劑含有選自由
[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[b]選自由聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物、聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子、和膽固醇酯水解酶構成的組中的至少一種物質，所述[a] [d]和膽固醇酯水解酶分別包含在第一試劑和第二試劑的任一者或兩者中。(23) 一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑盒，其特徵在於，包含第一試劑和含有膽固醇氧化酶的第二試劑，所述第一試劑含有選自由[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子、和膽固醇酯水解酶構成的組中的至少一種物質，所述[a] [d]和膽固醇酯水解酶分別包含在第一試劑和第二試劑的任一者或兩者中。(24) 一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑盒，其特徵在於，包含第一試劑和含有膽固醇氧化酶的第二試劑，所述第一試劑含有選自由[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[b2]選自由聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子、和膽固醇酯水解酶構成的組中的至少一種物質，所述[a] [d]和膽固醇酯水解酶分別包含在第一試劑和第二試劑的任一者或兩者中。(25)如0 04)中任一項所述的測定用試劑盒，其中，第一試劑和第二試劑的任一者或兩者中還含有過氧化氫測定用試劑。(26) 一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑盒，其特徵在於，包含第一試劑和含有膽固醇脫氫酶的第二試劑，所述第一試劑含有選自由[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[b]選自由聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物、聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子、及氧化型輔酶和膽固醇酯水解酶構成的組中的至少一種物質，所述[a] [d]、氧化型輔酶和膽固醇酯水解酶分別包含在第一試劑和第二試劑
10的任一者或兩者中。(27) 一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑盒，其特徵在於，包含第一試劑和含有膽固醇脫氫酶的第二試劑，所述第一試劑含有選自由[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子、及氧化型輔酶和膽固醇酯水解酶構成的組中的至少一種物質，所述[a] [d]、氧化型輔酶和膽固醇酯水解酶分別包含在第一試劑和第二試劑的任一者或兩者中。(28) 一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑盒，其特徵在於，包含第一試劑和含有膽固醇脫氫酶的第二試劑，所述第一試劑含有選自由[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[b2]選自由聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子、及氧化型輔酶和膽固醇酯水解酶構成的組中的至少一種物質，所述[a] [d]、氧化型輔酶和膽固醇酯水解酶分別包含在第一試劑和第二試劑的任一者或兩者中。(29)如06) 08)中任一項所述的測定用試劑盒，其特徵在於，第一試劑和第二試劑的任一者或兩者中還含有還原型輔酶測定用試劑。(30)如02) 09)中任一項所述的測定用試劑盒，其中，季銨鹽為三甲基烷基銨
鹽或苄基二甲基烷基銨鹽。(31)如02) 09)中任一項所述的測定用試劑盒，其中，叔胺為二甲基烷基胺。根據本發明，可以提供用於簡便且準確地測定樣品中的LDL-C的方法、試劑和試劑盒。
具體實施例方式本發明的樣品中的LDL-C的測定方法是不需要利用離心分離等物理方法來進行脂蛋白的級分分離操作的方法。另外，本發明的測定方法是在LDL-C的測定之前不除去樣品中的LDL以外的脂蛋白中的膽固醇的情況下測定樣品中的LDL-C的方法。另外，本發明的測定方法是在LDL-C的測定之前不測定樣品中的LDL以外的脂蛋白中的膽固醇的情況下測定樣品中的LDL-C的方法。本發明的測定方法的一個方式是具有如下特徵的方法使樣品與(i)膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶的組合、或(ii)膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶的組合在[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；
[b]選自由聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物、聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；和[d]聚陰離子的存在下反應，並測定該反應生成的物質或消耗的物質。本發明的測定方法的另一方式是具有如下特徵的方法使樣品與(i)膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶的組合、或(ii)膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶的組合在[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；和[d]聚陰離子的存在下反應，並測定該反應生成的物質或消耗的物質。此外，本發明的測定方法的又一方式是具有如下特徵的方法使樣品與(i)膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶的組合、或(ii)膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶的組合在[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[b2]選自由聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；和[d]聚陰離子的存在下反應，並測定該反應生成的物質或消耗的物質。任何一種方式中均包括以下步驟[1]在表面活性劑和聚陰離子的共存下進行樣品與酶類的反應的步驟；[2]測定上述[1]的步驟中生成的物質或消耗的物質的步驟；[3]使預先利用已知濃度的LDL-C製作的、表示LDL-C濃度和得自該生成的物質或該消耗的物質的信息量的關係的標準曲線與上述[2]中的測定值相關的步驟；和[4]確定樣品中的LDL-C濃度的步驟。在此，與樣品的反應中使用的酶類是(i)膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶的組合、或(ii)膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶的組合。本發明的測定方法中，作為樣品與酶類的反應所生成的物質，例如可以舉出過氧化氫、還原型輔酶等，作為樣品與酶類的反應所消耗的物質，例如可以舉出氧分子等。生成的過氧化氫可以使用例如過氧化氫電極或後述的過氧化氫測定用試劑進行測定。對於生成的還原型輔酶，例如可以舉出測定還原型輔酶的吸光度的方法和使用後述的還原型輔酶測定用試劑的方法等。還原型輔酶的吸光度測定中使用的波長優選為300 500nm，更優選為 330 400nm，特別優選340nm。消耗的氧分子可以使用例如氧電極進行測定。作為本發明的測定方法中使用的樣品，例如可以舉出全血、血漿、血清等，優選血漿和血清。另外，本發明的測定方法中，不僅可以使用來自健康人的樣品，也可以使用中性脂肪(TG)高的高TG樣品。作為本發明中的膽固醇酯水解酶，只要是具有水解膽固醇酯的能力的酶則沒有特別限定，例如，除來自動物、植物或微生物的膽固醇酯酶、脂蛋白脂酶以外，還可以使用通過基因工程的方法製造的膽固醇酯酶、脂蛋白脂酶等。作為膽固醇酯水解酶，除了無修飾的膽固醇酯水解酶以外，還可以使用經過化學修飾的膽固醇酯水解酶。另外，作為膽固醇酯水解酶，也可以使用市售品。作為市售的膽固醇酯水解酶，可以舉出膽固醇酯酶(C0E-311 ；東洋紡織公司制)、脂蛋白脂酶(LPL-311 ；東洋紡織公司制)、膽固醇酯酶III(CHEIII ；天野製藥公司制) 等。另外，本發明中，也可以將兩種以上的膽固醇酯水解酶組合使用。膽固醇酯水解酶的化學修飾中，作為修飾該酶的基團(化學修飾基團)，例如可以舉出以聚乙二醇為主要成分的基團、以聚丙二醇為主要成分的基團、具有聚丙二醇和聚乙二醇的共聚物的基團、含有水溶性多糖類的基團、磺丙基、磺丁基、聚氨酯基、具有螯合功能的基團等，優選以聚乙二醇為主要成分的基團。作為水溶性多糖類，例如可以舉出葡聚糖、 普魯蘭多糖、可溶性澱粉等。作為用於對膽固醇酯水解酶進行化學修飾的試劑(化學修飾劑)，可以舉出同時具有上述化學修飾基團和可與酶的氨基、羧基、巰基等反應的官能團或結構的化合物等。作為可與酶中的氨基反應的官能團或結構，例如可以舉出羧基、活性酯基(N-羥基琥珀醯亞胺基等)、酸酐、醯氯化物、醛、環氧基、1，3_丙烷磺內酯、1，4_ 丁烷磺內酯等。作為可與酶中的羧基反應的官能團或結構，例如可以舉出氨基等。作為與酶中的巰基具有反應性的基團或結構，例如可以舉出馬來醯亞胺基、二硫化物、α -滷代酯(α-碘代酯等)等。作為化學修飾劑，也可以使用市售品。作為市售的化學修飾劑，可以舉出具有以聚乙二醇為主要成分的基團和N-羥基琥珀醯亞胺基的Sunbright VFM-4101、Sunbright ME-050AS、Sunbright DE-030AS(均為日油公司制)、具有以聚亞烷基二醇為主要成分的基團和酸酐結構的 Sunbright AKM 系列(例如 Sunbright ΑΚΜ-1510 等)、Sunbright ADM 系列、Simbright ACM系列(均為日油公司制)、具有以聚乙二醇為主要成分的基團和環氧基的ΕΡ0Χ-3400、Μ-ΕΡ0Χ-5000 (均為Sheawater Polymers公司制)、包含具有螯合功能的基團和酸酐結構的二亞乙基三胺-N，N, N，，N」，N」-五乙酸二酐(DTPA anhydride ；同仁化學研究所公司制)等。膽固醇酯水解酶的化學修飾例如可以通過以下的方法進行，但並不限定於本方法。首先，將膽固醇酯水解酶溶解在PH8.0以上的緩衝液(例如HEPES緩衝液)中，在0 55°C下添加0. 01 500倍摩爾量的化學修飾劑，攪拌5分鐘 5小時。酶反應中，作為經過化學修飾的膽固醇酯水解酶，不僅可以使用該反應液本身，還可以使用根據需要利用超濾膜等將未反應的化學修飾劑等除去後而得到的物質。作為本發明的測定方法中的膽固醇酯水解酶的濃度，只要是能夠實施本發明的 LDL-C測定的濃度，則沒有特別限定，反應液中的濃度通常為0. 001 800U/mL，優選為 0.01 300U/mL。作為本發明中的膽固醇氧化酶，只要是具有氧化膽固醇而生成過氧化氫的能力的酶，則沒有特別限定，例如，除來自動物、植物或微生物的膽固醇氧化酶以外，還可以使用利用基因工程的方法製造的膽固醇氧化酶等，還可以使用膽固醇氧化酶(CH0DI ；協和發酵工
13業公司制)、膽固醇氧化酶(CH0DI ；ΚΙΚΚ0ΜΑΝ公司制)、膽固醇氧化酶(CH0-CE ；ΚΙΚΚ0ΜΑΝ公司制)、膽固醇氧化酶(C00-321 ；東洋紡織公司制)等市售品。另外，本發明中，也可以組合使用兩種以上的膽固醇氧化酶。膽固醇氧化酶可以是無修飾的酶，也可以是經過化學修飾的酶。經過化學修飾的膽固醇氧化酶例如可以使用前述的化學修飾劑，通過前述的化學修飾方法來製造。作為本發明的測定方法中的膽固醇氧化酶的濃度，只要是能夠實施本發明的 LDL-C測定的濃度，則沒有特別限定。反應液中的濃度通常為0.001 800U/mL，優選為 0.01 300U/mL。作為本發明中的膽固醇脫氫酶，只要是具有在氧化型輔酶的存在下氧化膽固醇而生成還原型輔酶的能力的酶，則沒有特別限定，例如，除來自動物、植物或微生物的膽固醇脫氫酶以外，還可以使用利用基因工程的方法製造的膽固醇脫氫酶等。也可以使用膽固醇脫氫酶「4!1^110」5(010!15;天野酶製品株式會社制)等市售品。另外，本發明中，也可以組合使用兩種以上的膽固醇脫氫酶。膽固醇脫氫酶可以是無修飾的酶，也可以是經過化學修飾的酶。經過化學修飾的膽固醇脫氫酶例如可以使用前述的化學修飾劑，通過前述的化學修飾方法來製造。作為本發明的測定方法中的膽固醇脫氫酶的濃度，只要是能夠實施本發明的 LDL-C測定的濃度，則沒有特別限定，反應液中的濃度通常為0. 001 800U/mL，優選為 0.01 300U/mL。本發明的使用膽固醇脫氫酶的測定方法中，使用氧化型輔酶。作為氧化型輔酶，例如可以舉出NAD、NADPjIHf -NAD、硫代-NADP等。作為本發明中使用的聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚(以下簡稱為POE-POA烷基芳基醚)中的烷基，例如可以舉出辛基、壬基、癸基、十二烷基等，作為POE-POA烷基芳基醚中的芳基，可以舉出苯基等。作為POE-POA烷基芳基醚中的POE-POA的聚合方式，沒有特別限定，例如可以舉出嵌段聚合型、無規聚合型的聚合方式。作為嵌段聚合型，例如可以舉出二嵌段共聚物、三嵌段共聚物、四嵌段共聚物等。作為POE-POA烷基芳基醚中的聚氧化烯(POA)，可以舉出聚氧乙烯以外的聚氧丙烯、聚氧丁烯等。作為POE-POA烷基芳基醚的具體例，可以舉出Emulgen L40等(花王公司制)、Acronecess KP189R、Acronecess KP189R-40、Acronecess NP-189R(以上為日油公司制)等。作為聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物(以下簡稱為POE-POA縮合物)中的POE-POA的聚合方式，沒有特別限定，例如可以舉出嵌段聚合型、無規聚合型的聚合方式。作為嵌段聚合型，例如可以舉出二嵌段共聚物、三嵌段共聚物、四嵌段共聚物等。作為POE-POA縮合物中的聚氧化烯(POA)，可以舉出聚氧乙烯以外的聚氧丙烯、聚氧丁烯等。聚氧化烯(POA)的分子量為500 6000，優選為1500 4000。Ρ0Ε-Ρ0Α縮合物的分子量為500 12000，優選為1500 8000。作為POE-POA 縮合物的具體例，可以舉出Pluronic L-121、Pluronic P-103、 Pluronic F_108(以上為旭電化公司制)、Pronon B-204、Acronecess B-208 (以上為日油公司制)等。作為聚氧乙烯烯基醚(以下簡稱為POE烯基醚)的烯基，可以舉出碳原子數8 30的烯基，例如辛烯基、壬烯基、癸烯基、十一碳烯基、十二碳烯基、十三碳烯基、十四碳烯基、十五碳烯基、十六碳烯基、十七碳烯基、十八碳烯基、油烯基、十九碳烯基、二十碳烯基、 二十一碳烯基、二十二碳烯基、二十三碳烯基、二十四碳烯基、二十五碳烯基、二十六碳烯基、二十七碳烯基、二十八碳烯基、二十九碳烯基、三十碳烯基等，優選油烯基。作為POE烯基醚的聚氧乙烯的氧乙烯的聚合度，優選為2 80，更優選為4 60。作為POE烯基醚的具體例，可以舉出BLAUN0N EN-1530、BLAUNON EN-1540、BLAUNON EN-1560 (青木油脂公司制)、Nonion E-215、Nonion E-230，Nonion E-235, NOFABLE EA0-9020 (以上為日油公司制)等。作為聚氧乙烯支鏈烷基醚(以下簡稱為POE支鏈烷基醚)的支鏈烷基，可以舉出碳原子數6 30的支鏈烷基，例如異己基、異庚基、異辛基、異壬基、異癸基、異十一烷基、異十二烷基、異十三烷基、異十四烷基、異十五烷基、異十六烷基、異十七烷基、異十八烷基、異十九烷基、異二十烷基、辛基十二烷基、異二十一烷基、異二十二烷基、異二十三烷基、異二十四烷基、癸基十四烷基、異二十五烷基、異二十六烷基、十二烷基十四烷基、異二十七烷基、異二十八烷基、異二十九烷基、異三十烷基等，優選碳原子數16以上的支鏈烷基。作為碳原子數16以上的支鏈烷基，例如可以舉出異十六烷基、異十七烷基、異十八烷基、異十九烷基、異二十烷基、辛基十二烷基、異二十一烷基、異二十二烷基、異二十三烷基、異二十四烷基、癸基十四烷基、異二十五烷基、異二十六烷基、十二烷基十四烷基、異二十七烷基、異二十八烷基、異二十九烷基、異三十烷基等。作為POE支鏈烷基醚的聚氧乙烯的氧乙烯的聚合度，優選為2 80，更優選為4 60。作為POE支鏈烷基醚的具體例， 可以舉出Nonion IC235、Nonion IC230、Nonion IC235、Nonion 0D225、Nonion 0D230、 Nonion 0D235 (以上為日油公司制)、EMALEX 1615、EMALEX 1625、EMALEX 1815、EMALEX 1820、EMALEX 1825、EMALEX 0D-10、EMALEX OD-16、EMALEX 0D-20、EMALEX OD-25、EMALEX 0D-25JJ、EMALEX 2420, EMALEX 2425 (以上為日本 Emulsion 公司制)等。作為聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚(以下簡稱為POE-POA支鏈烷基醚)的支鏈烷基，可以舉出碳原子數6 30的支鏈烷基，例如異己基、異庚基、異辛基、異壬基、異癸基、異十一烷基、異十二烷基、異十三烷基、異十四烷基、異十五烷基、異十六烷基、異十七烷基、異十八烷基、異十九烷基、異二十烷基、辛基十二烷基、異二十一烷基、異二十二烷基、異二十三烷基、異二十四烷基、癸基十四烷基、異二十五烷基、異二十六烷基、十二烷基十四烷基、異二十七烷基、異二十八烷基、異二十九烷基、異三十烷基等，優選異二十四烷基、癸基十四烷基。作為POE-POA支鏈烷基醚中的POE-POA的聚合方式，沒有特別限定，例如可以舉出嵌段聚合型、無規聚合型的聚合方式。作為嵌段聚合型，例如可以舉出二嵌段共聚物、 三嵌段共聚物、四嵌段共聚物等。作為POE-POA支鏈烷基醚中的聚氧化烯(Ρ0Α)，可以舉出聚氧乙烯以外的聚氧丙烯、聚氧丁烯等。作為POE-POA支鏈烷基醚的具體例，可以舉出 Unilube MT-0620B,Unilube 50MT-2200B,Unilube 20MT-2000B,Unilube MIL-0822B(以上為日油公司制)、PEN-4620、PEN-4630(以上為日光Chemicals公司制)等。作為季銨鹽，可以舉出三甲基烷基銨鹽、苄基二甲基烷基銨鹽等。作為三甲基烷基銨鹽的烷基，可以舉出碳原子數6 30的烷基，例如己基、庚基、 辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基(月桂基)、十三烷基、十四烷基(肉豆蔻基)、十五烷基、十六烷基(鯨蠟基)、十七烷基、十八烷基(硬脂基)、十九烷基、二十烷基、二十一烷基、 二十二烷基(山嵛基)、二十三烷基、二十四烷基、二十五烷基、二十六烷基、二十七烷基、二十八烷基、二十九烷基、三十烷基等，優選碳原子數8 20的烷基。作為碳原子數8 20的烷基，例如可以舉出辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基(月桂基)、十三烷基、十四烷基(肉豆蔻基)、十五烷基、十六烷基(鯨蠟基)、十七烷基、十八烷基(硬脂基)、十九烷基、二十烷基等。作為三甲基烷基銨鹽的鹽，可以舉出氯化物、溴化物、碘化物、氫氧化物等。作為三甲基烷基銨鹽，例如可以舉出正辛基三甲基氯化銨、癸基三甲基溴化銨、月桂基三甲基溴化銨、正十二烷基三甲基氯化銨、正十四烷基三甲基溴化銨、三甲基十四烷基氯化銨、三甲基鯨蠟基氯化銨、三甲基硬脂基氯化銨等，作為其市售品，例如可以舉出=Cation BB, Cation PB-40、Cation PB-300、Cation VB、Cation FB、Cation AT2-500 (以上為日油公司制)等。作為苄基二甲基烷基銨鹽的烷基，可以舉出碳原子數6 30的烷基，例如己基、 庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基(月桂基)、十三烷基、十四烷基(肉豆蔻基)、 十五烷基、十六烷基(鯨蠟基)、十七烷基、十八烷基(硬脂基)、十九烷基、二十烷基、 二十一烷基、二十二烷基(山嵛基)、二十三烷基、二十四烷基、二十五烷基、二十六烷基、 二十七烷基、二十八烷基、二十九烷基、三十烷基等，優選碳原子數8 20的烷基。作為碳原子數8 20的烷基，例如可以舉出辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基(月桂基)、 十三烷基、十四烷基(肉豆蔻基)、十五烷基、十六烷基(鯨蠟基)、十七烷基、十八烷基(硬脂基)、十九烷基、二十烷基等。作為苄基二甲基烷基銨鹽的鹽，可以舉出氯化物、溴化物、 碘化物、氫氧化物等。作為苄基二甲基烷基銨鹽，可以舉出苄基二甲基癸基溴化銨、苄基二甲基癸基氯化銨、苄基二甲基月桂基氯化銨、苄基二甲基十四烷基氯化銨水合物、苄基鯨蠟基二甲基氯化銨水合物、苄基二甲基硬脂基氯化銨水合物等，作為其市售品，可以舉出 Cation M2-100、Cation F2-35R、Cation F2-40E、Cation F2-50 (以上為日油公司制)、 Morimin 10_B、Morimin 12_B、Morimin 14-B(以上為 Morin 化學公司制)等。作為叔胺，可以舉出二甲基烷基胺等。作為二甲基烷基胺的烷基，可以舉出碳原子數6 30的烷基，例如己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基(月桂基)、十三烷基、十四烷基(肉豆蔻基)、十五烷基、十六烷基(鯨蠟基)、十七烷基、十八烷基(硬脂基)、 十九烷基、二十烷基、二十一烷基、二十二烷基(山嵛基)、二十三烷基、二十四烷基、二十五烷基、二十六烷基、二十七烷基、二十八烷基、二十九烷基、三十烷基等，優選碳原子數8 20的烷基。作為碳原子數8 20的烷基，例如可以舉出辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基(月桂基)、十三烷基、十四烷基(肉豆蔻基)、十五烷基、十六烷基(鯨蠟基)、十七烷基、十八烷基(硬脂基)、十九烷基、二十烷基等。作為二甲基烷基胺的具體例，可以舉出二甲基辛胺、二甲基癸胺、二甲基十二烷基胺、二甲基十四烷基胺、二甲基鯨蠟基胺、二甲基硬脂基胺等，作為其市售品，可以舉出叔胺BB、叔胺FB、叔胺ABT(以上為日油公司制)等。作為仲胺，可以舉出甲基烷基胺等。作為甲基烷基胺的烷基，可以舉出碳原子數 6 30的烷基，例如己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基(月桂基)、十三烷基、十四烷基(肉豆蔻基)、十五烷基、十六烷基(鯨蠟基)、十七烷基、十八烷基(硬脂基)、 十九烷基、二十烷基、二十一烷基、二十二烷基(山嵛基)、二十三烷基、二十四烷基、二十五烷基、二十六烷基、二十七烷基、二十八烷基、二十九烷基、三十烷基等，優選碳原子數8 20的烷基。作為碳原子數8 20的烷基，例如可以舉出辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基(月桂基)、十三烷基、十四烷基(肉豆蔻基)、十五烷基、十六烷基(鯨蠟基)、十七烷
16基、十八烷基(硬脂基)、十九烷基、二十烷基等。作為甲基烷基胺的具體例，可以舉出甲基辛胺、甲基癸胺、甲基十二烷基胺、甲基十四烷基胺、甲基鯨蠟基胺、甲基硬脂基胺等。作為伯胺，可以舉出烷基胺等。作為烷基胺的烷基，可以舉出碳原子數6 30的烷基，例如己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基(月桂基)、十三烷基、十四烷基(肉豆蔻基)、十五烷基、十六烷基(鯨蠟基)、十七烷基、十八烷基(硬脂基)、十九烷基、二十烷基、二十一烷基、二十二烷基(山嵛基)、二十三烷基、二十四烷基、二十五烷基、 二十六烷基、二十七烷基、二十八烷基、二十九烷基、三十烷基等，優選碳原子數8 20的烷基。作為碳原子數8 20的烷基，例如可以舉出辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基(月桂基)、十三烷基、十四烷基(肉豆蔻基)、十五烷基、十六烷基(鯨蠟基)、十七烷基、十八烷基(硬脂基)、十九烷基、二十烷基等。作為烷基胺的具體例，可以舉出辛胺、癸胺、十二烷基胺、十四烷基胺、鯨蠟基胺、硬脂基胺等，作為烷基胺的市售品，可以舉出胺BB、胺PB、胺 MB、胺AB (以上為日油公司制)等。本發明的LDL-C的測定方法中，使用[a]POE-POA烷基芳基醚和[b]選自由 POE-POA縮合物、POE烯基醚、POE支鏈烷基醚和POE-POA支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑(以下記為表面活性劑b)的情況下，作為POE-POA烷基芳基醚和表面活性劑 b的濃度，只要是能夠實施本發明的LDL-C的測定方法的濃度，則沒有特別限定，對於各表面活性劑，通常為0. 0001 20%，優選為0. 001 5%。本發明的LDL-C的測定方法中，使用[a] POE-POA烷基芳基醚和[bl] POE-POA縮合物的情況下，作為POE-POA烷基芳基醚和POE-POA縮合物的濃度，只要是能夠實施本發明的 LDL-C的測定方法的濃度，則沒有特別限定，對於各表面活性劑，通常為0. 0001 20%，優選為0. 001 5%。本發明的LDL-C的測定方法中，使用[a]P0E-P0A烷基芳基醚、[bl]P0E_P0A縮合物和[b2]選自由POE烯基醚、POE支鏈烷基醚和POE-POA支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑(以下記為表面活性劑1^2)的情況下，作為POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物和表面活性劑的濃度，只要是能夠實施本發明的LDL-C的測定方法的濃度，則沒有特別限定，對於各表面活性劑，通常為0. 0001 20%，優選為0. 001 5%。作為選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨鹽構成的組中的1種以上表面活性劑(以下記為表面活性劑c)的濃度，只要是能夠實施本發明的LDL-C的測定方法的濃度，則沒有特別限定,通常為0. 00001 20%，優選為0. 0001 5%。作為聚陰離子的具體例，可以舉出葡聚糖硫酸或其鹽、肝素或其鹽、磷鎢酸或其鹽、硫酸化環糊精或其鹽、硫酸化寡糖或其鹽等，優選葡聚糖硫酸或其鹽。作為葡聚糖硫酸， 例如可以舉出分子量為4萬、8萬、20萬、50萬、100萬、200萬等的葡聚糖硫酸。作為硫酸化寡糖，例如可以舉出硫酸化瓊脂糖、硫酸化海藻糖、硫酸軟骨素等。作為鹽，例如可以舉出鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽、鎂鹽等。另外，本發明中，可以使用兩種以上的聚陰離子。作為本發明的LDL-C的測定方法中的聚陰離子的濃度，只要是能夠實施本發明的LDL-C的測定方法的濃度，則沒有特別限定，通常為0. 0005 10%，優選為0. 005 1%。本發明中使用的水性介質，只要是能夠實施本發明的LDL-C的測定方法的水性介質，則沒有特別限定，例如包括去離子水、蒸餾水、緩衝液等，優選緩衝液。本發明的LDL-C的測定方法中的pH，只要是能夠實施本發明的LDL-C的測定方法的PH，則可以為任意的pH，例如可以舉出pH4 10。使用緩衝液作為水性介質時，優選使用符合設定的PH的緩衝劑。作為緩衝液中使用的緩衝劑，例如可以舉出三(羥甲基)氨基甲烷緩衝劑、磷酸緩衝劑、硼酸緩衝劑、Good』 s緩衝劑等。作為Good』 s緩衝劑，例如可以舉出2-(N-嗎啉基)乙磺酸(MES)、雙(2_羥乙基)亞氨基三(羥甲基)甲烷(Bis-Tris)、N42-乙醯胺基)亞氨基二乙酸(ADA)Ji 嗪-N，N，-雙乙磺酸)(PIPEQ、N-(2-乙醯胺基)_2_氨基乙磺酸(ACEQ、3_(N_嗎啉基)-2-羥基丙磺酸(MOPSO)、N，N-雙(2-羥乙基)_2_氨基乙磺酸(BEQ、3_(N_嗎啉基) 丙磺酸(MOPS)、N-[三(羥甲基)甲基]-2-氨基乙磺酸(TES)、244-(2_羥乙基)-1-哌嗪基]乙磺酸(HEPEQ、3-[N，N-雙羥乙基)氨基]_2_羥基丙磺酸(DIPSO)、N-[三(羥甲基)甲基]-2-羥基-3-氨基丙磺酸(TAPSO)、哌嗪-N，N』 -雙(2-羥基丙磺酸)(POPSO)、 3- [4- (2-羥乙基)-1-哌嗪基]-2-羥基丙磺酸(HEPPSO)、3- [4- (2-羥乙基)-1-哌嗪基]丙磺酸[(H)EPPS]、N-[三(羥甲基)甲基]甘氨酸(Tricine)、N，N-雙羥乙基)甘氨酸 (Bicine) ,N-H (羥甲基)甲基_3_氨基丙磺酸(TAPS)、N_環己基-2-氨基乙磺酸(CHES)、 N-環己基-3-氨基-2-羥基丙磺酸(CAPSO)、N-環己基-3-氨基丙磺酸(CAPQ等。緩衝液的濃度只要是適合於測定的濃度，則沒有特別限定，優選為0.001 2. Omol/L，更優選為 0. 005 1. Omol/L0本發明的LDL-C的測定方法中的反應溫度，只要是能夠實施本發明的LDL-C的測定方法的溫度，則沒有特別限定，優選10 50°C，更優選30 40°C。常用的自動分析裝置中設定的反應溫度通常為37°C。本發明的LDL-C的測定方法中的反應時間，只要是能夠實施本發明的LDL-C的測定方法的反應時間，則沒有特別限定，優選1 60分鐘，更優選2 30分鐘。本發明的LDL-C的測定方法中，LDL-C的測定例如通過測定反應生成的過氧化氫或還原型輔酶而進行。另外，也可以通過測定反應中消耗的氧量而進行。生成的過氧化氫的量例如可以使用過氧化氫電極或過氧化氫測定用試劑來進行測定。過氧化氫測定用試劑是用於將生成的過氧化氫轉變為可檢測的物質的試劑。作為可檢測的物質，例如可以舉出色素、發光等，優選色素。可檢測的物質為色素時，過氧化氫測定用試劑含有氧化發色型色原體和過氧化物酶等過氧化活性物質。作為氧化發色型色原體， 例如可以舉出後述的氧化發色型色原體。可檢測的物質為發光時，過氧化氫測定用試劑含有化學發光物質。作為化學發光物質，例如可以舉出魯米諾、異魯米諾、光澤精、吖啶酯等。作為過氧化氫測定用試劑，使用含有氧化發色型色原體和過氧化物酶等過氧化活性物質的試劑時，過氧化氫可以通過在過氧化活性物質的存在下與氧化發色型色原體反應生成色素，測定生成的色素而進行測定。另外，使用含有化學發光物質的過氧化氫測定用試劑時，過氧化氫可以通過與化學發光物質反應而產生光子，測定產生的光子而進行測定。作為氧化發色型色原體，例如可以舉出無色型色原體、氧化偶聯發色型色原體等。無色型色原體是在過氧化氫和過氧化物酶等過氧化活性物質的存在下可單獨轉變為色素的物質。具體而言，可以舉出四甲基聯苯胺、鄰苯二胺、10-N-羧甲基氨基甲醯基-3， 7-雙(二甲基氨基)-10H-吩噻嗪(CCAP)UO-N-甲基氨基甲醯基_3，7-雙(二甲基氨基)-10H-吩噻嗪(MCDP)、N-(羧甲基氨基羰基)-4，4』 -雙(二甲基氨基)二苯胺鈉鹽 (DA-64)、10-N-(羧甲基氨基羰基)-3，7_雙(二甲基氨基)-10H-吩噻嗪鈉鹽(DA-67)、4，4』_雙(二甲基氨基)二苯胺、雙[3-雙(4-氯苯基)甲基-4-二甲基氨基苯基]胺(BCMA)氧化偶聯發色型色原體是在過氧化氫和過氧化物酶等過氧化活性物質的存在下， 由兩種化合物氧化偶聯而生成色素的物質。作為兩種化合物的組合，可以舉出偶聯劑和苯胺類的組合、偶聯劑和酚類的組合等。作為偶聯劑，例如可以舉出4-氨基安替比林G-AA)、3_甲基-2-苯並噻唑啉酮脈寸。作為苯胺類，可以舉出N-(3-磺丙基)苯胺、N-乙基-N_(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺(TOOS)、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3，5-二甲基苯胺(MAOS)、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3，5-二甲氧基苯胺(DAOS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺(TOPS)、N- (2-羥基-3-磺丙基)-3，5- 二甲氧基苯胺(HDAOS)、N，N- 二甲基-3-甲基苯胺、N, N- 二(3-磺丙基)_3，5- 二甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺丙基)_3_甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺丙基)苯胺、N-乙基-N-(3-磺丙基)_3，5- 二甲氧基苯胺、N-(3-磺丙基)-3，5- 二甲氧基苯胺、N-乙基-N- (3-磺丙基)-3，5- 二甲基苯胺、N-乙基-N- (2-羥基-3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)苯胺、N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N』 -琥珀醯乙二胺(EMSE)、N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N』 -乙醯基乙二胺、N-乙基-N- (2-羥基-3-磺丙基)-4-氟-3，5- 二甲氧基苯胺(F-DAOS)、N_ [2-(琥珀醯基氨基) 乙基]-2-甲氧基-5-甲基苯胺(MASE)、N-乙基-N-[2-(琥珀醯基氨基)乙基]-2-甲氧基-5-甲基苯胺(Et-MASE)等。作為酚類，可以舉出苯酚、4-氯苯酚、3-甲基苯酚、3-羥基-2，4，6_三碘苯甲酸 (HTIB)等。在過氧化氫的測定中，過氧化活性物質的濃度只要是適於測定的濃度則沒有特別限定，使用過氧化物酶作為過氧化活性物質時，優選1 100kU/L。另外，氧化發色型色原體的濃度只要是適於過氧化氫的測定的濃度則沒有特別限定，優選0.01 10g/L。作為還原型輔酶的測定方法，例如可以舉出測定生成的還原型輔酶的吸光度的方法、使用還原型輔酶測定用試劑的方法等。作為測定還原型輔酶的吸光度的方法中的吸光度，優選300 500nm，更優選330 400nm，特別優選340nm左右。還原型輔酶測定用試劑是用於將生成的還原型輔酶轉變為可檢測的物質的試劑。作為可檢測的物質，例如可以舉出色素等。作為可檢測的物質為色素時的還原型輔酶測定用試劑，例如可以舉出含有硫辛醯胺脫氫酶、電子載體和還原發色型色原體的試劑。作為電子載體，例如可以舉出ι-甲氧基-5-甲基酚嗪錼硫酸甲酯鹽等。作為還原型輔酶測定用試劑，使用含有硫辛醯胺脫氫酶、電子載體和還原發色型色原體的試劑時，通過對還原發色型色原體轉變而生成的色素進行定量，可以定量還原型輔酶。作為還原發色型色原體，例如可以舉出3-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-二苯基-2H-四氮唑溴化物(MTT)、2_(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4- 二磺苯基)-2H-四氮唑單鈉鹽(WST-I)、2- (4-碘苯基)-3- (2,4- 二硝基苯基)-5- (2,4- 二磺苯基)-2H-四氮唑單鈉鹽(WST-3)等。(LDL-C測定用試劑)本發明的LDL-C測定用試劑可以用於本發明的LDL-C測定方法中，可以採用適於
19保存、流通和使用的試劑盒的形態。作為本發明的LDL-C測定用試劑盒，例如可以舉出兩試劑型的試劑盒、三試劑型的試劑盒等，優選由第一試劑和第二試劑構成的兩試劑型的試劑盒。本發明的LDL-C測定用試劑和測定用試劑盒可以為冷凍乾燥的狀態，也可以為溶解於水性介質中的狀態。使用冷凍乾燥的狀態的試劑或試劑盒測定樣品中的LDL-C時，將該試劑溶解於水性介質中來使用。作為該水性介質，例如可以舉出前述的水性介質等。在本發明的LDL-C測定用試劑和測定用試劑盒中，可以使用前述的膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶、氧化型輔酶、膽固醇脫氫酶、POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、POE 烯基醚、POE支鏈烷基醚、POE-POA支鏈烷基醚、季銨鹽、叔胺、仲胺、伯胺、聚陰離子、過氧化氫測定用試劑、還原型輔酶測定用試劑。在由第一試劑和第二試劑構成的兩試劑型的LDL-C測定用試劑盒中，第一試劑、 第二試劑的任一者或兩者中含有膽固醇酯水解酶。在使用膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶的LDL-C測定中使用的兩試劑型的LDL-C測定用試劑盒中，第一試劑中不含有膽固醇氧化酶，第二試劑中含有膽固醇氧化酶。另外，在使用膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶和氧化型輔酶的LDL-C測定中使用的兩試劑型的LDL-C測定用試劑盒中，第一試劑中不含有膽固醇脫氫酶，第二試劑中含有膽固醇脫氫酶，第一試劑、第二試劑的任一者或兩者中含有氧化型輔酶。第一試劑、第二試劑的任一者或兩者中可以含有POE-POA芳基醚，優選在第二試劑中含有POE-POA芳基醚。第--試齊[J、第二二試劑的任--者或兩者中含有表面活性劑b。
第--試齊[J、第二二試劑的任--者或兩者中含有季銨鹽。
第--試齊[J、第二二試劑的任--者或兩者中含有叔胺。
第--試齊[J、第二二試劑的任--者或兩者中含有仲胺。
第--試齊[J、第二二試劑的任--者或兩者中含有伯胺。
第--試齊[J、第二二試劑的任--者或兩者中含有聚陰離子。
第--試劑、第二試劑的任--者或兩者中可以含有過氧化氫測定用試劑，該試劑含
有氧化偶聯型色原體時，優選氧化偶聯型色原體的兩種化合物、即偶聯劑和苯胺類、或偶聯劑和酚類分別包含於不同的試劑中的方式。第一試劑、第二試劑的任一者或兩者中可以含有還原性輔酶測定用試劑，優選在第一試劑、第二試劑兩者中均含有還原性輔酶測定用試劑。本發明的LDL-C測定用試劑和測定用試劑盒中，根據需要可以含有水性介質、穩定劑、防腐劑、影響物質除去劑、反應促進劑等。作為水性介質，例如可以舉出前述的水性介質等。作為穩定劑，例如可以舉出乙二胺四乙酸(EDTA)、蔗糖、氯化鈣等。作為防腐劑，例如可以舉出疊氮化鈉、抗生素等。作為影響物質除去劑，例如可以舉出用於除去抗壞血酸的影響的抗壞血酸氧化酶等。作為反應促進劑，例如可以舉出輔脂肪酶、磷脂酶等酶、硫酸鈉、 氯化鈉等鹽類等。以下記述本發明的LDL-C測定用試劑的具體方式，但本發明的LDL-C測定用試劑不限定於此。·試劑 1
含有POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、聚陰離子、膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶的試劑。·試劑 2含有POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、聚陰離子、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶和過氧化氫測定用試劑的試劑。·試劑 3含有POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、聚陰離子、膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶的試劑。·試劑 4含有POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、聚陰離子、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶和過氧化氫測定用試劑的試劑。·試劑 5含有POE-POA烷基芳基醚、Ρ0Ε-Ρ0Α縮合物、表面活性劑1^2、表面活性劑C、聚陰離子、膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶的試劑。·試劑 6含有POE-POA烷基芳基醚、Ρ0Ε-Ρ0Α縮合物、表面活性劑1^2、表面活性劑C、聚陰離子、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶和過氧化氫測定用試劑的試劑。·試劑 7含有POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、聚陰離子、膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶的試劑。·試齊[J 8含有POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、聚陰離子、膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶、膽固醇脫氫酶和還原型輔酶測定用試劑的試劑。·試齊[J 9含有POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、聚陰離子、膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶的試劑。·試劑 10含有POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、聚陰離子、膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶、膽固醇脫氫酶和還原型輔酶測定用試劑的試劑。 試劑 11含有POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑1^2、表面活性劑C、聚陰離子、膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶的試劑。·試劑 12含有POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑1^2、表面活性劑C、聚陰離子、膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶、膽固醇脫氫酶和還原型輔酶測定用試劑的試劑。以下記述本發明的LDL-C測定用試劑盒的具體方式，但本發明的LDL-C測定用試劑盒不限定於此。·試劑盒1第一試劑
聚陰離子第二試劑POE-POA燒基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化 酶 試劑盒2第一試劑聚陰離子、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA燒基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、膽固醇氧化酶 試劑盒3第一試劑聚陰離子、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA燒基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化 酶 試劑盒4第一試劑聚陰離子、過氧化氧測定用試劑第二試劑POE-POA燒基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、過氧化氧測定用試劑、膽固醇 酷水解酶、膽固醇氧化酶 試劑盒5第一試劑聚陰離子、過氧化氧測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA燒基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、過氧化氧測定用試劑、膽固醇
氧化酶 試劑盒6第一試劑聚陰離子、過氧化氧測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA燒基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、過氧化氧測定用試劑、膽固醇 酷水解酶、膽固醇氧化酶 試劑盒7第一試劑聚陰離子第二試劑POE-POA燒基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑e、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧 化酶
·試劑盒8第一試劑聚陰離子、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、膽固醇氧化酶
化酶
試劑盒9
第一試劑
聚陰離子、膽固醇酯水解酶第二試齊[J
POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧
試劑盒10
第一試劑
聚陰離子、過氧化氫測定用試劑第二試齊[J
POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶 試劑盒11第一試劑聚陰離子、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固
醇氧化酶 試劑盒12第一試劑聚陰離子、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶·試劑盒13第一試劑聚陰離子第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑1^2、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶·試劑盒14第一試劑聚陰離子、膽固醇酯水解酶第二試劑
23
POE-POA燒基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑1^2、表面活性劑e、膽固醇氧化 酶 試劑盒15第一試劑聚陰離子、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA燒基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑1^2、表面活性劑e、膽固醇酯水 解酶、膽固醇氧化酶 試劑盒16第一試劑聚陰離子、過氧化氧測定用試劑第二試劑POE-POA燒基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑1^2、表面活性劑e、過氧化氧測 定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶 試劑盒17第一試劑聚陰離子、過氧化氧測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA燒基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑1^2、表面活性劑e、過氧化氧測 定用試劑、膽固醇氧化酶 試劑盒18第一試劑聚陰離子、過氧化氧測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA燒基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑1^2、表面活性劑e、過氧化氧測 定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶 試劑盒19第一試劑聚陰離子、POE-POA縮合物第二試劑POE-POA燒基芳基醚、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶 試劑盒20第一試劑聚陰離子、POE-POA縮合物、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA燒基芳基醚、表面活性劑C、膽固醇氧化酶 試劑盒21第一試劑聚陰離子、POE-POA縮合物、膽固醇酯水解酶
第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶·試劑盒22第一試劑聚陰離子、POE-POA縮合物、過氧化氫測定用試劑第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固
醇氧化酶·試劑盒23第一試劑聚陰離子、POE-POA縮合物、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固醇氧化酶·試劑盒M第一試劑聚陰離子、POE-POA縮合物、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固
醇氧化酶·試劑盒25第一試劑聚陰離子、POE-POA縮合物第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶·試劑盒沈第一試劑聚陰離子、POE-POA縮合物、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、膽固醇氧化酶·試劑盒27第一試劑聚陰離子、POE-POA縮合物、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶·試劑盒28第一試劑聚陰離子、POE-POA縮合物、過氧化氫測定用試劑
25
第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶·試劑盒29第一試劑聚陰離子、POE-POA縮合物、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固
醇氧化酶·試劑盒30第一試劑聚陰離子、POE-POA縮合物、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶
試劑盒31
第一試劑 聚陰離子、POE-POA縮合物
酶
酶
第二試齊[J
POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑1^2、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化
試劑盒32
第一試劑
聚陰離子、POE-POA縮合物、膽固醇酯水解酶第二試齊[J
POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑1^2、表面活性劑C、膽固醇氧化酶 試劑盒33 第一試劑
聚陰離子、POE-POA縮合物、膽固醇酯水解酶第二試齊[J
POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑1^2、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化
試劑盒34 第一試劑
聚陰離子、POE-POA縮合物、過氧化氫測定用試劑第二試齊[J
POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑1^2、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶
·試劑盒35
第一試劑聚陰離子、POE-POA縮合物、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑1^2、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固醇
氧化酶·試劑盒36第一試劑聚陰離子、POE-POA縮合物、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑1^2、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶·試劑盒37第一試劑聚陰離子、表面活性劑b第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶·試劑盒38第一試劑聚陰離子、表面活性劑b、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、膽固醇氧化酶·試劑盒39第一試劑聚陰離子、表面活性劑b、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶·試劑盒40第一試劑聚陰離子、表面活性劑b、過氧化氫測定用試劑第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶
27
試劑盒41 第一試劑
聚陰離子、表面活性劑b、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試齊[J
POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固醇氧化酶 試劑盒42 第一試劑
聚陰離子、表面活性劑b、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固
醇氧化酶·試劑盒43第一試劑聚陰離子、表面活性劑1^2第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶·試劑盒44第一試劑聚陰離子、表面活性劑1^2、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、膽固醇氧化酶·試劑盒45第一試劑聚陰離子、表面活性劑1^2、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶·試劑盒46第一試劑聚陰離子、表面活性劑1^2、過氧化氫測定用試劑第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶·試劑盒47第一試劑聚陰離子、表面活性劑1^2、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固
醇氧化酶·試劑盒48第一試劑聚陰離子、表面活性劑1^2、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶
28
·試劑盒49第一試劑聚陰離子、表面活性劑b第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶·試劑盒50第一試劑聚陰離子、表面活性劑b、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、膽固醇氧化酶 試劑盒51第一試劑聚陰離子、表面活性劑b、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶 試劑盒52第一試劑聚陰離子、表面活性劑b、過氧化氫測定用試劑第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶
氧化酶
試劑盒53
第一試劑
聚陰離子、表面活性劑b、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試齊[J
POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固醇
試劑盒M 第一試劑
聚陰離子、表面活性劑b、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試齊[J
POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、過氧化氫測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇氧化酶·試劑盒55第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶第二試劑
POE-POA燒基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氧 酶 試劑盒56第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA燒基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、膽固醇脫氧酶 試劑盒57第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA燒基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氧 酶 試劑盒58第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、還原型輔酶測定用試劑第二試劑POE-POA燒基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固 醇酯水解酶、膽固醇脫氧酶 試劑盒59第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA燒基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固 醇脫氧酶 試劑盒60第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA燒基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固 醇酯水解酶、膽固醇脫氧酶 試劑盒61第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶第二試劑POE-POA燒基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑e、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫
氧酶 試劑盒62第一試劑
聚陰離子、氧化型輔酶、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、膽固醇脫氫酶·試劑盒63第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫
氫酶·試劑盒64第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、還原型輔酶測定用試劑第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶·試劑盒65第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇脫氫酶·試劑盒66第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶·試劑盒67第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑1^2、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶·試劑盒68第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑1^2、表面活性劑C、膽固醇脫氫酶
·試劑盒69第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑1^2、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶·試劑盒70第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、還原型輔酶測定用試劑第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑1^2、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶 試劑盒71第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑1^2、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇脫氫酶 試劑盒72第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑1^2、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶·試劑盒73第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、POE-POA縮合物第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶·試劑盒74第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、POE-POA縮合物、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、膽固醇脫氫酶·試劑盒75第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、POE-POA縮合物、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶
·試劑盒76第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、POE-POA縮合物、還原型輔酶測定用試劑第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶·試劑盒77第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、POE-POA縮合物、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇脫氫酶·試劑盒78第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、POE-POA縮合物、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶·試劑盒79第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、POE-POA縮合物第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫
氫酶·試劑盒80第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、POE-POA縮合物、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、膽固醇脫氫酶 試劑盒81第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、POE-POA縮合物、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫
氫酶·試劑盒82第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、POE-POA縮合物、還原型輔酶測定用試劑第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽
33固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶·試劑盒83第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、POE-POA縮合物、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇脫氫酶·試劑盒84第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、POE-POA縮合物、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶
酶
酶
試劑盒85
第一試劑
聚陰離子、氧化型輔酶、POE-POA縮合物第二試齊[J
POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑1^2、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫
試劑盒86
第一試劑
聚陰離子、氧化型輔酶、POE-POA縮合物、膽固醇酯水解酶第二試齊[J
POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑1^2、表面活性劑C、膽固醇脫氫酶 試劑盒87 第一試劑
聚陰離子、氧化型輔酶、POE-POA縮合物、膽固醇酯水解酶第二試齊[J
POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑1^2、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫
試劑盒88 第一試劑
聚陰離子、氧化型輔酶、POE-POA縮合物、還原型輔酶測定用試劑第二試齊[J
POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑1^2、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶·試劑盒89第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、POE-POA縮合物、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶
34
第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑b2、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇脫氫酶·試劑盒90第一試劑 聚陰離子、氧化型輔酶、POE-POA縮合物、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑b2、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶 試劑盒91第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、表面活性劑b第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶 試劑盒92第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、表面活性劑b、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、膽固醇脫氫酶·試劑盒93第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、表面活性劑b、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶·試劑盒94第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、表面活性劑b、還原型輔酶測定用試劑第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶·試劑盒95第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、表面活性劑b、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇脫氫酶·試劑盒96第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、表面活性劑b、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑
POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶·試劑盒97第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、表面活性劑b2第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫
氫酶·試劑盒98第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、表面活性劑b2、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、膽固醇脫氫酶·試劑盒99第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、表面活性劑b2、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫
氫酶·試劑盒 100第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、表面活性劑b2、還原型輔酶測定用試劑第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶·試劑盒 101第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、表面活性劑b2、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇脫氫酶·試劑盒 102第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、表面活性劑b2、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、POE-POA縮合物、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶·試劑盒 103第一試劑
聚陰離子、氧化型輔酶、表面活性劑b第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶·試劑盒 104第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、表面活性劑b、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、膽固醇脫氫酶·試劑盒 105第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、表面活性劑b、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶·試劑盒 106第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、表面活性劑b、還原型輔酶測定用試劑第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶·試劑盒 107第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、表面活性劑b、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇脫氫酶·試劑盒 108第一試劑聚陰離子、氧化型輔酶、表面活性劑b、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶第二試劑POE-POA烷基芳基醚、表面活性劑b、表面活性劑C、還原型輔酶測定用試劑、膽固醇酯水解酶、膽固醇脫氫酶以下通過實施例對本發明進行更詳細的說明，但這些實施例並不限定本發明的範圍。需要說明的是，在本實施例和比較例中，使用下述製造商的試劑、酶和表面活性劑。試劑MOPS (同仁化學研究所公司制)DOSE (Daito Chemix 公司制)硫酸鈉(關東化學公司制)
葡聚糖硫酸鈉(分子量50萬)(Amersham公司制)磷鎢酸(NacalaiTesque 公司制)4-氨基安替比林(琦京化成公司制)酶

過氧化物酶(東洋紡織公司制)CHO-CE (膽固醇氧化酶；ΚΙΚΚ0ΜΑΝ公司制)LPL-311 (膽固醇酯水解酶；東洋紡織公司制)表面活性劑Nymeen S-220 (聚氧乙烯十八烷基胺；日油公司制)Nymeen L-207 (聚氧乙烯十二烷基胺；日油公司制)乙二胺E040P040(乙二胺聚氧乙烯聚氧丙烯縮合物；日油公司制)POE-POA烷基芳基醚EmuIgen L40 (花王公司制)Acronecess KP189R(日油公司制)Acronecess KP189R_40(日油公司制)POE-POA 縮合物Pluronic L121(旭電化公司制)Acronecess B208 (日油公司制)POE烯基醚BLAUN0NEN-1540 (青木油脂公司制)BLAUN0NEN-1530 (青木油脂公司制)Nonion E-230 (日油公司制)POE支鏈烷基醚Nonion 0D235 (日油公司制)POE-POA支鏈烷基醚PEN-4620 (日光 Chemicals 公司制)PEN-4630 (日光 Chemicals 公司制)季銨鹽正辛基三甲基氯化銨(東京化成工業公司制)癸基三甲基溴化銨(東京化成工業公司制)月桂基三甲基氯化銨(Nacalai Tesque公司制)三甲基十四烷基氯化銨(東京化成工業公司制)十六烷基三甲基氯化銨(Nacalai Tesque公司制)三甲基硬脂基氯化銨(東京化成工業公司制)苄基二甲基十四烷基氯化銨水合物(東京化成工業公司制)苄基鯨蠟基二甲基氯化銨水合物(東京化成工業公司制)苄基二甲基硬脂基氯化銨水合物(東京化成工業公司制)Cation BB(日油公司制)Cation M2_100(日油公司制)
Morimin IOB (Morin 化學公司制)Morimin 12B (Morin 化學公司制)叔胺叔胺BB (日油公司制)N, N- 二甲基正癸基胺(東京化成工業公司制)伯胺胺BB (日油公司制)胺PB (日油公司制)胺MB (日油公司制)實施例[實施例1]製備包含以下的第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑a)的LDL-C測定用試劑盒 (試劑盒Aal Aal6)。第一試劑(試劑A)
MOPS(pH7.2) 20mmol/L 葡聚糖硫酸鈉 0.5g/L 硫酸鈉2%TL
DOSE0.3g/L
過氧化物酶10kU/L 第二試劑(試劑al al6)
MOPS(pH7.0)20mmol/L
4-氨基安替比林0.5g/L
過氧化物酶20kU/L
Emulgen L407g/L
Pluronic L1213g/L
LPL-3111.5kU/L
CHO-CEl.OkU/L表面活性劑c [其種類(化合物名或製品名)和濃度如表1所示][比較例1]製備包含以下的第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑aO)的LDL-C測定用試劑盒(試劑盒AaO)。第一試劑(試劑A)MOPS(pH7.2)20mmol/L
葡聚糖硫酸鈉0.5g/L
硫酸鈉2giL
DOSE0.3g/L
過氧化物酶 10kU/L第二試劑(試劑aO)
MOPS(pH7.0) 20mmol/L 4-氨基安替比林 0.5g/L 過氧化物酶 20kU/L Emulgen L40 7g/L Pluronic L121 3g/L LPL-3111.5kU/L
CHO-CEl.OkU/L[實施例2] 使用實施例1和比較例1的各試劑盒，按照以下的順序測定30個人血清樣品中的 LDL-C。(1)標準曲線的製作以生理鹽水(LDL-C濃度0. Omg/dL)和血清(LDL-C濃度140mg/dL)作為標準溶液，使用實施例1和比較例1的各試劑盒，分別利用日立7170S型自動分析裝置，製作表示 LDL-C濃度與「吸光度」之間的關係的標準曲線。這裡的「吸光度」表示基於以下的反應中測定的兩個吸光度(El和E2)，由E2減去 El所得的值。向反應皿中添加標準溶液(3 μ L)和第一試劑(0. 15mL)，在37°C下加熱5分鐘，在主波長600nm、副波長700nm處測定反應液的吸光度(El)，接著，在該反應液中添加第二試劑(0. 05mL)，再在37°C下加熱5分鐘，在主波長600nm、副波長700nm處測定反應液的吸光度(E2)。(2)利用人血清樣品與實施例1和比較例1的各試劑盒的反應測定該樣品的「吸光度」使用人血清樣品代替(1)的標準曲線的製作中使用的標準溶液，除此以外，利用與(1)的「吸光度」的計算方法同樣的方法，測定該樣品的「吸光度」。(3)人血清樣品中的LDL-C濃度的確定由O)中測得的「吸光度」和(1)中製作的標準曲線確定各樣品中的LDL-C濃度。接著，作為試劑盒，使用市售的LDL-C測定用試劑盒即Determiner L LDL-C(協和梅迪克斯公司制)，作為樣品，使用30個人血清樣品，按照與上述同樣的順序，測定各樣品中的LDL-C。使用實施例1和比較例1的各試劑盒進行的測定與使用Determiner L LDL-C試
40劑盒進行的測定之間的相關係數示於表1。[實施例3]研究本發明的LDL-C測定用試劑盒是否能夠適用於高TG血清。從正常血清和高 TG血清(TG 1000mg/dL以上)中，利用超速離心法分取在1. 006 1. 063的比重範圍內存在的LDL。調節分取的LDL使膽固醇量為100mg/dL，使用實施例1和比較例1的各試劑盒， 按照與實施例2同樣的方法進行測定。進而，使用下式(I)
權利要求
1.一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇的測定方法，其特徵在於，使樣品與(i)膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶的組合、或(ii)膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶的組合在[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[b]選自由聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物、聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；和[d]聚陰離子的存在下反應，並測定該反應生成的物質或消耗的物質。
2.一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇的測定方法，其特徵在於，使樣品與(i)膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶的組合、或(ii)膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶的組合在[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚； [bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；和[d]聚陰離子的存在下反應，並測定該反應生成的物質或消耗的物質。
3.一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇的測定方法，其特徵在於，使樣品與(i)膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶的組合、或(ii)膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶的組合在[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚； [bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[b2]選自由聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；和[d]聚陰離子的存在下反應，並測定該反應生成的物質或消耗的物質。
4.如權利要求1 3中任一項所述的測定方法，其中，季銨鹽為三甲基烷基銨鹽或苄基二甲基烷基銨鹽。
5.如權利要求1 3中任一項所述的測定方法，其中，叔胺為二甲基烷基胺。
6.如權利要求1 5中任一項所述的測定方法，其中，生成的物質為過氧化氫。
7.如權利要求6所述的測定方法，其中，過氧化氫的測定使用過氧化氫測定用試劑進行。
8.如權利要求1 5中任一項所述的測定方法，其中，生成的物質為還原型輔酶。
9.如權利要求8所述的測定方法，其中，還原型輔酶的測定使用還原型輔酶測定用試劑進行。
10.一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑，其特徵在於，含有[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[b]選自由聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物、聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子；及膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶。
11.一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑，其特徵在於，含有 [a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子；及膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶。
12.—種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑，其特徵在於，含有 [a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[b2]選自由聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子；及膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶。
13.如權利要求10 12中任一項所述的測定用試劑，其中，還含有用於測定膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶與樣品的反應生成的物質的試劑。
14.如權利要求13所述的測定用試劑，其中，膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶與樣品的反應生成的物質為過氧化氫。
15.一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑，其特徵在於，含有[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[b]選自由聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物、聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子；及膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶。
16.一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑，其特徵在於，含有 [a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子；及膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶。
17.一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑，其特徵在於，含有 [a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[b2]選自由聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子；及膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶。
18.如權利要求15 17中任一項所述的測定用試劑，其中，還含有用於測定膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶與樣品的反應生成的物質的試劑。
19.如權利要求18所述的測定用試劑，其中，膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶與樣品的反應生成的物質為還原型輔酶。
20.如權利要求10 19中任一項所述的測定用試劑，其中，季銨鹽為三甲基烷基銨鹽或苄基二甲基烷基銨鹽。
21.如權利要求10 19中任一項所述的測定用試劑，其中，叔胺為二甲基烷基胺。
22.—種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑盒，其特徵在於，包含第一試劑和含有膽固醇氧化酶的第二試劑，所述第一試劑含有選自由[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[b]選自由聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物、聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子、和膽固醇酯水解酶構成的組中的至少一種物質，所述[a] [d]和膽固醇酯水解酶分別包含在第一試劑和第二試劑的任一者或兩者中。
23.一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑盒，其特徵在於，包含第一試劑和含有膽固醇氧化酶的第二試劑，所述第一試劑含有選自由[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚； [bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子、和膽固醇酯水解酶構成的組中的至少一種物質，所述[a] [d]和膽固醇酯水解酶分別包含在第一試劑和第二試劑的任一者或兩者中。
24.一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑盒，其特徵在於，包含第一試劑和含有膽固醇氧化酶的第二試劑，所述第一試劑含有選自由[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚； [bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[b2]選自由聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子、和膽固醇酯水解酶構成的組中的至少一種物質，所述[a] [d]和膽固醇酯水解酶分別包含在第一試劑和第二試劑的任一者或兩者中。
25.如權利要求22 M中任一項所述的測定用試劑盒，其中，第一試劑和第二試劑的任一者或兩者中還含有過氧化氫測定用試劑。
26.一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑盒，其特徵在於，包含第一試劑和含有膽固醇脫氫酶的第二試劑，所述第一試劑含有選自由[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[b]選自由聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物、聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子、及氧化型輔酶和膽固醇酯水解酶構成的組中的至少一種物質，所述[a] [d]、氧化型輔酶和膽固醇酯水解酶分別包含在第一試劑和第二試劑的任一者或兩者中。
27.一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑盒，其特徵在於，包含第一試劑和含有膽固醇脫氫酶的第二試劑，所述第一試劑含有選自由[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚； [bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子、及氧化型輔酶和膽固醇酯水解酶構成的組中的至少一種物質，所述[a] [d]、氧化型輔酶和膽固醇酯水解酶分別包含在第一試劑和第二試劑的任一者或兩者中。
28.一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇測定用試劑盒，其特徵在於，包含第一試劑和含有膽固醇脫氫酶的第二試劑，所述第一試劑含有選自由[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚； [bl]聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物；[b2]選自由聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；[d]聚陰離子、及氧化型輔酶和膽固醇酯水解酶構成的組中的至少一種物質，所述[a] [d]、氧化型輔酶和膽固醇酯水解酶分別包含在第一試劑和第二試劑的任一者或兩者中。
29.如權利要求沈 觀中任一項所述的測定用試劑盒，其特徵在於，第一試劑和第二試劑的任一者或兩者中還含有還原型輔酶測定用試劑。
30.如權利要求22 四中任一項所述的測定用試劑盒，其中，季銨鹽為三甲基烷基銨鹽或苄基二甲基烷基銨鹽。
31.如權利要求22 四中任一項所述的測定用試劑盒，其中，叔胺為二甲基烷基胺。
全文摘要
一種樣品中的低密度脂蛋白中的膽固醇的測定方法，其特徵在於，使樣品與(i)膽固醇酯水解酶和膽固醇氧化酶的組合、或(ii)膽固醇酯水解酶、氧化型輔酶和膽固醇脫氫酶的組合在[a]聚氧乙烯-聚氧化烯烷基芳基醚；[b]選自由聚氧乙烯-聚氧化烯縮合物、聚氧乙烯烯基醚、聚氧乙烯支鏈烷基醚和聚氧乙烯-聚氧化烯支鏈烷基醚構成的組中的1種以上表面活性劑；[c]選自由伯胺、仲胺、叔胺和季銨構成的組中的1種以上表面活性劑；和[d]聚陰離子的存在下反應，並測定該反應生成的物質或消耗的物質。
文檔編號C12Q1/26GK102209789SQ20098014502
公開日2011年10月5日 申請日期2009年11月13日 優先權日2008年11月14日
發明者三島慎剛, 村上智美, 桑田英之, 荒武知子 申請人:協和梅迪克斯株式會社