雞病毒疫苗及診斷的製作方法

2024-03-02 16:42:15

專利名稱：：雞病毒疫苗及診斷的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種疫苗、測定試劑盒和新的星狀病毒，尤其是雞星狀病毒3型(CAst-3)的測定方法。肉用仔雞(broilerchickens)感染該雞星狀病毒3型與腸炎、生長抑制和雞胚胎發育的可能不利影響有關。
背景技術：
：幼齡雞生長抑制的問題，在家禽養殖產業中已稱為不同術語如"萎縮(stunting)"、"發育不全(mnting-stunting)"或"不均衡生長"，其對受影響的農場造成了巨大的經濟損失。這種生長抑制與感染包括輪狀病毒和迄今未鑑定的稱為腸道病毒樣病毒(ELV)的小圓形病毒等多種病毒的感染有關。由於缺乏準確的診斷試驗所以特定的病毒引起的臨床問題是不清楚的，很難精確的估計對防禦病毒誘發的生長抑制問題疫苗的需求。雞的病毒感染能從汙染雞舍的病毒水平傳播；如，對於腸道感染，糞便-口腔傳染可是常見的。還認識到可能發生通過從病毒感染的親代雞到胚胎的腸道感染的垂直傳播。先前的研究(VeterinaryLaboratoriesAgency(VLA),Weybridge)顯示腸道病毒樣病毒(ELV),稱為FP3,能夠在未孵化的死亡小雞的胎糞(腸道內含物)中測定到，提示所述ELV感染了胚胎並且是從感染的親代中垂直轉播的[Spackman等，1984]。腸道病毒樣病毒包括微小核糖核酸病毒、星狀病毒，嵌杯樣病毒屬等等以及胞質中複製的小的未包膜的球狀病毒。它們有RNA基因組，在pH3時穩定。提示幾個抗原性彼此不同的ELV在禽類中引起生長抑制。
發明內容通過對2004-5UK群體的病雞的廣泛的病毒學研究，本發明人成功的從虛弱的小雞中分離了一種感染性的試劑(agent)。對所述試劑的鑑定提示所述病毒劑引起幼齡雞生長抑制和對雞胚胎的可能的不利影響。根據本發明的第一方面提供了一種稱為CAstV-3的分離的新的星狀病毒抹。所述病毒抹的樣品於2005年12月15日以收錄號CNCM1-3541保藏在巴斯德研究所CNCM。星狀病毒是小球狀病毒，典型地具有5角星或6角星形態和大約7kb的正義單鏈RNA基因組。很多星狀病毒先前已經在鴨、火雞或雞中被鑑定，然而，通過間接的免疫螢光測定證明本發明鑑定的星狀病毒是抗原獨特的。大部分(3.3kb)的CAstV-3基因組區域已經被測序。所述區域包括部分的星狀病毒ORFlb、星狀病毒RNA依賴的RNA聚合酶、24個核苷酸的小的基因間序列和編碼衣殼蛋白區的星狀病毒ORF2、和3，端未翻譯序列。根據第二方面，本發明提供了分離的核苷酸序列，其與以下具有至少85%,優選至少90%，優選至少93%,更優選至少95%,更優選至少98%，甚至更優選至少99%，和最優選100%的序列同一性(a)SEQIDNO:1到4的任一個所列的核苷酸序列，(b)在嚴格的條件下能夠與SEQIDNO:1到4的任一個雜交的核苷酸序列，或者(c)(a)或(b)的片段。適宜地，本發明的核苷酸序列編碼能產生針對雞星狀病毒3型的免疫原性應答的胺基酸序列。適宜地，核苷酸序列(a)或(b)的片段編碼能產生針對雞星狀病毒3型的免疫原性應答的胺基酸序列。適宜地，免疫原性應答針對雞星狀病毒3型(CAstV-3)衣殼蛋白提供的至少一個抗原性位點。本發明進一步提供了包括本發明第二方面的至少一個核苷酸序列和如啟動子的對照序列的基因構建體。還進一步提供了一種載體，所述載體包括根據本發明第二方面的分離的核苦酸序列和與所述核苷酸序列可操作性相連的啟動子。合適的載體包括病毒(如，牛痘病毒、腺病毒、杆狀病毒等)、酵母載體、噬菌體、染色體、人工染色體、質粒或粘粒DNA。根據本發明的第三方面，提供了一種生產本發明的核苷酸序列編碼的多肽或其片段的方法，所述方法包括以下步驟(a)將此處所述載體接觸細菌細胞和/或經由杆狀病毒接觸昆蟲細胞和/或酵母細胞和/或植物細胞，並(b)在適於多肽或其片段生產的條件下培養所述細菌細胞和/或昆蟲細胞和/或酵母細胞和/或植物細胞。適宜地，糹田菌細胞可是大腸桿菌(Escherichiacoli)。適宜地，多肽是由SEQIDNO:1到4的任一個核香酸序列編碼的。適宜地，多肽是由雞星狀病毒3型的核苷酸序列編碼的。本發明進一步提供了大體上從上述方法中生產的多肽。所迷多肽可被分離或從其表達的混合物中大體提純將能被本領域技術人員理解。根據本發明第四方面，提供了本發明第二方面任一核苷酸序列編碼的多肽序列。優選地，提供了SEQIDNO:1到4任一個編碼的多肽序列。適宜地，本發明的多肽可是抗原性的，因為它展現了至少一個免疫應答指向的抗原性位點。CAstV-3派生的抗原性多肽，如衣殼蛋白(SEQIDNO:5)或其片段，是在本發明的範圍內。適宜地，提供了一種多肽，其與SEQIDNO:5中所列的胺基酸的多肽具有至少85%,優選至少90%，優選至少93%，更優選至少95%,更優選至少98%，甚至更優選至少99%，和最優選100%的序列同一性。特異性結合本發明多肽的多克隆和單克隆抗體，以及所述抗體的使用，也在本發明的範圍內。所述多肽可分離或從其被提供的混合物中大體提純出將會被本領域技術人員理解。根據本發明第五方面提供了(i)本發明第一方面稱為CAstV-3的分離的新的星狀病毒株的用途，(ii)本發明第二方面的核苷酸序列的用途，或(Mi)本發明第四方面的多肽在製備能夠介導禽類免疫應答的組合物中的用途。根據本發明第六方面提供了根據本發明第五方面製備的組合物。適宜地，所述組合物包括至少部分的本發明第一方面的分離的新星狀病毒，至少一種本發明第二方面的核香酸序列，或至少一種本發明第四方面的多肽。肉用仔雞接種疫苗，即獲得性免疫的誘導是有利的，因為接種可用來控制臨床疾病。接種的親代產下的小雞對感染劑引起的不利臨床效果可能會更不易受感染，該感染劑是在肉用仔雞早期生長階段接種預防的。因而本發明第七方面提供了在禽類中預防生長抑制的免疫疫苗，所述的疫苗包括根據在禽類中誘導免疫應答的第六方面的組合物。本發明也提供了一種通過提供免疫有效量的所述疫苗來接種禽類預防CAstV-3的方法。分離的CAstV-3和/或本發明的核苷酸和/或多肽和/或本發明提供的抗體可被用於準備本發明診斷測定。所述測定能被用來檢測樣品，如被疑感染病毒的禽類組織、糞便、和血清中的禽類星狀病毒。根據本發明的第八方面提供了來自疑感染病毒的禽類的樣品中的雞星狀病毒3型檢測的診斷測定法，所迷方法包括以下步驟(i)以探針接觸禽類生理材料，其中所述探針選自(a)SEQIDNO:1到4任一個所列的核苷酸序列，(b)在嚴^"條件下能夠與SEQIDNO:1到4任一個雜交的核苷酸序列，(c)與(a)到(b)中任一個所列的核苷酸序列具有至少85%，優選至少90%，優選至少93%,更優選至少95%，更優選至少98%，甚至更優選至少99%，和最優選100%的序列同一性的核苷酸序列，(d)(a)、(b)或(c)的片段，(e)(a)到(d)中任一個所列的核苷酸序列編碼的多肽，或(f)與(e)中的多肽具有結合特異性的抗體，和(ii)檢測在探針和樣品中至少一種成分間的成功的結合事件。適宜地，所述探針可選自(a)SEQIDNO:1到4任一個所列的核苷酸序列，(b)在嚴格條件下能夠與SEQIDNO:1到4任一個雜交的核苷酸序列，(c)(a)或(b)的片段，(d)(a)到(c)中任一個所列的核苷酸序列編碼的多肽，或(e)與(d)中的多肽具有結合特異性的抗體。在一個特殊的實施方式中，探針可是用於RT-PCR擴增雞星狀病毒3型的選擇的靶序列的合適引物集合。適宜地，該片段編碼能夠產生抗原應答的多肽，所述抗原應答類似於SEQIDNO:l到4核苷酸序列中任一個編碼的多肽提供的抗原應答。適宜地，結合事件利用與探針締合的標記，如螢光標記，放射性同位素標記等等糹皮檢測。在一個實施方式中測定包括以下步驟(i)以至少部分雞星狀病毒3型接觸禽類生理材料，如血液，其包含能與至少部分雞星狀病毒3型特異結合的抗體，所述至少部分雞星狀病毒3型優選的固定於固體表面，以使所述抗體能夠結合到至少部分雞星狀病毒3型，並(ii)檢測所述結合抗體的存在。在進一步的實施方式中，一種診斷測定方法可包括以下步驟(i)以至少部分雞星狀病毒3型特異結合的抗體接觸禽類生理材料的樣品，如糞便，其包含禽類星狀病毒3型，所述抗體優選的固定於固體基質，以使所述抗體能夠結合所述禽類星狀病毒3型，並(ii)檢測所述結合抗體的存在。通過與共軛形式的病毒有特異性的抗體的使用，可檢測捕獲的病毒，如對本領域技術人員已知的。在進一步的實施方式中，一種診斷測定方法可包括以下步驟(i)提供來自禽類生理材料的遺傳物質，和(ii)化驗遺傳物質以檢測來自雞星狀病毒3型的任何遺傳物質。適宜地，探針可是能與本發明核苷酸序列結合的核酸序列，所述核苷酸序列優選的是雞星狀病毒3型核苷酸序列，優選的是SEQIDNO:1到4任一個的核普酸序列。適宜地，探針可是能與雞星狀病毒3型核香酸序列結合的引物集合，所述核苷酸序列優選的是SEQIDNO:1到4任一個的核苷酸序列，以允許通過RT-PCR擴增序列。根據本發明進一步方面提供了一種用在雞星狀病毒3型(CAstV-3)診斷的診斷試劑盒，其包括一種探針，其中所述探針是以下中的至少一種(a)SEQIDNO:l到4任一個所列的序列，(b)在嚴格條件下能夠與SEQIDNO:l到4任一個雜交的序列，(c)具有與(a)或(b)中任一個所列的核苷酸序列至少85%，優選至少90%，優選至少93%,更優選至少95%，更優選至少98%,甚至更優選至少99%,和最優選100%的序列同一性的核苷酸序列，(d)(a)、(b)或(c)的片段，(e)(a)到(d)中任一所列的核苷酸序列編碼的多肽，或(f)與(e)中的多肽具有結合特異性的抗體。適宜地，所述片段編碼能產生抗原應答的多肽，所述的抗原應答類似於SEQIDNO:1到4核香酸序列中任一個編碼的多肽提供的應答。適宜地，所述探針與標記，如螢光標記，放射性同位素標記等等締合。具體實施方式病毒本發明涉及分離的雞星狀病毒3型和所述病毒的核苷酸序列和多肽的鑑定。發明人對CAstV-3與其他禽類星狀病毒進行的成對胺基酸同一性比較提出與已知的星狀病毒有最近的同源性的是與CAstV-2。CAstV-3與CAstV-2間成對M酸同一性是84.6%。關於本發明提供的核苷酸序列，序列同一性利用合適的數學算法測定。對所述數學算法的計算機實施能被用作序列間的比較來測定序列同一性。所述實施包括但不限於PC/Gene程序中CLUSTAL(從Intelligenetics,MountainView,California可獲得)；ALIGN程序(2.0版本)和GAP,BESTFIT，BLAST,FASTA和Wisconsin遺傳學軟體包(WisconsinGeneticsSoftwarePackage),版本8中的TFASTA(從遺傳學電腦組(GCG)可獲得,575ScienceDrive,Madison，Wisconsin,USA)。適宜地，利用這些程序的比對可利用默認的參數來執行。此處所使用的在兩種核香酸序列或多肽序列的上下文中"序列同一性"和"同一性"是指兩種序列中相同的殘基的具體百分比，這是當超過具體的比對窗口比對出最大的相應性，如利用序列比對算法和目測測量的。適宜地，具體的比對窗口選自一種序列，該序列編碼或代表比對的具體多肽的胺基酸的至少50個，至少100個，至少150個，至少200個，至少250個，或最優選的所有。當序列同一性用來指蛋白質時，本領域技術人員應理解不相同的殘基位點通常由於保守胺基酸取代而不同，即其中氨基S交被與被取代胺基酸具有相似化學性質的胺基酸所取代。序列同一性百分比可被向上調節來為取代的保守特性做校正。雜交指的是當所述序列存在於複雜的混合物中(如全細胞的)DNA或RNA中，在嚴格條件下分子僅結合、二聯或雜交到一種特定的核苷酸序列。嚴格雜交在核酸以最小背景結合目標核酸時發生。典型地，為了達到嚴格雜交，使用低於Tm(—半的分子從配偶體中解離的熔化溫度)大約1°C到大約20。C的溫度，更優選的是低於5。C到大約20。C。然而，其進一步淨皮溶液的離子強度和pH限定。高度嚴格的洗脫條件的一個例子是72。C、15分鐘、0.15MNaCl。嚴格洗脫條件的例子是在65。C下0.2xSSC洗脫15min(見Sambrook和Russell下對ssc緩衝液的描述)。通常高度嚴格的洗脫前是低嚴格度的洗脫來去除背景探針信號。中等嚴格的對如大於100個核苷酸的二:^關體的洗脫的例子是在45。C下lxSSC15分鐘。低度嚴格的對如大於100個核苷酸的二聯體的洗脫的例子是在40。C下4-6xSSC15分鐘。對短探針(如10到50個核苷酸)，嚴格的條件典型地包括低於1.5M的鹽濃度，更優選的大約O.Ol到1.0M，pH7.0到8.3下鈉離子濃度(對其它的鹽)，和溫度代表性的是至少大約3(TC和對長探針至少大約60°C(如，大於50個核苷酸)。適宜地，本發明核苷酸序列編碼雞星狀病毒3型的抗原多肽。適宜地，本發明提供分離的核苷酸序列，其選自(a)SEQIDNO:1到4任一個所列的核苷酸序列，(b)在嚴格條件下能與SEQIDNO:1到4中任一個雜交的核苷酸序列，(c)(a)或(b)的片段。在具體的實施方式中，本發明的核苷酸序列由選自SEQIDNO:1、2、3和/或4中任一核苷酸序列組成。適宜地，可表達本發明的核苷酸序列來提供編碼的多肽。優選地，本發明的多肽包括由選自以下核苷酸序列編碼的多肽(a)SEQIDNO:1到4任一個所列的核苷酸序列，(b)在嚴格條件下與SEQIDNO:1到4任一個能夠雜交的核苷酸序列，(c)(a)或(b)的片段。本發明的多肽片段可是SEQIDNO:1到4編碼多肽中任一個的變體，所述變體包括一個或多個平截、取代、缺失或插入，其中所述多肽提供了與SEQIDNO:1到4編碼多肽中任一個相似的抗原應答。有利的是對蛋白質的這些改變可用來增強激發免疫應答的蛋白的功效或使其在禽類中使用更安全。提供免疫應答的這個片段長度包括至少6到15，優選的25和更優選的SEQIDNO:1到4任一個編碼的50個連續胺基酸。利用如SEQIDNO:1到4中任一個多核苷酸序列的C末端缺失，能夠產生抗原片段，所述的C末端缺失構建體可隨後被插入到合適的原核或真核表達質粒中。然後來自多核苷酸片段的表達產物的抗原活性可利用如下方法檢測利用免疫印跡的方法評價與來自天然和/或實驗感染的小雞的抗血清的反應性。可選擇地，能產生由CAstV-3蛋白序列具體指明的一系列重疊的合成肽，優選地衣殼蛋白。這些蛋白利用ELISA方法能與來自天然或實驗感染小雞的抗血清反應來確定哪些肽是抗原性的。此外，合成肽能用來免疫小鼠、兔、雞，並且產生的抗血清能利用間接免疫螢光測定來評價與CAstV-3的反應性。用這種方法能識別免疫原性肽並且可引發病毒特異性抗血清。描述的後兩種方法對包括線性連續表位的小肽特別的有利。適宜地，本發明提供了多肽的tt酸序列，其中1到5、1到10、1到15或1到20胺基酸殘基被缺失、取代和/或添加到SEQIDNO:1到4中任一個核苷酸序列編碼的胺基酸序列上，其中所述的多肽激發免疫應答(即，具有抗原活性)。在特定的實施方式中，本發明的核苷酸序列編碼下列(a)或(b)的多肽(a)包含SEQIDNO:5的胺基酸序列的多肽，(b)包含當一個或多個胺基酸殘基被缺失、取代和/或添加到SEQIDNO:5的氣基酸序列時的胺基酸序列的蛋白，其中所述蛋白具有如SEQIDNO:5相似的抗原應答。在特定的實施方式中，本發明的核苷酸序列編碼下列(a)或(b)的多肽(a)由SEQIDNO:5的胺基酸序列組成的多肽，(b)由當一個或幾個胺基酸殘基被缺失、取代和/或添加到SEQIDNO:5的胺基酸序列時的遵^基酸序列組成的蛋白，其中所述蛋白具有如SEQIDNO:5相似的抗原應答。可通過密碼子優化或修飾核苷酸序列來增加多肽的表達效率。適宜地，本發明提供由SEQIDNO:5的胺基酸序列組成的多肽。多克隆抗體血清能通過使用至少部分的CAstV-3來提高免疫應答而生產。免疫製劑可是細胞培養物中提純的病毒、病毒特異的合成肽、由表達載體等生產的多肽、DNA表達質粒。重複攻擊後，部分的血清能被去除和抗原提純。此外半提純的血清可利用層析提純，如，糖類凝膠柱和合適的緩衝液來根據分子量分離血清的組分。適宜地，本發明提供了與本發明至少一種多肽具有結合特異性的多克隆抗體。適宜地，本發明提供了多克隆抗體，其與以下具有結合特異性(a)由SEQIDNO:1到4中任一個的核苷酸序列編碼的至少一種多肽序列，(b)包括當一個或幾個胺基酸殘基被缺失、取代和/或添加到SEQIDNO:1到4中任一個編碼的胺基酸序列時的胺基酸序列的至少一種多肽序列，其中所述多肽具有如SEQIDNO:1到4任一核香酸序列編碼的多肽的相似的抗原應答，或(c)與SEQIDNO:1到4中任一核苷酸序列編碼的多肽具有相似的抗原應答的(a)或(b)的多肽片段。適宜地，本發明提供了多克隆抗體，其與以下具有結合特異性(a)SEQIDNO:1和/或2和/或4中任一核苷酸序列編碼的至少一種多肽序列，(b)包括當一個或幾個胺基酸殘基被缺失、取代和/或添加到SEQIDNO:1和/或2和/或4中任一個編碼的胺基酸序列時的胺基酸序列的至少一個多肽序列，其中所述多肽具有如SEQIDNO:1和/或2和/或4任一核苷酸序列編碼的多肽的相似的抗原應答，或(c)(a)或(b)中多肽的片段，其具有如SEQIDNO:1、2或4任一核苷酸序列編碼的多肽的相似的抗原應答。適宜地，該多克隆抗體不具有和SEQIDNO:3編碼的多肽的結合特優選的，本發明提供了多克隆抗體，其具有與(a)、(b)或(c)的結合特異性，其中(a)是具有SEQIDNO:5中胺基酸序列的至少一種多肽，(b)是包括當一個或幾個胺基酸殘基被缺失，取代和/或添加到SEQIDNO:5中的氨基S史序列時的胺基酸序列的至少一種多肽，其中所述多肽具有與SEQIDNO:5相似的抗原應答，(c)是(a)、(b)或(c)中多肽的片段，其具有與SEQIDNO:5中相似的抗原應答。單克隆抗體可通過雜交瘤技術生產，如，免疫接種小鼠可用來產生小鼠單克隆抗體。適宜地，本發明提供了一種與本發明至少一種多肽具有結合特異性的單克隆抗體。異性。適宜地，本發明提供了一種多克隆抗體，其與以下具有結合特異性(a)SEQIDNO:1到4中任一核苷酸序列編碼的至少一種多肽序列，(b)包括當一個或幾個胺基酸殘基被缺失、取代和/或添加到SEQIDNO:1到4中任一編碼的胺基酸序列時的胺基酸序列的至少一種多肽，其中所述蛋白具有與SEQIDNO:1到4中任一核香酸序列編碼的多肽的相似的抗原應答，或(c)(a)或(b)中多肽的片段，其具有與SEQIDNO:l到4中任一核苷酸序列編碼的多肽的相似的抗原應答。適宜地，本發明提供了一種單克隆抗體，其與以下具有結合特異性(a)SEQIDNO:1和/或2和/或4中任一核苷酸序列編碼的至少一種多肽序列，(b)包括當一個或幾個胺基酸殘基被缺失、取代和/或添加到SEQIDNO:1和/或2和/或4中任一個編碼的胺基酸序列時的胺基酸序列的至少一種多肽，其中所述多肽具有如SEQIDNO:1和/或2和/或4任一核苷S臾序列編碼的多肽的相似的抗原應答，或(c)(a)或(b)中多肽的片段，其具有與SEQTDNO:1、2或4中任一核苷酸序列編碼的多肽的相似的抗原應答。適宜地，該單克隆抗體不具有與SEQIDNO:3編碼的多肽的結合特異性。優選的，本發明提供了與(a)、(b)或(c)具有結合特異性的單克隆抗體，其中(a)是具有SEQIDNO:5中胺基酸序列的多肽，(b)是包括當一個或幾個胺基酸殘基被缺失、取代和/或添加到SEQIDNO:5中的胺基酸序列時的胺基酸序列的至少一種多肽，其中所述蛋白具有與SEQIDNO:5的相似的抗原應答，或(c)是(a)、(b)或(c)中多肽的片段，其具有與SEQIDNO:5中相似的抗原應答。免疫接種可實行來提供單克隆抗體，如下面詳述或可包括這三種方法中不止一個的結合1)CAstV-3可從胚胎中生長的病毒或是感染的禽類糞便(如雞糞便)存在的病毒中提純，並用來免疫接種。2)小鼠能用重組雞星狀病毒3型免疫接種，如CAstV-3，並通過在大腸桿菌、酵母、植物或感染了重組杆狀病毒的昆蟲細胞中表達雞星狀病毒3型多核苷酸序列(優選的編碼衣殼蛋白的多核苷酸序列)生產蛋白質。3)小鼠能夠用能夠表達禽類星狀病毒3型多核苷酸序列的DNA表達質粒來免疫接種，如包括SEQIDNO:1到4中至少一種的CAstV-3多核苦酸序列。如上述表明，這些製備物能夠用來生產多克隆抗體。免疫接種的小鼠中對禽類星狀病毒3型如CAstV-3的抗體的存在，能用間接的免疫螢光(IIF)試驗來檢測。雜交瘤細胞能通過免疫小鼠去除的脾臟來製備，並且克隆的細胞培養物能利用IIF試驗以篩選它們分泌病毒特異性的抗體的能力。以本發明蛋白質處理的動物生產的抗體能被分離和用作測定和/或用於測定的目的。特別的，本發明提供一種抗體的用途，其在診斷測定中與SEQIDNO:1到4中任一編碼的多肽具有結合特異性。如本領域技術人員將會理解，"抗體"應該被解釋為包含任何具有所需特異性的結合區域的結合元件或物質。抗體可是天然的或是部分的或全部合成生產的。所述術語也包含具有結合區域的任何多肽、蛋白質或肽，該結合區域是抗體結合區域或與抗體結合區域同源。這些能從天然資源中產生或它們能部分或完全合成生產。抗體的例子是免疫球蛋白同種型和其同種型亞型和包括如Fab、scFv、Fv、dAb、Fd和雙特異抗體等抗原結合區域的片段。禽類可是雞、火雞、鴨、鵪鶉、鵝、鴕鳥、雉、孔雀、珍珠雞、鴿子、天鵝、矮腳雞和/或企鵝。治療本發明的病毒、核酸序列、蛋白質或抗體可用來修飾禽類的免疫系統。這種調節能用來治療禽類。治療包括任何能有利於禽類的方案。治療可涉及現存的條件或預防性的(預防性治療)。治療可包括治癒的、緩解的或預防性的效果。治療可經由任何合適的途徑提供。精確的劑量取決於多個因素，如疫苗抗原的精確性質或特殊佐劑的應用。介導免疫應答的疫苗或組合物介導本發明免疫應答的疫苗或組合物包括活病毒、活減毒病毒或滅活分的CAstV-3，包括，如抗原亞單位，能表達本發明的核苷酸序列的載體；包括CAstV-3核香酸序列，SEQIDNO:1到4，如編碼本發明多肽的DNA疫苗，如CAstV-3(SEQIDNO:5)衣殼蛋白、重組雞星狀病毒3型、合成肽疫苗或類似物。適宜地，為了使病毒失活，可使用標準的化學失活劑，如包括甲醛、乙醛及類似的醛類試劑。可選擇地，可使用輻照(如紫外或y射線)病毒，或病毒可反覆的從非禽類來源的細胞培養物中生長出來，以致其帶毒性繁殖的能力喪失。本發明的疫苗可用於禽類接種預防生長抑制。本發明的衍生多肽可用來介導免疫應答。本發明的多肽可適合地連接到偶聯配偶體上，如效應分子、標籤、藥物、毒素和/或載體或轉運分子。將本發明多肽偶聯到肽基和非肽基偶聯配偶體的技術在本領域是眾所周知。適宜地，疫苗可包括藥物載體或稀釋劑，如生理鹽水、丙二醇及類似物。適宜地，疫苗可包括佐劑，如弗氏不完全佐劑。疫苗接種方法該疫苗可口服、注射用藥、鼻內給藥或靜脈注射給藥。所提供的疫苗的劑量典型地可將禽類的年齡和/或重量和/或生理狀態考慮進去。對大規;溪的禽類接種免疫如但不限於雞和火雞，適宜地該疫苗可由飲用水、噴霧或氣溶膠來提供。在一個實施方式中疫苗可以製備為活疫苗的形式，所述活疫苗可通過飲用水或噴霧形式給藥。這種疫苗可是非減毒的，因為生長期的種禽(如10周或更大)的感染不會導致致病的效果。(非常幼小的雞感染(如0-3周)可是致病的)。在第二個實施方式中，疫苗可以製備為減毒病毒，其可在胚胎或細胞培養物中生長病毒來生產。這種減毒疫苗也能通過飲用水或噴霧來提供。減毒或非減毒CAstV-3病毒也可通過接種來提供(如，皮下途徑)。在第三個實施方式中，疫苗可製備為死或失活病毒。失活(死)病毒可通過接種注射給藥。為了使引起的免疫應答最大化，與失活病毒一起用的佐劑可為很重要的。在第四個實施方式中，疫苗可以製備為重組亞單位疫苗。這種方法可採用，如當活疫苗不有效和當失活疫苗太昂貴而難以生產。重組亞單位疫苗可基於衣殼蛋白在大腸桿菌、酵母、植物或感染了重組杆狀病毒的昆蟲細胞的表達。在本實施方式中，至少部分的CAstV-3可用來製備疫苗，如CAstV-3蛋白(優選的結構蛋白)可被使用。這種蛋白可通過重組DNA表達方法或通過培養病毒而生產。適宜地，針對禽類星狀病毒3型，如CAstV-3的疫苗可進一步包括其他試劑的抗原作為Jf關合疫苗的一部分，如其他禽類，更明確的其他雞病毒。測定方法在特定的實施方式中，本發明的測定包括以下步驟-提供來自禽類的樣品，-將能與至少部分的雞星狀病毒3型(CAstV-3)特異結合的抗體與樣品接觸，-檢測抗體與樣品中CAstV-3的結合，其中抗體與樣品中雞星狀病毒3型的結合指示禽類中CAstV-3的存在。適宜地，能與雞星狀病毒3型特異結合的抗體能與多肽結合，所述多肽是SEQIDNO:1到4編碼的，更優選的SEQIDNO:1、2或4編碼的多肽，更優選的具有SEQIDNO:5的胺基酸序列的多肽，或至少部分的SEQIDNO:5的多肽，該多肽是抗原性的。在可選^^的實施方式中，本發明的測定包括以下步驟-將至少部分的雞星狀病毒3型與樣品接觸，-檢測至少部分雞星狀病毒3型與樣品中的抗體結合的存在或缺失，其中至少部分分離的雞星狀病毒3型與抗體的結合指示對雞星狀病毒3型的抗體在禽類中的存在。在進一步可選的實施方式中，本發明的測定包括以下步驟(i)提供遺傳物質，和(ii)化驗遺傳物質以檢測來自雞星狀病毒3型的任何遺傳物質。適宜地，遺傳物質來自禽類和可以來自禽類(如雞)的RNA。適宜地，遺傳物質可為來自禽類的羽毛、卵、血、糞便、腸道和腸道內含物、組織或類似物。已有大量可購買獲得的試劑盒來從組織樣品提取RNA。這些對本領域的技術人員是眾所周知的。本領域技術人員將會理解檢測樣品中遺傳物質的大量檢測方法。適宜地，本方法包括反轉錄PCR(RT-PCR)的使用。在一個特定優選的實施方式中檢測方法包括以下步驟(i)提供核酸聚合酶正向和反向引物，所述引物能與雞星狀病毒3型多核苷酸序列特異結合；(ii)在引物之間擴增多核苷酸序列；(iii)檢測擴增的多核苷酸序列；其中檢測到樣品中擴增的多核苷酸序列的多拷貝指示樣品中雞星狀病毒3型的存在。本試驗的基礎是如果兩個小的引物序列在提取自試驗樣品的RNA中找到了精確或非常相似配對，正鏈cDNA就會被生產。適合於本發明中使用的核酸聚合酶的正向和反向引物可選自於來自CAstV-3基因組中任何合適序列。本領域技術人員會理解需要考慮進的因素，當設計合適的引物，如使用序列比對確定序列保守區域，而正向和反向引物是通過這個保守區域設計的。適宜地，引物可具有以下序列正向5'-AGCCTCAAAGTATAAGACGCAG誦3，SEQIDNo:6反向5，-CCATGCTATTTCAAAGGTGGTT-3，SEQIDNo:7。有利地，使用這種引物提供一個試驗，所述試驗比通過間接的病毒抗原免疫螢光的檢測方法為10之間，優選的20，更優選的30和最優選的100倍更敏感，後一種方法中病毒抗原通過利用含病毒樣品接種初級雞胚胎肝細胞來生產。優選地，測定的方法提供了樣品中病毒量的定量的信息。有利地，引物可螢光標記和所述測定包括進一步的確定步驟，通過確定引物的螢光發射確定引物是否結合到多核苷酸序列。適宜地，螢光標籤是在本領域技術人員的共同普遍知識內的。優選地，本發明的測定方法對雞星狀病毒3型是特異的，該病毒於2005年12月15日以收錄號CNCM1-3541保藏於巴斯德研究所CNCM。任何合適的樣品可在本發明的測定中使用，如，來自禽類如雞的樣品可被使用並且病毒複製的組織，如腸可使用，可選擇地，樣品可是血或是糞便。優選的，用於診斷的樣品可選自糞便、腸內含物或糞便擦拭物。適宜地，當樣品是糞便和/或腸內含物，天然病毒懸濁液製備為在磷酸鹽緩衝液(PBS)中10%的勻漿。這些可利用3000g離心30min來澄清並且澄清的提取物等份(如200微升)被提取出。利用擦拭物，l-2mlPBS中的懸濁液可製得並在提取之前像上述一樣變澄清。診斷試劑盒在特別的本發明提供的用來檢測來自疑感染病毒的禽類樣品中的雞星狀病毒3型診斷測定試劑盒的例子中，測定試劑盒包括至少部分雞星狀病毒3型、本發明的核苷酸序列、本發明的多肽、本發明的多克隆抗體或本發明的單克隆抗體。至少部分的雞星狀病毒3型、本發明的核苷酸序列、本發明的多肽、本發明的多克隆抗體或本發明的單克隆抗體可結合到基質，以至試驗樣品可置於或衝洗在至少部分的雞星狀病毒3型、本發明的核苷酸序列、本發明的多肽、本發明的多克隆抗體或本發明的單克隆抗體之上。在特殊的例子中，用來檢測來自疑感染病毒的禽類樣品中的雞星狀病毒3型診斷測定試劑盒包括與至少部分雞星狀病毒3型具有結合特異性的抗體。適宜地，抗體可結合到基質上，這樣試驗樣品可置於或沖洗在結合抗體上。適宜地抗體具有與SEQIDNO:1到4中任一個編碼的多肽的結合特異性。在特定的實施方式中抗體具有與胺基酸序列為SEQIDNO:5的多肽的結合特異性。在進一步的例子中，用來^r測來自疑感染病毒的禽類樣品中的雞星狀病毒3型診斷測定試劑盒包括能與SEQIDNO:1到4中任一個雜交的核酸探針。在特定的例子中4是供能與SEQIDNO:1、2或4中任一個雜交的核酸探針。在一個實施方式中，探針可是核酸序列並且所述探針雜交到樣品中核苷酸序列可通過點雜交檢測。適宜地，探針可是引物集合。當引物集合3皮使用，所述引物集合可通過RT-PCR用來擴增選定的序列，如果特定的核苷酸序列在樣品中存在。在特定優選的例子中引物集合可選自正向5，-AGCCTCAAAGTATAAGACGCAG-3，SEQIDNo6反向5，隱CCATGCTATTTCAAAGGTGGTT-3，SEQIDNo7。優選地，測定試劑盒對雞星狀病毒3型是特異的，該病毒於2005年12月15日以收錄號CNCM1-3541保藏於巴斯德研究所CNCM。適宜地，病毒、核苷酸序列、多肽序列、免疫系統的調節基因、疫苗和本發明的試劑盒可於禽類使用，更優選的商業化生產的任何禽類，更優選的是如雞、火雞、鴨、鵝、雉、鴿子、珍珠雞等家禽，然而更優選的是雞。定義如此處使用的，術語"分離的"指本發明的肽、多肽、蛋白質、抗體、病毒或核酸分子的體外製備、分離和/或純化，以至其與體內物質不相關或大體上從體內物質中提純。如此處使用的，術語"氣溶膠"包括利用如噴霧器的壓力系統產生的極細的固體或液體顆粒。如此處使用的，術語"核酸"或"核香酸序列"包括基因組DNA、cDNA或RNA。此處描述的本發明用關於如下非限制性例子和圖來舉例說明。其他本發明的實施方式由於這個描述對本領域技術人員是明顯的。圖1顯示ELV和禽類星狀病毒配對胺基酸同一性比較；圖2顯示人、雞和火雞星狀病毒序列的種系發生分析；和圖3顯示取自1日齡小雞的腸樣品的RT-PCR結果的瓊脂糖凝膠電泳，其中RT-PCR產物為187bp。利用CAstV-3感染幼小雞仔實驗的和初步現場試驗提示利用CAstV-3感染幼小雞仔與在小雞中的生長遲緩或生長抑制有關。生長抑制是包括萎縮的疾病狀態的特點，指幼小的雞沒有以預期的速率生長。這可短暫的持續數日，之後受感染的雞生長正常並且"趕上"與他們一起孵化的未受感染的夥伴。可選擇性的，禽類可保持相對小("萎縮")並落後於與他們一起孵化的未受感染的夥伴。這樣，群體作為整體可描述為顯示"不均衡生長"。實驗性地，顯示以雞星狀病毒3型口服接種1日齡的無特異病原體的(SPF)雞導致14天期間範圍內的17%的生長抑制。組織學的變化可在腸、腎和胰臟中觀察到，顯示這種病毒在腸內複製但是此外具有在腸道外傳播的能力。病毒抗原在範圍廣泛的組織內被檢測。提示觀察到的生長抑制是由於對腸和其他器官如胰臟的聯合作用。現場的證據包括對來自顯示"不均衡生長"的群體臨床樣品的調查，其顯示來自一些臨床感染的雞的腸內含物包含大量的包括CAstV-3的腸道病毒樣病毒(ELV),連同輪狀病毒和呼腸病毒。已經承認雞星狀病毒3型可促成臨床問題。此外，以製備自表現不均衡生長的群體的病雞腸內含物的接種物口服感染1日齡SPF幼雞在感染後5周導致大約30%生長抑制。血清學試驗顯示接種的雞已經血清轉換到CAstV-3和先前識別的另一種免疫學不同的ELV。本發現顯示接種物包括CAstV-3並且提示病毒可能促進生長抑制。感染了如CAstV-3的腸病毒引起的致病效果可在小雞中和在沒有對感染病毒的母體抗體的雞中更嚴重。已認識到，由於這個位置抗體不存在，母體抗體的存在不會阻止雞腸道的感染，但是可阻止或減少感染向腸道外傳播。利用CAstV-3感染胚胎CAstV-3胚胎傳播的證據在本發明人最近的工作中被觀察到，這證明製備自獲得自幾個種雞群的1日齡小雞的腸組織中存在病毒。血清試驗顯示絕大部分種雞群顯示部分血清轉換到雞星狀病毒3型，當在22周試驗時(就在它們產蛋前)。這些結果合起來支持一個觀點，所述觀點為很多種禽在產卵中被感染和結果能傳播CAstV-3到它們的胚胎和後代小雞。用包括FP3的CAstV-3分離物接種6或7日齡的胚胎引起胚胎死亡、矮化和胚胎中肝及皮膚壞死和降低的孵化率。因此，現場感染CAstV-3具有破壞發展中的胚胎和導致孵化率降低的潛力。不考慮CAstV-3是否給胚胎引起疾病問題，可垂直傳播的病毒對剛孵化的小雞構成威脅，特別是由於這些小雞沒有針對病毒來自母體的抗體。病毒複製也可對這些直接感染的小雞導致致病作用。這些雞分泌的病毒通常在開始的幾天會依次水平感染一起孵化的夥伴，它們要麼具有母體抗體(如果蛋是由先前感染的、抗體陽性的育種者產的)，要麼沒有母體抗體(如果蛋是由未感染的、抗體陰性的育種者產的)。母體抗體的保護效果可導致觀察到的致病作用的變化和可觀察到肉雞群中的不均衡生長。傳染原的分離和初步表徵利用雞胚胎接種方法，很多嘗試用來從l日齡的虛弱的雞中分離傳染原是成功的，所述雞來自顯示降低的孵化率和有更高比率的虛弱小雞的群體。以下是一個這樣的例子來自樣品提交"11672"虛弱的雞以整個雞來勻漿並經由卵黃嚢接種到7日齡的胚胎中。培養10天後沒有記錄到胚胎死亡，但是胚胎比對照小。卵中尿嚢液樣品通過EM處理和檢查，但是沒有看見病毒粒子。將來自這些胚胎的肝集中起來，勻漿和經由卵黃嚢(第一途徑)再次接種7日齡卵中。利用這些樣品，記錄在4妻種後9到12天間胚胎死亡。相比對照胚胎矮化並且白色損傷(壞死區域)在肝葉周圍被發現。在這些卵中，尿囊液具有顯著的綠色，這種被收集並保存(-70。C)。EM檢查不能顯示任何病毒粒子的證據。肝從這些死胚胎中去除，集中起來，勻漿並通過電子顯微鏡檢查但是沒有看到病毒粒子。收集的肝再次接種到7日齡(第二途徑)，並且所有胚胎死亡從接種後第四天記錄。胚胎被矮化並且和以前一樣尿嚢液是顯著的綠色。肝和腎從死胚胎中去除並且冷凍切片。肝切片通過對感染性支氣管炎病毒免疫螢光染色，但是沒有觀察到陽性螢光。肝和腎冷凍切片保留後在此後染上其它的抗血清。從一套樣品中白色壞死的損傷見於肝臟上，一些這種材料處理為薄切片EM,但是沒有發現病毒複製的證據。具有壞死損傷的肝^皮勻漿並在初級胚胎肝細胞中提供2x7天途徑(pass)。沒有觀察到病毒CPE,但是固定蓋玻片並存於-20。C來等待當偶聯物變得可獲得時進行螢光染色。第二條途徑材料受如下描述的雞胚胎而另外傳代。收集的肝勻漿重新通過卯黃嚢接種，這次是到7日齡的SPF胚胎(第三途徑)。在接種後胚胎死亡從第7天到第11天被記錄，胚胎萎縮並伴有肝和皮膚上的大量的壞死損傷。將受感染的肝樣品固定和貯存來做組織生理學檢查，並且死胚胎剩下的肝收集到一起並勻漿。尿嚢液分開收集並也集中到一起。尿嚢液通過卵黃嚢接種到7日齡的胚胎(第四途徑)，導致胚胎在接種後7到10天死亡。尿嚢液和肝收集到一起來用於感染7日齡SPF胚胎(第五途徑)。胚胎收集，勻漿並貯存於-70°C。勻漿物在這裡指11672病毒第一途徑胚胎勻漿物(lpEH)。濃度和純化研究採用來自胚胎中11672樣品傳代的勻漿。全胚胎的勻漿在以11672(lpEH)來接種胚胎後製備，這是為識別負責胚胎死亡的因素。12隻7日齡的VALOSPF卵被接種並且矮化胚胎和綠色AF在接種後7天被收穫。不同的起始材料被用來純化。這些是尿嚢液，卵黃蒂，綠色肝臟和全胚胎。相同的純化用於每一例中。這包括三步(1)3000rpm離心20min澄清，(2)10000rpm低速超離心30min，(3)30,000ipm超高速離心3-4hr。10,000rpm和30,000rpm離心用Beckman超離心機操作(型號35固定角度轉子)。通過肝和全胚胎製備物，附加的步驟被使用。這包括重懸高密度離心的沉澱，用去垢劑十二烷基^5危酸鈉SDS的處理或不處理懸濁液，和利用6x14ml搖動式Beckman轉子在32000rpm處離心3-4hr通過25%的蔗糖墊(cushion)沉積。包括這個步驟因為高速沉澱是厚且膠狀的並可包含高水平的胚胎來源的汙染以致使病毒粒子的可視化非常困難。從以上準備獲得的材料的所有樣品利用恢復期抗血清免疫EM和陰性對照EM相比是陰性的。為更好的確定感染性是否在純化過程的一步或多步被集中，來自lpEH傳代材料的萎縮的全胚胎勻漿用以上1、2和3步驟來處理，同時接種到7日齡SPF胚胎的每步離心的材料被收集。所有的製備物，在7天培養中產生矮化或死亡，顯示包括高速離心沉澱的感染性在純化過程的每一步出現。這種結果顯示一些傳染的病毒保持與細胞物質有關，因為感染性通過10000rpm離心步驟沉澱(表1)。一些傳染的病毒保留在可溶的10000rpm的上清液部分並在30000rpm離心時沉澱。在30000rpm的上清液一些感染性的檢測提示11672病毒會很小。然而，利用胚胎接種來顯示在這種方法中病毒感染性是相對粗糙的方法。不滴定病毒感染性很難評估在每一組分中有多大比率的傳染性會出現。表l:來自不同離心的組分接種後的胚胎死亡^^莫式tableseeoriginaldocumentpage28每一組分中IO個卵被接種沉澱組分以1:60淨皮稀釋來說明離心效果在12天p.i.保持存活的胚胎被殺死並檢查為了確定傳染原是不是氯仿敏感的，即病毒因素是包被(對氯仿處理敏感)還是未包被(對氯仿有抗性)的，11672病毒胚胎勻漿(2pEH)被氯仿處理，然後接種到7日齡的胚胎。胚胎死亡和萎縮在處理和非處理準備中被記錄，顯示傳染原未包被。11672病毒胚胎勻漿(2pEH)從10"稀釋到10-5並且每一稀釋度祐3妻種到7日齡胚胎。萎縮和胚胎死亡記錄到10-4稀釋度(表2)。如預期的，對胚胎最嚴重的影響，以早夭和矮化的數目表示，觀察到最高濃度的病毒(即在剛好10"稀釋度)。在10-2到10-3的稀釋度有很少的死亡，10^稀釋度沒有死亡。在接種後11天還存活的胚胎中如矮化和肝壞死的變化顯示在這些稀釋度感染的病毒仍然存在。104胚胎感染劑量估計的感染性滴度值提供了對迄今利用EM觀察病毒顆粒的失敗的一種解釋，因為大於105或甚至大於1(^的病毒顆粒滴定值通常規定為為了觀察EM中顆粒所需的。表2:11672病毒不同傳染性的劑量接種後的胚胎死亡^t式tableseeoriginaldocumentpage29對每一稀釋度8個卵被:-接種。在第7日所有死亡的卵萎縮，出血或有肝壞死。在第ii日剩餘的胚胎被殺死和檢查。在進一步的實驗中調查感染11672病毒的胚胎對孵化率的影響。11672病毒胚胎勻漿(2pEHH皮接種到7日齡的胚胎，有三個稀釋度(l(T3、104、1(T5)，每一個稀釋度30個胚胎，24個胚胎未接種留作對照。檢查在接種後8天死亡的所有胚胎。所有的都比對照小，並有出血和肝壞死的跡象。此外在接種後12天每一稀釋度的8個卵被打開，胚胎檢查後結果如下10-3稀釋度4/8胚胎比對照小，3/8萎縮並有明顯肝壞死，1/8正常。10—4稀釋度3/8嚴重萎縮，其中2個肝壞死；5/8正常。10-5稀釋度:8/8正常在接種後13天存活的卵被轉到培養箱中並允許孵化。表3:11672病毒滴度對孵化率的影響tableseeoriginaldocumentpage30所有孵化的雞都很虛弱，並且花很長時間從蛋中出來。所有目前接種的胚胎都使用卵黃嚢途徑接種，胚胎死亡和萎縮是一直來的發現。絨膜尿嚢膜(CAM)途徑的接種在一些病毒的研究中很成功，因為如果病原在CAM中生長或病原能適應在CAM中生長，可能會產生高濃度病毒，且分辨更容易。過去，來自感染的CAM的低溫切片部分，利用間接的免疫螢光已用來做血清學分析。此外來自感染的卵的CAM通常在接種後4天收集，這縮短了分離的步驟(在卵黃嚢接種後至12天)。11672病毒(lpEH)因此接種到9日齡胚胎的CAM上，並在4天後收集。觀察到白色的位點和一些CAM的加厚，顯示病毒的生長。CAM加厚的區域被冷凍並低溫切片來做免疫螢光染色。受感染的區域被切割，勻漿並重新接種到9日齡胚胎的CAM上。接種的CAM的加厚還是明顯的。通過CAM接種已傳代所述材料4次。沒有觀察到病毒，當CAM製備物通過EM檢查，提示病毒產量低。傳染原的抗原鑑定0.1ml11672病毒全胚胎勻漿在隔離器中被口腔和肌肉內接種到12x1日齡SPF小雞。這些禽類在六周大時通過第二次口腔接種來追加劑量，然後兩周後放血和處死。這段時間在接種的雞中沒有觀察到明顯的臨床體徵。來自禽類的血清被收集，集中到一起並貯存到-20°C(抗血清l)。第二群的1日齡的雞#1肌肉內接種並在五周後放血。收集血清，像之前一樣(抗血清2)集中到一起並貯存到-20°C。11672病毒胚胎勻漿(2pEH)在25cm2的塑料瓶中接種到SPF雞胚胎肝細胞培養物。在接種後7天沒有觀察到病毒樣細胞病變效杲(CPE)，在這段時間，細胞從瓶中刮下，重懸並重新接種到新鮮培養物中(第二途徑)。在第二途徑(pass)後，或在如上述的CEL培養物的第三途徑後沒有觀察到CPE。11672病毒未稀釋的胚胎勻漿(2pEH)和1/10稀釋的接種到SPF雞胚胎肝(CEL)細胞培養物，在13mm的圓形蓋玻片上生長，並在30。C培養48h。蓋玻片在丙酮中固定10min，空氣乾燥並在37°C以抗血清1(上述)染色1小時。在更換幾次PBS衝洗後，蓋玻片用FITC抗雞偶聯劑重新染色1小時，沖洗，在緩衝的甘油中固定和在UV照明下檢查。在接種物的兩個稀釋度下，觀察在單個細胞中的陽性免疫螢光。免疫螢光是^^質的，並通常性質是顆粒性的。這個結果顯示胚胎傳代的病毒能夠經過在CEL細胞中部分複製，但是複製不導致CPE。利用抗血清1操作的間接免疫螢光(IIF)也成功地檢測胚胎腎低溫切片和來自11672病毒感染的卵CAM中病毒抗原。這證實了在CAM中檢測的加厚/痘瘉與病毒相關，並且也辨認了在實驗接種雞胚胎中病毒複製的一個可能位點(即，腎)。通過IIF的開拓性試驗在20世紀80年代顯示了抗血清1染色了感染了FP3病毒的CEL蓋玻片培養物，所述FP3病毒是殼內死亡小雞分離的一種腸道病毒樣病毒(ELV)。此外在前述的研究(McNulty等,1990)被提高到FP3的抗血清顯示通過IIF與感染了11672病毒的CEL蓋玻片培養物反應。還沒有操作過交叉中和試驗。基於IIF結果，總結出11672病毒是一種腸道病毒樣病毒(ELV),其與FP3病毒抗原性相關。儘管IIF試驗檢測到共同群體抗原的病毒，它不能將病毒以不同血清型區分。11672病毒作為新雞星狀病毒的核苷酸序列鑑定分離的]1672的核苷酸序列研究下列的引物序列被獲取來允許星狀病毒RNA聚合酶基因序列的通過RT-PCR擴增。AstPoI-lF5，畫GAYTGGAC麗GNTAYGAYGGNACNATNCC陽SEQIDNO:8AstPoI-lR5'-YTTNACCCACATNCCRAA-SEQIDNO:9其中Y二C或T;M二A或C;R=A或G和N二脫氧肌苷(I)一步RT-PCR利用來自AmershamPharmacia的Ready-To-GORT-PCR珠被執行。tableseeoriginaldocumentpage32SEQIDNO:1和SEQIDNO:2是對雞星狀病毒3型(CAstV-3)(分離11672)特異的核酸(nt)序列。這391nt兩側是設計來在RNA聚合酶基因區擴增星狀病毒序列的簡併引物。展示兩個克隆的序列。他們在4nt的位置有差別(99.0%nt同一性)。分離的FP3—個克隆的相應區域的核苷酸序列也在SEQIDNO:3中展示。這和11672病毒的克隆1在20nt的位置不同(94.9%nt的同一性)。BLAST檢索顯示391nt區域與火雞星狀病毒1型(GenBank收錄號Y15936)具有65%的核酸同一性，與禽類腎炎病毒(GenBank收錄號AB033998)具有61%的核酸同一性和如人星狀病毒1型(GenBank收錄號Z25771)具有60%的序列同一性。11672和FP3序列IDNO:1、2和3指的是以上述的。SeqIDNo-111672克隆1AAAGCCC丌GTTTTGGCGCATTAGGCAGATTCGGT丌丌T丌TTTAGCCTCAAAGTATAAGACGCAGGAAAACAAGGAGCTGTTTGATTGGTACACCAAAAACC丌TTGGAGAAGGTGATATTGTTACCTACTGGGGAAGTGTGCCAAA丁AAAGCGAGGAAATCCTTCAGGGCAAT丌TCTACCACCGTGGATAACAACAJGTGCAACGTATGGTTAACCACC丌TGAAATAGCATGGCTCCACCGCAAACAACGGGGGAGACTACCAACCCCAGCTGAATTGCGTGAAAACGT丌G丌ATAT丌GCTACGGTGATGACAGGCTCTTATCAGTTTCGAGAGACTTTGTCAnTATGAGCCTGAAACTGTGGTAGCAATGTACGCAGATGTASeqIDNo.211672克隆2AAAACCCTTGT丌TGGCGCA丌AGGCAGA丌CGG丌丌TC丌丌TAGGC丁CAAAGTATAAGAGGCAGGAAAACAAGGAGCTGTTTGA丁TGGTACACCAAAAAGCTTTTGGAGAAGG丁GATATTGTTAGG丁AGTGGGGAAG丁GTGCGAAATAAAGCGAGGAAATCC丌CAGGGCAACT丌CTACCAGCGTGGATAACAACATGTGCAACGTATGGTTAACCACC丌TGAAATAGCATGGCTCCACCGCAAACAACGGGGGAGACTACCAACCCCAGCTGAATTGCGTGAAAACGTTTGTTATATTTGCTACGGTGA丁GACAGGCCCTTATCAG丌TCGAGAGACTTTGTCA7TTATGAGCCTGAAACTGTGGTAGCAATGTACGCAGATGTASeqIDNo.3FP3克隆1AAAGCCCTTGTTTTGGCGTATTAGGCAGATTCGGTTTTTGTTGTTAGGCTCAAAGTATAAGACGCAGGAAAACAAGGACCTCT丌GA丌GGTACACCAAAAACCTCTTGGAGAAGGTGATATTGTTACCTACTGGAGAAGTGTGCGAAATAAAGCGAGGGAATCCTTCAGGGCAATTTTCTACTACCGTGGATAACAACATGTGCAATGTATGGGTAACCAGGTTTGAAATAGCATGGCTTCACCGCAAACAACGGGGTAGATTACCAACCCCAGCTGAATTGCGTGAAAATG丌TGTTATATTTGCTAGGGTGATGATAGGCTCTTATCAG丌TCAAGAGAC丌TGTCAT丌ATGAGCCTGACACTGTGGTAGCGATGTACGCTGA丁GTA序列數據顯示11672病毒和FP3病毒在核苷酸序列水平上是非常緊密相關的，並且兩者可是同一種病毒的隔離群。序列數據與11672和FP3是抗原性相似的發現是一致的，這也是間接免疫焚光所證明的。基於與其他物種的星狀病毒核酸水平的同一性，11672和FP3為隔離群的病毒種類被認為是新雞星狀病毒，本發明人已經命名其為雞星狀病毒3型(CAstV-3)。相應於病毒基因組3，端的3.2kb片段的核苷酸序列通過RT-PCR生產，使用基於oligodT的結合到星狀病毒基因組3，端PolyA尾的正向引物和選自通過簡併引物策略(SEQIDNo1-3)擴增的391核苷酸片段序列間片段的反向引物。3.2kb的片段利用pTOPO載體來克隆並且用以特異結合到質粒載體的正向和反向M13引物開始的引物步移策略來測序。將對11672病毒的391核苷酸片段特異的核苷酸序列和確定的3.2kb的片段結合得到了全長3265核苷酸的序列。這個序列包括在星狀病毒ORFlb5，末端的730核苷酸序列，這種編碼星狀病毒RNA依賴的RNA聚合酶，小的24核苷酸的基因間序列，編碼衣殼蛋白區域的完整星狀病毒ORF2(2217核苷酸)和276核苷酸的3'未翻譯區(UTR)(不包括PolyA尾)。3265核香酸片段的核苷酸序列如下SEOIDNo4AAAGGGCTTGTTTTGGCGCATTAGGGAGATTGGGT丌丌T丌丌TAGGCTCAAAGTATAAGAGGCAGGAAAACAAGGAGCTGnTGATTGGTACAGCAAAAAGGTTTTGGAGAAGGTGATATTGTTAGGTAGTGGGGAAGTGTGCCAAATAAAGGGAGGAAATCCTTCAGGGCAAT丌TGTAGGACCGTGGATAACAACATGTGCAACGTATGGTTAACCACC丌TGAAATAGCATGGGTCGACCGCAAACAACGGGGCAGACTACCAACCCCAGCTGAATTGCGTGAAAACGTTTGTTATATTTGCTACGGTGATGACAGGGTCTTA丁CAGTlTCGAGAGACTTTGTCTnTATGAGGCTGAAACTGTGGTAGCAATGTACGCAGA丁GTA丌CGGCATGTGGGTGAAGCCAGAGAATGTGAAGGTAAGAAATACACTTAGTGGTGTCTCTTTGTGTGGTATGACAATTACAAAAAATCAGCATGGCCGTTATGTTGGTATTCCTAATGTCAATAAAATACTGTCCACTGTACGGTCTCGTAGAAAGGGGCTTCCAAATGTAGAAGCACTATGGGGTAAGTTGATATGATTAAGAATTGTGTGTGAGAATGGAGATGGCGACGTAAAGGA丌ACTTAGATAGGGAGATGAATTGCGTCGAGGAGTATGCGGGTGCTGAAGAAATACAGTTACCAGAAGTCGGGCGCGACTTCTTTCAGAAAATCTGGTAGAGGGATGGAGGGAAATATAGCAGCATGGCCGATAAGGGTAGCGCGCAGAAGGAGAAAAGAAGAAGGCGCGGACGTGGGCGTTCTGGATGTAGGTCACGTTCTCG丌CCCGTTGTAGGAATGGTGTGAAGAAAAGTGTCAGGATAGTTGAATCTAAGAAAAGGCCATGTAGATGTATATTAAGAAAAGAAGTTGAAAATGATGAGAGAAGGGATAGGAGGGGTTTTAGGAAGATTGAAAAAAAATTAAATGGCCCTAAAATACATGATGGGATGGGAGTGACAAGTAGAGTTGGAGTGCTCAGTGGAAATTGTGACAATAATTTGGAAAGGAAAATGAGAGCTCTTCTTAACCCATTGCTTTTGAAATGTCAAAAGAGTGGGGCCTGAGCATCCCCACTTTGGCTTAGGGCATGTCAGTATTCAATGTGGAAGATACAGAAATGTGTTGTAAAATTTGTTCCCCTAGTTGGGGCTGCTAATGTGGCAGGTAGTGTATCC丁丌GTGTCTCTGGATCAGGATGCAACCTCCTCCCAGCCTGAATCACC丁GATACGATAAAGGCAAAGGTGCATGCAGAAGTTGCAATTGGACAAAGATTTAATTGGAACG丌CAATCTAGATACCTGGTCGGACCCCG丌CTGGTTGGTGGGGCATGGATACTGGTGAGTGACCAACTGATACAG丌GGACCAGCCGTTGACT丌TGGAATGTTTATAGAACAGTGAAGACAGTTGAAACTGGC丁CAACATCGCAGGCATACACTGCACCATTGTTTTCWTGAAGTGTATAGGGTGTATGIIIIIICAGGTTACGAACCAAAGCCTGCCCTGGCGACCATGACAAATTCAACTTTTGAGAGTCAGCAGGGGGTGACCATAACAAATGGTGCTAATGGTGAAC丌CTGCTCAATGTTCCACGGCGATCGAGTCTTGCCGAAGGGCTGCGTGAAAAGGAAGTATTATACCGCGGCCAAAACCAAACGGGTGGTGTGGGTGAGGTAGTGTGGGGGGTGGGATGAGGAGCTGTTGAAGGAGCTGCAGAAGGG丌GGGCCCATGGGGATGGTTAC丁GAGAGGTGGCTGGTGGG丁GATAAAGAAGTTGTTTGGACGGAGGGCTGAAAATGAAAGTGAGGATTATGTGATGTACTGGTCTATTGAGGATGCCAACAAAGATAGTAGGATCTATCAAACGGTATCCAGTGCGGTCGCTGTTCAAGAAGGTGGTCTGG丌CTCACCCAAATCTGATCGCCAAATG丌AATCAAGGTGGGGG丁G丌GTGGAGGTAGGTAGAACAA丌GCCACTGATTACTTGCCACTATCTCAGGGGGAGG丌CCGCTTTTAGAGAACA丌CTTTACTCCAGCACTGGGCAGCC丁GTGACATCAACTAAGAGCCA丁AGTATGAGGATCACTGGG丌TCCAGCCTCGAAATTGGTAACATCAACGTGGTCGCAATGGTTGGGCACTAG丁GATACGAGTGTCCAAGCAACAAAGTGGCTAATGTCGGATTATACAGACAGTGGAGTGATATTTGGCnTCCATACTCTGATGATTCCCCCGGGGAAACT丌TGGTAAGATTGGAGTAATACACACAGCCAAGTCGCTGATAAAAAGGGTGACATCAAGGGGACAAGGGGGGCTAGGGATGTCTCCACTTGT丌CGACATTGTTACCATCAACTTCTAAGGGACCAACCCAGATGGTTAGTTGGTTTGAGACGCCTTACTATTGGA丌AGGGTTTGTGACAATACCTGCTCAAACAAACCCACAAATGGCGCCGTGACACAGCGCTGCAATGCTTGGGGCG丌ATGGTGGTGAGCTTAGCACACAATAAAGTCTACA丁CTTGGCTGGTTATGCCGATTCTCAAACTAGGGTAGGACAACAAGAACTAGTCTGGGAGACT丌TGACTGGGATGGTACATTTTCTACTGGCAGGATTTATAATACAACATGGCCAGGAC丌TATGAAGAAAGTGATGATGAAACAGATGCCGAATCTGACATCTCCAGTCIIIIIGACCCCG丌AATGAGGTTGAGCAGGACTTTCACTTCAAATGTAGTCTGAAGACATCTGACTACTTGAAGGAGGAGGCTGATTATTGGAAAGCAAAAGCAGAACAA丌GC丌ATGGAGAAAGCAATGGGAAAAAATAATGACTGTCCTCCAGTTGTCCGCT丌GAGAAGGGCGGACCTGAGCAGCAAAAACAGCCTGCTAGCAGCCGCGGCCACGCCGAGTAGGATGGAGGGTACAGCTGCACCTTC"ITCATGGAGTTTTTATGCCATAA丁CAGGCTTTTCTCCATGTAAATCAAGGCACCGGGGCCACGCCGAGCAGGAACGAGGG丁AGAG丁GCCGGGTTGACCCCACCTGAAAGGGGGGTCCGCCGGTGTGATAATGACCACACCGGGGCCTGGTTTAAATCACAGATAATCACTCTGTGTGTCAATCAGGTCTTTCGGGCGGTTTTGGAAACACTAG丌TTTAAAACCAATTTGATTTTGAA玎AGATTAATTGGCAAAAAAAAAAAAAAAAAA.域。衣殼蛋白基因長度是2217核苷酸，並且編碼738胺基酸的蛋白質區738胺基酸衣殼蛋白區域的胺基酸序列如下:SEQIDNo5gpkihdrmavtttlesptdtvgpaldfwnlyrtvntlqtgstsqaytaplfsievytvyvfsgyepkpalatmtnstfesqqgvtitwvikklfgrsaenesddyvmyssiedankdsriyqtvssavpvqqgpMtqisspnvnqaggvvqvgttiatdylplsqaqvpllenilysstgqpvtstkshtmritgfpasklvtstssciwlgttdtsvqatkwlmsclytdtgviigfpysddspgetfgnigvihtaksliktvtsrrqrglrmsplvstllpstskgptqmlscfdtpyywirvodntcsnkptngavtqrcnawgvmwslahnkvyilagypdsqtrvpqqqlvwdtfdwdatfstkamgknndspplvrfekggpeqqkqpassrghae衣殼蛋白區域的核酸和預測的胺基酸序列知識可因為很多目的被利用，包括1)如果基因克隆到合適的表達載體，用作DNA疫苗。這種表達載體可也被用於引發(prime)/免疫小鼠來產生抗體試劑。2)利用原核(如大腸桿菌)和真核(如重組杆狀病毒感染的昆蟲細胞、酵母)表達系統來生產重組蛋白產物。這種蛋白可用作亞單位疫苗或免疫小鼠來生產抗體試劑。3)用來生產用於免疫和疫苗目的的衣殼蛋白特異的肽的生產。4)用於星狀病毒3特異的RT-PCR試驗發展的特異核苷酸序列的應用。對種雞群中雞星狀病毒3型血清學診斷試驗來自大約22周(剛好產蛋前)的種雞群的血清樣品是否存在11672病毒(CAstV-3的一個隔離群)抗體，通過利用感染了11672病毒的CEL蓋玻片培養物間接免疫螢光測定。血清以在PBS中1:500稀釋來篩選並且雞抗體利用FITC-抗雞抗體軛合物來4企測。抗體在62/211(29.4%)禽類和來自13/17(76.5%)的群體樣品中檢測。在一些群體中相對低水平的血清轉換提示可能發生一些種群經歷在產卵點(約22周)進行的感染和當繁殖者產卵時種禽的進一步感染。表4:在22周試驗的種雞群的血清學結果。感染11672病毒的CEL蓋玻片在間接的免疫螢光試驗中使用來檢測在雞血清中病毒特異的抗體。tableseeoriginaldocumentpage39在展示不均衡生長的群體中雞星狀病毒3型的檢測調查在顯示"不均衡生長"的群體中的病雞的腸內含物病毒的存在。這包括準備在MEM細胞培養基中5-10%勻漿，在3000rpm下離心30min澄清，澄清的提取物在10,000rpm離心30min並通過30%(w/w)PBS中蔗糖墊(sucrosecushion)將上清液超速離心。10,000rpm上清液樣品和重懸的蔗糖沉澱被接種到生長在玻璃蓋玻片的CEL細胞中。衝洗後，蓋玻片培養物培養48h,然後用丙酮處理固定。用包括CAstV-3的抗3種免疫不同的ELV的抗血清來培養固定的蓋玻片。檢測感染性CAstV-3的存在，從在孵化後5、7和9天顯示不均衡生長種雞群1中的樣品。也證明其它2種免疫不同的ELV的存在，即禽類腎炎病毒(CAstV-l)和一種以"612"隔離群例證的ELV。利用原始和部分純化的腸內含物的製備物來操作的電子顯微鏡負染技術顯示這些樣品包含高水平的ELV和輪狀病毒。口腔感染1日齡的SPF雞。這些雞在約2-3周展示羽毛異常和在5周時展示30%的重量降{氐。來自於在4，6,8，10和15日殺死的雞的腸內含物的電子顯微檢查顯示在所有的時間點ELV都存在。從5周大的雞中回收的抗血清通過間接IF顯示包含對CAstV-3和對第二個不同的ELV的抗體。促進了生長抑制。疫苗接種對CAstV-3的疫苗可在幼雞中預防疾病和生長抑制而進行保護，並且也針對從感染的繁殖者的垂直感染和對發育胚胎和孵化的小雞的垂直傳播的病毒可引起的不利影響而進行保護。給藥給種禽的疫苗可會對正在發育的小雞和幼小的生長的雞有健康的利益。疫苗可也給藥給生長的種雞。病毒的檢效'J樣品中病毒的存在可通過在胚胎和細胞培養物中感染病毒的生長來檢測。可選擇的病毒(或更確切的病毒抗原)能在來自感染的雞的組織樣品中利用免疫組織化學祐」檢測。這包括收集新鮮組織，組織在福馬林中固定，石蠟包埋，非常薄的組織部分的切片和病毒特異抗體的使用(如，單克隆抗體或高特異性的多克隆抗血清)來在組織切片來將病毒抗原染色。結合的抗體可通過次級的酶-抗體扼合物來4企測。病毒抗原還可以相同的方法利用抗體在冰凍組織切片中^r測。如果是感染腸道的星狀病毒，病毒有時在糞便中大量的分泌。病毒抗原的存在可利用檢測抗原的ELISA在糞便樣品或擦拭物中被檢測。代表性地，這包括病毒特異抗體(固定到塑料表面)的使用來結合併"捕獲"在稀釋的糞便樣品中存在的病毒顆粒。捕獲的病毒顆粒然後與軛合到一種酶，如辣4艮過氧化物酶的另一種病毒特異抗血清反應。結合的扼合物的存在通過加入酶底物和其轉換到有色產物來證明。雞會通過產生對CAstV-3的抗體來應對感染。血清中的抗體可利用多種試驗如間接的免疫螢光測定，病毒中和試驗或ELISA來檢測。這對大量樣品處理量特別有用。典型的間接的ELISA會包括固定病毒或病毒抗原到塑料微滴定板上，與血清稀釋液反應來讓抗體與酶偶聯的次級抗雞Ig抗體結合，反應，然後與酶底物反應。可選擇型的阻斷ELISA可使用。這會包括通過"阻斷"固定的病毒抗原和病毒特異的抗體(通常單克隆抗體)間反應的能力證實病毒特異的雞抗體的存在。可實現單克隆抗體的生產和鑑定並且單克隆抗體可使用在診斷試驗的發展中，如用來檢測對傳染原的血清抗體的檢測試驗。可選擇性的PCR試驗可使用。這個試驗的細節由以下提供。標準的RT-PCR試驗已經發展，其中正向(SEQIDNO6)和反向引物(SEQIDNO7)^於由11672和FP3隔離群(SEQIDNO:1-3)指定的在391核普酸片段中發現的保守序列，並且通過簡併引物RT-PCR方法擴增。標準試驗擴增了187鹼基對的產物(圖3)並發現比包括細胞培養物接種、然後間接螢光免疫的方法敏感10到100倍。標準試驗成功的在來自"哨兵"種雞孵化的1日齡小雞腸內含物樣品中檢測到CAstV-3。在本實驗，大約50個幼小的雌性來源於高健康狀態的群體。這些被安置圈進有病的種禽群，其產生了虛弱的小雞後代。生病的種雞群中的雄性一皮圈進雌性中。當雌性開始產卵，雌性產的卵分開的^皮培養、孵化並且對小雞後代糹全查CAstV-3的存在。以每周的間隔調查12個1日齡的小雞後代。小雞;陂處死並且腸道，肝，腎和心臟的樣品從單獨的禽類被收集。在每一12-雞提交(12-chicksubmission),來自六隻雞的腸道被收集到一起並通過超速離心的方法來處理用來檢測來自不均衡生長的小雞腸內含物中的11672ELV(上述)。這些製備物接種到生長在蓋玻片上的CEL來確定11672病毒的存在。在任一來自後代提交生產的製備物中沒有11672病毒一皮一全測(表5)。RNA從收集到一起的腸樣品等份被提取(通過超速離心生產)並且用標準的RT-PCR試驗來測試。在13個試驗的樣品中，8個對11672病毒RNA呈陽性。陽性的樣品從早的提交(7/3/05)到一些晚的提交(31/5/05)間斷地獲得。這些結杲顯示哨兵(sentinel)成體被感染了在雞舍中存在的11672病毒並且垂直傳染可能已發生。陽性樣品在12周的範圍內的檢測輪廓(profile)顯示11672病毒的傳播慢或病毒從受感染的親代雞傳播持續長時間。工作在進行著來確定CAstV-3的檢測是否和小雞後代的虛弱或是生長遲緩問題有關。表5:來自哨兵種雞的小雞後代中CAstV-3的檢測tableseeoriginaldocumentpage42Nt:未試驗現在充分描述的本發明，其變化和修改將對本領域普通技術人員是明顯的，而不用偏離本發明的權利要求的範圍。權利要求1.一種稱為CAstV-3的分離的星狀病毒株，其中所述病毒株於2005年12月15日以收錄號CNCMI-3541保藏在巴斯德研究所CNCM。2.—種分離的核苷酸序列，其與以下具有至少85%的序列同一性(a)SEQIDNO:1到4任一個所列的核苷酸序列，(b)在嚴格條件下能與SEQIDNO:1到4中任一個雜交的核苷酸序列，或(c)(a)或(b)的片段。3.根據權利要求2所述的分離的核苷酸序列，其中所述序列與以下具有100%的序列同一性(a)SEQIDNO:1到4任一個所列的核苷酸序列，(b)在嚴格條件下能與SEQIDNO:1到4任一個雜交的核苷酸序列，或(c)(a)或(b)的片段。4.一種基因構建體，其包括權利要求2或3所述的分離的核苷酸序列和對照序列。5.—種載體，其包括權利要求2或3所述的分離的核苷酸序列和可操作性地連接到所述核苷酸序列的啟動子。6.—種生產權利要求2或3中核苷酸序列編碼的多肽的方法，其包括以下步驟(a)以權利要求5中所述的載體接觸細菌細胞和/或經由杆狀病毒接觸昆蟲細月包和/或酵母細J包和/或才直物細月包，(b)在適合多肽生產的條件下培養所述的細菌細胞和/或昆蟲細胞和/或酵母細l包和/或4直物細月包。7.—種多肽序列，其由權利要求2或3的任何核苷酸序列編碼。8.根據權利要求7所述的多肽序列，其中所述多核苷酸序列由SEQIDNO:1到4的4壬一個核苷酸序列編碼。9.根據權利要求7所述的多肽序列，其包括SEQIDNO:5的胺基酸序列或其片段，其中所述片段是抗原性的。10.—種多克隆抗體，其中所述多克隆抗體具有對權利要求7到9中任一項所述的多肽的結合特異性。11.一種單克隆抗體，其中所述單克隆抗體具有對權利要求7到9中任一項所述的多肽的結合特異性。12.以下各項在製備能夠介導禽類免疫應答的組合物中的用途(i)至少部分的稱為CAstV-3的分離的星狀病毒才朱，(ii)如權利要求2或3所述的核普酸序列，或(iii)如權利要求7到9任一項所述的多肽。13.—種組合物，其如權利要求12中所述，該組合物包括(i)至少部分的稱為CAstV-3的分離的星狀病毒才朱，(ii)至少一種如權利要求2或3所述的核苷酸序列，或(iii)至少一種如權利要求7到9任一項所述的多肽。14.根據權利要求13所述的組合物，其進一步包括藥學載體或稀釋劑。15.—種在禽類中免疫預防生長抑制的疫苗，其中所述疫苗包括如權利要求13或14所述的組合物和佐劑。16.—種接種禽類預防CAstV-3的方法，其包括以下步驟(i)提供免疫學有效量的如權利要求15所述的疫苗給所述禽類。17.—種對來自禽類的樣品檢測雞星狀病毒3型的診斷測定方法，其包4舌以下步驟(i)以探針接觸禽類生理材料，其中所述探針選自(a)SEQIDNO:1到4任一個所列的核苷酸序列，(b)在嚴格條件下，能與SEQIDNO:1到4任一個雜交的核苷酸序列，(c)與(a)到(b)任一所列的核苷酸序列具有至少85%的序列同一性的核苷酸序列，(d)(a)、(b)或(c)的片段，(e)(a)到(d)任一所列的核香酸序列編碼的多肽，(f)與(e)的多肽特異結合的抗體，(ii)檢測所述探針和所述樣品中至少一個成分的成功結合的事件。18.根據權利要求17所述的診斷測定方法，其包括以下步驟-將至少部分的雞星狀病毒3型接觸禽類生理材料，-培養禽類生理材料和至少部分的雞星狀病毒3型，以使樣品中存在的能與至少部分的雞星狀病毒3型結合的任何抗體結合所述至少部分的雞星狀病毒3型，和-檢測所述結合抗體的存在。19.根據權利要求17所述的診斷測定方法，其包括以下步驟-以特異結合至少部分的雞星狀病毒3型的抗體接觸禽類生理材料樣品，-以所述抗體培養所述禽類生理材料，以使所述樣品中存在的任何雞星狀病毒3型結合到所述抗體，和-檢測所述樣品中存在的所述雞星狀病毒3型的存在。20.根據權利要求17所述的診斷測定方法，其包括以下步驟(i)提供來自禽類生理材料的遺傳物質，並(ii)化驗所述遺傳物質以檢測雞星狀病毒3型的遺傳物質。21.根據權利要求20所述的診斷測定方法，其中所述測定使用能結合到雞星狀病毒3型核苷酸序列的核酸探針來檢測來自雞星狀病毒3型的遺傳物質。22.根據權利要求20所述的診斷測定方法，其中所述測定使用能結合到雞星狀病毒3型核普酸序列的引物集合來允許通過RT-PCR擴增序列。23.根據權利要求22所述的診斷測定方法，其中所述測定包括以下步驟(i)為核酸聚合酶提供正向和反向的引物，其中所述引物能與雞星狀病毒3型多核苷酸序列特異結合；(ii)擴增所述引物間的多核苷酸序列；和(iii)檢測擴增的多核苷酸序列；其中檢測到所述樣品中的所述擴增的多核苷酸序列的多拷貝表示所述樣品中存在雞星狀病毒3型。24.—種用於診斷雞星狀病毒3型(CAstV-3)的診斷試劑盒，所述試劑盒包括探針，其中所述探針是以下中的至少一種(a)SEQIDNO:1到4任一個所列的序列，(b)在嚴格條件下，能與SEQIDNO:l到4任一個雜交的序列，(c)與(a)或(b)任一個所列的核苷酸序列具有至少85%的序列同一性的核苷酸序列，(d)(a)、(b)或(c)的片段，(e)(a)到(d)任一所列的核苷酸序列編碼的多肽，或(f)特異結合到(e)的多肽的抗體。25.根據權利要求24所述的診斷試劑盒，其中所述多肽由SEQIDNO:1到4中任一項的核普酸序列編碼。26.根據權利要求24所述的診斷試劑盒，其中所述抗體具有與SEQIDNO:5的胺基酸序列的多肽的結合特異性。27.根據權利要求24所述的診斷試劑盒，其中所述探針包括能由RT-PCR擴增選定的雞星狀病毒3型的核苷酸序列的引物集合，其中所述引物集合包括以下序列正向5，-AGCCTCAAAGTATAAGACGCAG-3'SEQIDNo:6反向5，-CCATGCTATTTCAAAGGTGGTT-3，SEQIDNo:7。全文摘要分離和鑑定了一種稱為雞星狀病毒3型的新的星狀病毒。提供了所述星狀病毒的核苷酸序列和多肽序列，以及其和分離的星狀病毒在測定試劑盒和疫苗中的用途。文檔編號C07K14/08GK101395175SQ200780007776公開日2009年3月25日申請日期2007年1月4日優先權日2006年1月4日發明者丹尼爾·託德,內裡斯·鮑爾,布萊恩·阿代爾,米爾德裡德·威利申請人:英國貝爾法斯特女王大學